本發(fā)明屬于微生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種植物乳桿菌，具體來說是一種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一類能利用可發(fā)酵性糖產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌總稱，目前在自然界已發(fā)現(xiàn)的這類細(xì)菌在分類學(xué)上至少有23個(gè)屬。在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用較多的乳酸菌主要有乳桿菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、乳球菌屬、片球菌屬和明串珠菌屬等。乳酸菌是益生菌最主要的來源，許多乳酸菌是人體腸道固有的益生菌，已具有改善人體腸道菌群，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，抑腫瘤，降低血清膽固醇，調(diào)節(jié)血壓等重要的生理活性。

風(fēng)味是發(fā)酵乳品質(zhì)形成的重要因素之一，也是影響消費(fèi)者對(duì)發(fā)酵乳認(rèn)可度的關(guān)鍵指標(biāo)。發(fā)酵乳中最具有代表性的風(fēng)味物質(zhì)是乙醛，但是乙醛的利用率較低，其含量在5-21ppm范圍內(nèi)，含量越高對(duì)發(fā)酵乳的風(fēng)味越有利。一些研究認(rèn)為不合標(biāo)準(zhǔn)的弱香味發(fā)酵乳就是由于其中乙酵含量低于4.0ppm。這一含量也被認(rèn)為是發(fā)酵乳中乙醛含量達(dá)不達(dá)標(biāo)的臨界含量，而具有良好風(fēng)味的發(fā)酵乳的乙酸含量可以達(dá)到8.0ppm(參考文獻(xiàn)Sandine W E,Daly C,Elliker P R,et al.Causes and control of culture-related flavor defects in cultured dairy products[J].Journal of Dairy Science,1972,55(7):1031-1039.)。因此提高乳酸菌產(chǎn)乙醛的能力，可以從源頭改善酸乳的風(fēng)味，提高發(fā)酵乳香氣品質(zhì)，為乳品工業(yè)的生產(chǎn)提供一定的指導(dǎo)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌及其應(yīng)用，所述的這種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌及其應(yīng)用要解決現(xiàn)有技術(shù)中的乳酸菌產(chǎn)乙醛的能力不足的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌，其保藏編號(hào)為CCTCC M2016514。

本發(fā)明還提供了一種工作發(fā)酵劑，將上述的植物乳桿菌菌種接種于滅菌乳中培養(yǎng)至凝乳，連續(xù)培養(yǎng)活化兩代作為母發(fā)酵劑；將母發(fā)酵劑按體積百分比3-5％接種于添加乳清蛋白的滅菌乳中培養(yǎng)至凝乳，即得工作發(fā)酵劑。

進(jìn)一步的，在培養(yǎng)至凝乳的過程中，在35-37℃條件下培養(yǎng)10-12h。

本發(fā)明還提供了一種工作發(fā)酵劑，將上述的植物乳桿菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中連續(xù)活化兩代，然后將活化培養(yǎng)物按體積百分比3-5％接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，固液分離得到細(xì)胞沉淀，將沉淀用無菌乳懸浮，即得工作發(fā)酵劑，其中，活菌數(shù)為10⁹cfu/mL以上。

進(jìn)一步的，在液體培養(yǎng)基中活化的過程中，在35-37℃條件下培養(yǎng)10-12h。

本發(fā)明還提供了上述的一種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌在發(fā)酵食品中的用途。

進(jìn)一步的，所述的發(fā)酵食品為乳酸菌奶飲料或者發(fā)酵乳。

本發(fā)明還提供了上述的一種乳酸菌飲料的制備方法，將原料乳滅菌后冷卻，然后加入上述的工作發(fā)酵劑混合均勻，使上述的植物乳桿菌濃度達(dá)到10⁶cfu/mL以上，即得到含有權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌的乳酸菌奶飲料。

本發(fā)明還提供了上述的一種發(fā)酵乳的制備方法，將原料乳滅菌后冷卻，再加入上述的工作發(fā)酵劑和常規(guī)商品發(fā)酵劑，所述的工作發(fā)酵劑占發(fā)酵乳的體積為3-5％，所述的常規(guī)商品發(fā)酵劑占發(fā)酵乳的體積為3-5％，混勻后在35-37℃的條件下發(fā)酵，至滴定酸度70-80°T，即得到上述植物乳桿菌的發(fā)酵乳。

進(jìn)一步，所述的常規(guī)商品發(fā)酵劑為保加利亞乳桿菌、雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌或者嗜酸乳桿菌中的任意一種或者兩種以上的組合。

其中，所述的滅菌方法是常規(guī)的原料乳滅菌方法，較佳的如超高溫瞬時(shí)滅菌，更佳的如在95℃下加熱殺菌20min。待滅菌乳冷卻后再加入所述的植物乳桿菌工作發(fā)酵劑，冷卻溫度常規(guī)，較佳的冷卻到37-40℃。發(fā)酵溫度常規(guī)，較佳的為37℃。

乙醛的測定方法是常規(guī)的頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(HS-SPME-GC-MS)的方法進(jìn)行檢測，優(yōu)選的包括將植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳置于頂空固相微萃取小瓶中待測。

其中，頂空固相微萃取的測定條件為：5g-10g上述發(fā)酵乳置于20ml頂空瓶中，55℃-60℃恒溫水浴下萃取30-40min，萃取頭置于GC-MS上解析5min。

其中，GC-MS測定條件為：60m×0.25mm×0.25μm HP-INNOWX毛細(xì)色譜柱(美國J&W公司)；50/30μm DVB/CAR/PDMS固相微萃取頭(美國Supelco公司)；初溫60℃，保持3min，5℃/min升溫至230℃，保持10min。

本發(fā)明的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)菌株CCTCC M2016514，其生物學(xué)名稱為：植物乳桿菌Z02(Lactobacillus plantarum Z02)，其屬于乳桿菌屬植物乳桿菌種。于2016年9月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)保藏中心。郵編：430072，其保藏編號(hào)為CCTCC M2016514。

本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯著的。本發(fā)明的高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌CCTCC M2016514，通過對(duì)其發(fā)酵乳中的乙醛含量進(jìn)行檢測和感官評(píng)定，結(jié)果表明本發(fā)明的植物乳桿菌乙醛產(chǎn)量較高，感官評(píng)分較高，改善了發(fā)酵乳的香氣品質(zhì)，促進(jìn)發(fā)酵乳品質(zhì)的提高，在發(fā)酵乳領(lǐng)域具有廣闊的前景。

附圖說明

結(jié)合以下附圖說明本發(fā)明的特征和有益效果。

圖1顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的菌落形態(tài)。

圖2顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的細(xì)胞形態(tài)(×1000)。

圖3顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的生長曲線。

圖4顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的最適生長溫度。

圖5顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳GC-MS總離子流圖。

圖6顯示了本發(fā)明所述植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵酸乳和空白酸乳的感官得分雷達(dá)圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明從乳酸菌生境中采集樣品，篩選高產(chǎn)乙醛的乳酸菌菌株，研究其產(chǎn)乙醛的能力，開發(fā)新的益生菌。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。

本發(fā)明從西藏靈菇中篩選出一株乳酸菌1-34，利用形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀和生理生化特征等微生物學(xué)特性及其遺傳特性16s rDNA對(duì)該乳酸菌1-34鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，該菌株已于2016年9月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，其保藏編號(hào)為CCTCC M2016514。

本發(fā)明植物乳桿菌CCTCC M2016514的形態(tài)學(xué)特征：

菌落特征：菌株在MRS平板上劃線分離，37℃培養(yǎng)48h，菌株生長良好，其菌落形態(tài)如圖1所示。菌落大小0.2-2mm，菌落圓形，邊緣整齊，正面微凸起，顏色乳白中帶點(diǎn)微黃色，不透明，表面濕潤光滑。

菌體特征：菌體呈桿狀(圖2)，菌體大小一般為0.6μm×1.5μm，不產(chǎn)芽孢，革蘭氏染色陽性。

本發(fā)明植物乳桿菌CCTCC M2016514的培養(yǎng)特征：植物乳桿菌CCTCC M2016514的最低生長溫度為15℃，最高生長溫度為45℃，在30-40℃生長溫度最佳；菌株CCTCC M2016514的延遲期相對(duì)較短，2h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，10h達(dá)到穩(wěn)定期。

本發(fā)明的植物乳桿菌CCTCC M2016514來源于傳統(tǒng)發(fā)酵食品，屬公認(rèn)安全(Generally Recognized As Safe，GRAS)菌種，可用于乳酸菌食品中。

因此，本發(fā)明還涉及所述的植物乳桿菌CCTCC M2016514在發(fā)酵食品中的用途。所述含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵食品包括乳酸菌奶飲料和發(fā)酵乳。

本發(fā)明還提供所述植物乳桿菌CCTCC M2016514工作發(fā)酵劑。

本發(fā)明工作發(fā)酵劑較佳的是采用下述制備方法制備的：將植物乳桿菌CCTCC M2016514菌種接種于12％(w/v)的脫脂乳中，在37℃條件下培養(yǎng)10-12h至凝乳，連續(xù)培養(yǎng)活化兩代，作為母發(fā)酵劑使用；將母發(fā)酵劑按3-5％(v/v)接種于上述的滅菌乳中，培養(yǎng)10-12h至凝乳，此時(shí)凝乳中活菌數(shù)約在10⁹cfu/mL，得到所述的工作發(fā)酵劑；或者將植物乳桿菌CCTCC M2016514菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37℃條件下培養(yǎng)10-12h進(jìn)行活化，連續(xù)活化兩代，然后將活化培養(yǎng)物按3-5％(v/v)接種于MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10-12h，在4℃條件下6000r/min離心10min，去除上清液，得到細(xì)胞沉淀，將沉淀用一定量的無菌脫脂乳懸浮，得到所述的工作發(fā)酵劑。

本發(fā)明中優(yōu)選的所述的乳酸菌奶飲料是按照下述步驟制備得到的：原料乳在95℃下加熱殺菌20min，然后冷卻到40℃，再加入所述的植物乳桿菌CCTCC M2016514工作發(fā)酵劑，使其濃度達(dá)到10⁶cfu/mL以上，在4℃冷藏保存即得到含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的乳酸菌奶飲料。

本發(fā)明中優(yōu)選的所述的發(fā)酵乳是按照下述步驟制備得到的：原料乳在95℃下加熱殺菌20min或在140℃下高溫?zé)釟⒕?s，然后冷卻到37℃，再按照3-5％(V/V)加入所述植物乳桿菌CCTCC M2016514，再加入3-5％(V/V)發(fā)酵乳商品發(fā)酵劑，混勻后在37℃下混菌發(fā)酵至滴定酸度70-80°T，然后冷卻至40℃，再進(jìn)行冷藏保存得到含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳。

下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例中所述的“室溫”是指進(jìn)行試驗(yàn)的操作間的溫度，一般為25℃。

實(shí)施例1 植物乳桿菌CCTCC M2016514的采集、分離

(1)、樣品預(yù)處理

分別取3g西藏靈菇若干份，分別放入裝有15無菌水的50ml錐形瓶中，震蕩后，靜置20min，備用。

(2)、乳酸菌菌株分離

使用無菌水以體積計(jì)，按照1：10對(duì)上述樣品進(jìn)行連續(xù)稀釋，在每個(gè)稀釋度取0.1mL稀釋樣品，分別涂布MRS瓊脂平板和M17瓊脂平板，在37℃厭氧條件下恒溫培養(yǎng)24-48h，用無菌牙簽挑取大小不同、凸起，微白色，濕潤，邊緣整齊，菌落背面為黃色的單菌落。然后在相應(yīng)的瓊脂平板上劃線分純，得到純的單菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，接觸酶實(shí)驗(yàn)。純化菌株保藏在相應(yīng)的分離培養(yǎng)基中，添加30％的甘油作為保護(hù)劑，-20℃凍存。

其中使用的培養(yǎng)基配方如下：

MRS培養(yǎng)基(乳桿菌選擇性培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)股份有限公司購得)。

M17培養(yǎng)基(乳球菌選擇性培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)股份有限公司購得)。

不同批次樣品在MRS瓊脂培養(yǎng)基和M17瓊脂培養(yǎng)基上共分離出100株菌。這些菌株在分離平板上表現(xiàn)出凸起，微白色，濕潤，邊緣整齊，菌落背面為黃色。

(3)不同菌株產(chǎn)乙醛能力測定

將從平板上得到的分離株接種到MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h，再按5％(V/V)的接種量接種到含MRS液體培養(yǎng)基中二次活化，在37℃發(fā)酵10h。將發(fā)酵液在4℃時(shí)6000rpm/min下離心10min，取菌體。用無菌水沖洗3次，加入無菌水混勻，備用。

原料乳在95℃下加熱殺菌20min或在140℃下高溫?zé)釟⒕?s，然后冷卻到40℃，再加入菌懸液，再加入5％(V/V)可共生的制備發(fā)酵乳商品發(fā)酵劑，混勻后在37℃下混菌發(fā)酵至滴定酸度70-80°T，然后冷卻至室溫，再進(jìn)行4℃冷藏保存。

將上述冷藏的發(fā)酵乳稱取5g，置于頂空固相微萃取小瓶(20ml)中。將頂空瓶置于55℃的恒溫水浴鍋中，插入事先老化好的萃取頭(50/30μm DVB/CAR/PDMS)，頂空吸附40min，萃取結(jié)束，將萃取頭轉(zhuǎn)移到GC-MS進(jìn)樣口處，解析5min，完成進(jìn)樣。

其中，所述的植物乳桿菌的發(fā)酵乳是常規(guī)的發(fā)酵乳，較佳的37℃條件下發(fā)酵10h而得發(fā)酵乳。

其中，頂空固相微萃取的測定條件為：5g上述發(fā)酵乳置于20ml頂空瓶中，55℃恒溫水浴下萃取40min，萃取頭置于GC-MS上解析5min。

GC-MS以初溫60℃，保持3min，5℃/min升溫至230℃，保持10min的速率升溫，完成發(fā)酵乳香氣化合物的檢測，從而測定得出發(fā)酵乳中乙醛的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1中。從表中可以看出，菌株1-34的乙醛產(chǎn)量相對(duì)較高，選取這株菌，命名為CCTCC M2016514。

表1.產(chǎn)乙醛乳酸菌的初步分離

實(shí)施例2 植物乳桿菌CCTCC M2016514的鑒定

(1)生理生化試驗(yàn)

菌株CCTCC M2016514為革蘭氏陽性、過氧化酶陰性、不運(yùn)動(dòng)的桿菌，在15℃和45℃能夠生長。

(2)菌株CCTCC M2016514的16s rDNA序列分析

菌株CCTCC M2016514基因組DNA提取方法：挑取純化的CCTCC M2016514單菌落接種到10mL MRS液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)8h后將菌液離心(5000g，10min)收集菌體。采用基因組DNA抽提試劑盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)提取。

PCR擴(kuò)增采用兩種合成的通用引物：

16s 27F:GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16s 1492R：CGGCTACCTTGTTACGACTT；

PCR產(chǎn)物采用柱式PCR產(chǎn)物純化試劑盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)回收，純化后送生工生物工程(上海)股份有限公司測序。所得菌株CCTCC M2016514的16s DNA核苷酸序列為1669bp(序列表中的SEQ ID NO：1)，送GenBank(GenBank accetion number：CP002222)做Blast分析。菌株CCTCC M2016514同源性最高菌株的是L.plantarum ST-Ⅲ(Sequence ID：CP002222.1)，同源性為99％。

根據(jù)Goodfellow和O′Donnell所說的DNA的G+C(mol％)≤10％～12％及16S rRNA的序列同源性≥95％的種可歸為一個(gè)屬，并且Embley和Stackebrangdt認(rèn)為當(dāng)16S rRNA的序列同源性≥97％時(shí)可以認(rèn)為是一個(gè)種。由此可以推斷：菌株CCTCC M2016514與L.plantarum ST-Ⅲ屬于同一個(gè)種。菌株CCTCC M2016514鑒定為植物乳桿菌。

依據(jù)形態(tài)特征、生理生化特征等微生物學(xué)特性及其遺傳特性16s rDNA對(duì)乳酸菌CCTCC M2016514鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，該菌株已于2016年9月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，其保藏編號(hào)為CCTCC M2016514。

實(shí)施例3 CCTCC M2016514菌株的生長特性

(1)CCTCC M2016514菌株生長曲線的繪制

將活化好的植物乳桿菌CCTCC M2016514按5％(V/V)接種量接入MRS液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)16h，每隔1-2h在600nm測定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值對(duì)時(shí)間作圖得到菌株CCTCC M2016514在MRS中的生長曲線，其結(jié)果(圖3)表明：植物乳桿菌CCTCC M2016514在MRS培養(yǎng)基中生長迅速，在2h左右進(jìn)入對(duì)數(shù)期，10h左右進(jìn)入穩(wěn)定期。

(2)CCTCC M2016514菌株最適生長溫度測定

將活化好的植物乳桿菌CCTCC M2016514按5％(V/V)接種量分別接于10mL MRS液體培養(yǎng)基中，分別置于15℃、25℃、32℃、37℃、40℃和45℃條件下恒溫培養(yǎng)8h，以未接種的MRS液體培養(yǎng)基作對(duì)照，于600nm測定不同溫度下培養(yǎng)的培養(yǎng)液的OD值，依據(jù)OD值的大小確定最適生長溫度。結(jié)果表明：(圖4)植物乳桿菌CCTCC M2016514的生長溫度范圍較廣，從15℃到45℃都生長，在30℃-40℃生長良好，最適生長溫度為37℃。

實(shí)施例4 植物乳桿菌CCTCC M2016514產(chǎn)乙醛能力測定

(1)菌種活化：將植物乳桿菌CCTCC M2016514菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37℃條件下培養(yǎng)10h進(jìn)行活化，連續(xù)活化兩代。

(2)工作發(fā)酵劑的制備：將活化培養(yǎng)物按5％(v/v)接種于MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10h，在4℃條件下6000r/min離心10min，去除上清液，得到細(xì)胞沉淀，將沉淀用一定量的無菌脫脂乳懸浮，得到所述的工作發(fā)酵劑。

(3)發(fā)酵乳制備：原料乳在95℃下加熱殺菌20min或在140℃下高溫?zé)釟⒕?s，然后冷卻到40℃，然后加入體積百分比5％植物乳桿菌CCTCC M2016514的工作發(fā)酵劑和體積百分比5％商品發(fā)酵劑，混勻后發(fā)酵至滴定酸度70-80°T，即得到含有所述植物乳桿菌的發(fā)酵乳CCTCC M2016514的發(fā)酵乳。

(4)乙醛含量測定：將上述冷藏的發(fā)酵乳稱取5g，置于頂空固相微萃取小瓶(20ml)中。將頂空瓶置于55℃的恒溫水浴鍋中，插入事先老化好的萃取頭(50/30μm DVB/CAR/PDMS)，頂空吸附40min，萃取結(jié)束，將萃取頭轉(zhuǎn)移到GC-MS進(jìn)樣口處，解析5min，完成進(jìn)樣。GC-MS以初溫60℃，保持3min，5℃/min升溫至230℃，保持10min的速率升溫，完成發(fā)酵乳香氣化合物的檢測，從而測定得出發(fā)酵乳中乙醛的含量，總離子流圖見圖5。

應(yīng)用實(shí)施例1 植物乳桿菌CCTCC M2016514工作發(fā)酵劑

將植物乳桿菌CCTCC M2016514菌種接種于添加1％乳清蛋白(WPC)的12％(w/v)在115℃滅菌15min的脫脂乳中，在37℃條件下培養(yǎng)10-12h至凝乳，連續(xù)培養(yǎng)活化兩代，作為母發(fā)酵劑使用；將母發(fā)酵劑按5％(v/v)接種于上述的滅菌乳中，培養(yǎng)10h至凝乳，此時(shí)凝乳中活菌數(shù)約在10⁹cfu/mL，得到本發(fā)明的工作發(fā)酵劑(1)。

將植物乳桿菌CCTCC M2016514菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37℃條件下培養(yǎng)10h進(jìn)行活化，連續(xù)活化兩代，然后將活化培養(yǎng)物按5％(v/v)接種于MRS液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10h，在4℃條件下6000r/min離心10min，去除上清液，得到細(xì)胞沉淀，將沉淀用一定量的無菌脫脂乳懸浮，得到本發(fā)明的工作發(fā)酵劑(2)。

應(yīng)用實(shí)施例2 含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的乳酸菌奶飲料

原料乳在95℃下加熱殺菌20min或在140℃下高溫?zé)釟⒕?s，然后冷卻到40℃，以5％(v/v)的量加入應(yīng)用實(shí)施例1所得的植物乳桿菌CCTCC M2016514工作發(fā)酵劑【工作發(fā)酵劑(1)或者(2)】，使其濃度達(dá)到10⁶cfu/m以上，在4℃冷藏保存即得到含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的乳酸菌奶飲料。

應(yīng)用實(shí)施例3 含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳

將原料乳鮮奶在95℃加熱滅菌20min或在140℃下高溫?zé)釟⒕?s，再冷卻至40℃，以5％(v/v)的量加入應(yīng)用實(shí)施例1所得的植物乳桿菌CCTCC M2016514工作發(fā)酵劑【工作發(fā)酵劑(1)或者(2)】，以及商業(yè)發(fā)酵劑保加利亞乳桿菌，該混菌在37℃發(fā)酵至滴定酸度為70°T，冷藏至4℃并冷藏保存即得到含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳。

對(duì)比實(shí)施例1 空白發(fā)酵乳的制備

將原料乳鮮奶在95℃加熱滅菌20min后，再冷卻至37℃，以5％(v/v)的量加入商業(yè)發(fā)酵劑保加利亞乳桿菌，在37℃發(fā)酵至滴定酸度為70°T，冷藏至4℃并冷藏保存即得到空白發(fā)酵乳。

效果實(shí)施例1 含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳和空白發(fā)酵乳乙醛含量對(duì)比

將上述應(yīng)用實(shí)施例3和對(duì)比實(shí)施例1中的發(fā)酵乳分別按照實(shí)施例4中的方法進(jìn)行乙醛含量測定，結(jié)果表明含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳的乙醛含量為8.75mg/L，而對(duì)比實(shí)施例1中的空白發(fā)酵乳中的乙醛含量為3.44mg/L，乙醛含量提高兩倍左右，證明植物乳桿菌CCTCC M2016514具有較高的產(chǎn)乙醛的能力。

效果實(shí)施例2 含有植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳和空白發(fā)酵乳感官評(píng)價(jià)對(duì)比。

由8位評(píng)價(jià)員(3男，5女)進(jìn)行感官評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)前需要對(duì)他們專業(yè)訓(xùn)練，使他們完全理解感官特性，熟知發(fā)酵乳的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)[參考文獻(xiàn)(陳潔.中溫發(fā)酵酸乳品質(zhì)的研究[D].江南大學(xué),2008.)/(康歡.酸奶中風(fēng)味物質(zhì)與酶活及感官特性關(guān)系的初探[D].東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.)]，初步選擇了9個(gè)可能對(duì)產(chǎn)品的可接受性有重要貢獻(xiàn)的感官性質(zhì)。感官評(píng)價(jià)術(shù)語相應(yīng)的定義見表2。

表2感官評(píng)價(jià)術(shù)語和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

首先，從冰箱中取出標(biāo)識(shí)隨機(jī)碼的樣品(應(yīng)用實(shí)施例2和對(duì)比實(shí)施例1中的樣品)，隨機(jī)呈送給評(píng)價(jià)員。他們打開蓋子后，首先用匙子輕輕攪動(dòng)酸乳，通過嗅聞確定氣味類型和強(qiáng)度，對(duì)其他性質(zhì)依次評(píng)價(jià)。采用9點(diǎn)標(biāo)度法。所有的評(píng)價(jià)過程都在有白色燈光和可控環(huán)境的感官評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。評(píng)價(jià)過程中，準(zhǔn)備一杯純凈水漱口。每個(gè)樣品重復(fù)三次。結(jié)果見圖6。

從圖6我們可以看出植物乳桿菌CCTCC M2016514的發(fā)酵乳在典型酸奶味、奶油味和整體接受性上高于空白發(fā)酵乳，這與效果實(shí)施例1中植物乳桿菌CCTCC M2016514具有較高的產(chǎn)乙醛的能力一致，乙醛具有奶油的香氣，它的存在可以顯著的改善發(fā)酵乳整體的風(fēng)味特征，給消費(fèi)者帶來更為愉悅的感官體驗(yàn)，從感官評(píng)價(jià)圖上也可以得出這一結(jié)論。

應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

序列表

<110> 上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)

<120> 一種高產(chǎn)乙醛的植物乳桿菌及其應(yīng)用

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1669

<212> DNA

<213> lactobacillus plantarum

<400> 1

aaactggtcg taaatacgac tcactatagg gcgacatatg atcgatgata tcccatgggc 60

ggccgcctgc agaccaggtc tggttacctt gttacgactt caccctaatc atctgtccca 120

ccttaggcgg ctggttccta aaaggttacc ccaccgactt tgggtgttac aaactctcat 180

ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat gctgatccgc 240

gattactagc gattccgact tcatgtaggc gagttgcagc ctacaatccg aactgagaat 300

ggctttaaga gattagctta ctctcgcgag ttcgcaactc gttgtaccat ccattgtagc 360

acgtgtgtag cccaggtcat aaggggcatg atgatttgac gtcatcccca ccttcctccg 420

gtttgtcacc ggcagtctca ccagagtgcc caacttaatg ctggcaactg ataataaggg 480

ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga caaccatgca 540

ccacctgtat ccatgtcccc gaagggaacg tctaatctct tagatttgca tagtatgtca 600

agacctggta aggttcttcg cgtagcttcg aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg 660

ggcccccgtc aattcctttg agtttcagcc ttgcggccgt actccccagg cggaatgctt 720

aatgcgttag ctgcagcact gaagggcgga aaccctccaa cacttagcat tcatcgttta 780

cggtatggac taccagggta tctaatcctg tttgctaccc atactttcga gcctcagcgt 840

cagttacaga ccagacagcc gccttcgcca ctggtgttct tccatatatc tacgcatttc 900

accgctacac atggagttcc actgtcctct tctgcactca agtttcccag tttccgatgc 960

acttcttcgg ttgagccgaa ggctttcaca tcagacttaa aaaaccgcct gcgctcgctt 1020

tacgcccaat aaatccggac aacgcttgcc acctacgtat taccgcggct gctggcacgt 1080

agttagccgt ggctttctgg ttaaataccg tcaatacctg aacagttact ctcagatatg 1140

ttcttcttta acaacagagt tttacgagcc gaaacccttc ttcactcacg cggcgttgct 1200

ccatcagact ttcgtccatt gtggaagatt ccctactgct gcctcccgta ggagtttggg 1260

ccgtgtctca gtcccaatgt ggccgattac cctctcaggt cggctacgta tcattgccat 1320

ggtgagccgt taccccacca tctagctaat acgccgcggg accatccaaa agtgatagcc 1380

gaagccatct ttcaaacttg gaccatgcgg tccaagttgt tatgcggtat tagcatctgt 1440

ttccaggtgt tatcccccgc ttctgggcag gtttcccacg tgttactcac cagttcgcca 1500

cttactcaaa tgtaaatcat gatgcaagca ccaatcaata ccagagttcg ttcgacttgc 1560

atgtattagg cacgccgcca gcgttcgtcc tgagccagga tcaaactcta agactggaga 1620

tctggatccc tcgagtctag agtcgacctg caggcatgca aaggtttgg 1669

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 引物16s 27f

<400> 2

gagagtttga tcctggctca g 21

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 引物16s 1492r

<400> 3

cggctacctt gttacgactt 20