包含非-氨基酸成分，諸如碳水化 合物基團、金屬離子或羧酸酯。非-氨基酸成分可通過表達多肽的細胞添加，且可根據(jù)細胞 類型而不同。在本文中根據(jù)其氨基酸骨架結(jié)構(gòu)或編碼其的核酸來定義多肽。一般不對添加 物例如糖基進行特別說明，但是其可以存在。
[0029] 術(shù)語"免疫球蛋白"是指由一種或多種基本上由免疫球蛋白基因編碼的多肽組成 的蛋白質(zhì)。已鑒定的免疫球蛋白基因包括不同的恒定區(qū)基因以及極多的免疫球蛋白可變區(qū) 基因。免疫球蛋白可以多種形式存在，包括例如，F(xiàn)v、Fab和F(ab)2&及單鏈（SCFv)或雙 抗體。
[0030] 術(shù)語"完整免疫球蛋白"是指包含兩條被稱為免疫球蛋白輕鏈多肽（輕鏈）和兩 條被稱為免疫球蛋白重鏈多肽（重鏈）的免疫球蛋白。完整免疫球蛋白的各個免疫球蛋白 重鏈和輕鏈多肽包含可變域（可變區(qū)）（一般為多肽鏈的氨基末端部分），其包含能夠與抗 原相互作用的結(jié)合區(qū)。完整的免疫球蛋白的各個免疫球蛋白重鏈和輕鏈還包含恒定區(qū)（通 常為羧基末端部分）。重鏈的恒定區(qū)介導抗體結(jié)合至i)具有FeY受體（FcyR)的細胞，諸 如吞噬細胞，或ii)具有新生Fc受體（FcRn)(又稱為Brambell受體）的細胞。其還介導 抗體與一些因子（包括經(jīng)典補體系統(tǒng)的因子諸如成分（Clq))結(jié)合。免疫球蛋白輕鏈和重 鏈的可變域包含不同的片段，即4個框架區(qū)（FR)和3個高變區(qū)（CDR)。
[0031] 術(shù)語"免疫球蛋白碎片"是指包含至少一個以下結(jié)構(gòu)域的多肽：重鏈的可變域、重 鏈的ChI域、鉸鏈區(qū)、CH2域、CH3域、CH4域、輕鏈的可變域和/或輕鏈的Q域。還包含其衍 生物和變體。例如，可存在其中一個或多個氨基酸或氨基酸區(qū)域缺失的可變域。
[0032] 術(shù)語"免疫球蛋白綴合物"指包含經(jīng)肽鍵與其他多肽綴合的免疫球蛋白重鏈或輕 鏈的至少一個結(jié)構(gòu)域的多肽。所述其他多肽為非免疫球蛋白肽，例如激素、或生長受體、或 抗融合肽、或補體因子等。
[0033] 術(shù)語"過濾器"是指微孔過濾器或或大孔過濾器。過濾器包括濾過膜，濾過膜 自身由聚合材料構(gòu)成，所述聚合材料例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯醋酸乙烯酯共聚物、聚 四氟乙稀、聚碳酸醋、聚氯乙稀、聚酰胺類（尼龍，例如Zetapore?、N66Posidyne?)、聚 酯類、醋酸纖維素、再生纖維素、纖維素復合材料、聚砜類、聚醚砜類、聚芳砜類、聚苯砜 類（polyphenylsulphones)、聚丙稀腈、聚偏二氟乙稀、非織造的和織造的織物（例如 Tyvek? )、纖維材料，或者由無機材料組成，諸如zeolithe、Si02、A1203、TiO2或輕基磷灰 石。在一個實施方案中，第一個和第二個過濾器的過濾膜由醋酸纖維素制成。
[0034] 對于重組產(chǎn)生的免疫球蛋白的純化，通常采用不同的柱色譜步驟的組合。一般， 通常在蛋白A親和色譜之后再進行一個或兩個分離步驟。該最后的純化步驟稱為"最終精 制（polishingstep)"，用于去除痕量雜質(zhì)和污染物如聚集的免疫球蛋白、殘留HCP(宿主 細胞蛋白質(zhì)）、DNA(宿主細胞核酸）、病毒或內(nèi)毒素。對于該最終精制，通常使用流通模式 (flow-throughmode)下的陰離子交換材料。
[0035] 己經(jīng)充分確立了不同的方法并廣泛地用于蛋白質(zhì)回收和純化，例如用微生物蛋 白質(zhì)的親和色譜（例如，蛋白A或蛋白G親和色譜）、離子交換色譜（例如，陽離子交換 (羧甲基樹脂）、陰離子交換（氨基乙基樹脂）和混合模式的交換）、親硫吸附（例如，用 0疏基基乙醇和其他SH配體）、疏水相互作用或芳族吸附色譜（aromaticadsorption chromatography)(例如，用苯基瓊脂糖凝膠、親氮雜芳基樹脂（aza-arenophilicresin) 或間氨基苯硼酸）、金屬螯合親和色譜（例如，用Ni(II)-和Cu(II)-親和材料）、尺寸排 阻色譜和電泳方法（例如凝膠電泳、毛細管電泳）（Vijayalakshmi,M.A.，Appl.Biochem. Biotech. 75(1998)93-102)。
[0036] 本文所述的第一個方面是制備免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括：
[0037]-提供蛋白質(zhì)的濃度至少為100g/l的免疫球蛋白溶液，
[0038] _經(jīng)第一個和第二個過濾器單元的組合過濾所述免疫球蛋白溶液，其中第一個過 濾器單元包含孔徑分別為3. 0ym和0. 8ym的預(yù)過濾器和主過濾器，且第二個過濾器單元 包含孔徑分別為0. 45ym和0. 22ym的預(yù)過濾器和主過濾器，其是通過將所述溶液施加至 所述過濾器組合并施加壓力而進行的，由此制備免疫球蛋白溶液。
[0039] 在一個實施方案中，蛋白質(zhì)濃度為100g/l至300g/l。在另一個實施方案中，蛋白 質(zhì)濃度為l〇〇g/l至200g/l。在另一個實施方案中，蛋白質(zhì)濃度為120g/l至165g/l。在另 一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的體積為3升至100升。該溶液體積相當于總質(zhì)量300g 至50,OOOg的免疫球蛋白。在一個實施方案中，所述體積為3.1升至80升。蛋白質(zhì)的濃度 為120g/l至165g/l時，該溶液體積相當于總質(zhì)量370g至13, 200g的免疫球蛋白。在一 個實施方案中，免疫球蛋白是抗-IL13受體a抗體。在另一個實施方案中，免疫球蛋白是 抗-HER2抗體。
[0040] 本文的另一個方面報道了制備免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步驟：
[0041] _培養(yǎng)包含編碼免疫球蛋白的核酸的細胞，
[0042]-從細胞或培養(yǎng)基中回收免疫球蛋白，
[0043] _使用一個或多個色譜法步驟純化所述免疫球蛋白，并提供純化的免疫球蛋白溶 液，和
[0044]-經(jīng)如本文報道的過濾器的組合（即第一個和第二個過濾器單元的組合）過濾 純化的免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器單元包含孔徑為3. 0ym的預(yù)過濾器和孔徑 為0. 8ym的主過濾器，且第二個過濾器單元包含孔徑為0. 45ym的預(yù)過濾器和孔徑為 0. 22ym的主過濾器，其是通過將所述溶液施加至所述過濾器組合并施加壓力而進行的。
[0045] 在一個實施方案中，所述細胞是原核細胞或真核細胞。在細胞是原核細胞的一個 實施方案中，所述細胞選自大腸桿菌（E.coli)細胞或芽孢桿菌屬（bacillus)細胞。在細 胞是真核細胞的一個實施方案中，所述細胞選自哺乳動物的細胞，在一個特定的實施方案 中所述細胞選自CHO細胞、BHK細胞、HEK細胞、Per.C6?細胞和雜交瘤細胞。在一個實施 方案中，所述細胞是選自CH0-K1和CHODG44的哺乳動物的細胞。在一個實施方案中，培養(yǎng) 是在20°C至40°C的溫度進行，且持續(xù)時間為4至28天。在一個實施方案中，純化過程使用 蛋白A親合色譜步驟和至少一個選自以下的步驟：陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏 水作用色譜。
[0046] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)包含孔徑分別為3. 0ym和0. 8ym的預(yù)過濾器和主過濾器的第一個過濾 器單元和包含孔徑分別為0. 45ym和0. 22ym的預(yù)過濾器和主過濾器的第二個過濾器單元 的組合對處理（過濾）高度濃縮的免疫球蛋白溶液有利，其使得可以過濾完整批次的濃縮 的免疫球蛋白溶液而不需要替換過濾器。
[0047] 還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在過濾器組合中，有利于的是各過濾器單元以及過濾器組合中所使用 的兩個過濾器中的每一個具有大致相等的過濾器面積，即在最小過濾器面積的兩倍之內(nèi)。
[0048] 還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，視溶液中包括免疫球蛋白在內(nèi)的各組分而不同的壓力和濃度范圍有 助于有利的方法。
[0049] 如果所述溶液是濃度為160g/l或更高濃度（即165g/l或170g/l)的濃縮的免疫 球蛋白溶液，沒有向其中加入過糖或表面活性劑，則在一個實施方案中在1.45巴或更高的 施加的壓力下進行該方法的操作，在另一個實施方案中在1. 5巴或更高的施加的壓力下進 行該方法的操作。如果溶液是濃度為125g/l或更高濃度（即130g/l或135g/l)的濃縮的