多步驟的最終過濾的制作方法
【專利說明】多步驟的最終過濾
[0001] 本申請為分案申請，原申請的申請?zhí)枮?01080044481. 6,申請日為2010年9月29 日，優(yōu)先權(quán)日為2009年10月1日，發(fā)明名稱為"多步驟的最終過濾"。
[0002] 本文報道了包括兩個直接相連的過濾步驟的組合的用于濃縮的多肽溶液的最終 過濾的方法，其中第一個過濾步驟包括使用孔徑為3. 0ym的過濾器的預(yù)過濾和使用孔徑 為0. 8ym過濾器的主過濾，且第二個過濾步驟包括使用孔徑為0. 45ym的過濾器的預(yù)過濾 和使用孔徑為〇. 22ym的過濾器的主過濾。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 濃度超過100g/l的蛋白質(zhì)溶液在最終過濾步驟期間容易有困難，例如只具有低 跨膜通量或所使用的過濾器被在配制或濃縮過程期間形成的聚集物或顆粒聚集阻塞或由 于加入的賦形劑導(dǎo)致濃縮的溶液粘度增加。
[0005] 粘度高和顆?；蚓奂锖吭黾咏Y(jié)合在一起經(jīng)常導(dǎo)致所使用的0. 22 y m最終過 濾的過濾器的孔被阻塞。因此，或者在過濾步驟期間（即在一批被完全處理之前）必須替 換過濾器，或者必須增加過濾器面積。
[0006] 還已經(jīng)觀察到孔徑為0. 45 y m的過濾器和孔徑為0. 22 y m的過濾器的組合沒有優(yōu) 勢，例如作為Sartobran P 0.45/0. 22 ym過濾器提供時如此?？赡鼙荛_上述問題的增加孔 徑的過濾器被用作深度過濾器或預(yù)-過濾器，但不被用作最終過濾器。
[0007] 在DE4 204 444中報道了從氣流除去水滴的I. 2ym預(yù)過濾器和之后的0. 2ym 無菌過濾的組合。在US4, 488, 961中報道了包含兩個不同孔徑的過濾器過濾器單元，其中 孔徑較小的過濾器是可彎曲的，通過使過濾器的流向變彎曲以降低過濾器單元的阻力。在 US5, 643, 566中使用孔徑為0. 45ym的過濾器的預(yù)過濾和孔徑為0. 22ym的過濾器的無菌 過濾的組合。在EP0 204 836中報道了兩階段過濾器，該過濾器使用內(nèi)壁光滑的膜與在其 下面的由帶有隆起的脹管器的硬質(zhì)的過濾支撐物支撐的薄的、能彎曲的多孔膜構(gòu)建而成。 在DE3 818 860中報道了至少兩個具有不同的膜材料和不同的過濾器孔徑和過濾器孔幾 何形狀的膜濾器單元的組合。
[0008]Aldington等人（J.Chrom.B848(2007)64-78)報道了按比例放大的單克隆抗體 純化方法。在CS247484報道了制備針對人淋巴細(xì)胞的免疫球蛋白的方法。
[0009] 發(fā)明概沐
[0010] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩個各自包含預(yù)過濾器和主過濾器且各自具有特別選擇的孔徑的過濾 器的組合能用于在最后的封裝步驟期間過濾高度濃縮的免疫球蛋白溶液，而在過濾過程期 間沒有孔阻塞的風(fēng)險和替換過濾器的需求。
[0011] 本文的一個方面報道了制備免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括以下步驟：
[0012] a)提供蛋白質(zhì)的濃度至少為100g/l的免疫球蛋白溶液，
[0013] b)經(jīng)第一個和第二個過濾器的組合過濾所述免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器 包含孔徑為3. 0ym的預(yù)過濾器和孔徑為0. 8ym的主過濾器，且第二個過濾器包含孔徑為 0. 45 ym的預(yù)過濾器和孔徑為0. 22 ym的主過濾器，并由此制備免疫球蛋白溶液。
[0014] 本文的另一個方面報道了第一個和第二個過濾器的組合的如本文報道的過濾器 組合在活性藥物成分制備之前進行的免疫球蛋白溶液的最終過濾中的應(yīng)用，其中第一個過 濾器包含孔徑為3.Oym的預(yù)過濾器和孔徑為0. 8ym的主過濾器，且第二個過濾器包含孔 徑為0. 45 y m的預(yù)過濾器和孔徑為0. 22 y m的主過濾器。
[0015] 本文的另一個方面報道了制備免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步驟：
[0016] a)提供包含編碼免疫球蛋白的核酸的細(xì)胞，
[0017] b)培養(yǎng)所述細(xì)胞，
[0018] c)從細(xì)胞或培養(yǎng)基中回收免疫球蛋白，
[0019] d)使用一個或多個色譜法步驟純化所述免疫球蛋白并提供免疫球蛋白溶液，和
[0020] e)經(jīng)第一個和第二個過濾器的組合過濾步驟d)的免疫球蛋白溶液，其中第一個 過濾器包含孔徑為3. 0ym的預(yù)過濾器和孔徑為0. 8ym的主過濾器，且第二個過濾器包含 孔徑為0. 45 y m的預(yù)過濾器和孔徑為0. 22 y m的主過濾器，并由此制備免疫球蛋白。
[0021] 本文的另一個方面報道了試劑盒，其包含第一個過濾器（包含孔徑為3. 0ym的預(yù) 過濾器和孔徑為0. 8 y m的主過濾器）和第二個過濾器（包含孔徑為0. 45 y m的預(yù)過濾器 和孔徑為0. 22ym的主過濾器）。
[0022] 在一個實施方案中，第一個過濾器面積最多是第二個過濾器面積的兩倍。在另一 個實施方案中，第一個和第二個過濾器具有大致相同的總過濾器面積。在一個實施方案中， 免疫球蛋白溶液包含糖和/或氨基酸和/或表面活性劑和/或鹽。在另一個實施方案中， 免疫球蛋白溶液的濃度為l〇〇g/l至300g/l。在又一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的體積 為3升至100升。在另一個實施方案中，過濾施加的壓力是0.1巴至4.0巴。在一個實施 方案中，免疫球蛋白溶液的濃度為160g/l或更高，且過濾施加的壓力為1. 45巴或更高。在 另一個實施方案中壓力為1. 50巴或更高。在另一個實施方案中，免疫球蛋白溶液包含糖和 表面活性劑，且免疫球蛋白溶液濃度為125mg/ml或更高，且過濾施加的壓力為0. 75巴或更 低。在另一個實施方案中壓力為0.7巴或更低。
[0023]在一個實施方案中，免疫球蛋白是抗-IL13受體a抗體或抗-HER2抗體。在另一 個實施方案中，純化過程使用蛋白A親合色譜步驟和至少一個選自以下的步驟：陽離子交 換色譜、陰離子交換色譜和疏水作用色譜。
[0024]發(fā)明詳沐
[0025] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩個各自包含預(yù)過濾器和主過濾器和各自具有特別選擇的孔徑的過濾 器或過濾器單元的組合可以用于在最后封裝步驟期間過濾高度濃縮的和粘稠的以及配制 的免疫球蛋白溶液（即包含糖和表面活性劑）。尤其是包含孔徑分別為3. 0ym和0. 8ym 的預(yù)過濾器和主過濾器的第一個過濾器和包含孔徑分別為0. 45 y m和0. 22 y m的預(yù)過濾器 和主過濾器的第二個過濾器的組合是非常有利的。就該組合中的單個過濾器單元而言，過 濾包含總計例如Ikg的抗-IL-13Ral抗體或6kg的抗-HER2抗體的高度濃縮的溶液已是可 能的，而且封裝所述的量而僅有較少的材料損失已是可能的。在一個實施方案中過濾器表 面積與溶液體積的比率已被確定。
[0026] 在一個實施方案中，免疫球蛋白溶液包括免疫球蛋白和賦形劑。在另一個實施方 案中，賦形劑包含一種或更多種物質(zhì)，其選自糖諸如葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖 和棉子糖，氨基酸諸如精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、谷氨酸、 天冬氨酸、甘氨酸和甲硫氨酸，鹽諸如氯化鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀 和表面活性劑諸如聚山梨醇酯類和聚（氧乙烯-聚氧丙烯）聚合物。
[0027] 本文所述的過濾在治療性抗體的制備中用作最終過濾步驟。該步驟可以在將所需 的賦形劑、穩(wěn)定劑和/或抗-氧化劑加入高度濃縮的抗體溶液之后進行。在一個實施方案 中，以kg計的抗體的量與過濾器的總面積的比率為lOOOg/m2至10, 000g/m2。在另一個實施 方案中，所述比率為IOOOgAi2至6000g/m2。在又一個實施方案中，所述比率為4000g/m2至 6000g/m2〇
[0028] "多肽"由通過肽鍵連接氨基酸（天然的或合成的）組成。具有少于約20個氨基 酸殘基的多肽可被稱為"肽"，而由兩個或更多個多肽組成的分子或包含一個超過100個氨 基酸殘基的多肽的分子可被稱為"蛋白質(zhì)"。多肽還可以