專利名稱:一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及ー種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
木糖葡萄球菌(Staphylococcus aureus)為葡萄球菌家族中的一員，為低毒カ條件致病菌，但近年來檢出率和多重耐藥性呈逐年增高趨勢，已成為醫(yī)院感染的主要病原菌之一。木糖葡萄球菌感染后癥狀不典型，且呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，給臨床診斷和治療帶來一定困難，高效可靠的檢驗(yàn)方法已是必然需要。
所謂微生物培養(yǎng)是ー種用人工方法使微生物生長繁殖的技木，而選擇性選擇性培養(yǎng)基是用來促進(jìn)或抑制一定類型的生物體(如細(xì)胞或細(xì)菌等)而設(shè)計(jì)的選擇性培養(yǎng)基，利用這種選擇性培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。
ー份2012年I月25日公開，公開號為102329747A名為《木糖葡萄球菌A2的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法》的發(fā)明專利(申請?zhí)枮?01110258768. 5)公開了ー種用于木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus) A2菌種保藏號為CGMCC No. 5049的高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，該配方包括0. 5重量份乳糖、2重量份示蛋白胨、0. 2重量份酵母膏、5重量份香菇汁、7.5重量份似(1。該種培養(yǎng)基用于在制備肉制品發(fā)酵劑。但是應(yīng)用于醫(yī)療檢驗(yàn)方面卻達(dá)不到培養(yǎng)的效果，其原因在于，醫(yī)療檢驗(yàn)用樣本往往含有其他致病菌，尤其是金葡菌，該種培養(yǎng)基僅僅提供了木糖葡萄球菌的生長條件，但是不能有效的去除混入的雜菌，導(dǎo)致混入的雜菌，如金黃色葡萄球菌，比木糖葡萄球菌生長更快，很快覆蓋了培養(yǎng)基，木糖葡萄球菌無法生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種對木糖葡萄球菌分離率高的選擇性培養(yǎng)基。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有
麥芽浸粉15g ；
雞蛋蛋白液150ml ；
氯化鈉5g ；
枸櫞酸鎂0. 5g ；
瓊脂15g ；
假細(xì)錐甲素8 12mg;
黃葵內(nèi)酯0.4 g;
磷酸ニ氫鉀0. 2g ；
蒸餾水加至1000ml。[0007]優(yōu)化方案中，姆IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅4mg。
優(yōu)化方案中，每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. lg。
優(yōu)化方案中，每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的山藥水煮液200 300ml。
最優(yōu)化方案中，姆IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅4mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液； (2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長；黃葵內(nèi)酷、L-半胱氨酸屬氨基酸類，為營養(yǎng)劑；且黃葵內(nèi)酯為木糖葡萄球菌特異性營養(yǎng)劑，可以特異性的促進(jìn)木糖葡萄球菌繁殖。瓊脂是選擇性培養(yǎng)基的凝固劑；假細(xì)錐甲素對于金葡菌具有特異的抑菌作用，對于木糖葡萄球菌無效；雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質(zhì)對促進(jìn)木糖葡萄球菌的繁殖和生長都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養(yǎng)基PH值恒定的作用。銅離子屬于重金屬離子，在4mg/L這個(gè)濃度劑量下，沉積于金葡菌內(nèi)部，導(dǎo)致胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團(tuán)塊，最終導(dǎo)致細(xì)菌變形及破裂，呈現(xiàn)重金屬源性損傷，而木糖葡萄球菌對重金屬的運(yùn)輸能力和滲透能力低于金葡菌，也即重金屬的抗性較高，故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長。山藥為薯菌科植物薯菌Dioscorea opposita Thunb.的干燥根莖,含有蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、還元糖、氨基酸等多種成分，可以提供能量代謝、細(xì)胞發(fā)育、新陳代謝因子，尤其是山藥塊莖含薯蕷皂甙元(diosgenin)和多酚氧化酶，有助于促進(jìn)路鄧葡萄球菌生長，尤其是重金屬環(huán)境下菌落的生長。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、木糖葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)際情況，對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。
實(shí)施例1，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素8mg ;黃葵內(nèi)酯0.4 g ;磷酸ニ氫鐘0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉；雞蛋蛋白液；氣化納；構(gòu)橡Ife續(xù)；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。
實(shí)施例2，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素12mg ;黃葵內(nèi)酯0. 4 g ;磷酸ニ氫鐘0. 2g ;硫酸銅4mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉；雞蛋蛋白液；氣化納；構(gòu)櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀；硫酸銅溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
實(shí)施例3，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素IOmg ;黃葵內(nèi)酯0. 4 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min,滅菌后分裝。
實(shí)施例4，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素9mg ;黃葵內(nèi)酯0. 4 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的山藥水煮液200ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀；溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45min,滅菌后分裝。實(shí)施例5，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素Ilmg ;黃葵內(nèi)酯0.4 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅4mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液300ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法為
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
所述的山藥水煮液濃度為200g/L，指的是每升山藥水煮液中含有生藥200g。
本發(fā)明所得木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基具有檢出可靠、木糖葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。
I對象與方法。
1.1選擇性培養(yǎng)基制備共設(shè)3組，分別為對照組、實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組。對照組為木糖葡萄球菌A2高密度培養(yǎng)基，配方為0. 5g乳糖、2g示蛋白胨、0.2g酵母膏、5g香菇汁、7. 5gNaCl溶于IOOOg蒸餾水中。實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組的配方和制備方法見實(shí)施例。
1. 2方法將50份經(jīng)由PCR確定木糖葡萄球菌陽性的標(biāo)本中混入金色葡萄球菌，接種于培養(yǎng)基上，在37°C下孵育24小吋。
1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 13. 0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Pく 0. 05表示有顯著性意義。
2結(jié)果在50份接種標(biāo)本中，細(xì)菌培養(yǎng)分離并鑒定為木糖葡萄球菌的，實(shí)施例1方案組為48例，實(shí)施例5方案組為49例。對照組木糖葡萄球菌A2高密度培養(yǎng)基經(jīng)鑒定為木糖葡萄球菌的共23例，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本發(fā)明各實(shí)施例組與對照組比較具有明顯差異(P〈0. 05)。結(jié)果表明，本發(fā)明實(shí)施例木糖葡萄球菌分離率明顯高于現(xiàn)有的選擇性培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有 麥芽浸粉15g ； 雞蛋蛋白液150ml ； 氯化鈉5g ； 枸櫞酸鎂O. 5g ； 瓊脂15g ； 假細(xì)錐甲素8 12mg; 黃葵內(nèi)酯0.4 g; 磷酸二氫鉀O. 2g ； 蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅4mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅4mg ；L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
6.一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液； (2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種木糖葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g；雞蛋蛋白液150ml；氯化鈉5g；枸櫞酸鎂0.5g；瓊脂15g；假細(xì)錐甲素8~12mg；黃葵內(nèi)酯0.4g；磷酸二氫鉀0.2g；蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；黃葵內(nèi)酯；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于山藥水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、木糖葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
文檔編號C12Q1/14GKCN103014130SQ201310010767
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月13日
發(fā)明者候素君 申請人:候素君導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan