專利名稱:一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域,具體涉及ー種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù):
葡萄球菌是臨床較常見的感染菌,隨著大量頭孢菌素尤其是第三代頭孢菌素等高效廣譜抗菌藥物的廣泛使用,耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)在全球范圍內(nèi)不斷増加,耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRCNS)作為MRS和凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)家族中的ー員,其檢出率和多重耐藥性呈逐年增高趨勢,已成為醫(yī)院感染的主要病原菌之一。CNS為低毒力條件致病菌,感染后癥狀不典型,且呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象,給臨床診斷和治療帶來一定困難,高效可靠的檢驗方法已是必然需要。目前CNS的測定方法為利用玻片法、試管法檢測凝聚因子,但有10% 15%假陰性率,故而在復(fù)雜病例的診斷,或者進行CNS治療藥物敏感度篩查實驗、藥理實驗、藥效實驗吋,需要進行進一歩的微生物培養(yǎng)。
所謂微生物培養(yǎng)是ー種用人工方法使微生物生長繁殖的技木,而選擇性選擇性培養(yǎng)基是用來促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等)而設(shè)計的選擇性培養(yǎng)基,利用這種選擇性培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。
目前臨床上普遍使用的葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基為甘露醇高鹽瓊脂(Manitol SaltAgar),用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)。培養(yǎng)基成分為蛋白胨、雞蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化鈉、酚紅、瓊脂。金黃色葡萄球菌菌落為黃色,大腸桿菌和沙門氏菌菌落為無色。但是,該種培養(yǎng)基并不能選擇性培養(yǎng)凝固酶陰性葡萄球菌(CNS),其原因在于在目前的選擇性培養(yǎng)基中金黃色葡萄球菌比凝固酶陰性葡萄球菌生長更快,很快覆蓋了培養(yǎng)基,CNS無法生長。
—份2011年7月6日公開,公開號為102119221A名為《能夠區(qū)分金黃色葡萄球菌與凝固酶陰性葡萄球菌的培養(yǎng)基》的發(fā)明專利(申請?zhí)枮?00980131422. X)公開了ー種用于生長、檢測、鑒定和/或計數(shù)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的特異性培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基特征在于其包含至少ー種磷脂酶C的熒光、顯色或發(fā)光底物。該發(fā)明中實施例的基礎(chǔ)培養(yǎng)基源自Baird-Parker + RPF培養(yǎng)基和Ottaviani Agosti瓊脂培養(yǎng)基(Qkk)。但該種培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基,即通過使用一種特異性底物而簡單的辨認金葡菌。該發(fā)明并未提供CNS選擇培養(yǎng)的任何信息。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供ー種對凝固酶陰性葡萄球菌分離率高的選擇性培養(yǎng)基。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是ー種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;
雞蛋蛋白液150ml ;
氯化鈉5g ;
枸櫞酸鎂0. 5g ;
瓊脂15g ;
假細錐甲素8 12mg;
天門冬素3. 6g ;
磷酸ニ氫鉀0. 2g ;
蒸餾水加至1000ml。
優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。
優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. lg。
優(yōu)化方案中,每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液200 300ml。
最優(yōu)化方案中,姆IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ;L_半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
ー種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于包括以下步驟
(1)取百合加水煮沸I小時,過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量;枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑,并可以抑制雜菌生長;天門冬素、L-半胱氨酸屬氨基酸類,為營養(yǎng)劑;瓊脂是選擇性培養(yǎng)基的凝固劑;假細錐甲素對于金葡菌具有特異的抑菌作用,對于凝固酶陰性葡萄球菌無效;雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等,這些物質(zhì)對促進凝固酶陰性葡萄球菌的繁殖和生長都是很重要的因素,此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養(yǎng)基PH值恒定的作用。銅離子屬于重金屬離子,在5mg/L這個濃度劑量下,沉積于金葡菌內(nèi)部,導(dǎo)致胞壁消失或變薄,核糖體聚集成團塊,最終導(dǎo)致細菌變形及破裂,呈現(xiàn)重金屬源性損傷,而凝固酶陰性葡萄球菌對重金屬的運輸能力和滲透能力低于金葡菌,也即重金屬的抗性較高,故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長。百合為百合科植物卷丹Liliumlancifolium Thunb 、百合 Lilium brown ii F. E. Brown var. viridulum Baker 或細葉百合Lilium pumilum DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉,含有蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、還元糖、維生素B1、B2、泛酸、維生素C、¢-胡蘿卜素等多種成分,可以提供能量代謝、細胞發(fā)育、新陳代謝因子,有助于促進凝固酶陰性葡萄球菌生長,尤其是重金屬環(huán)境下菌落的生長。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較,具有檢出可靠、凝固酶陰性葡萄球菌分離率高的特點。
具體實施方式
以下結(jié)合實際情況,對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。
實施例1,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素8mg ;天門冬素3. 6 g ;磷酸ニ氫鐘0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉;雞蛋蛋白液;氣化納;構(gòu)橡Ife續(xù);瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
實施例2,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素12mg ;天門冬素3. 6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀;硫酸銅溶于蒸餾水中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
實施例3,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素IOmg ;天門冬素3. 6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸溶于蒸餾水中,混勻 過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,毎次45 min,滅菌后分裝。
實施例4,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素9mg ;天門冬素3. 6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的百合水煮液200ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法
(1)取百合加水煮沸I小時,過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀;溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,毎次45min,滅菌后分裝。
實施例5,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g;枸櫞酸鎂0. 5g;瓊脂15g;假細錐甲素Ilmg;天門冬素3.6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液300ml ;蒸懼水加至1000ml。制備方法為
(1)取百合加水煮沸I小時,過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液;
(2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
所述的百合水煮液濃度為200g/L,指的是每升百合水煮液中含有生藥200g。
本發(fā)明所得凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基具有檢出可靠、凝固酶陰性葡萄球菌分離率高的特點,為臨床資料充分證明,有關(guān)資料如下。
I對象與方法。
1.1選擇性培養(yǎng)基制備共設(shè)3組,分別為對照組、實施例1方案組、實施例5方案組。對照組為葡萄球菌選擇性瓊脂110 (CHAPMAN瓊脂),配方為胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明膠、D-甘露醇、乳糖、氯化鈉、磷酸氫ニ鉀、瓊脂。實施例1方案組、實施例5方案組的配方和制備方法見實施例。
1. 2方法將90份經(jīng)由PCR確定凝固酶陰性葡萄球菌陽性的標本中混入金色葡萄球菌,接種于培養(yǎng)基上,在37°C下孵育24小吋。
1. 3統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 13. 0進行統(tǒng)計分析,Pく 0. 05表示有顯著性意義。[0028]2結(jié)果在90份接種標本中,細菌培養(yǎng)分離并鑒定為凝固酶陰性葡萄球菌的,實施例I方案組為82例,實施例5方案組為86例。對照組CHAPMAN瓊脂培養(yǎng)基菌落經(jīng)鑒定最后被證實均為金葡菌,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,本發(fā)明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結(jié)果表明,本發(fā)明實 施例凝固酶陰性葡萄球菌分離率明顯高于現(xiàn)有的選擇性培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在,配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有 麥芽浸粉15g ; 雞蛋蛋白液150ml ; 氯化鈉5g ; 枸櫞酸鎂O. 5g ; 瓊脂15g ; 假細錐甲素8 12mg; 天門冬素3. 6g ; 磷酸二氫鉀O. 2g ; 蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基,其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ;L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的百合水煮液200 300ml。
6.一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于包括以下步驟 (1)取百合加水煮沸I小時,過濾,取濾液,調(diào)整體積到濃度為200g/L,得百合水煮液; (2)取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸二氫鉀;L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中,混勻過濾后,蒸餾水定容,低溫滅菌2次,每次45 min,滅菌后分裝。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種凝固酶陰性葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法,用于檢驗和藥敏試驗領(lǐng)域。其特征在于,配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g;雞蛋蛋白液150ml;氯化鈉5g;枸櫞酸鎂0.5g;瓊脂15g;假細錐甲素8~12mg;天門冬素3.6g;磷酸二氫鉀0.2g;蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉;雞蛋蛋白液;氯化鈉;枸櫞酸鎂;瓊脂;假細錐甲素;天門冬素;磷酸二氫鉀;L-半胱氨酸及硫酸銅溶于百合水煮液中,混勻,定容,滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較,具有檢出可靠、凝固酶陰性葡萄球菌分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/14GKCN103014126SQ201310010741
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月13日
發(fā)明者孟蕾蕾 申請人:孟蕾蕾導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan