專利名稱:乳酸細(xì)菌菌株和包含此菌株的可食用組合物、藥物以及獸醫(yī)產(chǎn)品的制作方法
本發(fā)明涉及一種新的、生物純的嗜熱唾液鏈球菌菌株(Streptococcus thermophilus ssp.Salivarius)(CD8)(于2001年12月4日保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心(DSMZ)(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Braunschweig，Germany，保藏號(hào)DSM 14667)以及它的子代和突變體。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及了含有所述新菌株CD8作為有效成分(或作為有效成分中的一種)的可食用組合物、藥物和獸醫(yī)產(chǎn)品，以及利用上述菌株制備可食用組合物、藥物和獸醫(yī)產(chǎn)品，這些可食用組合物、藥物和獸醫(yī)產(chǎn)品用于預(yù)防/治療各種潛在病理狀況或明顯病理學(xué)的警示性和預(yù)示性體征。
當(dāng)本發(fā)明可食用組合物和藥物用于人類時(shí)，其預(yù)防或者確切地說治療作用主要顯示在預(yù)防某些肝臟疾病，如肝臟脂肪變性(脂肪肝)，特別是非酒精性肝臟脂肪變性，以及肝性腦?。活A(yù)防一些內(nèi)分泌和代謝疾病如高胰島素血癥、胰島素抗性和肥胖癥；還預(yù)防嬰兒病理狀態(tài)如孤獨(dú)癥、注意力缺陷障礙(ADD)和注意力缺陷的過度反應(yīng)癥(ADHD)(Attention Deficit/Hyperactive Disorder)。
當(dāng)用于動(dòng)物時(shí)，獸醫(yī)產(chǎn)品在治療肝臟病理學(xué)和內(nèi)分泌及代謝疾病中是有用的。
簡要說來，在本說明書的其余部分將專門描述預(yù)防/治療肝臟脂肪變性(脂肪肝)和非酒精性肝臟脂肪變性，也描述了本發(fā)明中可食用組合物和藥物對(duì)這些病理的特定預(yù)防和治療功效。
肝臟脂肪變性(或脂肪肝)是指肝細(xì)胞中脂類的過量積累，“過量積累”含意為脂類的積累超過正常肝重的5％。在大泡性(macrovesicular)肝臟脂肪變性中，如同在脂肪細(xì)胞中出現(xiàn)的一樣，大滴甘油三酯使肝細(xì)胞膨脹，使它們的細(xì)胞核易位到細(xì)胞邊緣。在小泡性(microvesicular)肝臟脂肪變性中，小滴甘油三酯在肝細(xì)胞中積累，把細(xì)胞核留在中心位置，于是肝細(xì)胞呈現(xiàn)出泡沫樣。
肝臟脂肪變性常能導(dǎo)致血清轉(zhuǎn)氨酶的有限增加(低于正常值上限的4倍)，并且可以通過超聲波掃描術(shù)、計(jì)算機(jī)化斷層顯像等成像技術(shù)進(jìn)行可靠鑒定。
非酒精性肝臟脂肪變性(常稱為NonAlcoholic steatoHepatitis，NASH)是一種脂肪變性的臨床癥狀，并伴有肝臟發(fā)炎。
確認(rèn)排除了其他肝病原因(例如感染肝炎B型病毒和肝炎C型病毒)和排除了酒精(20克/天)的濫用之后，可以通過肝臟活檢來診斷非酒精性肝臟脂肪變性。一旦排除了濫用因素，應(yīng)該考慮下列可能的病因因素飲食異常 肥胖； 全部胃腸外進(jìn)食； 體重快速減輕藥物 雌激素； 皮質(zhì)甾類； 乙胺碘呋酮代謝疾病 無β-脂蛋白血癥； β低脂蛋白血癥； 咸爾遜氏??；韋一克??； 四肢脂質(zhì)營養(yǎng)不良胃腸系統(tǒng)的外科手術(shù)改變 空腸回腸旁路術(shù)； 小腸大面積切除；胃成形術(shù)非酒精性肝臟脂肪變性的具體原因尚不清楚。過去，患這種病癥的一般患者都被描述為是女性、肥胖、血液內(nèi)糖過剩(可能是糖尿病造成的)。此外，患者可能呈現(xiàn)血液甘油三酯過剩并患有冠狀疾病、甲狀腺病癥或高血壓。近來已報(bào)道患有非酒精性肝臟脂肪變性的病人并不總是符合這種描述。一項(xiàng)試驗(yàn)由不超重的男性和女性受試者組成，他們不是糖尿病患者并且沒有過剩的血液甘油三酯。另外一組診斷有非酒精性肝臟脂肪變性的患者包括年齡在9至16歲的兒童。他們大多數(shù)超重但是只有2/30患有糖尿病。
沒有血液試驗(yàn)，該試驗(yàn)可以使確定性診斷脂肪變性和非酒精性肝臟脂肪變性成為可能。
轉(zhuǎn)氨酶(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT)的增加(也可能不增加)是唯一的生化指標(biāo)，然而他們?cè)趦煞N病理學(xué)上是共有的。已在病理學(xué)肥胖個(gè)體上找到了正常的生化值，這些個(gè)體的肝臟活檢顯示出進(jìn)行性肝病。
然而AST/ALT的比值會(huì)有益于區(qū)分酒精性肝臟脂肪變性和非酒精性肝臟脂肪變性，在前者中酒精(乙醇)的濫用可以導(dǎo)致深度的病理解剖學(xué)變化。在酒精性脂肪變性中AST/ALT比值一般高于2，而在非酒精性脂肪變性中ALT水平要高于AST水平。
目前還沒有得到普遍認(rèn)可的治療非酒精性肝臟脂肪變性的特定方法。顯而易見，肥胖、患有糖尿病以及具有血液甘油三酯升高值的患者被建議通過采取低熱量、低脂肪飲食的方法以及服用胰島素或降血糖藥物來減輕體重和控制他們的糖尿病。關(guān)于NASH的病理學(xué)、臨床方面、診斷和治療的詳細(xì)綜述，請(qǐng)看Sheth S G.等，非酒精性脂肪性肝炎Ann.Intern.Med.1997，127-137.這篇文章作為參考文獻(xiàn)編入本說明書中。
缺乏有效并普遍接受的治療方法構(gòu)成了一種風(fēng)險(xiǎn)因素，因?yàn)?，盡管非炎癥脂肪變性是一種良性狀態(tài)，有10％到50％受非酒精性肝臟脂肪變性影響的患者會(huì)產(chǎn)生一種能退化為肝硬化的進(jìn)行性纖維變性。肝硬化在西方國家如美國列死亡原因的第11位。
因而有必要具有一種供我們支配的有效預(yù)防/治療肝臟脂肪變性，特別是非酒精性肝臟脂肪變性的方法，所以本發(fā)明的目的就是使這種方法變得可用。
根據(jù)本發(fā)明，所述方法包含一種新的、生物純的嗜熱唾液鏈球菌菌株(CD8)(于2001年12月4日保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心，保藏號(hào)DSM 14667)以及它的子代和突變體。
該發(fā)明進(jìn)一步涉及含有前述鏈球菌菌株作為有效成份的組合物，組合物能夠在形式上和活性上體現(xiàn)為可食用產(chǎn)品或飲食補(bǔ)充物，或藥物本身，或獸醫(yī)產(chǎn)品，行使適當(dāng)?shù)妮o助或預(yù)防作用或治療作用，至于該組合物將要行使的具體的功能則依賴于它所要應(yīng)用的特定受試者。
該發(fā)明也包括使用上述菌株制備組合物，該組合物適于預(yù)防/治療先前列舉的肝臟、內(nèi)分泌和代謝疾病或者孤獨(dú)癥以及ADD或ADHD，以及一種基于上述組合物的給藥(優(yōu)選口服)的預(yù)防/治療方法盡管解釋新鏈球菌菌株(CD8)發(fā)揮預(yù)防/治愈作用的機(jī)制對(duì)于本發(fā)明的理解和實(shí)際應(yīng)用不是必需的，但可以假設(shè)良性和非酒精性肝臟脂肪變性(NASH)的進(jìn)展被炎癥細(xì)胞因子信號(hào)中鏈球菌誘導(dǎo)的變化所抑制、被上皮細(xì)胞屏障功能的改善所抑制以及被阻止其他腸內(nèi)細(xì)菌的易位所抑制。這些機(jī)制并不互相排斥并且有可能新的鏈球菌菌株具有多種活性。
對(duì)腸道有保護(hù)作用的基于乳酸細(xì)菌的組合物是已知的，但緩解或?qū)沽夹愿闻K脂肪變性或非酒精性肝臟脂肪變性的組合物則是未知的。
本發(fā)明含有預(yù)防或治療有效量的嗜熱唾液鏈球菌(CD8)或其子代或突變體的組合物可以制成可食用組合物或飲食補(bǔ)充物、制成藥物或獸醫(yī)產(chǎn)品，其中前述鏈球菌是唯一的活性成分或與一種或多種其他活性成分和/或一種或多種藥理學(xué)上可以接受的賦形劑混合。根據(jù)組合物的特定目的挑取賦形劑的方法和挑取最適宜的制備方法屬于食品或藥物技術(shù)領(lǐng)域：
人員的范疇。
一種特別優(yōu)選的組合物含有前述的鏈球菌CD8和短乳桿菌(Lactobacillus brevis)CD2。后者保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心，保藏號(hào)DSM 11988。
前述組合物可進(jìn)一步含有選自嬰兒雙岐桿菌(Bifidobacteriuminfantis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、雙歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillusbulgaricus)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)等的菌株或他們的混合物。
前述組合物可進(jìn)一步含有下列成分中的至少一種維生素E、膽堿、熊脫氧膽酸、氯貝丁酯、thioglitazone、吉非貝齊、甜菜堿、N-乙酰半胱氨酸、羅格列酮、堿性氨基酸、L-肉堿或一種低級(jí)烷基L-肉堿或它們藥理學(xué)可接受的鹽類。
優(yōu)選的低級(jí)烷基L-肉堿是乙?；?、丙?；彤愇祯；鵏-肉堿。L-肉堿的藥理學(xué)可接受鹽類是富馬酸鹽和酒石酸鹽，而藥理學(xué)上可接受的烷基L-肉堿鹽類是鹵化物、富馬酸鹽和半乳糖二酸鹽。
適于口服給藥的組合可以以單一劑量的形式存在，例如片劑、膠囊和小包，或者是粉末和顆粒形式，或者是懸浮液或乳液的形式。
片劑和膠囊可以包含粘合劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑、著色物質(zhì)、分離劑等等。片劑可以采用熟知的技術(shù)進(jìn)行包被。
液體組合物可以水性或油狀懸浮液的形式存在，例如在可食用油中，或者根據(jù)用戶的要求通過把以粉末或顆粒形式存在的制劑溶解或懸浮到水中或其他合適的溶劑中而進(jìn)行制備。
這些液體組合物可以包含懸浮劑、乳化劑、防腐劑等等。
如上述的各種劑量形式中優(yōu)選含有一定量嗜熱唾液鏈球菌(CD8)，其中當(dāng)用戶遵照易于使用的服藥方案用藥時(shí)，所述一定量足以提供給用戶每天500億至36000億個(gè)所述菌株的細(xì)菌。
我們現(xiàn)在敘述一下臨床研究，在研究中征募了非酒精性肝臟脂肪變性患者。非酒精性肝臟脂肪變性的診斷必須包括排除肝炎C病毒感染(即肝炎C病毒抗體)以及肝炎B病毒感染(肝炎B表面抗原)。血漿銅藍(lán)蛋白和a-1-抗胰蛋白酶水平在非酒精性肝臟脂肪變性的病人中通常正常。血清學(xué)自體免疫參數(shù)(抗線粒體抗體、抗核抗體、抗平滑肌抗體和抗肝臟/腎臟微粒體抗體)在受非酒精性肝臟脂肪變性影響的病人中為負(fù)值，除了一些有抗核抗體低陽性效價(jià)的病人(從1∶40到1∶320)。
臨床研究1征募了24位被診斷有非酒精性肝臟脂肪變性癥狀的病人用于臨床研究，其病癥是根據(jù)相容血清檢驗(yàn)顯示丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高而確定的。每天，所有病人都攝取凍干為顆粒的1.8萬億個(gè)嗜熱唾液鏈球菌(CD8)。
在研究開始和治療3個(gè)月后測(cè)定了生化血清參數(shù)，測(cè)量了體重和脂質(zhì)曲線(profile)。24人中有12人(50％)是肥胖的(＞20％超出理想體重)。11個(gè)病人使用口服降血糖藥和/或胰島素或具有空腹葡萄糖值＞160mg/dl。
3周治療后的血清堿性磷酸酶(Alk.phosph)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)平均值相對(duì)允許的基值顯著降低(T＜0.01)，如下表所示，其中數(shù)值表示為IU/l。
甘油三酯、膽固醇和體重沒有檢測(cè)到顯著變化。表中所列數(shù)據(jù)表明采用嗜熱唾液鏈球菌(CD8)治療非酒精性肝臟脂肪變性導(dǎo)致堿性磷酸酶、ALT和GGT水平顯著改善，所述堿性磷酸酶、ALT和GGT是指示肝臟功能如細(xì)胞裂解和膽汁淤積的血清酶。
臨床研究2研究中征募了五名患者兩名男性和三名女性，他們具有增加的的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平，對(duì)他們實(shí)施的肝臟活檢表明了征募前六個(gè)月中所發(fā)展的非酒精性肝臟脂肪變性。這些病人沒有表現(xiàn)出其他慢性肝臟疾病的跡象也沒有服用降低甘油三酯的藥。四個(gè)月后，每位患者每天攝入18000億個(gè)下列種類的細(xì)菌嗜熱唾液鏈球菌(CD8)短乳桿菌(CD2)嬰兒雙岐桿菌植物乳桿菌干酪乳桿菌德氏乳桿菌保加利亞亞種嗜酸乳桿菌。
每克組合物含有嗜熱唾液鏈球菌(CD8)1500億短乳桿菌(CD2)100億嬰兒雙岐桿菌1000億植物乳桿菌100億干酪乳桿菌100億德氏乳桿菌保加利亞亞種300億嗜酸乳桿菌300億。
在研究開始和16個(gè)星期時(shí)測(cè)定AST和ALT的血清水平。
本研究由五名沒有顯示任何負(fù)反應(yīng)的病人完成。
研究結(jié)果列于下表，其中結(jié)果表示為IU/l
本研究沒發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)曲線(血膽固醇(cholesterolemia)、甘油三酯)的變化，這證實(shí)了前述含有其他乳酸菌和嗜熱唾液鏈球菌(CD8)的組合物的特異性作用。組合物做成制劑以便顯示嗜熱唾液鏈球菌(CD8)和其他乳酸細(xì)菌(例如短乳桿菌CD2，看國際專利申請(qǐng)WO99/42568)的抗炎性質(zhì)。
根據(jù)布達(dá)佩斯條約為專利程序目的而進(jìn)行的國際承認(rèn)微生物保藏保藏證明INTERNATIONAL FORMVSL Pharma Ltd.1，Christchurch SquareDublin 8Ireland RECEIPT IN THE CASE OF AN ORIOINAL DEPOSITissued pursuant to Rule 7.1 by theINTERNATIONAI，DEPOSITARY AUTHORITYidentified at the bottom of this page 1Where Rule 6.4(d)applia，such date is the date on whlch the status of intemational depositary authority was acauired.Form DSMA-BP/4(Sole page)0196
權(quán)利要求
1.一種生物純的嗜熱唾液鏈球菌菌株CD8以及它的子代，所述菌株于2001年12月4日保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心，保藏號(hào)DSM 14667。
2.一種含有嗜熱唾液鏈球菌菌株或其子代的組合物，其中所述菌株于2001年12月4日保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心，保藏號(hào)DSM 14667。
3.權(quán)利要求
2中的組合物，還包含一種短乳桿菌菌株CD2或它的子代，該菌株保藏在德國布朗施維格的德意志微生物保藏中心，保藏號(hào)DSM 11988。
4.權(quán)利要求
3中的組合物，還包含選自嬰兒雙岐桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、雙歧雙歧桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種、嗜酸乳桿菌的菌株或者它們的混合物。
5.權(quán)利要求
2-4中任一項(xiàng)的組合物，還包含至少一種下列成分維生素E、膽堿、熊脫氧膽酸、氯貝丁酯、thioglitazone、吉非貝齊、甜菜堿、N-乙酰半胱氨酸、羅格列酮、堿性氨基酸、L-肉堿或一種低級(jí)烷基L-肉堿或它們藥理學(xué)可接受的鹽類。
專利摘要
描述了一種新的嗜熱唾液鏈球菌菌株(Streptococcusthermophilus ssp. Salivarius)(于2001年12月4日保藏在DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Braunschweig，Germany，保藏號(hào)DSM 14667)以及包含此菌的可食用組合物、藥物以及獸醫(yī)產(chǎn)品。所述菌株在預(yù)防/治療肝臟脂肪變性(脂肪肝)和非酒精性肝臟脂肪變性中特別有效。
文檔編號(hào)A61P1/16GKCN1276970SQ02818723
公開日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2002年12月19日
發(fā)明者C·德西蒙 申請(qǐng)人:艾蒂爾藥物有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan