背景技術(shù)：

1、在成熟b細(xì)胞和b細(xì)胞衍生的腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的b細(xì)胞成熟抗原(bcma)已牽涉幾種b細(xì)胞癌癥(例如，多發(fā)性骨髓瘤)和b細(xì)胞疾病或障礙(例如，輕鏈淀粉樣變性或lca)的進(jìn)展。因此，對于抗b細(xì)胞癌癥療法以及針對b細(xì)胞相關(guān)疾病或障礙的療法，bcma是有吸引力的靶標(biāo)。盡管如此，許多現(xiàn)有的bcma靶向療法(如抗cd3xbcma?t細(xì)胞接合物)引發(fā)強(qiáng)的毒性問題，如過度的促炎性細(xì)胞因子釋放。

2、自然殺傷(nk)細(xì)胞是參與先天免疫的淋巴細(xì)胞亞群。nk細(xì)胞提供了有效的免疫監(jiān)視機(jī)制，通過該機(jī)制可以消除不需要的細(xì)胞，如腫瘤或病毒感染的細(xì)胞。nk細(xì)胞的特征和生物學(xué)特性包括表面抗原(包括cd16、cd56和/或cd57)的表達(dá)；細(xì)胞表面上α/β或γ/δtcr復(fù)合物的不存在；通過激活特異性細(xì)胞溶解酶以mhc非限制性方式結(jié)合并殺傷細(xì)胞(特別是不能表達(dá)“自身”mhc/hla抗原的細(xì)胞)的能力；殺傷腫瘤細(xì)胞或表達(dá)nk激活性受體的配體的其他患病細(xì)胞的能力；以及釋放刺激免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)分子(稱為細(xì)胞因子)的能力。由于自然殺傷(nk)細(xì)胞的潛在抗腫瘤特性，人們對自然殺傷細(xì)胞的興趣不斷增長。

3、本領(lǐng)域?qū)哂锌晒芾戆踩蕴卣鞯挠行Э筨cma療法存在需求。本發(fā)明要求保護(hù)的抗bcma?x?nkp46結(jié)合蛋白提供了這種需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本披露涉及多功能結(jié)合蛋白，該多功能結(jié)合蛋白包含第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)以及免疫球蛋白fc區(qū)或其變體的全部或部分，其中該第一abd特異性結(jié)合人bcma并且該第二abd特異性結(jié)合人nkp46，并且其中該免疫球蛋白fc區(qū)或其變體的全部或部分與人fc-γ受體結(jié)合。特別地，所披露的nkp46-bcma接合物具有廣泛的fc工程化，其增強(qiáng)adcc活性(經(jīng)由與抗體的恒定區(qū)(fc)結(jié)合的cd16(fcγriiia))和/或血清半衰期。

2、所披露的nkp46-bcma接合物通過與nkp46和cd16的雙重nk接合而顯示出強(qiáng)效力，具有良好的安全性特征(與t細(xì)胞接合物(tce)方式相比，極少的促炎性細(xì)胞因子釋放)和長的血清半衰期。

3、本披露還涉及用于制備所述結(jié)合蛋白的方法、所述結(jié)合蛋白的組合物及其用途。

4、在一個方面，本披露提供了結(jié)合蛋白，該結(jié)合蛋白包含對bcma具有結(jié)合特異性的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)和對nkp46具有結(jié)合特異性的第二abd，其中：

5、(a)該第一abd包含：(a1)第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh1)，該第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有g(shù)ftfsnfgmh(seq?id?no:1)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有viwsdetnr(seq?id?no:2)的氨基酸序列的hcdr2序列和含有dqqycssdscftwfdp(seq?idno:3)的氨基酸序列的hcdr3序列；和(a2)第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl1)，該第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有cx1sstgx2vtpx3x4yan(seq?id?no:4)的氨基酸序列的lcdr1序列，其中x1是r或a，x2是t或a，x3是s或g，并且x4是n或y；含有dnnx5x6pp(seq?id?no:5)的氨基酸序列的lcdr2序列，其中x5是s、i或n并且x6是r或k；和含有alx7x8gx9qwv(seq?idno:6)的氨基酸序列的lcdr3序列，其中x7是w或y，x8是f或y，并且x9是n或g；并且

6、(b)該第二abd具有對nkp46的結(jié)合特異性。

7、在某些實(shí)施例中，(b)該第二abd包含：

8、(b1)第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh2)，該第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含：

9、-含有dyvin的hcdr1序列、含有eiypgsgtnyynekfka的hcdr2序列和含有rgryglyamdy的hcdr3序列；-含有g(shù)ytfsdyvin(seq?id?no:19)的hcdr1序列、含有eiypgsgtn(seq?id?no:20)的hcdr2序列和含有rgryglyamdy(seq?id?no:21)的hcdr3序列；-含有sdyawn(seq?id?no:22)的hcdr1序列、含有yitysgstsynpsles(seq?id?no:23)的hcdr2序列和含有g(shù)gyygsswgvfay(seq?id?no:24)的hcdr3序列；-含有eytmh(seq?id?no:25)的hcdr1序列、含有g(shù)ispniggtsynqkfkg(seq?id?no:26)的hcdr2序列和含有rggsfdy(seq?id?no:27)的hcdr3序列；-含有sftmh(seq?id?no:28)的hcdr1序列、含有yinpssgyteynqkfkd(seqid?no:29)的hcdr2序列和含有g(shù)ssrgfdy(seq?id?no:30)的hcdr3序列；或-含有sdyawn(seqid?no:31)的hcdr1序列、含有yitysgstnynpslks(seq?id?no:32)的hcdr2序列和含有cwdyalyamdc(seq?id?no:33)的hcdr3序列；和

10、(b2)第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl2)，該第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含：

11、-含有rasqdisnyln(seq?id?no:34)的lcdr1序列、含有ytsrlhs(seq?id?no:35)的lcdr2序列和含有qqgntrpwt(seq?id?no:36)的lcdr3序列；-含有rvseniysyla(seq?id?no:37)的lcdr1序列、含有naktlae(seq?id?no:38)的lcdr2序列和含有qhhygtpwt(seq?id?no:39)的lcdr3序列；-含有rasqsisdylh(seq?id?no:40)的lcdr1序列、含有yasqsis(seq?idno:41)的lcdr2序列和含有qnghsfplt(seq?id?no:42)的lcdr3序列；-含有raseniysnla(seq?id?no:43)的lcdr1序列、含有aatnlad(seq?id?no:44)的lcdr2序列和含有qhfwgtprt(seq?id?no:45)的lcdr3序列；或-含有rtseniysyla(seq?id?no:46)的lcdr1序列、含有naktlae(seq?id?no:47)的lcdr2序列和含有qhhydtplt(seq?id?no:48)的lcdr3序列。

12、在某些實(shí)施例中，該vl1包含：-含有casstgtvtpsnyan(seq?id?no:7)的氨基酸序列的lcdr1序列、含有dnnsrpp(seq?id?no:8)的氨基酸序列的lcdr2序列和含有alwfgnqwv(seq?id?no:9)的氨基酸序列的lcdr3序列；-含有crsstgtvtpsnyan(seq?id?no:10)的氨基酸序列的lcdr1序列、含有dnnsrpp(seq?id?no:11)的氨基酸序列的lcdr2序列和含有alwfgnqwv(seq?id?no:12)的氨基酸序列的lcdr3序列；-含有casstgavtpsnyan(seq?idno:13)的氨基酸序列的lcdr1序列、含有dnnikpp(seq?id?no:14)的氨基酸序列的lcdr2序列和含有alwyggqwv(seq?id?no:15)的氨基酸序列的lcdr3序列；或-含有casstgavtpgyyan(seq?id?no:16)的氨基酸序列的lcdr1序列、含有dnnnkpp(seq?id?no:17)的氨基酸序列的lcdr2序列和含有alyyggqwv(seq?id?no:18)的氨基酸序列的lcdr3序列。

13、在某些實(shí)施例中，-該vh1包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:55的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh1包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:50的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh1包含與seqid?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:51的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh1包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:52的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh1包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:53的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；或-該vh1包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl1包含與seq?id?no:54的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列。

14、在某些實(shí)施例中，-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:55的氨基酸序列；-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:50的氨基酸序列；-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:51的氨基酸序列；-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:52的氨基酸序列；-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:53的氨基酸序列；或-該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seq?id?no:54的氨基酸序列。

15、在某些實(shí)施例中，-該vh2包含與seq?id?no:56的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:64的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seq?id?no:57的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:65的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seqid?no:58的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:66的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seq?id?no:59的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:67的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seq?id?no:60的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:68的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seq?id?no:61的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:69的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；-該vh2包含與seqid?no:62的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:70的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；或-該vh2包含與seq?id?no:63的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且其中該vl2包含與seq?id?no:71的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列。

16、在某些實(shí)施例中，-該vh2包含seq?id?no:56的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:64的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:57的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:65的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:58的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:66的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:59的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:67的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:60的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:68的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:61的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:69的氨基酸序列；-該vh2包含seq?id?no:62的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:70的氨基酸序列；或-該vh2包含seq?id?no:63的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:71的氨基酸序列。

17、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白進(jìn)一步包含免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分。在某些實(shí)施例中，該fc結(jié)構(gòu)域是igg1?fc結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施例中，該igg1?fc結(jié)構(gòu)域是人igg1?fc結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施例中，該免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分與人fc-γ受體結(jié)合。在某些實(shí)施例中，該免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分與人cd16a(fcγriii)多肽結(jié)合。

18、在某些實(shí)施例中，該fc結(jié)構(gòu)域包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置297處的天然聚糖。

19、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白是n-糖基化的。

20、在某些實(shí)施例中，該fc結(jié)構(gòu)域或其變體包含第一fc重鏈和第二fc重鏈。

21、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈包含由一對半胱氨酸(c)介導(dǎo)的工程化鏈內(nèi)二硫鍵，該對半胱氨酸取代：(i)氨基酸位置242處的亮氨酸(l)和氨基酸位置334處的賴氨酸(k)；或(ii)氨基酸位置292處的精氨酸(r)和氨基酸位置302處的纈氨酸(v)；其中這些氨基酸位置是根據(jù)eu編號。

22、在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈或該第二fc重鏈包含半胱氨酸對。在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈和該第二fc重鏈各自包含半胱氨酸對。在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈和該第二fc重鏈各自包含l242c/k334c取代。在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈和該第二fc重鏈各自包含r292c/v302c取代。

23、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置332處的取代。在某些實(shí)施例中，氨基酸位置332處的取代是谷氨酸(e)。

24、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236、239或330處的一個或多個取代。在某些實(shí)施例中，氨基酸位置236處的取代是丙氨酸(a)。在某些實(shí)施例中，氨基酸位置239處的取代是天冬氨酸(d)。在某些實(shí)施例中，氨基酸位置330處的取代是亮氨酸(l)。

25、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)。在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236處的丙氨酸(a)、氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)。在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236處的丙氨酸(a)、氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)、氨基酸位置330處的亮氨酸(l)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)。

26、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白包含形成至少兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的至少兩個多肽鏈，其中至少一個多肽鏈包含由下式表示的結(jié)構(gòu)：

27、vl1-l1-vl2-l2-cl[i]；

28、并且至少一個多肽鏈包含由下式表示的結(jié)構(gòu)：

29、vh2-l3-vh1-l4-ch1[ii]；

30、其中：

31、cl是免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

32、ch1是免疫球蛋白ch1重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；并且

33、l1、l2、l3和l4是氨基酸接頭，其中l(wèi)1、l2、l3和l4中的任何一個或多個任選地不存在，并且

34、其中式i的多肽和式ii的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。

35、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白包含形成兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的三個多肽鏈，其中一個多肽鏈包含由下式表示的結(jié)構(gòu)：

36、vl1-l1-vl2-l2-cl[i]；

37、一個多肽鏈包含由下式表示的結(jié)構(gòu)：

38、vh2-l3-vh1-l4-ch1-鉸鏈-ch2-ch3[iii]；并且

39、一個多肽鏈包含由下式表示的結(jié)構(gòu)：

40、鉸鏈-ch2-ch3[iv]

41、其中：

42、cl是免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

43、ch1是免疫球蛋白ch1重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

44、ch2是免疫球蛋白ch2重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

45、ch3是免疫球蛋白ch3重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；

46、鉸鏈?zhǔn)沁B接該ch1結(jié)構(gòu)域和該ch2結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白鉸鏈區(qū)；

47、并且

48、l1、l2、l3和l4是氨基酸接頭，其中l(wèi)1、l2、l3和l4中的任何一個或多個任選地不存在，并且

49、其中式i的多肽和式ii的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。

50、在某些實(shí)施例中，(a)l1、l2、l3和l4各自獨(dú)立地是零個氨基酸長或包含選自下組的序列，該組由以下組成：ggggsggggs，ggggsggggsggggs(seq?id?no:82)、s、rt、tkgps(seqid?no:83)、gqpkaap(seq?id?no:84)和ggsgssgsgg(seq?id?no:85)；或(b)l1、l2、l3和l4各自獨(dú)立地包含選自下組的序列，該組由以下組成：ggggsggggs、ggggsggggsggggs、s、rt、tkgps、gqpkaap和ggsgssgsgg。

51、在某些實(shí)施例中，l1和l2各自包含氨基酸序列g(shù)gggsggggs。在某些實(shí)施例中，l3和l4各自不存在。

52、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白包含：(i)含有seq?id?no:72的氨基酸序列的第一多肽鏈；(ii)含有seq?id?no:73的氨基酸序列的第二多肽鏈；和(iii)含有seq?id?no:74的氨基酸序列的第三多肽鏈。

53、在另一方面，本披露提供了結(jié)合蛋白，該結(jié)合蛋白包含對bcma具有結(jié)合特異性的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)和對nkp46具有結(jié)合特異性的第二abd，其中：(a)該第一abd包含第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh1)和第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl1)，該第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，該第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與seq?id?no:55的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列；并且(b)該第二abd包含第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh2)和第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl2)，該第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與seq?id?no:56的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列，并且該第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與seq?id?no:64的氨基酸序列至少約90％相同的氨基酸序列。

54、在某些實(shí)施例中，該vh1包含seq?id?no:49的氨基酸序列，并且其中該vl1包含seqid?no:55的氨基酸序列；并且該vh2包含seq?id?no:56的氨基酸序列，并且其中該vl2包含seq?id?no:64的氨基酸序列。

55、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白包含：(i)含有seq?id?no:72的氨基酸序列的第一多肽鏈；(ii)含有seq?id?no:73的氨基酸序列的第二多肽鏈；和(iii)含有seq?id?no:74的氨基酸序列的第三多肽鏈。

56、在另一方面，本披露提供了結(jié)合蛋白，該結(jié)合蛋白包含對bcma具有結(jié)合特異性的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)和對nkp46具有結(jié)合特異性的第二abd，其中該結(jié)合蛋白包含：(i)含有seq?id?no:72的氨基酸序列的第一多肽鏈；(ii)含有seq?id?no:73的氨基酸序列的第二多肽鏈；和(iii)含有seq?id?no:74的氨基酸序列的第三多肽鏈。

57、在某些實(shí)施例中，上述結(jié)合蛋白用于作為藥劑使用。

58、在某些實(shí)施例中，上述結(jié)合蛋白用于在治療疾病或障礙的方法中使用。

59、在某些實(shí)施例中，上述結(jié)合蛋白用于在治療或預(yù)防癌癥的方法中使用。

60、在某些實(shí)施例中，上述結(jié)合蛋白用于在治療或預(yù)防多發(fā)性骨髓瘤的方法中使用。

61、在某些實(shí)施例中，上述結(jié)合蛋白用于在治療或預(yù)防輕鏈淀粉樣變性(lca)的方法中使用。

62、在另一方面，本披露提供了藥物組合物，該藥物組合物包含上述結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。

63、在另一方面，本披露提供了治療或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括向需要所述治療或預(yù)防的受試者施用上述藥物組合物。

64、在另一方面，本披露提供了分離的核酸分子，該分離的核酸分子包含編碼上述結(jié)合蛋白的核苷酸序列。

65、在另一方面，本披露提供了分離的核酸分子，該分離的核酸分子包含編碼第一多肽鏈的核苷酸序列，該第一多肽鏈包含seq?id?no:72的氨基酸序列。

66、在另一方面，本披露提供了分離的核酸分子，該分離的核酸分子包含編碼第二多肽鏈的核苷酸序列，該第二多肽鏈包含seq?id?no:73的氨基酸序列。

67、在另一方面，本披露提供了分離的核酸分子，該分離的核酸分子包含編碼第三多肽鏈的核苷酸序列，該第三多肽鏈包含seq?id?no:74的氨基酸序列。

68、在另一方面，本披露提供了表達(dá)載體，該表達(dá)載體包含上述核酸分子。

69、在另一方面，本披露提供了分離的細(xì)胞，該分離的細(xì)胞包含上述核酸分子。

70、在另一方面，本披露提供了分離的細(xì)胞，該分離的細(xì)胞包含上述表達(dá)載體。在某些實(shí)施例中，該細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。

71、在另一方面，本披露提供了制備該結(jié)合蛋白的方法，該方法包括在合適的條件下培養(yǎng)該分離的細(xì)胞以及回收該結(jié)合蛋白。

72、在另一方面，本披露提供了用于制備上述結(jié)合蛋白的方法，該方法包括以下步驟：(a)在適合于表達(dá)多種重組多肽的條件下培養(yǎng)一個或多個宿主細(xì)胞，所述多種重組多肽包含(i)含有seq?id?no:72的氨基酸序列的多肽，和(ii)含有seq?id?no:73的氨基酸序列的多肽，和(iii)含有seq?id?no:74的氨基酸序列的多肽；(b)任選地回收所表達(dá)的重組多肽。

73、在另一方面，本披露提供了通過上述制備方法產(chǎn)生的結(jié)合蛋白。在另一方面，本披露提供了治療或預(yù)防疾病或障礙的方法，該方法包括向有需要的受試者施用上述藥物組合物。

74、在另一方面，本披露提供了治療或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括向有需要的受試者施用上述藥物組合物。

75、在另一方面，本披露提供了治療或預(yù)防多發(fā)性骨髓瘤的方法，該方法包括向有需要的受試者施用上述藥物組合物。在某些實(shí)施例中，該多發(fā)性骨髓瘤是復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤。在某些實(shí)施例中，該多發(fā)性骨髓瘤是難治性多發(fā)性骨髓瘤。在某些實(shí)施例中，該多發(fā)性骨髓瘤是冒煙型多發(fā)性骨髓瘤。

76、在另一方面，本披露提供了治療或預(yù)防輕鏈淀粉樣變性(lca)的方法，該方法包括向有需要的受試者施用上述藥物組合物。在某些實(shí)施例中，該lca是復(fù)發(fā)性lca。在某些實(shí)施例中，該lca是難治性lca。

77、在另一方面，本披露提供了在有需要的患者中恢復(fù)或增強(qiáng)表達(dá)nkp46的細(xì)胞的活性的方法，該方法包括向該患者施用上述藥物組合物。

78、在另一方面，本披露提供了消除有需要的患者中的癌細(xì)胞的方法，該方法包括向該患者施用上述藥物組合物。

79、在另一方面，本披露提供了在有需要的患者中觸發(fā)或增加nk細(xì)胞介導(dǎo)的癌細(xì)胞裂解的方法，該方法包括向該患者施用上述藥物組合物。在某些實(shí)施例中，這些癌細(xì)胞表達(dá)bcma。

80、在另一方面，本披露提供了在有需要的患者中誘導(dǎo)nk細(xì)胞消除癌細(xì)胞的方法，該方法包括向該患者施用上述藥物組合物。

81、在另一方面，本披露提供了結(jié)合蛋白，該結(jié)合蛋白包含對bcma具有結(jié)合特異性的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)和對nkp46具有結(jié)合特異性的第二abd。

82、在某些實(shí)施例中，該結(jié)合蛋白進(jìn)一步包含免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分，任選地其中：該免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分與人fc-γ受體結(jié)合；該免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體的全部或部分與人cd16a(fcγriiia)多肽結(jié)合；該fc結(jié)構(gòu)域包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置297處的天然聚糖；和/或該結(jié)合蛋白是n-糖基化的。

83、在某些實(shí)施例中，該fc結(jié)構(gòu)域或其變體包含第一fc重鏈和第二fc重鏈。在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈包含由一對半胱氨酸(c)介導(dǎo)的工程化鏈內(nèi)二硫鍵，該對半胱氨酸取代：(i)氨基酸位置242處的亮氨酸(l)和氨基酸位置334處的賴氨酸(k)；或(ii)氨基酸位置292處的精氨酸(r)和氨基酸位置302處的纈氨酸(v)；其中這些氨基酸位置是根據(jù)eu編號。

84、在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈和該第二fc重鏈各自包含l242c/k334c取代。在某些實(shí)施例中，該第一fc重鏈和該第二fc重鏈各自包含r292c/v302c取代。

85、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置332處的取代，任選地其中氨基酸位置332處的取代是谷氨酸(e)；任選地進(jìn)一步包含至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236、239或330處的一個或多個取代，任選地其中氨基酸位置236處的取代是丙氨酸(a)，氨基酸位置239處的取代是天冬氨酸(d)，并且氨基酸位置330處的取代是亮氨酸(l)。

86、在某些實(shí)施例中，至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)；至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236處的丙氨酸(a)、氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)；或至少一個fc重鏈進(jìn)一步包含根據(jù)eu編號的氨基酸位置236處的丙氨酸(a)、氨基酸位置239處的天冬氨酸(d)、氨基酸位置330處的亮氨酸(l)和氨基酸位置332處的谷氨酸(e)。