本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用地中海擬無枝酸菌發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
利福霉素是由地中海擬無枝酸菌產(chǎn)生的一類安莎大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。這類抗生素的毒性低、療效高且抗菌譜較廣，廣泛應(yīng)用于治療g+(革蘭氏陽性菌)、結(jié)核病、麻風(fēng)病和與艾滋病有關(guān)的分枝桿菌感染。
從20世紀(jì)50年代末期發(fā)現(xiàn)利福霉素之后，對(duì)其結(jié)構(gòu)性質(zhì)及其發(fā)酵工藝進(jìn)行了大量的研究，發(fā)酵單位有了很大的提高，但近年來我國利福霉素的工業(yè)化水平提高緩慢，存在的問題主要是：
1國內(nèi)利福霉素發(fā)酵生產(chǎn)單位較低，60m3發(fā)酵罐發(fā)酵單位不超過22000u/ml，同國際生產(chǎn)技術(shù)水平存在一定的差距。
2利福霉素生產(chǎn)周期一般在200-220h，發(fā)酵周期較長，能耗較高。
基于以上原因，導(dǎo)致利福霉素生產(chǎn)成本較高，國際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力較弱。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種可有效提高利福霉素發(fā)酵單位，縮短發(fā)酵周期，降低生產(chǎn)成本，同時(shí)最大限度的降低原輔料對(duì)發(fā)酵單位的影響，且原輔料來源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)利福霉素穩(wěn)定、高效生產(chǎn)的培養(yǎng)基。
本發(fā)明的另一目的是提供一種利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：
一種利用地中海擬無枝酸菌發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)基，其特征在于包括一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其中
所述一級(jí)種子培養(yǎng)基組成為：轉(zhuǎn)化糖蜜13～17g/l、蠅蛆干粉12～16g/l、菌體蛋白9～13g/l、酵母自溶粉fm9018～12g/l、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/l、硫酸銨0.5～0.9g/l；
所述二級(jí)種子培養(yǎng)基組成為：轉(zhuǎn)化糖蜜16～20g/l、蠅蛆干粉14～18g/l、菌體蛋白11～15g/l、酵母自溶粉fm9015～9g/l、微生物復(fù)合氮素ft1008～12g/l、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/l、硫酸銨0.5～0.9g/l；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：甘油13～17ml/l、轉(zhuǎn)化糖蜜22～26g/l、蠅蛆干粉17～21g/l、菌體蛋白13～17g/l、酵母自溶粉fm9017～11g/l、微生物復(fù)合氮素ft10011～15g/l、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/l、硫酸銨0.5～0.9g/l、氧化鋁0.03～0.07g/l、磷酸鎂0.01～0.05g/l、氯化鈷0.004～0.008g/l、磷酸二氫鉀0.02～0.06g/l、硫酸錳0.002～0.006g/l。
一種利用上述培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)方法，其特征在于工藝步驟為：
1）一級(jí)種子培養(yǎng)：首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度40～45%、培養(yǎng)時(shí)間65～70h移種；
2）二級(jí)種子培養(yǎng)：首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)液移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度35～39%、培養(yǎng)時(shí)間40～45h時(shí)移種；
3）發(fā)酵培養(yǎng)：先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子培養(yǎng)液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，至菌體濃度34～38%、發(fā)酵周期不超過190h，化學(xué)效價(jià)＞30000u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
所述培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為菌體濃度20～30%；鏡檢無雜菌，移種量為0.5-0.6l/m3。
所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：40～60m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速50～60r/min；
所述二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：120～150m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速70～80r/min。
所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.6～7.0；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在90～100r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
所述發(fā)酵培養(yǎng)過程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，包括補(bǔ)糖和補(bǔ)氮，其中
所述補(bǔ)糖是指補(bǔ)入轉(zhuǎn)化糖蜜，當(dāng)發(fā)酵液中溶氧超過60%，勻速補(bǔ)入轉(zhuǎn)化糖蜜，補(bǔ)入速率為12-13l/(m3·h)，當(dāng)溶氧達(dá)到25%后停止補(bǔ)料；
所述補(bǔ)氮是指補(bǔ)入質(zhì)量濃度為50～60%的微生物復(fù)合氮素ft100，當(dāng)發(fā)酵液ph超過6.8，勻速補(bǔ)入微生物復(fù)合氮素ft100，補(bǔ)入速率為8-9l/(m3·h)，當(dāng)ph為6.2時(shí)，停止補(bǔ)料。
本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在：
1本發(fā)明確認(rèn)了地中海擬無枝酸菌發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源、氮源和最佳配伍比例。
2本發(fā)明對(duì)種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)的工藝進(jìn)行了詳細(xì)的闡述，確認(rèn)了利福霉素最佳的發(fā)酵工藝和控制參數(shù)。通過本發(fā)明發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素，其128m3發(fā)酵罐生產(chǎn)發(fā)酵單位達(dá)到27000u/ml以上，與國外生產(chǎn)技術(shù)水平幾乎持平。
3利福霉素發(fā)酵周期控制在190-200h，同國內(nèi)比較，發(fā)酵周期縮短了10h，降低了發(fā)酵能耗。
3本發(fā)明適用于工業(yè)化規(guī)?；l(fā)酵生產(chǎn)利福霉素。
具體實(shí)施方法
下面用實(shí)例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
下述實(shí)施例的菌種選用：生產(chǎn)使用的菌種來源是地中海擬無枝酸菌發(fā)酵液。母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為：菌體濃度20～30%；鏡檢無雜菌。
培養(yǎng)基中使用的酵母自溶粉fm901和微生物復(fù)合氮素ft100由安琪酵母股份有限公司提供。
實(shí)施例1
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜13kg、蠅蛆干粉12kg、菌體蛋白9kg、酵母自溶粉fm9018kg、輕質(zhì)碳酸鈣1kg、硫酸銨0.5kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液500ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：40m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速50r/min。
至菌體濃度40%、培養(yǎng)時(shí)間65h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜160kg、蠅蛆干粉140kg、菌體蛋白110kg、酵母自溶粉fm90150kg、微生物復(fù)合氮素ft10080kg、輕質(zhì)碳酸鈣10kg、硫酸銨5kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至20℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：120m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。
至菌體濃度35%、培養(yǎng)時(shí)間40h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
甘油1300l、轉(zhuǎn)化糖蜜2200kg、蠅蛆干粉1700kg、菌體蛋白1300kg、酵母自溶粉fm901700kg、微生物復(fù)合氮素ft1001100kg、輕質(zhì)碳酸鈣100kg、硫酸銨50kg、氧化鋁3kg、磷酸鎂1kg、氯化鈷0.4kg、磷酸二氫鉀2kg、硫酸錳0.2kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.6；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在90r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度34%、發(fā)酵周期190h，化學(xué)效價(jià)28273u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
實(shí)施例2
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜14kg、蠅蛆干粉13kg、菌體蛋白10kg、酵母自溶粉fm9019kg、輕質(zhì)碳酸鈣2kg、硫酸銨0.6kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至22℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液520ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：45m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速53r/min。
至菌體濃度41%、培養(yǎng)時(shí)間66h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜170kg、蠅蛆干粉150kg、菌體蛋白120kg、酵母自溶粉fm90160kg、微生物復(fù)合氮素ft10090kg、輕質(zhì)碳酸鈣11kg、硫酸銨6kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至22℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：125m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速73r/min。
至菌體濃度36%、培養(yǎng)時(shí)間41h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
甘油1400l、轉(zhuǎn)化糖蜜2300kg、蠅蛆干粉1800kg、菌體蛋白1400kg、酵母自溶粉fm901800kg、微生物復(fù)合氮素ft1001200kg、輕質(zhì)碳酸鈣110kg、硫酸銨60kg、氧化鋁4kg、磷酸鎂2kg、氯化鈷0.5kg、磷酸二氫鉀3kg、硫酸錳0.3kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至22℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.7；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在93r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度35%、發(fā)酵周期192h，化學(xué)效價(jià)28364u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
實(shí)施例3
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜15kg、蠅蛆干粉14kg、菌體蛋白11kg、酵母自溶粉fm90110kg、輕質(zhì)碳酸鈣3kg、硫酸銨0.7kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液550ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：50m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速55r/min。
至菌體濃度42%、培養(yǎng)時(shí)間67h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜180kg、蠅蛆干粉160kg、菌體蛋白130kg、酵母自溶粉fm90170kg、微生物復(fù)合氮素ft100100kg、輕質(zhì)碳酸鈣12kg、硫酸銨7kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：130m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速75r/min。
至菌體濃度37%、培養(yǎng)時(shí)間42h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
甘油1500l、轉(zhuǎn)化糖蜜2400kg、蠅蛆干粉1900kg、菌體蛋白1500kg、酵母自溶粉fm901900kg、微生物復(fù)合氮素ft1001300kg、輕質(zhì)碳酸鈣120kg、硫酸銨70kg、氧化鋁5kg、磷酸鎂3kg、氯化鈷0.6kg、磷酸二氫鉀4kg、硫酸錳0.4kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.8；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在95r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度36%、發(fā)酵周期195h，化學(xué)效價(jià)28527u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
實(shí)施例4
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜16kg、蠅蛆干粉15kg、菌體蛋白12kg、酵母自溶粉fm90111kg、輕質(zhì)碳酸鈣4kg、硫酸銨0.8kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至24℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液570ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：55m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速57r/min。
至菌體濃度44%、培養(yǎng)時(shí)間69h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜190kg、蠅蛆干粉170kg、菌體蛋白140kg、酵母自溶粉fm90180kg、微生物復(fù)合氮素ft100110kg、輕質(zhì)碳酸鈣13kg、硫酸銨8kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至24℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：135m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速78r/min。
至菌體濃度38%、培養(yǎng)時(shí)間44h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
甘油1600l、轉(zhuǎn)化糖蜜2500kg、蠅蛆干粉2000kg、菌體蛋白1600kg、酵母自溶粉fm9011000kg、微生物復(fù)合氮素ft1001200kg、輕質(zhì)碳酸鈣130kg、硫酸銨80kg、氧化鋁6kg、磷酸鎂4kg、氯化鈷0.7kg、磷酸二氫鉀5kg、硫酸錳0.5kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至24℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.9；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在97r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度37%、發(fā)酵周期198h，化學(xué)效價(jià)28405u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
實(shí)施例5
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜17kg、蠅蛆干粉16kg、菌體蛋白13kg、酵母自溶粉fm90112kg、輕質(zhì)碳酸鈣5kg、硫酸銨0.9kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液600ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：60m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速60r/min。
至菌體濃度45%、培養(yǎng)時(shí)間70h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
轉(zhuǎn)化糖蜜200kg、蠅蛆干粉180kg、菌體蛋白150kg、酵母自溶粉fm90190kg、微生物復(fù)合氮素ft100120kg、輕質(zhì)碳酸鈣14kg、硫酸銨9kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：140m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速80r/min。
至菌體濃度39%、培養(yǎng)時(shí)間45h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
甘油1700l、轉(zhuǎn)化糖蜜2600kg、蠅蛆干粉2100kg、菌體蛋白1700kg、酵母自溶粉fm9011100kg、微生物復(fù)合氮素ft1001300kg、輕質(zhì)碳酸鈣140kg、硫酸銨90kg、氧化鋁7kg、磷酸鎂5kg、氯化鈷0.8kg、磷酸二氫鉀6kg、硫酸錳0.6kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至24℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在7.0；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在100r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度38%、發(fā)酵周期200h，化學(xué)效價(jià)28217u/ml時(shí)終止發(fā)酵。
上述實(shí)施例1-5中，發(fā)酵過程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料：
轉(zhuǎn)化糖蜜補(bǔ)料工藝：當(dāng)溶氧超過60%，勻速補(bǔ)入轉(zhuǎn)化糖蜜，補(bǔ)入速率為12-13l/(m3·h)。當(dāng)溶氧達(dá)到25%后停止補(bǔ)料。
微生物復(fù)合氮素ft100：配置微生物符合氮素ft100溶液，濃度控制在50-60%。當(dāng)ph超過6.8，勻速補(bǔ)入微生物復(fù)合氮素ft100，補(bǔ)入速率為8-9l/(m3·h)。當(dāng)ph為6.2時(shí)，停止補(bǔ)料。
對(duì)比實(shí)施例
一級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積1m3。
淀粉15kg、葡萄糖9kg、黃豆餅粉12kg、魚粉8kg、蛋白胨6kg、輕質(zhì)碳酸鈣3kg、硫酸銨0.7kg。
首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的地中海擬無枝酸菌母瓶發(fā)酵液550ml接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。
培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～39℃；空氣流量：50m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速55r/min。
至菌體濃度35%、培養(yǎng)時(shí)間70h移種。
二級(jí)種子培養(yǎng)：種子培養(yǎng)基體積10m3。
淀粉180kg、葡萄糖100kg、黃豆餅粉160kg、魚粉85kg、蛋白胨60kg、酵母粉70kg、輕質(zhì)碳酸鈣12kg、硫酸銨8kg。
首先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)。
二級(jí)級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.06mpa；罐溫28～29℃；空氣流量：130m3/h；攪拌轉(zhuǎn)速75r/min。
至菌體濃度36%、培養(yǎng)時(shí)間46h時(shí)移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
淀粉1500l、葡萄糖1200kg、黃豆餅粉1900kg、魚粉950kg、酵母粉900kg、蛋白胨800kg、輕質(zhì)碳酸鈣120kg、硫酸銨70kg、氯化鈷0.6kg、磷酸二氫鉀4kg、硫酸錳0.4kg。
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至23℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：
a培養(yǎng)基初始ph：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后ph控制在6.8；
b溫度：培養(yǎng)溫度28～29℃，
c攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在95r/min，
d壓力控制：罐壓0.05～0.06mpa，
eph控制：發(fā)酵過程中ph控制在6～7，
f溶氧控制：發(fā)酵過程中，溶氧含量控制在25%以上。
至菌體濃度35%、發(fā)酵周期210h，化學(xué)效價(jià)20482u/ml時(shí)終止發(fā)酵。