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一種亞硝化細菌的PCR鑒定方法與流程

文檔序號:12413140閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種亞硝化細菌的PCR鑒定方法,其特征在于:PCR擴增反應條件具體如下:

2.根據(jù)權利要求1所述的亞硝化細菌的PCR鑒定方法,其特征在于:具體步驟如下:

⑴引物的設計與合成:以亞硝化細菌的專屬特征性基因氨單加氧酶基因為模板,根據(jù)引物設計原則,利用primer 5.0軟件設計并合成一對特異性引物,引物具體序列如下:

上游引物(F):5'-GGGGTTTCTACTCCTGGT-3',其核苷酸序列如Seq ID No:1所示;

下游引物(R):5'-CCCCTCGGGAAAGCCTTCTTC-3',其核苷酸序列如Seq ID No:2示;

⑵菌種基因組DNA的提?。翰捎锰旄毦蚪MDNA提取試劑盒提取待測菌種的基因組DNA;

⑶PCR擴增體系:分別以步驟(1)中合成的特異引物為PCR擴增引物,以步驟(2)中提取的基因組DNA為PCR擴增模板,進行PCR擴增,25ul PCR擴增體系如下:

試劑名稱加樣量ul10×PCR buffer2.5MgCl22.0上游引物(F)1.0下游引物(R)1.0基因組DNA1.0dNTPs2.0Taq聚合酶0.2ddH2O補足25ul

⑷PCR擴增反應條件:PCR擴增體系準備好后,以引物的退火溫度為53℃設定PCR擴增的反應條件,具體反應條件如下:

⑸瓊脂糖水平電泳:觀察是否含有大小為526bp目標條帶,其核苷酸序列如Seq ID No:3所示;若有則判定為試樣中含有亞硝化細菌。

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