專利名稱：一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本說明涉及一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法，具體涉及一種處理氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L廢水的轉(zhuǎn)基因細(xì)菌，屬于污水處理領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著化肥，石油化工等行業(yè)的迅速發(fā)展壯大，由此而產(chǎn)生了大量的高濃度氨氮廢水，過量氨氮排入水體將導(dǎo)致水體富營養(yǎng)化，降低水體觀賞價值，并且被氧化生成的硝酸鹽和亞硝酸鹽還會影響水生生物甚至人類健康。目前處理氨氮廢水主要有化學(xué)，物理和生物方法。物理方法主要有吹脫法，沸石脫氮法，膜分離法等，其中吹脫法受PH，溫度，汽液比的影響，不實用；沸石脫氮法要考慮沸石的再生問題，不經(jīng)濟(jì)；電滲析法耗能較高，不經(jīng)濟(jì)?；瘜W(xué)方法主要有MAP沉淀法，化學(xué)氧化法等其中MAP沉淀法需要加入大量的鎂鹽和磷鹽，不經(jīng)濟(jì)；化學(xué)氧化法會產(chǎn)生余氯對水中的魚類有影響。生物方法主要是微生物處理的方法,例如公告號為CN101240253、名稱為“活性污泥中高效硝化細(xì)菌的富集方法”所述得到的硝化細(xì)菌能處理氨氮濃度為500mg/L 1200mg/L的廢水，對于氨濃度為1200mg/L以上的廢水沒有很好的處理效果；公告號為CN1786184、“分離篩選異養(yǎng)硝化細(xì)菌的方法”所述通過牛肉膏一蛋白胨瓊脂平板分離，氨氧化能力鑒定液體培養(yǎng)基培養(yǎng)和格利斯試劑顯色，從混合微生物系中分離篩選異養(yǎng)硝化細(xì)菌；公告號為CN101812440A、名稱為“用于降解氨氮的硝化細(xì)菌載體及其制備方法”所述通過聚合反應(yīng)制備的一種互穿網(wǎng)絡(luò)水凝膠，由硝化菌與亞硝化菌按I : I 10 : I的重量比例混合形成的菌劑，用該凝膠包埋菌劑。化學(xué)和物理方法具有耗能高，穩(wěn)定性低，不經(jīng)濟(jì)，存在二次污染等問題，而生物方法對于氨氮濃度又有限制要求，只能處理氨氮濃度為1200mg/L以下的廢水。本發(fā)明針對微生物法經(jīng)過富集培養(yǎng)，篩選得到處理氨氮濃度為500mg/L 1200mg/L廢水的細(xì)菌，但是不能夠處理氨氮濃度為1200mg/L以上的廢水，制得了一種能夠處理氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L廢水的轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。用本發(fā)明處理氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L的廢水，脫氮率可達(dá)99%以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了生物方法只能處理氨氮濃度為1200mg/L以下廢水，限制性強(qiáng)，提供了一種能夠處理高氨氮濃度廢水的轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌，通過該制備方法得到的硝化細(xì)菌，對氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L廢水中的氨氮去除率高達(dá)99%以上。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
(1)取生產(chǎn)過一季大豆的土壤作為菌源，在溫度為30°c 35°C，pH7. 5 8. 5，光照條件下在氨氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)20 36h，菌落作為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的菌源；
(2)把得到的菌源放入氨氮濃度為500mg/L 1000mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d，得到細(xì)菌；(3)再把步驟2中得到的細(xì)菌放入氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d ；
(4)把農(nóng)用廢水分別涂抹于10個高濃度氨氮培養(yǎng)基上，在溫度為30°C 35°C，pH7. 5 8. 5，光照條件下培養(yǎng)2 3d，篩選出生長最為優(yōu)秀的菌落，即為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。所述的氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量百分比計，含有瓊脂1% 3%，NH4NO3 10% 20%，Mg (NO3) 2 3% 5%，KCl 10% 20%，NaNO3 10% 20%，K2HPO4 10% 20%，氨水 20% 56%。所述的高濃度氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量百分比計，含有瓊脂1% 3%，NH4NO3 20% 30%, Mg (NO3) 2 3% 5%，KCl 10% 20%，NaNO3 10% 20%，K2HPO4 10% 20%，氨水 10% 46%。本發(fā)明與現(xiàn)有方法相比所具有的優(yōu)點及效果是
(1)本發(fā)明轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌針對性強(qiáng)；
(2)本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌能夠處理氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L的廢水。
具體實施例方式實例I
氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂lg, NH4NO3 10g, Mg(NO3)2 3g，KCl 10g, NaNO3 IOg,K2HPO4 10g，氨水 56g；
高濃度氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂3g，NH4NO3 30g，Mg (NO3)2 5g，KCl 20g，NaNO320g, K2HPO4 20g,氨水 IOg0轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備方法為
先取生產(chǎn)過一季大豆的土壤作為菌源，在溫度為30°C，pH 7. 5，光照條件下在氨氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)20h，菌落作為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的菌源，再把得到的菌源放入氨氮濃度為500mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d，得到細(xì)菌；然后把步驟2中得到的細(xì)菌放入氨氮濃度為1300mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d ；最后把農(nóng)用廢水分別涂抹于10個高濃度氨氮培養(yǎng)基上，在溫度為30°C，pH 7. 5，光照條件下培養(yǎng)2d，篩選出生長最為優(yōu)秀的菌落，即為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。用該轉(zhuǎn)基因細(xì)菌在30°C，pH 7. 5條件下處理某工廠氨氮濃度1300mg/L廢水，廢水內(nèi)的氨氮濃度從1300mg/L降到10mg/L,去除率高達(dá)99. 97%。實例2
氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂3g，NH4NO3 20g, Mg(NO3)2 5g，KCl 20g, NaNO3 20g，K2HPO4 20g,氨水 20g ；
高濃度氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂lg，NH4NO3 20g，Mg (NO3)2 3g，KCl IOg，NaNO310g, K2HPO4 IOg,氨水 46g。轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備方法為
先取生產(chǎn)過一季大豆的土壤作為菌源，在溫度為35°C，pH 8. 5，光照條件下在氨氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)36h，菌落作為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的菌源，再把得到的菌源放入氨氮濃度為 1000mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d,得到細(xì)菌；然后把步驟2中得到的細(xì)菌放入氨氮濃度為1800mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d ；最后把農(nóng)用廢水分別涂抹于10個高濃度氨氮培養(yǎng)基上，在溫度為35°C，pH 8. 5，光照條件下培養(yǎng)3d，篩選出生長最為優(yōu)秀的菌落，即為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。用該轉(zhuǎn)基因細(xì)菌在35°C，pH 8. 5條件下處理某工廠氨氮濃度1800mg/L廢水，廢水內(nèi)的氨氮濃度從1800mg/L降到9mg/L,去除率高達(dá)99. 98%。實例3
氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂2g，NH4NO3 15 g，Mg(NO3)2 4g，KCl 15g，NaNO3 15g，K2HPO4 15g，氨水 34g；
高濃度氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量計，含有瓊脂2g，NH4NO3 25g，Mg (NO3)2 4g，KCl 15g，NaNO315g，K2HPO4 15g，氨水 24g。轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備方法為
先取生產(chǎn)過一季大豆的土壤作為菌源，在溫度為33°C，pH 8，光照條件下在氨氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)30h，菌落作為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的菌源，再把得到的菌源放入氨氮濃度為900mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d，得到細(xì)菌；然后把步驟2中得到的細(xì)菌放入氨氮濃度為1500mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d ；最后把農(nóng)用廢水分別涂抹于10個高濃度氨氮培養(yǎng)基上，在溫度為33°C，pH 8，光照條件下培養(yǎng)3d，篩選出生長最為優(yōu)秀的菌落，即為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。用該轉(zhuǎn)基因細(xì)菌在33 °C，pH 8條件下處理某工廠氨氮濃度1500mg/L廢水，廢水內(nèi)的氨氮濃度從1500mg/L降到8mg/L,去除率高達(dá)99. 98%。
權(quán)利要求
1.一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法，其特征在于培養(yǎng)方法為 (1)取生產(chǎn)過一季大豆的土壤作為菌源，在溫度為30°C 35°C，pH7. 5 8. 5，光照條件下在氨氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)20 36h，菌落作為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的菌源； (2)把得到的菌源放入氨氮濃度為500mg/L 1000mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d，得到細(xì)菌； (3)再把步驟2中得到的細(xì)菌放入氨氮濃度為1200mg/L 1800mg/L農(nóng)用廢水中，用2Gx的X光照射，培養(yǎng)7d ； (4)把農(nóng)用廢水分別涂抹于10個高濃度氨氮培養(yǎng)基上，在溫度為30°C 35°C，pH7.5 8. 5，光照條件下培養(yǎng)2 3d，篩選出生長最為優(yōu)秀的菌落，即為轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法，其特征在于所述的氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量百分比計，含有瓊脂1% 3%，NH4NO3 10% 20%，Mg (NO3) 2 3% 5%, KCl 10% 20%，NaNO3 10% 20%，K2HPO4 10% 20%，氨水 20% 56%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法，其特征在于所述的高濃度氨氮培養(yǎng)基中以質(zhì)量百分比計，含有瓊脂1% 3%，NH4NO3 20% 30%，Mg(NO3)23% 5%，KCl 10% 20%，NaNO3 10% 20%，K2HPO4 10% 20%，氨水 10% 46%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備以及應(yīng)用方法，屬于污水處理領(lǐng)域。本發(fā)明轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌的制備方法為首先用氨氮培養(yǎng)基對收獲一季大豆的土壤水溶液進(jìn)行富集培養(yǎng)；然后用梯度農(nóng)用廢水以及X射線對細(xì)菌進(jìn)行處理；最后用高濃度氨氮培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌。用該轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌處理某工廠氨氮濃度1200mg/L～1800mg/L的廢水，氨氮去除率達(dá)99%以上。本發(fā)明硝化細(xì)菌針對性強(qiáng)，提供了一種處理1200mg/L氨氮濃度以上的轉(zhuǎn)基因硝化細(xì)菌，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N1/21GK102634475SQ20121011872
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者包鎧, 雷思宇, 雷春生 申請人:常州亞環(huán)環(huán)保科技有限公司