本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類綠卡色林衍生物，它們的制備方法，以及含有這些化合物的藥物組合物及其在治療肥胖癥方面的用途。

技術(shù)背景

肥胖是一個(gè)全球性的公共健康問題。在過去的幾十年里，發(fā)達(dá)國(guó)家的肥胖人數(shù)一直在增長(zhǎng)，發(fā)展中國(guó)家也逐漸出現(xiàn)了肥胖問題。據(jù)統(tǒng)計(jì)目前全球已有15億超重和5億肥胖患者。同時(shí)，肥胖所帶來(lái)的負(fù)面影響已經(jīng)超過了酗酒和抽煙。2013年6月，美國(guó)醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)正式將肥胖視作一種疾病。與肥胖相關(guān)的并發(fā)癥包括心血管疾病、癌癥和糖尿病等。

鹽酸綠卡色林(Lorcaserin Hydrochloride)，化學(xué)名為(R)-8-氯-1-甲基-2,3,45,-四氫-1H-3-苯并氮雜鹽酸鹽，于2012年6月27日被美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)上市，這是自1999年批準(zhǔn)奧利司他之后，13年來(lái)批準(zhǔn)的首個(gè)減肥藥，主要用于體質(zhì)指數(shù)(BMI)≥27，且至少患有一項(xiàng)肥胖并發(fā)癥的超重或肥胖患者的輔助治療。綠卡色林是5-HT受體激動(dòng)劑類減肥藥。5-HT受體是治療肥胖癥的一類重要靶點(diǎn)，代表藥物有芬氟拉明(Fenfluramine)、西布曲明(Sibutramine)等，這些藥物均由于會(huì)激動(dòng)5-HT_2B受體，引起嚴(yán)重的心臟瓣膜的毒副作用而被撤市。綠卡色林是通過對(duì)芬氟拉明進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造而得，可選擇性地激活下丘腦中的5-HT_2C受體使食欲減退，增加飽腹感，但對(duì)5-HT_2B受體的激動(dòng)作用弱，從而避免了對(duì)心臟瓣膜的毒副作用，增強(qiáng)了用藥安全性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一類通式(I)的化合物，藥理實(shí)驗(yàn)顯示，本發(fā)明的化合物(I)不僅可以對(duì)高脂肥胖大鼠產(chǎn)生減重效果，而且對(duì)大鼠血清脂質(zhì)也有一定的調(diào)節(jié)作用，從而進(jìn)一步加強(qiáng)了減重效果。因此，本發(fā)明的通式(I)化合物可用于治療肥胖性疾病或血清脂質(zhì)紊亂性疾病。

其中：

R¹代表：H或C₁～C₆烷基；優(yōu)選H或CH₃。

R²代表：其中R³代表H、CH₃、CH₂CH₃、CH₂CH₂OH、CONHCH₃或CONHCH₂CH₃，X代表CH₂、O、NH、N-CH₃或N-COCH₃；R⁴、R⁵代表H或C₁～C₆的烷基、CH₂CH₂OH、CONHCH₃；R⁶代表H、F、Cl、Br、CH₃或OCH₃。R²優(yōu)選：其中R³優(yōu)選H、CH₂CH₂OH、CONHCH₃、CONHCH₂CH₃，X優(yōu)選CH₂、O或N-CH₃；優(yōu)選R⁴＝R⁵＝CH₃。

通式(I)的化合物可與藥學(xué)上可接受的酸形成酸加成鹽，其中用于成鹽的酸為：氯化氫、溴化氫、硫酸、磷酸、碳酸、草酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或阿魏酸。

本發(fā)明優(yōu)選的部分化合物如下：

本發(fā)明通式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽(I.A)可用下列方法制備：

其中：

由化合物II(綠卡色林)和化合物III進(jìn)行?；磻?yīng)制備化合物I的過程，所用的活化劑為三光氣、對(duì)硝基氯甲酸苯酯或N,N’-羰基二咪唑(CDI)，優(yōu)選N,N’-羰基二咪唑(CDI)；溶劑為四氫呋喃、丙酮、二氯甲烷或乙腈，或任意幾種的混合溶劑。

由化合物II和氯甲酸-2-氯乙酯進(jìn)行?；磻?yīng)制備化合物IV的過程，所用的堿為氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、三乙胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基(PyBop)或N,N-二異丙基乙胺(DIEA)，優(yōu)選三乙胺、PyBop和DIEA；溶劑為四氫呋喃、丙酮、二氯甲烷或乙腈，或任意幾種的混合溶劑。

由化合物IV與化合物V進(jìn)行取代反應(yīng)制備化合物I的過程，所述的化合物V為2-甲氨基甲?；哙?、2-甲氨基甲酰基吡咯、2-羥乙基哌啶或2-乙氨基-1-乙醇；所用的堿為氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、三乙胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基(PyBop)或N,N-二異丙基乙胺(DIEA)，優(yōu)選碳酸鉀；溶劑為四氫呋喃、丙酮、乙腈或二氯甲烷，或任意幾種的混合溶劑。

由化合物I成鹽制備化合物I·A的過程，所用的反應(yīng)物(A)為氯化氫、溴化氫、硫酸、磷酸、碳酸、草酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或阿魏酸；溶劑為甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯或四氫呋喃，或任意幾種的混合溶劑。

本發(fā)明還公開了一種藥物組合物，其包括藥物有效劑量的本發(fā)明的化合物(I)或其鹽(I·A)和藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明所述的化合物可以添加藥學(xué)上可接受的載體制成常見的藥用制劑，如片劑、膠囊、糖漿、懸浮劑，可以加入香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑等常用藥用輔料。

本發(fā)明另一個(gè)目的是提供本發(fā)明的通式(I)的綠卡色林衍生物及其立體異構(gòu)體、水合物、溶劑合物或結(jié)晶在制備治療肥胖癥或血清脂質(zhì)紊亂性疾病藥物中的應(yīng)用。

大鼠減肥藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的通式(I)化合物的酸加成鹽(I.A)在日摩爾劑量相同的條件下，一天給藥1次比綠卡色林一天給藥2次的減肥效果較好。

以下是本發(fā)明部分化合物的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果。

①大鼠高脂肥胖模型的建立

測(cè)試候選化合物I-1·HCl,I-2·HCl,I-4·HCl,I-11·H₂C₂O₄和I-13·H₂C₂O₄的大鼠減肥效果：選用健康成年清潔級(jí)SD大鼠60只，雄性，體重180-220克。將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(10只)和造模組(50只)，對(duì)照組喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料，模型組喂養(yǎng)足量高脂飼料。連續(xù)喂飼5周。

5周后，以高脂飲食組大鼠體重超過正常組大鼠平均體重的20％作為肥胖大鼠模型的標(biāo)準(zhǔn)，判斷造模是否成功。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為7組，每組6只。如表1所示，喂養(yǎng)前各組大鼠體重均無(wú)顯著性差異，造模成功后，高脂膳食組、陽(yáng)性藥對(duì)照組及五組受試化合物組之間的大鼠體重?zé)o顯著性差異，而與正常膳食組的大鼠體重有極顯著性差異。

表1.造模大鼠體重(n＝6)

注：與空白組相比*P<0.05，**P<0.01.

②給藥劑量

對(duì)照組大鼠每天給予基礎(chǔ)飼料自由攝食，其他試驗(yàn)組大鼠在毎天喂高脂詞料的同時(shí)開始給藥。

高脂模型組：大鼠灌胃等量的生理鹽水。

陽(yáng)性藥對(duì)照組：大鼠灌胃給予鹽酸綠卡色林溶液1.56mg/kg(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，2次/天(分別于8:00,20:00給藥)；相當(dāng)于12.92μmol/(kg·天)。

化合物I-1·HCl組：大鼠灌胃給予I-1·HCl溶液(4.85mg/kg，1次/天)(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，1次/天(第二次使用等體積空白生理鹽水；8:00,20:00)；相當(dāng)于12.92μnmol/(kg.天)。

化合物I-2·HCl組：大鼠灌胃給予I-2·HCl溶液(4.49mg/kg，1次/天)(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，1次/天(第二次使用等體積空白生理鹽水；8:00,20:00)；相當(dāng)于12.92μmol/(kg.天)。

化合物I-4·HCl組：大鼠灌胃給予I-4·HCl溶液(5.03mg/kg，1次/天)(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，1次/天(第二次使用等體積空白生理鹽水；8:00,20:00)；相當(dāng)于12.92μmol/(kg·天)。

化合物I-11·H₂C₂O₄組：大鼠灌胃給予I-11·H₂C₂O₄溶液(6.25mg/kg，1次/天)(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，1次/天(第二次使用等體積空白生理鹽水；8:00,20:00)；相當(dāng)于12.92μmol/(kg·天)。

化合物I-13·H₂C₂O₄組：大鼠灌胃給予I-13·H₂C₂O₄溶液(5.75mg/kg，1次/天)(0.9％生理鹽水配置，1ml/kg)，1次/天(第二次使用等體積空白生理鹽水；8:00,20:00)；相當(dāng)于12.92μmol/(kg·天)。

每天記錄大鼠體重、攝食量。觀察毛色及光澤度、行為是否異常、飲水和飲食是否正常、排便是否正常、有無(wú)死亡等。

給藥5周后，將禁飲禁食8小時(shí)的大鼠進(jìn)行處理，測(cè)定指標(biāo)如下：

Lees指數(shù)：Lees指數(shù)＝體重(g)^1/3*10³/體長(zhǎng)(cm)(可較敏感的反應(yīng)肥胖變化)

脂體比；脂體比＝[腎周脂肪濕重(g)+附睪脂肪濕重)g)]/體重(g)×100％。

肝臟指數(shù)：肝臟指數(shù)＝肝臟重量(g)/體重(g)

血清脂質(zhì)指標(biāo):用試劑盒測(cè)定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

用藥前，正常膳食對(duì)照組、高脂膳食對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組和五組受試化合物組的大鼠毛質(zhì)白，有光澤，動(dòng)物行為未見異常，平日飲水、飲食正常，未見稀便、溏便現(xiàn)象，也無(wú)死亡現(xiàn)象。用藥后，正常膳食對(duì)照組和高脂膳食對(duì)照組大鼠形態(tài)一切正常。陽(yáng)性藥對(duì)照組和五組受試化合物組的大鼠毛有輕微結(jié)綹，光澤度略有下降，有輕微稀便現(xiàn)象。

表2.給藥后大鼠體重變化(n＝6)

注：與正常膳食組相比*P<0.05，**P<0.01；與高脂模型組相比^#P<0.05，^##P<0.01

同時(shí)，表2結(jié)果顯示，與高脂膳食對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥綠卡色林和五組受試化合物組均極顯著的降低了大鼠體重增長(zhǎng)質(zhì)量，其中化合物I-2·HCl組的減重效果最好，明顯優(yōu)于其它各組；化合物I-1·HCl組和I-13·H₂C₂O₄組的減重效果優(yōu)于陽(yáng)性藥對(duì)照組；化合物I-4·HCl組和I-11·H₂C₂O₄組減重效果與陽(yáng)性藥相當(dāng)。

進(jìn)一步考察了大鼠的肥胖指數(shù)，從表3可以看出五組受試化合物相較于綠卡色林，均具有更好的Lees指數(shù)、肝指數(shù)及脂體比，表明受試化合物在每天同等摩爾劑量的條件下，比陽(yáng)性藥綠卡色林具有更好的減肥效果。

表3.給藥后每組大鼠的肥胖指標(biāo)(n＝6)

在考察五組受試化合物減肥效果的同時(shí)，為了考察對(duì)血清脂質(zhì)紊亂的調(diào)控作用，對(duì)血清的低密度脂蛋白(LDL-C)含量、總膽固醇含量及甘油三酯含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，五組受試化合物均顯著的降低了高脂膳食大鼠的血清指標(biāo)，且與陽(yáng)性藥綠卡色林效果相當(dāng)(表4)。

表4.給藥后大鼠血清指標(biāo)(n＝6)

注：與高脂模型組相比^#P<0.05；^##P<0.01

從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，通過將氨基甲酸酯結(jié)構(gòu)引入到綠卡色林分子中的仲氨基上，合成得到的氨基甲酸酯類化合物，成鹽后，在與陽(yáng)性藥日摩爾劑量相同的條件下，一天給藥1次，可以達(dá)到綠卡色林一天2次的減肥效果，且部分化合物減重效果優(yōu)于陽(yáng)性藥綠卡色林，同時(shí)還可以在一定程度上改善肥胖造成的血清脂質(zhì)紊亂。通過前藥修飾，改善了綠卡色林的代謝穩(wěn)定性，提高了用藥順從性，本發(fā)明化合物具有一定的潛在開發(fā)價(jià)值。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(二乙氨基)乙酯(I-1)的制備

在50mL三頸瓶中加入CDI(1.43g,8.79mmol)，抽真空，N₂保護(hù)，于0℃下，緩慢滴加N-羥乙基二乙胺(III-1)(0.94g,8.00mmol)溶于二氯甲烷(2mL)所得的溶液，滴加完畢后，0℃攪拌10分鐘，室溫反應(yīng)5小時(shí)，再緩慢滴加綠卡色林鹽酸鹽(1.00g,4.14mmol)溶于二氯甲烷(4mL)所得的溶液，滴加完畢后繼續(xù)室溫反應(yīng)過夜，TLC監(jiān)控(石油醚:丙醇:三乙胺＝10:1:1)至原料反應(yīng)完全，加入20mL二氯甲烷稀釋，用水(5mL)、飽和碳酸氫鈉(5mL)以及飽和氯化鈉溶液(5mL)各洗一遍，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮得粗品，柱層析分離(洗脫劑:石油醚:乙酸乙酯＝3:1～1:1)得油狀物(I-1)1.13g,收率：80.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.13-7.11(m,,1H),7.08(dd,J₁＝8.0Hz,J₂＝2.1Hz,1H),7.02-6.99(m,1H),4.16(t,J＝6.2Hz,2H),3.84-3.33(m,4H),3.13-3.96(m,2H),2.81(dd,J＝15.1,6.2Hz,1H),2.70(t,J＝6.3Hz,2H),2.58(q,J＝7.1Hz,4H),1.30-1.24(m,3H),1.03(t,J＝7.1Hz,6H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(二乙氨基)乙酯鹽酸鹽(I-1·HCl)的制備

將I-1(1.0g,2.95mmol)溶解到3ml二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，乙醚洗滌，烘干，得化合物(I-1·HCl)1.08g，收率97.5％，m.p.156～158℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃),δ(ppm):12.55(bs,1H),7.16-7.12(m,2H),7.07-7.04(m,1H),4.62(t,J＝5.0Hz,2H),3.86-3.47(m,4H),3.28-3.02(m,8H),2.89-2.86(dd,J₁＝15.7Hz,J₂＝4.6Hz,1H),1.47-1.37(m,6H),1.32(m,3H).¹³C NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm)154.91,145.40,136.95,131.18,127.77,126.38,115.18,59.16,51.72,49.69,47.32,46.34,40.57,35.11,17.09,8.32.IR(cm^-1)KBr:3415.52,3131.48,2968.93,2931.39,2647.20,2470.87,1693.04,1435.94,1400.98,1266.41,1242.20,1191.42,1109.38,1029.90,939.95,822.37,765.56.HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺.Calcd for C₁₈H₂₈N₂O₂Cl:339.1834；Found:339.1840.

實(shí)施例2

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(二甲氨基)乙酯(I-2)的制備

以N-羥乙基二甲胺(III-2)(2.20g,24.68mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(3.0g,12.44mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀物(I-2)1.49g，產(chǎn)率：38.6％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.13-7.10(m,1H),7.09(dd,J₁＝8.0Hz,J₂＝2.1Hz,1H),7.02-7.01(m,1H),4.20(t,J＝5.9Hz,2H),3.77-3.35(m,4H),3.03-3.00(m,2H),2.84(m,1H),2.56(t,J＝5.9Hz,2H),2.28(s,6H),1.30-1.24(m,3H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(二甲氨基)乙酯鹽酸鹽(I-2·HCl)的制備

將I-2(1.32g,4.25mmol)溶解到10mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得產(chǎn)物(I-2·HCl)1.43g，收率：97.0％，m.p.150～152℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):12.66(bs,1H),7.13-7.11(m,2H),7.04-7.01(m,1H),4.62-4.55(m,2H),3.82-3.45(m,4H),3.33(m,2H),3.14-3.01(m,2H),2.96-2.75(m,7H),1.31-1.28(d,J＝7.0Hz,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):154.37,145.07,136.17,132.42,130.70,128.18,125.23,58.94,55.51,49.64,45.39,42.86,39.52,34.88,17.59IR(cm^-1)KBr:3414.62,3131.59,1685.92,1400.36,1237.41,1114.43,989.16,937.34,863.98,760.78,546.82.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₆H₂₄N₂O₂Cl:311.1521；Found:311.1529.

實(shí)施例3

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(哌啶-1-基)乙酯(I-3)的制備

以N-羥乙基哌啶(III-3)(2.15g,16.64mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(2.08g,8.62mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀物(I-3)1.28g，產(chǎn)率：42.3％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.14-7.07(m,2H),,7.03-7.00(m,1H),4.23(t,J＝6.0Hz,2H),3.76-3.42(m,4H),3.08-3.00(m,2H),2.82(dd,J₁＝15.1Hz,J₂＝6.5Hz,1H),2.61(t,J＝5.9Hz,2H),2.46-2.44(m,4H),1.60-1.55(m,4H),1.46-1.43(m,2H),1.30-1.28(m,3H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(哌啶-1-基)乙酯鹽酸鹽(I-3·HCl)的制備

將I-3(1.1g,3.13mmol)溶解到10mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得(I-3·HCl)1.18g，收率：97.2％，m.p.152～154℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):12.45(bs,1H),7.16-7.12(m,2H),7.07-7.03(m,1H),4.65-4.64(m,2H),3.82-3.45(m,6H),3.24-3.22(m,2H),3.18-3.00(m,2H),2.88-2.83(m,1H),2.70-2.63(m,2H),2.33-2.30(m,2H),1.95-1.85(m,3H),1.50-1.37(m,1H),1.33-1.29(m,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):155.25,145.55,136.66,132.35,131.76,127.85,125.73,59.43,56.01,53.48,51.44,46.30,40.03,34.97,22.25,21.44,17.20.IR(cm^-1)KBr:3414.69,3131.55,2944.57,2486.25,1697.41,1400.36,1243.09,1125.84,934.84,813.76,764.74,546.19.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₉H₂₈N₂O₂Cl:351.1834；Found:351.1841.

實(shí)施例4

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(嗎啉-1-基)乙酯(I-4)的制備

以N-羥乙基嗎啉(3.66g,27.90mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(3.48g,14.43mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀物(I-4)2.14g，收率：42.0％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.14-7.08(m,2H),7.04-7.00(m,1H),4.23(t,J＝5.8Hz,2H),3.76(m,1H),3.70(t,J＝4.5Hz,4H),3.64-3.36(m,3H),3.08-3.00(m,2H),2.83(dd,J₁＝14.3Hz,J₂＝4.7Hz,1H),2.63(t,J＝5.8Hz,2H),2.52(t,J＝4.6Hz,4H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H)

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(嗎啉-1-基)乙酯鹽酸鹽(I-4·HCl)的制備

將I-4(1.87g,5.30mmol)溶解到10mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得(I-4·HCl)2.01g，收率：97.6％，m.p.157～158℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):13.39(s,1H),7.15-7.11(m,2H),7.06-7.02(m,1H),4.64(m,2H),4.36-4.28(m,2H),4.01-3.98(m,2H),3.81-3.50(m,4H),3.48-3.39(m,2H),3.30(m,2H),3.17-3.03(m,2H),2.99-2.89(m,3H),1.31-1.28(m,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):154.87,145.75,137.16,132.16,131.47,128.06,126.38,63.92,58.78,56.01,51.69,50.95,45.81,39.95,34.80,17.11.IR(cm-1)KBr:3413.84,3128.37,1696.55,1400.47,1242.96,1136.12,990.12,951.78,860.60,548.10.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₈H₂₆N₂O₃Cl:353.1626；Found:353.1625.

實(shí)施例5

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酯(I-5)的制備

以N-羥乙基-N-甲基哌嗪(III-5)(2.81g,19.51mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(2.44g,10.11mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀物(I-5)1.62g，收率：43.76％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.13-7.07(m,2H),7.03-7.01(m,1H),4.22(t,J＝5.9Hz,2H),3.74-3.40(m,4H),3.07-2.96(m,2H),2.82(dd,J₁＝15.2Hz,J₂＝4.0Hz,1H),2.64(t,J＝5.9Hz,2H),2.55-2.44(m,8H),2.28(s,-3H),1.29-1.27(m,3H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酯鹽酸鹽(I-5·HCl)的制備

將I-5(1.4g,3.82mmol)溶解到10mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得(I-5·HCl)1.49g，收率：96.8％，m.p.222～224℃。¹H NMR(300MHz,D₂O),δ(ppm):7.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.07(dd,J₁＝8.1Hz,J₂＝1.9Hz,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),4.19-4.17(m,2H),3.60(m,4H),3.44(m,10H),3.12-3.06(m,2H),2.92(s,3H),2.79-2.74(m,1H),1.12(d,J＝7.1Hz,3H).¹³C-NMR(75MHz,D₂O),δ(ppm):156.37,145.13,137.06,131.19,127.85,126.14,114.72,59.43,56.01,50.96,49.33,48.83,45.48,42.55,39.12,33.26,16.38.IR(cm^-1)KBr:3414.55,3131.72,1690.96,1400.69,1239.36,1115.28,938.01,859.97,763.63,545.25.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₉H₂₉N₃O₂Cl:366.1943；Found:366.1949.

實(shí)施例6

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸1-(二甲氨基)-2-丙酯(I-6)的制備

以N-(2-羥基)丙基二甲胺(III-6)(6.00g,58.18mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(7.27g,30.14mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀純品(I-6)8.0g，收率：81.7％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.12-7.07(m,2H),7.01(m,1H),5.00-4.97(m,1H),3.84-3.34(m,4H),3.06-3.02(m,2H),2.85-2.83(dd,J₁＝14.0Hz,J₂＝5.5Hz,1H),2.56-2.41(m,,1H),2.33-2.29(m,,1H),2.27(s,3H),2.25(s,3H),1.30(d,J＝6.9Hz,3H),1.22(d,J＝6.2Hz,3H).

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸1-(二甲氨基)-2-丙酯草酸鹽(I-6·H₂C₂O₄)的制備

將I-6(7.79g,24.01mmol)溶解到50mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得(I-6·H₂C₂O₄)9.59g，收率：96.3％，m.p.103～105℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):9.01(bs,2H),7.14-7.11(m,2H),7.07-7.03(m,1H),5.26(m,1H),3.84-3.48(m,4H),3.44-3.30(m,2H),3.12-3.00(m,3H),2.89(d,J＝6.6Hz,3H),2.84(d,J＝4.0Hz,3H),1.31-1.29(m,3H),1.16(d,J＝6.1Hz,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):162.83,154.43,145.13,136.66,132.41,127.84,126.15,68.73,65.31,60.25,50.95,46.29,45.48,42.55,35.78,22.25,16.78.IR(cm_-1):3127.12,1637.81,1400.44,1072.98,947.95,859.36,544.71.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₇H₂₆N₂O₂Cl:325.1677；Found:325.1674.

實(shí)施例7

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸1-(二乙氨基)-2-丙酯(I-7)的制備

以N-(2-羥基)丙基二乙胺(III-7)(14.22g,108.36mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(13.54g,56.14mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀純品(I-7)17.0g，收率：85.8％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.14-7.08(m,2H),7.04-7.00(m,1H),5.00-4.91(m,1H),3.65-3.43(m,4H),3.09-3.01(m,2H),2.82(dd,J₁＝15.0Hz,J₂＝6.5Hz,1H),2.64-2.50(m,5H),2.45-2.40(m,1H),1.30(d,J＝7.1Hz,3H),1.22(d,J＝6.3Hz,3H)，1.01(td,J₁＝7.1Hz,J₂＝2.8Hz,6H),

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸1-(二乙氨基)-2-丙酯草酸鹽(I-7·H₂C₂O₄)的制備

將I-7(16.0g,45.33mmol)溶解到100mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得(I-7·H₂C₂O₄)19.28g，收率：96.0％，m.p.98～100℃。¹H NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):12.18(bs,2H),7.16-7.12(m,2H),7.08-7.03(m,1H),5.27(m,1H),3.78-3.44(m,4H),3.41-3.23(m,6H),3.07-2.93(m,3H),1.36-1.27(m,12H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):155.65,145.96,137.96,132.01,127.86,126.14,115.13,72.97,70.37,58.12,50.95,47.60,45.49,40.44,36.19,18.91,17.35 11.73.IR(cm^-1)KBr:3131.30,1638.12,1400.47,1072.31,949.35,859.95,544.84.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₉H₃₀N₂O₂Cl:353.1990；Found:353.1985.

實(shí)施例8

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(哌嗪-1-基)乙酯(I-8)的制備

以N-羥乙基-N-Boc-哌嗪(III-8)(2.96g,12.86mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(1.6g,6.63mmol)為原料，操作同I-1，得1.16g淡黃色油狀物。將該油狀物溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.5mL三氟乙酸，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，減壓濃縮至干，加水(5mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 8左右，二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮至干得淡黃色油狀物(I-8)0.88g，收率：37.5％。¹H NMR(300MHz,D₂O),δ(ppm):7.17-7.14(m,1H),7.11(dd,J₁＝8.1Hz,J₂＝2.0Hz,ArH,1H),7.04-7.03(m,1H),4.23(t,J＝5.9Hz,2H),3.78-3.41(m,4H),3.08-3.00(m,2H),2.96-2.91(m,2H),2.84(dd,J₁＝14.5Hz,J₂＝5.2Hz,1H),2.65-2.61(m,4H),2.56-2.46(m,4H),1.31-1.28(m,3H),1.25(s,1H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(哌嗪-1-基)乙酯鹽酸鹽(I-8·HCl)的制備

將I-8(0.72g,2.05mmol)溶解到3mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加飽和HCl的乙醚溶液至pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得(I-8·HCl)0.77g，收率：97.0％。m.p.178～180℃。¹H NMR(300MHz,D₂O),δ(ppm):7.11(m,1H),7.05-6.98(m,2H),4.19-4.17(m,2H),3.60(m,1H),3.41-3.38(m,6H),3.25-3.15(m,7H),3.08-3.02(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.77-2.69(m 1H),1.11-1.09(d,J＝7.1Hz,3H).¹³C-NMR(75MHz,D₂O),δ(ppm):145.95,137.06,132.71,131.99,127.84,126.13,114.72,59.84,56.00,50.54,48.43,45.08,41.66,38.31,33.25,15.97.IR(cm-1)KBr:3414.72,3131.81,1691.01,1400.56,1239.71,1078.42,1000.64,936.59,762.89,545.40.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₈H₂₇N₃O₂Cl:352.1786；Found:352.1795.

實(shí)施例9

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(芐氨基)乙酯(I-9)的制備

以N-羥乙基-N-Boc-苯乙胺(III-9)(1.04g,4.13mmol)和綠卡色林鹽酸鹽(0.50g,2.07mmol)為原料，操作同I-1，得淡黃色油狀物0.88g。將該油狀物溶于4mL干燥的二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘，TLC點(diǎn)板監(jiān)控，原料反應(yīng)完全，旋干，加水(5mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 8左右，二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾旋干，得淡黃色油狀物(I-9)0.63g，收率：81.5％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.35-7.27(m,5H),7.15-7.08(m,2H),7.04-6.99(m,1H),4.27-4.23(t,J＝5.4Hz,2H),3.85(s,2H),3.65-3.39(m,4H),3.09-3.01(m,2H),2.90(t,J＝5.3Hz,2H),2.82(dd,J₁＝15.4Hz,J₂＝6.5Hz,1H),1.88(s,1H),1.31-1.25(m,3H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(芐氨基)乙酯鹽酸鹽(I-9·HCl)的制備

將I-9(0.5g,1.34mmol)溶解到3mL二氯甲烷中，于0℃下，緩慢滴加乙醚的飽和HCl溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，烘干，得(I-9·HCl)0.53g，收率：96.6％。m.p.178～180℃。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):10.25(bs,2H),7.64-7.62(m,2H),7.43-7.41(m,3H),7.15-7.09(m,2H),7.04-7.01(m,1H),4.50-4.69(m,2H),4.19(s,2H),3.83-3.80(m,1H),3.60-3.55(m,3H),3.11-3.02(m,4H),2.91-2.79(m,1H),1.30-1.25(m,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):155.51,145.80,136.60,131.30,129.78,129.41,129.15,128.79,127.50,125.82,125.73,59.90,51.05,49.99,46.18,44.92,40.39,35.47,17.17.IR(cm^-1)KBr:3414.59,3131.63,2771.45,1697.76,1400.55,1243.32,1141.30,1115.42,1002.79,950.49,859.95,746.58,702.75,543.99.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₂₁H₂₆N₂O₂Cl:373.1677；Found:373.1674

實(shí)施例10

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(甲氨基甲?；?哌啶-1-基)乙酯(I-10)的制備

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-氯乙酯(IV)

綠卡色林鹽酸鹽(1.0g,4.14mmol)溶于10mL干燥的二氯甲烷中，于0℃下，將三乙胺(1.22mL,8.79mmol)加入上述反應(yīng)中攪拌反應(yīng)10分鐘，再將氯甲酸氯乙酯(0.74g,5.20mmol)于0℃下，緩慢滴加入上述反應(yīng)液，滴畢后繼續(xù)攪拌反應(yīng)2小時(shí)，向反應(yīng)液中加15mL二氯甲烷稀釋，分別用水(20mL×2)、飽和氯化鈉溶液(20mL×2)洗滌，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮至干得1.18g油狀產(chǎn)物IV。產(chǎn)率：94.5％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.16(m,1H),7.12(dd,J₁＝8.0Hz,J₂＝2.0Hz,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),4.37-4.36(m,,2H),3.71(m,1H),3.72(t,J＝5.5Hz,2H),3.65-3.37(m,3H),3.12-3.04(m,2H),2.90-2.82(m,1H),1.33(d,J＝7.2Hz,3H).

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(甲氨基甲?；?哌啶-1-基)乙酯(I-10)

將中間體IV(1.1g,3.64mmol)溶解于10mL乙腈中，加入N-甲基-2-哌啶甲酰胺(V-1)(0.52g,3.66mmol)，碳酸鉀(0.58g,4.19mmol)和碘化鈉(0.054g,0.36mmol)，抽真空，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至回流，TLC檢測(cè)至反應(yīng)完全，減壓濃縮至干，殘留物中加入15mL二氯甲烷稀釋，用水(10mL)洗滌一次、飽和氯化鈉溶液洗滌三次(10mL×3)，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮至干，粗品經(jīng)柱層析分離(石油醚:乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到淡黃色油狀物(I-10)1.08g，收率72.5％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.15-7.10(m,2H),7.05(m,1H),6.79(s,1H),4.28-4.17(m,2H),3.81-3.40(m,4H),3.11-2.96(m,,3H),2.87-2.82(m,6H),2.45-2.40(m,-1H),2.15-2.12(m,1H),1.98-1.93(m,2H),1.72-1.63(m,,2H),1.51-1.24(m,2H),1.33-1.28(m,3H).

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(甲氨基甲酰基)哌啶-1-基)乙酯草酸鹽(I-10·H₂C₂O₄)的制備

將I-10(0.73g,1.79mmol)溶解到10mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸飽和的丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得化合物(I-10·H₂C₂O₄)0.86g，收率96.4％，m.p.85～86℃.¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):11.49(bs,0.5H),10.83(bs,o.5H),9.11(bs,0.5H),8.79(bs,o.5H),7.15-7.11(m,2H),7.07-7.03(m,1H),4.60-4.37(m,3H),3.76-3.34(m,7H),3.21-3.01(m,3H),2.83(s,3H),2.72-2.61(m,1H),2.40-2.09(m,3H),1.99-1.81(m,2H),1.75-1.59(m,1H),1.36-1.30(m,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):175.06,155.65,145.13,137.96,132.00,128.66,126.13,114.72,67.84,62.77,55.20,51.85,51.30,46.79,41.38,40.84,36.60,29.02,25.68,24.78,23.15,17.61.IR(cm^-1)KBr:3127.09,1676.06,1400.44,1239.99,1075.34,949.59,859.63,545.87

HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₂₁H₃₁N₃O₃Cl:408.2048；Found:408.2045.

實(shí)施例11

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(甲氨基甲?；?吡咯烷-1-基)乙酯(I-11)的制備

以化合物N-甲基-2-吡咯甲酰胺(V-2)(1.5g,11.70mmol)和中間體IV(3.53g,11.68mmol)為原料，操作同I-10，得淡黃色油狀物(I-11)4.01g，產(chǎn)率：87.1％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.45(s,1H),7.16-7.11(m,2H),7.05(m,1H),4.20-4.12(m,2H),3.74-3.30(m,4H),3.28-3.02(m,3H),2.99-2.70(m,6H),2.60-2.36(m,1H),2.26-2.08(m,1H),1.92-1.78(m,4H),1.34-1.28(m,3H).

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(甲氨基甲?；?吡咯烷-1-基)乙酯草酸鹽(I-11·H₂C₂O₄)的制備

將I-11(3.42g,8.68mmol)溶解到10mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸飽和的丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得化合物(I-11·H₂C₂O₄)4.06g，收率96.7％，m.p.127～129℃.¹H-NMR(300MHz,D₂O),δ(ppm):7.15(m,1H),7.09-7.01(m,2H),4.19-4.14(m,2H),3.69(m,2H),3.53-3.36(m,5H),3.23-3.02(m,3H),3.02-2.88(m,1H),2.85-2.71(m,1H),2.64-2.62(d,J＝5.6Hz3H),2.51-2.32(m,1H),2.09-1.93(m,3H),1.13-1.11(d,J＝6.5Hz,3H).¹³C-NMR(75MHz,D₂O),δ(ppm):167.89,156.56,146.36,137.06,132.00,127.85,126.55,115.13,67.42,64.49,60.25,56.50,50.13,46.31,39.14,32.85,30.15,29.42,26.49,22.25,16.38.IR(cm^-1)KBr:3127.87,1677.58,1400.47,1222.41,1071.20,951.77,860.43,706.22,544.44.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₂₀H₂₉N₃O₃Cl:394.1892；Found:394.1892.

實(shí)施例12

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(2-羥乙基)哌啶-1-基)乙酯(I-12)的制備

以化合物2-哌啶乙醇(V-3)(0.6g,4.64mmol)和中間體IV(1.4g,4.63mmol)為原料，操作同I-10，得淡黃色油狀純品(I-12)1.43g，產(chǎn)率：78.1％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.14-7.09(m,2H),7.04-7.01(m,1H),4.21(t,J＝5.8Hz,2H),3.91-3.88(m,4H),3.22-2.94(m,,4H),2.87-2.77(m,4H)2.44-2.40(m,1H),2.00-1.98(m,1H),1.73-1.53(m,3H),1.51-1.43(m,3H),1.32-1.26(m,3H)

(1R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(2-(2-羥乙基)哌啶-1-基)乙酯草酸鹽(I-12·H₂C₂O₄)的制備

將I-12(1.28g,3.24mmol)溶解到10mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸飽和的丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得化合物(I-12·H₂C₂O₄)1.51g，收率96.2％.

¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.13-7.09(m,2H),7.05-7.02(m,1H),4.50-4.18(m,2H),3.91-3.30(m,10H),3.23-3.01(m,3H),2.86-2.81(m,1H),2.09-1.82(m,8H),1.33-1.25(m,3H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):156.06,146.36,137.97,132.41,128.25,126.13,115.57,69.14,62.97,62.37,60.10,53.35,51.91,51.25,49.14,46.35,40.84,36.20,31.14,27.31,22.73,17.19.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₂₁H₃₂N₂O₃Cl:395.2096；Found:395.2091.

實(shí)施例13

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(乙基(2-羥乙基)氨基)乙酯(I-13)的制備

以N-乙基乙醇胺(V-4)(2.05g,23.0mmol)和中間體IV(6.95g,23.0mmol)為原料，操作同I-10，得淡黃色油狀純品(I-13)3.71g，收率：45.5％。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.183-7.08(m,2H),7.07-7.00(m,1H),4.21-4.18(m,2H),3.94(m,2H),3.76-3.47(m,6H),3.26-3.23(m,4H),3.08-3.01(m,2H),2.84(dd,J₁＝15.1Hz,J₂＝5.9Hz 1H),1.30-1.29(m,3H),1.29(t,J＝6.8Hz,3H).

(R)-8-氯-1-甲基-1,2,4,5-四氫-3H-苯并[d]氮-3-甲酸2-(乙基(2-羥乙基)氨基)乙酯草酸鹽(I-13.H₂C₂O₄)的制備

將I-13(3.3g,9.30mmol)溶解到30mL干燥丙酮中，于0℃下，緩慢滴加草酸飽和的丙酮溶液調(diào)pH 1～2，逐漸析出白色固體，抽濾，異丙醚打漿，抽濾，烘干，得化合物(I-13·H₂C₂O₄)3.98g，收率96.1％.¹H-NMR(300MHz,CDCl₃),δ(ppm):7.13-7.02(m,3H),4.48(m,2H),3.94(m,2H),3.76-3.47(m,6H),3.26-3.23(m,4H),3.08-3.01(m,2H),2.83(dd,J₁＝14.6Hz,J₂＝4.2Hz,1H),1.30-1.28(m,6H).¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃),δ(ppm):155.74,146.18,137.53,131.42,128.27,125.68,109.95,63.09,58.58,55.75,52.85,50.63,48.04,46.12,41.00,36.17,35.86,17.06,11.62.HRMS(ESI):m/z[M+H]+.Calcd for C₁₈H₂₈N₂O₃Cl:355.1783；Found:355.1782。