技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物新用途，特別涉及一種取代桂皮酰胺衍生物在制備抗焦慮藥物中的應用。
背景技術：
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焦慮癥，又稱為焦慮性神經(jīng)癥，是神經(jīng)癥這一大類疾病中最常見的一種，以焦慮情緒體驗為主要特征?？煞譃槁越箲](廣泛性焦慮)和急性焦慮發(fā)作(驚恐障礙)兩種形式。主要表現(xiàn)為：無明確客觀對象的緊張擔心，坐立不安，還有植物神經(jīng)癥狀(心悸、手抖、出汗、尿頻等)。
具體的，
慢性焦慮，又稱廣泛性焦慮，在沒有明顯誘因的情況下，患者經(jīng)常出現(xiàn)過分擔心、緊張害怕，但緊張害怕常常沒有明確的對象和內(nèi)容。主要表現(xiàn)為：(1)情緒癥狀：緊張不安、提心吊膽，恐懼、害怕、憂慮。(2)植物神經(jīng)癥狀：頭暈、胸悶、心慌、呼吸急促、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫等軀體方面的癥狀。(3)運動性不安：坐立不安，坐臥不寧，煩躁，很難靜下心來。
急性焦慮發(fā)作，又稱驚恐發(fā)作、驚恐障礙，在正常的日常生活環(huán)境中，并沒有恐懼性情境時，患者突然出現(xiàn)極端恐懼的緊張心理，伴有瀕死感或失控感，同時有明顯的植物神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，主要表現(xiàn)為：(1)瀕死感或失控感：突然出現(xiàn)極度恐懼的心理，體驗到瀕死感或失控感。(2)植物神經(jīng)系統(tǒng)癥狀同時出現(xiàn)：如胸悶、心慌、呼吸困難、出汗、全身發(fā)抖等。(3)一般持續(xù)幾分鐘到數(shù)小時：發(fā)作開始突然，發(fā)作時意識清楚。
在當今社會，伴隨著人們生活節(jié)奏的加快和工作壓力增大，社會競爭日益激烈，焦慮癥的患病率逐年上升。
焦慮癥的治療，通常采用心理治療和藥物治療，其中：
心理治療，找出生活中的壓力源，避開壓力，學習放松技巧，減輕壓力；
藥物治療，用抗焦慮藥物去平靜腦中過度活躍的部分，較為典型的藥物苯二氮卓類藥物(bdz)，其抗焦慮作用強，起效快，但長期服用有成癮性、耐藥性及戒斷反應等副作用；三環(huán)類抗抑郁藥(tcas)對廣泛性焦慮有良好療效，但有較強的抗膽堿能副作用和心臟毒性作用，限制了它們的應用；其他用于抗焦慮的藥物也或多或少的存在起效緩慢、藥物間相互作用和不良反應等問題。以上副作用常令患者十分顧慮，這種擔憂反而加重焦慮，或被迫放棄治療。停藥反應更是醫(yī)生面臨的難中之難。
因此，亟需一種可以有效治療焦慮，且副作用少的藥物。本發(fā)明桂皮酰胺衍生物在單次經(jīng)口給藥后能快速跨過血腦屏障從而發(fā)揮其抗焦慮效果。
桂皮酰胺，又稱苯丙烯酰胺，肉桂酰胺，3-苯基丙烯酰胺，其取代桂皮酰胺衍生物曾經(jīng)在cn102850317a(申請?zhí)枮閏n201210123842.7)和cn104513172a(申請?zhí)枮閏n201410504555.x)中公開了一系列取代的桂皮酰胺衍生物及其制備方法，動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，取代桂皮酰胺衍生物具有明顯的抗抑郁活性。
未見到取代的桂皮酰胺衍生物在抗焦慮方面的報道。
本發(fā)明涉及取代桂皮酰胺衍生物在制備抗焦慮藥物中的應用。本發(fā)明通過考察取代桂皮酰胺衍生物對小鼠在高架十字迷宮實驗中進入開臂次數(shù)和在開臂停留時間的影響，以及對大鼠在飲水沖突實驗中懲罰期飲水次數(shù)的影響，驗證其在抗焦慮方面的作用，實驗證明取代桂皮酰胺衍生物中有17種化合物在給藥7天后能在不同程度上增加小鼠進入開臂的次數(shù)，并延長小鼠在開臂停留的時間，且能明顯增加大鼠在飲水沖突實驗中懲罰期飲水次數(shù)，從而證明取代桂皮酰胺衍生物可以開發(fā)為抗焦慮藥物。
技術實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明涉及取代桂皮酰胺衍生物的新應用。
具體的，本發(fā)明提供了取代桂皮酰胺衍生物在制備抗焦慮藥物中的應用。
其中，所述焦慮是指慢性焦慮(廣泛性焦慮)或者急性焦慮(驚恐發(fā)作、驚恐障礙)。
所述的取代桂皮酰胺衍生物為式(ⅰ)結構的化合物或其可藥用鹽作為藥物活性成分，具體如下：
式中：
r1為-h、-oh、-f、-cl、-br、-i、-och3、-ocf3、-ochf2、-och2f、-cf3、-chf2、-ch2f、-ch3、-ch3ch2、-cf3ch2、-cn、-no2、-nh2或-coor5；
r2為h、c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、c3-c10環(huán)烴基、c1-c10羥烷基或n-取代哌嗪衍生基團；或r2為與相鄰的x形成四氫吡咯基、哌啶基或環(huán)己亞胺基的基團；
r3或r4各自獨立地為h、oh、or5、f、cl、br、i、c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、cf3、chf2、ch2f、no2、nh2、ocf3、ochf2、och2f、oocr5或coor5；
或，r3與r4相連形成-och2o-、-och2ch2o-；
其中，r5為c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、c3-c10環(huán)烴基、c1-c10羥烷基；
n為1、2或3，-(c2-c3)n-單元最少含有一個碳碳單鍵或者一個碳碳雙鍵；
x為＝o、＝s、h、sh或sr6；
y為n或nr6、o或s；
r6為h、c1-c10直鏈烴、c3-c10支鏈烴、c3-c10環(huán)烴或c6-c10芳香烴；
優(yōu)選的，所述取代桂皮酰胺衍生物如式(ⅱ)所示，
其中，
r1為-h、-oh、-f、-cl、-br、-i、-och3、-ocf3、-ochf2、-och2f、-cf3、-chf2、-ch2f、-ch3、-ch3ch2、-cf3ch2、-cn、-no2、-nh2或-coor5；
r2為h、c1-c10直鏈烴、c3-c10支鏈烴、c3-c10環(huán)烴、c6-c10芳香烴或c1-c10烷基醇或n-取代哌嗪衍生物，或r2為與相鄰的x形成四氫吡咯基、哌啶基或環(huán)己亞胺基的基團。
r5為c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、c3-c10環(huán)烴基、c1-c10羥烷基；
n為1、2或3，-(c2-c3)n-單元最少含有一個碳碳單鍵或者一個碳碳雙鍵；
x為＝o、＝s、h、sh或sr6；
y為n或nr6、o或s；其中r6為h、c1-c10直鏈烴、c3-c10支鏈烴、c3-c10環(huán)烴或c6-c10芳香烴；
或優(yōu)選的，所述取代桂皮酰胺衍生物如式(ⅲ)所示，
其中，
r3為h、oh、or5、f、cl、br、i、c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、cf3、chf2、ch2f、no2、nh2、ocf3、ochf2、och2f、oocr5或coor5；
r4為h、oh、or5、f、cl、br、i、c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、cf3、chf2、ch2f、no2、nh2、ocf3、ochf2、och2f、oocr5或coor5；
r5為c1-c10直鏈烴基、c3-c10支鏈烴基、c3-c10環(huán)烴基、c1-c10羥烷基；
n為1、2或3，-(c2-c3)n-單元最少含有一個碳碳單鍵或者一個碳碳雙鍵；
x為n或nh；
r2為h、c1-c10直鏈烴、c3-c10支鏈烴、c3-c10環(huán)烴、c6-c10芳香烴或c1-c10烷基醇或n-取代哌嗪衍生物，或r2為與相鄰的x形成四氫吡咯基、哌啶基或環(huán)己亞胺基的基團。
本發(fā)明的化合物或其可藥用酸加成鹽，特別優(yōu)選的是以下化合物：
5′-碘-3′，4′-次甲二氧基桂皮酸異丁基酰胺(ⅱ-3)
5′-氯-3′，4′-次甲二氧基桂皮酸異丁基酰胺(ⅱ-4)
5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基桂皮酸異丁基酰胺(ⅱ-5)
5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基桂皮酸哌啶基酰胺(ⅱ-10)
3-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-丙酸異丁基酰胺(ⅱ-11)
5-三氟甲基-3，4-次甲二氧基苯甲酸異丁基酰胺(ⅱ-12)
(e)-n-(4-甲基哌嗪基)-5-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-1-戊烯酰胺鹽酸鹽(ⅱ-13)
(2e,4e)-n-異丁基-7-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-2，4-庚二烯酰胺
(ⅱ-14)
(2e,4e)-n-(4-甲基哌嗪基)-7-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-2，4-庚二烯酰胺胺鹽酸鹽(ⅱ-15)
n-甲基-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基)-苯丙胺鹽酸鹽(ⅱ-16)
3′,4′-二甲氧基-5′-三氟甲基-桂皮酸異丁基酰胺(ⅲ-2)
3′-羥基-4′-甲氧基-5′-三氟甲基-桂皮酸異丁基酰胺(ⅲ-4)
3′,4′-二羥基-5′-三氟甲基-桂皮酸異丁基酰胺(ⅲ-7)
3′,4′-二羥基-5′-三氟甲基-桂皮?；哙?ⅲ-9)
3-(3′,4′-二羥基-5′-三氟甲基苯基)-丙酸異丁基酰胺(ⅲ-10)
3,4-二羥基-5-三氟甲基-苯甲酸異丁基酰胺(ⅲ-11)
5-(5′-三氟甲基-3′,4′-二甲氧基苯基)戊二烯酸異丁基酰胺(ⅲ-13)
本發(fā)明所述的應用，其中所述藥物可以是含有本發(fā)明化合物或其藥用鹽的藥物組合物，可以被制備成任何一種可藥用的劑型，這些劑型包括：片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑、貼劑。
本發(fā)明的藥物組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調味劑和濕潤劑。適用的填充劑包括淀粉、蔗糖、纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬脂酸鎂?？赏ㄟ^混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進行反復混合可使活性物質分布在整個使用大量填充劑的那些組合物中；常用的輔料成分包括：甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素c、edta二鈉、edta鈣鈉，一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的制劑在使用時根據(jù)況確定用法用量，可以每日服1-5次。
本發(fā)明提供的取代桂皮酰胺衍生物的新應用具有以下優(yōu)點：
1、發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的化合物能夠改善焦慮癥，并發(fā)現(xiàn)該衍生物能快速透過血腦屏障，具有起效快的特點。同時，對焦慮導致的睡眠障礙也有較明顯的改善作用。
2、經(jīng)動物自主活動評估證實，本發(fā)明提供的化合物抗焦慮活性不是化合物對動物活動度抑制作用的繼發(fā)結果；此外以5g/kg的劑量灌服該化合物，動物未見明顯不良反應，說明其安全性高，耐受性好。
3、傳統(tǒng)的中樞苯二氮卓類抗焦慮藥物如地西泮具有鎮(zhèn)靜、肌肉松弛等副作用，從而限制了其在臨床中的應用。
經(jīng)利用western-blot技術檢測相關基因的表達變化，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述的17種化合物可調節(jié)線粒體自噬相關基因的表達，可能為外周型苯二氮卓受體的結合性配體。外周型苯二氮卓受體與本發(fā)明所述的化合物結合后，能刺激線粒體分泌類固醇，調節(jié)生物的行為，表現(xiàn)出明顯的抗焦慮作用，且無鎮(zhèn)靜、肌松等副作用。
所以，相比于傳統(tǒng)的中樞苯二氮卓類抗焦慮藥物，本發(fā)明所述的化合物可能具有起效快，副反應少且不易產(chǎn)生耐受性等優(yōu)勢。
具體實施方式
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明。
化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12及其制備方法見cn201210123842.7(公開號為cn102850317a)；
化合物ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13及其制備方法見cn201410504555.x(公開號為cn104513172a)；
化合物ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15、ⅱ-16的制備方法見實施例1-4。
實施例1：(e)-n-(4-甲基哌嗪基)-5-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-1-戊烯酰胺鹽酸鹽(ⅱ-13)
步驟1：將化合物1(1.53g，4.0mmol)置于100ml的單口瓶中，加入15ml氯仿溶解，再將化合物2(1g，4.0mmol)加到反應體系中，室溫攪拌反應14h；tlc監(jiān)測(展開劑pe:ea＝5:1)顯示反應完全；然后將反應物直接濃縮得粗產(chǎn)物化合物3，經(jīng)硅膠柱色譜純化(pe:ea＝5:1)后，得到1.1g白色固體化合物3，收率78.87％。
步驟2：把化合物3(0.3g，0.87mmol)溶于5ml二氯甲烷中，降溫至0℃；將三氟乙酸(1ml)滴加到反應體系中，然后將反應體系升溫的室溫下反應；1h后tlc顯示原料反應完畢，把反應體系直接濃縮，得到化合物4白色固體0.21g(84％)。
步驟3：把化合物4(0.48g，1.66mmol)、n-甲基哌嗪(0.5g，5mmol)、dipea(0.43g，3.34mmol)、加到二氯甲烷中，氮氣置換三次，然后加入hatu(0.95g，2.5mmol)室溫下攪拌6h；反應體系經(jīng)水洗滌，有機相干燥濃縮得到粗品，經(jīng)硅膠柱色譜純化后得到400mg無色油狀物；然后用2ml的二氧六環(huán)溶解，再加入4ml的二氧六環(huán)的鹽酸溶液，室溫下攪拌30min，濃縮干燥得到43mg化合物ⅱ-13(65％)。
1hnmr(dmso,400mhz):δ11.28-11.27.00(1h,nh,br),7.11(1h,s),6.94(1h,s),6.70(1h,d,j＝15.2hz),6.50(1h,d,j＝15.2hz),6.17(2h,s),4.33(2h,br),3.42-3.20(6h,br),2.75(4h,s),2.51(3h,s)；
esi-ms:371.1[m+h]+
實施例2：(2e,4e)-n-異丁基-7-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-2，4-庚二烯酰胺(ⅱ-14)
步驟1：50ml三口瓶中加入化合物5(650mg，2.6mmol)、20ml無水四氫呋喃、氫氧化鋰(326mg，7.8mmol)，n2保護下加熱至70℃反應1小時。將化合物1(0.76g，2.0mmol)溶于10ml無水四氫呋喃中，0.5小時內(nèi)將其滴入反應瓶中。反應液于70℃反應10小時。薄層色譜檢測，反應完全后停止加熱。將反應液旋轉蒸發(fā)濃縮至干，加入20ml蒸餾水使固體溶解。向上述溶液中慢慢滴加2n鹽酸至ph2.0，繼續(xù)攪拌1小時，析出淡黃色固體，減壓抽濾收集固體，真空干燥得到化合物6(400mg,65％)。
步驟2：把物料6(400mg，1.4mmol)、edci(410mg，2.14mmol)、異丁胺(310mg，4.2mmol)溶到20ml二氯甲烷中，室溫攪拌反應6后tlc顯示原料反應完，然后把反應體系直接縮干，粗產(chǎn)品經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷：乙酸乙酯＝3:1)后，得到270mg白色固體ⅱ-14(52％)。
1hnmr(dmso,400mhz):δ7.18(1h,dd,j1＝10.8hz,j2＝4.4hz),6.80(1h,d,j＝5.6hz),6.11(2h,m),6.06(2h,s),5.76(1h,d,j＝15.2hz),5.46(1h,s),3.17(2h,t,j＝6.0hz),2.68(2h,t,j＝7.6hz),2.44(2h,m),1.80(1h,m),0.94(3h,s),0.92(3h,s)；
esi-ms:370.1[m+h]+
實施例3：(2e,4e)-n-(4-甲基哌嗪基)-7-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基苯基)-2，4-庚二烯酰胺鹽酸鹽(ⅱ-15)
化合物6(0.52g，1.66mmol)、n-甲基哌嗪(0.5g，5mmol)、dipea(0.43g，3.34mmol)加到二氯甲烷中，然后加入hatu(0.95g，2.5mmol)室溫下攪拌6h；反應體系經(jīng)水洗滌，有機相干燥濃縮得到粗品，經(jīng)硅膠柱色譜純化后得到350mg無色油狀物；然后用2ml的二氧六環(huán)溶解，再加入4ml的二氧六環(huán)的鹽酸溶液，室溫下攪拌30min，濃縮干燥得到370mg化合物ⅱ-15(53％)。
1hnmr(meod,400mhz):δ7.25(1h,dd,j1＝10.8hz,j2＝4.4hz),6.96(1h,s),6.87(1h,s),6.48(1h,d,j＝14.8hz),6.31(1h,dd,j1＝10.8hz,j2＝4.4hz),6.21(1h,m),6.10(2h,s),4.87(2h,br),3.77-3.50(3h,br),3.40-3.10(3h,br),3.15(3h,s),2.76(2h,t,j＝7.2hz),2.50(2h,t,j＝7.2hz)；
esi-ms:397.1[m+h]+
實施例4：n-甲基-(5′-三氟甲基-3′，4′-次甲二氧基)-苯丙胺鹽酸鹽(ⅱ-16)
50ml三口瓶中加入化合物1(650mg，2.6mmol)、甲胺溶液(0.4ml，5.1mmol)，氰基硼氫化鈉(430mg，5.2mmol)加入至20ml無水甲醇中，室溫反應6小時。反應液加入50ml水，乙酸乙酯(50ml×2)萃取后，濃縮有機相得粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(正己烷：乙酸乙酯＝1:1)純化后得320mg油狀物；
然后用2ml的二氧六環(huán)溶解，再加入4ml的二氧六環(huán)的鹽酸溶液，室溫下攪拌30min，濃縮干燥得到340mg化合物ⅱ-16(47％)。
1hnmr(d2o,400mhz):δ6.93(1h,s),6.92(1h,s),6.01(2h,s),2.93(2h,t,j＝8.0hz),2.62(2h,t,j＝8.0hz),2.61(3h,s),1.90(2h,m)；
esi-ms:263.2[m+h]+
實施例5：滴丸制劑的制備
取化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15、ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、或ⅲ-130.5g，與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6-8℃液體石蠟中，除油，制得滴丸500粒。
實施例6：注射劑
取化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15、ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、或ⅲ-130.5g，以及葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝500支，即得。
以下通過實驗數(shù)據(jù)說明本發(fā)明的有益效果：
實驗例1：小鼠高架十字迷宮實驗
(一)實驗材料
1、待測樣品
取代桂皮酰胺衍生物如化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13：由天士力控股集團有限公司研究院中藥所提供。
樣品處理：向2wt％的吐溫80水溶液中加入化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13，分別將上述化合物配制成濃度為0.5mg/ml的溶液。
地西泮，生產(chǎn)廠家：北京益民藥業(yè)有限公司，規(guī)格：2.5mg/片，國藥準字h11020898，臨用時通過2wt％的吐溫80水溶液配制成含有0.075mg/ml藥品的溶液。
2、實驗動物
spf級icr雄性小鼠，購買自北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證：scxk(京)2012-0001。
飼養(yǎng)條件：屏障動物房飼養(yǎng)，溫度20-25℃，相對濕度40％-60％，每籠12只，自由飲食，飼料為滅菌全價鼠專用飼料，該飼料由北京華埠康生物科技股份有限公司提供；每日更換墊料。
3、實驗儀器
高架十字迷宮：北京新天地科技有限責任公司。
(二)實驗方法
取247只icr小鼠，雄性，鼠齡6-8周，體重18-22g，適應性喂養(yǎng)1周。然后，將小鼠按體重隨機平均分入19個組中，按表1中所列藥物和劑量每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7天。在第7天給藥20min后進行高架十字迷宮實驗。
小鼠高架十字迷宮(epm)，由兩個相對的敞開臂(openarms,50cm×10cm)和兩個相對的閉臂(en-closedarms，50cm×10cm×40cm)組成，閉臂上部未封頂，迷宮中央為10cm×10cm的開闊部，迷宮離地面50cm。實驗于13:00～18:00安靜環(huán)境下進行。
各給藥組連續(xù)給藥7天，受試物于末次給藥后20min，陽性藥地西泮于末次給藥后60min進行高架十字迷宮實驗，將每只小鼠放入一個60cm×60cm×35cm塑料盒中，讓其熟悉環(huán)境5min后再置于迷宮中央，記錄5min內(nèi)小鼠分別進入開臂和閉臂的次數(shù)以及在兩臂內(nèi)的滯留時間，計算各組小鼠進入開臂的次數(shù)(open-armsentries，oe)和在開臂停留時間(open-armstime，ot)分別占進入兩臂總次數(shù)和在兩臂停留總時間的百分比(oe％和ot％)。
(三)實驗統(tǒng)計
采用spss11.5軟件進行分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，用方差分析比較組間差異的顯著性，p＜0.05為有顯著性差異。
(四)實驗結果
本實驗評價了本發(fā)明17個化合物對小鼠在高架十字迷宮實驗中進入開臂次數(shù)和在開臂停留時間的影響。
表1各化合物對小鼠進入開臂次數(shù)及在開臂停留時間的影響
注：與溶劑對照組相比，*p<0.05，**p<0.01
表1實驗結果顯示：將本發(fā)明化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13，以10mg/kg劑量灌胃給藥1周后，與溶劑對照組相比，均能延長小鼠進入開臂的次數(shù)，并延長在其在開臂停留的時間，上述結果在統(tǒng)計學上的差異顯著(p<0.05，p<0.01)。
實驗結論：在高架十字迷宮實驗中，以10mg/kg的劑量，將本發(fā)明所述的17種化合物給藥7天均能在不同程度上增加高架十字迷宮實驗中小鼠進入開臂的次數(shù)，并延長小鼠在開臂停留的時間。
實驗結果可以證明：本發(fā)明所述的17種化合物具有顯著的抗焦慮活性。
實驗例2：大鼠飲水沖突實驗
(一)實驗材料
1、待測樣品
取代桂皮酰胺衍生物如化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13：由天士力控股集團有限公司研究院中藥所提供。
樣品處理：向2wt％的吐溫80水溶液中加入化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13，分別將上述化合物配制成濃度為0.5mg/ml的溶液。
地西泮，生產(chǎn)廠家：北京益民藥業(yè)有限公司，規(guī)格：2.5mg/片，國藥準字h11020898，臨用時通過2wt％的吐溫80水溶液配制成含有0.01mg/ml藥品的溶液。
2、實驗動物
spf級雄性sd大鼠，購買自北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證：scxk(京)2012-0001。
飼養(yǎng)條件：屏障動物房飼養(yǎng)，溫度20-25℃，相對濕度40％-60％，每籠6只，自由飲食，飼料為滅菌全價鼠專用飼料，該飼料由北京華埠康生物科技股份有限公司提供；每日更換墊料。
3、實驗儀器
vogeltest(吮水電擊)焦慮測試系統(tǒng)，型號：le100-25，美國哈佛儀器公司生產(chǎn)。
(二)實驗方法
230只sd大鼠，雄性，體重180-220g，適應性喂養(yǎng)1周后按體重隨機分19組，每組12-13只，按表2中所列藥物和劑量每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥10天，末次給藥前48h禁水，第9d進行非懲罰性飲水訓練；第10d所有組末次灌胃0.5h后，進行懲罰實驗測試。
第一階段，非懲罰飲水訓練：將大鼠禁水24h后單個置于操作箱，讓其充分探究，直到發(fā)現(xiàn)瓶嘴并開始舔水，計數(shù)器自動記錄無電擊條件下大鼠3min的舔水次數(shù)設置條件：電擊強度0ma)，淘汰舔水少于300次的大鼠。第二階段，懲罰實驗：上述未被淘汰的大鼠繼續(xù)禁水24h(共48h)后置于操作箱。大鼠能很快找到瓶嘴并開始舔水，舔夠20次儀器自動開始計時并給予一次電擊(舔水與電擊次數(shù)之比為20:1)，電擊強度為0.3ma，持續(xù)2s，但是大鼠可通過脫離瓶嘴來控制受電擊時間的長短。記錄懲罰期(3min)大鼠的舔水次數(shù)。
vogel飲水沖突模型觀察指標：懲罰期內(nèi)大鼠的舔水次數(shù)。
(三)實驗統(tǒng)計
采用spss11.5軟件進行分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，用方差分析比較組間差異的顯著性，p＜0.05為有顯著性差異。
(四)實驗結果
本實驗評價了本發(fā)明17個化合物對大鼠飲水沖突實驗中懲罰期大鼠舔水次數(shù)的影響。
表2各化合物對懲罰期大鼠舔水次數(shù)的影響
注：與溶劑對照組相比，*p<0.05，**p<0.01
表2實驗結果顯示：將本發(fā)明化合物ⅱ-3、ⅱ-4、ⅱ-5、ⅱ-10、ⅱ-11、ⅱ-12、ⅱ-13、ⅱ-14、ⅱ-15，ⅱ-16，ⅲ-2、ⅲ-4、ⅲ-7、ⅲ-9、ⅲ-10、ⅲ-11、ⅲ-13，以5mg/kg劑量灌胃給藥10d后，與溶劑對照組相比，均能增加大鼠懲罰期飲水次數(shù)，上述結果在統(tǒng)計學上的差異顯著(p<0.05，p<0.01)。
實驗結論：大鼠飲水沖突實驗中，以5mg/kg的劑量，將本發(fā)明所述的17種化合物給藥10天均能在不同程度上增加大鼠懲罰期的飲水次數(shù)。
實驗結果可以證明：本發(fā)明所述的17種化合物具有抗焦慮活性。