本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種片葉苔素d含氮衍生物及其制備方法和在治療腫瘤疾病中的用途。

背景技術(shù)：

腫瘤，是目前嚴(yán)重危害人類健康和生活質(zhì)量的一類疾病，抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)與研制一直是藥物研究人員們的工作重點與熱點。目前腫瘤化療有兩大挑戰(zhàn)，第一是藥物選擇性差，即在腫瘤治療的同時對正常組織造成損傷導(dǎo)致治療失?。坏诙悄[瘤耐藥，腫瘤細(xì)胞對藥物不再敏感，而且對一種藥物耐藥后往往對其他藥物也產(chǎn)生耐藥，即多藥耐藥，最終也導(dǎo)致化療的失敗。尋找腫瘤的致命弱點來設(shè)計抗腫瘤藥物是藥物化學(xué)家的長期追求。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞的亞細(xì)胞器包括線粒體、細(xì)胞核、溶酶體等結(jié)構(gòu)和生理特性不同，利用這種差別來設(shè)計藥物受到越來越多的關(guān)注。在諸多的亞細(xì)胞器中，溶酶體作為藥物的靶點有著更多的優(yōu)勢。由于腫瘤細(xì)胞溶酶體數(shù)量更多，體積更大，溶酶體膜穩(wěn)定性更差，而溶酶體膜本身缺陷，容易導(dǎo)致膜滲透，誘導(dǎo)溶酶體途徑的細(xì)胞死亡，為藥物設(shè)計提供了新的靶點和途徑。

雙聯(lián)芐是主要存在于苔蘚植物中的一類天然多酚類化合物，具有抗腫瘤、抗炎、抗真菌、抗細(xì)菌、抗氧化、昆蟲拒食、植物生長調(diào)節(jié)和抗血小板凝集等廣泛而又顯著的生物學(xué)活性，是發(fā)現(xiàn)和研制新藥的重要來源。片葉苔素d是從干地錢(marchantiapolymorpal.)中分離得到的環(huán)狀雙聯(lián)芐類化合物，呈無色塊狀結(jié)晶，分子式為c28h24o4，分子量為424，熔點為194-196℃，易溶于氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中，結(jié)構(gòu)式如下：

近期研究發(fā)現(xiàn)，片葉苔素d的胺甲基化衍生物具有良好的抗腫瘤活性，進(jìn)一步的作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，該類具有弱堿性的片葉苔素d衍生物能夠在腫瘤細(xì)胞溶酶體中定向富集，進(jìn)一步引起溶酶體膜滲透的增加，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

因此，針對片葉苔素d進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，對于發(fā)現(xiàn)更有效的抗癌藥物具有十分重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種片葉苔素d含氮衍生物及其制備方法。

本發(fā)明對片葉苔素d進(jìn)行了進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾和改造，分別通過直接在苯環(huán)上引入氨基和以醚化酚羥基的方式引入含氮基團(tuán)，制備了一系列的具有更好抗腫瘤活性的片葉苔素d含氮衍生物。

本發(fā)明的另一目的是提供上述片葉苔素d含氮衍生物在制備治療腫瘤疾病的藥物中的用途。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一方面，提供一種式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中，r¹、r²和r³分別獨立的選自：氫原子、硝基、氨基、酰胺基或(c1-c10)烷氨基；r⁴、r⁵和r⁶分別獨立的選自：氫原子或具有不同取代基的(c1-c10)胺烷基。

優(yōu)選的，r⁴、r⁵和r⁶分別獨立的選自：氫原子、2-(二甲氨基)-乙基、2-(二乙氨基)-乙基、2-(四氫吡咯-1-基)-乙基、2-(環(huán)己亞氨基-1-基)-乙基、2-(哌啶-1-基)-乙基、2-嗎啉基-乙基、3-(二甲氨基)-丙基、3-(二乙氨基)-丙基、3-(四氫吡咯-1-基)-丙基、3-(哌啶-1-基)-丙基、3-嗎啉基-丙基或3-(環(huán)己亞氨基-1-基)-丙基。

優(yōu)選的，式i所示的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽為：式i所示的化合物與無機(jī)酸或者有機(jī)酸形成的鹽。

所述無機(jī)酸優(yōu)選為：鹽酸、硫酸或氫溴酸；

所述有機(jī)酸優(yōu)選為：甲磺酸、甲苯磺酸或三氟乙酸。

優(yōu)選的，上述式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽選自如下化合物：

本發(fā)明的第二方面，提供式i所示的化合物的制備方法，包括：以片葉苔素d為原料，在片葉苔素d的苯環(huán)上引入硝基、氨基、酰胺基或(c1-c10)烷氨基；

或者，以片葉苔素d為原料，和具有不同取代氨基的氯代烷鹽酸鹽反應(yīng)，在片葉苔素d的苯環(huán)上引入具有不同取代基的(c1-c10)胺烷基。

式i所示的化合物的制備方法，可以如下面詳述地得到。

當(dāng)式i所示的化合物中，r⁴、r⁵和r⁶分別選自氫原子時，其合成路線如下：

當(dāng)式i所示的化合物中，r¹、r²和r³分別選自氫原子時，其合成路線如下：

本發(fā)明的第三方面，提供式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療腫瘤疾病的藥物中的用途。

所述腫瘤疾病優(yōu)選為肺癌、乳腺癌或白血病。

本發(fā)明的第四方面，提供一種藥物組合物，所述藥物組合物的活性成分為式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。

所述藥物組合物可以以式i所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽作為治療腫瘤疾病的唯一活性成分；還可以與至少一種其他抗腫瘤藥物合用，其它抗腫瘤藥物的原子組成或結(jié)構(gòu)均異于式(i)的化合物。

上述的藥物組合物還可以與藥學(xué)上可接受的輔料結(jié)合制備成各種藥物劑型。

所述藥物劑型可以為口服制劑、外用制劑或注射制劑。

固態(tài)形式的制劑包括粉劑、片劑、分散顆粒、膠囊、藥丸及栓劑。粉劑及片劑可包含約5％至約95％的活性成分。適當(dāng)?shù)墓腆w輔料可以是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、糖或者乳糖。片劑、粉劑、藥丸及膠囊為適于口服用的固態(tài)劑型。液態(tài)形式的制劑包括溶液、懸浮液及乳液，其實施例為非經(jīng)腸注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味劑及造影劑的口服溶液。此外，還可制成注射用小水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。

本發(fā)明的第五方面，提供一種治療腫瘤疾病的方法，該方法包括給予面臨腫瘤疾病風(fēng)險或經(jīng)診斷患有腫瘤疾病的受試者治療有效量的式i所示的化合物或其其藥學(xué)上可接受的鹽。

本文使用的術(shù)語“治療有效量”表示，治療、改善靶向的疾病或病癥或者表現(xiàn)出可檢測的治療效果所需的治療劑的量。

本發(fā)明的化合物在相當(dāng)寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。實際服用本發(fā)明式i所示的化合物的劑量可由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來決定。這些情況包括：受試者的身體狀態(tài)、給藥途徑、年齡、體重、對藥物的個體反應(yīng)，癥狀的嚴(yán)重程度等。

在治療過程中，上述式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可還以與至少一種其它抗腫瘤藥物合用。所涵蓋的其它抗腫瘤藥物的原子組成或結(jié)構(gòu)均異于式i的化合物。

上述技術(shù)方案具有如下有益效果：

溶酶體是哺乳動物細(xì)胞中的一類重要細(xì)胞器，含有50余種酸性水解酶，ph值為4.5-5。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞中的溶酶體具有體積大、數(shù)量多、溶酶體膜穩(wěn)定性差等特點。因此，利用溶酶體自身偏酸性的特點，設(shè)計弱堿性化合物，使其更容易分布于溶酶體內(nèi)，從而起到靶向作用；其次，利用與正常細(xì)胞相比腫瘤細(xì)胞中的溶酶體數(shù)量更多、體積更大的特點，使靶向溶酶體藥物能夠集中分布于腫瘤細(xì)胞內(nèi)，提高藥物對腫瘤的選擇性，從而降低毒性；再次，利用腫瘤細(xì)胞溶酶體膜穩(wěn)定性差的特點，使靶向溶酶體藥物更容易引起溶酶體膜滲透甚至破壞溶酶體膜，進(jìn)而引起組織蛋白酶釋放，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，從而達(dá)到消滅腫瘤的目的；最后，藥物在破壞溶酶體的同時也克服了由溶酶體引起的腫瘤耐藥。綜上，溶酶體作為抗腫瘤藥物的靶標(biāo)，具有靶向性強(qiáng)、腫瘤選擇性高、作用機(jī)制明確和能夠克服腫瘤耐藥的特點，是新型抗腫瘤藥物的理想靶點。因此，以溶酶體為靶點，設(shè)計、合成小分子化合物，對于研究和開發(fā)新型高效的抗腫瘤藥物具有重大意義。

本申請發(fā)明人課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)片葉苔素d的胺甲基化衍生物具有較好的抗腫瘤活性，并且能夠靶向腫瘤溶酶體。在此基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和制備靶向溶酶體的效果更優(yōu)的抗腫瘤化合物，本申請從新的方向上對片葉苔素d進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾和改造，本申請的設(shè)計思路主要為：

一是通過對片葉苔素d的酚羥基進(jìn)行醚化修飾，引入各類含氮堿性基團(tuán)，同時封閉酚羥基的酸性，從而提高分子的整體堿性。

二是通過直接將氮原子引入至片葉苔素d的苯環(huán)上，制備一系列的堿性苯胺類衍生物。

本發(fā)明通過對片葉苔素d進(jìn)行上述的結(jié)構(gòu)修飾和改造，得到系列的片葉苔素d含氮衍生物，并對化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾和改造后的片葉苔素d含氮衍生物的抗腫瘤活性較片葉苔素d有了明顯的改善，而且與片葉苔素d的胺甲基化衍生物相比，本申請經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾和改造后的片葉苔素d含氮衍生物其對溶酶體的靶向性更強(qiáng)，對某些腫瘤細(xì)胞株的抑制作用更強(qiáng)，具有開發(fā)成為抗腫瘤新藥的良好前景。

此外，片葉苔素d存在水溶性低，口服生物利用度差等缺點，本發(fā)明通過在分子中引入極性更強(qiáng)的含氮基團(tuán)，能夠在一定程度上提高化合物的極性和水溶性，有利于提高生物利用度。

具體實施方式

應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說明都是示例性的，旨在對本發(fā)明提供進(jìn)一步的說明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

需要注意的是，這里所使用的術(shù)語僅是為了描述具體實施方式，而非意圖限制根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說明書中使用術(shù)語“包含”和/或“包括”時，其指明存在特征、步驟、操作和/或它們的組合。

正如背景技術(shù)所介紹的，針對片葉苔素d進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，對于發(fā)現(xiàn)更有效的抗癌藥物具有十分重要的意義?；诖?，本發(fā)明提出了一種片葉苔素d含氮衍生物及其制備方法和在治療腫瘤疾病中的用途。

在本發(fā)明的一種實施方案中，提供了一種片葉苔素d含氮衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：

其中，r¹、r²和r³分別獨立的選自：氫原子、硝基、氨基、酰胺基或(c1-c10)烷氨基；r⁴、r⁵和r⁶分別獨立的選自：氫原子或具有不同取代基的(c1-c10)胺烷基。

在本發(fā)明的另一種實施方案中，給出了上述式i所示化合的制備方法。

當(dāng)式i所示的化合物中，r⁴、r⁵和r⁶分別選自氫原子時，制備方法具體如下：

步驟1：低溫條件下，將片葉苔素d的二氯甲烷溶液加入到硝酸的乙酸溶液中，室溫攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系加入至冰水中，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉水溶液洗，干燥、過濾、蒸除溶劑、硅膠柱層析純化，獲得結(jié)構(gòu)式如ii所示的化合物；

步驟2：將結(jié)構(gòu)式如ii的化合物溶解于乙酸乙酯或甲醇溶液中，加入鈀碳，氫氣條件下，攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到如iii所示的化合物；

步驟3：低溫條件下，將結(jié)構(gòu)式如iii的化合物和硼氫化鈉的四氫呋喃溶液慢慢滴加至硫酸和醛的混合溶液中，攪拌，反應(yīng)完成后，加入碳酸氫鈉水溶液終止反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到如iv所示的化合物；

步驟4：低溫條件下，將乙酰氯慢慢滴加至結(jié)構(gòu)式如iii的化合物和三乙胺的二氯甲烷溶液中，室溫攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，水洗三遍，有機(jī)相干燥、過濾、蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到如v所示的化合物；

步驟5：低溫條件下，將氫氧化鈉水溶液滴加至結(jié)構(gòu)式如v的化合物的甲醇溶液中，室溫攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，加入鹽酸終止反應(yīng)，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾，蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到如vi所示的化合物。

其合成路線為：

當(dāng)式i所示的化合物中，r¹、r²和r³分別選自氫原子時，其制備方法如下：

將片葉苔素d和具有不同取代氨基的氯代烷鹽酸鹽以及碳酸鉀溶解到丙酮溶液中，加熱回流攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，過濾、蒸除溶劑、硅膠柱層析純化，獲得結(jié)構(gòu)式如vii所示的化合物。

合成路線如下：

在本發(fā)明的再一種實施方案中，考察了上述的片葉苔素d衍生物對a549、mcf-7、k562細(xì)胞的生長抑制作用。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，片葉苔素d含氮衍生物的抗腫瘤活性較片葉苔素d有了明顯的改善，從而完成了本發(fā)明。

為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實施例詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。

實施例1：化合物i-1至i-4的制備

化合物i-1的制備

在0℃條件下，將硝酸(5.3μl)的乙酸溶液(0.5ml)慢慢滴加至片葉苔素d(50mg)的二氯甲烷(0.7ml)中。室溫攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系倒入冰水中，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，水洗三遍，硫酸鈉干燥，過濾、蒸除溶劑，過硅膠柱層析純化得到化合物i-1。msm/z470(m+1)；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.72(s,1h),7.63(s,1h),7.38(t,j＝7.8hz,1h),7.28(s,1h),7.10(d,j＝7.7hz,1h),6.96(d,j＝8.1hz,1h),6.93(d,j＝8.0hz,1h),6.88(m,3h),6.84(d,j＝8.1hz,1h),6.56(s,1h),6.38(d,j＝7.6hz,1h),5.81(s,1h),4.96(s,1h),4.94(s,1h),3.06-2.57(m,8h).

化合物i-2的制備

將化合物i-1(98mg)溶解于乙酸乙酯(5ml)中，加入鈀碳(5mg)，氫氣環(huán)境下，磁力攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，蒸除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-2純品。msm/z440(m+1)；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.34(t,j＝7.9hz,1h),7.07(d,j＝7.7hz,1h),6.91(d,j＝7.8hz,2h),6.82(m,3h),6.76(d,j＝7.9hz,1h),6.49(s,1h),6.34(d,j＝7.6hz,1h),6.28(s,1h),4.85(s,1h),3.06-2.82(m,3h),2.76-2.65(m,2h),2.60(m,3h).

化合物i-3的制備

在0℃條件下，將化合物i-2(30mg)和硼氫化鈉的四氫呋喃溶液慢慢滴加至硫酸(3m)和甲醛的混合溶液中。磁力攪拌，反應(yīng)完成后，加入碳酸氫鈉水溶液終止反應(yīng)，加入二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，蒸除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-3純品。msm/z468(m+1)；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.35(t,j＝7.9hz,1h),7.07(d,j＝7.7hz,1h),6.91(d,j＝8.0hz,2h),6.82(m,4h),6.59(s,1h),6.53(s,1h),6.36(d,j＝7.6hz,1h),5.22(s,1h),3.02-2.54(m,14h).

化合物i-4的制備

在0℃條件下，將乙酰氯(33.7μl)慢慢滴加至化合物i-2(47mg)和三乙胺(104μl)的二氯甲烷(5ml)溶液中，室溫攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，加入稀鹽酸終止反應(yīng)。二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，水洗三遍，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾、蒸除溶劑，所得到的產(chǎn)物隨后溶解于甲醇(0.5ml)中，并向其中滴加氫氧化鈉的水溶液，室溫下磁力攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，加入稀鹽酸溶液終止反應(yīng)，二氯萃取，合并有機(jī)相，硫酸鈉干燥、過濾、整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-4純品。msm/z482(m+1)；¹hnmr(600mhz,(cd3)2co)δ8.96(s,1h),8.65(s,1h),7.73(s,1h),7.20(m,3h),6.97(m,2h),6.87(d,j＝6.9hz,1h),6.80(d,j＝7.5hz,1h),6.73(m,3h),6.28(m,2h),5.18(s,1h),2.92-2.83(m,3h),2.73(m,1h),2.60(m,5h),2.21(s,3h).

實施例2：化合物i-5的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和2-氯-n，n-二甲基乙胺(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-5純品。msm/z496(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.35(t,j＝7.9hz,1h),7.12(d,j＝7.8hz,1h),7.02(d,j＝7.9hz,1h),6.96-6.93(m,2h),6.89(d,j＝7.6hz,1h),6.86-6.77(m,3h),6.75(dd,j＝8.1,1.6hz,1h),6.65(d,j＝7.6hz,1h),6.21(s,1h),5.38(d,j＝1.6hz,1h),4.17-4.02(m,2h),3.07-2.96(m,2h),2.96-2.80(m,4h),2.70-2.61(m,1h),2.61-2.53(m,2h),2.42(t,j＝12.0hz,1h),2.29(s,6h)。

實施例3：化合物i-6的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和2-氯-n，n-二乙基乙胺(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-6純品。msm/z524(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.38(t,j＝7.9hz,1h),7.16(d,j＝7.7hz,1h),6.99(d,j＝7.3hz,1h),6.93(d,j＝7.9hz,2h),6.94-6.82(m,4h),6.74(d,j＝7.5hz,1h),6.51(d,j＝6.1hz,1h),6.28(s,1h),5.40(s,1h),4.30-4.20(m,2h),2.98-2.90(m,4h),2.82(d,j＝10.5hz,2h),2.70(s,4h),2.63(t,j＝11.1hz,1h),2.50(t,j＝11.1hz,1h),1.27(s,6h)。

實施例4：化合物i-7的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和n-(2-氯乙基)吡咯烷(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-7純品。msm/z522(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.33(t,j＝7.9hz,1h),7.10(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),7.00(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.91(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.90(d,j＝7.8,1h),6.84(d,j＝7.6hz,1h),6.83-6.74(m,3h),6.72(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.57(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),6.20(d,j＝1.7hz,1h),5.38(d,j＝2.0hz,1h),4.24-4.03(m,2h),3.01-2.75(m,8h),2.72-2.47(m,5h),2.46-2.33(m,1h),1.90-1.75(m,4h).

實施例5：化合物i-8的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和1-(2-氯乙基)哌啶(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-8純品。msm/z536(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.36(t,j＝8.0hz,1h),7.13(d,j＝7.8hz,1h),7.02(d,j＝7.4hz,1h),6.93(d,j＝8.0hz,2h),6.84(d,j＝7.6hz,1h),6.83-6.78(m,3h),6.74(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),6.55(d,j＝7.6hz,1h),6.29(s,1h),5.40(d,j＝1.5hz,1h),4.30-4.25(m,1h),4.15-4.12(m,1h),3.03-2.71(m,8h),2.65-2.40(m,6h),1.75-1.62(m,4h),1.50-1.42(m,2h)。

實施例6：化合物i-9的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和1-(2-氯乙基)嗎啉(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-9純品。¹hnmr(cdcl3)δ7.34(t,j＝7.9hz,1h),7.11(d,j＝7.5hz,1h),6.98(d,j＝7.2hz,1h),6.92(d,j＝8.0hz,2h),6.87-6.76(m,4h),6.73(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.56(d,j＝7.9hz,1h),6.23(s,1h),5.38(s,1h),4.23-4.02(m,2h),3.02-2.79(m,8h),2.71(s,4h),2.63-2.40(m,2h),1.64-1.58(m,8h)；ms(esi)550(m+h)⁺.

實施例7：化合物i-10的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和1-(2-氯乙基)環(huán)己基胺(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-10純品。¹hnmr(cdcl3)δ7.34(t,j＝7.9hz,1h),7.11(d,j＝7.5hz,1h),6.98(d,j＝7.2hz,1h),6.92(d,j＝8.0hz,2h),6.87-6.76(m,4h),6.73(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.56(d,j＝7.9hz,1h),6.23(s,1h),5.38(s,1h),4.23-4.02(m,2h),3.02-2.79(m,8h),2.71(s,4h),2.63-2.40(m,2h),1.64-1.58(m,8h)；ms(esi)550(m+h)⁺.

實施例8：化合物i-11的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和3-氯-n，n-二甲基丙胺(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-11純品。msm/z510(m+1)；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36(t,j＝7.9hz,1h),7.12(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.94-6.87(m,4h),6.84(dd,j＝8.3,1.2hz,1h),6.79(d,j＝7.9hz,2h),6.72(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.43(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),6.27(d,j＝1.7hz,1h),5.40(d,j＝2.0hz,1h),4.02-3.97(m,1h),3.90-3.86(m,1h),2.98-2.85(m,4h),2.82-2.71(m,3h),2.70-2.48(m,3h),2.21(s,6h),1.85-1.74(m,2h).

實施例9：化合物i-12的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(1.5mmol)和n-(3-氯乙基)吡咯烷(0.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-12純品。msm/z536(m+1)；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38(t,j＝8.0hz,1h),7.15(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.94-6.88(m,3h),6.84(dd,j＝8.2,1.1hz,1h),6.82-6.77(m,3h),6.72(dd,j＝8.1,2.0hz,1h),6.42(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),6.29(d,j＝1.7hz,1h),5.40(d,j＝2.0hz,1h),4.09-4.05(m,1h),3.92-3.87(m,1h),3.00-2.84(m,6h),2.79-2.61(m,6h),2.58-2.48(m,2h),2.00-1.88(m,6h)。

實施例10：化合物i-13的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和2-氯-n，n-二甲基乙胺(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-13純品。¹hnmr(cdcl3)δ7.28(t,j＝7.9hz,1h),7.03(dd,j＝7.7,1.1hz,1h),6.90(d,j＝8.0hz,2h),6.81(d,j＝8.0,2h),6.78-6.74(m,2h),6.73-6.68(m,2h),6.37(d,j＝1.6hz,1h),6.28(dd,j＝7.6,1.6hz,1h),5.47(d,j＝2.0hz,1h),4.20(t,j＝6.3hz,2h),3.97-3.76(m,4h),2.99-2.84(m,3h),2.82(t,j＝6.2hz,2h),2.80-2.56(m,5h),2.52(q,j＝6.5hz,2h),2.44(td,j＝6.0,2.7hz,2h),2.37(s,6h),2.17(s,6h),2.08(s,6h)；ms(esi)638(m+h)⁺.

實施例11：化合物i-14的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和2-氯-n，n-二乙基乙胺(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-14純品。msm/z722(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.23(t,j＝8.0hz,1h),6.98(d,j＝7.8hz,1h),6.84(d,j＝8.2hz,2h),6.77(d,j＝6.6hz,1h),6.712-6.68(m,5h),6.36(s,1h),6.20(d,j＝7.6hz,1h),5.42(d,j＝1.7hz,1h),4.24(t,j＝6.0hz,2h),4.07-3.97(m,4h),3.13-3.06(m,2h),2.96-2.84(m,7h),2.81(q,j＝7.1hz,4h),2.78-2.71(m,1h),2.72-2.65(m,1h),2.61(q,j＝7.1hz,4h),2.58-2.52(m,2h),2.49(q,j＝7.1hz,4h),2.44-2.41(m,1h),1.12(t,j＝7.2hz,6h),0.92(t,j＝7.2hz,6h),0.88(t,j＝7.2hz,6h)。

實施例12：化合物i-15的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和n-(2-氯乙基)吡咯烷(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-15純品。msm/z716(m+1)；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.27(t,j＝7.7hz,1h),7.03(d,j＝7.7hz,1h),6.91(d,j＝8.2hz,1h),6.89-6.86(m,2h),6.80(d,j＝8.2hz,1h),6.78-6.73(m,3h),6.71(d,j＝8.2hz,1h),6.32(s,1h),6.30(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),5.50(d,j＝2.0hz,1h),4.39(t,j＝5.6hz,2h),4.32-4.08(m,4h),3.40-3.26(m,2h),3.24(t,j＝5.6hz,2h),3.11-3.02(m,6h),2.94-2.76(m,8h),2.72-2.51(m,8h),1.97-1.87(m,4h),1.87-1.78(m,4h),1.77-1.60(m,4h)。

實施例13：化合物i-16的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和1-(2-氯乙基)哌啶(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-16純品。msm/z758(m+1)；¹hnmr(cdcl3)δ7.21(t,j＝8.0hz,1h),6.96(d,j＝7.7hz,1h),6.83(d,j＝8.2hz,2h),6.77(d,j＝7.4hz,1h),6.74(d,j＝7.6hz,1h),6.69(d,j＝7.9hz,2h),6.66-6.65(m,2h),6.30(s,1h),6.24(d,j＝7.6hz,1h),5.41(d,j＝1.7hz,1h),4.18(t,j＝6.3hz,2h),3.95-3.76(m,4h),2.87-2.80(m,5h),2.75-2.68(m,1h),2.66-2.56(m,4h),2.56-2.48(m,8h),2.28(s,4h),2.16(s,4h),1.61-1.52(m,4h),1.45(dt,j＝11.1,5.6hz,4h),1.38(dt,j＝11.4,5.6hz,4h),1.36-1.22(m,6h)。

實施例14：化合物i-17的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和1-(2-氯乙基)嗎啉(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-17純品。¹hnmr(cdcl3)δ7.29(t,j＝7.9hz,1h),7.04(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.92(d,j＝8.2hz,2h),6.85(d,j＝7.5hz,1h),6.81(d,j＝7.6hz,1h),6.77-6.73(m,4h),6.38(d,j＝1.5hz,1h),6.30(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),5.48(d,j＝2.1hz,1h),4.30(s,2h),4.03(s,4h),3.78(t,j＝4.6hz,4h),3.64(s,4h),3.56(s,4h),3.05-2.86(m,5h),2.82-2.55(m,11h),2.45(s,4h),2.29(s,4h).ms(esi)764(m+h)⁺.

實施例15：化合物i-18的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和1-(2-氯乙基)環(huán)己基胺(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-18純品。¹hnmr(cdcl3)δ7.28(t,j＝7.8,1h),7.02(dd,j＝7.8,1.0hz,1h),6.91(d,j＝8.2hz,2h),6.84-6.80(m,2h),6.77-6.72(m,4h),6.37(d,j＝1.5hz,1h),6.30(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),5.47(d,j＝2.1hz,1h),4.21(t,j＝6.6hz,2h),4.01-3.76(m,4h),3.05(t,j＝6.6hz,2h),2.97-2.86(m,3h),2.85-2.79(m,4h),2.78-2.72(m,3h),2.70-2.65(m,4h),2.66-2.59(m,2h),2.58-2.57(m,4h),2.47-2.45(m,4h),1.69-1.66(m,4h),1.62-1.57(m,4h),1.52(s,8h),1.46(s,8h).ms(esi)800(m+h)⁺.

實施例16：化合物i-19的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和3-氯-n，n-二甲基丙胺(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-19純品。msm/z680(m+1)；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(t,j＝7.9hz,1h),7.10(dd,j＝7.8,1.1hz,1h),6.91(d,j＝8.1hz,1h),6.89-6.77(m,4h),6.76(dd,j＝8.2,2.0hz,2h),6.71-6.61(m,1h),6.41(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),6.29(d,j＝1.5hz,1h),5.43(d,j＝2.0hz,1h),4.20(t,j＝5.9hz,2h),4.09-3.98(m,1h),3.92(t,j＝5.4hz,2h),3.76-3.70(m,1h),3.18-3.02(m,2h),3.00-2.78(m,5h),2.75-2.68(m,3h),2.66(s,6h),2.63-2.59(m,1h),2.57(s,6h),2.47(s,6h),2.35-2.11(m,3h),2.09-1.84(m,6h)。

實施例17：化合物i-20的制備

將片葉苔素d(0.5mmol)、碳酸鉀(3mmol)和n-(3-氯乙基)吡咯烷(1.5mmol)溶解于丙酮(10ml)溶液中，加熱回流，攪拌24小時，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，整除溶劑，所得到的產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物i-20純品。msm/z758(m+1)；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31(t,j＝7.9hz,1h),7.10(d,j＝7.7hz,1h),6.90(d,j＝8.2hz,1h),6.85(d,j＝8.5hz,2h),6.84-6.81(m,2h),6.79-6.72(m,2h),6.65(s,1h),6.39(d,j＝7.5hz,1h),6.59(d,j＝2.1hz,1h),5.40(d,j＝1.9hz,1h),4.20(t,j＝5.5hz,2h),4.06-3.96(m,1h),3.94-3.91(m,2h),3.81-3.76(m,2h),3.69-3.65(m,2h),3.58-3.47(m,2h),3.42-3.36(m,3h),3.10-3.04(m,2h),2.95-2.81(m,5h),2.77-2.49(m,11h),2.45-2.40(m,2h),2.22-2.11(m,4h),2.09–1.86(m,13h)。

實施例18：化合物的抗腫瘤活性評價

片葉苔素d衍生物對a549、mcf-7、k562細(xì)胞的生長抑制作用

方法：mtt法：取a549、mcf-7和k562三種腫瘤細(xì)胞株，2×10⁴/孔細(xì)胞接種于96孔板中，分別加入0.4％dmso和不同濃度的片葉苔素d衍生物，培養(yǎng)24、48和72h后，每孔加入5mg/mlmtt20μl繼續(xù)孵育4h，離心并小心吸取上清液，加入200μldmso并輕微振蕩，使生成的甲臜完全溶解顯色后，用bio-radmodel550microplatereader以570nm波長測od值。實驗在不同培養(yǎng)時間條件下分別進(jìn)行3次，算出平均值。以片葉苔素d、阿霉素和發(fā)明人課題組前期合成的片葉苔素d的氨甲基化的衍生物(rd-n)為陽性對照藥，具體結(jié)果見表1。

表1.片葉苔素含氮衍生物的抗腫瘤活性評價結(jié)果，具體用半數(shù)抑制濃度(ic50值)來表示。

表1.片葉苔素d含氮衍生物的抗腫瘤活性評價

結(jié)果：片葉苔素d含氮衍生物i-1至i-20在和腫瘤細(xì)胞a549、mcf-7和k562培養(yǎng)48小時條件下，通過mtt法測定各個衍生物對腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度。實驗結(jié)果表明，全部衍生物對三種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，而且酚羥基烷基化的衍生物具有較為顯著的抗腫瘤活性。其中，化合物i-13的活性最強(qiáng)，對a549、mcf-7和k562三種腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度分別為0.51、0.23和0.19微摩爾，較片葉苔素d活性有極為顯著的提高，而且比臨床一線抗腫瘤藥物阿霉素的活性提高了3-10倍。此外，衍生物i-14、i-16和i-18也具有良好的抑制腫瘤細(xì)胞的活性，其半數(shù)抑制濃度也在均亞爾摩爾級別。值得注意的是，三烷基化衍生物明顯高于單烷基化衍生物。

此外，本發(fā)明的多數(shù)醚化產(chǎn)物較片葉苔素d的氨甲基化產(chǎn)物rd-n(片葉苔素d的氨甲基化產(chǎn)物rd-n的結(jié)構(gòu)和合成方法參見“片葉苔素d及其衍生物抗腫瘤機(jī)制的研究和鼠李糖受體的發(fā)現(xiàn)”，王燕燕，山東大學(xué))的抗腫瘤活性有顯著提高。

綜上所述，片葉苔素d衍生物i-13以及i-14、i-16和i-18表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性，較片葉苔素d有明顯的改善，而且化合物i-13的抗腫瘤活性顯著優(yōu)于臨床用藥阿霉素，具有開發(fā)成為抗腫瘤新藥的良好前景。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。