技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
一種高效重組表達限制性內(nèi)切酶的方法，包括如下步驟：（1）先將限制性內(nèi)切酶基因插入，再將載體轉(zhuǎn)化導入大腸桿菌，篩選培養(yǎng)、測序，獲得限制性內(nèi)切酶的重組表達質(zhì)粒，質(zhì)粒載體為利用乳糖操縱子和T7啟動子調(diào)控，IPTG誘導的pET系列表達載體；（2）將限制性內(nèi)切酶的重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）pLysS感受態(tài)細胞中，篩選獲得限制性內(nèi)切酶的重組表達菌株；（3）擴大培養(yǎng)限制性內(nèi)切酶的重組表達菌株并誘導表達限制性內(nèi)切酶。本發(fā)明方法利用葡萄糖對乳糖操縱子表達系統(tǒng)本底表達的抑制作用，以及BL21（DE3）pLysS菌株自身對乳糖操縱子表達系統(tǒng)本底表達的嚴苛控制作用，省略了對宿主DNA的甲基化保護步驟，不僅大大簡化了重組表達過程，可以應(yīng)用于多種限制酶的重組表達。

技術(shù)研發(fā)人員：高嵩;張坤曉;許恒皓;李肖;胡艷紅;張穎;吳勝月
受保護的技術(shù)使用者：淮海工學院
技術(shù)研發(fā)日：2017.01.17
技術(shù)公布日：2017.08.18