1.一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于：采用多重PCR檢測(cè)方法，能夠一次性同時(shí)利用WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測(cè)引物WSSV-F和WSSV-R、AHPND-F和AHPND-R、EHP-F和EHP-R、IHHNV-F和IHHNV-R進(jìn)行四種病原的擴(kuò)增，引物序列如下：
對(duì)蝦白斑綜合征病毒W(wǎng)SSV
上游引物：WSSV-F：TTCTCACCTCATGCTTTCTTCC SEQ ID NO:1
下游引物：WSSV-R：TACTTGCTTAGAGATGGCTTCG SEQ ID NO:2
對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥AHPND
上游引物：AHPND-F：GGAAGTCGGTCGTAGTGTAG SEQ ID NO:3
下游引物：AHPND-R：ATATCGCATAACCAAGCCATTC SEQ ID NO:4
蝦肝腸胞蟲(chóng)EHP
上游引物：EHP-F：GAGAGTAGCGGAACGGATAG SEQ ID NO:5
下游引物：EHP-R：GCATCACGGACCTGTTATTG SEQ ID NO:6
傳染性皮下及造血組織壞死病毒IHHNV
上游引物：IHHNV-F：AAGAGCAGCGACAGTTCAG SEQ ID NO:7
下游引物：IHHNV-R：CGGCTTCCTTAGTTGATAGTTG SEQ ID NO:8；
所述4對(duì)病原引物彼此間無(wú)交叉，且不與其它病原產(chǎn)生交叉。
2.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)提取DNA：
取疑似對(duì)蝦白斑綜合征病毒、對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥、蝦肝腸胞蟲(chóng)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒發(fā)病對(duì)蝦鰓和內(nèi)臟組織，提取病原核酸DNA備用；
采用權(quán)利要求1所述的多重PCR引物；陽(yáng)性對(duì)照為SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的核酸序列混合作為模板，陰性對(duì)照為：不含有對(duì)蝦白斑綜合征病毒、對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥、蝦肝腸胞蟲(chóng)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒任一病原的任意DNA核酸序列；
(2)多重PCR擴(kuò)增：
提取好待檢測(cè)的DNA模板，同時(shí)按照PCR檢測(cè)的PCR反應(yīng)體系設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，加入陽(yáng)性質(zhì)控品或陰性質(zhì)控品進(jìn)行擴(kuò)增；將各反應(yīng)管放入PCR儀的反應(yīng)槽內(nèi)，設(shè)定多重PCR儀反應(yīng)程序，進(jìn)行多重PCR反應(yīng)；
擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)與分析：1.5％(W/V)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)目的條帶并成像分析；
(3)結(jié)果判定：
當(dāng)檢測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增條帶大小接近，約為1189bp時(shí)，結(jié)果為對(duì)蝦白斑綜合征病毒陽(yáng)性；如果沒(méi)有1189條帶，則為對(duì)蝦白斑綜合征病毒陰性；
當(dāng)檢測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增條帶大小接近，約為719bp時(shí)，結(jié)果為對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥陽(yáng)性；如果沒(méi)有719條帶，則為對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥陰性；
當(dāng)檢測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增條帶大小接近，約為512bp時(shí)，結(jié)果為蝦肝腸胞蟲(chóng)陽(yáng)性；如果沒(méi)有512bp條帶，則為蝦肝腸胞蟲(chóng)陰性；
當(dāng)檢測(cè)樣本和陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增條帶大小接近，約為244bp時(shí)，結(jié)果為傳染性皮下及造血組織壞死病毒陽(yáng)性；如果沒(méi)有244bp條帶，則為傳染性皮下及造血組織壞死病毒陰性；
當(dāng)陰性對(duì)照出現(xiàn)條帶時(shí)，表明操作過(guò)程中有試劑污染，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效；
當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照無(wú)條帶時(shí)，表明引物或者試劑盒中相關(guān)試劑降解，引物或試劑盒失效。
3.如權(quán)利要求2所述的一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟(1)提取病原核酸DNA的步驟為：取疑似對(duì)蝦白斑綜合征病毒、對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥、蝦肝腸胞蟲(chóng)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒發(fā)病對(duì)蝦內(nèi)臟組織0.05-0.15g，加入400μL裂解液研磨均勻，加入蛋白酶K，終濃度為100μg/ml，震蕩混勻后于55℃溫育1-2h；
在反應(yīng)液中加入等體積的苯酚∶氯仿∶異戊醇混勻，去除殘余蛋白，10000r/min離心10min后取上清，加入等體積氯仿∶異戊醇混勻，10000r/min離心10min，轉(zhuǎn)移上層水相，加入1/10體積3mol/L乙酸鈉，再加入2倍體積無(wú)水乙醇，混勻，12000r/min離心5min，沉淀用75％冷乙醇洗滌2次，室溫晾干后加入50μL TE，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
4.如權(quán)利要求3所述的一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于：所述裂解液組成為15mmol/L NaCl,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L EDTA,1％SDS。
5.如權(quán)利要求2所述的一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟(2)中PCR檢測(cè)的PCR反應(yīng)體系為：50μL反應(yīng)體系中包含有10倍濃度的含鎂離子的Taq DNA聚合酶緩沖液5μL，Taq DNA聚合酶1μL，各引物終濃度為0.4μM，提取好待檢測(cè)的DNA模板2μL。
6.如權(quán)利要求2所述的一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟(2)設(shè)定多重PCR反應(yīng)條件為：95℃4分鐘，1個(gè)循環(huán)；95℃1分鐘，58.5℃1分鐘，72℃1分鐘，35個(gè)循環(huán)；72℃10分鐘，1個(gè)循環(huán)；4℃保存。
7.一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測(cè)引物WSSV-F和WSSV-R、AHPND-F和AHPND-R、EHP-F和EHP-R、IHHNV-F和IHHNV-R、陽(yáng)性對(duì)照品、陰性對(duì)照品、DNA聚合酶、10×PCR緩沖液、Mg2+、三磷酸鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脫氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸和無(wú)菌超純水；WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的專用檢測(cè)引物WSSV-F和WSSV-R、AHPND-F和AHPND-R、EHP-F和EHP-R、IHHNV-F和IHHNV-R，引物序列如下：
對(duì)蝦白斑綜合征病毒W(wǎng)SSV
上游引物：WSSV-F：TTCTCACCTCATGCTTTCTTCC SEQ ID NO:1
下游引物：WSSV-R：TACTTGCTTAGAGATGGCTTCG SEQ ID NO:2
對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥AHPND
上游引物：AHPND-F：GGAAGTCGGTCGTAGTGTAG SEQ ID NO:3
下游引物：AHPND-R：ATATCGCATAACCAAGCCATTC SEQ ID NO:4
蝦肝腸胞蟲(chóng)EHP
上游引物：EHP-F：GAGAGTAGCGGAACGGATAG SEQ ID NO:5
下游引物：EHP-R：GCATCACGGACCTGTTATTG SEQ ID NO:6
傳染性皮下及造血組織壞死病毒IHHNV
上游引物：IHHNV-F：AAGAGCAGCGACAGTTCAG SEQ ID NO:7
下游引物：IHHNV-R：CGGCTTCCTTAGTTGATAGTTG SEQ ID NO:8；
陽(yáng)性對(duì)照品為SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的核酸序列混合作為模板；
陰性對(duì)照為：不含有對(duì)蝦白斑綜合征病毒、對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥(pirVP)、蝦肝腸胞蟲(chóng)、傳染性皮下及造血組織壞死病毒任一病原的任意DNA核酸序列。
8.一種同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦WSSV、AHPND、EHP、IHHNV的多重PCR引物，其特征在于：引物序列如下：
對(duì)蝦白斑綜合征病毒W(wǎng)SSV
上游引物：WSSV-F：TTCTCACCTCATGCTTTCTTCC SEQ ID NO:1
下游引物：WSSV-R：TACTTGCTTAGAGATGGCTTCG SEQ ID NO:2
對(duì)蝦急性肝胰腺壞死癥AHPND
上游引物：AHPND-F：GGAAGTCGGTCGTAGTGTAG SEQ ID NO:3
下游引物：AHPND-R：ATATCGCATAACCAAGCCATTC SEQ ID NO:4
蝦肝腸胞蟲(chóng)EHP
上游引物：EHP-F：GAGAGTAGCGGAACGGATAG SEQ ID NO:5
下游引物：EHP-R：GCATCACGGACCTGTTATTG SEQ ID NO:6
傳染性皮下及造血組織壞死病毒IHHNV
上游引物：IHHNV-F：AAGAGCAGCGACAGTTCAG SEQ ID NO:7
下游引物：IHHNV-R：CGGCTTCCTTAGTTGATAGTTG SEQ ID NO:8。