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鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法和引物對與流程

文檔序號:12346689閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,包括用于檢測交配型MAT1-1的特異引物對P7-2F/P7-2R或P8-5F/P8-5R,用于檢測交配型MAT1-2的特異引物對P10-1F/P10-2R或P10-2F/P10-3R,相應(yīng)的PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序;

所述的P7-2F/P7-2R特異引物對中,P7-2F的核苷酸序列為5’-CCGGTTTATCTTACTGGACTGGTTC-3’,P7-2R 的核苷酸序列為5’-GCTTTCCTCTTCTCTCGTTGCCATA -3’ ;

所述的P8-5F/P8-5R特異引物對中,P8-5F的核苷酸序列為5’-ATGTCACTCCGTCCGGTTTACCTTA -3’,P8-5R 的核苷酸序列為5’-TGGAATGTCTGTGATTGAGGCTGTG -3’ ;

所述的P10-1F/P10-2R特異引物對中,P10-1F的核苷酸序列為5’-GGCCAGAACAGATGCTCGAAGAAGC -3’,P10-2R 的核苷酸序列為5’-CTCCCAAAGCATGATCAAATCCCTC -3’ ;

所述的P10-2F/P10-3R特異引物對中,P10-2F的核苷酸序列為5’-AGACCGCTTTAGATAGATTGGCAGG -3’,P10-3R 的核苷酸序列為5’-GATCAAATCCCTCCATTAAGGCATC -3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,鑒定交配型MAT1-1和MAT1-2的PCR擴(kuò)增體系相同,均包括2×PCRmix 12.5μL,10μM/L的正反向引物各1μL, DNA模板10ng, ddH2O補(bǔ)足至25μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,特異引物對P7-2F/P7-2R鑒定菌株的MAT1-1交配型的PCR擴(kuò)增程序為:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性30 sec,62℃退火30 sec,72℃延伸40 sec,30個循環(huán);72℃延伸10 min;

特異引物對P8-5F/P8-5R鑒定菌株的MAT1-1交配型的PCR擴(kuò)增程序為:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性30 sec,65℃退火30 sec,72℃延伸90 sec,30個循環(huán);72℃延伸10 min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,特異引物對P7-2F/P7-2R檢測菌株的MAT1-1交配型時,可以獲得大小約為0.6kb的唯一條帶;特異引物對P8-5F/P8-5R檢測菌株MAT1-1交配型時,可以獲得大小約為1.7kb的唯一條帶。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,特異引物對P10-1F/P10-2R和P10-2F/P10-3R鑒定菌株的MAT1-2交配型的PCR擴(kuò)增程序相同,均為:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性30 sec,64℃退火30 sec,72℃延伸60 sec,30個循環(huán);72℃延伸10 min。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型方法,其特征在于,特異引物對P10-1F/P10-2R,檢測菌株MAT1-2交配型時,可以獲得大小約為1.1kb的唯一條帶;特異引物對P10-2F/P10-3R檢測菌株MAT1-2交配型時,可以獲得大小約為1.0kb的唯一條帶。

7.鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型的PCR引物對,其特征在于:包括用于檢測交配型MAT1-1的特異引物對為P7-2F/P7-2R或P8-5F/P8-5R,以及用于檢測交配型MAT1-2的特異引物對為P10-1F/P10-2R或P10-2F/P10-3R。

8.含有權(quán)利要求7 所述的PCR 引物對的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型的試劑。

9.含有權(quán)利要求7所述的PCR 引物對的鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型的試劑盒。

10.權(quán)利要求7所述的PCR 引物對、權(quán)利要求8所述的試劑或權(quán)利要求9所述的試劑盒在鑒定黑色羊肚菌類群中四個種的交配型中或黑色羊肚菌育種的應(yīng)用。

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