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雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法與流程

文檔序號:12346663閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,利用PCR擴(kuò)增后的CH4基因片段在黃顙魚和瓦氏黃顙魚之間具有種間序列差異,以限制性核酸內(nèi)切酶HindⅢ進(jìn)行酶切,酶切位點為A↓AGCTT,采用RFLP方法分析鑒別黃顙魚、瓦氏黃顙魚及其雜交子代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,具體包括以下步驟:

A、取待測魚的組織樣本,提取基因組DNA;

B、以提取到的基因組DNA為模板,在專用引物的引導(dǎo)下進(jìn)行PCR擴(kuò)增;

C、對擴(kuò)增出的目的基因片段采用限制性核酸內(nèi)切酶HindⅢ進(jìn)行酶切,酶切位點為A↓AGCTT;

D、瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR-RFLP產(chǎn)物,經(jīng)電泳檢測,在同一個泳道上只有一條帶,為瓦氏黃顙魚;在同一泳道上有兩條帶,為黃顙魚;在同一泳道上有三條帶,為雜交種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,在一個泳道上同時出現(xiàn)長度為300bp、140bp和160bp的三條DNA標(biāo)記條帶的,為瓦氏黃顙魚和黃顙魚的雜交種。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,所述B步驟中的專用引物為CH4基因片段專用引物,引物對為:

正向引物5’-TCCCCAAGGTTTACTTGCTCGCTCC-3’;

反向引物5’-CGATGGATCTGGATATGTGGCGCAC-3’。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,采用所述專用引物擴(kuò)增得到黃顙魚的CH4基因片段的核苷酸序列為SEQ ID NO:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,采用所述專用引物擴(kuò)增得到瓦氏黃顙魚的CH4基因片段的核苷酸序列為SEQ ID NO:2。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述雜交黃顙魚的CH4酶切鑒定方法,其特征在于,所述的C步驟中,使用PCR儀進(jìn)行酶切實驗,限制性酶切CH4基因片斷的步驟為:8μL CH4-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,加入1-1.5μL酶切反應(yīng)緩沖液,0.5-1μL限制性核酸內(nèi)切酶HindⅢ,37℃酶切2.5h,酶切位點為A↓AGCTT。

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