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一種鼠傷寒沙門氏菌的LAMP引物組及試劑盒與使用方法與流程

文檔序號:12346657閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種鼠傷寒沙門氏菌的LAMP引物組,其特征在于包括一對外引物、一對內(nèi)引物和一對環(huán)引物,其核苷酸序列分別如下所示:

SainvA-F3:GGTCGTTCTACATTGACAGAA,

SainvA-B3:CGACACGTTCTGAACCTT;

SainvA-FIP: CGGCATCGGCTTCAATCAAGGGTACTGTTAATTACCACGCT,

SainvA-BIP:GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGGTGACAATAGAGAAGACAACA;

SainvA-LF:TGGTACTGATCGATAATGCCAG,

SainvA-LB:TATTGGCGATAGCCTGGC。

2.一種鼠傷寒沙門氏菌的LAMP檢測試劑盒,其特征在于包括以下物質(zhì):(1)DNA聚合酶;(2)2×反應緩沖液;(3)熒光染料;(4)密封液;(5)標準陽性模板;(6)陰性對照;(7)權(quán)利要求1所述的LAMP引物組。

3.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述的引物組濃度比例如下:外引物、內(nèi)引物、環(huán)引物的摩爾比為:1-2:4-8:2-4。

4.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶。

5.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述2×反應緩沖液包含buffer緩沖液、甜菜堿和dNTPs,三者的體積比為10:8:7。

6.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述熒光染料為濃度是0.02mM的SYTO-9。

7.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述密封液為礦物油。

8.如權(quán)利要求2所述的LAMP檢測試劑盒,其特征在于,所述的標準陽性模板為鼠傷寒沙門氏菌標準菌株基因組DNA;所述的陰性對照為滅菌超純水。

9.使用權(quán)利要求2的LAMP檢測試劑盒檢測鼠傷寒沙門氏菌的方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)待檢樣品的提?。翰捎盟蠓◤拇龣z樣品中提取DNA;

(2)反應體系及條件:25μl反應體系含有:SainvA-F3 0.2μM,SainvA-B3 0.2μM,SainvA-FIP 0.8μM,SainvA-BIP 0.8μM,SainvA-LF 0.4μM,SainvA-LB 0.4μM,2×反應液12.5μl,DNA聚合酶8U,SYTO-9 0.5μl,待檢樣品2μl,用超純水補齊至25μl;密封液加入體積為20μl;同時設(shè)置陽性對照和陰性對照;

將配置好的PCR管混勻后離心,63℃反應30~45min,并在80℃持續(xù)2min;

(3)檢測結(jié)果判斷:將上述反應管置于熒光PCR儀中,根據(jù)擴增曲線來判斷檢測結(jié)果;擴增曲線呈“S”形,檢測結(jié)果為陽性,即檢測樣品中含有屬傷寒沙門氏菌;無“S”形擴增曲線出現(xiàn),檢測結(jié)果為陰性,即檢測樣品不含有鼠傷寒沙門氏菌。

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