本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種混合透明質(zhì)酸凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
：透明質(zhì)酸(Hyaluronicacid，簡稱HA)又稱玻尿酸，天然透明質(zhì)酸屬于一種生理性物質(zhì)，多用于填充支撐于細胞與膠原纖維的空間，具有優(yōu)異的鎖水和保水功能。隨著年齡的增長、外力擠壓牽引以及光照輻射等因素的影響，人體皮膚內(nèi)透明質(zhì)酸逐漸流失，進而引起真皮細胞、膠原蛋白和彈性纖維減少及其所在部位的三維空間坍塌，導(dǎo)致皮膚松弛，出現(xiàn)面部皺紋。通過注射透明質(zhì)酸可有效解決這一問題，但由于透明質(zhì)酸酶及自由基降解等原因，外源天然透明質(zhì)酸在體內(nèi)維持存在時間較短，限制了透明質(zhì)酸在軟組織填充除皺方面的應(yīng)用?，F(xiàn)有技術(shù)中，一般通過對透明質(zhì)酸進行交聯(lián)處理來延長透明質(zhì)酸在體內(nèi)維持的時間。經(jīng)過交聯(lián)處理后的透明質(zhì)酸，可以在保留軟組織填充除皺功效的同時，延長透明質(zhì)酸在體內(nèi)的保留時間。但是純透明質(zhì)酸交聯(lián)的填充劑在體內(nèi)只能起物理填充的作用，對機體膠原纖維生長的刺激作用非常有限，因此現(xiàn)有技術(shù)中還通常采用交聯(lián)處理后的透明質(zhì)酸與細胞生長因子結(jié)合的方式來達到促進機體自身膠原纖維生長的目的。雖然細胞生長因子具有促進組織細胞再生的功能，但細胞的再生速度與細胞受生長因子作用的時間長短有明顯關(guān)系，也就是說細胞只有在長時間受到細胞因子的刺激下才會不停地生長，然而直接注射細胞生長因子，在人體局部停留時間相當(dāng)短暫，有的只有1～2小時，達不到刺激細胞生長的目的，其效力難以持久。然而，現(xiàn)有的透明質(zhì)酸類填充劑或凝膠的制備技術(shù)均不能實現(xiàn)既保證透明質(zhì)酸的體內(nèi)存留時間，又能使細胞生長因子有效地促進機體自身膠原纖維生長的效果，使該類填充劑或凝膠的應(yīng)用受到了嚴(yán)重限制。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種混合透明質(zhì)酸凝膠及其制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中的透明質(zhì)酸類填充劑或凝膠不能既保證透明質(zhì)酸的體內(nèi)存留時間，又能使細胞生長因子有效地促進機體自身膠原纖維生長的問題。本發(fā)明還提供一種利用該混合透明質(zhì)酸凝膠制備的注射制劑，其可以用于皮膚美容，能減輕注射過程中的疼痛感，具有修復(fù)皮膚及促進皮膚中膠原纖維再生的作用。第一方面，本發(fā)明提供一種混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，所述方法包括：將透明質(zhì)酸鈉與交聯(lián)劑在pH值為9～13的條件下反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；將多聚核苷酸與交聯(lián)劑在pH值為2～5的條件下反應(yīng)，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；將所述交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與所述交聯(lián)核苷酸凝膠混合后再次與交聯(lián)劑進行反應(yīng)，調(diào)節(jié)pH值至中性，經(jīng)中性磷酸鹽緩沖液透析后，制備得到混合透明質(zhì)酸凝膠。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的步驟中，所述透明質(zhì)酸鈉與所述交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.005～0.05。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述多聚核苷酸從動物、植物或微生物中提取得到，所述多聚核苷酸的分子量為500～300萬道爾頓。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述多聚核苷酸的分子量為1000～30萬道爾頓。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述多聚核苷酸的分子量為1萬～20萬道爾頓。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述得到交聯(lián)核苷酸凝膠的步驟中，所述多聚核苷酸與所述交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.002～0.02。作為本發(fā)明第一方面的優(yōu)選方式，所述制備得到混合透明質(zhì)酸凝膠的步驟中，所述交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與所述交聯(lián)核苷酸凝膠的質(zhì)量比為1：10～50：1，所述交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與所述交聯(lián)核苷酸凝膠的總質(zhì)量與所述交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.0001～0.01。第二方面，本發(fā)明提供一種混合透明質(zhì)酸凝膠，由第一方面所述的制備方法制備得到，其中透明質(zhì)酸的含量為0.5％～15％，多聚核苷酸的含量為0.01％～5％。第三方面，本發(fā)明提供一種注射制劑，其含有第二方面所述的混合透明質(zhì)酸凝膠。作為本發(fā)明第三方面的優(yōu)選方式，還包括局部麻醉劑，所述混合透明質(zhì)酸凝膠與所述局部麻醉劑的質(zhì)量比為1：0.001～0.05。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果：(1)本發(fā)明提供的混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，將透明質(zhì)酸鈉和多聚核苷酸兩種物質(zhì)進行混合交聯(lián)，使不同的透明質(zhì)酸網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)穿插在一起，再進行二次交聯(lián)，可使凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)更加牢固穩(wěn)定，從而提高其在體內(nèi)的留存時間，并且還具有高致密性和滅菌穩(wěn)定性；(2)本發(fā)明提供的混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，通過將透明質(zhì)酸鈉與多聚核苷酸進行二次交聯(lián)的方式交聯(lián)，交聯(lián)劑用量少，交聯(lián)效率高；(3)本發(fā)明提供的混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，兩種不同交聯(lián)度的凝膠可同時進行交聯(lián)，可縮短工藝周期，能耗低，并且污染少，易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；(4)本發(fā)明制備的混合透明質(zhì)酸凝膠，可使多聚核苷酸在體內(nèi)存留時間延長，發(fā)揮作用具有增強的穩(wěn)定性和內(nèi)聚性，機械性能良好，具有優(yōu)異的流變學(xué)性能，塑形性好且易于注射，填充效果好；(5)本發(fā)明制備的混合透明質(zhì)酸凝膠，生物相容性優(yōu)異，可以促進機體自身成纖維細胞的生長，對皮膚的修復(fù)效果更好；(6)本發(fā)明提供的注射制劑，其含有該混合透明質(zhì)酸凝膠及局部麻醉劑，不僅能有效減輕注射過程中的疼痛感，還具有修復(fù)皮膚皺紋的功能，同時又可以促進皮膚中膠原纖維的再生，保持皮膚水分平衡，改善皮膚結(jié)構(gòu)和彈性。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發(fā)明實施例提供的混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下4周后取材時的照片；圖2為本發(fā)明實施例提供的混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下4周后取材時的HE切片照片；圖3為本發(fā)明實施例提供的混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下12周后取材時的HE切片照片；圖4為本發(fā)明實施例提供的注射制劑中鹽酸利多卡因麻醉劑在模擬體液介質(zhì)中的釋放率曲線圖；圖5為本發(fā)明實施例提供的注射制劑中鹽酸利多卡因麻醉劑在SD大鼠皮下的體內(nèi)釋放率曲線圖。具體實施方式為了進一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明優(yōu)選實施方案進行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進一步說明本發(fā)明的特征和優(yōu)點，而不是對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。本發(fā)明實施例提供一種混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，該方法包括：S1、將透明質(zhì)酸鈉與交聯(lián)劑在pH值為9～13的條件下反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；S2、將多聚核苷酸與交聯(lián)劑在pH值為2～5的條件下反應(yīng)，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；S3、將交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與交聯(lián)核苷酸凝膠混合后再次與交聯(lián)劑進行反應(yīng)，調(diào)節(jié)pH值至中性，經(jīng)中性磷酸鹽緩沖液透析后，制備得到混合透明質(zhì)酸凝膠。其中，步驟S1和步驟S2的實施沒有順序限定，可同時進行，這樣能縮短工藝周期，有效提高生產(chǎn)效率。在實際中，透明質(zhì)酸通常以透明質(zhì)酸鹽的形式存在，如鈉鹽、鉀鹽等，本發(fā)明中優(yōu)選為透明質(zhì)酸鈉。因此步驟S1中的原料，還可選用透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鈣或透明質(zhì)酸鎂等其他透明質(zhì)酸鹽。由于不同分子量的透明質(zhì)酸鈉在機體內(nèi)產(chǎn)生的生理功能有一定差異，而且透明質(zhì)酸鈉經(jīng)高溫滅菌后會有一定程度的分子量衰減。因此，本發(fā)明中透明質(zhì)酸鈉的分子量為10萬～300萬，其分子量優(yōu)選為100萬～200萬之間時，效果更佳。在上述實施例的基礎(chǔ)上，步驟S1中，透明質(zhì)酸鈉與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.005～0.05。透明質(zhì)酸鈉與交聯(lián)劑的質(zhì)量比高于1：0.05時，交聯(lián)形成的凝膠硬度大，體內(nèi)植入后異物反應(yīng)明顯，因此將兩者的質(zhì)量比控制在此范圍內(nèi)，就可以控制交聯(lián)程度，最大限度地保持透明質(zhì)酸的生物相容性。在上述實施例的基礎(chǔ)上，步驟S2中，多聚核苷酸從動物、植物或微生物中提取得到，其中多聚核苷酸的分子量為500～300萬道爾頓。多聚核苷酸一般選擇從動物、植物或微生物中提取得到，其來源廣泛、不受限制，最主要的是如此提取到的多聚核苷酸的生物相容性更高。其中，本發(fā)明中多聚核苷酸的分子量為500～300萬道爾頓，其分子量優(yōu)選為1000～30萬道爾頓，更優(yōu)選為1萬～20萬道爾頓。優(yōu)選分子量較大的多聚核苷酸，是因為其分子量越大則說明多聚核苷酸中的單體越多，鏈越長，相對來說在體內(nèi)降解時間會越長。但是，過大的分子量也會影響體內(nèi)降解，對機體起不到持續(xù)刺激的作用。在上述實施例的基礎(chǔ)上，步驟S2中，多聚核苷酸與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.002～0.02。將兩者的質(zhì)量比控制在此范圍內(nèi)，就可以控制交聯(lián)程度，較低的交聯(lián)程度可保證多聚核苷酸的生物相容性。在上述實施例的基礎(chǔ)上，步驟S3中，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與交聯(lián)核苷酸凝膠的質(zhì)量比為1：10～50：1，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與交聯(lián)核苷酸凝膠的總質(zhì)量與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1：0.0001～0.01。交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與交聯(lián)核苷酸凝膠進行輕度交聯(lián)，保證凝膠在體內(nèi)的抗酶解性能，同時加入較少量交聯(lián)劑，殘留易清除，產(chǎn)品更安全。另外，在步驟S3中，所用的中性磷酸鹽緩沖液為生理上可接受的等張緩沖液，可從下述兩種緩沖液中選擇一種使用：緩沖液一：含有氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，其濃度分別為6～12g/L、0.1～0.3g/L和0.01～0.1g/L；緩沖液二：含有氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀，其濃度分別為6～12g/L、0.1～0.3g/L和0.01～0.1g/L。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以根據(jù)實際情況選擇其他合適的中性磷酸鹽緩緩沖液進行透析，本發(fā)明對此不作限定。在步驟S1、S2及S3中，交聯(lián)反應(yīng)的溫度為15～60℃，優(yōu)選為30～50℃；交聯(lián)反應(yīng)的時間為1～20小時，優(yōu)選2～8小時。在步驟S1、S2及S3中，所用的交聯(lián)劑選自1，4-丁二醇二縮水甘油醚、乙二醇二縮水甘油醚、甘油三環(huán)氧丙醚、烯丙基縮水甘油醚、新戊二醇二縮水甘油醚或1，6-己二醇二縮水甘油醚、二乙烯基砜(DVS)、1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷、1-(2，3-環(huán)氧丙基)-2，3-環(huán)氧環(huán)己烷、碳二亞胺(EDC)、己二酰肼(ADH)、雙(磺基)辛二酸酯中的一種或幾種。其中，步驟S1、S2及S3中選用的交聯(lián)劑可以相同，也可以不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實際情況選擇合適的交聯(lián)劑進行反應(yīng)，本發(fā)明對此不作限定。本發(fā)明實施例提供的混合透明質(zhì)酸凝膠的制備方法，將透明質(zhì)酸鈉和多聚核苷酸兩種物質(zhì)進行混合交聯(lián)，可提高其在體內(nèi)的留存時間，并且還具有高致密性和滅菌穩(wěn)定性。本發(fā)明實施例提供一種混合透明質(zhì)酸凝膠，其由上述實施例中所述的制備方法制備得到，其中透明質(zhì)酸鈉的含量為0.5％～15％，多聚核苷酸的含量為0.01％～5％。制備得到的混合透明質(zhì)酸凝膠，采用濕熱方式進行滅菌，滅菌條件為在121℃下保持20分鐘，或在130℃下保持5分鐘，即可達到滅菌效果，滅菌穩(wěn)定性高。本發(fā)明實施例制備的混合透明質(zhì)酸凝膠，可使多聚核苷酸在體內(nèi)存留時間延長，發(fā)揮作用具有增強的穩(wěn)定性和內(nèi)聚性，且生物相容性優(yōu)異，可以促進機體自身成纖維細胞的生長，對皮膚的修復(fù)效果更好。本發(fā)明實施例還提供一種注射制劑，其含有上述實施例制備的混合透明質(zhì)酸凝膠，且該混合透明質(zhì)酸凝膠為其主要活性成分。在上述實施例的基礎(chǔ)上，該注射制劑中還包括局部麻醉劑。混合透明質(zhì)酸凝膠與局部麻醉劑的質(zhì)量比為1：0.001～0.05，優(yōu)選為1：0.002～0.01。在注射制劑中加入局部麻醉劑后，可有效減輕注射過程中的疼痛感，更有利于在臨床上應(yīng)用。此外，該局部麻醉劑選自氨布卡因、苯佐卡因、阿莫拉酮、阿米洛卡因、布比卡因、貝他卡因、甲氯卡因、丁胺卡因、丁托西卡因、卡鐵卡因、氯普魯卡因、可卡因、環(huán)美卡因、二丁卡因、二甲民喹、二甲卡因、地哌冬、雙環(huán)胺、去水芽子堿、氯乙烷、依替卡因、尤普羅辛、非那可明、海克卡因、羥丁卡因、對氨基苯甲酸民丁酯、甲磺酸亮氨卡因、左沙屈爾、利多卡因、甲哌卡因、美普卡因、美布卡因、氯甲烷、麥替卡因、納伊卡因、奧他卡因、奧索卡因、羥乙卡因、非那卡因、哌羅卡因、匹多卡因、聚乙二醇單十二醚、丙嗎卡因、丙胺卡因、普魯卡因、丙泮卡因、丙美卡因、丙哌卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、羅哌卡因、丁卡因、托利卡因、三甲卡因、佐拉敏及其鹽中的一種或多種。注射制劑中還包括一些未經(jīng)修飾的多糖或多元醇，如透明質(zhì)酸鈉、丙二醇、甘露醇等，該多糖或多元醇占混合透明質(zhì)酸凝膠總質(zhì)量的0.01％～1.0％。為了進一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的混合透明質(zhì)酸凝膠及其制備方法以及注射制劑進行具體描述。實施例一(1)將5.0g透明質(zhì)酸鈉溶解于50mLpH值為12的NaOH溶液中，攪拌均勻后加入0.03g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于40℃條件下水浴3小時，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓；(2)將5.0g多聚核苷酸溶解于pH值為3的HCl溶液中，攪拌均勻后加入0.025g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于30℃條件下水浴6小時，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；其中，多聚核苷酸的分子量為500道爾頓；(3)將交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠和交聯(lián)核苷酸凝膠各取50g混合，調(diào)節(jié)pH至3～5，加入0.05g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于30℃條件下水浴6小時，然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，用中性磷酸鹽緩沖液透析24小時后即得到混合透明質(zhì)酸凝膠；(4)對得到的混合透明質(zhì)酸凝膠進行滅菌，滅菌后進行無菌灌裝。經(jīng)檢測，實施例一中制備得到的混合透明質(zhì)酸凝膠中，透明質(zhì)酸的含量為2.45％，多聚核苷酸的含量為1.62％。實施例二(1)將5.0g透明質(zhì)酸鈉溶解于50mLpH值為13的NaOH溶液中，攪拌均勻后加入0.075g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于37℃條件下水浴12小時，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓；(2)將3.0g多聚核苷酸溶解于pH值為4的HCl溶液中，攪拌均勻后加入0.006g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于40℃條件下水浴3小時，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；其中，多聚核苷酸的分子量為10000道爾頓；(3)取交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠50g，再取交聯(lián)核苷酸凝膠20g進行混合，調(diào)節(jié)pH至3～5，加入0.035g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于30℃條件下水浴6小時，然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，用中性磷酸鹽緩沖液透析24小時后即得到混合透明質(zhì)酸凝膠；(4)對得到的混合透明質(zhì)酸凝膠進行滅菌，滅菌后進行無菌灌裝。經(jīng)檢測，實施例二中制備得到的混合透明質(zhì)酸凝膠中，透明質(zhì)酸的含量為2.51％，多聚核苷酸的含量為0.42％。實施例三(1)將5.0g透明質(zhì)酸鈉溶解于50mLpH值為13的NaOH溶液中，攪拌均勻后加入0.15g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于37℃條件下水浴12小時，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓；(2)將3.0g多聚核苷酸溶解于pH值為4的HCl溶液中，攪拌均勻后加入0.015g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于40℃條件下水浴3小時，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；其中，多聚核苷酸的分子量為10000道爾頓；(3)取交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠50g，再取交聯(lián)核苷酸凝膠20g進行混合，調(diào)節(jié)pH至3～5，加入0.056g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于30℃條件下水浴6小時，然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，用中性磷酸鹽緩沖液透析24小時后即得到混合透明質(zhì)酸凝膠；(4)對得到的混合透明質(zhì)酸凝膠進行滅菌，滅菌后進行無菌灌裝。經(jīng)檢測，實施例二中制備得到的混合透明質(zhì)酸凝膠中，透明質(zhì)酸的含量為2.76％，多聚核苷酸的含量為0.73％。實施例四(1)將5.0g透明質(zhì)酸鈉溶解于50mLpH值為13的NaOH溶液中，攪拌均勻后加入0.2g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于37℃條件下水浴12小時，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；其中，透明質(zhì)酸鈉的分子量為200萬道爾頓；(2)將3.0g多聚核苷酸溶解于pH值為4的HCl溶液中，攪拌均勻后加入0.03g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于40℃條件下水浴3小時，得到交聯(lián)核苷酸凝膠；其中，多聚核苷酸的分子量為10000道爾頓；(3)取交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠50g，再取交聯(lián)核苷酸凝膠20g進行混合，調(diào)節(jié)pH至3～5，加入0.07g1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯(lián)劑，混合均勻后于30℃條件下水浴6小時，然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，用中性磷酸鹽緩沖液透析24小時后即得到混合透明質(zhì)酸凝膠；(4)對得到的混合透明質(zhì)酸凝膠進行滅菌，滅菌后進行無菌灌裝。經(jīng)檢測，實施例二中制備得到的混合透明質(zhì)酸凝膠中，透明質(zhì)酸的含量為2.97％，多聚核苷酸的含量為1.20％。實施例五(1)在實施例一制備的混合透明質(zhì)酸凝膠中，添加鹽酸利多卡因麻醉劑，其中鹽酸利多卡因的質(zhì)量占混合透明質(zhì)酸凝膠總質(zhì)量的0.3％。兩者混合均勻后，調(diào)節(jié)pH值至中性，得到含有混合透明質(zhì)酸凝膠的注射制劑。(2)將該注射制劑灌裝于注射器中。對上述實施例中制備的混合透明質(zhì)酸凝膠及注射制劑的各項性能進行評價，具體如下：(1)混合透明質(zhì)酸凝膠對皮膚膠原纖維的再生作用通過進行大鼠皮下埋植試驗來評價混合透明質(zhì)酸凝膠對皮膚膠原纖維的再生作用。具體地，將實施例一中制備的混合透明質(zhì)酸凝膠進行SD大鼠皮下移植，分別于4周和12周后進行處死取材，HE切片觀察材料及材料周圍膠原蛋白生長情況。參照圖1、圖2和圖3所示，其中圖1為混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下4周后取材時的照片，圖2為混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下4周后取材時的HE切片照片，圖3為混合透明質(zhì)酸凝膠植入SD大鼠皮下12周后取材時的HE切片照片。從照片中可以看出，植入4周時材料周圍已經(jīng)開始有膠原纖維生長，到第12周時材料周圍新生了大量的膠原纖維，表明本發(fā)明制備的混合透明質(zhì)酸凝膠可促進機體膠原纖維的再生。由上述動物試驗結(jié)果可以看出，混合透明質(zhì)酸凝膠植入后能很好的起到填充作用，同時促進機體膠原纖維的再生。(2)不同濃度和交聯(lián)程度的混合透明質(zhì)酸凝膠注射時的推擠力通過對注射時推擠力的測定來評價不同濃度和交聯(lián)程度的混合透明質(zhì)酸凝膠的注射難易程度。具體地，選取實施例二、實施例三及實施例四中制備的混合透明質(zhì)酸凝膠，安裝30G注射針頭，以30mm/min的速度推動，記錄注射器柄的平均推擠力。理論上混合透明質(zhì)酸凝膠的交聯(lián)程度越高，其體內(nèi)抗酶解性能越好。但高的交聯(lián)程度，增加了混合透明質(zhì)酸凝膠的硬度，導(dǎo)致其從注射器中擠出的推擠力也相應(yīng)增加。具體參數(shù)及檢測結(jié)果如下表1所示：表1透明質(zhì)酸鈉/交聯(lián)劑多聚核苷酸/交聯(lián)劑凝膠混合物/交聯(lián)劑推擠力(N)1:0.0151:0.0021:0.0005151:0.031:0.0051:0.0008211:0.041:0.011:0.00134從表1的檢測結(jié)果可以看出，中等交聯(lián)程度，即交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸鈉、多聚核苷酸和交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠與交聯(lián)核苷酸凝膠混合物的比例分別為3.0％、0.5％和0.08％時，其推擠力適中，可滿足注射用填充劑的物理性能要求。(3)注射制劑中麻醉劑的釋放動力學(xué)通過體外釋放試驗和體內(nèi)釋放試驗來評價混合注射制劑中麻醉劑的釋放動力學(xué)。具體地，體外釋放試驗采用模擬體液為介質(zhì)，將10g實施例五制備的注射制劑放入透析袋中，加入30g水進行透析，在不同的時間段進行取樣，檢測透析液中鹽酸利多卡因麻醉劑的含量。參照圖4所示，圖4為模擬體液介質(zhì)中鹽酸利多卡因麻醉劑的釋放率曲線圖。從該圖中可以看出，鹽酸利多卡因可以從混合透明質(zhì)酸凝膠中自由完全的釋放出來。體內(nèi)釋放試驗中，將注射制劑采用皮下埋植的方式植入SD大鼠體內(nèi)，在不同時間段內(nèi)取出該注射制劑，檢測注射制劑中鹽酸利多卡因麻醉劑的殘留量。參照圖5所示，圖5為SD大鼠皮下鹽酸利多卡因麻醉劑的體內(nèi)釋放速率曲線圖。由該圖可以看出，鹽酸利多卡因在體內(nèi)3個小時基本釋放完全，一方面說明注射制劑中添加的局部麻醉劑可以自由釋放，另一方面可以說明該注射制劑可以起到緩解疼痛的效果。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3