本發(fā)明涉及新的N-苯基-2-氨基嘧啶類化合物和它們的可藥用鹽，涉及包含此類化合物和鹽的藥物組合物，以及涉及其用途。本發(fā)明的化合物和鹽抑制細胞表皮生長因子受體(EGFR)，特別是其突變體，該新型EGFR抑制劑能有效地抑制某些突變形式的表皮生長因子受體(例如L858R激活突變體、delE746_A750突變體、Exonl9缺失激活突變體和T790M耐藥突變體)，從而用于治療由這些突變或其它因素引起的多種疾病和病癥，例如，用于治療或改善異常細胞增殖性病癥，例如癌癥。
背景技術(shù)：
：癌癥是僅次于由心血管疾病導(dǎo)致死亡主要疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2012年全球新增癌癥患者1,400萬人，癌癥相關(guān)死亡820萬人。而中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院和國家癌癥中心的研究人員2016年的統(tǒng)計表明，在中國，2015年新增429.2萬癌癥患者，因癌癥而死亡的人數(shù)也達281.4萬。隨著生活方式的變化、人口老齡化以及環(huán)境改變等因素的增加，癌癥的發(fā)生率和死亡率都將加速上升。預(yù)計在今后二十年里，全球年癌癥新發(fā)生病例將增長70％，達到2,500萬左右。因此，癌癥的預(yù)防和治療面臨嚴峻的挑戰(zhàn)。據(jù)統(tǒng)計，全球范圍內(nèi)位居發(fā)病率前三位的癌癥在男性中分別是肺癌、前列腺癌和直腸癌；在女性中分別是乳腺癌、結(jié)腸癌和肺癌。男性和女性患者加在一起，肺癌成為了第一大癌癥，也是致死率最高的癌癥，其中，在臨床上，非小細胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)約占肺癌患病總數(shù)的85％。由于其早期缺乏明顯癥狀，大多患者就診時疾病已發(fā)展為中晚期，因而喪失了良好的治療時機。根據(jù)美國癌癥協(xié)會的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，每年大約新增20萬例NSCLC患者中，約65％以上確診時已屬于III或IV期。除部分III期NSCLC可經(jīng)誘導(dǎo)治療手術(shù)切除外，大部分病人只能采用化療。而化療藥物的毒副作用大，給患者帶來極大痛苦。因此，尋找高效的靶向治療各種癌癥的藥物成為廣大患者，特別是晚期患者最急迫的需求。表皮生長因子受體(EGFR)是erbB受體家族的跨膜蛋白酪氨酸激酶成員。它與表皮生長因子(EGF)的結(jié)合導(dǎo)致其發(fā)生同源性二聚，或與另一個家庭成員(如erbB2(HER2)、erbB3(HER3)或erbB4(HER4))發(fā)生異源性二聚。erbB受體的同源性二聚化和/或異源性二聚化導(dǎo)致細胞內(nèi)域關(guān)鍵酪氨酸殘基的磷酸化，進而調(diào)控參與細胞增殖和生存的許多細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路。機體對erbB家族信號傳導(dǎo)控制的異常就會促進細胞的擴散、入侵、轉(zhuǎn)移、血管生成和腫瘤細胞的生成。該類酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)機制已在許多人類癌癥(包括肺，頭部和頸部和胸部等)中得到了描述。因此，erbB受體家族是抗癌藥物的有效靶點。其中以EGFR為靶點的一些藥物已經(jīng)上市，包括吉非替尼(Gifitinib，IRESSATM)、厄洛替尼(Erlotinib，TARCEVATM)、拉帕替尼(TYKERBTM)、埃克替尼(Icotinib，凱美納)等。文獻《NewEnglandJournalofMedicine》(2008)第358卷，1160-74，和BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications(2004)第319卷，1-11中提供了對erbB受體信號傳導(dǎo)及其參與腫瘤發(fā)生的詳細論述。在2004年，有關(guān)文獻(Science(2004)第304卷，1497-500andNewEnglandJournalofMedicine(2004)第350卷，2129-39)報道了非小細胞肺癌(NSCLC)表皮生長因子受體激活突變對吉非替尼治療的反應(yīng)。最常見的表皮生長因子受體激活突變(L858R和delE746_A750)導(dǎo)致相對于其野生型(WT)受體而言，對酪氨酸激酶抑制劑(如吉非替尼和厄洛替尼)的親和力的增強，以及對ATP親和力的下降，從而使前述小分子酪氨酸激酶抑制劑(如吉非替尼和厄洛替尼)能有效地抑制肺癌細胞生長。但是在另一方面，長期使用小分子酪氨酸激酶抑制劑(如吉非替尼和厄洛替尼)導(dǎo)致部分病人產(chǎn)生了對吉非替尼和厄洛替尼治療的耐藥性。研究表明，例如看門殘基T790M的突變，據(jù)報道在50％的臨床耐藥性患者中檢測的到。該突變降低了吉非替尼或厄洛替尼與EGFR的結(jié)合力，不僅如此，還將與ATP親和力水平改變到了與野生型(WT)表皮生長因子受體的同一水平。鑒于這種突變在靶向EGFR的現(xiàn)有療法的抗藥性中的嚴重后果，即這類突變病人又重新回到了無藥物治療的年代，因此，發(fā)明一類可以抑制包含看門基因T\M突變的，新型的EGFR抑制劑藥物治療相關(guān)癌癥變得十分迫切。相對于激活突變體形式的EGFR(如L858REGFR突變體，或delE746_A750突變體或Exonl9缺失EGFR)和/或耐藥突變形式的EGFR(如T790MEGFR突變體)，新型抑制劑表現(xiàn)出對野生型EGFR的選擇性是必要的，因為對野生型EGFR的抑制將會帶來毒副作用。為了進一步高效克服T790M突變引起的相關(guān)的耐藥性，一類新型不可逆的ATP競爭性抑制劑(如PF00299804，CI-1033，HKI-272，AZD9291等)已經(jīng)進入臨床研究階段或者已經(jīng)被批準上市。不可逆抑制劑含有一個邁克爾加成的受體，能夠與一個處于結(jié)合部位的保守氨基酸(Cys797)的巰基(-SH)產(chǎn)生共價鍵偶聯(lián)。這種抑制劑和EGFR之間通過不可逆的共價鍵結(jié)合，通常比可逆性抑制劑和EGFR之間的結(jié)合能力強(JournalofMedicinalChemistry，2009，52，1231-1236)。此類抑制劑展現(xiàn)出活性高、選擇性強的特征。盡管如此，上述所列的不可逆抑制劑的臨床實驗結(jié)果表明這些抑制劑仍然有一定的局限性，例如由于脫靶效應(yīng)或選擇性依然不佳導(dǎo)致的副作用，以及藥代性能欠缺、體內(nèi)代謝產(chǎn)物藥理毒理表征不明等。所以，開發(fā)出新型的、高效和安全的不可逆EGFR抑制劑具有重大的臨床意義和應(yīng)用前景。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種新型高活性EGFR抑制劑N-苯基-2-氨基嘧啶類化合物和它們的可藥用鹽，以及包含此類化合物和鹽的藥物組合物。此類新型的EGFR抑制劑可以通過阻斷激活突變型EGFR的磷酸化過程，抑制腫瘤細胞的生長、增殖和分化，從而可以開發(fā)成為新型的抗腫瘤藥物。本發(fā)明包括如下式(I)的化合物和它們的可藥用鹽、包含這種化合物及其鹽的藥物組合物以及使用這些化合物及其鹽以及藥物組合物作為EGFR抑制劑的方法和用途。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及式(I)所示的化合物或其可藥用鹽、溶劑化物、水合物、前藥或衍生物，和包含其的藥物組合物：其中R1、R2、R3和R4分別為所指定的各種獨立的有機分子基團或有機分子片段，且可以獨立地進行任意組合從而形成一系列結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物；其中：R1選自下述5元并6元氮雜稠環(huán)：R2選自：R3選自-N(R6)-C1-6烷基-NR6R6；R6獨立地為H、C1-6烷基，或兩個R6基團之間或任何一個R6基團與它們所連接的碳原子形成3-12元單環(huán)體系，優(yōu)選形成4-6元單環(huán)體系，所述單環(huán)體系中還可任選的包含O、N、S等雜原子；在一個優(yōu)選的實施方案中，R3選自：R4選自任選取代的烷氧基，優(yōu)選為C1～C8烷氧基或C1～C4烷氧基，更優(yōu)選為-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3和環(huán)丙烷氧基(-Oc-Pr)；R5選自烷基、烷氧基和鹵素，其中所述烷基優(yōu)選為C1～C8烷基，更優(yōu)選為C1～C4烷基，最優(yōu)選為甲基或乙基；所述烷氧基優(yōu)選為C1～C8烷氧基，更優(yōu)選為C1～C4烷氧基，最優(yōu)選為甲氧基或乙氧基；所述鹵素優(yōu)選為-Cl、-F或-Br。在另一些實施方案中，通過向有患病風險或已患病的對象施用式(I)化合物或包含其的藥物組合物，提供用于預(yù)防與EGFR活性相關(guān)疾病或病癥、減少其進展的方法、治療或者使之消退的方法。在某些實施方案中，所述疾病或病癥選自異常細胞增殖性病癥，例如癌癥。本發(fā)明所公開的化合物能通過抑制在癌細胞中起關(guān)鍵作用的激酶-EGFR酪氨酸激酶，來抑制腫瘤細胞的增長，從而達到治療癌癥的作用。在另一個實施方案中，式(I)化合物或其藥物組合物用于治療非小細胞肺癌。在另一個實施方案中，提供式(I)的任一化合物或包含其的藥物組合物在制備用于任何上述用途的藥物中的用途。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供用于任何上述用途的式(I)的任一化合物或包含其的藥物組合物。術(shù)語定義本文中使用的術(shù)語“烷基”包含1～20、2～20、3～20、4～20、5～20、6～20、7～20或8～20個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，本發(fā)明所用烷基包含1～10、2～10、3～10、4～10、5～10、6～10、7～10或8～10個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，本發(fā)明所用烷基包含1～8、2～8、3～8、4～8、5～8、6～20或7～8個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，本發(fā)明所用烷基包含1～6、2～6、3～6、4～6或5～6個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，本發(fā)明所用烷基包含1～4、2～4或3～4個碳原子。示例性的脂肪族基團因此包括(但不限于)例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，其還可帶有一個或更多個取代基。本文中使用的術(shù)語“烷氧基”是指通過氧原子連接至母體分子部分的飽和(即，O-烷基)基團。在某些實施方案中，所述烷基包含1～20、2～20、3～20、4～20、5～20、6～20、7～20或8～20個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，所述烷基基團包含1～10、2～10、3～10、4～10、5～10、6～10、7～10或8～10個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，本發(fā)明所用烷基、烯基和炔基包含1～8、2～8、3～8、4～8、5～8、6～20或7～8個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，所述烷基包含1～6、2～6、3～6、4～6或5～6個脂肪族碳原子。在其他一些實施方案中，所述烷基包含1～4、2～4或3～4個脂肪族碳原子。烷氧基的示例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。本文中使用的術(shù)語“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的原子。本文中使用的術(shù)語“可藥用鹽”是指這樣的鹽，在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，其適用于接觸人和較低等動物的組織，而沒有不適當?shù)亩拘?、刺激性、過敏反應(yīng)等，稱得上合理的受益/風險比。可以在本發(fā)明化合物的最終分離和純化期間原位制備所述鹽，或單獨通過將游離堿或游離酸與合適的試劑反應(yīng)制備所述鹽，如下概述。例如，游離堿功能可以與合適的酸反應(yīng)。此外，當本發(fā)明的化合物帶有酸性部分，其合適的可藥用鹽可包括金屬鹽，例如堿金屬鹽(如鈉鹽或鉀鹽)；和堿土金屬鹽(如鈣鹽或鎂鹽)?？伤幱玫臒o毒酸加成鹽的示例是氫基與無機酸(例如，鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有機酸(例如，醋酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的鹽，或通過使用現(xiàn)有技術(shù)中的其他方法如離子交換形成的鹽。其他可藥用鹽包括己二酸鹽、海藻酸鈉、抗壞血酸鹽、天門冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、hernisulfate、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、磷酸鹽、苦味鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。代表性堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等的鹽。其他可藥用鹽包括(適當時)無毒銨鹽、季銨鹽和用反離子形成的胺陽離子，例如，鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低級烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。此外，本文中使用的術(shù)語“前藥”是指本發(fā)明化合物的那些前藥，在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，其適用于接觸人和更低等動物的組織，而沒有不適當?shù)亩拘?、刺激性、過敏反應(yīng)等，稱得上合理的受益/風險比并且對其預(yù)期用途有效。術(shù)語“前藥”是指在體內(nèi)迅速經(jīng)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生上述式的母體化合物的化合物，例如通過在體內(nèi)代謝，或本發(fā)明化合物的N-去甲基化。發(fā)明詳述本文中體現(xiàn)的選擇性EGFR拮抗劑可用于多種病癥和疾病，例如治療各種與EGFR活性相關(guān)的病癥，例如癌癥(如非小細胞肺癌)。1)本發(fā)明化合物一般說明本發(fā)明包括如下式(I)的化合物、使用所述化合物作為EGFR拮抗劑治療相關(guān)疾病的方法、以及包含所述化合物及其鹽的藥物組合物。在特定的實施方案中，本發(fā)明的化合物包括如下定義的通式(I)的化合物、或其可藥用鹽、溶劑化物、水合物、前藥或衍生物：其中：R1選自如下所示的5元并6元氮雜稠環(huán)：R2選自：R3選自-N(R6)-C1-6烷基-NR6R6；R6獨立地為H、C1-6烷基，或兩個R6基團之間或任何一個R6基團與它們所連接的碳原子形成3-12元單環(huán)體系，優(yōu)選形成4-6元單環(huán)體系，所述單環(huán)體系中還可任選的包含O、N、S等雜原子；在一個優(yōu)選的實施方案中，R3選自：R4選自任選取代的烷氧基，優(yōu)選為C1～C8烷氧基或C1～C4烷氧基，更優(yōu)選為-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3和環(huán)丙烷氧基(-Oc-Pr)；R5選自烷基、烷氧基和鹵素，所述烷基優(yōu)選為C1～C8烷基，更優(yōu)選為C1～C4烷基，最優(yōu)選為甲基或乙基；所述烷氧基優(yōu)選為C1～C8烷氧基，更優(yōu)選為C1～C4烷氧基，最優(yōu)選為甲氧基或乙氧基；所述鹵素優(yōu)選為-Cl、-F或-Br。在某些實施方案中，R1是在某些實施方案中，R1是在某些實施方案中，R1是在某些實施方案中，R1是在某些實施方案中，R2是在某些實施方案中，R2是在某些實施方案中，R2是在某些實施方案中，R2是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R3是在某些實施方案中，R4是-OCH3。在某些實施方案中，R5是-CH3。在某些實施方案中，R5是-OCH3。在某些實施方案中，R5是-Cl。在另一些實施方案中，本發(fā)明式(I)化合物的非限制性示例包括下述化合物：一些前述化合物可以包括一個或更多個非對稱中心，化合物含有雙鍵或環(huán)狀鏈的能以順式或反式的形式存在，化合物帶有比如羰基或肟基或芳香基，互變異構(gòu)能夠發(fā)生，因此一個化合物可能以多種異構(gòu)的形態(tài)存在。因此可以以各種異構(gòu)體(例如，立體異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體)形式存在。因此，本發(fā)明的化合物及其藥物組合物可以是個別對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體的形式，或者可以是立體異構(gòu)體混合物的形式。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物是對映體純的(enantiopure)化合物。在另一些實施方案中，提供立體異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的混合物。本發(fā)明也保護在本專利中化合物被同位素標記的分子。通常用作同位素標記的同位素是：氫同位素，2H和3H；碳同位素：11C，13C和14C；氯同位素：35Cl和37Cl；氟同位素：18F；碘同位素：123I和125I；氮同位素：13N和15N；氧同位素：15O，17O和18O和硫同位素35S。這些同位素標記化合物可以用來研究藥用分子在組織中的分布情況。尤其是氘3H和碳13C，由于它們?nèi)菀讟擞浨曳奖銠z測，運用更為廣泛。某些重同位素，比如重氫(2H)，的取代能增強代謝的穩(wěn)定性，延長半衰期從而達到減少劑量的目而提供療效優(yōu)勢的。同位素標記的化合物一般從已被標記的起始物開始，用已知的合成技術(shù)象合成非同位素標記的化合物一樣來完成其合成。2)藥物組合物在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含式(I)化合物或其可藥用鹽作為活性成分的藥物組合物。因此，本發(fā)明的另一方面，提供藥物組合物，其包括任意一種或更多種本文中描述的化合物(或其可藥用鹽、溶劑化物、水合物、前藥或衍生物)以及任選地包括可藥用載體。在某些實施方案中，這些組合物任選地還包括一種或更多種其他治療藥物。作為替代地，本發(fā)明的化合物可聯(lián)合一種或更多種其他治療藥物向有此需求的患者施用。還要理解的是，本發(fā)明的某些化合物可以以游離的形式，或適當時，以其可藥用鹽的形式存在以用于治療。如上所述，本發(fā)明的藥物組合物還包括可藥用載體，在本文中，所述載體包括任何和所有溶劑、稀釋劑、或其他液體載體、分散或懸浮輔助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等，其調(diào)整為所需的特定劑量形式。Remington’sPharmaceuticalSciences，SixteenthEdition，E.W.Martin(MackPublishingCo.，Easton，Pa.，1980)公開了各種用于配制藥物組合物的載體，以及用于其制備的已知技術(shù)。除非任何常規(guī)載體介質(zhì)與本發(fā)明的化合物不相容，例如通過產(chǎn)生任何不期望的生物作用或者和藥物組合物的任何其他成分以有害的方式相互作用，否則其用途預(yù)計屬于本發(fā)明范圍內(nèi)?？梢宰鳛榭伤幱幂d體的材料的一些示例包括但不限于糖例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；粉狀西黃蓍膠；麥芽糖；明膠；滑石粉；賦形劑如可可脂和栓劑蠟；油例如花生油、棉籽油；紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二元醇類例如丙二醇；酯例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖試劑例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格溶液(Ringer’ssolution)；乙醇和磷酸鹽緩沖溶液，以及其他無毒可相容的潤滑劑例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及根據(jù)配制者的判斷，組合物中還可存在著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。本發(fā)明中所描述的給藥途徑。包括但不限于：口服、舌下含復(fù)、皮下注射、靜脈注射、滴鼻、表面涂抹、皮滲透、腹腔內(nèi)給藥、肌肉注射、肺部給藥等。藥物劑型包括固體、半固體、液體和氣霧劑的形式，比如，顆粒片狀、膠囊、粉末、液體、懸浮液、栓劑和懸浮液劑等。藥物也可以緩釋的方式例如通過長效注射劑、滲透泵、藥丸、貼劑等方式給藥。用于口服施用的液體劑型包括但不限于可藥用乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物，液體劑型還可包含現(xiàn)有技術(shù)中常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增溶劑和乳化劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽、落花生(花生)、玉米、胚芽、橄欖、蓖麻和芝麻的油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀釋劑，口服組合物也可包括輔藥(adjuvant)，例如潤濕劑、乳化和混懸劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑?？勺⑸渲苿?，例如，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)可以使用適當?shù)姆稚⒒驖櫇駝┖突鞈覄┡渲茻o菌可注射水性或油性混懸液。所述無菌可注射制劑也可是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、混懸液或乳液，例如，1，3-丁二醇中的溶液?？山邮艿妮d體和溶劑之中可用的是水、林格溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌、固定油常規(guī)用作溶劑或混懸基質(zhì)。出于此目的，可以使用任何溫和的固定油，包括合成的單甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸例如油酸用于注射物的制備?？勺⑸渲苿┛梢允菬o菌的，例如，通過穿過細菌-阻留過濾器進行過濾，或通過使用前以無菌固體組合物的形式加入殺菌劑，其可以溶于或分散于無菌水或其他無菌可注射介質(zhì)中。用于直腸或陰道施用的組合物優(yōu)選栓劑，可以通過將本發(fā)明化合物和合適的非刺激性賦形劑或載體(例如，可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟)混合來制備，其在環(huán)境溫度下是固體，在體溫下是液體，因此在直腸或陰道腔中融化并釋放活性化合物。用于口服施用的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這樣的固體劑型中，活性化合物和至少一種惰性可藥用賦形劑或載體相混合，例如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣和/或a)填料或填充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽/酯、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯樹膠，c)保濕劑例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶液遲延劑(solutionretardingagent)，例如石蠟，f)吸收加速劑，例如季銨鹽化合物，g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯，h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土，以及i)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂，固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，及其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，所述劑型還可包括緩沖劑。相似類型的固體組合物也可作為填充劑用于軟和硬填充明膠膠囊，其使用這樣的賦形劑，例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等?？蓪⑵瑒?、糖衣劑(dragee)、膠囊劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型制備成具有包衣和殼層(shell)(例如腸溶衣以及藥物制劑領(lǐng)域公知的其他包衣)。其可任選包含遮光劑(opacifyingagent)，還可以是只或優(yōu)選在腸道中的某些部分釋放，任選地以延遲的方式釋放所述活性成分的組合物?？捎玫陌窠M合物的示例包括高分子物質(zhì)和蠟。相似類型的固體組合物也可作為填充劑用于軟和硬填充明膠膠囊，其使用這樣的賦形劑，例如乳糖和高分子量聚乙二醇等。活性化合物也可以是具有同一種或更多種上述賦形劑的微囊包裹的形式?？蓪⑵瑒?、糖衣劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型制備成具有包衣和殼層(例如，腸溶衣、控釋包衣以及制藥制劑領(lǐng)域公知的其他包衣)。在這樣的固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑(例如，蔗糖、乳糖和淀粉)混合。這種劑型還可包括例如(在常規(guī)的做法中)除惰性稀釋劑之外的其他物質(zhì)，例如片劑潤滑劑和其他壓片輔助劑(例如，硬脂酸鎂和微晶纖維素)。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，所述劑型還可包括緩沖劑。他們可任選包含遮光劑，還可以是只或優(yōu)選在腸道中的某些部分釋放，任選地以延遲的方式釋放所述活性成分的組合物?？捎玫陌窠M合物的示例包括高分子物質(zhì)和蠟。當被給藥時，化合物或者單獨或者與一些常用的藥物輔助劑混合一起。這些常用輔料成分，例如可以是甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。如果需要，藥物也可含有少量的非毒性輔助劑，如濕潤劑、乳化劑、增溶劑、酸堿緩沖劑等。一般來說，取決于給藥的途徑，藥物含有0.005％到95％(重量百分比)活性化合物。在某些情況下，為0.5％到50％。當藥以藥丸或藥片的形式服用時，該藥的組成含有活性成分，稀釋劑比如乳糖或蔗糖磷酸鈣等，潤滑劑比如硬脂酸鎂，黏糊劑比如淀粉、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、纖維素、纖維素衍生物等。其它的固體制劑形式還包括包在明膠膠囊里的粉末，溶液或懸浮液。液體藥組成為通過溶解或分散活性分子和至少一種藥用輔助劑在諸如水、生理鹽水、水溶性糊精、甘油、二醇、乙醇等的載體中。注射藥劑在注射前可用常規(guī)方法制成溶液、乳化液或懸浮液。液體藥物組成的化合物的含量取決于具體情況，化合物的活性和給藥對象的需求。但是活性成分的重量百分比一般為0.01％到10％，某些情況下為0.2％到2％。在可接受的的給藥途徑下，化合物的給藥量必須達到治療效。而實際的給藥量則與很多因素有關(guān)。諸如疾病的程度、年齡、相對健康狀況、藥物分子的活性、給藥的途徑和劑型等。藥可給一天一次或多次。本專利中化合物的每天有效給藥量在0.01到200毫克每公斤身體重量。因此，對于一個70公斤的人來說，每天的給藥量在7-3500毫克之間。還要理解的是，可以配制本發(fā)明的化合物和藥物組合物，并用于聯(lián)合治療，即化合物和藥物組合物可以與同一種或更多種其他期望的療法或醫(yī)療程序同時、在先或隨后配制或施用。以組合方案采用的具體治療組合(療法或程序)將考慮到所需的療法和/或程序的相容性，以及要達到的理想治療作用。治療性藥盒在另一些實施方案中，本發(fā)明涉及為方便和有效進行根據(jù)本發(fā)明的方法的藥盒。一般來說，藥包(pharmaceuticalpack)或藥盒包括一個或更多個裝有一種或更多種本發(fā)明藥物組合物成分的容器。所述藥盒尤其適用于固體口服形式(例如，片劑或膠囊劑)。所述藥盒優(yōu)選包括許多單位劑量，以及還可包括按照其預(yù)期用途的順序列出劑量的卡片。如果需要，可以提供記憶幫助，例如，以數(shù)字、字母或其他標記或日歷插頁的形式指定治療計劃中施用劑量的日子。等同方案如下代表性示例意圖幫助說明本發(fā)明，不意圖也不應(yīng)當解釋為限制本發(fā)明的范圍。事實上，從本文獻的全部內(nèi)容(包括以下的實施例和本文中引用的科學(xué)和專利文件的參考文獻)出發(fā)，對于本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來說，除了本文中所示和描述的之外，本發(fā)明的多種修改及其很多其他實施方案會變得更明顯。還應(yīng)當理解的是，那些引用的參考文獻的內(nèi)容通過引用并入本文，以幫助說明現(xiàn)有技術(shù)的狀態(tài)。如下實施例包含重要附加信息，可以以其各種實施方案及其等價形式適用于實施本發(fā)明的范例和指導(dǎo)。具體實施方式還可進一步通過實施例來理解本發(fā)明的化合物及其制備，其中所述實施例說明了一些制備或使用所述化合物的方法。然而，要理解的是，這些實施例不限制本發(fā)明?，F(xiàn)在已知的或進一步開發(fā)的本發(fā)明的變化被認為落入本文中描述的和以下要求保護的本發(fā)明范圍之內(nèi)。合成方法一般描述：實施者具有完備的小分子化學(xué)文獻可以利用，結(jié)合本文中包含的信息，用于指導(dǎo)合成策略、保護基團和其他用于合成本發(fā)明化合物的材料和方法。本文中引用的各種文獻提供如下有用的背景信息：制備與本文中描述的本發(fā)明化合物相似的化合物或相關(guān)的中間體，以及關(guān)于這種可能的目標化合物的制劑、用途和施用信息。此外，將實施者引向本文件提供的關(guān)于各種示例性化合物及其中間體的具體指導(dǎo)和實施例。還可進一步通過實施例來理解本發(fā)明的化合物及其制備，其中所述實施例說明了一些制備或使用所述化合物的過程。然而，要理解的是，這些實施例不限制本發(fā)明?，F(xiàn)在已知的或進一步開發(fā)的本發(fā)明的變化被認為落入本文中描述的和以下要求保護的本發(fā)明范圍之內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，任何可獲得的技術(shù)可用于制造或制備本發(fā)明化合物或包括所述化合物的組合物。例如，可使用各種溶液相合成方法，例如如下詳述的那些。作為替代或補充，本發(fā)明化合物可使用任何本領(lǐng)域公知的多種組合技術(shù)、平行合成和/或固相合成方法。如下所述，要理解的是，根據(jù)本文中描述的方法可以合成多種本發(fā)明化合物。用于制備這些化合物的起始材料和試劑可從商業(yè)供應(yīng)商獲得，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種方法制備。這些方案僅說明可以合成本發(fā)明化合物的一些方法，根據(jù)本公開內(nèi)容，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以進行并將提出這些方案的各種修改?？墒褂贸Ｒ?guī)技術(shù)分離和純化本發(fā)明起始材料、中間體和化合物，所述技術(shù)包括過濾、蒸餾、結(jié)晶、色譜等?？梢允褂贸Ｒ?guī)方法(包括物理常數(shù)和波譜數(shù)據(jù))對其進行表征。一般反應(yīng)過程：本發(fā)明化合物是利用便利的起始原料和通用的合成步驟來完成合成的。我們給出了典型的或傾向性的反應(yīng)條件，諸如反應(yīng)溫度，時間，溶劑，壓力，反應(yīng)物的摩爾比。但是除非特殊說明，其他反應(yīng)條件也能采納。優(yōu)化條件可能隨著具體的反應(yīng)物或溶劑的使用而改變，但在通常情況下，反應(yīng)優(yōu)化步驟和條件都能得到確定。另外，本發(fā)明中可能用到了一些保護基團來保護某些官能團避免不必要的反應(yīng)。適宜于各種官能團的保護基以及它們的保護或脫保護條件已為合成工藝廣泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有機合成中的保護基團》(第3版，Wiley，NewYork，1999和書中的引用文獻)詳細描述了大量的保護基團的保護或脫保護。所有反應(yīng)中用到的起始反應(yīng)物一般是已知的化合物或能依照文獻報道的方法可制備的。例如，從供應(yīng)商購買或者依據(jù)文獻步驟制備得到。本專利中所描述的化學(xué)反應(yīng)一般在常壓下進行。反應(yīng)溫度在攝氏-78度至攝氏200度之間。除非在反應(yīng)實例中做出說明，反應(yīng)時間和條件為，例如，一個大氣壓下，攝氏-78℃至攝氏110℃之間，大約1到24小時內(nèi)完成。如果反應(yīng)過夜，則反應(yīng)時間一般為16小時。溶劑，有機溶劑或惰性溶劑各自表述為使用的該溶劑在所描述的反應(yīng)條件下不參與反應(yīng)，包括，諸如苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。在實例中，化合物和中間體的分離和純化依據(jù)具體的需求采取適當?shù)姆椒ê筒襟E，例如過濾、萃取、結(jié)晶、柱層析、制備薄層板色譜、制備高效液相色譜或上述方法的混合使用。其具體使用方法可參閱本專利描述的實例。當然，其他類似的分離和純化手段也是可以采用的。實施例以下的實例在于更全面地描述上述發(fā)明的制作和使用方式。顯然這些實例絕不僅僅限于本發(fā)明的范圍，而只是起展示目的。在以下合成路線及后續(xù)實例中所給出的縮寫定義如下：μL＝微升；μM＝微摩爾；NMR＝核磁共振；Boc＝叔丁氧基羰基br＝寬峰d＝雙峰δ＝化學(xué)位移℃＝攝氏dd＝雙雙峰DMF＝氮，氮二甲基甲酰胺DMSO＝二甲亞砜DCM＝二氯甲烷HPLC＝高效液相Hz＝赫茲IC50＝抑制50％活性的濃度GI50＝抑制50％增長的濃度J＝偶合常數(shù)(Hz)m＝多重峰M+H+＝母體化合物質(zhì)量+一質(zhì)子mg＝毫克mL＝毫升mmol＝毫摩爾MS＝質(zhì)譜nM＝納摩爾ppm＝每百萬分s＝單峰t＝三重峰TFA＝三氟乙酸(一)合成實施例本發(fā)明化合物的合成可以按照如下反應(yīng)方案及其描述中所示制備本發(fā)明的式(I)化合物。方案1采用上述方案1中所示的方法制備本發(fā)明的化合物1、化合物2、化合物3和化合物4(其結(jié)構(gòu)式如下所示)。化合物1的制備第一步：2-(1-氨基乙基)吡啶的制備將2-乙?；拎?5g，41.2mmol)和鹽酸羥胺(3.44g，49.5mmol)在室溫下溶于甲醇(100mL)中，攪拌下加入碳酸鉀(17g，124mmol)。反應(yīng)混合物室溫攪拌4小時后，濾除固體，向濾液中依次加入鋅粉(13.5g，206mmol)和氯化銨(11g，206mmol)。反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜。濾除固體，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入氫氧化鈉水溶液，調(diào)pH～13，水相用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到2-(1-氨基乙基)吡啶(4.5g，收率90％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)123.1。第二步：N-(1-(吡啶-2-基)乙基)甲酰胺的制備在0℃將2-(1-氨基乙基)吡啶(5g，41mmol)分批加入甲酸(50mL)中。加畢后，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用二氯甲烷/異丙醇(85∶15)萃取(50mL×3)，合并有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-(1-(吡啶-2-基)乙基)甲酰胺(6g，收率97％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)151.0。第三步：1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在室溫下，將N-(1-(吡啶-2-基)乙基)甲酰胺(5.67g，37.8mmol)溶于無水甲苯(40mL)中，在氮氣保護下滴下三氯氧磷(10.4mL)。滴畢后，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，干燥旋蒸得到1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(4.36g，收率87％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)133.0。第四步：1-甲基-3-溴咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(4.26g，32mmol)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，分批加入N-溴代丁二酰亞胺(5.74g，32mmol)。加畢后，反應(yīng)液在0℃下攪拌10分鐘。水(100mL)加入到反應(yīng)體系中，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚＝0～30％)后得到1-甲基-3-溴咪唑并[1，5-a]吡啶(4.15g，收率61％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)211.1，213.1。第五步：1-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將1-甲基-3-溴咪唑并[1，5-a]吡啶(3g，14.2mmol)溶于無水四氫呋喃(30mL)中，在氮氣保護下，滴加甲基溴化鎂(7.1mL，21.3mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在室溫下攪拌2個小時。依次向反應(yīng)體系中加入2，4-二氯嘧啶(3.18g，21.3mmol)的四氫呋喃溶液和四三苯基膦鈀(822mg，0.7mmol)。反應(yīng)混合液加熱到70℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷(50mL×3)和水萃取分液，合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品，然后用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯/(石油醚：二氯甲烷＝3∶1)＝0～50％)得到1-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，5-a]吡啶(1.46g，收率42％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)245.0。第六步：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備室溫下，將1-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，5-a]吡啶(1g，4.1mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(760mg，4.1mmol)和對甲苯磺酸(777mg，4.9mmol)加入到2-戊醇(25mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)1.5小時。反應(yīng)冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾得到析出的固體。水相用二氯甲烷萃取(40mL×2).合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。合并所有固體后用(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)打漿再過濾得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(1.15g，收率71％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.1。第七步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(500mg，1.27mmol)，N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺(136mg，1.33mmol)和二異丙基乙基胺(0.55mL，3.17mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(10mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝0～10％)得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(400mg，收率66％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第八步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(323mg，0.68mmol)溶于乙醇(10mL)和水(2.5mL)中。依次加入鐵粉(190mg，3.4mmol)和氯化銨(363mg，6.8mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃過夜。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并的有機相依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(278mg，收率92％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.2。第九步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備(化合物1)在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(50mg，0.11mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯溶液)(214mg，0.34mmol)和三乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水二氯甲烷中。將混合物加熱至40℃反應(yīng)1小時后直到LC-MS檢測到無反應(yīng)物殘留，取飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，分液后水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物1)(15mg，收率27.3％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.2。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.94(s，1H)，9.81(d，J＝7.3Hz，1H)，9.37(s，1H)，8.46(d，J＝5.3Hz，1H)，7.64(d，J＝5.3Hz，1H)，7.46(d，J＝9.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，6.82(dd，J＝8-7，6.3Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.64(t，J＝6.8Hz，1H)，6.52-6.43(m，1H)，6.38-6.32(m，1H)，5.68(dd，J＝10.0，1.8Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.00(s，2H)，2.71(s，3H)，2.58(s，3H)，2.53(t，2H)，2.40(s，6H)。化合物2的制備將上述化合物1制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得E-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-烯酰胺(化合物2)(23mg，收率37.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNM二R(400MHz，CDCl3)δ9.86-9.78(m，2H)，9.36(s，1H)，8.46(d，J＝5.3Hz，1H)，7.63(d，J＝5.3Hz，1H)，7.46(d，J＝9.1Hz，1H)，7.38(s，1H)，6.88(dd，J＝9.0，6.3Hz，1H)，6.82(d，J＝6.6Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.65(t，J＝6.7Hz，1H)，6.35(d，J＝15.2Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.19(d，J＝5.9Hz，2H)，3.00(t，J＝5.5Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.58(s，3H)，2.54(s，2H)，2.41(s，6H)，2.33(s，6H)?；衔?的制備將上述化合物1制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物3)(17mg，收率27.8％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.46(s，1H)，9.80(d，J＝7.2Hz，1H)，9.20(s，1H)，8.44(d，J＝5.3Hz，1H)，7.64(d，J＝5.3Hz，1H)，7.48(d，J＝8.9Hz，1H)，7.42(s，1H)，6.87-6.83(m，1H)，6.80(s，1H)，6.76(t，J＝6.4Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.45(s，2H)，2.99(s，1H)，2.73(s，3H)，2.58(s，3H)，2.38(m，14H)?；衔?的制備將上述化合物1制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物4)(26mg，收率46.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.51(br，1H)，9.79(d，J＝7.3Hz，1H)，9.18(s，1H)，8.43(d，J＝5.3Hz，1H)，7.63(d，J＝5.3Hz，1H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，7.39(s，1H)，6.86(dd，J＝8.5，6.5Hz，1H)，6.78(s，1H)，6.74(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，3.88(s，3H)，2.97(t，2H)，2.73(s，3H)，2.58(s，3H)，2.47(t，2H)，2.41(s，3H)，2.01(s，3H)。方案2采用上述方案2中所示的方法制備本發(fā)明的化合物5、化合物6、化合物7和化合物8(其結(jié)構(gòu)式如下所示)?；衔?的制備第一步：3-甲基-2-氨甲基吡啶的制備將3-甲基-2-氰基吡啶(10g，84.6mmol)在室溫下溶于乙醇(200mL)中，雷尼鎳(4g)加入到反應(yīng)底物中，然后在室溫下在氫氣環(huán)境中氫化攪拌過夜。待反應(yīng)完畢，濾除固體，減壓旋蒸除去有機溶劑得到3-甲基-2-氨甲基吡啶(9.7g，收率94％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)123.2。第二步：N-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)甲酰胺(HDBA0997-13-1)的制備在0℃，將3-甲基-2-氨甲基吡啶(5g，41mmol)分批加入甲酸(50mL)中。加畢后，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。待反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。向所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用二氯甲烷/異丙醇(85：15)萃取(50mL×3)，合并有機相用飽和食鹽水(50mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)甲酰胺(5.4g，收率88％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)151.1。第三步：8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在室溫下，將N-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)甲酰胺(5.4g，36mmol)溶于無水甲苯(40mL)中，在氮氣保護下滴下三氯氧磷(9.9mL)。滴畢后，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。待反應(yīng)完畢后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有機相用飽和食鹽水(50mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(3.85g，收率81％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)132.9。第四步：3-溴-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(2.98g，22.6mmol)溶于乙腈(40mL)中，分批加入溴化氰。加畢后，反應(yīng)混合液在室溫下攪拌1個小時。待反應(yīng)完畢后將飽和碳酸氫鈉水溶液加入到反應(yīng)體系中，水相用二氯甲烷(30mL×3)，合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。然后用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚＝0～30％)得到3-溴-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(3.35g，收率70％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)210.8，212.8。第五步：3-(2-氯嘧啶-4-基)-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將3-溴-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(2.71g，12.8mmol)溶于無水四氫呋喃(30mL)中，在氮氣保護下，滴加甲基溴化鎂(6.4mL，19.3mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在室溫下攪拌1小時，經(jīng)檢測無起始物剩余后，依次向反應(yīng)體系中加入2，4-二氯嘧啶(2.87g，19.3mmol)的四氫呋喃溶液(10mL)和四三苯基膦鈀(742mg，0.64mmol)。反應(yīng)混合液加熱到70℃反應(yīng)1小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷(50mL×3)和水分液萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。然后用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯/(石油醚/二氯甲烷＝3∶1)＝0～50％)得到3-(2-氯嘧啶-4-基)-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(2.7g，收率86％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)244.9，246.9。第六步：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備室溫下，將3-(2-氯嘧啶-4-基)-8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(1g，4.1mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(760mg，4.1mmol)和對甲苯磺酸(933mg，4.9mmol)加入到2-戊醇(25mL)中并加熱到100℃反應(yīng)1.5小時。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾析出固體。水相用二氯甲烷萃取(40mL×2)。合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。合并固體用(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)打漿得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(1.34g，收率83％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.2。第七步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(1g，2.54mmol)，N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺(285mg，2.79mmol)和二異丙基乙基胺(1.09mL，6.35mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(15mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇＝0～10％)得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(700mg，收率58％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第八步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(700mg，1.47mmol)溶于乙醇(20mL)和水(5mL)中。依次加入鐵粉(412mg，7.35mmol)和氯化銨(787mg，14.7mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃過夜。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品有二氯甲烷(30mL×3)和飽和碳酸氫鈉水溶液分液萃取。合并有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(600mg，收率75％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.1。第九步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備(化合物5)在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(100mg，0.22mmol)，丙烯酸(32mg，0.44mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯)(428mg，0.67mmol)和三乙胺(136mg，1.34mmol)溶于無水二氯甲烷中。將反應(yīng)混合物加熱至40℃反應(yīng)1小時后至LC-MS檢測無反應(yīng)物剩余后，將飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取。合并有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物5)(28mg，收率25.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.3。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.04(s，1H)，9.76(d，J＝7.0Hz，1H)，9.37(s，1H)，8.49(d，J＝5.3Hz，1H)，7.67(d，J＝5.3Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.41(s，1H)，6.81(s，1H)，6.67(s，1H)，6.63(d，J＝6.9Hz，1H)，6.36(d，J＝3.4Hz，2H)，5.67(dd，J＝7.8，4.0Hz，1H)，3.89(s，3H)，2.98-2.91(t，2H)，2.72(s，3H)，2.49(s，2H)，2.44-2.38(t，2H)，2.33(s，6H)?；衔?的制備將上述化合物5制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得制得E-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-烯酰胺(化合物6)(18mg，收率8.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.87(br，1H)，9.76(d，J＝6.9Hz，1H)，9.37(s，1H)，8.49(d，J＝5.3Hz，1H)，7.67(d，J＝5.3Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.40(s，1H)，6.89(dt，J＝15.1，6.2Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.68-6.61(m，2H)，6.30(d，J＝15.3Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.16(d，J＝6.0Hz，2H)，2.97(t，2H)，2.71(s，3H)，2.51-2.46(m，5H)，2.38(s，6H)，2.31(s，6H)?；衔?的制備將上述化合物5制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法可制得制得4-(二甲基氨基)-M(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物7)(20mg，收率16.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.54(br，1H)，9.75(d，J＝6.6Hz，1H)，9.21(s，1H)，8.48(d，J＝5.3Hz，1H)，7.68(d，J＝5.3Hz，1H)，7.62(s，1H)，7.44(s，1H)，6.80(s，1H)，6.75-6.69(m，2H)，3.89(s，3H)，3.45(s，2H)，2.96(t，2H)，2.73(s，3H)，2.50(s，3H)，2.41-2.35(m，14H)。化合物8的制備將上述化合物5制備方法的第九步中所用的丙烯酸替換為丁炔酸，經(jīng)上述同樣的方法可制得制得N-(2-((2-二甲基氨基(乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物8)(36mg，收率32.0％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.5。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.96(br，1H)，9.60(br，1H)，8.69(s，1H)，8.43-8.37(m，1H)，7.73(s，1H)，7.48(d，J＝5.2Hz，1H)，7.07(s，1H)，6.87(d，J＝6.7Hz，1H)，6.69(t，1H)，3.77(s，3H)，2.91(t，2H)，2.75(s，3H)，2.47(s，3H)，2.37(t，2H)，2.31(s，6H)，2.04(s，3H)。方案3采用上述方案3中所示的方法制備本發(fā)明的化合物9、化合物10、化合物11和化合物12(其結(jié)構(gòu)式如下所示)?；衔?的制備第一步：6-甲基-2-吡啶甲胺的制備將6-甲基-2-吡啶腈(10g，84.7mmol)溶于甲醇(100mL)中，攪拌下加入10％鈀/碳(1g)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜，濾除固體，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到6-甲基-2-吡啶甲胺(9g，收率87％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)123.1。第二步：N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)甲酰胺的制備在0℃，將6-甲基-2-吡啶甲胺(9g，73.8mmol)分批加入甲酸(100mL)中。加畢后，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。待反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用二氯甲烷/異丙醇(85∶15)萃取(50mL×3)，合并有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-甲酰胺(6g，收率55％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)151.0。第三步：5-甲基-咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在室溫下，將N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-甲酰胺(6g，40mmol)溶于三氯氧磷(30mL)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合液加熱到100℃過夜。待反應(yīng)完畢后，反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去三氯氧磷。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有機相用飽和食鹽水(30mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(1.1g，收率20.8％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)133.0。第四步：1，3-二溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在室溫，將1-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(1.1g，8.3mmol)溶于無水二氯甲烷(30mL)中，分批加入N-溴代丁二酰亞胺(2.97g，16.6mmol)。加畢后，反應(yīng)液攪拌10分鐘后，將水(100mL)加入到反應(yīng)體系中，水相用乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚＝0～30％)后得到1，3-二溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(1.36g，收率56.9％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)291.1。第五步：1-溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將1，3-二溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(1.36g，4.7mmol)溶于無水四氫呋喃(30mL)中，在氮氣保護下，滴加異丙基溴化鎂(2.36mL，5.64mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在0℃攪拌一個小時。待反應(yīng)完成后，向反應(yīng)體系中加入甲醇(3mL)，用二氯甲烷(50mL×3)和水分液萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(3mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到1-溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(950mg，收率96％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)212.9。第六步：1-(2-氯嘧啶-4-基)-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在-78℃，將1-溴-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(950mg，4.5mmol)溶于無水四氫呋喃(10mL)中，在氮氣保護下，滴加正丁基鋰(3.8mL，9mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在-78℃下攪拌2個小時至無起始物剩余。向反應(yīng)體系中加入氯化鋅(1.6g，11.3mmol)，反應(yīng)混合液在-78℃下攪拌一個小時。依次向反應(yīng)體系中加入2，4-二氯嘧啶(1.37g，9mmol)的四氫呋喃溶液和四三苯基膦鈀(545mg，0.045mmol)。反應(yīng)混合液加熱到70℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷(50mL×3)和水分液萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。然后用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯：(石油醚∶二氯甲烷＝3∶1)＝0～50％)得到1-(2-氯嘧啶-4-基)-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(509mg，收率46.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)245.0。第七步：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1-基)嘧啶-2-胺的制備室溫下，將1-(2-氯嘧啶-4-基)-5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶(509mg，4.1mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(388mg，4.1mmol)和對甲苯磺酸(713mg，8.82mmol)加入到2-戊醇(15mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)冷卻至是室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾析出固體。水相用二氯甲烷萃取(40mL×2)。合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。合并固體用(石油醚：乙酸乙酯＝5∶1)打漿得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1-基)嘧啶-2-胺(400mg，收率48.7％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.1。第八步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1-基)嘧啶-2-胺(400mg，1.01mmol)，N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺(103mg，1.01mmol)和二異丙基乙基胺(325mg，2.53mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(5mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時后冷卻至室溫后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇＝0～10％)得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(292mg，收率60.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第九步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(292mg，0.613mmol)溶于乙醇(10mL)和水(2.5mL)中。依次加入鐵粉(206mg，3.68mmol)和氯化銨(328mg，6.13mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃過夜。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品用二氯甲烷(30mL×3)萃取。合并的有機相一次用飽和的碳酸氫鈉水溶液(20mL)飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(249mg，收率91.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.2。第十步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備(化合物9)在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(50mg，0.11mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯)(214mg，0.34mmol)和三乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水二氯甲烷中。反應(yīng)混合物加熱至40℃反應(yīng)1小時后無起始物剩余后，將飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取。合并有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物9)(20mg，收率36.3％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.2。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.82(br，1H)，8.47(d，J＝5.0Hz，2H)，8.36(s，1H)，7.71-7.57(m，2H)，7.26(d，J＝5.0Hz，1H)，6.95(t，J＝7.7Hz，2H)，6.67(d，J＝6.5Hz，1H)，6.21(d，J＝16.8Hz，1H)，5.73(d，J＝10.9Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.06(br，2H)，2.76-2.56(m，5H)，2.48-2.25(m，6H)?；衔?0的制備將上述化合物9制備方法的第十步中所用的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得E-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-烯酰胺(化合物10)(18mg，收率29.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.66(br，1H)，9.53(s，1H)，8.60(d，J＝5.1Hz，1H)，8.53(br，1H)，7.68-7.59(m，2H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，7.31(d，J＝5.1Hz，1H)，6.98-6.80(m，2H)，6.70(s，1H)，6.54(d，J＝6.6Hz，1H)，6.45(d，J＝15.3Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.28(d，J＝6.4Hz，2H)，3.04(t，2H)，2.67-2.58(m，6H)，2.54(s，3H)，2.46(s，6H)，2.39(s，6H)?；衔?1的制備將上述化合物9制備方法的第十步中所用的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物11)(12mg，收率18.8％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.37(br，1H)，9.35(s，1H)，8.57(d，J＝5.1Hz，1H)，7.73-7.55(m，2H)，7.47(d，J＝8.9Hz，1H)，7.33(d，1H)，6.86(dd，1H)，6.74(s，1H)，6.56(d，J＝6.6Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.46(s，2H)，2.99(t，2H)，2.70(s，3H)，2.53(s，3H)，2.44-2.08(m，14H)?；衔?2的制備將上述化合物9制備方法的第十步中所用的丙烯酸替換為丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(5-甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物12)(27mg，收率47.9％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.5。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.33(br，1H)，9.33(s，1H)，8.56(d，J＝4.3Hz，1H)，7.73-7.54(m，2H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，7.30(s，1H)，6.86(dd，J＝9.0，6.6Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.56(d，J＝6.5Hz，1H)，3.84(s，3H)，2.98(t，J＝5.8Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.53(s，3H)，2.50(t，J＝5.8Hz，2H)，2.42(s，6H)，2.02(s，3H)。方案4采用上述方案4中所示的方法制備本發(fā)明的化合物13、化合物14、化合物15和化合物16(其結(jié)構(gòu)式如下所示)?；衔?3的制備第一步：8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶的制備將2-氨基-3-甲基吡啶(10g，92.5mmol)和2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(36.4g，185mmol)溶解到乙醇(100mL)中，然后將48％的溴化氫水溶液(9mL)緩緩滴入反應(yīng)液中。將反應(yīng)體系加熱到90℃回26個小時后，LC-MS檢測反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束，然后冷卻至室溫。先將反應(yīng)體系中的乙醇減壓旋蒸掉，再用過量的飽和的碳酸氫鈉水(100mL)溶液和碳酸氫鈉固體(15g)將反應(yīng)中剩余的氫溴酸中和。將剩余的混合物用乙酸乙酯(200mLx3)萃取，然后將所有的有機相混合后再用去離子水(100mL)和飽和食鹽水(100mL)清洗各一次，用無水硫酸鈉干燥，減壓旋蒸至無溶劑。剩余混合物經(jīng)由硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝0-10％)，得到8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶(12g，收率98％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)133.94。第二步：3-溴-8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶的制備在10℃，將N-溴代丁二酰亞胺(16.8g，94.4mmol)加入到8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶(12g，9.2mmol)的氯仿(180mL)中，待反應(yīng)攪拌15分鐘后，加入100mL的飽和碳酸氫鈉溶液。將水相和有機相分離，水相用乙酸乙酯萃取(150mLx3)，合并后的有機相用去離子水(150mL)和飽和食鹽水(150mL)清洗后，再用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓旋蒸至物溶劑殘留，剩余的粗品再通過硅膠柱薄層層析分離(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)即可得到3-溴-8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶(16.5g，收率82.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)212.2。第三步：8-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，5-a]吡啶的制備在0℃，將3-溴-8-甲基-咪唑并[1，2-a]吡啶(16.5g，78.2mmol)溶于無水四氫呋喃(220mL)中，在氮氣保護下，滴加甲基溴化鎂(3M乙醚溶液，55mL，165mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在室溫下攪拌2個小時至LC-MS檢測無反應(yīng)物剩余。依次向反應(yīng)體系中加入2，4-二氯嘧啶(16.5g，110.7mmol)和四三苯基膦鈀(4.4g，3.5mmol)。反應(yīng)混合液加熱到70℃反應(yīng)2小時后冷卻至室溫，倒入500mL的冰水混合物中并攪拌15分鐘至無冰塊剩余，然后過濾。將濾餅加入到500mL石油醚與二氯甲烷(5∶1)中并劇烈攪拌1個小時，再次過濾后得到純凈的產(chǎn)物8-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，2-a]吡啶(15.5g，收率81.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)245.2。第四步：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將8-甲基-3-(2-氯嘧啶-4-基)咪唑并[1，2-a]吡啶(15.5g，63.5mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(11.8g，63.5mmol)和對甲苯磺酸(19.5g，114.3mmol)加入到2-戊醇(310mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)4小時。反應(yīng)冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾析出固體。水相用二氯甲烷萃取(200mL×3)。合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。合并固體用(石油醚：乙酸乙酯＝5∶1)打漿得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(16g，收率64％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.1。第五步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫中將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(16g，40.61mmol)至于二甲基乙酰胺(430mL)中，隨后加入二異丙基乙胺(17.7mL，101.6mmol)和N，N，N’-三甲基乙二胺(4.4g，43.1mmol)。將反應(yīng)液加熱至160℃持續(xù)攪拌4個小時后，反應(yīng)液變?yōu)槌吻澹缓罄鋮s至室溫。低壓旋蒸至大部分的二甲基乙酰胺移除后，將剩余固體加入到二氯乙烷(2L)中，再加入去離子水(1L)對有機相進行洗滌。分離后水相再次用二氯乙烷萃取(1Lx2)。合并的有機相用無水硫酸鈉干燥后過濾，低壓旋蒸后用硅膠薄層層析分離(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇＝1-25％)，可得N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(9g，收率46.6％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第六步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(9g，18.9mmol)溶于乙醇(430mL)和水(140mL)中。依次加入鐵粉(5.4g，96.4mmol)和氯化銨(9g，170mmol)以及濃鹽酸(10mL)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃過夜，待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品有用二氯甲烷(300mL×3)萃取。合并有機相用飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)和飽和食鹽水(200mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品，再經(jīng)過硅膠薄層層析分離(洗脫液：二氯甲烷/甲醇＝1-25％)可得N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(5.5g，收65.1％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.2。第七步：N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備(化合物13)在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(50mg，0.11mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯)(214mg，0.34mmol)和三乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水二氯甲烷中。反應(yīng)混合物加熱至40℃反應(yīng)2小時至LC-MS監(jiān)測已無底物剩余，將反應(yīng)液倒入到飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)中，水相用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物13)(14mg，收率25.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.2。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.13(br，1H)，9.77(d，J＝6.9Hz，1H)，9.40(s，1H)，8.43(d，J＝5.4Hz，1H)，8.24(s，1H)，7.42(s，1H)，7.15-7.05(m，2H)，6.81(s，1H)，6.78(t，J＝6.9Hz，1H)，6.41-6.21(m，2H)，5.67(dd，J＝9.5，2.3Hz，1H)，3.89(s，3H)，2.89(t，2H)，2.69(s，3H)，2.64(s，3H)，2.31(t，2H)，2.29(s，6H)。化合物14的制備將上述化合物13制備方法的第七步中的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得E-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-烯酰胺(化合物14)(26mg，收率42.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.91(br，1H)，9.76(d，J＝7.0Hz，1H)，9.38(s，1H)，8.43(d，J＝5.4Hz，1H)，8.24(s，1H)，7.40(s，1H)，7.08(d，J＝5.4Hz，2H)，6.89(dt，J＝15.3，6.2Hz，1H)，6.84-6.75(m，2H)，6.25(d，J＝15.3Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.14(d，J＝5.8Hz，2H)，2.93(t，2H)，2.71(s，3H)，2.62(s，3H)，2.41(t，J＝5.5Hz，2H)，2.33(s，6H)，2.27(s，6H)?；衔?5的制備將上述化合物13制備方法的第七步中的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物15)(3mg，收率4.9％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.53(br，1H)，9.74(d，J＝6.9Hz，1H)，9.22(s，1H)，8.40(d，J＝15.3，5.4Hz，1H)，8.24(s，1H)，7.49(s，1H)，7.17-7.04(m，2H)，6.90(t，J＝6.9Hz，1H)，6.78(s，1H)，3.90(s，3H)，3.47(s，2H)，2.93(br，J＝23.5Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.65(s，3H)，2.52-2.14(m，14H)。化合物16的制備將上述化合物13制備方法的第七步中的丙烯酸替換為丁-2-丁炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得N-(2-((2-二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丁-2-炔酰胺(化合物16)(14mg，收率25.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.5。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.24(br，1H)，9.72(d，J＝6.9Hz，1H)，9.15(s，1H)，8.39(d，J＝5.4Hz，1H)，8.24(s，1H)，7.49(s，1H)，7.14(d，J＝6.9Hz，1H)，7.09(d，J＝5.4Hz，1H)，6.91(t，1H)，6.73(s，1H)，3.88(s，3H)，3.08(t，J＝5.8Hz，2H)，2.69(s，3H)，2.69-2.60(m，5H)，2.51(s，6H)，2.01(s，3H)。方案5采用上述方案5中所示的方法制備本發(fā)明的化合物17、化合物18、化合物19和化合物20(其結(jié)構(gòu)式如下所示)?；衔?7的制備第一步：3-(2-氯嘧啶-4-基)-7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶的制備將N-氨基-2-甲基氫溴酸鹽(2.0g，10.6mmol)與2-氯-4乙炔基吡啶(1.46g，10.6mmol)及DBU(3.2g，21.2mmol，2eq)一起加入乙腈(20mL)中，加熱至60℃過夜。待反應(yīng)完成后將反應(yīng)液旋蒸至干，粗品經(jīng)硅膠柱分離純化得到3-(2-氯嘧啶-4-基)-7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶(1.6g，61.3％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)245.0。第二步：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將3-(2-氯嘧啶-4-基)-7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶(1.6g，6.5mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(1.22g，6.5mmol)和對甲苯磺酸(1.9g，9.96mmol)加入到2-戊醇(20mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾得到析出的固體。然后用(石油醚：乙酸乙酯＝3∶1)打漿再過濾得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(1.25g，收率49％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.1第三步：N1-(2-(二甲胺)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯1，4-二胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(1.2g，3mmol)，N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺(310mg，3.04mmol)和二異丙基乙基胺(0.9mL，5.08mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(10mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇＝0～10％)得到N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1，4-二胺(484mg，收率33.3％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第四步：N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1，2，4-三胺的制備在室溫下，將N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1，4-二胺(464mg，1.05mmol)溶于乙醇(5mL)和濃鹽酸(2mL)中，加入鐵粉(353mg，6.3mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃反應(yīng)2小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品用二氯甲烷(30mLx3)萃取，合并的有機相依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滴，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N1-(2-(二甲基胺)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1，2，4-三胺(685mg，收率100％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.2。第五步：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酸酰胺(化合物17)在室溫下，將N1-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(7-甲基吡咯[1，5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1，2，4-三胺(50mg，0.11mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯溶液)(214mg，0.34mmol)和二異丙基乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中。將混合物加熱至40℃反應(yīng)2小時后直到LC-MS檢測到無反應(yīng)物殘留，取飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，分液后水相用二氯甲烷(10mLx3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酸酰胺(化合物17)(23.3mg，收率38％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.2。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.94(s，1H)，9.52(s，1H)，8.57(s，1H)，8.48(d，J＝8.9Hz，1H)，8.41(d，J＝5.3Hz，1H)，7.51(d，J＝6.9Hz，1H)，7.26-7.20(m，1H)，7.03(d，J＝5.3Hz，1H)，6.80-6.73(m，2H)，6.47-6.36(m，2H)，5.68(dd，J＝9.3，2.5Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.00-2.96(m，2H)，2.79(s，3H)，2.70(s，3H)，2.51-2.45(m，2H)，2.37(s，6H).化合物18的制備將上述化合物17制備方法的第五步中的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得(E)-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(化合物18)(15.6mg，收率27％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，9.52(s，1H)，8.57(s，1H)，8.47(d，J＝8.9Hz，1H)，8.41(d，J＝5.3Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.26-7.21(m，1H)，7.03(d，J＝5.3Hz，1H)，6.92(dt，J＝15.1，6.3Hz，1H)，6.77(s，1H)，6.74(d，J＝6.8Hz，1H)，6.34(s，1H)，3.89(s，3H)，3.20(s，2H)，3.02-2.93(m，2H)，2.79(s，3H)，2.70(s，3H)，2.48(s，2H)，2.36(d，J＝17.3Hz，12H).化合物19的制備將上述化合物17制備方法的第五步中的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁-2-炔酰胺(化合物19)(10.1mg，收率17.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.75(s，1H)，9.21(s，1H)，8.57(s，1H)，8.43(d，J＝8.9Hz，1H)，8.38(d，J＝5.3Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.43-7.37(m，1H)，7.05(d，J＝5.3Hz，1H)，6.79(d，J＝6.9Hz，1H)，6.72(s，1H)，3.96(d，J＝43.7Hz，5H)，3.19(s，2H)，3.08(s，2H)，2.92(s，6H)，2.84-2.65(m，12H).化合物20的制備將上述化合物17制備方法的第五步中的丙烯酸替換為丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(7-甲基吡咯[1，5-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁-2-炔酰胺(化合物20)(19.1mg，收率32％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.32(s，1H)，9.35(s，1H)，8.57(s，1H)，8.44(d，J＝8.8Hz，1H)，8.38(d，J＝5.3Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.34(d，J＝7.2Hz，1H)，7.03(d，J＝5.3Hz，1H)，6.77(s，2H)，3.89(s，3H)，3.01(s，2H)，2.80(s，3H)，2.72(s，3H)，2.46(d，J＝23.6Hz，8H)，2.02(s，3H).方案六采用上述方案六中所示的方法制備本發(fā)明的化合物21、化合物22、化合物23和化合物24(其結(jié)構(gòu)式如下所示)?；衔?1的制備第一步：N-(2-(1H-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺的制備將2，5-二甲氧基四氫呋喃(9g，68mmol)和乙二胺(3.6g，60mmol)在室溫下溶于2，4-二氧六環(huán)(80mL)中，攪拌下加入乙酸(60mL)。反應(yīng)混合物回流4小時后，室溫攪拌過夜。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH～10，水相用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚＝50％～100％)后得到N-(2-(1H-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺(3.92g，收率38％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)153.1。第二步：1-甲基-3，4-二氫吡咯[1，2-a]吡嗪的制備在0℃將N-(2-(1H-吡咯-1-基)乙基)乙酰胺(3.92g，25.8mmol)分批加入三氯氧磷(40mL)中。加畢后，反應(yīng)混合液回流過夜。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調(diào)pH7～8，水相用二氯甲烷/異丙醇(85：15)萃取(50mLx3)，合并有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝100％～90％)后得到1-甲基-3，4-二氫吡咯[1，2-a]吡嗪(3g，收率87％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)135.1。第三步：1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪的制備在230℃下，1-甲基-3，4-二氫吡咯[1，2-a]吡嗪(3g，22.4mmol)和鈀碳(1g)中，在氮氣保護下反應(yīng)3小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用硅藻土過濾，二氯甲烷洗滌，旋蒸后經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝100％～85％)后得到1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(1.8g，收率61％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)133.0。第四步：6-溴-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪的制備在0℃，將1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(1.8g，13.6mmol)溶于無水四氫呋喃(30mL)中，分批加入N-溴代丁二酰亞胺(1.95g，6.82mmol)。加畢后，反應(yīng)液在室溫下攪拌10分鐘。反應(yīng)液旋蒸經(jīng)硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚＝0～50％)后得到6-溴-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(2g，收率71.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)211.1，213.1。第五步：6-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪的制備在0℃，將6-溴-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(2g，9.5mmol)溶于無水四氫呋喃(30mL)中，在氮氣保護下，滴加異丙基溴化鎂(9.5mL，28.5mmol)。滴畢后，反應(yīng)混合液在室溫下攪拌4個小時。依次向反應(yīng)體系中加入2，4-二氯嘧啶(2.76g，19mmol)的四氫呋喃溶液和四三苯基膦鈀(1.1mg，0.95mmol)。反應(yīng)混合液加熱到70℃反應(yīng)4個小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷(50mLx3)和水萃取分液，合并的有機相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品，然后用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑∶乙酸乙酯∶(石油醚/二氯甲烷＝3∶1)＝0～50％)得到6-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(1.35g，收率58.7％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)245.0。第六步N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺的制備室溫下，將6-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪(1.35g，5.5mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(1.03g，5.5mmol)和對甲苯磺酸(1.9g，9.96mmol)加入到2-戊醇(20mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中，抽濾得到析出的固體。然后用(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)打漿再過濾得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(1.5g，收率69％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)395.1。第七步N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(800mg，2.03mmol)，N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺(310mg，3.04mmol)和二異丙基乙基胺(0.9mL，5.08mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(10mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑∶二氯甲烷/甲醇＝0～10％)得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(500mg，收率51.8％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)477.1。第八步N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-氨基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(500mg，1.05mmol)溶于乙醇(5mL)和濃鹽酸(2mL)中，加入鐵粉(353mg，6.3mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃反應(yīng)2小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品用二氯甲烷(30mLx3)萃取，合并的有機相依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-氨基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(400mg，收率85.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)447.2。第九步N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-丙烯酰胺苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺的制備(化合物21)在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-氨基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(50mg，0.11mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯溶液)(214mg，0.34mmol)和二異丙基乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中。將混合物加熱至40℃反應(yīng)2小時后直到LC-MS檢測到無反應(yīng)物殘留，取飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，分液后水相用二氯甲烷(10mLx3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基吡咯[1，2-a]并吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物21)(14mg，收率25％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)501.2。1HNMR(400MHz，CDC13)δ10.07(br，1H)，9.61(d，J＝5.0Hz，1H)，9.36(s，1H)，8.43(d，J＝5.4Hz，1H)，7.52(d，J＝5.0Hz，1H)，7.41(d，J＝4.8Hz，1H)，7.39(br，1H)，7.04(d，J＝5.4Hz，1H)，6.83(d，J＝4.3Hz，1H)，6.81(s，1H)，6.45-6.31(m，2H)，5.68(dd，1H)，3.88(s，3H)，2.90(t，2H)，2.72(s，3H)，2.70(s，3H)，2.42(t，2H)，2.34(s，6H).化合物22的制備將上述化合物21制備方法的第九步中的丙烯酸替換為(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得E-4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基吡咯[1，2-a]并吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(化合物22)(30.9mg，收率35.6％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)558.6。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.87(br，1H)，9.61(d，J＝5.0Hz，1H)，9.37(s，1H)，8.42(d，J＝8.7Hz，1H)，7.52(d，J＝5.0Hz，1H)，7.42(d，J＝4.5Hz，1H)，7.38(br，1H)，7.04(d，J＝5.6Hz，1H)，6.94-6.80(m，2H)，6.79(s，1H)，6.37(d，J＝15.1Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.19(d，J＝11.0Hz，2H)，3.00(t，2H)，2.72(s，4H)，2.69(s，3H)，2.54(t，J＝5.2Hz，2H)，2.40(s，6H)，2.32(s，6H).化合物23的制備將上述化合物17制備方法的第五步中的丙烯酸替換為4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得4-(二甲基氨基)-N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基吡咯[1，2-a]并吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)氫基)苯基)丁-2-炔酰胺(化合物23)(18mg，收率9％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)556.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.49(br，1H)，9.53(d，J＝5.0Hz，1H)，9.16(s，1H)，8.36(d，1H)，7.51(d，J＝15.8Hz，1H)，7.36(d，J＝4.5Hz，2H)，6.96(d，J＝11.7Hz，1H)，6.78(d，J＝4.5Hz，1H)，6.74(s，1H)，3.82(s，3H)，3.38(s，2H)，2.86(t，2H)，2.65(d，J＝8.3Hz，6H)，2.30(d，J＝2.1Hz，12H).化合物24的制備將上述化合物17制備方法的第五步中的丙烯酸替換為丁-2-炔酸，經(jīng)上述同樣的方法即可制得N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基吡咯[1，2-a]并吡嗪-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁-2-炔酰胺(化合物24)(26.5mg，收率46.5％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)513.7。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.97(br，1H)，9.58(d，J＝5.0Hz，1H)，9.17(s，1H)，8.46-8.36(m，2H)，7.61(d，J＝5.0Hz，1H)，7.44(br，J＝5.8Hz，1H)，7.43(d，J＝4.6Hz，1H)，7.05(d，J＝5.4Hz，1H)，6.86(d，J＝4.4Hz，1H)，6.76(s，1H)，3.90(s，3H)，3.16(t，J＝5.9Hz，2H)，2.82-2.63(m，8H)，2.59(d，J＝22.6Hz，6H)，2.03(d，J＝5.1Hz，3H).方案七第一步2-甲氧基-N4-甲基-N1-(4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-馬福林乙基)-5-硝基苯-1，4-二胺的制備在室溫下，將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(0.25g，0.6mmol)，N-甲基-2-馬福林乙基-1-胺(0.25g，1.7mmol)和二異丙基乙基胺(0.18mL，1.02mmol)加入到N，N-二甲基乙酰胺(5mL)中。反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至140℃反應(yīng)1小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，減壓旋蒸除去有機溶劑得到粗產(chǎn)品。用硅膠柱層析分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝0～10％)得到N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(310mg，收率98％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)519.2。第二步5-甲氧基-N4-甲基-N1-(4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-馬福林乙基)苯基-1，4-三胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-6-基)嘧啶-2-胺(310mg，0.59mmol)溶于乙醇(10mL)和濃鹽酸(2mL)中，加入鐵粉(700mg，12.6mmol)。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃反應(yīng)2小時。待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品用二氯甲烷(50mLx3)萃取，合并的有機相依次用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到5-甲氧基-N4-甲基-N1-(4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-馬福林乙基)笨基-1，4-三胺(260mg，收率82％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)489.3。第三步：N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-馬福林乙基)氨基)-5-((4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨)苯基)丙烯酰胺的制備(化合物25)在室溫下，將5-甲氧基-N4-甲基-N1-(4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-馬福林乙基)苯基-1，4-三胺(130mg，0.27mmol)，丙烯酸(32mg，0.44mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯溶液)(428mg，0.68mmol)和二異丙基乙胺(136mg，1.34mmol)溶于無水二氯甲烷(4mL)中。將混合物加熱至40℃反應(yīng)2小時后直到LC-MS檢測到無反應(yīng)物殘留，取飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)加入到反應(yīng)體系中，分液后水相用二氯甲烷(10mLx3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(10mL)洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-馬福林乙基)胺基)-5-((4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)胺)苯基)丙烯酰胺(化合物25)(33mg，收率22.2％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)542.3。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(d，J＝6.8Hz，1H)，9.41(s，1H)，9.19(br，1H)，8.43(d，J＝10.7Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.49(s，1H)，7.10(d，J＝5.4Hz，2H)，6.85-6.73(m，2H)，6.52-6.31(m，2H)，5.74(dd，1H)，3.90(s，3H)，3.73(br，4H)，3.01(t，J＝6.0Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.65(s，3H)，2.45(br，4H)，2.36(t，2H).方案八N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-甲基哌啶-3-基)氨基)-5-((4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)胺)苯基)丙烯酰胺(化合物26)的制備N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-甲基哌啶-3-基)氨基)-5-((4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)胺)苯基)丙烯酰胺(化合物26)的合成方法與N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-馬福林乙基)胺基)-5-((4-(8-甲基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)胺)苯基)丙烯酰胺(化合物25)相同，從N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-胺開始，經(jīng)三步合成可制得。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)527.3。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.76(d，J＝6.9Hz，1H)，9.42(br，1H)，8.44(d，J＝5.4Hz，1H)，8.26(s，1H)，7.51(s，1H)，7.15-7.06(m，2H)，6.87-6.78(m，2H)，6.39(br，1H)，6.35(dd，J＝16.7Hz，1H)，5.71(dd，J＝11.6Hz，1H)，3.91(s，3H)，2.67(s，3H)，2.65(s，3H)，2.43(s，3H)，2.15-1.83(m，9H).方案九化合物27的制備第一步(E)-4-(2-丁氧乙烯基)-2-氯嘧啶的制備將2，4-二氯嘧啶(1.5g，10mmol)溶于聚乙二醇(50ml)中，然后加入乙烯丁基醚(20g，20mmol)與醋酸鈀(0.5g)。反應(yīng)液在80℃下加熱1.5h后，冷卻至室溫，加入乙醚萃取混合液(50mLx5)。將所有有機層合并后用無水硫酸鈉干燥，旋蒸干燥后經(jīng)硅膠柱分離純化得到(E)-4-(2-丁氧乙烯基)-2-氯嘧啶(420mg，收率50％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)213.1第二步8-氯-3-(2-氯吡啶-4-基)咪唑[1，2-a]吡啶的制備將(E)-4-(2-丁氧乙烯基)-2-氯嘧啶(200mg，0.94mmol)溶于1，4-二氧六環(huán)中(5mL)中，加入NBS(178mg，1mmol)。待反應(yīng)液在室溫下攪拌一小時后，加入3-氯-2-氨基吡啶(128mg)與1mL水。待反應(yīng)完成后，反應(yīng)液用二氯甲烷萃取(10mLx3)。合并后的有機相用無水硫酸鈉干燥后旋蒸濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱分離后得到干凈的8-氯-3-(2-氯吡啶-4-基)咪唑[1，2-a]吡啶(210mg，收率84％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)265.0第三步N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備室溫下，將8-氯-3-(2-氯吡啶-4-基)咪唑[1，2-a]吡啶(210mg，0.8mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(146mg，0.8mmol)和對甲苯磺酸(248mg，1.4mmol)加入到2-戊醇(4mL)中。反應(yīng)混合物加熱到100℃反應(yīng)4小時。反應(yīng)冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)中，抽濾析出固體。水相用二氯甲烷萃取(5mLx3)。合并的有機相用飽和食鹽水(5mL)洗，無水硫酸鈉干燥后，減壓旋蒸得到粗產(chǎn)品。合并固體用(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)打漿得到N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(115mg，收率35％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)415.1。第四步N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫中將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-氯咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(115mg，0.28mmol)加入二甲基乙酰胺(2mL)中，隨后加入二異丙基乙胺(0.05mL，101.6mmol)和N，N，N’-三甲基乙二胺(29mg，43.1mmol)。將反應(yīng)液加熱至160℃持續(xù)攪拌4個小時后，反應(yīng)液變?yōu)槌吻?，然后冷卻至室溫。低壓旋蒸至大部分的二甲基乙酰胺移除后，將剩余固體加入到二氯乙烷(5mL)中，再加入去離子水(2mL)對有機相進行洗滌。分離后水相再次用二氯乙烷萃取(5mLx2)。合并的有機相用無水硫酸鈉干燥后過濾，低壓旋蒸后用硅膠薄層層析分離(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝1-25％)，可得N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(100mg，產(chǎn)率71.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)497.2。第五步N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-硝基苯基)-4-(8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(100mg，0.2mmol)溶于乙醇(4mL)和水(1.4mL)中。依次加入鐵粉(112mg，2mmol)和氯化銨(38mg，170mmol)以及一滴濃鹽酸。在氮氣保護下，反應(yīng)混合物加熱到70℃過夜，待反應(yīng)冷卻至室溫后，濾除固體。減壓旋蒸除去有機溶劑。所得粗品有用二氯甲烷(10mLx3)萃取。合并有機相用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)和飽和食鹽水(10mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品，再經(jīng)過硅膠薄層層析分離(洗脫液：二氯甲烷/甲醇＝1-25％)可得N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(60mg，收率65.1％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)467.2。第六步N-(5-((4-(8-氯咪唑【1，2-a】吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基-2-((2-二甲基)乙基)(甲基)氨基-4-甲氧基苯基丙烯酰胺(化合物27)的制備在室溫下，將N-(2-甲氧基-4-(N1，N2，N2-三甲基-1，2-乙二胺-1-基)-5-胺基苯基)-4-(8-氯咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(60mg，0.13mmol)，丙烯酸(16mg，0.22mmol)，丙基磷酸酐(50％乙酸乙酯)(214mg，0.34mmol)和三乙胺(68mg，0.67mmol)溶于無水二氯甲烷中。反應(yīng)混合物加熱至40℃反應(yīng)2小時至LC-MS監(jiān)測已無底物剩余，將反應(yīng)液倒入到飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)中，水相用二氯甲烷(20mLx3)萃取。合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)清洗，無水硫酸鈉干燥后旋蒸得到粗品。經(jīng)HPLC分離純化得到N-(5-((4-(8-氯咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基-2-((2-二甲基)乙基)(甲基)氨基-4-甲氧基苯基丙烯酰胺(化合物27)(10.4mg，收率15.4％)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)521.2。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ10.01(br，1H)，9.86(dd，J＝7.0，0.9Hz，1H)，9.35(s，1H)，8.46(d，J＝5.3Hz，1H)，8.28(s，1H)，7.44(s，1H)，7.36(dd，J＝7.4，0.9Hz，1H)，7.11(d，J＝5.3Hz，1H)，6.84-6.77(m，2H)，6.45(dd，J＝16.8，9.7Hz，1H)，6.35(dd，J＝16.9，1.9Hz，1H)，5.69(dd，J＝9.8，2.0Hz，1H)，3.89(s，3H)，2.97(t，2H)，2.71(d，J＝9.2Hz，3H)，2.49(s，2H)，2.38(s，6H).化合物28的制備N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基-4-甲氧基-5-((4-(8-甲氧基咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基苯基丙烯酰胺胺(化合物28)的制備方案與N-(5-((4-(8-氯咪唑[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基-2-((2-二甲基)乙基)(甲基)氨基-4-甲氧基苯基丙烯酰胺(化合物27)相同(方案九)。LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)517.2。1HNMR(400MHz，DMSO)δ9.92(br，1H)，9.41(br，1H)，8.63(s，1H)，8.46(s，1H)，8.42-8.22(m，2H)，7.31(s，1H)，7.01(s，1H)，6.85(s，2H)，6.67(br，1H)，6.18(dd，1H)，5.72(s，1H)，3.94(s，3H)，3.82(s，3H)，3.33(s，3H)，3.10(t，2H)，2.69(t，2H)，2.51(s，6H).方案十第一步：2-甲氧基-N4-甲基-N4-(2-(甲胺基)乙基)-N1-(4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-硝基苯-1，4-二胺的制備將N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(5.0g，12.68mmol)和N，N′-二甲基乙二胺(6.7g，76.1mmol)加入50mL乙腈中，升溫至80℃反應(yīng)過夜。TLC檢測起始原料消失，緩慢降溫至室溫，滴加入55mL水，攪拌2h，過濾，濾餅用25mL水洗滌兩次，濾餅干燥得到2-甲氧基-N4-甲基-N4-(2-(甲氨基)乙基)-N1-(4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-硝基苯-1，4-二胺(5.0g，收率86％)，LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)463。第二步：叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂的制備將2-甲氧基-N4-甲基-N4-(2-(甲氨基)乙基)-N1-(4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-硝基苯-1，4-二胺(5.0g，10.8mmol)加入50mL二氯甲烷和5.0mL甲醇溶液中，滴加入Boc2O(2.36g，10.8mmol)并攪拌2h。TLC檢測反應(yīng)完畢，濃縮掉反應(yīng)液，固體用30mL甲基叔丁基醚打漿，過濾，濾餅用甲基叔丁基醚洗滌兩次，濾餅干燥后得到叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(5.3g，收率88％)，LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)563。第三步：叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂的制備將叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(5.3g，9.43mmol)和10％鈀碳(0.5g，10％)加入70mL丙酮中，氫氣置換三次，保持壓力45psi，加熱至40℃，攪拌過夜。TLC檢測反應(yīng)完畢，加硅藻土過濾，濾液濃縮，固體用甲基叔丁基醚打漿，過濾，濾餅再用活性炭脫色，過濾干燥后得到叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(40g，收率80％)，LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)533。第四步：叔丁基(2-((2-丙烯酰氨基-5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂的制備：將叔丁基(2-((5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(60g，112.65mmol)加入360mL乙腈和120mL水中，降溫至-5℃，滴加入3-氯丙酰氯(18.6g，146.4mmol)，滴加完后在0～5度攪拌0.5h，檢測反應(yīng)完畢。滴加入氫氧化鈉(14.42g，360.5mmol)水溶液(30mL)，完畢后加熱至75℃攪拌4h。TLC檢測反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，滴加入400mL水，攪拌2h過濾，濾餅重結(jié)晶后得到叔丁基(2-((2-丙烯酰氨基-5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(45g，收率68％)，LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)587。第五步：N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-甲胺基)乙基)氨基)-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丙烯酰氨雙鹽酸鹽(化合物29)的制備將叔丁基(2-((2-丙烯酰氨基-5-甲氧基-4-((-4(8-甲基咪唑[1，2-a]并吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氨基苯基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸脂(45g，76.7mmol)加入200mL丙酮中，滴加入4NHCl甲醇溶液(200mL)，室溫下攪拌4h。TLC檢測反應(yīng)完畢，過濾，濾餅用丙酮洗滌兩次，濾餅依次用甲醇和乙醇打漿一次，干燥后得到N-(4-甲氧基-2-(甲基(2-甲胺基)乙基)氨基)-5-((4-(8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基丙烯酰氨雙鹽酸鹽(化合物29)(28g，收率66％)，LC-MS(ESI)：m/z(M+H+)487。1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.06(s，1H)，9.56(s，2H)，9.49(s，1H)，8.53(d，J＝5.7Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.86(d，J＝7.1Hz，1H)，7.68(d，J＝6.0Hz，1H)，7.50(t，J＝7.1Hz，1H)，7.22(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.19(dd，J＝17.0，3.9Hz，1H)，5.68(dd，J＝10.2，3.9Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.41(s，2H)，3.13(s，2H)，2.68(s，3H)，2.66(s，3H)，2.55(t，J＝5.3Hz，3H).(二)生物活性測試實施例1、酶學(xué)活性測試蛋白激酶是在細胞中可以磷酸化其下游底物的一類蛋白。它可以通過磷酸化其下游底物而調(diào)節(jié)細胞的增長、凋亡、遷移、血管形成以及細胞的抗藥性。蛋白激酶的過表達或者活性的改變與許多癌癥的發(fā)生、發(fā)展及演化都有著密切的關(guān)系。所以，可以通過抑制蛋白激酶的磷酸化抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展。Caliper方法是基于微流體芯片技術(shù)的遷移率檢測技術(shù)(Mobility-ShiftAssay)。利用酶反應(yīng)中底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，帶有熒光標記的多肽底物和反應(yīng)產(chǎn)物的電荷不同而被分離并檢測。我們使用Caliper的方法檢測了所有化合物對EGFR(野生型)和EGFR(T790M/L858R)激酶活性。所有試劑與耗材均采購于括號里指定的公司HEPES(Sigma，Cat#3375)，ATP(Sigma，Cat#A7699)，DMSO(Amesco，Cat#0231)，DTT(Fluka，Cat#43817)，MgCl2(Sigma，Cat#208337)，Staurosporine(STSP)(Sigma，Cat#S5921)，384WellPlate(PerkinElmer，Cat#6007290)，Brij35(Sigma，Cat#B4184)，EDTA(Sigma，Cat#431788)，EGFR(SignalChem，Cat#E10-11G)，EGFR(T790M/L858R)(BPS，Cat#40350)，F(xiàn)L-22(5-FAM-EEPLYWSFPAKKK-CONH2)(HDB，Cat#F22-1A)。酶學(xué)活性測試實驗使用的主要儀器為：Envision(PerkinElmer)Liquidhandle(JANUS)，LabChipEZReaderII(Caliperlifesciences)。溶液配制1.ATP(40mM貯存液)：溶解33.066mgATP(FW：551.1)于1.5mL10mMofTrisbuffer(pH7.0)，分裝后貯存于-80℃。2.FL-22(5mM貯存液)：溶解5mgFL-22(FW：1598)于661μL重蒸水中。分裝后貯存于-20℃。3.Kinases所有激酶分裝后貯存于-80℃。4.STSP(Staurosporine)(10mM貯存液)：溶解1mgstaurosporine(FW：466.53)于214μLDMSO中，分裝后貯存于-80℃。5.DTT(1M貯存液)：溶解48.2mgDTT(FW：154.25)于312.4μL重蒸水中分裝后貯存于-20℃。6.EDTA(35mM貯存液)：溶解13gEDTA-Na22·H2O于1000mLHPLC級別的水中，調(diào)pH值到8.0，室溫貯存。7.酶反應(yīng)緩沖液(Caliper)：HEPES(100mM)MgCl2(10mM)，Brij35(30％)(100μl/L)，DTT(1mM)。調(diào)整pH值至7.4，混勻(HEPES，MgCl2以及Brij35)，DTT為新鮮加?；衔锶芤号渲疲?)待測化合物加DMSO配成高濃度儲存溶液。2)用DMSO稀釋陽性化合物儲存液，配成100X溶液。3)在工作板中加入5μL上述溶液及15μL反應(yīng)液，配成25X溶液。4)取以上板中溶液2μL到檢測板。用試劑配制：1)2.6XATP：用反應(yīng)液將ATP稀釋至2.6X。2)2.6X底物溶液：用反應(yīng)液將底物稀釋至2.6X。3)5X激酶溶液：用反應(yīng)液將激酶稀釋至5X。激酶反應(yīng)：1)在384孔板上每孔加入2μL25X化合物溶液。HPE、ZPE對照孔加入2μL25％DMSO。2)每孔加入10μL5X激酶溶液。HPE對照孔加入10μL反應(yīng)液。3)將檢測板1000rpm離心以混勻。4)將2.6XATP溶液與2.6X底物溶液等體積混合得到1.3XATP-底物溶液。5)每孔加入38μL上述ATP-底物溶液。6)將檢測板1000rpm離心以混勻。7)將檢測板置于30℃反應(yīng)1小時。8)每孔加入20μL35mMEDTA終止反應(yīng)。9)Caliper讀取轉(zhuǎn)化率。原始數(shù)據(jù)分析：1)計算化合物抑制系數(shù)：化合物抑制系數(shù)＝(零對照孔轉(zhuǎn)化率-化合物孔轉(zhuǎn)化率)/(零對照孔轉(zhuǎn)化率滿抑制對照孔轉(zhuǎn)化率)X100％。2)Prism5.0進行分析。Staurosporine(STSP)是激酶的廣譜性抑制劑，用作測試激酶的陽性對照化合物。將測試化合物配成指定的濃度進行測試。將化合物對激酶的抑制系數(shù)進行數(shù)據(jù)分析。陽性化合物對激酶的IC50值與已知文獻數(shù)據(jù)相符。部分化合物對EGFR和EGFR(T790M/L858R)的酶學(xué)實驗結(jié)果如下表1所示：表1化合物EGFRIC50(nM)EGFR(T790M/L858R)IC50(nM)123.111.8582134.83.357315.923.7384189.23.41557.8420.762650.991.311719.742.488849.661.4019963.123.3210456445.54111564.3451311.060.4691459.841.1981667.20.9471716.621.4041847.721.2391955.905.46720123.91.9862127.101.79022112.91.3202324.941.86124136.60.91325219.21.7252685.311.8152715.030.8502816.931.735AD929126.241.317Gefitinib3.37512.83STSP403.30.9392、Celltiter-Glo細胞增殖試驗：腫瘤細胞增殖及生長抑制分析：H1975(L858K/T790M)，PC-9(Ex19del)，HCC827(Ex19del)，A431(野生型)細胞均由輝源生物科技(上海)有限公司提供，并通過了支原體檢測。H1975和HCC827細胞的生長培養(yǎng)基為RPMI-1640(Invitrogen，貨號：31800-0222)：10％胎牛血清和100U青霉素和100μg/mL鏈霉素。A431和PC-9細胞的生長培養(yǎng)基為DMEM(Invitrogen，貨號：12100-046)：10％胎牛血清和100U青霉素和100μg/mL鏈霉素。采用CellTiter-Glo分析法檢測化合物對腫瘤細胞的增殖活性的影響。腫瘤細胞暴露在處理條件下72小時，各細胞系每次實驗所使用的細胞密度根據(jù)細胞72h生長曲線進行調(diào)整。為待測試化合物設(shè)置了10個濃度梯度3倍稀釋(0.5nM-10μM)，每個濃度值使用3組平行對照。將對數(shù)生長期的細胞用胰蛋白酶消化制成細胞懸液，Roche計數(shù)儀計數(shù)并用完全培養(yǎng)基適當稀釋，使細胞終濃度為1～2×103個cell/mL。將細胞接種于384孔板中，每孔22.6μL，設(shè)置3組平行，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。將化合物溶于DMSO，配制濃度為10μmol/L的母液，隨后將化合物用BRAVO儀器進行梯度稀釋，逐步稀釋得到的化合物濃度分別為10、3.33、1.11、0.37、0.123、0.041、0.0137、0.00457、0.00152、0.0005μmol/L。取2μL化合物溶液加到18μL的培養(yǎng)基中，充分混合后，再取2μL化合物和培養(yǎng)基混合溶液加到18μL的培養(yǎng)基中，充分混合。取2.4μL的混合物加入384孔板中。2.4μL稀釋后的DMSO代替化合物溶液用作0％抑制對照(注意DMSO終濃度要小于0.1％，以減少DMSO帶來的影響)。培養(yǎng)72小時之后，加入24μLCellTiter-Glo試劑。在一個定軌振蕩器上混合內(nèi)容物2分鐘，誘導(dǎo)細胞裂解。將384孔板室溫孵育10分鐘，使熒光信號值穩(wěn)定。用M1000PRO(TECAN)讀取數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)使用GraphPadPrismversion5.0進行計算，GI50值通過使用劑量反應(yīng)曲線的非線性回歸模型調(diào)整得到。表2從表2的結(jié)果中可以看出，與AZD9291相比，本發(fā)明化合物顯示出強的抑制EGFR單或雙突變型細胞的活性。上述研究結(jié)果表明本發(fā)明化合物顯示出顯著的EGFR抑制活性，并對EGFR突變體具有顯著的選擇性。這表明本發(fā)明化合物有希望成為出色的用于與EGFR活性相關(guān)的治療劑，例如用于治療或改善異常細胞增殖性病癥，例如癌癥。本
發(fā)明內(nèi)容僅僅舉例說明了要求保護的一些具體實施方案，其中一個或更多個技術(shù)方案中所記載的技術(shù)特征可以與任意的一個或多個技術(shù)方案相組合，這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案也在本申請保護范圍內(nèi)，就像這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案已經(jīng)在本發(fā)明公開內(nèi)容中具體記載一樣。當前第1頁1 2 3