本發(fā)明涉及同時具有酯化、酯交換、Sn-1，3選擇性的固定化酶和其制備方法以及使用該固定化酶的酯化方法。
背景技術：
：脂肪酶（lipase，EC3.1.1.3）全稱為甘油三酰酯水解酶，不同菌種來源的脂肪酶還可以具有酯化、酯交換、醇解、消旋體拆分等功能。液體脂肪酶不能重復使用，難以分離，限制了其在工業(yè)上的應用。通過固定化技術將酶賦形于具有一定物理性質(zhì)的載體之上，可解決上述問題。脂肪酶在結(jié)構上有疏水的空洞，上邊有蓋子，蓋子的開合與疏水/親水界面密切相關。固定化后的脂肪酶受載體性質(zhì)的影響，會表現(xiàn)出不同的活力。在非專利文獻“ontheimportanceofthesupportmaterialforbioorganicsynthesis,Eur.J.Biochem.172,573～578(1988)”中指出不同極性的載體表面帶電性質(zhì)，親疏水性的差別會導致酶固定化后活力的差別。在非專利文獻“膜材料的親疏水性對固定化脂肪酶的影響，高?；瘜W工程學報2006年6月第20卷第三期”中，采用了8種親疏水性不同的膜材料作為固定化載體，發(fā)現(xiàn)固定化酶載體材料性質(zhì)之間的區(qū)別會導致固定化酶吸附量、比活力、半衰期等性質(zhì)的變化。在CN2005101263630中，以疏水聚四氟乙烯為底層膜，醋酸纖維素為頂膜，復合的固定化酶膜制備的脂肪酶具有較高的活力和較好的穩(wěn)定性，然而固定化酶膜制備方法復雜，不適用工業(yè)化生產(chǎn)和應用。在WO99/33964中，保護的載體為親水性表面的無機材料，如硅石、沸石、礬土、陶瓷等，或親水表面的無機材料包被了有機基團，因此具有疏水性表面，或者疏水表面的有機材料，如有機聚合樹脂。在本專利中，載體表面或親水，或疏水，其實施例結(jié)果顯示通過本方法制備的固定化脂肪酶的酯交換活力也較低，不能滿足實際生產(chǎn)的需求。在US5232843中，在離子交換樹脂為載體固定化脂肪酶的基礎上加入酪蛋白酸鈉，結(jié)果酶的活力得到提高，但是反應時間較長。種種實驗數(shù)據(jù)表明，固定化脂肪酶載體材料的極性性質(zhì)會影響固定化酶的活力變化。在現(xiàn)有的商品化的固定化酶產(chǎn)品中，根據(jù)固定化酶材料的不同，大體可以分為兩種，一種是以有機高分子樹脂為載體，如諾維信公司生產(chǎn)的RMIM、novozyme435等。一種是以無機粉末為載體，如諾維信公司生產(chǎn)的TLIM。然而兩種不同性質(zhì)載體制備的固定化酶在應用上差別較大，RMIM具有專一性，隨機酯交換活力較差，TLIM具有較高的隨機酯交換活力，但專一性較差。目前缺少一種固定化酶的方法，可以使固定化脂肪酶產(chǎn)品同時具有較高的酯交換活力和專一性。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供固定化酶，其包含疏水載體和親水載體和酶蛋白，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體含量為0.1～99重量%，親水載體含量為5～99重量%，酶含量為0.05～10重量%，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體的含量為0.5～95重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體的含量為1～90重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體的含量為5～80重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體的含量為10～70重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述親水載體的含量為8～95重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述親水載體的含量為10～90重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述親水載體的含量為15～85重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述親水載體的含量為25～80重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的孔徑為2～500nm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的孔徑為20～200nm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的孔徑為2～500nm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的孔徑為20～200nm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的比表面積為10～1000m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的比表面積為50～400m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的比表面積為10～1000m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的比表面積為50～400m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的粒徑為0.5μm～700μm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體的粒徑為20～100μm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的粒徑為0.5μm～700μm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體的粒徑為20～100μm。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述疏水載體選自聚（甲基）丙烯酸酯、聚苯乙烯、（甲基）丙烯酸酯與苯乙烯的交聯(lián)接枝聚合物、（甲基）丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸乙二醇酯交聯(lián)共聚物、疏水改性二氧化硅、滑石粉、疏水型沸石、苯乙烯或二乙烯苯與順丁烯二酸二甲酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與乙酸烯丙酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與丙烯腈的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與甲基乙烯基甲酮的共聚物中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述聚（甲基）丙烯酸酯選自交聯(lián)聚（甲基）丙烯酸。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述聚苯乙烯選自苯乙烯和二乙烯苯的共聚物。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述親水載體選自硅藻土、硅酸鹽、堿式碳酸鎂、白炭黑、沸石、氧化鋁、分子篩、蛭石、硅膠、纖維素或其衍生物、糊精、淀粉或其衍生物中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述酶的含量為0.1～8重量%，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述酶的含量為0.5～7重量%，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述酶的含量為1～5重量%，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述酶是脂肪酶。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述脂肪酶選自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)、米黑毛霉(Mucormiehei)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、根霉(Rhizopussp.)、黑曲霉(Aspergillusniguer)及伯克霍爾德氏菌(Burkholderiasp.)中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述脂肪酶通過基因工程或蛋白質(zhì)工程改造而得。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，還包含粘合劑。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述粘合劑選自羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素鈉、明膠或聚維酮中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述粘合劑的含量為0.5～15重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述粘合劑的含量為2～7重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，還包含穩(wěn)定劑。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，所述穩(wěn)定劑選自丙二醇、甘油、山梨醇或赤蘚糖醇中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述穩(wěn)定劑的含量為0.5～30重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述穩(wěn)定劑的含量為2～10重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，還包含水。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述水的含量為0.5～15重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的固定化酶，其中，相對于固定化酶總量，所述水的含量為2～5重量%。本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法，其包括（1）將疏水載體與酶混合的步驟，（2）在步驟（1）所得的混合物中加入親水載體與酶的步驟。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為1～100：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為10～90：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為為20～80：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為為30～70：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為40～60：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的孔徑為2～500nm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的孔徑為20～200nm根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的比表面積為10～1000m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的比表面積為50～400m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的粒徑為0.5μm～700μm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體的粒徑為20～100μm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，所述疏水載體選自聚（甲基）丙烯酸酯、聚苯乙烯、（甲基）丙烯酸酯與苯乙烯的交聯(lián)接枝聚合物、（甲基）丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸乙二醇酯交聯(lián)共聚物、疏水改性二氧化硅、滑石粉、疏水型沸石、苯乙烯或二乙烯苯與順丁烯二酸二甲酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與乙酸烯丙酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與丙烯腈的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與甲基乙烯基甲酮的共聚物中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述聚（甲基）丙烯酸酯選自交聯(lián)聚（甲基）丙烯酸。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述聚苯乙烯選自苯乙烯和二乙烯苯的共聚物。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為10～200：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為20～180：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為50～160：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為80～150：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為100～140：1，其中酶的量以酶蛋白計。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的孔徑為2～500nm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的孔徑為20～200nm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的比表面積為10～1000m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的比表面積為50～400m2/g。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的粒徑為0.5μm～700μm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體的粒徑為20～100μm。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述親水載體選自硅藻土、硅酸鹽、堿式碳酸鎂、白炭黑、沸石、氧化鋁、分子篩、蛭石、硅膠、纖維素或其衍生物、糊精、淀粉或其衍生物中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述酶是脂肪酶。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述脂肪酶選自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)、米黑毛霉(Mucormiehei)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、根霉(Rhizopussp.)、黑曲霉(Aspergillusniguer)及伯克霍爾德氏菌(Burkholderiasp.)中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述脂肪酶通過基因工程或蛋白質(zhì)工程改造而得。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，還包括添加粘合劑的工序。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述粘合劑選自羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素鈉、明膠或聚維酮中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為0.5～15重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為2～7重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，還包括添加穩(wěn)定劑的工序。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，所述穩(wěn)定劑選自丙二醇、甘油、山梨醇或赤蘚糖醇中的至少一種。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述穩(wěn)定劑的添加量為0.5～30重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述穩(wěn)定劑的添加量為2～10重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，還包括添加水的工序。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為10～100重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為20～80重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為30～70重量%。根據(jù)本發(fā)明所述的制備方法，其中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為40～60重量%。本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法，其包括（1）將親水載體與酶混合的步驟，（2）在步驟（1）所得的混合物中加入疏水載體與酶的步驟。本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法，其包括將疏水載體、親水載體、酶混合的步驟。本發(fā)明的另一個目的是提供酯化方法，其使用前面所述的固定化酶或通過前面所述的固定化酶的制備方法制備得到的固定化酶進行酯化。本發(fā)明的另一個目的是提供用于酶固定化的載體，所述載體包含疏水載體和親水載體。發(fā)明效果本發(fā)明的固定化脂肪酶制備方法以及本發(fā)明的固定化脂肪酶，通過疏水與親水載體的復配，提高了比單獨疏水載體或親水載體固定化酶的酯交換活力，并且提高了比單獨疏水載體或親水載體固定化酶的專一性，以及提高了酯化活力。具體實施方式固定化酶本發(fā)明涉及一種同時具備高酯交換活力及強Sn-1,3專一性和高酯化能力的固定化酶。本發(fā)明的一個目的是提供固定化酶，其包含疏水載體和親水載體和酶，其中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體含量為0.1～99重量%，親水載體含量為5～99重量%，酶含量為0.05～10重量%，其中酶的量以酶蛋白計。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，相對于固定化酶總量，所述疏水載體含量為0.5～95重量%，優(yōu)選為1～90重量%，更優(yōu)選為5～80重量%，進一步優(yōu)選為10～70重量%。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，相對于固定化酶總量，所述親水載體含量為8～95重量%，優(yōu)選為10～90重量%，優(yōu)選為15～85重量%，更優(yōu)選為25～80重量%。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述疏水載體的孔徑為2～500nm，優(yōu)選所述疏水載體的孔徑為20～200nm。所述疏水載體的比表面積為10～1000m2/g，優(yōu)選所述疏水載體的比表面積為50～400m2/g，所述疏水載體的粒徑為0.5μm～700μm，優(yōu)選所述疏水載體的粒徑為20～100μm。所述疏水載體選自聚（甲基）丙烯酸酯、聚苯乙烯、（甲基）丙烯酸酯與苯乙烯的交聯(lián)接枝聚合物、（甲基）丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸乙二醇酯交聯(lián)共聚物、疏水改性二氧化硅、滑石粉、疏水型沸石、苯乙烯或二乙烯苯與順丁烯二酸二甲酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與乙酸烯丙酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與丙烯腈的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與甲基乙烯基甲酮的共聚物中的至少一種。所述聚（甲基）丙烯酸酯選自交聯(lián)聚（甲基）丙烯酸。所述聚苯乙烯選自苯乙烯和二乙烯苯的共聚物。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述親水載體的孔徑為2～500nm，優(yōu)選所述親水載體的孔徑為20～200nm，所述親水載體的比表面積為10～1000m2/g，優(yōu)選所述親水載體的比表面積為50～400m2/g。所述親水載體的粒徑為0.5μm～700μm，優(yōu)選所述親水載體的粒徑為20～100μm。本發(fā)明中所述疏水載體或親水載體的孔徑、疏水載體或親水載體的比表面積、疏水載體或親水載體的粒徑通過氮氣吸附法測得。所述親水載體選自硅藻土、硅酸鹽、堿式碳酸鎂、白炭黑、沸石、氧化鋁、分子篩、蛭石、硅膠、纖維素或其衍生物、糊精、淀粉或其衍生物中的至少一種。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，相對于固定化酶總量，所述酶的含量為0.1～8重量%，優(yōu)選所述酶的含量為0.5～7重量%，更優(yōu)選所述酶的含量為1～5重量%，其中酶的量以酶蛋白計。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述酶是脂肪酶。所述脂肪酶選自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)、米黑毛霉(Mucormiehei)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、根霉(Rhizopussp.)、黑曲霉(Aspergillusniguer)及伯克霍爾德氏菌(Burkholderiasp.)中的至少一種。所述脂肪酶通過基因工程或蛋白質(zhì)工程改造而得，包括化學修飾的酶、蛋白質(zhì)工程的突變體或基因工程菌產(chǎn)生的酶；或市售的脂肪酶，包括但不限于丹麥諾維信公司的LipozymeTL100L，Palatase20000L。用于固定化過程中的酶液可無需經(jīng)過任何分離、純化等改變其原有組成或環(huán)境的預處理。也可對酶液進行稀釋或pH調(diào)節(jié)等處理，以適于反應。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的固定化酶還包含粘合劑。所述粘合劑選自羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素鈉、明膠或聚維酮中的至少一種。相對于固定化酶總量，所述粘合劑的含量為0.5～15重量%，優(yōu)選所述粘合劑的含量為2～7重量%。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的固定化酶還包含穩(wěn)定劑。所述穩(wěn)定劑選自丙二醇、甘油、山梨醇或赤蘚糖醇中的至少一種。相對于固定化酶總量，所述穩(wěn)定劑的含量為0.5～30重量%，優(yōu)選所述穩(wěn)定劑的含量為2～10重量%。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的固定化酶還包含水。相對于固定化酶總量，所述水含量為0.5～15重量%，優(yōu)選所述水含量為2～5重量%。在本發(fā)明的具體實施方式中，所述固定化酶中，親水載體、疏水載體與酶的比例以重量比例計，親水載體：疏水載體：酶＝50：120：2.6、或者親水載體：疏水載體：酶為140：40：4、或者親水載體：疏水載體：酶為55：30：1.8、或者親水載體：疏水載體：酶為60：60：0.8?；蛘哂H水載體：疏水載體：酶為60：55：6，其中酶的量以酶蛋白計。本發(fā)明的固定化酶可以通過下述本發(fā)明的固定化酶的制備方法進行制備。固定化酶的制備方法本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法I，其包括（1）將疏水載體與酶混合的步驟，（2）在步驟（1）所得的混合物中加入親水載體與酶的步驟。在上述步驟（1）中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為1～100：1，優(yōu)選為10～90：1，更優(yōu)選為20～80：1，進一步優(yōu)選為30～70：1，最優(yōu)選為40～60：1，其中酶的量以酶蛋白計。在本發(fā)明的具體實施方式中，疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，疏水載體：酶為120：2.2，其中酶的量以酶蛋白計。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述疏水載體的孔徑為2～500nm，優(yōu)選所述疏水載體的孔徑為20～200nm。例如所述疏水載體的孔徑為5nm、35nm、45nm。所述疏水載體的比表面積為10～1000m2/g，優(yōu)選所述疏水載體的比表面積為50～400m2/g。例如所述疏水載體的比表面積為65m2/g、140m2/g、170m2/g。所述疏水載體的粒徑為0.5μm～700μm，優(yōu)選所述疏水載體的粒徑為20～100μm。例如所述疏水載體的粒徑為20μm、40μm、95μm。所述疏水載體選自聚（甲基）丙烯酸酯、聚苯乙烯、（甲基）丙烯酸酯與苯乙烯的交聯(lián)接枝聚合物、（甲基）丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸乙二醇酯交聯(lián)共聚物、疏水改性二氧化硅、滑石粉、疏水型沸石、苯乙烯或二乙烯苯與順丁烯二酸二甲酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與乙酸烯丙酯的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與丙烯腈的共聚物、苯乙烯或二乙烯苯與甲基乙烯基甲酮的共聚物中的至少一種。所述聚（甲基）丙烯酸酯選自交聯(lián)聚（甲基）丙烯酸。所述聚苯乙烯選自苯乙烯和二乙烯苯的共聚物。優(yōu)選聚（甲基）丙烯酸酯、疏水改性二氧化硅或聚丙烯酸。在本發(fā)明的具體實施方式中，使用平均孔徑45nm、平均比表面積140m2/g、平均粒徑95μm的聚（甲基）丙烯酸酯，或者使用平均孔徑5nm、比表面積170m2/g、平均粒徑20μm的疏水改性二氧化硅，或者使用平均孔徑35nm、比表面積65m2/g、平均粒徑40μm的聚丙烯酸粉末。所述步驟（1）中將疏水載體與酶混合后，為了充分進行混合，在20～25℃、優(yōu)選24℃下進行振蕩。振蕩時間沒有特別限定，只要使得疏水載體與酶充分混合即可，例如12～48小時，優(yōu)選20～36小時，例如20小時。所述步驟（1）中，振蕩后可以進行干燥以除去水分，例如干燥至混合物的水分含量為15重量％以下，優(yōu)選12重量％以下，更優(yōu)選10重量％以下，進一步優(yōu)選8重量％以下。干燥可以在室溫下進行。干燥可以是自然干燥，還可以利用真空干燥箱中進行干燥。干燥時間可以根據(jù)上述混合物的水分含量適當確定，沒有特別的限定。在上述步驟（2）中，親水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為10～200：1，優(yōu)選為20～180：1，更優(yōu)選為50～160：1，進一步優(yōu)選為80～150：1，最優(yōu)選為100～140：1，其中酶的量以酶蛋白計。在本發(fā)明的具體實施方式中，親水載體與酶蛋白的混合比例以重量比例計，親水載體與酶為125：1，其中酶的量以酶蛋白計。所述親水載體的孔徑為2～500nm，優(yōu)選所述親水載體的孔徑為20～200nm。例如所述親水載體的孔徑為15nm、120nm。所述親水載體的比表面積為10～1000m2/g，優(yōu)選所述親水載體的比表面積為50～400m2/g。例如所述親水載體的比表面積為50m2/g、160m2/g、240m2/g。所述親水載體的粒徑為0.5μm～700μm，優(yōu)選所述親水載體的粒徑為20～100μm。例如所述親水載體的粒徑為40μm或60μm。所述親水載體選自硅藻土、硅酸鹽、堿式碳酸鎂、白炭黑、沸石、氧化鋁、分子篩、蛭石、硅膠、纖維素或其衍生物、糊精、淀粉或其衍生物中的至少一種。優(yōu)選白炭黑或硅膠。在本發(fā)明的具體實施方式中，使用平均孔徑15nm、平均比表面積160m2/g、平均粒徑40μm的白炭黑，或者使用平均孔徑15nm、平均比表面積240m2/g、平均粒徑40μm的白炭黑，或者使用平均孔徑120nm、平均比表面積50m2/g、平均粒徑60μm的硅膠（400目）。本發(fā)明中所述疏水載體或親水載體的孔徑、疏水載體或親水載體的比表面積、疏水載體或親水載體的粒徑通過氮氣吸附法測得。在所述步驟（2）中，將所述步驟（1）中所得的混合物加入混合設備，例如混合制粒機中，進一步加入親水載體和酶進行混合。利用混合制粒機將步驟（1）中所得的混合物與親水載體和酶進行混合，并進行制粒，隨后利用拋丸設備（例如拋丸機等）進行拋丸。拋丸后進行干燥，使得水分含量為15重量％以下，優(yōu)選12重量％以下，更優(yōu)選10重量％以下，進一步優(yōu)選8重量％以下。干燥可以在室溫下進行。干燥可以是自然干燥，還可以利用真空干燥箱中進行干燥。干燥時間可以適當確定，沒有特別的限定。干燥后獲得固定化酶產(chǎn)品。在本發(fā)明的具體實施方式中，親水載體、疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體：疏水載體：酶＝50：120：2.6，其中酶的量以酶蛋白計。在上述步驟（1）和步驟（2）中，所述酶是脂肪酶。所述脂肪酶選自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)、米黑毛霉(Mucormiehei)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、根霉(Rhizopussp.)、黑曲霉(Aspergillusniguer)及伯克霍爾德氏菌(Burkholderiasp.)中的至少一種。所述脂肪酶通過基因工程或蛋白質(zhì)工程改造而得，包括化學修飾的酶、蛋白質(zhì)工程的突變體或基因工程菌產(chǎn)生的酶；或市售的脂肪酶，包括但不限于丹麥諾維信公司的LipozymeTL100L，Palatase20000L。用于固定化過程中的酶液可無需經(jīng)過任何分離、純化等改變其原有組成或環(huán)境的預處理。也可對酶液進行稀釋或pH調(diào)節(jié)等處理，以適于反應。在上述步驟（1）和步驟（2）中，所加入的酶可以相同也可以不同，根據(jù)需要進行適當選擇。在上述步驟（1）和/或步驟（2）中，還包括添加粘合劑的工序。優(yōu)選在步驟（2）中添加粘合劑。所述粘合劑選自羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素鈉、明膠或聚維酮中的至少一種。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為0.5～15重量%，優(yōu)選所述粘合劑的添加量為2～7重量%。在本發(fā)明的具體實施方式中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為1.8重量%。在上述步驟（1）和/或步驟（2）中，還包括添加穩(wěn)定劑的工序。優(yōu)選在步驟（2）中添加穩(wěn)定劑。所述穩(wěn)定劑選自丙二醇、甘油、山梨醇或赤蘚糖醇中的至少一種。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述穩(wěn)定劑的添加量為0.5～30重量%，優(yōu)選所述穩(wěn)定劑的添加量為2～10重量%。所述穩(wěn)定劑也可以在使用前已經(jīng)添加到酶中，例如商購的酶中已經(jīng)添加了上述穩(wěn)定劑。在上述步驟（1）和/或步驟（2）中，還包括添加水的工序。優(yōu)選在步驟（2）中添加水。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為10～100重量%，優(yōu)選所述水的添加量為20～80重量%，更優(yōu)選所述水的添加量為30～70重量%，進一步優(yōu)選所述水的添加量為40～60重量%。在本發(fā)明的具體實施方式中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為59重量%。本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法II，其包括將疏水載體、親水載體、酶混合的步驟。其中所述的疏水載體、親水載體、酶的描述參見上述本發(fā)明中的記載。在本實施方式中，可以將疏水載體和親水載體混合后，在加入酶，或者將將疏水載體、親水載體、酶加入后進行混合。在本發(fā)明的具體實施方式中，親水載體、疏水載體與酶的混合比例以重量比例計，親水載體：疏水載體：酶為140：40：4、或者親水載體：疏水載體：酶為55：30：1.8、或者親水載體：疏水載體：酶為60：60：0.8或者親水載體：疏水載體：酶為60：55：6，其中酶的量以酶蛋白計。在優(yōu)選的實施方式中，還包括添加粘合劑的工序。所述粘合劑選自羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素鈉、明膠或聚維酮中的至少一種。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為0.5～15重量%，優(yōu)選所述粘合劑的添加量為2～7重量%。在具體實施方式中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述粘合劑的添加量為3.3重量%。在優(yōu)選的實施方式中，還包括添加穩(wěn)定劑的工序。所述穩(wěn)定劑選自丙二醇、甘油、山梨醇或赤蘚糖醇中的至少一種。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述穩(wěn)定劑的添加量為0.5～30重量%，優(yōu)選所述穩(wěn)定劑的添加量為2～10重量%。在優(yōu)選的實施方式中，還包括添加水的工序。相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為10～100重量%，優(yōu)選所述水的添加量為20～80重量%，更優(yōu)選所述水的添加量為30～70重量%，進一步優(yōu)選所述水的添加量為40～60重量%。在本發(fā)明的具體實施方式中，相對于疏水載體和親水載體的總量，以重量計，所述水的添加量為55.6重量%、66.7重量％、70.6重量％。在優(yōu)選的實施方式中，將疏水載體和親水載體混合均勻后，加入混合制粒機中，進一步加入酶進行混合，并進行制粒，隨后利用拋丸設備（例如拋丸機等）進行拋丸。拋丸后進行干燥，使得水分含量為15重量％以下，優(yōu)選12重量％以下，更優(yōu)選10重量％以下，進一步優(yōu)選8重量％以下。干燥可以在室溫下進行。干燥可以是自然干燥，還可以利用真空干燥箱中進行干燥。干燥時間可以適當確定，沒有特別的限定。干燥后獲得固定化酶產(chǎn)品。在優(yōu)選的實施方式中，將疏水載體、親水載體、酶混合均勻后用搖床在20～45℃（例如25或45℃）、100～200rpm（例如150rpm）下進行振蕩6～24小時（例如12小時）后，濾除上清液，獲得固定化酶產(chǎn)品。優(yōu)選進行干燥，使得水分含量為15重量％以下，優(yōu)選12重量％以下，更優(yōu)選10重量％以下，進一步優(yōu)選8重量％以下。干燥可以在室溫下進行。干燥可以是自然干燥，還可以利用真空干燥箱中進行干燥。干燥時間可以適當確定，沒有特別的限定。在本發(fā)明中，所述“酶”是指酶液，包含酶蛋白和水。本發(fā)明的另一個目的是提供固定化酶的制備方法III，其包括（1）將親水載體與酶混合的步驟，（2）在步驟（1）所得的混合物中加入疏水載體與酶的步驟。所述制備方法III中，親水載體、疏水載體以及酶的相關記載參見上述固定化酶的制備方法I。本發(fā)明的另外一個目的是提供用于酶固定化的載體，所述載體包含疏水載體和親水載體。其中所述疏水載體和親水載體參見上述固定化酶的制備方法I中的所述疏水載體和親水載體。酯化方法本發(fā)明的另一個目的是提供酯化方法，使用上述的固定化酶或通過上述的固定化酶的制備方法制備得到的固定化酶進行酯化。本發(fā)明中所述酯化方法包括下述的酯化方法，還包括酯交換方法。本發(fā)明的酯化方法使用上述固定化酶按照常規(guī)的酯化方法或酯交換方法進行?？梢詫⒈景l(fā)明的固定化酶與待酯化原料或底物進行接觸來進行酯化。待酯化原料或底物可以是油脂。所述油脂可以是植物源油或動物源油。所述植物源油選自稻米油、葵花籽油、菜油、棕櫚油、棕櫚仁油、花生油、菜籽油、大豆油、棉籽油、紅花籽油、紫蘇籽油、茶籽油、橄欖油、可可豆油、烏桕籽油、扁桃仁油、杏仁油、油桐籽油、橡膠籽油、玉米油、小麥胚油、芝麻籽油、蓖麻籽油、月見草籽油、榛子油、南瓜籽油、胡桃油、葡萄籽油、玻璃苣籽油、沙棘籽油、番茄籽油、澳洲堅果油、椰子油、可可脂、藻類油等中的至少一種。所述動物源油是深海魚油，例如三文魚油、沙丁魚油等。固定化酶與待酯化原料或底物的比例，以重量比例計，例如為0.1～10：1～100，優(yōu)選0.5～8：20～80，更優(yōu)選1～5：30～60。在本發(fā)明的具體實施方式中，固定化酶與待酯化原料或底物的比例，以重量比例計，例如是1：20。所述酯化反應可以是脂肪酸與醇及醇的酯化物（如甘油一酯、甘油二酯）的酯化，包括油脂脫酸、生物柴油合成等。所述脂肪酸可以是純脂肪酸也可以是含有脂肪酸的下述油脂或脂肪酸酯。所述醇可以是純的醇也可以是含有醇的下述油脂或脂肪酸酯。所述油脂可以是植物源油或動物源油。所述植物源油選自稻米油、葵花籽油、菜油、棕櫚油、棕櫚仁油、花生油、菜籽油、大豆油、棉籽油、紅花籽油、紫蘇籽油、茶籽油、棕櫚果油、橄欖油、可可豆油、烏桕籽油、扁桃仁油、杏仁油、油桐籽油、橡膠籽油、玉米油、小麥胚油、芝麻籽油、蓖麻籽油、月見草籽油、榛子油、南瓜籽油、胡桃油、葡萄籽油、玻璃苣籽油、沙棘籽油、番茄籽油、澳洲堅果油、椰子油、可可脂、藻類油等中的至少一種，優(yōu)選選自大豆油、玉米油、菜油、葵花籽油、稻米油或棕櫚油中的至少一種油。所述動物源油是深海魚油，例如三文魚油、沙丁魚油等。所述油脂可以是毛油，也可以是進行了脫膠和/或脫蠟的油脂。所述脂肪酸可以是至少一種碳原子數(shù)1～30的直鏈或支鏈、飽和或不飽和脂肪酸。優(yōu)選選自碳原子數(shù)8～22的飽和或不飽和脂肪酸中的至少一種，可以舉出辛酸、壬酸、癸酸、月桂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、棕櫚油酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸等。所述醇可以是至少一種碳原子數(shù)1～30的直連或支鏈、飽和或不飽和醇。優(yōu)選甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、赤蘚糖醇。所述醇可以是未經(jīng)過酯化的醇，也可以是其中的1個或以上的羥基被酯化得到的醇酯化物（不包括醇的全部羥基被酯化的酯化物）。例如，丙二醇單酯、甘油一酯、甘油二酯、赤蘚糖醇一酯、赤蘚糖醇二酯、赤蘚糖醇三酯等。所述醇的酯化物可以是上述本發(fā)明的醇的碳原子數(shù)1～20的烷基酯、碳原子數(shù)2～20的烯基酯、碳原子數(shù)6～20的芳基酯、碳原子數(shù)7～20的芳烷基酯等。所述烷基酯可以舉出甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、庚酯、辛酯、壬酯、癸酯、十一烷基酯、十二烷基酯、十六烷基酯、十八烷基酯等。所述烯基酯可以舉出乙烯酯、丙烯酯、丁烯酯、戊烯酯、己烯酯、庚烯酯、辛烯酯、壬烯酯、癸烯酯、十一烯基酯、十二烯基酯、十六烯基酯、十八烯基酯等。所述芳基酯可以舉出苯基酯、萘基酯等。所述芳烷基酯可以舉出芐基酯等。優(yōu)選甲酯或乙酯。本發(fā)明所述脂肪酸酯可以為上述脂肪酸和上述醇的酯化物。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述脂肪酸酯是所述脂肪酸的甲酯或乙酯。上述底物包括反應體系中的脂肪酸、醇、油脂、脂肪酸酯。酯化反應溫度沒有特別限定，只要能夠充分酯化、實現(xiàn)本發(fā)明的目的即可，例如為20～80℃（例如70℃）。酯化反應時間沒有特別限定，只要能夠充分酯化、實現(xiàn)本發(fā)明的目的即可，例如為10分鐘～10小時，優(yōu)選20分鐘～5小時，更優(yōu)選30分鐘～2小時。在本發(fā)明的具體實施方式中，酯化反應進行30分鐘。通過使用本發(fā)明的固定化酶，可以提高上述酯交換反應的酯交換活力(IUN)。酯交換活力(IUN)的公式為式（1）。酯交換活力(IUN)＝（SFC0-SFC1）/30×1260　　　（1）式中，SFC0是指沒有經(jīng)過酶反應的底物油脂在40℃下的SFC值，SFC1指40℃下酶反應產(chǎn)物樣品的SFC值。SFC(solidfatcontent)是指固脂含量。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如疏水載體和酶）相比，酯交換活力(IUN)提高了10％～50％，例如提高了13.3％～19.8％、16.2％～22.2％、27.4％～38.8％、23.1％～34.9％。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如親水載體和酶）相比，酯交換活力(IUN)提高了4％～40％，例如提高了25.5％～31.1％、6.72％～13.7％、24.4％～29.8％、18.4％～28.8％、6.4％～21.1％、17.7％～30.4％、5.8％～20.3％。上述本發(fā)明的固定化酶具有提高的專一性，特別是用于上述酯交換反應中，可以提高專一性。通過2位p的插入率來表示專一性的提高率，2位p的插入率是甘油三酯第二位置中的棕櫚酸含量占甘油三酯總棕櫚酸含量的百分比，反映的是棕櫚酸在甘油三酯結(jié)構的分布情況，如果按實施例中的反應來看，2位棕櫚酸含量越高，證明酶的專一性越強。2位p的插入率計算公式為式（2）。結(jié)果示于表2。P%inSn-2=Sn-2P/3×（FACP）×100%　　?。?）式中，F(xiàn)AC（脂肪酸組成）分析方法參照國標GB/T17376，GB/T17377-2008表示分析，Sn-2分析參照國標GB/T24894-2010。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如疏水載體和酶）相比，通過式（2）表示的2位p的插入率提高了15％～30％，例如提高了20.7％～23.8％。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如親水載體和酶）相比，通過式（2）表示的2位p的插入率提高了10％～40％，例如提高了29.2％～31.9％、16.0％～19.2％。通過使用本發(fā)明的固定化酶，可以提高酶的酯化活力。酯化活力也稱為酯化能力，用下述式（3）表示。酯化活力（％）＝（AV0-AV1）/AV0×100%　　　（3）式中，AV0為酯化前酸價；AV1為酯化反應后酸價。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如疏水載體和酶）相比，酯化活力提高了25％～40％，例如提高了28.2％～31.7％。通過使用本發(fā)明的固定化酶（例如親水載體、疏水載體和酶以及必要時的粘合劑、穩(wěn)定劑、水），與對比固定化酶（例如親水載體和酶）相比，酯化活力提高了20％～50％，例如提高了40.0％～43.0％、29.0％～32.4％。本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數(shù)、比率、比例、或份數(shù)按重量計。本發(fā)明中的重量體積百分比中的單位是本領域技術人員所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶質(zhì)的重量。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。載體孔徑、比表面積由北京貝世德公司的比表面積分析儀測定，型號：3H-2000BET-A，粒徑由美國貝克曼庫爾特的激光粒度儀測定，型號：LS13320。實施例在本發(fā)明的下述實施例中，酸價(AV)檢測方法參照GB5530-85《動植物油脂酸值和酸價的測定方法》；水分含量測定方法，烘箱干燥法參照GB5009.3-2010,固定化酶中酶蛋白的量測定方法，參照文獻L.Mojovic,Z.Knezevic,R.Popadic,etal.ImmobilizationoflipasefromCandidarugosaonapolymersupport.ApplMicrobiolBiotechnol,1998,50:676-681。實施例1稱取處理好的疏水樹脂sepabeadsEC-HA（三菱化學）120g，加入脂肪酶TL(Thermomyceslanuginose)酶液(活性單位為1000KLU/g，酶液中蛋白含量為2重量%)110ml（諾維信公司），置于20℃搖床中震蕩24h后取出濾出樹脂，室溫干燥至水分含量10%以下，將該樣品放入高速混合制粒機(型號：GHL5常州佳發(fā)制粒設備公司)中，另外加入50g親水型K160白炭黑（益海嘉里佳木斯工廠），另取100ml水加入20ml脂肪酶酶液（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L），3g羧甲基纖維素鈉，混合溶解均勻后，噴入高速混合制粒機中。待樹脂混合白炭黑顆粒變大至450～800微米時，停止制粒，取出樣品在拋丸機(型號：QZL-MINI，常州佳發(fā)制粒設備公司)中進行拋丸。拋好后置于室溫下干燥至水分含量8%以下。得到固定化酶1。其中親水載體：疏水載體：酶蛋白=50:120:2.6(重量比)。SepabeadsEC-HA平均孔徑45nm，平均比表面積140m2/g，平均粒徑95μm，K160白炭黑平均孔徑15nm，平均比表面積160m2/g，平均粒徑40μm。實施例2取AerosilR974疏水型二氧化硅（德固賽公司）40g，K160親水型白炭黑（益海嘉里佳木斯工廠）140g，混合均勻后置于高速混合制粒機（GHL5常州佳發(fā)制粒設備公司）中，另取200ml酶液（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L，活性單位為1000KLU/g，酶液中蛋白含量為2重量%），100ml水，6g明膠溶解混合均勻后勻速泵入制粒機，待顆粒形成后取出樣品進行拋丸，自然干燥至水分含量8%以下。得到固定化酶2。其中親水載體：疏水載體：酶蛋白=140:40:4(重量比)。AerosilR974平均孔徑5nm，比表面積170m2/g，平均粒徑20μm。K160白炭黑平均孔徑15nm，平均比表面積240m2/g，平均粒徑40μm。實施例3取疏水載體聚丙烯酸高分子粉末（上海華震樹脂公司）30g，加入親水載體400目硅膠（青島海洋化工廠）55g，加入90ml酶液（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L，活性單位為1000KLU/g，酶液中蛋白含量為2重量%），60ml水，攪拌均勻后置于40℃搖床中150rpm震蕩12h，取出濾除上清液，將固形物部分置于真空干燥箱中進行干燥至水分含量10%以下。得到固定化酶3。其中親水載體：疏水載體：酶蛋白=55：30:1.8(重量比)。聚丙烯酸粉末平均孔徑35nm，比表面積65m2/g，平均粒徑40μm。400目硅膠平均孔徑120nm，比表面積50m2/g，平均粒徑60μm。實施例4取聚苯乙烯高分子粉末（安徽三星樹脂科技有限公司）60g，加入F270白炭黑(益海嘉里佳木斯工廠)60g，加入40mlTL脂肪酶液（諾維信公司，活性單位為1000KLU/g，酶液中蛋白含量為2重量%），80ml水，攪拌均勻后置于25℃搖床中150rpm震蕩12h，取出濾除上清液，將固形物部分置于真空干燥箱中進行干燥至水分含量10%以下。得到固定化酶4。其中親水載體：疏水載體：酶蛋白=60:60:0.8(重量比)。聚苯乙烯高分子粉末平均孔徑20nm，比表面積75m2/g，平均粒徑30μm。F270白炭黑平均孔徑15nm，比表面積270m2/g，平均粒徑40μm。實施例5取聚苯乙烯高分子粉末（安徽三星樹脂科技有限公司）60g，加入F270白炭黑(益海嘉里佳木斯工廠)55g，加入300mlTL脂肪酶液（諾維信公司，活性單位為1000KLU/g，酶液中蛋白含量為2重量%），攪拌均勻后置于25℃搖床中150rpm震蕩12h，取出濾除上清液，將固形物部分置于真空干燥箱中進行干燥至水分含量10%以下。得到固定化酶5。其中親水載體：疏水載體：酶蛋白=60:55:6(重量比)。比較例1取大孔吸附樹脂HPD100A（疏水型）（滄州寶恩化工公司）40g，加入脂肪酶酶液50ml（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L），置于20℃搖床中150rpm震蕩12h，取出濾除上清液，將吸附有酶的樹脂置于室溫進行干燥至水分含量10%以下。得到固定化酶6。比較例2取白炭黑（Zeofree5162Q，邱博工程材料有限公司）50g，加入60ml脂肪酶酶液（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L），水40ml，置于20℃搖床中150rpm震蕩12h，取出后濾除上清液，將吸附有酶的白炭黑置于室溫干燥至水分含量10%以下。得到固定化酶7。比較例3取100g白炭黑K160親水型白炭黑（益海嘉里佳木斯工廠，20g親水載體麥芽糊精（DE16~20，河南豫中生物科技有限公司），加入高速混合制粒機中，將溶有5%的明膠的TL液體酶140ml（諾維信公司，商品名lipozymeTL100L），水80ml混勻，均勻泵入制粒機，待顆粒形成后取出進行拋丸，室溫干燥至水分含量8%以下。得到固定化酶8。試驗例1固定化酶酯交換活力采用精煉大豆油和極度氫化大豆油（上海嘉里食品工業(yè)有限公司）（w/w73:27）為底物，固定化酶（固定化酶1～8）和底物質(zhì)量比為1:20，在70℃反應30min，反應畢后取出產(chǎn)物測其40℃固脂含量(solidfatcontent,SFC)。每次取出產(chǎn)物把酶留在反應器內(nèi)，再加入底物進行反應，重復5次。40℃SFC含量方法：將裝有樣品的固脂管分別放入100℃烘箱中15min，60℃水浴5min，0℃水浴60min，40℃水浴30min，然后用核磁共振儀（德國布魯克光譜儀器有限公司型號mq20）測其固脂含量(solidfatcontent,SFC)。酯交換活力(IUN)的公式為式（1）。結(jié)果示于表1。酯交換活力(IUN)＝（SFC0-SFC1）/30×1260　　?。?）式中，SFC0是指沒有經(jīng)過酶反應的底物油脂在40℃下的SFC值，SFC1指40℃下酶反應產(chǎn)物樣品的SFC值。SFC(solidfatcontent)是指固脂含量。表1.酯交換活力反應次數(shù)固定化酶1固定化酶2固定化酶3固定化酶4固定化酶5固定化酶6固定化酶7固定化酶81650647618601631521448461257355654053254444640241535415294984565133313853874460487458412453317339348實施例1～5為疏水載體和親水載體復配后通過不同的固定化酶工藝制備的產(chǎn)品，比較例1為疏水載體制備的固定化脂肪酶，比較例2為親水載體制備的固定化脂肪酶，通過上述結(jié)果可以看出，通過疏水與親水載體的復配，提高了比單獨疏水載體或親水載體固定化酶的酯交換活力。比較例3為親水載體的復配，在酶反應過程中效果也不如親疏水載體復配的效果。試驗例2脂肪酶專一性將25g棕櫚酸硬脂精和50g油酸（嘉里特種油脂（上海）有限公司）加入250ml三角瓶中，分別加入5g待測固定化酶1～6，于60℃，150rpm反應3.5h。反應完畢后，用氣相進行脂肪酸組成（FAC）分析，Sn-2分析（FAC分析方法參照國標GB/T17376，GB/T17377-2008，Sn-2分析參照國標GB/T24894-2010）。2位p的插入率計算公式為式（2）。結(jié)果示于表2。P%inSn-2=Sn-2P/3×（FACP）×100%　　　（2）。表2.專一性固定化酶1固定化酶2固定化酶3固定化酶4固定化酶5固定化酶6固定化酶7固定化酶855.3%56.7%54.5%55.3%55.9%43.2%38.6%45.8%通過上述結(jié)果可以看出，通過疏水與親水載體的復配，提高了比單獨疏水載體或親水載體固定化酶的專一性。試驗例3固定化酶的酯化能力分別向100ml單口圓底燒瓶中加入28g棕櫚酸（嘉里特種油脂（上海）有限公司），分別加入3g上述固定化酶1～8，置于磁力攪拌器上50℃，250rpm加熱。甲醇3.2g，6h內(nèi)分六次加入，反應完畢后取出產(chǎn)物測酸價，計算酯化活力。結(jié)果示于表3。酯化活力（％）＝（AV0-AV1）/AV0×100%　　?。?）式中，AV0為酯化前酸價；AV1為酯化反應后酸價。表3酯化活力固定化酶1固定化酶2固定化酶3固定化酶4固定化酶5固定化酶6固定化酶7固定化酶898.7%94.6%96.0%95.7％93.9％67.4%56.3%66.7%在酯化過程中會產(chǎn)生水，水在體系中既可以起到界面的作用促進反應，又和甲醇互溶造成對酶的傷害，疏水的載體因?qū)λ呐懦庠斐煞磻煌耆?，而親水的載體因吸附甲醇造成對酶蛋白的變性，因此效果較差。通過上述結(jié)果可以看出，通過疏水與親水載體的復配，提高了比單獨疏水載體或親水載體，或兩種親水載體復配的固定化酶的酯化活力。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實質(zhì)技術內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實質(zhì)技術內(nèi)容是廣義地定義于申請的權利要求范圍中，任何他人完成的技術實體或方法，若是與申請的權利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權利要求范圍之中。當前第1頁1 2 3