本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株具有群體感應(yīng)的保加利亞乳桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
酸奶是含活菌的乳制品，正常發(fā)酵結(jié)束后，在產(chǎn)品貯存、運輸、銷售、食用前這一過程中，菌體仍要生長繁殖，發(fā)生后酸化現(xiàn)象(postacidification)，即酸奶的pH值繼續(xù)下降，以至出現(xiàn)消費者不可接受的過酸味及感官質(zhì)量下降。酸奶后酸化現(xiàn)象導(dǎo)致的結(jié)果是酸奶無法長期貯存，酸奶貯存期短的缺陷困擾著酸奶的消費。
群體感應(yīng)(Quorum Sensing，QS)是指某些微生物群體其基因的表達受到與群體密度相關(guān)的信號分子調(diào)控的現(xiàn)象。QS系統(tǒng)參與調(diào)控一系列生物學(xué)功能，如：菌體發(fā)光、抗生素的生物合成、毒性因子的產(chǎn)生、胞外多糖的合成、細菌叢集、生物膜形成、質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移等。
QS系統(tǒng)被認為參與調(diào)控細菌的多項生理功能，該系統(tǒng)包括自誘導(dǎo)肽(autoinducingpeptide，AIP)、組氨酸蛋白激酶和感應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白，又稱為三組分系統(tǒng)。AIP作為信號分子，用于指示細胞密度，當(dāng)AIP達到某一臨界的濃度閾值時，便可激活一系列特定基因的表達。目前已經(jīng)在多種細菌上觀測到了群體感應(yīng)現(xiàn)象的存在，比如金黃色葡萄球菌、變異鏈球菌等。
自然界的有些細菌具有群體感應(yīng)系統(tǒng)，可以通過監(jiān)測周圍環(huán)境中群體感應(yīng)信號分子濃度，來感知自身和周圍環(huán)境中其他菌群的數(shù)量變化，當(dāng)信號分子濃度達到一定閾值時就啟動菌體相關(guān)基因表達，調(diào)控菌濃度以及相關(guān)生物學(xué)功能。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一株具有群體感應(yīng)的保加利亞乳桿菌及其應(yīng)用。
本發(fā)明提供的德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillusdelbrueckiisubsp.bulgaricus)ljj-6，已于2015年09月09日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC NO.11346。德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)ljj-6，簡稱乳桿菌ljj-6。
一方面，在MRS液體培養(yǎng)基中進行相同時間的培養(yǎng)，12小時時，乳桿菌ljj-6的菌密度與現(xiàn)有的保加利亞乳桿菌類似，24小時后乳桿菌ljj-6的菌密度顯著低于現(xiàn)有的保加利亞乳桿菌。另一方面，進行相同時間的培養(yǎng)，加入乳桿菌ljj-6得到的酸奶 的酸度值與加入現(xiàn)有保加利亞乳桿菌得到的酸奶的酸度值沒有顯著差異，但將酸奶進行貨架期保存后，加入乳桿菌ljj-6得到的酸奶的酸度值顯著低于加入現(xiàn)有保加利亞乳桿菌得到的酸奶的酸度值。結(jié)果表明，與現(xiàn)有的保加利亞乳桿菌相比，本發(fā)明提供的乳桿菌ljj-6可以解決酸奶后酸化現(xiàn)象。結(jié)果表明，本發(fā)明提供的乳桿菌ljj-6為具有群體感性現(xiàn)象的保加利亞乳桿菌菌株。
本發(fā)明還保護乳桿菌ljj-6在制備食品中的應(yīng)用。所述食品具體可為酸奶。
本發(fā)明還保護一種酸奶制品的制備方法，包括如下步驟：將乳桿菌ljj-6接種至液態(tài)奶并發(fā)酵，得到酸奶制品。所述方法中，乳桿菌ljj-6在所述液態(tài)奶中的初始密度具體可為104cfu/ml。所述發(fā)酵的條件具體可為：37℃靜置培養(yǎng)12小時。所述液態(tài)奶具體可為牛奶和/或羊奶。
以上任一所述方法制備得到的酸奶制品也屬于本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明提供的乳桿菌ljj-6在發(fā)酵后期可以通過自溶的方式調(diào)控菌群密度，從而降低酸奶的后酸化現(xiàn)象，可以作為優(yōu)質(zhì)酸奶發(fā)酵劑，具有重大的應(yīng)用和推廣價值。
附圖說明
圖1為實施例3中的酸度值結(jié)果。
具體實施方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
MRS液體培養(yǎng)基的制備方法如下：取酪蛋白胨10.0克、牛肉浸取物10.0克、酵母提取液5.0克、葡萄糖5.0克、乙酸鈉5.0克、檸檬酸二胺2.0克、吐溫801.0克、磷酸氫二鉀2.0克、七水硫酸鎂0.2克、七水硫酸錳0.05克和碳酸鈣20.0克，用蒸餾水溶解并定容至1.0升，調(diào)pH至6.8。
保加利亞乳桿菌LJJ：崔文明等，“保加利亞乳桿菌LJJ自溶的影響因素分析”，食品與發(fā)酵工業(yè)，2013年第39卷第7期(總第307期)，6-12。
實施例1、乳桿菌ljj-6的鑒定和保藏
2012年08月，從內(nèi)蒙牧區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品中分離得到一株菌，將其命名為ljj-6。
ljj-6的形態(tài)特征：革蘭氏陽性桿菌，菌體粗而長，菌體長2μm～9μm、寬0.15μm～0.18μm,單個體呈長桿狀或成鏈，菌體兩端稍圓，通常呈單個，平行或短鏈排列。
ljj-6的生理生化特征：兼性厭氧菌，最適培養(yǎng)溫度為3℃，最適宜生長的pH為6.5-7.0，最適宜的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基；能夠發(fā)酵牛奶中的乳糖生成乳酸，同時產(chǎn)生 特殊的香氣。
ljj-6的16sRNA的編碼序列(見序列表的序列1)與GenBank中的德氏乳桿菌保加利亞亞種ATCC11842的16sRNA的編碼序列同源性為98％。
本發(fā)明提供的德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)ljj-6，已于2015年09月09日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC NO.11346。德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)ljj-6，簡稱乳桿菌ljj-6。
實施例2、乳桿菌ljj-6的培養(yǎng)(MRS培養(yǎng)基)
1、分組處理如下(進行三次重復(fù)試驗，每次重復(fù)試驗中每組設(shè)置5個重復(fù)處理)：
第一組：將乳桿菌ljj-6接種至MRS液體培養(yǎng)基并使其初始濃度為104cfu/ml，37℃靜置培養(yǎng)20小時；
第二組：將保加利亞乳桿菌LJJ接種至MRS液體培養(yǎng)基并使其初始濃度為104cfu/ml，37℃靜置培養(yǎng)20小時。
2、步驟1中，靜置培養(yǎng)12小時時，檢測培養(yǎng)體系的OD600nm值。第一組的OD600nm值為2.4±0.1，第二組的OD600nm值為2.4±0.15。
3、完成步驟1后，檢測培養(yǎng)體系的OD600nm值。
第一組的OD600nm值為2.8±0.1，第二組的OD600nm值為3.45±0.15。
4、完成步驟1后，檢測培養(yǎng)體系的pH值。
第一組的pH值4.4±0.2，第二組的pH值4.3±0.2，兩組之間無顯著性差異。
結(jié)果表明：在培養(yǎng)過程中，乳桿菌ljj-6和保加利亞乳桿菌LJJ的起始生長速度沒有顯著差異；隨著培養(yǎng)時間的增加，培養(yǎng)體系中的菌濃度越來越高，乳桿菌ljj-6由于具備群體感應(yīng)現(xiàn)象從而生長速度變慢，而保加利亞乳桿菌LJJ由于不具備群體感性現(xiàn)象從而生長速度沒有變慢。
實施例3、乳桿菌ljj-6的培養(yǎng)(牛奶)
1、分組處理如下(進行三次重復(fù)試驗，每次重復(fù)試驗中每組設(shè)置5個重復(fù)處理)：
第一組：將乳桿菌ljj-6接種至三元純牛奶并使其初始濃度為104cfu/ml，37℃靜置培養(yǎng)12小時；
第二組：將保加利亞乳桿菌LJJ接種至三元純牛奶并使其初始濃度為104cfu/ml，37℃靜置培養(yǎng)12小時。
接種了乳桿菌的純牛奶靜置培養(yǎng)后稱為酸奶。
2、完成步驟1后，檢測酸奶的酸度值。
第一組、第二組酸奶的酸度均為60°T-80°T。
3、完成步驟1后，將酸奶進行貨架期保存(貨架期保存即4-6℃保存)，每天取樣并檢測酸度。
結(jié)果見圖1(從貨架期保存開始計時，每24小時為1天，橫坐標為保存天數(shù)；縱坐標為酸度值，單位為°T)。隨著保存時間的延長，第一組和第二組之間的差異開始顯現(xiàn)，乳桿菌ljj-6發(fā)酵的酸奶的酸度值上升較慢，保存至第10天的時候，乳桿菌ljj-6發(fā)酵的酸奶的酸度值明顯低于保加利亞乳桿菌LJJ發(fā)酵的酸奶。