本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種1,2-O-異丙叉基-5-芳氨代-α-呋喃葡萄糖衍生物、其制備方法，及其在制備治療腫瘤疾病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：癌癥的治療長期以來是一個(gè)世界性的難題。細(xì)胞癌變的本質(zhì)可能是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)胞無限增殖。因此以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)高效、低毒的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研發(fā)的重要方向。例如，以酪氨酸激酶為藥靶的抗腫瘤化合物吉非替尼[AstraZeneca,London,U.K.,http://www.astrazeneca.com/]、埃羅替尼[Roche,Ltd,Basel,Switzerland,http://www.roche.com/]、拉帕替尼[WO99/35146]等已成功用于多種腫瘤的臨床治療。但是，一些針對某一靶標(biāo)的藥物使用一段時(shí)間后，會產(chǎn)生明顯的耐藥性[Bioorganic&MedicinalChemistry2012,20,3756–3767]，給腫瘤的后期治療帶來困難。因此，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎，低毒的抗腫瘤化合物仍被迫切地期待?；谝陨显颍景l(fā)明人經(jīng)過長期試驗(yàn)研究，合成得到了一類芳氨代葡萄糖衍生物。通過對這些芳氨代葡萄糖衍生物的腫瘤細(xì)胞生長抑制活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這類化合物具有良好的抗腫瘤活性，有望用于腫瘤的治療。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種結(jié)構(gòu)為式Ⅰ所示的1,2-O-異丙叉基-5-芳氨代-α-呋喃葡萄糖衍生物及其鹽：其中，R1選自C1-C4烷基、氫；R2選自鹵素、-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基；R3選自鹵素、C1-C4烷基、-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R7,R7獨(dú)立地選自C1-C4烷基；且當(dāng)R2選自鹵素時(shí)，R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R7,R7獨(dú)立地選自C1-C4烷基；當(dāng)R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6,R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基時(shí)，R3選自鹵素、C1-C4烷基；R4、R5各自獨(dú)立的選自氫、C1-C4烷基。在一些實(shí)施方案中，R1選自甲基或氫。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自鹵素時(shí)，其中R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R7,R7選自乙基；在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自鹵素時(shí)，其中R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基；在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自鹵素時(shí)，其中R3選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基甲基、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基；在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自氯時(shí)，其中R3選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基甲基、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基時(shí)，R3選自鹵素、甲基；在一些實(shí)施方案中，當(dāng)R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基時(shí)，R3選自氯、甲基；在一些實(shí)施方案中，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6選自乙基，R3選自氯、甲基；在一些實(shí)施方案中，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基，R3選自氯、甲基；在一些實(shí)施方案中，R2選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基甲基、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基，R3選自氯、甲基。在一些實(shí)施方案中，其中R4、R5各自獨(dú)立的選自氫、甲基；在一些實(shí)施方案中，其中R4、R5各自獨(dú)立的選自氫。一些實(shí)施方案中，式Ⅰ化合物選自下列化合物，R1選自甲基或氫，當(dāng)R2選自鹵素時(shí)，其中R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R7,R7選自乙基，R4、R5各自獨(dú)立的選自氫、甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R3選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基甲基、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R2選自氯。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R4、R5各自獨(dú)立的選自氫。在另一些實(shí)施方案中，式Ⅰ化合物選自下列化合物，其中，R1選自甲基或氫，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基時(shí)，R3選自鹵素、甲基，R4、R5各自獨(dú)立的選自氫、甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R3選自氯、甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6，R6選自乙基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R2選自選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基甲基、4-乙氧基苯甲基、2-乙氧基苯甲基。在上述實(shí)施方案中優(yōu)選的實(shí)施方案為，R4、R5各自獨(dú)立的選自氫。優(yōu)選的通式Ⅰ化合物或其鹽，優(yōu)選藥物可接受的化合物舉例如下，但不局限于下列化合物：術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”，是指在向接受者給藥時(shí)，能夠(直接或間接)提供本文所述化合物的鹽。其保持游離態(tài)堿(酸)的生物有效性與性質(zhì)，且不會在生物學(xué)或其他方面是不期望的。然而，應(yīng)當(dāng)理解，通式I化合物的非藥學(xué)上可接受的鹽由于其可用于制備藥學(xué)上可接受的鹽因而也落入本發(fā)明范圍內(nèi)。式Ⅰ化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)酸或有機(jī)酸鹽。所述的無機(jī)酸包括但不限于鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸等；所述的有機(jī)酸包括但不限于甲酸，乙酸，三氟乙酸，枸櫞酸，馬來酸，酒石酸，富馬酸，苯甲酸，乳酸，甲磺酸或4-甲基苯磺酸等。術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氯。術(shù)語“烷基”是指由碳原子和氫原子組成的直鏈或支鏈的飽和的脂肪烴基團(tuán)，其通過單鍵與分子的其余部分連接。所述烷基優(yōu)選具有1-4個(gè)碳原子的C1-4烷基。所述烷基為非取代烷基。未取代的烷基的非限制性實(shí)例包括但不限于諸如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基等等。本發(fā)明另一方面提供式Ⅰ化合物的制備方法，包括將化合物Ⅰ-5溶解在有機(jī)溶劑中，并在還原劑存在條件下，與1,2-O-異丙叉基-5-氧代-α-呋喃葡萄糖發(fā)生反應(yīng)，其中R1、R2、R3、R4、R5定義與通式Ⅰ相同，其中，有機(jī)溶劑選自甲醇，還原劑選自氰基硼氫化鈉。本發(fā)明再一方面提供一種式Ⅰ-5的化合物用于制備式Ⅰ化合物的用途。本發(fā)明再一方面提供一種式Ⅰ-5化合物的制備方法，包括反應(yīng)a和反應(yīng)b，其中R1、R2、R3、R4、R5定義與通式Ⅰ相同，R2′、R3′分別獨(dú)立地選自-C4H4S-Ph-F、-Ph-O-R′，R′獨(dú)立地選自C1-C4烷基，在一些實(shí)施方案中，R2′、R3′選自5-(4-氟苯基)噻吩-2-基、4-乙氧基苯基、2-乙氧基苯基。a反應(yīng)中，R2選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R6,R6獨(dú)立地選自C1-C4烷基時(shí)，R3選自鹵素、C1-C4烷基，具體反應(yīng)步驟如下：b反應(yīng)中，R2選自鹵素，R3選自-CH2-C4H4S-ph-F、-CH2-ph-O-R7,R7獨(dú)立地選自C1-C4烷基，具體反應(yīng)步驟如下：(a)在催化劑存在下，式Ⅰ-1或Ⅰ-1′與氯化劑發(fā)生反應(yīng)，得到式Ⅰ-2或Ⅰ-2′；(b)在催化劑存在下，式Ⅰ-2與R2′H或Ⅰ-2′與R3′H發(fā)生Fridel-Crafts?；磻?yīng)，得到式Ⅰ-3或Ⅰ-3′；(c)在催化劑存在下，Ⅰ-3或Ⅰ-3′與還原劑發(fā)生反應(yīng)，得到式Ⅰ-4或Ⅰ-4′；(d)在催化劑存在下，式Ⅰ-4或Ⅰ-4′與強(qiáng)還原劑反應(yīng)，得到式Ⅰ-5或Ⅰ-5′；其中，步驟(a)中的催化劑選自吡啶，氯化劑選自氯化亞砜；反應(yīng)溫度為45-55℃，優(yōu)選50℃。步驟(b)中催化劑選自無水AlCl3；反應(yīng)溫度為0～5℃，優(yōu)選0℃。步驟(c)中催化劑選自三氟化硼，還原劑選自三乙基硅烷。步驟(d)中催化劑選自FeCl3，還原劑選自水合肼；反應(yīng)溫度為75-85℃，優(yōu)選80℃。本發(fā)明還提供了結(jié)構(gòu)為式Ⅰ所述化合物合成中所及結(jié)構(gòu)為式1，式2，式3，式4，式5，式6，式7，式8，式9，式10，式11，式12，式13，式14，式15，式16，式17，式18，式19，式20，式21和式22的中間體化合物：本發(fā)明再一方面提供結(jié)構(gòu)為式Ⅰ所示1,2-O-異丙叉基-5-芳氨代-α-呋喃葡萄糖衍生物在腫瘤治療中的用途。所述腫瘤選自人表皮癌、宮頸癌、腎癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、 結(jié)直腸癌、膀胱癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、前列腺癌、生殖泌尿道癌、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、星形細(xì)胞癌、Kaposi肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞癌。其中，優(yōu)選人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞、人肺癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞。具體實(shí)施方式下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本
發(fā)明內(nèi)容不限于這些實(shí)施例。本發(fā)明實(shí)施例中所用的1,2-O-異丙叉基-5-氧代-α-呋喃葡萄糖按文獻(xiàn)[Chem.Pharm.Bull.,1989,37(9),2344-2350]報(bào)道的方法合成；4-甲基-3-((5-氟苯基)-噻吩-2-基甲基)苯胺及其它的類似物參照文獻(xiàn)[CN102115468A]方法合成；其它所用試劑均為分析純?；衔锝Y(jié)構(gòu)鑒定所用的核磁共振儀為BrukerAvance300、400、600超導(dǎo)核磁共振儀，TMS作為內(nèi)標(biāo)；紅外光譜采用Nicolet170SXFT-IR紅外光譜儀測定；熔點(diǎn)采用X-6顯微熔點(diǎn)測定儀測定(溫度未進(jìn)行校正)；質(zhì)譜用BrukerEsquire3000plus質(zhì)譜儀測定。實(shí)施例1：化合物Ⅱ-1的合成(1)2-氯-5-硝基-4′-乙氧基二苯酮的制備稱取2-氯-5-硝基苯甲酸2.06g(10mmol)溶解在5mL氯化亞砜中，滴加3滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將2.12g(15mmol)無水AlCl3加入到18mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入苯乙醚1.35g(11mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15-20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-5-硝基苯甲酰氯溶解在6mLCH2Cl2中，加入到苯乙醚體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)12小時(shí)，得到黑綠色溶液。TLC跟蹤，原料大部分反應(yīng)完，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至70mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，每次至少攪拌30分鐘，再用CH2Cl2萃取，最后用鹽水 洗滌合并的有機(jī)層。通過硅膠柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:40，V/V)分離得到白色固體2-氯-5-硝基-4′-乙氧基二苯酮1.7g，產(chǎn)率54％。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:8.28(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),8.24(d,J＝2.7Hz,1H),7.79～7.73(m,2H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),6.97～6.93(m,2H),4.13(q,J＝7.0Hz,2H),1.46(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:191.0,164.2,146.3,140.3,138.1,132.6,131.2,128.1,125.3,124.0,114.7,64.1,14.6。(2)化合物1的制備稱取2-氯-5-硝基-4′-乙氧基二苯酮0.61g(2mmol)溶于6mL乙腈中，加入三乙基硅烷1.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液0.5mL，40℃反應(yīng)12h，每隔6h補(bǔ)加三乙基硅烷1mL，三氟化硼乙醚溶液0.5mL，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到固體0.55g,即目標(biāo)化合物1，產(chǎn)率94％。m.p.：84～84.8℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:8.00(dt,J＝6.5,2.6Hz,2H),7.52(d,J＝8.6Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,2H),6.85(d,J＝8.7Hz,2H),4.09(s,2H),4.02(q,J＝7.0Hz,2H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:158.0,146.7,141.3,141.0,130.4,123.0,129.5,125.5,122.5,114.9,63.5,38.4,14.9.IRvmax(KBr)cm-1：2979,1609,1528,1348,1249,1113,1057,902,840,734。(3)化合物2的制備稱取0.29g(1mmol)2-氯-5-硝基-4′-乙氧基二苯基甲烷，0.19g活性炭，0.10gFeCl3·6H2O溶于4mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將0.5mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得白色固體0.25g，即目標(biāo)化合物2，產(chǎn)率95％。m.p.：101.5～102.3℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.10(t,J＝7.8Hz,3H),6.82(d,J＝8.5Hz,2H),6.45(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.39(d,J＝2.8Hz,1H),3.99(q,J＝7.0Hz,2H),3.92(s,2H),3.52(s,2H),1.39(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.4,145.2,139.8,131.6,130.0,129.9,123.2,117.3,114.5,114.3,63.4,38.3,14.9.IRvmax(KBr)cm-1：3475,3364,2929,1609,1516,1243,1175,1119,1044,877,821,772。(3)化合物Ⅱ-1的制備稱取2-氯-5-氨基-4′-乙氧基二苯基甲烷1.17g(4.5mmol)，氰基硼氫化鈉1.15g(18mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖6.3g(28mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢瑁宜嵋阴ポ腿?，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:2，V/V)得到白色固體1.40g，即化合物Ⅱ-1，產(chǎn)率67％。m.p.:159.4～160.5℃；HRMSm/z(ESI)： 464.1843[M+H]+，計(jì)算值：464.1839；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.09(d,J＝8.6Hz,2H),7.02(d,J＝8.7Hz,1H),6.86～6.78(m,2H),6.53(d,J＝2.7Hz,1H),6.50(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),5.81(d,J＝3.7Hz,1H),5.53(d,J＝9.4Hz,1H),5.25(d,J＝5.0Hz,1H),4.55(t,J＝5.2Hz,1H),4.36(d,J＝3.7Hz,1H),4.08(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),3.98(d,J＝2.0Hz,1H),3.98～3.94(m,2H),3.81(s,2H),3.65(ddd,J＝12.9,9.1,3.6Hz,1H),3.62～3.54(m,1H),3.48～3.40(m,1H),1.38(s,3H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：156.8,147.4,138.5,131.5,129.6,129.1,118.5,115.3,114.2,112.1,110.4,104.3,84.8,79.1,72.9,62.8,60.1,51.8,37.8,26.7,26.1,14.7.IRvmax(KBr)cm-1：3432,3357,2967,2936,1590,1516,1385,1243,1162,1038,852,796。實(shí)施例2：化合物II-2的合成(1)化合物3的制備稱取2-氯-5-硝基苯甲酸2.06g(10mmol)溶解在5mL氯化亞砜中，滴加3滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將2.12g(15mmol)無水AlCl3加入到18mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入苯乙醚1.35g(11mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-5-硝基苯甲酰氯溶解在6mLCH2Cl2中，加入到苯乙醚體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)12小時(shí)，得到黑綠色溶液。TLC跟蹤，原料大部分反應(yīng)完，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至70mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，每次至少攪拌30分鐘，再用CH2Cl2萃取，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過柱層色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:40，V/V)分離得到白色固 體0.6g，即目標(biāo)化合物3，產(chǎn)率19％。m.p.:86.5～88℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.21(dd,J＝7.7,2.3Hz,2H),7.90(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.61～7.50(m,2H),7.14～7.04(m,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),3.84(q,J＝7.0Hz,2H),0.85(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：192.1,158.8,146.4,143.2,137.8,135.6,131.3,130.6,125.9,124.7,123.6,121.0,112.3,63.7,13.9.IRvmax(KBr)cm-1：2868,2589,1981,1609,1479,1249,1125,1051,815,741。(2)化合物4的制備稱取2-氯-5-硝基-2′-乙氧基二苯酮0.60g(2mmol)溶于6mL乙腈中，加入三乙基硅烷1.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液0.5mL,40℃反應(yīng)48h，每隔24h補(bǔ)加三乙基硅烷1mL，三氟化硼乙醚溶液0.5mL，TLC跟蹤，原料始終反應(yīng)不完，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，硅膠柱色譜分離(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)，得到淡黃色固體0.24g，即目標(biāo)化合物4，產(chǎn)率41％。m.p.:90.8～92.5℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ：8.10(d,J＝2.4Hz,1H),7.97(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(dd,J＝12.8,8.1Hz,2H),6.89(dd,J＝13.8,7.6Hz,2H),4.14(s,2H),4.02(dd,J＝13.9,6.9Hz,2H),1.38(t,J＝6.9Hz,3H).13CNMR(75MHz,CDCl3)δ：156.8,146.5,141.1,140.7,130.8,130.0,128.5,126.1,126.0,122.1,120.4,111.4,63.5,34.1,14.8.IRvmax(KBr)cm-1：2990,1612,1521,1471,1350,1260,1124,1049,933,903,843,747,647,531。(3)化合物5的制備稱取2.6g(9mmol)2-氯-5-硝基-2′-乙氧基二苯基甲烷，1.35g活性炭，0.92gFeCl3·6H2O溶于30mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將3.6mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓除去乙醇，加水?dāng)嚢瑁靡宜嵋阴ポ腿?，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓濃縮得淡黃色固體2.0g，即目標(biāo)化合物5，產(chǎn)率85％。m.p.:119～120℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.18(t,J＝7.8Hz,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.01(d,J＝7.7Hz,1H),6.85(t,J＝7.3Hz,2H),6.44(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.41(d,J＝2.7Hz,1H),4.02(dd,J＝13.9,7.0Hz,2H),3.99(s,2H),3.37(s,2H),1.37(td,J＝6.9,1.3Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：156.88,145.01,139.24,130.34,129.73,128.34,127.47,123.65,120.33,117.58,114.25,111.38,63.65,33.32,14.95.IRvmax(KBr)cm-1：3457,2868,2594,1987,1479,1231,1125,1051,815,747。(4)化合物Ⅱ-2的制備稱取2-氯-5-氨基-2′-乙氧基二苯基甲烷0.92g(3.5mmol)，氰基硼氫化鈉0.88g(14mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖5.9g(23mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng) 4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢瑁宜嵋阴ポ腿?，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:2)得到白色固體產(chǎn)物1.10g，即目標(biāo)化合物Ⅱ-2，產(chǎn)率68％。m.p.:105.6～106.8℃；HRMSm/z(ESI)：464.1843[M+H]+，計(jì)算值：464.1839；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.21～7.13(m,1H),7.04(d,J＝8.7Hz,1H),6.95(t,J＝8.3Hz,2H),6.83(t,J＝7.5Hz,1H),6.51(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.46(d,J＝2.3Hz,1H),5.80(d,J＝3.6Hz,1H),5.50(d,J＝9.3Hz,1H),5.23(d,J＝4.9Hz,1H),4.53(s,1H),4.36(d,J＝3.6Hz,1H),4.08(d,J＝8.9Hz,1H),4.03(q,J＝6.9Hz,2H),3.97(s,1H),3.84(s,2H),3.67～3.54(m,2H),3.43(d,J＝10.2Hz,1H),1.38(s,3H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H),1.22(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：156.2,147.3,137.5,129.5,129.0,127.7,127.4,120.1,118.9,115.4,112.0,111.5,110.4,104.2,84.8,79.0,72.8,63.2,59.9,51.8,32.7,26.7,26.1,14.7.IRvmax(KBr)cm-1：3475,3382,2991,2929,1801,1609,1485,1374,1236,1169,1032,865,753。實(shí)施例3：化合物Ⅱ-3的合成(1)化合物6的制備稱取2-甲基-5-硝基苯甲酸4.52g(25mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加3滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3h，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl35.00g(37.5mmol)加入到45mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入苯乙醚3.36g(27.5mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-甲基-5-硝基苯甲酰氯溶解在14mLCH2Cl2中，加入到苯乙醚體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)1h，得到黑綠色溶液。TLC跟蹤，原料大部分反應(yīng)完，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，每次至少攪拌30分鐘，再用CH2Cl2萃取，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過柱層色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)分離得到白色固體6.3g，即目標(biāo)化合物6，產(chǎn)率88％。m.p.:81.2～83℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ：8.33～8.00 (m,2H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(d,J＝8.3Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),4.13(dd,J＝13.9,6.9Hz,2H),2.41(s,3H),1.46(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(75MHz,CDCl3)δ：194.5,163.9,145.7,144.1,140.3,132.5,131.9,129.0,124.3,122.7,114.6,64.0,20.0,14.6.IRvmax(KBr)cm-1：2967,1659,1602,1528,1348,1256,1150,1038,914,834,728。(2)化合物7的制備稱取2-甲基-5-硝基-4′-乙氧基二苯酮1.75g(6mmol)溶于6mL乙腈中，加入三乙基硅烷6.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液3.0mL，40℃反應(yīng)2h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到固體1.15g，即目標(biāo)化合物7，產(chǎn)率69％。m.p.:50.9～52.3℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.99(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),7.95(d,J＝2.2Hz,1H),7.29(d,J＝8.3Hz,1H),7.01(d,J＝8.5Hz,2H),6.83(d,J＝8.6Hz,2H),4.00(q,J＝7.0Hz,2H),3.97(s,2H),2.34(s,3H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.7,146.5,144.7,141.2,130.9,130.3,129.6,124.4,121.4,114.7,63.4,38.5,19.9,14.8.IRvmax(KBr)cm-1：2985,1609,1516,1348,1243,1187,1113,1038,840,741。(3)化合物8的制備稱取2-甲基-5-硝基-4′-乙氧基二苯基甲烷1.15g(4mmol)，活性炭0.63g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.40g溶于10mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將1.7mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得白色固體0.75g，即目標(biāo)化合物8，產(chǎn)率74％。m.p.:66.5～66.2℃；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ：7.06(d,J＝8.7Hz,2H),6.97(d,J＝7.9Hz,1H),6.87～6.79(m,2H),6.52(dd,J＝7.9,2.5Hz,1H),6.45(d,J＝2.4Hz,1H),4.03(q,J＝7.0Hz,2H),3.85(s,2H),3.40(s,2H),2.16(s,3H),1.43(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ：157.3,144.4,140.4,132.4,131.0,129.8,126.7,117.1,114.5,113.3,63.5,38.6,18.7,15.0.IRvmax(KBr)cm-1：3457,3364,2985,1609,1510,1243,1181,1106,1044,914,815,772。(4)化合物Ⅱ-3的制備稱取2-甲基-5-氨基-4′-乙氧基二苯基甲烷724mg(3mmol)，氰基硼氫化鈉754mg(12mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖5.0g(23mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)1h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢瑁宜嵋阴ポ腿?，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:2，V/V)得到白色固體產(chǎn)物0.94g，即目標(biāo)化合物Ⅱ-3，產(chǎn)率70％。m.p.:175.4～175.9℃；HRMSm/z(ESI):466.2190[M+Na]+,計(jì)算值:466.22061HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.02(d,J＝8.5 Hz,2H),6.81(dd,J＝8.0,5.6Hz,3H),6.50～6.35(m,2H),5.82(d,J＝3.7Hz,1H),5.24(d,J＝4.9Hz,1H),5.05(d,J＝9.5Hz,1H),4.50(t,J＝5.2Hz,1H),4.37(d,J＝3.7Hz,1H),4.10(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),4.01(dd,J＝4.7,2.7Hz,1H),3.96(q,J＝7.0Hz,2H),3.71(s,2H),3.70～3.63(m,1H),3.58(dt,J＝10.0,4.1Hz,1H),3.50～3.44(m,1H),2.02(s,3H),1.38(s,3H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：156.6,146.4,139.3,132.3,130.3,129.4,122.5,115.2,114.1,110.7,110.3,104.2,84.8,79.2,73.0,62.8,59.9,52.1,38.2,26.7,26.1,18.2,14.7.IRvmax(KBr)cm-1：3432,3345,2985,2924,1621,1510,1385,1243,1169,1044,957,865,803。實(shí)施例4：化合物Ⅱ-4的合成稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-5-氨基苯基)-甲基噻吩0.30g(1mmol)，氰基硼氫化鈉0.25g(4mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖1.09g(5mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢?，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:1，V/V)得到0.34g淡黃色目標(biāo)化合物Ⅱ-4，產(chǎn)率68％。m.p.:140.8～141.3℃。HRMSm/z(ESI):500.1902[M+H]+,計(jì)算值:500.1901；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.46(dd,2H),7.07～6.95(m,4H),6.67(d,J＝3.5Hz,1H),6.61(d,J＝2.4Hz,1H),6.57(dd,1H),5.91(d,J＝3.7Hz,1H),4.48(d,J＝3.7Hz,1H),4.24(d,J＝2.6Hz,1H),4.20(dd,1H),4.01(s,2H),3.80(dt,3H),2.20(s,3H),1.47(s,3H),1.29(s,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.7,156.0,139.7,138.1,136.3,134.1,126.2,125.6,125.6,121.9,121.9,121.5,120.8,117.5,111.2,110.5,110.4,108.0,106.5,99.5,79.8,75.4,70.0,56.3,49.0,29.0,21.5,20.9,13.2.IRvmax(KBr)cm-1：3427，3306,2927，1616，1514，1380，1232，1163，1074，833，808。實(shí)施例5：化合物Ⅱ-5的合成(1)化合物9的制備稱取2-氯-5-硝基苯甲酸5.04g(25mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加4滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3h，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl34.55g(25mmol)加入到15mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入2-(4-氟苯基)噻吩4.45g(25mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-5-硝基苯甲酰氯溶解在45mLCH2Cl2中，加入到2-(4-氟苯基)噻吩體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)1h，得到墨綠色溶液，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過柱層色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)分離得到7.0g淡黃色目標(biāo)化合物9，產(chǎn)率78％。m.p.:155.4～156.1℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:8.32(s,1H),8.28(d,1H),7.70～7.60(m,3H),7.34(s,1H),7.27(s,1H),7.11(t,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:184.9,165.3,163.6,155.7,147.1,141.8,140.1,139.2,138.3,132.4,129.3,128.5,127.5,126.7,125.4,124.9,117.4,117.3.IRvmax(KBr)cm-1：3070,1645,1523,1442,1342,1301,1230,1045,815,728。(2)化合物10的制備稱取2-(2-氯-5-硝基苯甲?；?-5-(4-氟苯基)-噻吩2.17g(6mmol)溶于6mL乙腈和6mL二氯甲烷中，加入三乙基硅烷6.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液3.0mL，40℃反應(yīng)2h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到2.0g目標(biāo)化合物10，產(chǎn)率96％。m.p.:81.6～82.3℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:7.28(d,J＝2.6Hz,1H),7.17(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),6.66(d,J＝8.7Hz,1H),6.60(dd,J＝8.6Hz,2H),6.19(d,J＝3.5Hz,1H),6.15(t,J＝8.6Hz,2H),5.94(d,J＝3.5Hz,1H),3.44(s,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：163.9,162.2,147.5,143.5,141.5,140.5,140.1,131.3,131.2,131.2,128.1,128.1,128.0,126.1,123.8,123.7,116.7,116.5,34.6.IRvmax(KBr)cm-1：3103,2929,1521,1346,1240,1045,810,742。(3)化合物11的制備稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-氯-5-硝基苯基)-甲基噻吩1.39g(4mmol)，活性炭0.63g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.40g溶于10mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將1.7mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得1.22g白色目標(biāo)化合11，產(chǎn)率92％。m.p.:145.7～146.2℃；1HNMR(600MHz, DMSO-d6)δ：7.62(dd,J＝8.8Hz,2H),7.30(d,J＝3.6Hz,1H),7.22(t,J＝8.8Hz,2H),7.11(d,1H),6.89(d,J＝3.6Hz,1H),6.66(d,1H),6.58～6.54(m,1H),5.73(s,2H),4.12(s,2H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ162.2,160.6,147.0,142.3,140.6,137.6,130.5,130.5,129.6,127.0,126.9,126.8,123.4,119.4,116.3,115.9,115.8,114.6,33.2.IRvmax(KBr)cm-1：3405,3388,3060,1615,1510,1224,834,803。(4)化合物Ⅱ-5的的制備稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-氯-5-氨基苯基)-甲基噻吩0.30g(1mmol)，氰基硼氫化鈉0.25g(4mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖1.09g(5mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢?，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:1，V/V)得到0.34g淡黃色目標(biāo)化合物Ⅱ-5，產(chǎn)率68％。m.p.:140.8～141.3℃，HRMSm/z(ESI):542.1159[M+Na]+,計(jì)算值:542.1175；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ:7.60(dd,J＝8.8,2H),7.28(d,J＝3.6Hz,1H),7.21(t,J＝8.8Hz,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,1H),6.87(d,J＝3.6Hz,1H),6.67(d,J＝2.8Hz,1H),6.56(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),5.82(d,J＝3.7Hz,1H),5.61(d,1H),5.25(d,1H),4.55(s,1H),4.37(d,J＝3.7Hz,1H),4.08(s,3H),4.00(s,1H),3.69(s,1H),3.62(d,J＝7.5Hz,1H),3.47(d,J＝7.5Hz,1H),1.38(s,3H),1.23(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：162.2,160.6,147.6,142.5,140.4,137.2,130.5,130.5,129.3,127.0,127.0,126.7,123.4,118.2,115.9,115.8,114.9,112.7,110.4,104.3,84.9,79.1,72.9,60.1,51.9,33.4,26.7,26.1.IRvmax(KBr)cm-1：3450,3355,2925,1604,1514,1232,1159,1076,837,804。實(shí)施例6：化合物Ⅱ-6的合成(1)化合物12的制備稱取2-甲基-3-硝基苯甲酸4.55g(25mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加4滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3h，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl34.55g(25mmol)加入到15mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入2-(4-氟苯基)噻吩4.45g(25mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-甲基-3-硝基苯甲酰氯溶解在45mLCH2Cl2中，加入到2-(4-氟苯基)噻吩體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)1h，得到墨綠色溶液，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，最后用鹽水洗滌，合并的有機(jī)層。通過硅膠柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)分離得到6.23g目標(biāo)化合物12產(chǎn)率73％。m.p.:126.8～127.4℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.59～7.53(m,3H),7.37(t,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),7.04(t,2H),2.40(s,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:188.0,164.3,162.7,154.2,150.9,142.3,141.6,137.1,131.3,130.8,129.3,129.3,128.3,128.3,126.5,125.7,124.3,116.5,116.3,16.3.IRvmax(KBr)cm-1：3091,1631,1531,1438,1244,1074,825,682。(2)化合物13的制備稱取2-(2-甲基-3-硝基苯甲酰基)-5-(4-氟苯基)-噻吩2.05g(6mmol)溶于6mL乙腈和6mL二氯甲烷中，加入三乙基硅烷6.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液3.0mL，40℃反應(yīng)2h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到1.91g目標(biāo)化合物13，產(chǎn)率97％。m.p.:97.4～98.2℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：6.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.24～6.17(m,3H),6.03(t,J＝8.0Hz,1H),5.77(dd,3H),5.40(d,1H),2.95(s,2H),1.17(s,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.8,156.2,146.3,137.0,136.2,135.8,128.4,125.5,125.3,125.3,122.0,121.9,121.3,121.3,117.6,117.5,110.7,110.5,29.1,9.7.IRvmax(KBr)cm-1：3095,1533,1363,1234,811,777,732。(3)化合物14的制備稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-3-硝基苯基)-甲基噻吩1.31g(4mmol)，活性炭0.63g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.40g溶于10mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將1.7mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得1.16g目標(biāo)化合物14，產(chǎn)率98％。m.p.:116.8～117.3℃；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.57(dd,J＝8.9Hz,2H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),7.18(t,J＝8.9Hz,2H),6.87(t,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝3.6Hz,1H),6.59(d,J＝7.7Hz,1H),6.51(d,1H),4.84(s,2H),4.05(d,2H),2.01(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：162.1,160.5,146.9,144.6,115.9,115.7,113.3,34.1,12.8.IRvmax(KBr)cm-1：3280,3260,3070,1583,1467,1228,1097,825,800,757。(4)化合物Ⅱ-6的合成稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-甲基-3-氨基苯基)-甲基噻吩0.30g(1mmol)，氰基硼氫化鈉0.25g(4mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖1.09g(5mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢?，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:1，V/V)得到3.60g淡黃色目標(biāo)化合物Ⅱ-6，產(chǎn)率72％。m.p.:161.3-161.8℃。HRMSm/z(ESI):522.1709[M+Na]+,計(jì)算值:522.1721；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ:7.49–7.27(m,2H),6.96(dt,4H),6.65(t,2H),6.57(d,1H),5.86(s,1H),4.43(d,1H),4.21(s,2H),4.03(s,2H),3.84(s,1H),3.74(d,2H),2.03(s,3H),1.41(s,3H),1.22(s,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:157.6,156.0,139.9,138.7,136.1,133.7,125.7,125.6,121.9,121.8,121.6,120.5,117.4,116.7,115.3,110.5,110.4,106.5,105.9,99.6,79.7,75.5,70.2,56.1,48.7,29.8,21.5,20.9,7.6.IRvmax(KBr)cm-1：3456,3207,2920,1591,1514,1226,1060,1014,827,790。實(shí)施例7：化合物Ⅱ-7的合成(1)2-氯-4-硝基-4′-乙氧基二苯酮的制備稱取2-氯-4-硝基苯甲酸3.12g(15mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加4滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl33.06g(15mmol)加入到25mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入苯乙醚2.08g(16.5mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-4-硝基苯甲酰氯溶解在8mLCH2Cl2中，加入到苯乙醚體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)12小時(shí)，得到黑綠色溶液。TLC跟蹤，原料大部分反應(yīng)完，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的 有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，每次至少攪拌30分鐘，再用CH2Cl2萃取，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過硅膠柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:40，V/V)分離得到白色固體2.6g，即2-氯-4-硝基-4′-乙氧基二苯酮，產(chǎn)率55％。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.34(d,J＝2.1Hz,1H),8.23(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.74(d,J＝8.9Hz,2H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),6.95(d,J＝9.0Hz,2H),4.13(q,J＝7.0Hz,2H),1.46(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：191.7,164.3,148.7,145.0,132.51,132.4,129.5,128.1,125.2,121.9,114.7,64.1,14.6。(2)化合物15的制備稱取2-氯-4-硝基-4′-乙氧基二苯酮0.63g(2mmol)溶于6mL乙腈中，加入三乙基硅烷1.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液0.5mL，40℃，反應(yīng)12h，每隔6h補(bǔ)加三乙基硅烷1mL，三氟化硼乙醚溶液0.5mL，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到固體0.50g，即目標(biāo)化合物15，產(chǎn)率92％。m.p.:51.4～52.7℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.23(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.26(d,J＝8.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.6Hz,2H),6.84(d,J＝8.6Hz,2H),4.09(s,2H),4.01(q,J＝7.0Hz,2H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.9,146.9,146.8,134.9,131.2,130.1,129.4,124.7,121.8,114.8,63.5,38.5,14.9.IRvmax(KBr)cm-1：2979,1615,1534,1354,1243,1038,908,796,728。(3)化合物16的制備稱取2-氯-4-硝基-4′-乙氧基二苯基甲烷2.92g(10mmol)，活性炭1.5g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.20g溶于30mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將4mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得白色固體2.35g，即目標(biāo)化合物16，產(chǎn)率90％。m.p.:87.1～88.6℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.87～6.78(m,2H),6.72(d,J＝2.4Hz,1H),6.51(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),4.01(q,J＝7.0Hz,2H),3.93(s,2H),3.57(s,2H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：157.3,145.7,134.5,132.4,131.5,129.7,128.8,115.8,114.4,113.9,63.4,37.5,14.9.IRvmax(KBr)cm-1：3469,3370,2960,1882,1621,1510,1218,1169,1113,1044,908,772.(4)化合物Ⅱ-7的制備稱取2-氯-4-氨基-4′-乙氧基二苯基甲烷786mg(3mmol)，氰基硼氫化鈉754mg(12mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖6.0g(27mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)3h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢?，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:2，V/V)得 到白色固體產(chǎn)物0.97g，即目標(biāo)化合物Ⅱ-7，產(chǎn)率70％。m.p.:114.5～115.2℃；HRMSm/z(ESI):486.1644[M+Na]+，計(jì)算值：486.1659；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.05(d,J＝8.6Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.81(d,J＝8.6Hz,2H),6.68(d,J＝2.3Hz,1H),6.55(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),5.82(d,J＝3.7Hz,1H),5.57(d,J＝9.4Hz,1H),5.27(d,J＝5.0Hz,1H),4.58(t,J＝5.3Hz,1H),4.37(d,J＝3.7Hz,1H),4.07(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),3.98(dd,J＝4.9,2.7Hz,1H),3.95(q,J＝7.0Hz,2H),3.78(s,2H),3.66(ddd,J＝13.1,9.2,3.7Hz,1H),3.63～3.57(m,1H),3.50～3.42(m,1H),1.39(s,3H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：156.7,148.1,133.1,132.5,131.1,129.3,124.7,114.1,112.7,112.0,110.4,104.3,84.8,79.2,72.9,62.8,60.5,51.9,36.6,26.7,26.1,14.7.IRvmax(KBr)cm-1:3426,3345,2967,2929,1770,1609,1503,1379,1249,1162,1069,1038,883,796。實(shí)施例8：化合物Ⅱ-8的合成(1)化合物17的制備稱取2-氯-4-硝基苯甲酸3.12g(15mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加4滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3h，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl33.06g(15mmol)加入到25mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入苯乙醚2.08g(16.5mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-4-硝基苯甲酰氯溶解在8mLCH2Cl2中，加入到苯乙醚體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)12h，得到黑綠色溶液。TLC跟蹤，原料大部分反應(yīng)完，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，每次至少攪拌30分鐘，再用CH2Cl2萃取，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過硅膠柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:40，V/V)分離得到白色 固體0.94g，即目標(biāo)化合物17，產(chǎn)率20％。m.p.:86.7～88.7℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.27(d,J＝2.1Hz,1H),8.17(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),7.91(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.59～7.53(m,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.09(t,J＝7.8Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),3.84(q,J＝7.0Hz,2H),0.85(t,J＝7.0Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：192.6,158.9,148.2,147.9,135.7,131.9,131.2,128.9,125.8,124.7,121.7,121.0,112.3,63.8,13.8.IRvmax(KBr)cm-1：3091,2991,1659,1584,1528,1447,1391,1298,1161,1124,1036,949,887,838,763,694。(2)化合物18的制備稱取2-氯-4-硝基-2′-乙氧基二苯酮0.61g(2mmol)溶于6mL乙腈中，加入三乙基硅烷1.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液0.5mL，40℃反應(yīng)48h，每隔24h補(bǔ)加三乙基硅烷1mL，三氟化硼乙醚溶液0.5mL，TLC跟蹤，原料始終反應(yīng)不完，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，硅膠柱色譜分離(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)得到淡黃色固體0.26g，即目標(biāo)化合物18，產(chǎn)率45％,。m.p.:23～24.5℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.97(d,J＝8.5Hz,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(d,J＝7.4Hz,1H),6.90(t,J＝7.4Hz,1H),6.87(d,J＝8.2Hz,1H),4.14(s,2H),4.00(m,J＝6.9,3.5Hz,2H),1.33(td,J＝6.9,1.2Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：156.8,146.6,146.6,134.9,131.1,130.7,128.4,126.21,124.4,121.4,120.5,111.4,63.5,34.1,14.8.IRvmax(KBr)cm-1：2984,1600,1522,1457,1396,1348,1239,1113,1039,922,891,817,743。(3)化合物19的制備稱取2-氯-5-硝基-2′-乙氧基二苯基甲烷1.1g(4mmol)，活性炭0.57g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.38g溶于10mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將1.5mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓除去乙醇，加水?dāng)嚢?，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓濃縮得淡黃色固體0.76g，即目標(biāo)化合物19，產(chǎn)率77％。m.p.:58.4～59.5℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ：7.16(t,J＝7.0Hz,1H),6.99(d,J＝6.8Hz,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(dd,J＝7.1,4.2Hz,2H),6.70(d,J＝2.1Hz,1H),6.46(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),4.01(dd,J＝15.9,9.0Hz,4H),3.44(s,2H),1.38(t,J＝6.9Hz,3H).13CNMR(75MHz,CDCl3)δ：156.8,145.5,134.8,131.8,130.1,129.0,128.1,127.3,120.3,115.7,113.8,111.2,63.6,32.5,14.9.IRvmax(KBr)cm-1：3432,3348,2983,1619,1505,1451,1248,1116,1044,925,865,799,745。(4)化合物Ⅱ-8的制備稱取2-氯-4-氨基-2′-乙氧基二苯基甲烷0.69g(2.6mmol)，氰基硼氫化鈉655mg(10.4mmol)， 5-位氧化單丙酮葡萄糖6.0g(27mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)嚢瑁宜嵋阴ポ腿?，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:2，V/V)得到白色固體0.88g，即目標(biāo)化合物Ⅱ-8，產(chǎn)率73％。m.p.:54.5～55.2℃；HRMSm/z(ESI):486.1638[M+Na]+，計(jì)算值：486.1659；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.17～7.11(m,1H),6.93(d,J＝8.1Hz,1H),6.88(dd,J＝10.4,8.9Hz,2H),6.81(t,J＝7.4Hz,1H),6.70(d,J＝2.3Hz,1H),6.53(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),5.82(d,J＝3.6Hz,1H),5.56(d,J＝9.4Hz,1H),5.28(d,J＝4.8Hz,1H),4.59(t,J＝5.2Hz,1H),4.37(d,J＝3.6Hz,1H),4.08(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),4.05～3.97(m,3H),3.81(s,2H),3.71～3.57(m,2H),3.51～3.42(m,1H),1.39(s,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H),1.23(s,3H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：156.2,148.1,133.4,131.3,129.4,128.5,127.2,123.4,119.9,112.6,111.9,111.4,110.4,104.3,84.8,79.2,72.9,63.1,60.4,51.9,31.7,26.7,26.1,14.7.IRvmax(KBr)cm-1：3395,2991,2929,1801,1615,1503,1379,1243,1044,846,753。實(shí)施例9：化合物Ⅱ-9的合成(1)化合物20的制備稱取2-氯-4-硝基苯甲酸5.04g(25mmol)溶解在8mL氯化亞砜中，滴加4滴吡啶，然后在50℃下攪拌反應(yīng)3h，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。減壓旋蒸除去氯化亞砜，不經(jīng)處理直接投入下一步反應(yīng)。將無水AlCl34.55g(25mmol)加入到15mLCH2Cl2中，冷卻至0℃，緩慢加入2-(4-氟苯基)噻吩4.45g(25mmol)，同時(shí)保持溫度在0～5℃，完成加入后，在0℃下攪拌15～20分鐘。然后將上一步制備的2-氯-4-硝基苯甲酰氯溶解在45mLCH2Cl2中，加入到2-(4-氟苯基)噻吩體系中，加入的速度要使溫度保持在0～5℃，反應(yīng)1h，得到墨綠色溶液，停止反應(yīng)。通過在劇烈攪拌和冷卻下將其加入至80mL2NHCl中，猝滅反應(yīng)混合物，在20～25℃下攪拌20分鐘，然后分離各相。有機(jī)相用2NHCl洗滌，合并的水相用CH2Cl2萃取。收集的有機(jī)相用飽和 NaHCO3溶液洗滌兩次，最后用鹽水洗滌合并的有機(jī)層。通過硅膠柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯：石油醚＝1:20，V/V)分離得到白色固體6.73g，即目標(biāo)化合物20，產(chǎn)率75％。m.p:62.8-63.4℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.36(d,J＝2.1Hz,1H),8.25(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.68～7.63(m,3H),7.34(d,J＝4.0Hz,1H),7.28(d,J＝4.0Hz,1H),7.14(t,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：184.6,164.4,162.8,154.8,149.0,143.9,140.9,137.3,132.7,129.5,129.2,129.1,128.4,128.4,125.5,124.4,121.8,116.5,116.7.IRvmax(KBr)cm-1：3105,2925,1744,1517,1346,1234,913,790,728。(2)化合物21的制備稱取2-(2-氯-4-硝基苯甲?；?-5-(4-氟苯基)-噻吩2.17g(6mmol)溶于6mL乙腈和6mL二氯甲烷中，加入三乙基硅烷6.0mL，緩慢加入三氟化硼乙醚溶液3.0mL，40℃反應(yīng)2h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。滴加飽和碳酸氫鈉溶液攪拌30分鐘，攪拌處理兩次，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相，減壓得到固體2.02g，即目標(biāo)化合物21，產(chǎn)率97％。m.p.:131.6～132.2℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：8.27(d,J＝2.3Hz,1H),8.07(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.48(dd,J＝8.7Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),7.07(d,J＝3.6Hz,1H),7.03(t,J＝8.7Hz,2H),6.81(d,J＝3.6Hz,1H),4.33(s,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ:163.1,161.5,147.2,145.2,142.8,139.2,134.7,131.0,130.5,130.4,127.5,127.3,127.3,124.8,123.0,122.0,115.9,115.8,33.82.IRvmax(KBr)cm-1：3068,2920,1521,1350,1230,1043,827,740。(3)化合物22的制備稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-氯-4-硝基苯基)-甲基噻吩1.39g(4mmol)，活性炭0.63g，F(xiàn)eCl3·6H2O0.40g溶于10mL無水乙醇中，加熱攪拌至80℃回流，將1.7mL水合肼緩慢滴加到反應(yīng)中，40分鐘后，TLC跟蹤，原料反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，熱過濾，濃縮濾液，加入冷水?dāng)嚢韬笪龀霭咨腆w，抽濾，干燥，得白色固體1.28g，即目標(biāo)化合22，產(chǎn)率97％。m.p.:163.4～164.1℃；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ：7.56(dd,J＝8.3,5.5Hz,2H),7.23(d,J＝3.5Hz,1H),7.17(t,J＝8.2Hz,2H),7.04(d,J＝8.3Hz,1H),6.79(d,J＝3.5Hz,1H),6.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.51(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),5.31(s,2H),4.03(s,2H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ：162.2,160.6,149.0,144.0,140.2,133.0,131.3,130.6,130.6,126.9,126.1,123.8,123.4,123.3,115.9,115.8,113.8,113.8,113.1,39.5,32.3.IRvmax(KBr)cm-1：3360,3274,3075,1611,1508,1313,1026,831,667。(4)化合物Ⅱ-9的制備稱取2-(4-氟苯基)-5-(2-氯-4-氨基苯基)-甲基噻吩0.30g(1mmol)，氰基硼氫化鈉0.25g(4mmol)，5-位氧化單丙酮葡萄糖1.09g(5mmol)，4A分子篩10粒，加入10mL甲醇中，加熱至70℃回流反應(yīng)4h，TLC跟蹤，反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑，加入蒸餾水?dāng)? 拌，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，收集有機(jī)相。硅膠柱色譜分離(乙酸乙酯：石油醚＝1:1，V/V)得到淡黃色固體產(chǎn)物0.37g，即目標(biāo)化合物II-9，產(chǎn)率74％。m.p.:110.8～111.3℃；HRMSm/z(ESI):542.1162[M+Na]+,計(jì)算值:542.1175；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ：7.45(s,2H),7.02(dd,4H),6.73(d,2H),6.54(d,J1H),5.90(s,1H),4.48(s,1H),4.24(s,1H),4.19(s,1H),4.09(s,2H),3.78(d,3H),1.46(s,3H),1.28(s,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ：162.9,161.3,146.8,143.2,141.6,134.6,131.4,130.9,130.9,127.3,127.2,127.1,126.1,122.7,115.8,115.6,114.7,113.2,111.8,104.7,85.1,80.2,75.0,61.3,53.3,33.0,26.7,26.8.IRvmax(KBr)cm-1：3427,3328,2927,1616,1514,1380,1232,1163,1074,833,808。實(shí)施例10：對腫瘤細(xì)胞的生長抑制實(shí)驗(yàn)1、受試化合物按照以上實(shí)施例的方法制備2、通過MTT法檢測化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性，并得出各化合物的IC503、材料和方法(1)細(xì)胞株：人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株A431(購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫)人肺癌細(xì)胞株A549(購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480(購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫)(2)試劑和耗材：MTT(MPBIO)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(CorningCostar)胎牛血清(Hyclone)培養(yǎng)基(Invitrogen)酶標(biāo)儀(ThermoMULTISKANMK3)4、實(shí)驗(yàn)步驟(1)細(xì)胞培養(yǎng)A431和A549細(xì)胞使用含有20％胎牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL鏈霉素、2mML-Glu的DMEM高糖培養(yǎng)基，SW480細(xì)胞使用含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL鏈霉素、2mML-Glu的DMEM高糖培養(yǎng)基，在飽和濕度、37℃和5％CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長至約80％～90％匯合時(shí)，將細(xì)胞按適當(dāng)比例傳代，約2～3d傳代1次。(2)化合物的配置及儲存化合物用DMSO溶解后儲存于-20℃。臨用前用培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，并使DMSO終濃度為0.5％。(3)細(xì)胞接種及藥物處理收集對數(shù)生長期細(xì)胞，計(jì)數(shù)，用相應(yīng)培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞至合適濃度，按一定細(xì)胞數(shù)(A4313000cell/孔，A5492500cell/孔，SW4805000cell/孔)接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種100μL細(xì)胞懸液，在飽和濕度、37℃和5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。用培養(yǎng)基將待測化合物稀釋至適當(dāng)濃度，每個(gè)化合物做8個(gè)梯度，2個(gè)復(fù)孔，按100μL/孔加入細(xì)胞。放入飽和濕度、37℃和5％CO2培養(yǎng)箱中孵育72h。加入MTT(儲存濃度：5mg/mL)20μL/孔，置于飽和濕度、37℃和5％CO2培養(yǎng)箱中孵育4h。吸棄孔內(nèi)液體，加入DMSO150μL/孔，震蕩10分鐘，待甲臜完全溶解后，在酶標(biāo)儀上測定570nm波長處的吸光度，以630nm處吸光度作為參比，計(jì)算抑制率。(4)藥物對腫瘤細(xì)胞生長抑制率的計(jì)算方式如下：腫瘤細(xì)胞生長抑制率％＝[1-(ODs-ODNC)/(ODPC-ODNC)]×100％其中：ODS：樣品孔的吸光值(細(xì)胞+待測化合物+MTT)ODPC：對照孔的吸光值(細(xì)胞+DMSO+MTT)ODNC：調(diào)零孔的吸光值(培養(yǎng)基+DMSO+MTT)ODs＝OD570s-OD630sODPC＝OD570對照-OD630對照ODNC＝OD570調(diào)零-OD630調(diào)零(5)藥物對腫瘤細(xì)胞生長抑制曲線的擬合及IC50的計(jì)算采用GraphpadPrism5擬合藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制曲線，并得出IC50值。(6)本實(shí)驗(yàn)每組設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)以臨床使用的抗腫瘤藥物吉非替尼為陽性對照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，受試化合物對3種腫瘤細(xì)胞株的增殖都具有不同程度的抑制作用。所有化合物對于A431細(xì)胞均具有明顯的抑制作用，尤其是化合物Ⅱ-9對于A431細(xì)胞的生長抑制作用較顯著。同時(shí)化合物Ⅱ-9在A549腫瘤細(xì)胞上表現(xiàn)出比吉非替尼更好的活性，表明這些化合物具有在抗腫瘤方面的用途。表1受試化合物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的IC50(μM)化合物SW480A549A431吉非替尼12.54±0.3118.48±1.344.12±0.29Ⅱ-146.12±3.2543.33±9.3034.62±0.96Ⅱ-235.27±0.1648.43±0.2718.84±3.27Ⅱ-314.58±0.3419.49±1.3211.25±1.76Ⅱ-467.06±14.17>100>100Ⅱ-522.37±4.26155.320.08±0.92Ⅱ-646.44±2.78>100102.70±3.39Ⅱ-779.46±8.46>10078.71±25.30Ⅱ-852.28±8.7870.88±8.1434.99±2.18Ⅱ-98.57±2.7915.24±6.645.15±0.40當(dāng)前第1頁1 2 3