一種蛋白質(zhì)接枝天然多糖及其制備方法及用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)接枝天然多糖及其制備方法及用途，具體的涉及一種生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖及其制備方法與用途，屬于天然高分子改性領(lǐng)域。本發(fā)明的生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖是將殼寡糖溶解后，與生物蛋白質(zhì)溶液在催化劑微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下得到。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，反應(yīng)物質(zhì)均為天然高分子，綠色環(huán)保。制得的水溶性殼寡糖-生物蛋白質(zhì)共聚物具有良好的成膜性、吸濕保濕性和抗氧化作用。
【專利說明】一種蛋白質(zhì)接枝天然多糖及其制備方法及用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬天然高分子改性領(lǐng)域，具體涉及一種蛋白質(zhì)接枝天然多糖，特別是魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物接枝殼寡糖及其制備方法、用途。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)和多糖是共存于食品乳化體系中最重要的兩類生物大分子，是影響食品結(jié)構(gòu)和質(zhì)構(gòu)的主要因素。蛋白質(zhì)因能在液液或氣液界面上形成吸附層來降低界面張力而多在膠體體系中充當(dāng)乳化劑，多糖則由于其良好的增稠和持水特性而常用做穩(wěn)定劑，由此賦予了體系不同于兩者單獨(dú)存在時(shí)的功能表現(xiàn)。共價(jià)鍵結(jié)合的蛋白質(zhì)與多糖形成接枝物，既保留了蛋白質(zhì)的表面活性又具有多糖的親水性能，與蛋白質(zhì)多糖弱相互作用形成的混合物對(duì)比，對(duì)環(huán)境條件具有較高的適應(yīng)性。
[0003]當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)和多糖位于同一體系時(shí)，在適合的溫度，pH值，離子強(qiáng)度等條件下，二者之間會(huì)通過相互作用而發(fā)生交聯(lián)。這些相互作用分為范德華力，氫鍵，靜電吸引，疏水相互作用及熱力學(xué)不相容性的次級(jí)力等，這都和他們所處的體系息息相關(guān)。其中，比較常見的是美拉德(Mailard)反應(yīng)，這些相互作用得到的產(chǎn)物具備優(yōu)良的功能特性，比如較高的溶解性、乳化特性等。 [0004]蛋白質(zhì)的氨基基團(tuán)與糖的還原性羰基末端經(jīng)接枝反應(yīng)可以得到蛋白質(zhì)-糖共價(jià)復(fù)合物。這種基于Maillard反應(yīng)機(jī)理的化學(xué)改性，由于其不需要任何化學(xué)試劑作為催化劑，僅加熱即可進(jìn)行反應(yīng)，被認(rèn)為是一種有效改善蛋白質(zhì)功能特性的綠色方法。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)-糖的接枝物對(duì)于外部環(huán)境因素具有較高的穩(wěn)定性，與以次級(jí)力相結(jié)合的蛋白質(zhì)-糖非共價(jià)復(fù)合物相比，其結(jié)合不受熱或PH值的影響。目前，國內(nèi)外許多學(xué)者已對(duì)卵清蛋白、蛋清蛋白、牛血清蛋白、β_乳球蛋白、大豆分離蛋白、大米蛋白等蛋白質(zhì)與糖類化合物的接枝反應(yīng)進(jìn)行了深入研究。結(jié)果表明，由于親水性糖鏈的共價(jià)接入，蛋白質(zhì)分子的乳化性、溶解性、熱穩(wěn)定性、抗氧化性等功能特性均有顯著的提高。
[0005]國內(nèi)外對(duì)蛋白質(zhì)和糖進(jìn)行接枝改性的傳統(tǒng)方法主要有兩種:干熱法和濕熱法。干熱法由日本Kato教授首先提出，通過控制自發(fā)的美拉德反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)，反應(yīng)是在低于蛋白質(zhì)變性溫度下進(jìn)行的，而且需控制反應(yīng)體系的水分活度使蛋白質(zhì)的氨基處于非聚集的反應(yīng)狀態(tài)。干熱法接枝反應(yīng)步驟如下:將蛋白質(zhì)和糖按照一定的比例溶解于水中，分散均勻后進(jìn)行冷凍干燥，將凍干粉置于一定溫度和相對(duì)濕度環(huán)境下進(jìn)行反應(yīng)。干熱法多用于多糖和蛋白質(zhì)的接枝反應(yīng)，接枝物功能特性較好，但反應(yīng)時(shí)間較長，另外對(duì)反應(yīng)條件的要求較為嚴(yán)格。濕熱法通常是將蛋白質(zhì)和糖按照一定的比例溶解于選定PH值的緩沖溶液中，然后放在一密閉的容器里，使用水浴或者油浴來進(jìn)行反應(yīng)。PH值和溫度對(duì)濕熱法接枝反應(yīng)的速度影響較大，緩沖溶液越呈堿性，溫度越高，體系反應(yīng)速度越快。與干熱法相比，濕熱法制備蛋白質(zhì)-糖接枝產(chǎn)物所需時(shí)間較短，一般需要幾到十幾小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間，但高溫下易發(fā)生蛋白質(zhì)肽鏈的變性和聚集，加速M(fèi)aillard反應(yīng)向高級(jí)階段進(jìn)行，不利于控制反應(yīng)朝有利的方向發(fā)展，多被用于蛋白質(zhì)與小分子糖之間的接枝反應(yīng)。[0006]近年來，積極尋找有效的蛋白質(zhì)-糖接枝反應(yīng)的方法，成為國內(nèi)外研究小組的熱門課題。管軍軍研究了微波輻射加熱方式對(duì)大豆分離蛋白-多糖接枝反應(yīng)的影響，發(fā)現(xiàn)微波加熱能夠顯著促進(jìn)大豆分離蛋白與乳糖、可溶性淀粉之間的接枝反應(yīng)，且其共價(jià)復(fù)合物的功能特性較大豆分離蛋白相比有顯著的提高。齊軍茹通過加入極性有機(jī)溶劑降低反應(yīng)體系的水分活度，建立了液相體系中大豆酸沉蛋白-葡聚糖之間的Maillard反應(yīng)模型，產(chǎn)物的功能性質(zhì)與干熱反應(yīng)的蛋白質(zhì)-多糖復(fù)合物所表現(xiàn)出來的優(yōu)越功能性質(zhì)相當(dāng)。王金水使用超聲波處理技術(shù)促進(jìn)了小麥蛋白與阿拉伯膠、麥芽糊精在水溶液中的接枝反應(yīng)，接枝物的溶解性和熱穩(wěn)定性得到明顯的提高。許彩虹使用高壓反應(yīng)釜裝置探討了大豆7S球蛋白與葡聚糖在壓力作用下的接枝反應(yīng)，在提高接枝程度的同時(shí)，低壓能夠顯著抑制反應(yīng)中的褐變程度，即減少了高級(jí)階段有色物質(zhì)的生成。管永光將脈沖電場處理技術(shù)引入到蛋白質(zhì)-多糖的接枝反應(yīng)中，并對(duì)其接枝物理化性質(zhì)和功能性質(zhì)進(jìn)行探討，高強(qiáng)度電場能夠顯著促進(jìn)蛋白質(zhì)-多糖共價(jià)復(fù)合物的生成，這為低溫條件下制備蛋白質(zhì)-糖接枝物提供了一定參考。
[0007]CN102068965A公開了一種適于蛋白純化的殼聚糖分離介質(zhì)的制備方法，包括如下步驟:(1)在攪拌下，將殼聚糖的乙酸溶液分散于液體石蠟中，在制孔劑環(huán)己烷和少許spanSO存在下，形成殼聚糖微粒；然后在交聯(lián)劑戊二醛的作用下，殼聚糖微粒進(jìn)一步交聯(lián)形成殼聚糖骨架；(2)殼聚糖骨架先進(jìn)行溶脹處理；然后在DMSO/NaOH混合液中，殼聚糖骨架上的羥基與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，在殼聚糖骨架上引入環(huán)氧基，得到接枝后的殼聚糖骨架；(3)將IDA/NaOH混合 溶液加入接枝后的殼聚糖骨架，20-80°C溫度下反應(yīng)l_10h，抽濾即得所述的殼聚糖分離介質(zhì)。
[0008]CN101906213A公開了一種新型的蛋白質(zhì)糖基化接枝方法，包括如下步驟:(1)在擁擠試劑中加入緩沖溶液，攪拌，得到溶液；(2)將蛋白和葡聚糖加入步驟(1)得到的溶液中，攪拌2h后，加入NaN3，在5°C放置24h，再在50_70°C攪拌12_48h后，迅速冷卻至低于25 °C，得到糖基化蛋白產(chǎn)物。
[0009]CN101785522A公開了一種植物蛋白與多糖接枝聚合的方法，包括(I)植物蛋白與多糖接枝共聚:將植物蛋白溶解后，加入多糖得到混合溶液，植物蛋白與多糖的質(zhì)量比為0.1-10:1 ； (2)將混合溶液攪拌2-3小時(shí)后，通過頻率為500-2000赫茲，15_45kV的脈沖電場，脈沖處理時(shí)間為480-2000 μ S，得到共聚物；(3)將共聚物濃縮后噴霧干燥。
[0010]上述現(xiàn)有技術(shù)公開的多是植物蛋白與多糖進(jìn)行接枝，但對(duì)于動(dòng)物蛋白與多糖進(jìn)行接枝的報(bào)道卻較為少見，并且，現(xiàn)有技術(shù)所述制備方法還存在反應(yīng)時(shí)間長、成本較高、反應(yīng)中間體有毒副作用等的問題。
[0011]因此，本發(fā)明提供了一種新的以轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶為催化劑，催化魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物和殼寡糖制備得到蛋白質(zhì)接枝殼寡糖改性物。在殼寡糖上接入魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物合成具有更高生物活性的生物材料，為魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物的深度開發(fā)和應(yīng)用拓展更大的市場空間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種催化魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物接枝殼寡糖的制備方法及其用途。[0013]本發(fā)明所述天然多糖指的是自然界中廣泛存在的纖維素及其衍生物，例如甲殼素類及海藻酸、淀粉等天然高分子材料。本發(fā)明優(yōu)選使用甲殼素類物質(zhì)殼寡糖，是將殼聚糖經(jīng)特殊的生物酶技術(shù)或微波降解技術(shù)降解得到的一種聚合度在2~20之間的寡糖，具有水溶性較好和生物活性高，無毒無免疫原性、易被生物體吸收等諸多優(yōu)良性質(zhì)，是甲殼素、殼聚糖的升級(jí)產(chǎn)品，具有殼聚糖不可比擬的優(yōu)越性，在生物醫(yī)藥行業(yè)得到了廣泛的應(yīng)用。
[0014]本發(fā)明所述蛋白質(zhì)指的是生物蛋白，特別是動(dòng)物蛋白質(zhì)，主要來源是禽類、畜類、魚類和昆蟲等。本發(fā)明優(yōu)選使用魚皮膠原蛋白，是魚類動(dòng)物體內(nèi)含量最豐富的蛋白質(zhì)，它比牛、豬等哺乳動(dòng)物來源的膠原蛋白具有更好的生物相容性，并無免疫原性，膠原蛋白有利于細(xì)胞的粘著與生長，可促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。
[0015]本發(fā)明還優(yōu)選使用魚皮膠原蛋白的水解產(chǎn)物明膠和水解膠原蛋白，該兩種蛋白質(zhì)更易被人體直接吸收，還具有獨(dú)特的吸濕保濕性，外可阻止人體水分過分流失，內(nèi)可預(yù)防自由基對(duì)人體細(xì)胞的傷害，是修復(fù)各種機(jī)體組織損傷的重要生物材料。
[0016]本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用以下的技術(shù)方案:
本發(fā)明提供的生物蛋白質(zhì)接枝殼聚糖，其特征在于:它是以生物蛋白質(zhì)和殼寡糖為底物，轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶為催化劑制備得到的。
[0017]按上述方案，所述的生物蛋白質(zhì)選自魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物明膠和水解膠原蛋白。所述的殼寡糖的分子量為1500-2000。
[0018]按上述方案，所述蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其中殼寡糖的氨基被蛋白質(zhì)取代的取代度為 0.314-0.721。
[0019]本發(fā)明提供的上述蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其制備方法包括:殼寡糖在磷酸鹽緩沖溶液中溶解后，加入預(yù)先在相同的磷酸緩沖溶液中溶解的蛋白質(zhì)，在10-40°C下加入轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶催化接枝反應(yīng)1.0-6.0小時(shí)后，再進(jìn)行后處理。
[0020]按上述反應(yīng)，所述的蛋白質(zhì)和殼寡糖的質(zhì)量比為(0.4-2.0):1.0。
[0021]按上述方案，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH為5.0-7.0。
[0022]按上述方案，所述殼寡糖與磷酸緩沖溶液比例為1.0g:(15-30)ml ;蛋白質(zhì)與磷酸緩沖溶液的比例為(0.4-2.0) g:25 ml。
[0023]按上述反應(yīng)，所述的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是粗制轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶經(jīng)超濾膜對(duì)酶液濃縮純化后冷凍干燥制得。
[0024]按上述反應(yīng)，所述的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和殼寡糖的質(zhì)量比為(0.10-0.35):1.0。
[0025]按上述反應(yīng)，所述的催化接枝反應(yīng)是在pH為5.0-7.0的條件下反應(yīng)1.0-6.0小時(shí)。
[0026]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明以轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶為催化劑，催化同一生物來源的三種不同蛋白質(zhì)和殼寡糖合成以酰胺鍵連接的蛋白質(zhì)-殼寡糖接枝共聚物，解決了傳統(tǒng)采用化學(xué)交聯(lián)劑進(jìn)行酰胺化反應(yīng)存在的反應(yīng)時(shí)間長，成本較高，反應(yīng)中間體有毒副作用的問題。酶催化反應(yīng)條件溫和，環(huán)境友好，工藝簡單；制得的可溶性蛋白質(zhì)接枝殼寡糖具有良好的吸濕保濕性、抗氧化性。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明所述生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖可用于食品、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域。在綠色食品或功能食品中，為人體同時(shí)提供蛋白質(zhì)與多糖兩種機(jī)體所需的營養(yǎng)物質(zhì)與能量來源；在化妝品領(lǐng)域，可作為一種同時(shí)具有吸濕保濕性能和抗氧化作用的組分直接應(yīng)用至護(hù)膚品中；在醫(yī)藥領(lǐng)域，則由于本發(fā)明所述生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖具有良好的抗氧化性，可應(yīng)用于燒傷與燙傷等創(chuàng)傷過程中的恢復(fù)過程，預(yù)防并減輕由于過氧化而導(dǎo)致的傷口炎癥反應(yīng)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為實(shí)施例2制備的膠原蛋白接枝殼寡糖和殼寡糖的紅外圖譜；
圖2為實(shí)施例1-4制備的膠原蛋白接枝殼聚糖對(duì)過氧化氫的清除率；
圖3為實(shí)施例1-4制備的膠原蛋白接枝殼聚糖對(duì)DPPH的清除率；
其中，附圖2、3中的取代度分別對(duì)應(yīng)相應(yīng)的實(shí)施例，取代度0.314代表實(shí)施例1，取代度0.409代表實(shí)施例2，取代度0.521代表實(shí)施例3，取代度0.686代表實(shí)施例4，取代度0.721代表實(shí)施例5 ；Vc代表維生素C。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本申請(qǐng)之發(fā)明，但實(shí)施例不應(yīng)視作對(duì)本發(fā)明權(quán)利的限定。
[0030]實(shí)施例1
魚皮膠原蛋白接枝殼寡糖，其制備方法如下:
(1)配制pH為5.0的磷酸緩沖溶液，量取15 ml磷酸緩沖溶液至三口燒瓶中，加入1.0g殼寡糖，使其充分溶解；另將0.4 g魚皮膠原蛋白溶解于25 ml磷酸緩沖溶液中；
(2)催化接枝:在步驟(1)所得的殼寡糖溶液中，依次加入步驟(1)所得的魚皮膠原蛋白緩沖溶液和0.10 g轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在10°C下磁力攪拌I小時(shí)；
(3)后處理:將步驟(2)反應(yīng)得到的溶液繼續(xù)升溫至100°C，并磁力攪拌10min后，經(jīng)抽濾，透析三天純化，冷凍干燥后得到魚皮膠原蛋白接枝殼寡糖。
[0031]經(jīng)測定:該魚皮膠原蛋白接枝殼寡糖中氨基基團(tuán)被魚皮膠原蛋白取代的取代度為
0.314。該魚皮膠原蛋白接枝殼寡糖紅外表征的紅外圖譜見圖1，圖中:在1654 cnT1和1545CnT1處出現(xiàn)的吸收峰，分別歸屬于酰胺I帶和酰胺II帶，說明魚皮膠原蛋白中酰胺基已成功接枝到殼寡糖的氨基上，得到以酰胺鍵連接的魚皮膠原蛋白-殼寡糖共聚物。
[0032]實(shí)施例2
水解膠原蛋白接枝殼寡糖，其制備方法如下:
(1)配制pH為6.0的磷酸緩沖溶液，量取20 ml磷酸緩沖溶液至三口燒瓶中，加入1.0g殼寡糖，使其充分溶解；另將0.8 g由膠原蛋白經(jīng)堿性蛋白酶酶解而制得的水解膠原蛋白溶解于25 ml磷酸緩沖溶液中；
(2)催化接枝:在步驟(1)所得的殼寡糖溶液中，依次加入步驟(1)所得的水解膠原蛋白緩沖溶液和0.15g轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在20°C下磁力攪拌3小時(shí)；
(3)后處理:將步驟(2)反應(yīng)得到的溶液繼續(xù)升溫至100°C，并磁力攪拌10min后，經(jīng)抽濾，透析三天純化，冷凍干燥后得到水解膠原蛋白接枝殼寡糖。
[0033]經(jīng)測定:該水解膠原蛋白接枝殼寡糖中氨基基團(tuán)被水解膠原蛋白取代的取代度為 0.409。
[0034]實(shí)施例3
魚明膠接枝殼寡糖，其制備方法如下:(I)配制pH為7.0的磷酸緩沖溶液，量取25 ml磷酸緩沖溶液至三口燒瓶中，加入1.0g殼寡糖，使其充分溶解；另將1.2g經(jīng)酸法水解膠原蛋白制得的魚明膠溶解于25 ml磷酸緩沖溶液中；
(2 )催化接枝:在步驟(1)所得的殼寡糖溶液中，依次加入步驟(1)所得的明膠緩沖溶液和0.20 g轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在40°C下磁力攪拌6小時(shí)；
(3)后處理:將步驟(2)反應(yīng)得到的溶液繼續(xù)升溫至100°C，并磁力攪拌10 min后，經(jīng)抽濾，透析三天純化，冷凍干燥后得到魚明膠接枝殼寡糖。
[0035]經(jīng)測定:該魚鱗膠原蛋白接枝殼聚糖中氨基基團(tuán)被魚明膠取代的取代度為0.521。
[0036]實(shí)施例4
魚明膠接枝殼寡糖，其制備方法如下:
(1)配制pH為6.0的磷酸緩沖溶液，量取30 ml醋酸溶液至三口燒瓶中，加入1.0 g殼聚糖，使其充分溶解；另將2.0 g經(jīng)酸法水解膠原蛋白制得的魚明膠溶解于30 ml磷酸緩沖溶液中；
(2)催化接枝:在步驟(1)所得的殼寡糖溶液中，依次加入步驟(1)所得的魚明膠緩沖溶液和0.35 g轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在30°C下磁力攪拌5.0小時(shí)；
(3)后處理:將步驟(2)反應(yīng)得到的溶液繼續(xù)升溫至100°C，并磁力攪拌10min后，經(jīng)抽濾，透析三天純化，冷凍干燥后得到魚明膠接枝殼寡糖。
[0037]經(jīng)測定:該魚明膠接枝殼寡糖中氨基基團(tuán)被魚明膠取代的取代度為0.686。
[0038]實(shí)施例5
水解膠原蛋白接枝殼寡糖，其制備方法如下:
(1)配制pH為6.0的磷酸緩沖溶液，量取25 ml磷酸緩沖溶液至三口燒瓶中，加入1.0g殼寡糖，使其充分溶解；另將2.0 g由膠原蛋白經(jīng)堿性蛋白酶酶解而制得的水解膠原蛋白溶解于25 ml磷酸緩沖溶液中；
(2)催化接枝:在步驟(1)所得的殼寡糖溶液中，依次加入步驟(1)所得的水解膠原蛋白緩沖溶液和0.3 g轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在30°C下磁力攪拌4小時(shí)；
(3)后處理:將步驟(2)反應(yīng)得到的溶液繼續(xù)升溫至100°C，并磁力攪拌10min后，經(jīng)抽濾，透析三天純化，冷凍干燥后得到水解膠原蛋白接枝殼寡糖。
[0039]經(jīng)測定:該水解膠原蛋白接枝殼寡糖中氨基基團(tuán)被水解膠原蛋白取代的取代度為0.721。
[0040]將上述各實(shí)施例制備的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖進(jìn)行如下性能表征:
(I)吸濕性實(shí)驗(yàn):精確稱取0.5 g實(shí)施例1、2、3制備的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖各兩份，分別加入直徑3 cm的稱量瓶中，將稱量瓶分別放置在兩個(gè)干燥器中，一個(gè)干燥器內(nèi)放有硫酸銨飽和溶液(相對(duì)濕度RH=81%)，另一個(gè)干燥器內(nèi)放有飽和碳酸鈉溶液(RH=43%)，放置時(shí)間為24 h，分別稱量樣品放置前質(zhì)量(Wtl)和放置后質(zhì)量(Wn)。根據(jù)下式計(jì)算吸濕率:
【權(quán)利要求】
1.生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其特征在于:它是以生物蛋白質(zhì)和殼寡糖為底物，轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶為催化劑制備得到的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其特征在于:所述的生物蛋白質(zhì)選自魚皮膠原蛋白及其水解產(chǎn)物明膠和水解膠原蛋白，所述的殼寡糖的分子量為1500-2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其特征在于:所述蛋白質(zhì)接枝殼寡糖，其中殼寡糖的氨基被蛋白質(zhì)取代的取代度為0.314-0.721。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的任意一種蛋白接枝殼寡糖的制備方法，其特征在于:它是先將殼寡糖溶于磷酸鹽緩沖溶液中，與蛋白質(zhì)溶液在轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下，進(jìn)行接枝反應(yīng)，并進(jìn)行后處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物蛋白質(zhì)接枝天然多糖的制備方法，其特征在于:所述的接枝反應(yīng)是在PH為5.0-7.0的條件下，將殼寡糖溶液與蛋白質(zhì)溶液在10-40°C反應(yīng)1.0-6.0 小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖的制備方法，其特征在于:殼寡糖溶解于pH為5.0-7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，殼寡糖與磷酸鹽緩沖溶液比例為1.0 g:(15-30)ml ;蛋白質(zhì)溶解于pH為5.0-7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，蛋白質(zhì)與磷酸鹽緩沖溶液的比例為(0.4-2.0) g:25ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖的制備方法，其特征在于:所述的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是粗制轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶經(jīng)超濾膜對(duì)酶液濃縮純化后冷凍干燥制得。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖的制備方法，其特征在于:蛋白質(zhì)和殼寡糖的質(zhì)量比為(0.4-2.0):1.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖的制備方法，其特征在于:轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和殼寡糖的質(zhì)量比為(0.10-0.35):1.0。
10.權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的蛋白質(zhì)接枝殼寡糖可以在藥品、食品、化妝品領(lǐng)域中起到吸濕保濕及抗氧化的作用。
【文檔編號(hào)】C08H1/00GK103980500SQ201410163891
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年4月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月23日
【發(fā)明者】帥放文, 王向峰, 章家偉 申請(qǐng)人:湖南爾康北山明膠有限公司