專利名稱：:制備l-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)丁酸的新方法本發(fā)明是有關(guān)制備L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)丁酸的新方法。該酸具有除草活性并且已被周知用作有效的除草劑(見日本專利公開56210/86號說明書或美國專利4，265，654號說明書)。制備(Ⅰ)式表示的L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)-丁酸(下文縮寫為“L-AMPB”)的已知方法包括將抗生素物質(zhì)SF-1293即L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)-丁酰-L-丙氨酰-L-丙氨酸進(jìn)行水解(見日本專利申請首次公開“KoKai”85538/73號)，并且用微生物酶分解SF-1293物質(zhì)(見日本專利申請首次公開“KoKai”31890/74號)。在抗生素物質(zhì)SF-1293中含有SF-1293分子一部分并有除草活性的L-AMPB(也稱為“bialaphos”;見日本專利公開639/76號和美國專利4，309，208號)。除此之外，已知的方法中還有用化學(xué)合成方法首先制得AMPB的外消旋混合物(見日本專利申請首次公開“KoKai”91019/73和84529/79號)，然后借助微生物酶光學(xué)離析上述外消旋AMPB產(chǎn)物，得到L-AMPB。本發(fā)明的發(fā)明者最近又報(bào)道了另外一種方法，包括培養(yǎng)制造L-AMPB的鏈霉菌屬菌株，隨后直接從得到的培養(yǎng)肉湯中回收L-AMPB(見日本專利申請首次公開“KoKai”47485/82號)。為了制備、研究和開發(fā)作為除草劑的象L-AMPB這樣有除草活性的物質(zhì)并且以商業(yè)化除草劑產(chǎn)品實(shí)際投入市場，必不可少地要進(jìn)行某些研究以改進(jìn)制備除草劑物質(zhì)的方法，使所述的方法價(jià)格低廉而又能大規(guī)模生產(chǎn)。與此同時(shí)還要進(jìn)行大量的研究和開發(fā)工作以增強(qiáng)所述物質(zhì)的安全性和除草活性。如作為上述化學(xué)合成方法制得的AMPB是一種L-AMPB和D-AMPB的混合物。但D-AMPB本身基本上沒有除草活性。此外，D-AMPB是非天然物質(zhì)并且當(dāng)施用于土壤時(shí)，它由于土壤細(xì)菌的分解作用緩慢以致留在土壤中并在某些情況下可能引起環(huán)境污染。當(dāng)L-AMPB是用合成方法制備時(shí)，首先可能生成外消旋混合物形式的AMPB。因此將L-AMPB和D-AMPB從外消旋混合物中彼此分開是必要的。所以用合成的方法制備L-AMPB不僅麻煩而且產(chǎn)率也低。相反，利用微生物和微生物酶制備L-AMPB的方法能夠提供一種僅僅得到自然生成的L-AMPB物質(zhì)。因?yàn)橐恍]有起除草作用而留在土壤中的L-AMPB很容易被土壤細(xì)菌分解和代謝，所以它不會長時(shí)間地留在土壤中。這種自然生成的L-AMPB被認(rèn)為是一種沒有環(huán)境污染危險(xiǎn)的理想除草劑。基于上述原因，本發(fā)明的發(fā)明者做了大量的研究工作試圖將制備AMPB的化學(xué)合成方法大規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)能與用微生物方法制備L-AMPB具有唯一性的特點(diǎn)結(jié)合起來，確定一種生產(chǎn)L-AMPB大規(guī)模選擇性的方法。L-AMPB可以被認(rèn)為是一種α-氨基酸衍生物。有關(guān)這些通常組成蛋白質(zhì)的普通α-氨基酸，已經(jīng)知道在特殊的氨基轉(zhuǎn)移酶作用下，由相應(yīng)的2-氧代酸經(jīng)氨基轉(zhuǎn)移作用生成α-氨基酸。因此，本申請發(fā)明者一直熱衷于從相應(yīng)的2-氧代酸制備L-AMPB的研究，并對2-氧代酸作了大量研究。結(jié)果意外地發(fā)現(xiàn)在至少一種氨基給予體存在下，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸(以下縮寫為OMPB)用某種氨基轉(zhuǎn)移酶處理或用能產(chǎn)生這種氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物處理時(shí)，在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)時(shí)間內(nèi)，OMPB能以令人注目的產(chǎn)率轉(zhuǎn)變成L-AMPB。本發(fā)明提供了一種由(Ⅰ)式表示的L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)丁酸的制備方法，它包括將(Ⅱ)式表示的4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸，在一種或多種氨基給予體存在下，用一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶或者用一種或多種能產(chǎn)生一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物處理。在進(jìn)行本發(fā)明方法中，使氨基轉(zhuǎn)移酶或能產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物與在水成液反應(yīng)介質(zhì)中的OMPB和氨基給予體化合物發(fā)生反應(yīng)。水成液反應(yīng)介質(zhì)含有OMPB和溶解在其中作為氨基給予體的化合物。本發(fā)明的方法中，當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)的pH值調(diào)節(jié)在7.5或更高時(shí)，通常進(jìn)行OMPB到L-AMPB的轉(zhuǎn)化反應(yīng)可能最佳。調(diào)節(jié)pH值可通過加氫氧化鈉或適宜的緩沖溶液來完成。選定理想的反應(yīng)條件，使反應(yīng)介質(zhì)的溫度和pH范圍最適宜氨基轉(zhuǎn)移酶或產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物參與反應(yīng)。通常在室溫至60℃的溫度范圍適宜進(jìn)行反應(yīng)，優(yōu)選的溫度范圍是25～50℃。用作反應(yīng)起始化合物的OMPB是一種已知物質(zhì)。例如在日本專利申請首次公開“KoKai”92897/81號或美國專利4，399，287號說明書中，描述了OMPB的制備和它的物理化學(xué)性質(zhì)。在本發(fā)明的方法中，起始OMPB化合物通常被溶解在反應(yīng)介質(zhì)中，在反應(yīng)初最佳的起始濃度范圍在0.10-100mg/ml。本發(fā)明的方法所使用的微生物可以是放線菌、細(xì)菌、酵母和真菌(霜菌)。可用于本發(fā)明的典型放線菌綱例子可以指出的有白色鏈霉菌、灰色鏈霉菌、吸水鏈霉菌、青紫色鏈霉菌、產(chǎn)綠色鏈霉菌、師崗鏈霉菌、肉桂鏈輪絲菌、地中海諾卡氏菌、Nocardiopsisdassonvillei、Saccharopolysporahirsuta、Kitasa-tosporiaphosalacinea、碳樣小單孢菌、假普通鏈孢囊菌等等。用在本發(fā)明方法中作為例舉的細(xì)菌包括枯草芽孢桿菌、藤黃細(xì)球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏桿菌、綠膿桿菌、洋蔥假單孢菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、谷氨酸棒桿菌及其它。用于本發(fā)明方法的典型酵母有橢園醞酒酵母、白假絲酵母、新型隱球酵母、漢遜德巴利酵母、施氏漢遜酵母等等。用于本發(fā)明方法中作為例舉的真菌有黃曲霉、土曲霉、Mucorspinescens、出芽短梗霉、球毛殼、繩狀青霉、Gliocladiumvireus等。上述放線菌、細(xì)菌、真菌和酵母菌的種類可以是它們各自的典型培養(yǎng)菌株，這些菌株已被寄存和貯藏在周知的微生物公共存放處并且現(xiàn)在可以大量地從這些寄存處取出。在本發(fā)明方法中，可用的優(yōu)選微生物實(shí)例有吸水鏈霉菌SF-1293菌株(FERMBP-130或ATCC21705，見日本專利公開639/76號或美國書3，832，394號)，它就是通常所說的產(chǎn)生SF-1293物質(zhì)鏈霉菌菌株，和其突變菌株、吸水鏈霉菌NP-50菌株(FERMP-7804或FERMBP-1368;見日本專利申請首次公開“KoKai”58589/86號或歐洲專利申請公開0173327號)以及變鉛青鏈霉菌66菌株(FERMBP-737;見日本專利申請首次公開“KoKai”175889/84號或歐洲專利申請公開0196375號說明書)。另外，只要在氨基給予體存在下能產(chǎn)生將OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB氨基轉(zhuǎn)移酶活性的酶，在本發(fā)明中也能使用任何其它的微生物。吸水鏈霉菌特性已在日本專利公開639/76號或美國書3，832，394號進(jìn)行了描述。吸水鏈霉菌NP-50菌株、(FERMBP-1368)具有和前面所述SF-1293菌株相同的微生物特性，只是NP-50菌株與SF-1293菌株遺傳特性不同，因?yàn)镹P-50菌株缺乏產(chǎn)生SF-1293物質(zhì)的生物合成能力(見日本專利申請首次公開“KoKai”58589/86號或歐洲專利申請公開0173327號)。再有變鉛青鏈霉菌66菌株(FERMBP-737)的微生物特征已在日本專利申請首次介開“KoKai”175889/84號中進(jìn)行了描述。上面敘述的微生物菌種中，具有FERMP-數(shù)字的菌種已經(jīng)寄存貯藏在日本公共寄存處“國際貿(mào)易和工業(yè)部，工業(yè)科學(xué)技術(shù)暑發(fā)酵研究院”地址日本1-3，Higashi1-chome，Yatabe-machi，TsuKuba-gun，Ibaraki-ken。那些具有FERMBP-數(shù)字的菌種也已經(jīng)寄存和貯藏在按布達(dá)佩斯條約指定的同樣的日本公共寄存處。用于本發(fā)明方法的酶，即氨基轉(zhuǎn)移酶，可以是任何在氨基給予體存在下使OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB具有氨基轉(zhuǎn)移酶活性的酶。在本發(fā)明方法中的優(yōu)選氨基轉(zhuǎn)移酶實(shí)例包括市場上可以買到的谷氨酸草酰乙酸氨基轉(zhuǎn)移酶(通?？s寫為GOT)(國際酶分類號為EC2，6，1，1)和市場上可以買到的谷氨酸丙酮酸氨基轉(zhuǎn)移酶(通?？s寫為GPT)(國際酶分類號為EC2，6，1，2)以及那些在L-谷氨酸作為氨基給予體存在下有能使OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB氨基轉(zhuǎn)移酶活性的酶。這些氨基轉(zhuǎn)移酶即可以單獨(dú)使用又可以二種或多種結(jié)合使用。其中優(yōu)選的是在天冬氨酸作為氨基給予體存在下，具有將2-氧代戊二酸轉(zhuǎn)化成谷氨酸酶促活性的氨基轉(zhuǎn)移酶(即這種也有所謂GOT活性的氨基轉(zhuǎn)移酶)和在谷氨酸作為氨基給予體存在下，具有將OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB氨基轉(zhuǎn)移酶活性的結(jié)合或體系。例如作為這種有所謂GOT活性的氨基轉(zhuǎn)移酶可能使用商業(yè)上可以買到的谷氨酸草酰乙酸氨基轉(zhuǎn)移酶(國際酶分類號EC2，6，1，1);或者用一種方便的方法從有GOT活性的一種微生物中已經(jīng)提取過的具有GOT活性的氨基轉(zhuǎn)移酶。例如吸水鏈霉菌SF-1293菌株(見日本的專利申請首次公開“KoKai”47485/82號;FERMBP-130;ATCC21705)。這些具有GOT活性的氨基轉(zhuǎn)移酶可再單獨(dú)或結(jié)合使用。對于在L-谷氨酸作為氨基給予體存在下能把OMPB轉(zhuǎn)化成L-OMPB并且與所述的有GOT活性氨基轉(zhuǎn)移酶結(jié)合使用的第二種氨基轉(zhuǎn)移酶，只要在L-谷氨酸存在下能轉(zhuǎn)化OMPB成L-AMPB，可以使用任意的氨基轉(zhuǎn)移酶。用于本發(fā)明方法中的氨基給予體化合物，任何已知的氨基給予體，例如由日本生物化學(xué)社編輯、東京KagaKuDozin有限公司出版的“SEIKAGAKUJIKKENKOZA”11卷“氨基酸和生物胺的代謝”或在“生物化學(xué)雜志”2472486(1972)中描述過的全都可以使用。根據(jù)本發(fā)明，可以使用的氨基給予體化合物最佳實(shí)例包括直鏈脂肪族的L-α-氨基酸如L-谷氨酸、L-天冬氨酸、L-丙氨酸、L-甲硫氨酸、L-谷氨酰胺等;支鏈的脂肪族L-α-氨基酸如L-亮氨酸、L-異亮氨酸、L-纈氨酸等，堿性氨基酸如L-賴氨酸、L-鳥氨酸、L-組氨酸等;以及芳香族氨基酸如L-苯基丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸等;還有這些氨基酸的堿金屬鹽如鈉鹽或鉀鹽。此外，在本發(fā)明中與上述L-氨基酸相對映的D-氨基酸同樣可以作為氨基給予體。這些氨基給予體既可單獨(dú)使用又可以結(jié)合起來使用。作為氨基給予體，優(yōu)選的是使用谷氨酸或一種它的鹽，與天冬氨酸或其鹽結(jié)合。在反應(yīng)開始前，氨基給予體的量與存在反應(yīng)介質(zhì)中OMPB量摩爾比通?？梢允窃?0∶1～1∶10的范圍。在本發(fā)明的方法中，當(dāng)谷氨酸和/或天冬氨酸作氨基給予體時(shí)，商業(yè)上可以買到的谷氨酸或天冬氨酸都可以使用。通常，這些氨基酸可以是D異構(gòu)體和L異構(gòu)體的混合物，優(yōu)選的是它們的L異構(gòu)體。谷氨酸和天冬氨酸的鹽，它們的堿金屬鹽特別是它們的鈉鹽或鉀鹽也可使用。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施例中，谷氨酸(或它的鹽)、天冬氨酸(或它的鹽)是以結(jié)合的形式使用的。這些氨基給予體化合物的相應(yīng)濃度和氨基給予體與OMPB的比率優(yōu)選范圍如下描述。當(dāng)氨基給予體以高于OMPB的比率提供時(shí)，反應(yīng)介質(zhì)中存在的氨基給予體的量大于OMPB的量，這樣就能提高反應(yīng)速率和OMPB變成L-AMPB的轉(zhuǎn)化率。但是也要從經(jīng)濟(jì)角度來選定適宜的氨基給予體化合物與OMPB的比率。通常谷氨酸或它的鹽的濃度(或加入量)與OMPB的濃度(或加入量)比率的優(yōu)選范圍在0.2∶1～3.0∶1。另一方面，天冬氨酸或它的鹽的濃度(或加入量)與OMPB的濃度(或加入量)的比率理想范圍在1.0∶1～3.0∶1。在本發(fā)明的方法中，當(dāng)產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物與化學(xué)式為(Ⅱ)的OMPB和氨基給予體反應(yīng)時(shí)，本發(fā)明的方法可以這樣的方式來進(jìn)行。即首先所述的微生物在含有通常用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)。用于一般培養(yǎng)微生物的任何普通的微生物培養(yǎng)營養(yǎng)源都是可能的。例如，可使用的碳營養(yǎng)源有葡萄糖、淀粉、甘油、蔗糖、粘稠麥芽糖漿、糖蜜或其它等。它們既可以單獨(dú)使用又可以結(jié)合起來使用。可使用的氮營養(yǎng)源有大豆粉、麥胚芽、肉羹、胨、干酵母、玉米漿、硫酸銨等。它們既可以單獨(dú)使用又可以結(jié)合起來使用。如果需要，還可以在上述培養(yǎng)介質(zhì)中加入一種或多種無機(jī)鹽和碳酸鈣、氯化鈉、氯化鉀和磷酸鹽。作為微生物培養(yǎng)方法，液體培養(yǎng)方法，尤其浸沒培養(yǎng)方法最適宜。上述微生物的培養(yǎng)可在需氧條件下進(jìn)行，適于培養(yǎng)的溫度為25～40℃。對放線菌可以持續(xù)培養(yǎng)1-4天，細(xì)菌1-2天，酵母1-2天，真菌1-4天。這樣培養(yǎng)得到的產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶微生物的培養(yǎng)肉湯可以這樣來使用。如果需要的話，從培養(yǎng)肉湯中分離微生物細(xì)胞然后用水或生理鹽水洗滌所得到被洗過的完整的細(xì)胞以合適的細(xì)胞濃度懸浮在水、生理鹽水或一種適宜的緩沖水溶液中，得到一種容易使用的細(xì)胞懸浮液。然后或同時(shí)或連續(xù)地加到含使用的微生物細(xì)胞、OMPB(第一種基質(zhì))和氨基給予體化合物(一種或多種)(表示酶的第二種基質(zhì))的培養(yǎng)肉湯或水懸浮液中。得到的液體混合物保持在這樣的條件下，即讓微生物與OMPB和氨基給予體反應(yīng)從而繼續(xù)進(jìn)行OMPB到L-AMPB的轉(zhuǎn)化反應(yīng)。在水成液反應(yīng)介質(zhì)中的細(xì)胞濃度和OMPB和氨基給予體的濃度以及反應(yīng)溫度和pH條件可以適宜地調(diào)節(jié)以致保持反應(yīng)介質(zhì)在這樣的條件，即OMPB到L-AMPB的轉(zhuǎn)化反應(yīng)將有效地進(jìn)行并且將讓微生物顯示其作用。在水成液反應(yīng)介質(zhì)中OMPB和氨基給予體用上面描述的方法處理被轉(zhuǎn)化成L-AMPB。調(diào)節(jié)反應(yīng)時(shí)間，以使在反應(yīng)混合物中能產(chǎn)生和積累L-AMPB相當(dāng)大的量。另一方面，在本發(fā)明的方法中，當(dāng)用氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)處理OMPB和氨基給予體時(shí)，OMPB和氨基給予體(一種或多種)加入并且被溶解在水或一種緩沖溶液適宜的氨基轉(zhuǎn)移酶的一種酶溶液中。隨后進(jìn)行OMPB的酶促反應(yīng)。在反應(yīng)體系中，氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)OMPB和氨基給予體(一種或多種)各自的濃度和反應(yīng)溫度及pH值的條件可以適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)到能充分發(fā)生OMPB到L-AMPB轉(zhuǎn)化反應(yīng)的各自最佳范圍。作為使用的氨基轉(zhuǎn)移酶可以是商業(yè)上可以買到的一種酶產(chǎn)物形式的氨基轉(zhuǎn)移酶。另外，可以使用這樣的水溶液，原酶溶液或在水中的一種原酶產(chǎn)物的水溶液。原酶溶液是在所述的肉湯中通過分離微生物細(xì)胞用于在本發(fā)明中產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶微生物，從一種放線菌、細(xì)菌、真菌或酵母的培養(yǎng)肉湯中直接制備的。水原酶溶液也能以分離的微生物細(xì)胞的一種水提取液的形式使用。只要所說的原酶溶液在氨基給予體(一種或多種)存在下，具有使OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB的能力，以上述描述的微生物或其培養(yǎng)肉湯中通過超聲處理或細(xì)胞的溶菌酶處理等方法制得的原酶溶液也能用于本發(fā)明的方法中。毫無疑問，提純過的酶的水溶液也能使用。我們知道酶或微生物穩(wěn)定性和施用效率借助有機(jī)溶劑、交聯(lián)劑和載體等通過固相能夠增強(qiáng)。在本發(fā)明的方法中，只要有把OMPB移化成L-AMPB的能力，用已知固相方法處理過的固相酶或固相的產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物也可以使用。在本發(fā)明的方法中，用氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)將OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB的酶促反應(yīng)優(yōu)選條件是pH值為7.5、或高于7.5，最好在8.0～9.0的范圍內(nèi)進(jìn)行。反應(yīng)適當(dāng)?shù)剡x擇在使氨基轉(zhuǎn)移酶具有活性或參與酶促反應(yīng)的最佳溫度和pH值范圍。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，在L-谷氨酸、或其鹽和天冬氨酸或其鹽兩者都作為氨基給予體存在的情況下，用一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶或產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物處理4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸，即OMPB。在這一實(shí)施例中作為使用的氨基轉(zhuǎn)移酶最好用一種酶體系。這種酶體系由兩種酶組成一種是在L-天冬氨酸作為氨基給予體存在下有使2-氧代戊二酸轉(zhuǎn)化成谷氨酸的氨基轉(zhuǎn)移酶活性，即這種酶具有在所述的GOT活性范圍內(nèi)氨基轉(zhuǎn)移酶活性;第二種是在谷氨酸作為氨基給予體存在下，具有使OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB的氨基轉(zhuǎn)移酶活性。上述本發(fā)明方法中優(yōu)選的實(shí)施例可以選取微生物。這種微生物能產(chǎn)生一種酶體系，該酶體系不僅在天冬氨酸作為氨基給予體存在的情況下能將2-氧代戊二酸轉(zhuǎn)化成谷氨酸，即所謂GOT活性，而且在谷氨酸作為氨基給予體存在的情況下，還具有將OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB的氨基轉(zhuǎn)移酶活性。所述的微生物可以是吸水鏈霉菌SF-1293菌株(FERMBP-130或ATCC21705)或它的實(shí)變菌株，吸水鏈霉菌NP-50菌株(見日本專利申請首次公開“KoKai”58589/86號;FERMP-7804或FERMBP-1368)。在上述優(yōu)選的實(shí)施例中，可以推測OMPB在上述氨基轉(zhuǎn)移酶體系或微生物的作用下，從作為氨基給予體之一的谷氨酸(或它的鹽)中接受氨基，以至于隨氨基的給予作用谷氨酸轉(zhuǎn)化成2-氧代戊二酸生成L-AMPB。而天冬氨酸(或它的鹽)在有GOT活性的氨基轉(zhuǎn)移酶作用下，作為另一種氨基給予體將其氨基提供給所述的2-氧代戊二酸使2-氧代戊二酸再轉(zhuǎn)變成谷氨酸。天冬氨酸(或它的鹽)本身則被轉(zhuǎn)化成草酰乙酸并且最終成丙酮酸。以這種方式，本發(fā)明的方法提供了一種含有L-AMPB作為產(chǎn)物的反應(yīng)溶液?？傊?，簡單地說，實(shí)施本發(fā)明適宜的方案是4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸在至少一種氨基給予體化合物存在下，用至少一種氨基轉(zhuǎn)移酶處理或反應(yīng)。優(yōu)選的是在L-谷氨酸和L-天冬氨酸或它們的鹽都存在的條件下，溫度從室溫至60℃，pH值為7.5～9.0在堿性條件下，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)及氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)溶解在水成液反應(yīng)介質(zhì)中反應(yīng)。適宜地實(shí)施本發(fā)明方法的另一個(gè)方案是4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸，在至少一種氨基給予體化合物存在下，用至少能產(chǎn)生一種氨基轉(zhuǎn)移酶的一種微生物處理或反應(yīng)。優(yōu)選的是在L-谷氨酸和L-天冬氨酸或它們的鈉鹽都存在的條件下，pH值為7.5～9.0的堿性條件，溫度在室溫至60℃，其中4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體(一種或多種)已被溶解并且所說的微生物細(xì)胞已被懸浮在水成液反應(yīng)介質(zhì)中。當(dāng)使用產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物細(xì)胞實(shí)施本發(fā)明的方法時(shí)，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)加入到一種能產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物培養(yǎng)肉湯中，其中所述的完整細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)肉湯中，而后使4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸、氨基給予體化合物(一種或多種)和所說的微生物之間發(fā)生相互作用。本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施方案是，在至少一種氨基給予體化合物存在下，所選的是在L-谷氨酸和L-天冬氨酸或它們的鈉鹽都存在下，在pH值為7.5～9.0的堿性條件，溫度從室溫至60℃，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸用至少能產(chǎn)生一種氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物和含有氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物提取物處理，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)及含氨基轉(zhuǎn)移酶的所述微生物提取物已被溶解在水成液反應(yīng)介質(zhì)中。本發(fā)明的方法無論按那種方案進(jìn)行，酶促反應(yīng)開始進(jìn)行之前，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸溶解在水成液反應(yīng)介質(zhì)中的初始濃度為0.1到100mg/ml。4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸轉(zhuǎn)化成L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)-丁酸的酶促反應(yīng)發(fā)生之前，4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)在水成液反應(yīng)介質(zhì)中的摩爾比為1∶10-10∶1。根據(jù)本發(fā)明的方法，當(dāng)4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸(即OMPB)、氨基給予體化合物(一種或多種)和氨基轉(zhuǎn)移酶或生成氨基轉(zhuǎn)移酶細(xì)胞之間相互反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行時(shí)，給出了含有一定量生成的L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)-丁酸(即L-AMPB)、一定量遺留下的未反應(yīng)的OMPB、一定量使用的氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)或一定量使用的微生物細(xì)胞的水反應(yīng)溶液或混合物。如果反應(yīng)溶液或混合物含有使用的微生物細(xì)胞，最好對其分離。通過離心分離作用，從反應(yīng)溶液或混合物中使微生物細(xì)胞分離出來并可以得到含有L-AMPB但不含微生物細(xì)胞的上層清液?，F(xiàn)在把從L-AMPB水溶液中回收L-AMPB產(chǎn)物的方法描述如下從水溶液中回收和純化L-AMPB可以根據(jù)已知產(chǎn)生L-AMPB發(fā)酵方法產(chǎn)生L-AMPB微生物的培養(yǎng)肉湯中，運(yùn)用回收和提純L-AMPB的同樣方式進(jìn)行。回收和純化L-AMPB的詳細(xì)步驟在日本專利申請首次公開“KoKai”47485/82號中已經(jīng)描述。例如，從本發(fā)明的方法中得到的從反應(yīng)溶液中回收和純化L-AMPB，可以將含有L-AMPB的反應(yīng)溶液通過一個(gè)Dowex50W(美國，Rohm和Haas有限公司的產(chǎn)品)陽離子交換樹脂，使L-AMPB被該樹脂吸附，然后用水或稀氨水溶液洗脫，得到含有L-AMPB的洗提餾分。收集含有L-AMPB的洗提餾分，并在減壓下濃縮得到L-AMPB干燥粉末。根據(jù)本發(fā)明的方法制得的L-AMPB物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)與在日本專利申請首次公開“KaKai”47485/82號中描述過的已知發(fā)酵方法得到的具有可信的L-AMPB樣品的性質(zhì)相同。另外，我們也看到，根據(jù)本發(fā)明的方法制得的L-AMPB表明除草活性。用這些L-AMPB進(jìn)行實(shí)驗(yàn)與已知發(fā)酵方法制得的L-AMPB除草活性相比是相同的。根據(jù)以下實(shí)施例說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1通過各種不同的商業(yè)上可以買到的氨基轉(zhuǎn)移酶與OMPB反應(yīng)制備L-AMPB。OMPB溶解在含有加入氨基給予體化合物的50mM體積的磷酸鹽緩沖溶液(pH6)中。在該實(shí)驗(yàn)中使用谷氨酸草酰乙酸氨基轉(zhuǎn)移酶(GOT)(Boehr-ingerMannheim有限公司的產(chǎn)品)作為氨基轉(zhuǎn)移酶，L-天冬氨酸(Asp)和L-谷氨酸(Glu)都作為氨基給予體(提供氨基的物質(zhì))加入并溶解在反應(yīng)介質(zhì)中。另一方面，當(dāng)使用谷氨酸丙酮酸氨基轉(zhuǎn)移酶(GPT)(Boehringermannheim有限公司的產(chǎn)品)時(shí)，將L-丙氨酸(Ala)作為氨基給予體加入并溶解在反應(yīng)介質(zhì)中。當(dāng)參考試驗(yàn)使用谷氨酸脫氫酶(GLOH)時(shí)，加入氯化銨和氫氧化鈉作為氨基給予體。為了進(jìn)行對比，用2-氧代戊二酸(2-KG)(作為對照物)與所用的氨基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行反應(yīng)，評價(jià)谷氨酸。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，酶促反應(yīng)在30℃進(jìn)行50分鐘后，在100℃加熱反應(yīng)混合物3分鐘停止反應(yīng)。加入稀硫酸溶液，將反應(yīng)混合物或溶液的pH值調(diào)到2并離心分離，得到上層清液。用氨基酸分析儀測定生成并存在于上層清液中的L-AMPB和谷氨酸的量。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。表1使用的酶基質(zhì)化合物和它氨基給予體化合物反應(yīng)產(chǎn)物和它和加入量的濃度(μg/ml)和它的濃度(μg/ml)的生成量μg/mlOMPB100Asp1000L-AMPB2.8GOTOMPB100Glu1000L-AMPB3.7(10單位/毫升)2-KG100Asp1000Glu109.3(對照)GPTOMPB100Ala1000L-AMPB0.9(4單位/毫升)2-KG100Ala1000Glu92.7(對照)NADH+NH4ClGLDHOMPB1001000L-AMPB1.9(60單位/毫升)2-KG100NADH+NH4ClGlu109.3(對照)1000由表1的結(jié)果可以清楚地看到使用酶促反應(yīng)從OMPB制備L-AMPB，雖然其收率是顯著的，但是不如從2-氧代戊二酸制備谷氨酸的收率高。實(shí)施例2下列表2中陳述的試驗(yàn)細(xì)菌菌株分別被接種到40ml一份營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)介質(zhì)中(Difco公司產(chǎn)品)，隨后在28℃培養(yǎng)細(xì)菌6小時(shí)。得到的培養(yǎng)肉湯每個(gè)作為種子培養(yǎng)，以接種物2%的量把它接種到如上同樣組成的40ml一份的培養(yǎng)介質(zhì)中并且在28℃培養(yǎng)過夜。OMPB被加到每個(gè)得到的培養(yǎng)肉湯(含細(xì)菌細(xì)胞為100μg/ml濃度)。每個(gè)得到的含OMPB的培養(yǎng)肉湯，進(jìn)一步加入作為氨基給予體的L-天冬氨酸鈉(濃度為100μg/ml)。這樣就得到了含有培養(yǎng)肉湯、OMPB和L-天冬氨酸鈉的液體混合物。在28℃用24小時(shí)進(jìn)行OMPB轉(zhuǎn)化成L-AMPB的酶促轉(zhuǎn)化作用。反應(yīng)混合物的pH值用25%的硫酸調(diào)到2終止反應(yīng)。用離心分離分出細(xì)胞。用氨基酸分析儀來測定上層清液中所得的L-AMPB的量。試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)在表2中。表2試驗(yàn)細(xì)菌生成L-AMPB原酶溶液GOT酶的特定GOT活性(效力)活性(×103菌株的量(微克/毫升)(×10-3單位/毫升)蛋白質(zhì)單位/毫克)枯草桿菌ATCC93412.422.046.7藤黃細(xì)球菌ATCC66331.922.0196.4金黃葡萄球菌20926.617.5182.3(ATCC6538)大腸埃氏桿菌ATCC107980.83.85.4綠膿桿菌ATCC101458.3342.0686.7粘質(zhì)沙雷氏菌ATCC138805.045.6300.0從表2中可以清楚地看到由OMPB可以以有意義收率制備L-AMPB。另外，將上述28℃培養(yǎng)過夜得到的各份培養(yǎng)肉湯進(jìn)行超聲處理，分解細(xì)菌細(xì)胞得到細(xì)胞提取物。如此制得的細(xì)胞提取物離心分離，產(chǎn)生水原酶溶液。測得各原酶溶液GOT活性強(qiáng)度(效力)并在表2中表明。表2所示的數(shù)字可以看到產(chǎn)生L-AMPB的量和所述原酶溶液GOT活性測得值之間的重要相互關(guān)系。此外，按Bio-Rad蛋白質(zhì)分析方法分析所述原酶溶液中的蛋白質(zhì)含量，評價(jià)所述溶液中酶(×10-3蛋白質(zhì)單位/毫克)的特殊GOT活性并列于上述表2之中。實(shí)施例3吸水鏈霉菌SF-1293菌株(FERMBP-130)在10ml的予先培養(yǎng)介質(zhì)(含有2.0%的可溶性淀粉、1.0%的聚胨、0.3%的肉汁、0.05%的磷酸氫二鉀、pH7.0)中接種。在28℃將上述菌株振動-培養(yǎng)24小時(shí)，所得的培養(yǎng)肉湯用作種子培養(yǎng)，以接種物2%的量接種到培養(yǎng)介質(zhì)中(含有7.0%的葡萄糖、4.4%的bactosoyton、0.372%的磷酸二氫鉀、0.0852%的磷酸氫二鈉、1.15%的dotiteTES，即N-三(羥甲基)甲基-2-氨基-乙烷磺酸、0.0001%的氯化鈷;pH6.0)。然后在28℃，在充氣和搖動的條件下，進(jìn)行SF-1293菌株的培養(yǎng)。培養(yǎng)4天后，通過離心分離收集產(chǎn)生的微生物細(xì)胞，用50mM的磷酸鹽緩沖溶液(pH6.0)洗滌。然后通過超聲波處理(用一種特定的稱做“KUBOTAINSONATOR”的儀器，1.5A，1分鐘)分裂細(xì)胞。隨后再離心分離，得到原酶溶液。將濃度分別達(dá)到100μg/ml和200μg/ml的OMPB和L-天冬氨酸加入到上述原酶溶液中。對于氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)用2-氧代戊二酸(2-KG)作對照基質(zhì)進(jìn)一步做對照實(shí)驗(yàn)。然后使酶促反應(yīng)在30℃進(jìn)行2小時(shí)后，將反應(yīng)溶液在100℃加熱3分鐘，以終止反應(yīng)。用稀硫酸將得到的反應(yīng)溶液pH值調(diào)至2，離心分離反應(yīng)溶液得到上層清液。用氨基酸分析儀測定存在于上層清液中的L-AMPB和由2-KG產(chǎn)生的谷氨酸的量。試驗(yàn)結(jié)果列于表3中。表3</tables>實(shí)施例4(1)吸水鏈霉菌NP-50菌株(FERMP-7804或FERMBP-1368)在10ml的予先培養(yǎng)介質(zhì)(含有2.0%的可溶性淀粉、1.0%的聚胨、0.3%的肉汁、0.05%的磷酸氫二鉀;pH7.0)中接種。在28℃將上述NP-50菌株振動-培養(yǎng)24小時(shí)，所得的培養(yǎng)肉湯用作種子培養(yǎng)。將其以2%接種到生產(chǎn)的培養(yǎng)介質(zhì)中(含有7.0%的葡萄糖、4.4%的bacto-soyton、0.327%的磷酸二氫鉀、0.0852%的磷酸氫二鈉、1.15%的dotiteTES、0.0001%的氯化鈷;pH6.0)，然后在28℃在充氣和搖動的條件下進(jìn)行NP-50菌株的培養(yǎng)。(2)在一個(gè)250ml的錐形燒瓶中，將20ml的已在上述生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)了3天的吸水鏈霉菌NP-50菌株培養(yǎng)肉湯、30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度87mg/ml予先將其pH值調(diào)至7.0)、40ml商品L-谷氨酸鈉水溶液(L-谷氨酸鈉濃度170mg/ml)和10ml的1Mtris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合到一起，混合液中的OMPB濃度總計(jì)為26mg/ml。在37℃，輕輕搖動燒瓶中的液體混合物，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。然后將得到的反應(yīng)混合物離心分離，除去其中的微生物細(xì)胞，用氨基酸分析儀分析含有生成L-AMPB的上層清液(100ml)，測定溶液中L-AMPB的量。結(jié)果表明生成了14mg/ml的L-AMPB。另外，用L-丙氨酸或L-天冬氨酸鈉分別作為氨基給予體(加到濃度為170mg/ml)進(jìn)行類似的實(shí)驗(yàn)。觀察到當(dāng)使用L-丙氨酸時(shí)，生成了2.8mg/ml的L-AMPB。使用L-天冬氨酸鈉時(shí)，生成了1.5mg/ml的L-AMPB。(3)在上述步驟(2)中，使用L-谷氨酸鈉作為氨基給予體已生成的反應(yīng)混合物，經(jīng)離心分離后得到的上層清液(100ml)通入一個(gè)“Dowex50W×2”(H+一型)(商標(biāo)名稱，Rohm&Haas公司產(chǎn)品)陽離子交換樹脂柱，隨后用稀氨水展開。收集含有L-AMPB餾份的洗提液并濃縮。濃縮液在一個(gè)150ml“Dowex1×2”(CH3COO-一型)(商標(biāo)名稱Rohm&Hass公司生產(chǎn))陰離子交換柱上進(jìn)行色譜分離。用水洗滌樹脂柱后，用0.3N的乙酸水溶液洗提柱。在減壓下，將含有L-AMPB餾份的洗提液濃縮至干，在真空下干燥，得到720mg白色粉末狀的L-AMPB，從甲醇中重結(jié)晶白色粉末。用常規(guī)方法分析得到的晶體，即測定元素分析、比旋光度、熔點(diǎn)、紅外吸收光譜、核磁共振譜和質(zhì)譜等。證實(shí)得到的L-AMPB晶體與可信的L-AMPB樣品完全一致。實(shí)施例5(1)將在實(shí)施例4步驟(1)中使用的生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)的吸水鏈霉菌NP-50菌株(FERMP-7804;FERMBP-1368)培養(yǎng)肉湯(20ml)置于一個(gè)30ml的離心管中，以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離10分鐘。沉淀了的NP-50菌株細(xì)胞懸浮在30ml50mM的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)中，制成細(xì)胞懸浮液。在一個(gè)250ml的錐形燒瓶中將20ml的細(xì)胞懸浮液、30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度87mg/ml予先將pH值調(diào)至7.0)、40ml的商業(yè)L-谷氨酸鈉水溶液(L-谷氨酸鈉濃度170mg/ml)和10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合在一起?；旌弦褐械腛MPB濃度總計(jì)為26mg/ml。在37℃，輕輕搖動得到的液體混合物，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。隨后離心分離如此得到的反應(yīng)混合物以去除其中的微生物細(xì)胞。通過氨基酸分析儀分析得到的含有生成的L-AMPB上層清液(100ml)以測定溶液中L-AMPB的量。結(jié)果表明生成了15mg/ml的L-AMPB。(2)在用實(shí)施例4步驟(3)的相同方式中，使上述步驟(4)中得到的含有L-AMPB的上層清液(100ml)在一個(gè)400ml的“Dowex50W×2”(H+一型)陽離子交換樹脂柱上進(jìn)行色譜分離，然后用稀氨水展開。以實(shí)施例4步驟(3)的相同方法對含有L-AMPB餾分的洗提液進(jìn)行后處理，得到750ml白色粉末狀的L-AMPB。實(shí)施例6(1)將已在實(shí)施例4步驟(1)中使用的生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中已培養(yǎng)的吸水鏈霉菌NP-50菌株(FERMP-7804;FERMBP-1368)培養(yǎng)肉湯(20ml)置于一個(gè)30ml的離心管中，并在3000rpm的轉(zhuǎn)速下離心分離。將沉積了的NP-50菌株細(xì)胞懸浮在30ml50mM的tris-HCl緩沖溶液中(pH8.5)以制成細(xì)胞懸浮液。隨后，用超聲波分裂儀分裂細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞。分裂10分鐘后，所得的懸浮液以1000rpm轉(zhuǎn)速離心分離10分鐘，生成20ml上層清液的原酶溶液。在一個(gè)250ml的錐形燒瓶中，將以上得到的20ml上層清液(原酶溶液)與30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度為87mg/ml，予先調(diào)節(jié)pH值至7.0)、40ml商品L-谷氨酸鈉水溶液(谷氨酸鈉濃度為170mg/ml)和10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合在一起，混合液中的OMPB濃度總計(jì)為26mg/ml。在37℃，輕輕搖動所得的液體混合物，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。然后，用氨基酸分析儀分析得到的反應(yīng)混合物(100ml)，測定在所說反應(yīng)混合物中生成的L-AMPB量。結(jié)果表明生成了16mg/ml的L-AMPB。(3)在如實(shí)施例4步驟(3)的同樣方法，將從上述步驟(2)的酶促反應(yīng)中得到的反應(yīng)混合物(100ml)在一個(gè)400ml“Dowex50W×2”(H+一型)離子交換柱進(jìn)行色譜分離，隨后用稀氨水展開。用如實(shí)施例4步驟(3)的同樣方法對含有L-AMPB餾分的洗提液進(jìn)行后處理，得到740mg白色粉末狀的L-AMPB。實(shí)施例7(1)將變鉛青鏈霉菌66菌株(FERMBP-737)在10ml與實(shí)施例4步驟(1)使用相同組成的予先培養(yǎng)介質(zhì)中接種。在28℃，將上述微生物振動一培養(yǎng)24小時(shí)。得到的培養(yǎng)肉湯用作種子培養(yǎng)。將其以接種物2%的量接種到與實(shí)施例4步驟(1)中使用相同組成的生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中。隨后在28℃，在充氣和搖動的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。(2)在一個(gè)250ml的錐形燒瓶中，將20ml的在上述生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)了3天的變鉛青鏈霉菌66菌株培養(yǎng)肉湯30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度87mg/ml，予先調(diào)節(jié)pH值為7.0)、40ml的商品L-谷氨酸鈉水溶液(L-谷氨酸鈉濃度170mg/ml)和10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合在一起?；旌弦褐械腛MPB濃度總計(jì)約為26mg/ml。在37℃輕輕搖動燒瓶里的液體混合物，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。然后，將這樣得到的反應(yīng)混合物離心分離以除去其中的微生物細(xì)胞。用氨基酸分析儀分析所得的含有生成的L-AMPB上層清液(100ml)，測定其中L-AMPB的量，結(jié)果表明生成了6mg/ml的L-AMPB。實(shí)施例8(1)吸水鏈霉菌SF-1293菌株(FERMBP-130;ATCC21705)在與實(shí)施例4步驟(1)中使用的組成相同的10ml予先培養(yǎng)介質(zhì)中接種。在28℃，將上述SF-1293菌株振動-培養(yǎng)24小時(shí)。生成的培養(yǎng)肉湯用作種子培養(yǎng)。將它以接種物2%的量接種到組成與實(shí)施例4步驟(1)中使用的生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中。然后，在28℃，在充氣和搖動的條件下，進(jìn)行SF-1293菌株培養(yǎng)。(2)在一個(gè)250ml錐形燒瓶中，將20ml在上述生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中已培養(yǎng)了3天的吸水鏈霉菌SF-1293菌株培養(yǎng)肉湯、30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度87mg/ml，予先將pH值調(diào)在7.0)、40ml的商品L-谷氨酸鈉水溶液(L-谷氨酸鈉濃度170mg/ml)和10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合在一起?；旌弦褐械腛MPB濃度總計(jì)約為26mg/ml。在37℃輕輕搖動燒瓶中的液體混合物，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。然后離心分離如此得到的反應(yīng)混合物，除去其中的微生物細(xì)胞。用氨基酸分析儀分析所得的含有生成L-AMPB的上層清液(100ml)，測定上層清液中生成的L-AMPB量。結(jié)果表明生成了7mg/ml的L-AMPB。(3)在如實(shí)施例4步驟(3)中相同的方法，使上述步驟(2)中得到的上層清液(100ml)在一個(gè)400ml“Dowex50W×2”(H+一型)離子交換樹脂柱進(jìn)行色譜分離，然后用稀氨水展開。用在實(shí)施例4步驟(3)中的相同方法對含有L-AMPB餾份的洗提液進(jìn)行后處理，得到350mg的白色粉末L-AMPB。實(shí)施例9將一塊20g的商品面包酵母(釀酒酵母、日本OrientalYeast公司產(chǎn)品)濕塊懸浮在100ml50mM的tris-HCl緩沖溶液中(pH8.5)。在一個(gè)250ml的錐形燒瓶中，將20ml的面包酵母細(xì)胞懸浮液、30ml的OMPB水溶液(OMPB濃度87mg/ml，予先將pH值調(diào)至7.0)、40ml的商品L-谷氨酸鈉水溶液(L-谷氨酸鈉溶液170mg/ml)和10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)混合在一起。混合液中的OMPB濃度總計(jì)約為26mg/ml。在37℃，輕輕搖動所得的液體混合物24小時(shí)，使OMPB的酶促反應(yīng)得以進(jìn)行。離心分離這樣得到的反應(yīng)混合物以除去其中的酵母細(xì)胞。用氨基酸分析儀分析所得的含有生成的L-AMPB上層清液(100ml)，測定上層清液中存在的L-AMPB量。結(jié)果表明生成了6mg/ml的L-AMPB。實(shí)施例10在50mM的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)中，其中加入并溶解了400μg/ml的OMPB和600μg/ml的L-谷氨酸，使氨基轉(zhuǎn)移酶與OMPB反應(yīng)生成L-AMPB。用作這個(gè)氨基轉(zhuǎn)移酶的是商品谷氨酸-草酰乙酸-氨基轉(zhuǎn)移酶(GOT)(Boeh-ringerMannheim公司的產(chǎn)品)，GOT濃度定為40單位/ml。在37℃，使酶促反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)后，得到的反應(yīng)液在100℃加熱3分鐘，以終止反應(yīng)。然后，用稀硫酸將反應(yīng)溶液的pH值調(diào)至2，離心分離。除去不溶性固體，得到上層清液。用氨基酸分析儀測定上層清液中的L-AMPB量，氨基酸分析儀是日本ATTO公司制造“MLO-703”型，保留時(shí)間為12分鐘。測定結(jié)果表明在上層清液中生成了100μg/mlL-AMPB。實(shí)施例11(1)培養(yǎng)方法下面表4-10指出的幾種微生物，分別從它們各自的種子培養(yǎng)斜面上接種到裝在大容量試管中的液體培養(yǎng)介質(zhì)中(含有0.5%葡萄糖、0.3%的酵母汁、1.0%的肉汁、1.0%的胨、0.3%的氯化鈉;pH7.0)每10ml體積1份。也可以將一種不銹鋼圈置于培養(yǎng)放線菌類所用的試管中。而后在試管搖動器上，分別將被接種的微生物在28℃培養(yǎng)24小時(shí)(或48小時(shí))。(2)制備細(xì)胞樣品培養(yǎng)結(jié)束后，將得到的培養(yǎng)肉湯按每份1ml(真菌除外，真菌培養(yǎng)每份取0.2ml)分別取到微量試管中(Eppenderf股份有限公司的產(chǎn)品)，并以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離3分鐘。棄去上層清液，收集剩余的沉積細(xì)胞作為細(xì)胞樣品。(3)酶促反應(yīng)將每個(gè)細(xì)胞樣品分別裝入微量試管中，然后加入20μl的tris-HCl緩沖溶液(1摩爾pH8.0)、20μl的OMPB水溶液(OMPB濃度200mg/ml，pH8.0)、40μl下列給定的氨基給予體水溶液(包括L-谷氨酸鈉、L-天門冬酸鈉和L-丙氨酸中的任何一種，濃度為1摩爾/ml)和120μl的水。將得到的混合物在37℃放置24小時(shí)，使存在其中的微生物細(xì)胞、OMPB和氨基給予體化合物之間產(chǎn)生相互作用。反應(yīng)結(jié)束后，以12000rpm的轉(zhuǎn)速將反應(yīng)混合物離心分離3分鐘。用氨基酸分析儀測定L-AMPB的量，進(jìn)而確定存在于所得上層清液中的L-AMPB量。試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)于表4～10中。表4生成的L-AMPB量(mg/ml)使用的微生物(細(xì)菌)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸枯草芽孢桿菌ATCC66332.01.92.2藤黃微球菌ATCC93412.60.20.3金黃色葡萄球菌209pATCC65383.20.60.5大腸埃希氏桿菌ATCC107989.84.23.3綠膿桿菌ATCC101458.33.33.8洋蔥假單孢菌ATCC177599.62.43.0粘質(zhì)沙雷氏菌ATCC138809.51.81.6谷氨酸棒桿菌ATCC130322.50.30.4表5生成的L-AMPB量(mg/ml)使用的微生物(酵母菌)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸釀酒酵母ATCC97630.90.30.2白假絲酵母IAM48881.20.90.4白假絲酵母IAM482912.16.14.0新型隱球酵母IAMIAM47722.41.30.8漢遜德巴和酵母IAM43562.71.20.7變異三角酵母IAM44432.21.50.4施氏漢遜酵母IAM42691.60.80.2表6生成的L-AMPB量(mg/ml)使用的微生物(放線菌)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸白色鏈霉菌IFO13014(ATCC3004)7.41.00.8灰色鏈霉菌IFO12875(ATCC23345)8.31.71.9肉桂鏈輪絲菌IFO12852(ATCC11874)10.66.02.2師崗鏈霉菌IFO13416(ATCC19166)6.87.53.3地中海諾卡氏菌ATCC212718.12.61.6(擬諾片氏)Nocardiopsisdassonvillei6.31.51.5JCM3237Saccharopolysporahirsuta3.70.80.9JCM3170(ATCC27875)表7使用的微生物(放線菌)生成的L-AMPB(mg/ml)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸綠色產(chǎn)色鏈霉菌IFO13347(ATCC14925)9.51.61.1多毛鏈霉菌IFO12807(ATCC19797)1.40.10.1碳樣小單孢菌NRRL2972(ATCC27114)6.11.41.6假普通鏈孢囊菌ATCC271003.00.81.7＊培養(yǎng)時(shí)間48小時(shí)表8使用的微生物(放線菌)生成的L-AMPB量(mg/ml)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸綠色產(chǎn)色鏈霉菌JCM4977＊8.85.63.6＊Bialaphos產(chǎn)生的放線菌表9使用的微生物(真菌)生成的L-AMPB量(mg/ml)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸黃曲霉ATCC96430.50.20.3土曲霉IAMQM82J0.30.20.1MucorspinessensIAMMU35.30.91.1出芽短梗霉IAMF241.70.60.4球毛殼ATCC62050.30.10.2表10生成的L-AMPB量(mg/ml)使用的微生物(真菌)谷氨酸天冬氨酸丙氨酸繩狀青霉ATCC96440.60.40.3Gliocladiumvirens2.00.40.5ATCC9645(粘質(zhì)霉)培養(yǎng)時(shí)間48小時(shí)在上面表2和表4-10指出的微生物種屬或菌株中，具有ATCC一號的種屬或菌株已經(jīng)寄存和貯藏在美國首都華盛頓“美國標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所”中;具有JCM-號的種屬或菌株已經(jīng)寄存和貯藏在日本Saitama-KenWake市物理和化學(xué)研究所的“日本微生物收藏所”(JapanCollectionofMicroorganism)中;具有IAM-號的種屬或菌株已經(jīng)寄存和貯藏在日本東京“東京大學(xué)應(yīng)用微生物研究所”中;具有IFO-號的種屬或菌株已經(jīng)寄存和貯藏在日本大阪“大阪發(fā)酵研究所”中。上述所有具有給出存取號碼的微生物菌種或菌株，都可作為已知類型的培養(yǎng)菌株，從上述確定的公眾寄存處得到和分類。實(shí)施例12(1)吸水鏈霉菌NP-50菌株(FERMP-7804或FERMBP-1368)在10ml的予先培養(yǎng)介質(zhì)中(包括2.0%的可溶性淀粉、1.0%的聚胨(polypeptone)、0.3%的肉汁、0.05%的磷酸氫二鉀pH7.0)接種。上述的NP-50菌株在28℃，振動-培養(yǎng)24小時(shí)。用得到的培養(yǎng)肉湯作種子培養(yǎng)。將它以接種物2%的量接種到生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中(包括7.0%的葡萄糖、3.9%的麥胚芽、2.5%的可溶性植物蛋白、0.3%的磷酸二氫鉀、0.0001%的氯化鈷;pH6.8)。然后，在28℃充氣和搖動的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。(2)向每份20ml的由培養(yǎng)NP-50菌株在上述生產(chǎn)培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)了3天得到的，其中含有吸水鏈霉菌NP-50菌株培養(yǎng)肉湯中加入OMPB和L-谷氨酸鈉以及作為氨基給予體的L-天冬氨酸鈉。加入比例的量要使它們在得到的混合物中濃度如同下面表11給出的進(jìn)行氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)時(shí)的最初濃度。再加入10ml1M的tris-HCl緩沖溶液(pH8.5)，將得到的每個(gè)混合物的pH值調(diào)至8.5，并使混合物體積達(dá)到100ml。這樣使得培養(yǎng)肉湯的最初體積被稀釋了5倍。然后，使OMPB酶促胺化反應(yīng)在37℃進(jìn)行24小時(shí)，反應(yīng)過程中輕輕搖動反應(yīng)溶液，該溶液含有懸浮在內(nèi)的細(xì)胞以及溶液在內(nèi)的OMPB和氨基給予體化合物。反應(yīng)結(jié)束后，每份100ml的反應(yīng)混合物分別進(jìn)行加熱處理(酶的滅菌和致純失活)以終止反應(yīng)。過濾每份反應(yīng)混合物，除去微生物細(xì)胞。用氨基酸分析儀(商標(biāo)名稱“MLC-703”ATTO公司生產(chǎn)，停留時(shí)間12分鐘)測定所得的每份濾液中L-AMPB的量。試驗(yàn)結(jié)果列于表11中。表11反應(yīng)開始前氨基給予體反應(yīng)結(jié)束后生成試驗(yàn)號OMPB的初初始濃度(μg/ml)的L-AMPB最終濃度始濃度L-谷氨酸鈉L-天冬氨酸鈉(μg/ml)1100001000005930210000200000717031000001000035041000010000100008500530000300003000028360從表11的結(jié)果我們清楚地看到當(dāng)L-谷氨酸鈉和L-天冬氨酸鈉一起做為氨基給予體共同存在的條件下進(jìn)行OMPB酶促胺化反應(yīng)，與在有L-谷氨酸鈉和L-天冬氨酸鈉任何一個(gè)存在的條件下進(jìn)行酶促胺化反應(yīng)比較，前者由OMPB生成L-AMPB的量相對明顯地有所增加。實(shí)施例13在如實(shí)施例12同樣的予先培養(yǎng)條件下制得的吸水鏈霉菌NP-50菌株培養(yǎng)肉湯用作種子培養(yǎng)。在一個(gè)3升的發(fā)酵瓶中將其接種到容量如實(shí)施例12使用的同樣的培養(yǎng)介質(zhì)中。在28℃培養(yǎng)3天。將如此得到的2升培養(yǎng)肉湯移入反應(yīng)罐中，隨后向其中加入300克OMPB。另外，向其中加入并溶解310克的L-谷氨酸鈉(WakoPureChemicalIndustriesLtd的產(chǎn)品)和290克的L-天冬氨酸鈉(NakaraiChemicals，Ltd的產(chǎn)品)。然后，用NaOH水溶液將混合物的pH值調(diào)至8.5后，加水，使混合物體積達(dá)到10升。這樣，反應(yīng)開始時(shí)，得到的液體混合物中OMPB濃度是30000μg/ml。此時(shí)，L-谷氨酸鈉和L-天冬氨酸鈉各自的濃度等于OMPB的摩爾濃度(1/6mol)。然后，在37℃使OMPB的酶促胺化反應(yīng)進(jìn)行24小時(shí)。反應(yīng)過程中輕輕搖動含有NP-50菌株細(xì)胞，OMPB和氨基給予體化合物的液體混合物，并且控制pH值為8.5。反應(yīng)結(jié)束后，加入50%的硫酸，將反應(yīng)所得混合物pH值調(diào)至3.0。借助一種助濾器過濾反應(yīng)混合物。除去細(xì)胞，得到9l濾液。用與實(shí)施例12相同的方法，分析濾液中L-AMPB的濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)是29000μg/ml。完后使濾液通過一個(gè)5l“Dowex50WH+一型)陽離子交換樹脂柱，進(jìn)行色譜分離，用水展開。含有L-AMPB的餾份再通過(CH3COO-一型)陰離子交換樹脂柱，進(jìn)行色譜分離。用水洗滌，然后用0.3N的乙酸水溶液洗提。在減壓條件下，將含有L-AMPB餾份的洗提液濃縮至干，在真空下干燥得到白色粉末的L-AMPB。從甲醇中重結(jié)晶這種白色粉末，得到產(chǎn)量(L-AMPB)183克。以常規(guī)方法分析得到的L-AMPB晶體。即測定元素分析、比旋光度、熔點(diǎn)、紅外吸收光譜、核磁共振譜和質(zhì)譜。證實(shí)得到L-AMPB晶體與可信的L-AMPB樣品完全一致。權(quán)利要求1.一種制備由(Ⅰ)式表示的L-2-氨基-(羥甲基氧膦基)-丁酸的方法其中包括，在有一種或多種氨基給予體的存在下，用一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶或者用一種或多種能夠產(chǎn)生一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物處理由(Ⅱ)式表示的4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸。2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的微生物是一種放線菌。3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的微生物是一種細(xì)菌。4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的微生物是一種酵母菌。5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的微生物是一種真菌。6.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的方法，其中使用的微生物選自鏈霉菌、鏈輪絲菌、諾卡氏菌、擬諾卡氏菌、Saccharopolyspora、Kitasatosporia、小單孢菌或鏈囊菌等菌屬中的一種放線菌。7.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的方法，其中使用的微生物是選自芽孢桿菌、微球菌、金黃色葡萄球菌、埃希氏桿菌、假單孢菌、沙雷氏菌或棒桿菌等菌屬中的一種細(xì)菌。8.根據(jù)權(quán)利要求4中所述的方法，其中使用的微生物是選自酵母、假絲酵母、隱球酵母、德巴利酵母、三角酵母或漢遜酵母等菌屬中的一種酵母。9.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的方法，其中使用的微生物是選自曲霉、白霉、短梗霉、毛殼、青霉或粘帚霉等菌屬中的一種真菌。10.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的氨基轉(zhuǎn)移酶是谷氨酸-草酰乙酸-氨基轉(zhuǎn)移酶和谷氨酸-丙酮酸-氨基轉(zhuǎn)移酶兩者中的任何一種，以及在有谷氨酸作為氨基給予體的存在下，能夠?qū)?-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸轉(zhuǎn)化成L-2-氨基-4-(羥甲基氧膦基)-丁酸的氨基轉(zhuǎn)移酶，或者上述氨基轉(zhuǎn)移酶的兩種或多種結(jié)合物。11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中的任何一個(gè)所述的方法，其中使用的氨基給予體是谷氨酸和/或天冬氨酸。12.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸用至少一種氨基轉(zhuǎn)移酶，在至少有一種氨基給予體化合物的存在下，在一種溶解了4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物以及氨基轉(zhuǎn)移酶(一種或多種)的水溶液介質(zhì)中，pH值范圍為7.5～9.0的堿性條件下，溫度范圍從室溫至60℃進(jìn)行處理或與其進(jìn)行反應(yīng)。13.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸用至少一種能夠產(chǎn)生至少一種氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物，在至少有一種氨基給予體化合物的存在下，在一種溶解了4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物，懸浮著所說微生物細(xì)胞的水溶液介質(zhì)中，pH值范圍為7.5-9.0的堿性條件下，溫度范圍從室溫至60℃進(jìn)行處理或與其進(jìn)行反應(yīng)。14.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸用一種能夠產(chǎn)生至少一種氨基轉(zhuǎn)移酶和含有氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物提取液，在有至少一種氨基給予體化合物的存在下，在一種溶解了4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物及含有氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物水溶液介質(zhì)中，在pH值范圍為7.5～9.0的堿性條件下，溫度范圍為室溫到60℃進(jìn)行處理。15.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸以0.1到100mg/ml的初始濃度溶解在水溶液介質(zhì)中。16.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中在4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸轉(zhuǎn)化成L-2-氨基-4-(羥甲基氧膦基)-丁酸前。最初4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)比例為1∶10～10∶1的摩爾比范圍。17.根據(jù)權(quán)利要求1或13中所述的方法，其中將4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸和氨基給予體化合物(一種或多種)加入到能夠產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物培養(yǎng)肉湯中，微生物的完整細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)肉湯內(nèi)，而后，在4-(羥甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸、氨基給予體化合物(一種或多種)和微生物之間進(jìn)行相互作用。18.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中使用的那些能夠產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物選自吸水鏈霉菌SF-1293FERMBP-130或ATCC21705、吸水鏈霉菌NP-50FERMBP-1368、變鉛青鏈霉菌66FERMBP-737、白色鏈霉菌IFO13014(ATCC3004)、灰色鏈霉菌IFO12875(ATCC23345)、肉桂鏈輪絲菌IFO12852(ATCC11874)、師崗鏈霉菌IFO13416(ATCC19166)、地中海諾卡氏菌ATCC21271、Nocardiopsis(擬諾卡氏)dassonvilleiJCM3237、Saccharopolysporahirsuta、JCM3170(ATCC27875)、綠色產(chǎn)色鏈霉菌IFO13347(ATCC14925)、綠色產(chǎn)色鏈霉菌JCM4977、多毛鏈霉菌IFO12807(ATCC19797)、碳樣小單孢菌NRRL2972(ATCC27114)、假普通鏈孢囊菌ATCC27100;枯草芽孢桿菌ATCC6633、藤黃微球菌ATCC9341、金黃色葡萄球菌209PATCC6538、大腸埃希氏桿菌ATCC10798、綠膿桿菌ATCC10145、洋蔥假單孢菌ATCC17759、粘質(zhì)沙雷氏菌ATCC13880、谷氨酸棒桿菌ATCC13032;釀酒酵母ATCC9763、白假絲酵母IAM4888、白假絲酵母IAM4829、新型隱球酵母IAM4772、漢遜德巴利酵母IAM4356、變異三角酵母IAM4443、施氏漢遜酵母IAM4269;黃曲霉ATCC9643、土曲霉IAMQM82JMucor(白霉)SpinescensIAMMu3、黑酵母IAMF24、球毛殼ATCC6205、繩狀青霉ATCC9644和GliocladiumVirensATCC9645。專利摘要本發(fā)明提供了在一種或多種氨基給予體存在下，如α-氨基酸存在下，制備L-2-氨基-4-(羥基甲基氧膦基)-丁酸(L-AMPB)的一種新方法，包括用一種或多種氨基轉(zhuǎn)移酶或用一種或多種能產(chǎn)生氨基轉(zhuǎn)移酶的微生物處理4-(羥基甲基氧膦基)-2-氧代-丁酸(OMPB)。按照這個(gè)方法，在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)時(shí)間，能以方便的方式制備作為除草劑使用的光學(xué)活性L-AMPB。文檔編號C12R1/85GK87105130SQ87105130公開日1988年6月15日申請日期1987年6月8日發(fā)明者今井敏,村上健,原修,宮道慎二,熊田要市,安田弘行,高根信彥,吉澤八十代,齊藤敏則,小川弘,武部英月,佐藤篤行,長岡行藏,深津俊三,岡田明申請人:明治制菓株式會社導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan