一種高純度米爾貝霉素的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高純度米爾貝霉素的制備方法。將米爾貝霉素粗品用大孔吸附樹脂富集并分離出米爾貝霉素A3和A4，濃縮、干燥；然后將米爾貝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，用半制備液相色譜制備得高純度米爾貝霉素A3和A4。該制備方法簡單，無副產(chǎn)物和雜質(zhì)殘留，產(chǎn)品分離純化穩(wěn)定且成品純度高(可達99.99％)。
【專利說明】一種高純度米爾貝霉素的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素米爾貝霉素標準品的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]米爾貝霉素(milbemycin)是大環(huán)內(nèi)酯類抗體內(nèi)外寄生蟲藥物，主要有A3、A4同系物，常用做犬的驅(qū)蟲藥。米爾貝霉素對控制和預(yù)防大部分常見寄生蟲疾病都有很好的效果。通常用來預(yù)防惡絲蟲病，控制線蟲、鉤蟲引發(fā)的犬、貓疾病及犬的鞭蟲病。由于米爾貝霉素受外國專利保護，我國使用的米爾貝霉素主要來自于國外進口，昂貴的價格使米爾貝霉素的使用受到了巨大的限制。在生產(chǎn)技術(shù)和應(yīng)用上我國都遠遠低于外國水平，并且目前文獻中還未出現(xiàn)有關(guān)米爾貝霉素的制備方法。自行研發(fā)米爾貝霉素的制備方法將打破這種壟斷現(xiàn)象，能大大加快我國自主生產(chǎn)米爾貝霉素的腳步，因此如何制備出高純度的米爾貝霉素成品，一直受到人們的重視。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于解決我國對于米爾貝霉素純品制備技術(shù)空洞的缺陷，提供一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素米爾貝霉素的制備方法，其制備工藝簡單，收率高，相比其他手段，成本有明顯的降低，產(chǎn)品分離純化結(jié)果穩(wěn)定且成品純度高。
[0004]為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
[0005]一種高純度米爾貝霉素的制備方法，包括如下步驟:
[0006]I)將含量多50% (質(zhì)量百分比含量)米爾貝霉素粗品用大孔吸附樹脂富集并分離出米爾貝霉素A3和A4，濃縮、干燥得到干粉；
[0007]2)將米爾貝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，然后用半制備液相色譜制備得高純度米爾貝霉素A3和A4。
[0008]上述步驟I)富集用的樹脂例如HP20、HPD100, HPD300吸附樹脂。通常，樹脂裝柱的徑高比1: (5-8)。
[0009]在本發(fā)明的一些具體實施例中，步驟I)將米爾貝霉素粗品用60%乙醇或甲醇溶解后上柱，然后以50%-62% (V/V)的乙醇溶液或者55%-65% (V/V)的甲醇溶液為流動相進行解吸，將米爾貝霉素A3和A4的解吸液合并、濃縮，用酯類有機溶劑(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯)萃取，再濃縮得到米爾貝霉素A3和A4的干粉。
[0010]上述步驟2)所用甲醇是純度達99.%的分析級甲醇，所用乙腈為純度達99.%分析級乙腈；利用甲醇或乙腈將步驟I)得到的干粉溶解為濃度為30mg/mL?67mg/mL的溶液，然后進行半制備液相色譜。
[0011]在本發(fā)明的一些具體實施例中，步驟2)的半制備液相色譜以乙腈:水:甲醇=70:28:2(體積比)的溶液為流動相，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集米爾貝霉A3和A4。
[0012]在本發(fā)明的具體實施例中，上述步驟2)所用的半制備液相色譜儀為安捷倫1200，半制備柱為LP-C8 (上海月旭科技有限公司)，半制備柱為25.01*250mm，粒徑為5_8 μ m。
[0013]制備得到的米爾貝霉素A3和A4樣品通過高效液相色譜(HPLC)進行純度檢測，純度均達到98% -100%，制備收率彡95%。
[0014]本發(fā)明提供了一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素米爾貝霉素的制備方法，大大提高了米爾貝霉素制備純度，米爾貝霉素A3和A4產(chǎn)物純度高(可達99.%)，而且制備工藝簡單，收率高，相比其他手段，成本有明顯的降低，不易產(chǎn)生副產(chǎn)物，實現(xiàn)了我國對米爾貝霉素高純度純品分離的突破。

【具體實施方式】
[0015]以下通過【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0016]實施例1
[0017]取IL HP20樹脂裝柱(徑高比=1:6)，取米爾貝霉素粗品12g(含量為56% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用50%的乙醇解吸樹脂柱，檢測。將分離出的米爾貝霉素A3、A4合并，濃縮后水層為500mL，加500mL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮、干物質(zhì)重8.09g(含量為82% )。
[0018]取2g富集后的米爾貝霉素A3和A4用30mL的甲醇溶解。將溶解液進半制備液相色譜儀，所用的半制備液相色譜儀為安捷倫1200，半制備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μ m。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇=70:28:2 (體積比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質(zhì)量1.92g，收率為 96%。
[0019]采用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ 1，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為100%。
[0020]實施例2:
[0021]取1.8L HP100樹脂(上海華震樹脂有限公司)裝柱(徑高比=1:8)，取米爾貝霉素粗品26.39g(含量為51.20% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用60%的二氯甲烷解吸樹脂柱，梯度抽取檢測。將分離出的米爾貝霉素A3、A4合并，濃縮后水層為810mL，加SlOmL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮，干物質(zhì)重14.5g(含量為93.21% )。
[0022]取2g富集后的米爾貝霉素A3和A4用30mL的乙腈溶解。將溶解液進半制備液相色譜儀，所用的半制備液相色譜儀為安捷倫1200，半制備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μ m。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇=70:28:2 (體積比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質(zhì)量為1.8g，收率為90%。
[0023]采用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ I，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為99.8%。
[0024]實施例3
[0025]取2L HP300大孔吸附樹脂裝柱(徑高比=1:7)，取米爾貝霉素粗品14.94g(含量為53.21% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用55%的乙醇解吸樹脂柱，梯度抽取檢測。將分離出的米爾貝霉素A3、A4合并，濃縮后水層為450mL，加450mL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮，干物質(zhì)重8.91g(含量為89.23% ) ο
[0026]取2g富集后的米爾貝霉素A3和A4用30mL的乙腈溶解。將溶解液進半制備液相色譜儀，所用的半制備液相色譜儀為安捷倫1200，半制備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μm。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇= 70:28:2，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質(zhì)量為1.96g，收率為 98%。
[0027]采用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ I，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為100%。
【權(quán)利要求】
1.一種高純度米爾貝霉素的制備方法，包括如下步驟: 1)將含量多50%的米爾貝霉素粗品用大孔吸附樹脂富集并分離出米爾貝霉素A3和A4，濃縮、干燥得干粉； 2)將步驟I)得到的米爾貝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，用半制備液相色譜制備得高純度米爾貝霉素A3和A4。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟I)富集用的樹脂選自下列型號的樹脂之一:HP20、HPD100 和 HPD300。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟I)所用樹脂柱的徑高比為I: (5 ?8) ο
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟I)具體是:將米爾貝霉素粗品用60%乙醇或60%甲醇溶解后上柱，然后以50% -62%的乙醇溶液或者55% -65%的甲醇溶液為流動相進行解吸，將米爾貝霉素A3和A4的解吸液合并、濃縮，用酯類有機溶劑萃取，再濃縮、得到米爾貝霉素A3和A4的干粉。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述酯類有機溶劑是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)用甲醇或乙腈將干粉溶解為濃度30mg/mL?67mg/mL的溶液進行半制備液相色譜。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所用甲醇是純度達99%的分析級甲醇，所用乙腈為純度達99.%分析級乙腈。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)的半制備液相色譜以體積比乙腈:水:甲醇=70:28:2的溶液為流動相，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集米爾貝霉A3和A4。
9.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)采用的半制備液相色譜儀為安捷倫1200，半制備柱為LP-C8色譜柱。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，步驟2)半制備柱為25.01*250mm，粒徑為 5-8 μπι。
【文檔編號】C07D493/22GK104497003SQ201410696342
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】周筠翔, 趙燕, 謝云, 張洪蘭, 詹付鳳, 葉靜 申請人:北大醫(yī)藥重慶大新藥業(yè)股份有限公司, 北大方正集團有限公司, 北大醫(yī)療產(chǎn)業(yè)集團有限公司