肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體 Ofep-S-S-DOX-Lip)制劑，本發(fā)明還公開了這種H印-S-S-DOX-Lip制劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝素（heparin，Hep)是一種酸性的粘多糖，在臨床上廣泛用于抗凝血和抗血栓。 近年來，人們在輔助使用肝素治療和預(yù)防癌癥并發(fā)的靜脈血栓時，發(fā)現(xiàn)肝素可以抑制腫瘤 轉(zhuǎn)移，延長惡性腫瘤患者的壽命。因此，國內(nèi)外對肝素抗轉(zhuǎn)移機制進行了大量的基礎(chǔ)和臨床 研宄。研宄結(jié)果表明，肝素的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用涉及到腫瘤形成與生長的各個環(huán)節(jié)。肝素促進 組織因子旁路途徑抑制物的釋放從而抑制腫瘤血管的新生。肝素可以抑制肝素酶的活性， 因此干預(yù)腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
[0003] 相對于開發(fā)昂貴的抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物，科學家們一直致力于應(yīng)用納米載體治療腫 瘤轉(zhuǎn)移。但將刺激響應(yīng)型納米藥物載體用于轉(zhuǎn)移瘤的研宄報道還很少。該載體是指在體循 環(huán)時維持原形，到達腫瘤位點時，腫瘤的特有環(huán)境將刺激載體發(fā)生轉(zhuǎn)變，促進藥物在腫瘤部 位的釋放，進一步提高載體的革G向性和有效性。其中，利用二硫鍵實現(xiàn)納米載體在腫瘤細胞 內(nèi)的觸發(fā)表現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用前景。二硫鍵在體內(nèi)血液循環(huán)過程中可長期穩(wěn)定存在，但在富 含還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH)的環(huán)境中會發(fā)生斷鍵反應(yīng)，而GSH在腫瘤 細胞內(nèi)的濃度（2~8mmol/L)要比其在血漿中的濃度（1~2 ymol/L)高1000倍以上，因 此，若通過二硫鍵負載藥物，則可以利用這種濃度差實現(xiàn)藥物在腫瘤細胞內(nèi)的控制釋放。
[0004] 本發(fā)明選擇的模型藥物為阿霉素（Doxorubicin，D0X)。為橙紅色結(jié)晶粉末，別名 多柔比星、羥柔紅霉素、14-羥正定霉素，熔點204-205°C，分子量為579. 98。其結(jié)構(gòu)中帶有 羥基，呈弱堿性。阿霉素作為經(jīng)典的化療藥物，抗腫瘤機制明確，主要是抑制RNA和DNA的 合成。1974年即在美國獲準臨床應(yīng)用，用于治療各種惡性腫瘤，如乳腺癌、肺癌、淋巴瘤、神 經(jīng)細胞瘤等。注射后廣泛分布于心、肝、脾、肺、腎中，在血漿中消失迅速，且其不良反應(yīng)較 多，最嚴重的是劑量依賴性心臟毒性和神經(jīng)毒性，不僅影響了患者的生存質(zhì)量，而且使阿霉 素的應(yīng)用受到限制，這也一直是化學結(jié)構(gòu)改造和新劑型研發(fā)工作的焦點。
[0005] 本發(fā)明是在構(gòu)建阿霉素脂質(zhì)體O)〇x-Lip)的基礎(chǔ)上，通過共價鍵結(jié)合的方式將肝 素修飾材料修飾在脂質(zhì)體表面。本發(fā)明用肝素修飾阿霉素脂質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤細胞轉(zhuǎn) 移和生長的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是制備肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體Ofep-S-S-DOX-Lip)，延長 阿霉素的體內(nèi)半衰期，提高阿霉素的生物利用度，并發(fā)揮肝素抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過如下措施來達到：
[0008] 本發(fā)明Ifep-S-S-DOX-Lip制劑，含下列組分及重量比：
[0009] 阿霉素1
[0010] 肝素修飾材料1~4
[0011] 大豆卵磷脂 10~80
[0012] 膽固醇 1~8
[0013] 十八胺1~4
[0014] 本發(fā)明中肝素修飾材料Ofep-DTSP)的制備方法如下：
[0015] 利用乙二胺的兩端氨基，通過聚合物末端反應(yīng)，將肝素的羧基和3,3'-二硫代二 丙酸二（N-羥基丁二酰亞胺酯）（DTSP)的酯基橋接，獲得二硫鍵修飾的肝素Ofep-DTSP)。
[0016] 優(yōu)選地，稱取一定量的H印溶于pH 7. 2的PBS溶液中，然后加入1-乙基-(3-二 甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽（EDC.HC1)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺（Sulfo-NHS)，再 緩慢滴加乙二胺，室溫攪拌反應(yīng)。透析法除去未反應(yīng)物質(zhì)。將透析液凍干得白色粉末。經(jīng) 將白色粉末溶于水中，3,3'-二硫代二丙酸二（N-羥基丁二酰亞胺酯）（DTSP)溶于二甲基 甲酰胺（DMF)，將DTSP的DMF溶液緩慢滴加到水溶液中，然后滴加三乙胺室溫反應(yīng)，透析除 去未反應(yīng)物質(zhì)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，當溶劑剩余少量時，加乙醇沉淀產(chǎn)物，離心棄上清，將沉 淀真空干燥，得白色固體。經(jīng) 1H NMR鑒定為目標產(chǎn)物Hep-DTSP。
[0017] 本發(fā)明采用薄膜分散法，制備步驟如下：
[0018] a.將處方量的大豆卵磷脂、膽固醇、十八胺溶于三氯甲烷中；
[0019] b.在水浴30°C~40°C條件下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸去除三氯甲烷；待有機溶劑揮 干后，繼續(xù)旋蒸2h;
[0020] C.加入PBS緩沖溶液，在水浴30°C~40°C條件下水合lh形成白色的分散乳液；
[0021] d.將步驟c中的乳液用探頭超聲儀進行超聲分散，即得空白脂質(zhì)體；
[0022] e.在水浴50°C~60°C條件下，將步驟d得到空白脂質(zhì)體與阿霉素溶液孵育 30min-60min，即得阿霉素脂質(zhì)體（DOX-Lip);
[0023] f.將步驟e中得到的阿霉素脂質(zhì)體混懸液與二硫鍵修飾的肝素在堿性條件下反 應(yīng)，得肝素修飾的阿霉素脂質(zhì)體。
[0024] 本發(fā)明中，阿霉素與磷脂、膽固醇與磷脂的配比直接影響到脂質(zhì)體的質(zhì)量。
[0025] 當固定處方和制備過程中的其他參數(shù)不變，僅考察藥物和磷脂的比例時，阿霉素 脂質(zhì)體的平均粒徑和包封率如表1所示。
[0026]表1.藥物和磷脂的比例對脂質(zhì)體粒徑和包封率的影響
【主權(quán)項】
1. 一種肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體，其特征在于，主要是含下列組分及重量比： 阿霉素 1 肝素修飾材料1~4 大豆卵磷脂 10~80。 膽固醇 1~8 十八胺 1~4
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體，其特征在于，所述肝素修 飾材料的合成方法為：利用乙二胺的兩端氨基，通過聚合物末端反應(yīng)，將肝素的羧基和3， 3 ^ -二硫代二丙酸二（N-羥基丁二酰亞胺酯）（DTSP)的酯基橋接，獲得二硫鍵修飾的肝素 Ofep-DTSP)。
3. 權(quán)利要求1或2所述的阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： a. 將處方量的大豆卵磷脂、膽固醇、十八胺溶于三氯甲烷中； b. 在水浴30°C~40°C條件下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸去除三氯甲烷；待有機溶劑揮干后， 繼續(xù)旋蒸2h ; c. 加入硫酸銨溶液，在水浴30°C~40°C條件下水合Ih形成白色的分散乳液； d. 將步驟c中的乳液用探頭超聲儀進行超聲分散，即得空白脂質(zhì)體； e. 在水浴50°C~60°C條件下，將步驟d得到空白脂質(zhì)體與阿霉素溶液孵育 30min-60min，即得阿霉素脂質(zhì)體； f. 將步驟e中得到的阿霉素脂質(zhì)體混懸液與二硫鍵修飾的肝素在堿性條件下反應(yīng)，即 得肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體制劑及其制備方法。所述的阿霉素脂質(zhì)體包含大豆卵磷脂、膽固醇、十八胺、阿霉素和肝素修飾材料，所述的肝素是通過二硫鍵修飾在阿霉素脂質(zhì)體表面。薄膜分散法制備的肝素修飾的可斷鍵阿霉素脂質(zhì)體，當脂質(zhì)體到達腫瘤細胞后，腫瘤細胞內(nèi)高度表達的谷胱甘肽會觸發(fā)脂質(zhì)體的二硫鍵斷裂，脫去外層的肝素，更好地釋放抗腫瘤藥物，并發(fā)揮肝素抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。
【IPC分類】A61K47-48, A61K31-728, A61K9-127, A61K31-704, A61P35-04, A61P35-00
【公開號】CN104666247
【申請?zhí)枴緾N201510055455
【發(fā)明人】柯學, 韓苗苗, 楊淼, 張強
【申請人】中國藥科大學
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年1月29日