一種米爾貝肟的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化學(xué)品的合成及純化領(lǐng)域，具體涉及一種半合成大環(huán)內(nèi)酯類驅(qū)蟲藥的合成及純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]米爾貝西(Milbemycin Oxime)是大環(huán)內(nèi)酯類抗體內(nèi)外寄生蟲藥物，是米爾貝霉素A3和A4的肟衍生物。米爾貝肟具有廣譜的抗寄生蟲作用，對(duì)體內(nèi)、體外寄生蟲特別是線蟲和節(jié)肢動(dòng)物有良好的驅(qū)殺作用。Lee等通過米爾貝肟對(duì)廣東血圓線蟲和犬惡絲蟲體外活力的神經(jīng)藥理學(xué)機(jī)制研究顯示，米爾貝肟對(duì)兩種蟲體的抑制和刺激效應(yīng)是通過的gabergic和膽堿能機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。藥物與靶蟲細(xì)胞上的特異性高親合力的位點(diǎn)結(jié)合，影響了細(xì)胞膜對(duì)C1-的通透性，繼而引起線蟲的神經(jīng)細(xì)胞及節(jié)肢動(dòng)物的肌細(xì)胞抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ_氨基丁酸(GABA)的釋放量增加，打開谷氨酸控制的C1-通道，增強(qiáng)神經(jīng)膜對(duì)C1-的通透性，GABA作用于突觸前神經(jīng)末梢，減少興奮性遞質(zhì)的釋放，使突觸后膜產(chǎn)生興奮性突觸后電位減弱，突觸后神經(jīng)元因膜電位的去極化程度達(dá)不到閾值而不能進(jìn)入興奮狀態(tài)，從而引起抑制，蟲體麻痹、死亡。哺乳的主要外周神經(jīng)傳遞介質(zhì)是乙酰膽堿，不受影響，雖然此類藥對(duì)大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的GABA有一定影響，但其不易通過血一腦屏障，因此在推薦使用劑量下使用對(duì)脊椎動(dòng)物無毒副作用。本類藥物進(jìn)入到體內(nèi)后極少分布到哺乳動(dòng)物腦組織，因此可以選擇性地作用于宿主的體內(nèi)外寄生蟲，而對(duì)動(dòng)物宿主本身不表現(xiàn)作用。
[0003]目前已經(jīng)報(bào)道的米爾貝肟的制備方法均采用了硅膠層析或制備色譜等工藝。CN101037442Α公開了一種利用冰城鏈霉菌制備α _型米爾貝霉素的方法。該方法采用甲醇提取，乙酸乙酯萃取，硅膠層析及C18制備色譜純化得到α-型米爾貝霉素。CN 104327094Α公開了一種米爾貝肟的分離純化方法。該方法以提取的米爾貝霉素浸膏進(jìn)行合成得到米爾貝肟粗品，然后采用硅膠柱層析進(jìn)行初步純化，再采用反相高效液相色譜進(jìn)行精純，最后經(jīng)結(jié)晶、轉(zhuǎn)晶、干燥得到米爾貝肟成品。上述米爾貝肟的制備方法的主要問題是硅膠層析或制備色譜不僅設(shè)備投入大，溶劑消耗大，成本高，而且較難放大，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種米爾貝肟的制備方法，解決了【背景技術(shù)】中的不足，該制備方法產(chǎn)能大幅提高，成本明顯下降，明顯優(yōu)于現(xiàn)有的制備方法。
[0005]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的所采用的技術(shù)方案為:
[0006]—種米爾貝肟的制備方法，包括以下步驟:(1)、米爾貝霉素提取:以發(fā)酵所得的米爾貝菌絲體為原料，經(jīng)正庚烷與乙醇的混合溶劑攪拌提取后，將提取液減壓濃縮，得到濃縮液Α，將濃縮液Α用乙醇水溶液萃取后，萃取液加壓濃縮，得到濃縮液B ;調(diào)節(jié)濃縮液B的pH至8?11，加入正庚烷與丙酮的混合溶劑萃取，得到正庚烷相，將正庚烷相過濾后，再減壓濃縮后得到米爾貝霉素；
[0007](2)、米爾貝酮制備:以米爾貝霉素為原料，建立氧化反應(yīng)體系，反應(yīng)完成后將反應(yīng)體系過濾、濃縮、萃取、濃縮后得到中間產(chǎn)物米爾貝酮；
[0008](3)、米爾貝肟合成:將米爾貝酮用甲醇、二氧六環(huán)溶解，滴加鹽酸羥胺溶液，25?35°C反應(yīng)12?20小時(shí)，將反應(yīng)體系濃縮，用二氯甲烷-水體系萃取，二氯甲烷相經(jīng)干燥、濃縮得米爾貝肟粗品；
[0009](4)、米爾貝肟純化:將米爾貝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶劑結(jié)晶，結(jié)晶品用乙醇溶解，在攪拌下滴加到水中析晶，過濾、干燥得米爾貝肟成品。
[0010]步驟(1)中正庚烷與乙醇的混合溶劑中兩者的體積比為(4?8):1，提取時(shí)的固液比為1: (5?10)，提取次數(shù)2?5次，提取液在50?60°C下減壓濃縮至原體積的1/10?1/4，得到濃縮液A。
[0011]步驟(1)中濃縮液A萃取所用乙醇水溶液的濃度為75%?90%，分兩次萃取，每次的溶劑用量為濃縮液A體積的0.7?1倍，合并兩次萃取的乙醇相，加壓濃縮至原體積的1/10?1/4，制得濃縮液B。
[0012]步驟(1)中用氨水調(diào)節(jié)濃縮液B的pH至8?11，加入的正庚烷與丙酮的混合溶劑中正庚烷與丙酮的體積比為(10?20):1，分兩次萃取，每次溶劑的用量為濃縮液B體積的
0.8?1.2倍，合并正庚烷相，加入無水硫酸鎂后攪拌、過濾。
[0013]步驟(2)的氧化反應(yīng)體系中以氯化鐵為氧化劑，以哌啶類氮氧自由基為催化劑，NaN02S鐵離子螯合劑，在二氯甲烷溶劑中于25?40 °C下反應(yīng)2?5h，米爾貝霉素、催化劑、FeCl3、NaN02&及二氯甲烷之間的摩爾比為 1: (0.02 ?0.08): (1.2 ?1.5): (1.2 ?1.5):(100 ?160)。
[0014]步驟(2)中將反應(yīng)體系過濾后35°C減壓蒸干進(jìn)行濃縮，再用濃度50%?80%的乙醇水溶液溶解，其中每千克濃縮物用15?30L的溶液溶解，然后再加入等體積的混合溶劑萃取兩次，混合溶劑為正庚烷與丙酮，其中正庚烷與丙酮的體積比為(10?20):1。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明先用正庚烷和乙醇體系對(duì)米爾貝霉素提取物進(jìn)行萃取，去除極性較小的雜質(zhì)(正庚烷相中)。米爾貝霉素經(jīng)氧化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為米爾貝酮，再次采用正庚烷與乙醇體系進(jìn)行萃取，由于米爾貝酮極性更小，在萃取過程中米爾貝酮分配在正庚烷相中，因此通過對(duì)米爾貝酮的萃取又能去除分配在乙醇中的極性較大的雜質(zhì)。米爾貝酮經(jīng)肟化反應(yīng)生成米爾貝肟后直接經(jīng)結(jié)晶、轉(zhuǎn)晶、干燥即可得到米爾貝肟成品。本發(fā)明以氧化反應(yīng)前后的兩次萃取替代了原有的硅膠柱層析和反相制備色譜，使得產(chǎn)能大幅提高，成本明顯下降，明顯優(yōu)于前述報(bào)道的制備方法。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)具體的說明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于以下實(shí)施例。
[0017]實(shí)施例1
[0018]本實(shí)施例所提供的米爾貝肟的制備方法，其步驟如下:1、稱取130Kg經(jīng)干燥的米爾貝菌絲體，米爾貝霉素^和A 4的標(biāo)定含量分別為0.55 %和2.57%，將其加入到1500L攪拌提取罐，加入體積比為6:1的正庚烷、丙酮混合溶劑750L，30rpm攪拌提取2h，過濾，濾餅再按上述條件提取2次，合并濾液。將濾液栗入濃縮釜，55°C減壓濃縮至約300L，得到濃縮液A。
[0019]2、將上步的濃縮液A轉(zhuǎn)移至1000L萃取釜，加入85%乙醇水溶液300L，25rpm攪拌15min，靜置30min，分液，上層正庚烷相用300L 85%乙醇溶液再萃取一次，合并萃取液，55°C減壓濃縮至150L，得到濃縮液B。
[0020]3、將上步的濃縮液B轉(zhuǎn)移至500L萃取釜，用氨水調(diào)節(jié)pH至9.5，加入體積比為95:5的正庚燒、丙酮混合溶劑150L，30rpm攪拌15min，靜置30min，分液，下層水相再萃取一次，合并萃取液，將其轉(zhuǎn)入500L攪拌罐，加入15Kg無水硫酸鎂，攪拌lOmin，過濾，將濾液在55°C下減壓濃干得米爾貝霉素浸膏14.9Kg，米爾貝霉素A3、^標(biāo)定含量分別為4.03%,20.12%，米爾貝霉素A3和A4的提取收率分別為84.0%和89.7%。
[0021]4、將上述米爾貝霉素浸膏用60L 二氯甲烷溶解轉(zhuǎn)移至100L反應(yīng)釜，加入Tempo (四甲基哌啶氮氧化物)52g，三氯化鐵1350g，亞硝酸鈉578g，35°C攪拌反應(yīng)2h，取樣檢測，反應(yīng)完全后，過濾，濾液在35 °C減壓濃干得米爾貝酮。
[0022]5、將米爾貝酮用300L 65%乙醇水溶液溶解，轉(zhuǎn)移至1000L萃取釜，加入體積比為95:5的正庚烷、丙酮溶液300L，攪拌15min，靜置60min，分液，下層乙醇溶液再萃取一次，合并正庚烷相，45 °C減壓濃干，得米爾貝酮純化品。
[0023]6、米爾貝酮純化品用甲醇、二氧六環(huán)溶解，滴加鹽酸羥胺溶液，30°C反應(yīng)16小時(shí)，將反應(yīng)體系濃縮，用二氯甲烷-水體系萃取，二氯甲烷相經(jīng)干燥、濃縮得米爾貝肟粗品；將米爾貝肟粗品用三氯甲烷和正庚烷混合溶劑結(jié)晶，結(jié)晶品用乙醇溶解，在攪拌下滴加到水中析晶，過濾、干燥得米爾貝肟成品2.85Kg，總收率為70.3%。
[0024]實(shí)施例2
[0025]本實(shí)施例所提供的米爾貝肟的制備方法，其步驟如下:1、稱取130Kg經(jīng)干燥的米爾貝菌絲體，米爾貝霉素^