專利名稱：一種從油用牡丹籽餅粕中制備單萜苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備單萜苷的方法，具體的說是涉及一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷化合物的方法，屬于中藥有效成分提取分離及應(yīng)用技術(shù)。
背景技術(shù)：
單萜苷是一類在芍藥科中分布很廣泛的一類化合物，同時也是一類具有非常廣泛生物活性的化合物，對免疫、心血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌等方面均有肯定的藥理作用。單萜苷類化合物大量存在于芍藥屬植物中，是芍藥屬植物特征性活性成分。牡丹籽油含有多種不飽和脂肪酸，尤其是罕見的奇數(shù)脂肪酸，是一種具有重要開發(fā)價值的食用油脂來源。2011年3月22日，中華人民共和國衛(wèi)生部批準自丹鳳牡丹(faeonia ostii T.Hong et J.X.Zhang)和紫斑牡丹(Paeoriia rockii)的籽經(jīng)過經(jīng)壓榨、脫色、脫臭等工藝制成的牡丹籽油作為新資源食品可以生產(chǎn)及食用中華人民共和國衛(wèi)生部公告，2011年第9號:衛(wèi)生部關(guān)于批準元寶楓籽油和牡丹籽油作為新資源食品的公告。這將為牡丹籽油的生產(chǎn)和使用起到非常大的促進作用。由于牡丹籽油的高營養(yǎng)價值，我國油用牡丹籽的種植量在逐漸增多，油用牡丹籽的產(chǎn)量也逐年增加。按照目前的產(chǎn)量，油用牡丹籽產(chǎn)量為3萬噸，按照出油率為30%計算，榨油后將會產(chǎn)生大約2萬噸的牡丹籽餅柏，這些牡丹籽餅柏的開發(fā)利用將會是一個非常重要且任務(wù)艱巨的研究課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從牡丹籽榨油后剩余的籽餅柏中制備分離單萜苷的方法。該方法過程簡單，所提取得到的單萜苷純度較高，具有多種生物活性。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，包括以下步驟:
(1)制備原料:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入占原料重量61倍的有機溶劑，回流3飛小時，冷卻至50°C后過濾出有機溶劑，繼續(xù)向原料中加入占原料重量6 8倍的有機溶齊U，回流3飛小時，冷卻至50°C后過濾出有機溶劑，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料重量10-12倍的濃度為70、0%的乙醇，加熱回流3-5小時，過濾得殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料重量10-12倍的濃度為7(Γ90%的乙醇，加熱回流3飛小時，過濾得殘渣，如此提取三次，合并濾液，將濾液減壓至-0.08^-0.10MPa蒸發(fā)濃縮至無醇味，得溶液備用；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量4飛倍的無水乙醇，靜止12 24小時后過濾，棄去不溶物，濾液在40-60°C減壓至-0.08-0.10MPa濃縮至無溶劑揮出，得混合物備用；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為50-60°C、300W的超聲條件下，向步驟(4)制取的混合物中加入占其質(zhì)量15 20倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物,將溶解部分用質(zhì)量為混合物的8(T100倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇水溶液進行脫洗，每個體系脫洗3 4倍柱體積，采用HPLC測定，收集單萜苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物。所述的油用牡丹籽餅柏為鳳丹籽餅柏或紫斑牡丹籽餅柏。所述的步驟(2)中采用的有機溶劑是石油醚、正己烷、環(huán)己烷中的ー種或幾種混合。
所述的過濾采用離心、抽濾、超濾或者壓濾。所述的大孔吸附樹脂采用弱極性或中等極性中的任何ー種。本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明是從油用牡丹，主要是鳳丹牡丹ostiiT.Hong et J.X.Zhang)和紫斑牡丹iPaeonia rockii)籽榨油后的下腳料牡丹籽餅柏中制備分離單萜苷，采用的原料為制備牡丹籽油(Peony Seed Oil)后的下腳料，為資源的進ー步開發(fā)利用，不會影響到原植物的其它功能和價值。本發(fā)明采用有機溶劑脫脂(石油醚或正己烷或環(huán)己烷)、有機溶劑こ醇提取、醇沉、大孔吸附樹脂吸附等エ藝較大規(guī)模的制備純度高的單萜苷，單萜苷純度達到55%以上，其中主要成分芍藥苷含量大于35%?？梢詥为毣蚺c適宜的賦形劑等結(jié)合，按照常規(guī)方法制成ロ服或非ロ服劑型的藥物。
具體實施例方式實施例1
(1)原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取1Kg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入8倍的石油醚，回流5小吋，冷卻至50°C后過濾出石油醚，繼續(xù)向原料中加入6倍的石油醚，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出石油醚，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量12倍的濃度為90%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量12倍的濃度為90%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.0SMPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量6倍的無水こ醇，靜止24小時后過濾，棄去不溶物，濾液在60°C減壓至-0.1OMPa濃縮至無溶劑揮出，稱重，得樣品275g ；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為60°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量20倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的100倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物，稱重，得樣品65 g，經(jīng)過檢測，芍藥苷含量41.5%，總單萜苷含量63.8%。實施例2
(1)原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取2Kg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(1)制取的原料中加入6倍的正己烷，回流3小吋，冷卻至50°C后過濾出正己燒，繼續(xù)向原料中加入4倍的正己烷，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出正己烷，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為70%的乙醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為70%的乙醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.0SMPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料4倍的無水乙醇，靜止18小時后過濾，棄去不溶物，濾液在40°C減壓至-0.1OMPa濃縮至無溶劑揮出，稱重，得樣品257g ；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為60°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量15倍的濃度為30%的乙醇，使混合物充分溶解,過濾,棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的80倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的乙醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物，稱重，得樣品57.3 g，經(jīng)過檢測，芍藥苷含量38.7%，總單萜苷含量60.8%。實施例3
(O原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取2Kg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入6倍的環(huán)己烷，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出環(huán)己烷，繼續(xù)向原料中加入6倍的正己烷，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出正己烷，得到脫脂后的牡丹 籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為70%的乙醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為70%的乙醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.0SMPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量4倍的無水乙醇，靜止12小時后過濾，棄去不溶物，濾液在40°C減壓至-0.1OMPa濃縮至無溶劑揮出，稱重，得樣品287g ；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為60°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量15倍的濃度為30%的乙醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的80倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的乙醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物，稱重，得樣品71.3g，經(jīng)過檢測，芍藥苷含量36.2%，總單萜苷含量57.8%。實施例4
(O原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取IKg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入8倍的正己烷，回流5小時，冷卻至50°C后過濾出正己燒，繼續(xù)向原料中加入6倍的石油醚，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出石油醚，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量12倍的濃度為90%的乙醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量12倍的濃度為90%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.09MPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量6倍的無水こ醇，靜止24小時后過濾，棄去不溶物，濾液在60°C減壓至-0.09MPa濃縮至無溶劑揮出，稱重，得樣品268g ；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為60°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量20倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的100倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物，稱重，得樣品61g，經(jīng)過檢測，芍藥苷含量37.9%，總單萜苷含量58.1%。實施例5
(1)原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取IKg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入7倍的環(huán)己烷烷，回流4小時，冷卻至50°C后過濾出環(huán)己烷，繼續(xù)向原料中加入7倍的石油醚，回流4小時，冷卻至50°C后過濾出石油醚，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量11倍的濃度為83%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量11倍的濃度為83%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.09MPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量5倍的無水こ醇，靜止18小時后過濾，棄去不溶物，濾液在50°C減壓至-0.09MPa濃縮至無溶劑揮出，稱重；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為55°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量17倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解,過濾,棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的90倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物。實施例6
(1)原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取IKg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入7倍的環(huán)己烷烷，回流4小時，冷卻至50°C后過濾出環(huán)己烷，繼續(xù)向原料中加入8倍的環(huán)己烷，回流5小時，冷卻至50°C后過濾出環(huán)己烷，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為90%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量11倍的濃度為70%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.09MPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量4倍的無水こ醇，靜止12小時后過濾，棄去不溶物，濾液在50°C減壓至-0.09MPa濃縮至無溶劑揮出，稱重；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為50°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量17倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的90倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物。實施例7
(1)原料制備:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，取IKg備用；
(2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入6倍的環(huán)己烷烷，回流3小時，冷卻至50°C后過濾出正己燒，繼續(xù)向原料中加入7倍的石油醚，回流4小時，冷卻至50°C后過濾出正己烷，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用；
(3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料質(zhì)量12倍的濃度為83%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料質(zhì)量10倍的濃度為70%的こ醇加熱回流，過濾殘渣，如此提取三次，合并濾液，濾液減壓至-0.1OMPa蒸發(fā)濃縮至無醇味；
(4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量6倍的無水こ醇，靜止24小時后過濾，棄去不溶物，濾液在50°C減壓至-0.08MPa濃縮至無溶劑揮出，稱重；
(5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為55°C、超聲功率為300W的條件下向步驟(4)制取的混合物中加入占混合物質(zhì)量15倍的濃度為30%的こ醇，使混合物充分溶解,過濾,棄去不溶物，將溶解部分用質(zhì)量為步驟(4)制取的混合物的質(zhì)量的90倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的こ醇-水溶液進行洗脫，每個體系洗脫3_4倍柱體積，采用HPLC測定，收集芍藥苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物。芍藥苷含量的測定方法:采用Agilent Zorbax SB C18色譜柱(4.6 X 250 mm, 5 m);流動相為こ腈-磷酸ニ氫鉀緩沖鹽(PH=2.5) 20:80等度洗脫，流速I mL min-1，檢測波長230 nm，柱溫30°C?？倖屋栖蘸繙y定方法:采用苯甲酸作為標準對照品，利用紫外-可見分光光度法，在230 nm處測試:稱取10毫克苯甲酸，采用85%こ醇配置成100 u g/mL的苯甲酸儲備液，在取一定量的儲備液稀釋成5.00，4.00，3.00，2.00，1.00，0.50 u g/mL,在230nm處測定紫外吸收，以吸光度A和濃度C進行線性回歸分析，得標準曲線。由測定的樣品吸光度A，按照下列公式計算出總單萜苷的含量。

總單萜苷(%) =(苯甲酸質(zhì)量X480.27X提取液稀釋倍數(shù))パ樣品粉末質(zhì)量 X 122.12 X IO6)。
權(quán)利要求
1.一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)制備原料:將榨油后的油用牡丹籽餅柏粉碎、干燥，制得原料，備用； (2)有機溶劑脫脂:向步驟(I)制取的原料中加入占原料重量61倍的有機溶劑，回流3飛小時，冷卻至50°C后過濾出有機溶劑，繼續(xù)向原料中加入占原料重量6 8倍的有機溶齊U，回流3飛小時，冷卻至50°C后過濾出有機溶劑，得到脫脂后的牡丹籽餅柏備用； (3)回流提取:向步驟(2)制取的脫脂后的牡丹籽餅柏中加入占原料重量1(Γ12倍的濃度為70、0%的乙醇，加熱回流3飛小時，過濾得殘渣，繼續(xù)向殘渣中加入占原料重量1(Γ12倍的濃度為7(Γ90%的乙醇，加熱回流3飛小時，過濾得殘渣，如此提取三次，合并濾液，將濾液減壓至-0.08^-0.1OMPa蒸發(fā)濃縮至無醇味，得溶液備用； (4)溶劑提取:在步驟(3)得到的溶液中加入占原料質(zhì)量4飛倍的無水乙醇，靜止12 24小時后過濾， 棄去不溶物，濾液在4(T60°C減壓至-0.08'0.1OMPa濃縮至無溶劑揮出，得混合物備用； (5)大孔吸附樹脂層析:在溫度為5(T60°C、300W的超聲條件下，向步驟(4)制取的混合物中加入占其質(zhì)量15 20倍的濃度為30%的乙醇，使混合物充分溶解，過濾，棄去不溶物,將溶解部分用質(zhì)量為混合物的8(Γ100倍的大孔吸附樹脂充分吸附，然后依次用濃度為30%、40%、60%、70%、90%的乙醇水溶液進行脫洗，每個體系脫洗3 4倍柱體積，采用HPLC測定，收集單萜苷含量大于30%的餾分段，即得到單萜苷化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，其特征在于:所述的油用牡丹籽餅柏為鳳丹籽餅柏或紫斑牡丹籽餅柏。
3.如權(quán)利要求1中所述的一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，其特征在于:所述的步驟(2)中采用的有機溶劑是石油醚、正己烷、環(huán)己烷中的一種或幾種混合。
4.如權(quán)利要求1中所述的一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，其特征在于:所述的過濾采用離心、抽濾、超濾或者壓濾。
5.如權(quán)利要求1中所述的一種從油用牡丹籽餅柏中制備單萜苷的方法，其特征在于:所述的大孔吸附樹脂采用弱極性或中等極性中的任何一種。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從油用牡丹籽餅粕中制備單萜苷類化合物的方法，本發(fā)明以油用牡丹籽榨油后剩余的籽餅粕為原料，經(jīng)過粉碎，有機溶劑脫脂，采用乙醇回流提取，分離手段包括有機溶劑脫脂、溶劑提取、大孔吸附樹脂層析等方法，從油用牡丹籽餅粕中制備分離得到單萜苷類化合物，本發(fā)明簡便，快捷，所得到單萜苷類化合物純度高，收率高，為油用牡丹籽榨油后剩余餅粕的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。
文檔編號C07H1/08GK103113434SQ201310061008
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者鄧瑞雪, 劉普, 尹衛(wèi)平, 高嘉嶼, 盧宗元, 牛亞琪, 王怡冉, 時清亮, 柴元武 申請人:河南科技大學(xué)