專利名稱：黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種中藥材對照品制備方法，具體是一種黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法。
背景技術(shù)：
2008年我國首次把中藥標準物質(zhì)研究列入國家科技計劃，建立我國中藥材標準物質(zhì)、中藥材物質(zhì)標準、中藥材標準分析方法技術(shù)規(guī)范和國際上通行的中藥標準是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵。黃芪作為非常中藥的一味補氣中藥，具有益氣固表、斂汗固脫、托瘡生肌、利水消腫之功效。臨床上應用非常廣泛，主要用于治療氣虛乏力，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，癰疽難饋，久潰不斂，血虛萎黃，內(nèi)熱消渴，慢性腎炎，蛋白尿，糖尿病等病癥。 自2010版藥典以來，有關(guān)黃芪藥材的質(zhì)量控制在原有對照品黃芪甲苷的基礎上又引進黃芪毛蕊異黃酮苷作為質(zhì)量控制的標準，但目前還沒有此對照品制備方法的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高效率、低成本中藥材對照品黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題本發(fā)明黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法，包括以下步驟(1)稱取黃芪藥材粉末，按每10公斤粉末加入100L的體積濃度為70-85 %乙醇提取，過濾，濾液濃縮至無醇味，過大孔樹脂，先用蒸餾水水洗至澄清，再用體積濃度為 70-85%的乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份，回收乙醇，在水浴鍋上濃縮得浸膏；(2)稱取浸膏，用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，點板，合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分，再將其蒸干；(3)用適量甲醇溶解后再加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，點板，合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分，蒸干得毛蕊異黃酮苷化合物粗品；(4)粗品用適量甲醇溶解后加入2倍甲醇體積的石油醚萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾，濾渣依次用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再經(jīng)100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，用甲醇重結(jié)晶，得到純的毛蕊異黃酮苷，揮干，保存。采用本發(fā)明方法可制取中藥材對照品黃芪毛蕊異黃酮苷，而且效率高、成本低。


圖1是本發(fā)明方法的工藝流程圖。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步說明。實施例1稱取黃芪藥材粉末(過50目篩)10公斤，加入100L的體積乙醇提取，過濾，濾液濃縮至無醇味，過D-101大孔樹脂(HG2-885-76)，再用體積濃度為70 %的乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份濃縮，回收乙醇，在水浴鍋上濃縮得浸膏。稱取浸膏，用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分。再用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，得粗品毛蕊異黃酮苷。將粗品用適量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇體積量)萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾，濾渣依次用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀。此米白色沉淀再經(jīng)100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，用甲醇重結(jié)晶，得到純度為98. 8% (HPLC面積-歸一法測定)的毛蕊異黃酮，揮干，保存。實施例2稱取黃芪藥材粉末(過50目篩)20公斤，加入200L的體積濃度為80 % 的乙醇提取，過濾，濾液濃縮至無醇味，過D-101大孔樹脂(HG2-885-76)，，再用體積濃度為80%的乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份濃縮，回收乙醇，在水浴鍋上濃縮得浸膏。稱取浸膏，用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分。再用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，得粗品毛蕊異黃酮苷。將粗品用適量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇體積量)萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾， 濾渣依次用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀。此米白色沉淀再經(jīng)100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，用甲醇重結(jié)晶，得到純度為98.8% (HPLC面積-歸一法測定)的毛蕊異黃酮，揮干，保存。實施例3稱取黃芪樣藥材粉末(過50目篩)30公斤，加入300L體積濃度為85 % 的乙醇提取，過濾，濾液濃縮至無醇味，過D-101大孔樹脂(HG2-885-76)，，再用體積濃度為85%的乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份濃縮，回收乙醇，在水浴鍋上濃縮得浸膏。稱取浸膏，用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析。采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分。再用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，得粗品毛蕊異黃酮苷。將粗品用適量甲醇溶解后加入石油醚O倍甲醇體積量)萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾， 濾渣依次用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀。此米白色沉淀再經(jīng)100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液進行洗脫，收集，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，用甲醇重結(jié)晶，得到純度為98.8% (HPLC面積-歸一法測定)的毛蕊異黃酮，揮干，保存。以下為結(jié)構(gòu)鑒定和純度檢測學實驗資料
1樣品純度檢測1.1 TLC 法檢測取適量制備所得的供試品以盡可能大的量點于硅膠G板上，以毛蕊異黃酮苷對照品溶液為對照，分別以乙酸乙酯-二丁酮-甲酸-水(體積比為10 :1:1: 1)、正丁醇-醋酸-水(體積比為4 5 1)及氯仿-甲醇(體積比為8 2)為展開劑，展開，晾干，在紫外燈254nm下觀察。結(jié)果在供試品色譜中，僅在于對照品色譜相應位置上顯一個黃色斑點，碘熏顯色為黃色。1.2 HPLC 法檢測色譜條件色譜柱BDS C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)，流動相A相是體積比為2 26 的乙腈-甲醇溶液，B相是體積濃度為0. 5%的磷酸水，梯度洗脫0-30min，15-60% A，檢測波長為254nm，柱溫為25°C，流速為0. 7mL/min,進樣量體積為10 μ L，純度98. 8%2結(jié)構(gòu)鑒定
權(quán)利要求
1.黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法，包括以下步驟(1)稱取黃芪藥材粉末，按每10公斤粉末加入100L的體積濃度為70-85%乙醇提取， 過濾，濾液濃縮至無醇味，過大孔樹脂，先用蒸餾水水洗至澄清，再用體積濃度為70-85%的乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份，回收乙醇，在水浴鍋上濃縮得浸膏；(2)稱取浸膏，用適量甲醇溶解后加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為9 1 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，點板，合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分，再將其蒸干；(3)用適量甲醇溶解后再加入100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，點板，合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分，蒸干得毛蕊異黃酮苷化合物粗品；(4)粗品用適量甲醇溶解后加入2倍甲醇體積的石油醚萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾，濾渣依次用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再經(jīng)100-200目的硅膠拌樣進行硅膠柱層析，采用體積比為 9:1: 0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，用甲醇重結(jié)晶，得到純的毛蕊異黃酮苷，揮干，保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了黃芪中毛蕊異黃酮苷的提取與純化方法，該方法包括以下步驟(1)將黃芪藥材粉末用乙醇提取，過濾，再經(jīng)蒸餾水、乙醇洗脫，收集含毛蕊異黃酮苷的組份，濃縮得浸膏；(2)進行硅膠柱層析，采用體積比為9∶1∶0.05的氯仿-甲醇-水溶液洗脫，收集樣品，點板，合并含有毛蕊異黃酮苷斑點的組分，蒸干；(3)再進行硅膠柱層析，得毛蕊異黃酮苷化合物粗品；(4)加入石油醚萃取，棄去石油醚層，甲醇層有白色沉淀析出，過濾，濾渣用石油醚、甲醇洗滌，得米白色沉淀；(5)米白色沉淀再進行硅膠柱層析，合并含有毛蕊異黃酮苷的組份，重結(jié)晶，得到純的毛蕊異黃酮苷，揮干，保存。本發(fā)明方法制取黃芪毛蕊異黃酮苷，效率高、成本低。
文檔編號C07H1/08GK102532221SQ20111045243
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者劉振杰, 周小雷, 王碩, 袁經(jīng)權(quán), 龔小妹 申請人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園