玉竹葉黃酮苷提取物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，設(shè)及玉竹葉黃酬巧提取物及其制備方法，還設(shè)及玉竹葉黃 酬巧提取物在制備預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病腎病是常見的糖尿病慢性微血管并發(fā)癥之一，通常是指由于糖尿病引起的 腎小球基底膜增厚，系膜擴張 W及胞外基質(zhì)增生，導(dǎo)致腎小球的高濾過和蛋白尿。早期表現(xiàn) 為尿中排出微量白蛋白，繼之出現(xiàn)臨床蛋白尿，最后進展為慢性腎功能不全，已成為終末期 腎衰的主要病因。DN發(fā)病與高血糖引起糖代謝異常相關(guān)的機制主要有蛋白質(zhì)非酶糖基化終 末產(chǎn)物生成增多、多元醇代謝途徑異常和蛋白激酶C激活等。
[0003] 已有大量證據(jù)表明，持續(xù)高血糖引起機體多種蛋白質(zhì)非酶糖基化，由此形成的非 酶糖基化終末產(chǎn)物在糖尿病腎病的發(fā)病機制中起重要作用，作為糖尿病腎病治療的新祀 點，蛋白質(zhì)非酶糖基化終末產(chǎn)物抑制劑將成為一類新型的糖尿病腎病治療藥物。
[0004] 玉竹始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，源于百合科黃精屬植物玉竹Polygonatum Odoratum (Mill.) Druce的干燥根莖，為中國藥典2015年版一部所收載。具有養(yǎng)陰潤燥， 生津止渴之功能，用于肺胃陰傷，燥熱咳嗽，咽干口渴，內(nèi)熱消渴。本案發(fā)明人發(fā)現(xiàn)玉竹根莖 所含的二氨高異黃酬類化合物3-(4'-徑苯甲基)-5,7-二徑基-6-甲基-8-氧甲基-苯丙二氨 化喃-4-酬，3-(4 ' -徑苯甲基)-5，7-二徑基-6，8-二甲基-苯丙二氨化喃-4-酬和3-(4 ' -甲氧 苯甲基)-5,7-二徑基-6-甲基-8-氧甲基-苯丙二氨化喃-4-酬對蛋白質(zhì)非酶糖基化終末產(chǎn) 物的形成具有明顯地抑制作用。在此基礎(chǔ)上，本案發(fā)明人制備了玉竹二氨高異黃酬提取物 并發(fā)現(xiàn)了玉竹二氨高異黃酬提取物預(yù)防和/或治療糖尿病腎病作用，已獲得發(fā)明專利授權(quán) (ZL 2009 1 0067518.6)。玉竹的非藥用部位玉竹葉生物量大，價廉易得，但對其開發(fā)利用 非常有限，常常棄之不用，未見玉竹葉化學(xué)成分和藥理作用的研究報道。本案發(fā)明人對其化 學(xué)成分進行了研究，從乙醇提取物乙酸乙醋和正下醇分離部位中分離鑒定了 10個化合物 [徐偉強，等.中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20(21) : 112 ]。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本案發(fā)明人采用體外D-葡萄糖-牛血清白蛋白蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)體系測定玉 竹葉乙醇提取物對蛋白質(zhì)非酶糖基化抑制作用研究中發(fā)現(xiàn)，玉竹葉乙醇提取物對蛋白質(zhì)非 酶糖基化終末產(chǎn)物的形成具有顯著的抑制作用。進一步采用體外D-葡萄糖-牛血清白蛋白 蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)體系研究了從玉竹葉中分離鑒定的10個化合物，首次發(fā)現(xiàn)玉竹所含 的黃酬巧肥皂草巧對蛋白質(zhì)非酶糖基化終末產(chǎn)物的形成具有明顯地抑制作用，在此基礎(chǔ) 上，本案發(fā)明人制備了肥皂草巧含量50~70%的玉竹葉黃酬巧提取物并發(fā)現(xiàn)了玉竹葉黃酬巧 提取物基于抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化終末產(chǎn)物的形成機制預(yù)防和/或治療糖尿病腎病作用， 因而完成了本發(fā)明。
[0006] 本發(fā)明提供一種玉竹葉黃酬巧提取物及其制備方法和用途。
[0007] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物，從玉竹葉中提取。
[0008] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物中肥皂草巧的含量50~70%，肥皂草巧是由下述式表 示的化合物。
[0009] 本發(fā)明提供玉竹葉黃酬巧提取物的制備方法，其特征在于包括W下步驟： a) 玉竹葉用0~100%乙醇或丙酬水溶液回流提取，濾過，提取液合并，提取液減壓濃縮得 提取物； b) 將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗 脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液； C)用10~20%乙醇水溶液至洗脫液近無色，棄去洗脫液； d)用30~50%乙醇水溶液洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，洗脫液減壓濃縮、干燥得玉 竹葉黃酬巧提取物。
[0010] 本發(fā)明提供玉竹葉黃酬巧提取物的制備方法，優(yōu)選的包括W下步驟： a) 玉竹葉加70~90%乙醇水溶液回流提取，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物； b) 將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗 脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液； C)用10%乙醇水溶液洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液； d)用30%乙醇水溶液洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，洗脫液液減壓濃縮、干燥得玉 竹葉黃酬巧提取物。
[0011] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物在制備預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中的應(yīng)用， 特別是在制備蛋白質(zhì)非酶糖基化抑制劑產(chǎn)品中應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明采用體外D-葡萄糖-牛血清白蛋白蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)體系測定玉竹葉 黃酬巧提取物的抑制作用，玉竹葉黃酬巧提取物半數(shù)抑制濃度ICso值24.7~37.9 yg/mL，陽 性對照氨基脈半數(shù)抑制濃度ICsq值231.26山1。上述結(jié)果表明玉竹葉黃酬巧提取物可在制備 預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中應(yīng)用，特別是作為蛋白質(zhì)非酶糖基化抑制劑在制備預(yù)防 和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中應(yīng)用。也可W含有玉竹葉黃酬巧提取物的藥物組合物在制備 預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中應(yīng)用，特別是作為蛋白質(zhì)非酶糖基化抑制劑在制備預(yù)防 和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品中應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物優(yōu)點為其中肥皂草巧的含量50~70%，運是W前技術(shù) 尚未報道的，由于含量高，從而提高了療效，滿足制備預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品的需 要。
[0014] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物制備方法優(yōu)點為工藝簡單，操作方便，技術(shù)易掌握， 能耗小，溶劑可回收循環(huán)使用，生產(chǎn)成本低。
[0015] 本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物可用于制備預(yù)防和/或治療糖尿病腎病產(chǎn)品優(yōu)點為 作用機制明確，基于抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化。
[0016] 本發(fā)明還提供用本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物W及藥學(xué)上可接受的載體或賦形 劑制備的藥物制劑。運些藥物制劑選自W下劑型：片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片 劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸 劑、散劑、膏劑、口服液、混懸劑、溶液劑、氣霧劑、注射劑，注射乳劑、凍干粉針，還可W根據(jù) 需要制備成緩釋或控釋制劑。
[0017] 本發(fā)明的含有玉竹葉黃酬巧提取物的藥物制劑，在制備藥物制劑時可加入藥物可 接受的載體，所述藥物可接受的載體來自：抗氧劑、塞合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、濕 潤劑、溶劑、緩釋材料、腸溶材料、抑調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用載體如:甘露糖醇、右旋糖 巧、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鋼、娃衍生物、纖維素、纖維 素衍生物、明膠、聚乙締化咯燒酬、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸巧、聚乙二醇、環(huán)糊精、憐脂類材 料、滑石粉、硬脂酸儀、硬脂酸巧等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明的玉竹葉黃酬巧提取物高效液相色譜圖 W下通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，并非對本發(fā)明的限定，依照本領(lǐng)域公 知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實施方式并不限于具體實施例。
【具體實施方式】 [0019]實施例1 HPLC法測定玉竹葉黃酬巧提取物中肥皂草巧含量的方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W甲醇為流動相A，WO. 1 %憐酸溶液為流動相B， 線性梯度洗脫:〇 min(A 20 %，B 80 %)一 10 min(A 20 %，B 80 %)一 20 min(A 30 %，B 70 %)一 40 min(A30 %，B 70 %)一 50 min(A 40 %，B 60 %)一 60 min(A 60 %，B 40 〇/〇) 一 70 min(A 100%，B 0 %)一 90 min(A 100 %，B 0 %);流速：1.0 mL.min-i;檢測波長為 340nm。理論塔板數(shù)按肥皂草巧峰計算，不低于6000。
[0020] 溶液的制備 對照品溶液的制備 精密稱取肥皂草巧對照品適量，加甲醇制成每1 mL含肥皂草巧180 iig的溶液。
[0021] 供試品溶液的制備 取玉竹葉黃酬巧提取物30 mg，精密稱定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，加甲醇至 刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0022] 樣品測定方法 精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20山，按色譜條件進樣測定，外標(biāo)一點法計算玉 竹葉黃酬巧提取物中肥皂草巧的含量。
[0023] 實施例2 取玉竹葉10 Kg，加8倍量水回流提取3次，每次2小時，濾過，提取液合并，減壓回收得提 取物。取提取物加水溶解，加于HPDlOO大孔吸附樹脂柱上，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去 洗脫液，用10%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液，用50%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收 集洗脫液，減壓回收得玉竹葉黃酬巧提取物348 g。采用實施例1的方法測定玉竹葉黃酬巧 提取物中肥皂草巧的含量為50.23 %。
[0024] 實施例3 取玉竹葉10 Kg，加10倍量80%丙酬回流提取3次，每次2小時，濾過，提取液合并，減壓回 收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD