一種采用hplc快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥成分分析領(lǐng)域。即一種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法。其色譜分析條件如下：（1）色譜柱采用反相C18色譜柱；（2）流動(dòng)相組成為：甲醇-水-四氫呋喃-酸，流動(dòng)相中各成分的體積比為：四氫呋喃與甲醇比例為0.03～0.1，四氫呋喃+甲醇比例為30～40%，酸的比例為水相的0.1-2%；（3）紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm；（4）色譜柱溫度為：35～45℃。在等度洗脫的條件下，20min內(nèi)就可以同時(shí)分離分析15個(gè)以上的色譜峰，與從前的方法相比，不但解決了木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷與木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷較難分離的問(wèn)題，并且苦碟子注射液中的酚酸類色譜峰也很好的分離出來(lái)，而且分析時(shí)間大大縮短。
【專利說(shuō)明】一種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類 有效成分的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥成分分析領(lǐng)域。即一種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮 苷及酚酸類有效成分的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 苦碟子注射液是以菊科草本植物抱莖苦荬菜為原料提取精制而成的靜脈注射 齊U，其主要成分有酚酸類、黃酮類等。苦碟子注射液列入國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品（國(guó)藥準(zhǔn)字 Z20025450)，由通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。因其具有活血止痛、清熱祛瘀的功效， 而被廣泛用于心腦血管疾病的治療，長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐證明其使用安全，療效確切。木犀草 素-7-0-々-D葡萄糖醛酸苷屬于黃酮苷類，在苦碟子藥材中含量較高且比較穩(wěn)定，其在苦 碟子注射液中含量也較高，因此可作為苦碟子注射液質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。但是因?yàn)槟鞠?草素-7-0-，_D葡萄糖醛酸苷與木犀草素-7-0-，-D葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)相近，目前采用HPLC 方法分析苦碟子注射液時(shí)，上述兩種成分的分離度不夠，分離時(shí)間大大延長(zhǎng)，并且因?yàn)椴捎?梯度洗脫，分析色譜圖容易出現(xiàn)波動(dòng)(對(duì)比文獻(xiàn)：HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定苦碟子注射液中六 種黃酮類成分的方法，申請(qǐng)?zhí)枺?01310071067.X)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有苦碟子注射液分析方法的缺陷，提供了一種采用HPLC快速分析 苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法。
[0004] 一種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法，其色 譜分析條件如下：（1)色譜柱采用反相C18色譜柱；（2)流動(dòng)相組成為：甲醇-水-四氫呋 喃-酸，流動(dòng)相中各成分的體積比為：四氫呋喃與甲醇比例為〇. 03?0. 1，四氫呋喃+甲醇 比例為30?40%，酸的比例為水相的0. 1-2% ; (3)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm; (4)色譜柱溫度 為：35?45°C。優(yōu)選色譜柱溫度為40?45°C。
[0005] 流動(dòng)相中各成分的體積比優(yōu)選為為：四氫呋喃與甲醇比例為0. 05?0. 1，四氫呋 喃+甲醇比例為35-38% ;酸的比例為水相的0. 5-1%。
[0006] 酸包括但不限于甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸二氫 鉀、硫酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸。酸優(yōu)選為甲酸或冰乙酸。
[0007] -種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法，其特 征在于色譜分析條件如下：（1)色譜柱采用反相C18色譜柱；（2)流動(dòng)相組成為：四氫呋喃 與甲醇比例為0. 05?0. 1，四氫呋喃+甲醇比例為35-38% ;甲酸的比例為水相的0. 5-1% ; (3)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm; (4)色譜柱溫度為：40?45°C。
[0008] 通過(guò)中心復(fù)合設(shè)計(jì)的方法，優(yōu)化色譜分析條件，可以明顯提高各色譜峰分離效果， 尤其是木犀草素-7-0-々-D葡萄糖醛酸苷與木犀草素-7-0-々-D葡萄糖苷的分離效果，縮 短分析時(shí)間，色譜分析圖譜重現(xiàn)性好。
[0009] 中心復(fù)合設(shè)計(jì)（centralcompositedesign,CO))方法是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的實(shí)驗(yàn) 設(shè)計(jì)方法。該方法的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)點(diǎn)距中心點(diǎn)的距離相等，自變量的極端水平為實(shí)驗(yàn)所允許 的極大極小值，一次設(shè)計(jì)即可獲得較佳條件，用非線性數(shù)學(xué)模型擬合相關(guān)系數(shù)較高，預(yù)測(cè)性 好。為了明確各因素對(duì)HPLC分析結(jié)果的影響，本發(fā)明采用中心復(fù)合設(shè)計(jì)方法對(duì)苦碟子注射 液中木犀草素-7-0-々-D葡萄糖醛酸苷的高效液相分析方法進(jìn)行了優(yōu)化，得出最佳色譜條 件。
[0010] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的效果作進(jìn)一步的說(shuō)明，下述各實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā) 明，對(duì)本發(fā)明沒有限定。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1 -圖3是表2中各分析條件下的HPLC圖譜。
[0012] 圖4是各指標(biāo)（Y)與影響因子（X)關(guān)系圖。
[0013] 圖5是優(yōu)化的色譜分析條件下苦碟子注射液的HPLC分析圖譜。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1 采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法： 1.儀器與材料 島津LC-2010A高效液相色譜儀（SHIMADZU公司），UV檢測(cè)器，色譜柱UltimateTMAQ-C18 (4.6X250mm，5Mm)(WelchMaterials公司）?？嗟幼⑸湟海ㄍɑ?華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司。批號(hào)91112)，色譜甲醇，色譜乙腈，色譜四氫呋喃，色譜甲酸（山 東禹王公司），雙蒸水（實(shí)驗(yàn)室自制）。
[0015] 2.色譜條件 色譜柱：UltimateTMAQ_C18 (4.6X250 (WelchMaterials公司）；流動(dòng)相：A 相有機(jī)相，B相為l%(v/v)的甲酸水溶液；流速為1mL*min-l;檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm;進(jìn)樣體 積為10ML。
[0016] 流動(dòng)相：A相為四氫呋喃與甲醇溶液的混合溶液，四氫呋喃的體積比變化范圍為 0.03-0.1 (v/v)，B相為1% (v/v)的甲酸水溶液，A相變化范圍為30%-40%;柱溫變化范 圍 35-45 °C。
[0017] 3.樣品測(cè)定 取苦碟子注射液，經(jīng)過(guò)〇. 45Mm微孔濾膜，按各色譜條件測(cè)定。
[0018] 4.色譜分析條件優(yōu)化試驗(yàn) 4.1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 影響色譜行為的因素有很多，根據(jù)范第姆特速率理論，HPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：①小 粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；②低粘度流動(dòng)相，流速不宜過(guò)快；③柱溫適當(dāng)。當(dāng)色譜柱 固定后，影響色譜行為的因素包括：流動(dòng)相的種類、流動(dòng)相的配比、柱溫以及流速。為減少 試驗(yàn)次數(shù)，本實(shí)驗(yàn)采用常用流速1mL*min-l。綜合以上因素，最終確定了溫度（XJ、四氫 呋喃與甲醇比例（X2)、有機(jī)相（甲醇+四氫呋喃）比例（X3)為影響色譜行為的關(guān)鍵因素。 以其作為考察對(duì)象，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平?？疾熘笜?biāo)采用4、5號(hào)峰分離度（YD，5、6號(hào)峰 分離度（Y2)，7號(hào)峰保留時(shí)間（Y3)。因素及水平表詳見表1;試驗(yàn)安排及結(jié)果詳見表2。 各實(shí)驗(yàn)結(jié)果色譜詳見圖1 一圖3，縱坐標(biāo)為mAU，橫坐標(biāo)為min。圖1中的（1)是表2中run 1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。依此類推，各圖的分析條件與表2相對(duì)應(yīng)。
[0019]每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次，為了 4、5、6號(hào)峰達(dá)到彼此分離，我們認(rèn)為分離度I、Y2大于 2 (-般要求大于1. 5即可）是理想的；為了提高工作效率，7號(hào)峰的出峰時(shí)間應(yīng)控制在20 分鐘之內(nèi)，即Y3〈 20min。
[0020] 表1影響因素與水平及真實(shí)值與代碼值

【權(quán)利要求】
1. 一種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法，其特征 在于色譜分析條件如下：（1)色譜柱采用反相C18色譜柱；（2)流動(dòng)相組成為：甲醇-水-四 氫呋喃-酸，流動(dòng)相中各成分的體積比為：四氫呋喃與甲醇比例為〇. 03?0. 1，四氫呋喃+ 甲醇比例為30?40%，酸的比例為水相的0. 1-2% ; (3)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm ; (4)色譜柱 溫度為：35?45°C。
2. 如權(quán)利要求1中所述的采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成 分的方法，其特征在于流動(dòng)相中各成分的體積比為：四氫呋喃與甲醇比例為〇. 05?0. 1，四 氫呋喃+甲醇比例為35-38% ;酸的比例為水相的0. 5-1%。
3. 如權(quán)利要求1或2中所述采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效 成分的方法，其特征在于所述的酸包括但不限于甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、磷酸、 磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、硫酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸。
4. 如權(quán)利要求3所述采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的 方法，其特征在于所述的酸為甲酸或冰乙酸。
5. 如權(quán)利要求1中所述的采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成 分的方法，其特征在于色譜柱溫度為40?45°C。
6. -種采用HPLC快速分析苦碟子注射液中黃酮苷及酚酸類有效成分的方法，其特征 在于色譜分析條件如下：（1)色譜柱采用反相C18色譜柱；（2)流動(dòng)相組成為：四氫呋喃與 甲醇比例為0. 05?0. 1，四氫呋喃+甲醇比例為35-38% ;甲酸的比例為水相的0. 5-1% ; (3) 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm ; (4)色譜柱溫度為：40?45°C。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104458995SQ201410777085
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】劉東春, 鄒敬韜, 王芳, 蓋男, 田旭輝, 陳家驕, 黃小萍, 鄧昌瑞, 王鳳玉, 陳 峰, 劉東輝 申請(qǐng)人:通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司