專利名稱：一種原花青素的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物提取技術領域，涉及一種原花青素的制備方法。
背景技術：
原花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins (OPC)，是一種有著特殊分子結構的生物類黃酮，是目前國際上公認的清除人體內自由基最有效的天然抗氧化劑。一般為紅棕色粉末，氣微、味澀，溶于水和大多有機溶劑。一般為葡萄籽提取物、法國海岸松樹皮提取物或紫提取物薯等。原花青素是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強效的自由基清除劑，具有非常強的體內活性。實驗證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素 E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全。原花青素在保健品和化妝品等領域都有廣泛的應用。經(jīng)檢索，原花青素的提取制備方法摘錄如下中國專利申請?zhí)?01110U6763. 7名稱一種從松球殼提取原花青素的提取工藝，本發(fā)明涉及一種從松球殼提取原花青素的提取工藝，屬于食品技術領域，其提取工藝是粉碎，松球殼經(jīng)粉碎至40-60目，備用；脫脂，取松球殼粉，加8-12倍量石油醚浸泡M小時以上，超聲處理25分鐘以上，過濾，得脫脂松球殼粉，備用；提取，按脂松球殼粉與40%乙醇的固液比1 20比例，浸泡M小時以上，超聲波振蕩提取1小時，過濾，減壓濃縮至無醇味，加蒸餾水稀釋，備用；純化，將提取液上大孔樹脂柱，放置M小時以上，以2BV/h流速水洗，水洗，用乙醇4-6BV解析，流出液減壓濃縮回收乙醇，60-80°C真空干燥，成品。有益效果是為原花青素生產(chǎn)提供了一種來源廣泛、數(shù)量豐富的可再生綠色資源。中國專利申請?zhí)?01110091574. O —種薔薇紅景天原花青素的制備方法本發(fā)明涉及一種薔薇紅景天原花青素的制備方法，該方法以薔薇紅景天根莖為原料，先將其粉碎、 過篩，用50%乙醇回流2小時，得原花青素初提液；再對該初提液進行除雜，高濃度乙醇除糖類物質，石油醚除脂類物質；然后用乙酸乙酯萃取，分離高聚原花青素和低聚原花青素； 最后再用大孔吸附樹脂對高聚、低聚原花青素進行純化，冷凍干燥后高聚原花青素的純度達到95. 0%，低聚原花青素純度達到88. 3%。該方法工藝簡單，無污染，易于工業(yè)化生產(chǎn)； 得到的原花青素純度高，可應用于天然色素食品添加劑及具有抗氧化作用的醫(yī)藥保健品原料。中國專利申請?zhí)?01110031451. 8 —種提取分離云南松樹皮中低聚原花青素的方法，先將原料預處理，將新鮮云南松樹皮，分揀出未污染部分，于室內晾干，控制原料水分在8 10%，粉碎，過20目篩；再進行提取，以預處理后的原料，按料液比1 2 10加入提取溶劑，在沸騰條件下回流提取或微波提取1 4次；將提取溶液合并，抽濾，濾液濃縮成浸膏；最后分離，以提取原料3 6倍重量的水溶解浸膏，過濾，濾液用氯仿萃取脫脂2次， 氯仿與浸膏水溶解溶液的體積比為1 3，脫脂后的水層加入氯化鈉至飽和，再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯與飽和水的體積比例為1 1 ；將萃取液在70士2°C、壓力為0. 02 0. OSMPa條件下除去溶劑，濃縮即得低聚原花青素。本發(fā)明方法工藝過程簡單易行、設備簡單、原料易得、便于推廣應用。
中國專利申請?zhí)?01010503367. 7蔓越橘果實中花色苷及原花青素類成分的提取方法本發(fā)明公開了一種蔓越橘果實中花色苷和原花青素類成分的提取方法，包括以下步驟先將蔓越橘果實破碎處理，用生物酶酶解后，在pH值1. 0 5. 5條件下進行水浸提， 得水提取液和殘渣；再將殘渣進行醇提萃取，濃縮萃取液回收醇，得醇提濃縮液；將水提取液與醇提濃縮液合并，通過大孔吸附樹脂吸附，用水洗滌大孔吸附樹脂后，用含水醇溶液解析，將解析液濃縮、干燥，得含花色苷和原花青素類成分的混合物；本發(fā)明的方法工藝簡單、 設備通用強、投資少、收率高、成本低、適于規(guī)?；a(chǎn)；所得混合物可用做食品、保養(yǎng)品、藥品方面的原料或作為添加劑使用。中國專利申請?zhí)?01010525734. 3黑果枸杞原花青素產(chǎn)品及其制備方法本發(fā)明涉及一種黑果枸杞原花青素產(chǎn)品，該產(chǎn)品以黑果枸杞鮮果為原料，經(jīng)分離純化后得到的低聚原花青素含量為40% 70%、高聚體原花青素含量為10% 35%、其它雜質為10% 40%的淡紫紅色粉末產(chǎn)品。同時本發(fā)明還公開了該產(chǎn)品的制備方法。本發(fā)明采用膜分離技術，方法簡單、快速，不僅避免了有毒性的有機試劑的使用，得到的產(chǎn)品性質均一、穩(wěn)定、且有效地降低了生產(chǎn)成本，可應用具有抗氧化作用的醫(yī)藥保健品原料。中國專利申請?zhí)?01010188041. X從葡萄酒泥中提取原花青素的方法本發(fā)明公開了一種從葡萄酒泥中提取原花青素的方法，包括下列內容在葡萄酒泥中加入1 2倍體積的濃度為80% 90%的乙醇溶液攪拌提取，再沉淀分離并收集提取液，分別用紗布和濾紙過濾提取液并收集濾液，將濾液加熱蒸發(fā)回收乙醇，最后加熱蒸發(fā)干燥除去水分得到葡萄原花青素產(chǎn)品。將本發(fā)明的方法用于從葡萄酒泥中提取原花青素，能夠將廢棄酒泥中的葡萄原花青素提取出來，變廢為寶，為葡萄原花青素的生產(chǎn)提供一種新的原料來源，并且能夠克服目前提取方法存在的溶劑使用量大、提取時間長、生產(chǎn)成本高的缺陷。中國專利申請?zhí)?00910048064. 8 一種低聚原花青素的提取方法本發(fā)明公開了一種提取低聚原花青素的方法，其包括如下步驟將含低聚原花青素的植物原料用溶劑提取所得的粗提物上大孔吸附樹脂柱，用水洗脫除去蛋白質和多糖類雜質，之后再用下述有機溶劑中的一種或多種與水作為洗脫劑進行梯度洗脫乙醇、甲醇和丙酮，收集以體積比為 4:1: 5的正丁醇、醋酸和水的混合溶液靜置分層后的上層溶液為展開劑，硅膠薄層層析板上Rf值為0. 2 0. 5的洗脫部分，即得低聚原花青素提取物。較現(xiàn)有技術，本發(fā)明的方法純度和收率均有顯著提高，低聚原花青素收率可達80%以上，產(chǎn)品純度> 50%，基本都在80%以上，且該方法工藝簡便，成本低，易于產(chǎn)業(yè)化。中國專利申請?zhí)?01010125513. 7 —種從葡萄籽中提取原花青素的方法本發(fā)明提供一種從葡萄籽中提取原花青素的方法，將物料放入提取罐中，提取溶劑為水或含水乙醇，用量為3 10倍體積物料質量，溫度為45 100°C，時間為20 60分鐘，通過依次對各罐進行提取，使各罐中提取液的有效成分含量依次遞減，再將各罐中有效成分含量最高的提取液進行排液，進入循環(huán)步驟后對已經(jīng)進行多次溶劑提取的物料所在的提取罐進行排渣與加物料，新溶劑在物料進行最后一次提取時加入，之后隔一個單元進行遷移，進行多次提取后排液。本發(fā)明確保各提取單元的物料與溶劑始終保持較大的有效成分濃度差，可加快提取速率，提高最終溶劑有效成分的濃度，在保證較高的提取率的前提下，具有節(jié)省溶劑、節(jié)約能源等特點。中國專利申請?zhí)?01010103007. 8 —種葡萄籽原花青素的制備方法本發(fā)明公開了一種葡萄籽原花青素的制備方法，其包括下列內容先將葡萄籽用溫度為85-95°C的水溶液浸提，過濾得到葡萄籽原花青素粗提取物溶液；再將粗提取物溶液加熱蒸發(fā)濃縮，濃縮液中加入乙醇溶解原花青素并去除沉淀物，獲得葡萄籽原花青素乙醇提取溶液；然后將乙醇提取液經(jīng)柱層析進行吸附分離，再用30% -40%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，干燥后獲得低聚體原花青素產(chǎn)品。該方法能夠提高效率、降低溶劑用量及提取成本。中國專利申請?zhí)?00910035924. 4 —種從樹莓中提取原花青素的方法本發(fā)明涉及的是一種從原料樹莓中提取原花青素的方法，其特征是該方法采用乙醇為提取劑，提取工藝包括在常壓下，控制乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時間四個條件，提取液經(jīng)過濾、 精制純化、濃縮、干燥得到成品，精制純化采用大孔吸附樹脂。本發(fā)明的優(yōu)點樹莓中原花青素含量高，且采用提取法的效率高，可明顯提高原花青素的溶出率，并保持原有結構和活性，避免了化學合成法副產(chǎn)物比較多，特別是產(chǎn)物的異構體難以分離，造成產(chǎn)物純度不高，因而它在食品、藥品等領域有著廣泛地應用。本發(fā)明成本低、提取效率高，可明顯提高原花青素的溶出率，并保持原有結構和活性，且工藝簡單、高效、快速、廢液排放量少。中國專利申請?zhí)?01010241351. 3 一種黑果枸杞原花青素提取物的制備方法本發(fā)明涉及一種黑果枸杞原花青素提取物的制備方法，該方法以黑果枸杞果汁或黑果枸杞濃縮液為原料，經(jīng)非極性大孔吸附樹脂分離后，用去離子水洗脫至無糖，再用鹽酸-乙醇溶液洗脫，得到含有原花青素的洗脫液；然后將含有原花青素的洗脫液經(jīng)真空減壓濃縮或納濾膜濃縮后，得到原花青素濃縮液；最后將濃縮液經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥后，即可得到原花青素含量>50%、總多酚含量>50%、花色苷含量的的黑果枸杞原花青素提取物。本發(fā)明采用膜分離技術集合柱層析分離技術，不但有效降低了生產(chǎn)成本，縮短了提取分離的時間，減少了工藝過程中的能耗，而且所得產(chǎn)品純度高、性能穩(wěn)定，可應用于天然色素食品添加劑以及具有抗氧化作用的醫(yī)藥保健品原料。李羚、楊雪瀅、高云濤等利用丙醇-硫酸銨雙水相體系與超聲耦合法對葡萄籽中抗氧化活性物質進行提取分離。結果表明，該法可有效地從葡萄籽中提取抗氧化活性物質， 提取物具有良好的抗氧化活性；提取物對光照核黃素超氧陰離子自由基和i^nton反應羥自由基的清除率分別為75.0%和92.0%，對卵磷脂脂質過氧化物的抑制率為74.5%。該法提取物的抗氧化活性高于乙醇、乙酸乙酯回流提取法提取物的抗氧化活性。該法操作簡便、 條件溫和、環(huán)境友好。王平等的葡萄籽中原花色素的提取、純化及分析方法研究，實驗考察了提取、純化和精制工藝過程中的諸多影響因素，確定了最佳工藝條件以60%的丙酮水溶液為浸提劑，料液比為1 10，40°C下提取M小時。向浸提劑加入NaCl使其分相，首次將雙水相技術應用于原花色素的純化過程中。丙酮相浸提液經(jīng)樹脂吸附后用不同濃度乙醇溶液洗脫，洗脫液再經(jīng)乙酸乙酯萃取后得到最終的產(chǎn)品，原花色素的提取率為0. 59%，產(chǎn)品純度為 98%。目前，原花青素的市售產(chǎn)品多從葡萄籽、松樹皮或紫薯里邊提取，所用的方法為大孔樹脂吸附洗脫法，大孔樹脂法存在的主要問題是，需要時間長，處理原料量底下、產(chǎn)品純度低。一根大孔樹脂柱，每次處理的浸膏樣品量僅為吸附填料的5%，而浸膏中目標物質的含量為0. 1 10%，甚至更低經(jīng)過分離后得到的粗產(chǎn)品產(chǎn)量很少，一根裝填一噸填料的大孔樹脂柱，一個流程僅能生產(chǎn)數(shù)公斤的粗產(chǎn)品。一個流程包括浸膏溶解成約5%水溶液，加到層析住上，需要十數(shù)小時；然后水洗把未被吸附的游離物質洗去，又需十數(shù)小時；然后用一定比例的水-溶劑乙醇進行第一次洗脫，除去非有效物質，需要數(shù)十小時；之后再用另一種溶劑體系把有效物質部位洗脫下來，又耗時數(shù)十小時。最后用純溶劑乙醇洗脫柱子，洗去可溶解物質。若柱子污染程度較輕，乙醇洗后，用水把乙醇替換，即可進行下一次的分離。若柱子污染嚴重，醇洗、水洗后，還要進行堿溶液洗滌，然后水洗至中性；再用酸溶液洗滌，然后再用水洗至中性，再生過程才得以完成。從投溶液上柱，直到組分完全洗下，柱子再生，整個流程需要4天甚至更長時間。雙水相法有報道，但工藝未成熟，為實驗室的制備方法，無法進行規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提高已有技術中原花青素原料處理量小，去雜純化過程中處理時間長，工藝流程長，難進行連續(xù)操作，分離效果不理想，難工業(yè)化生產(chǎn)的技術問題，提供一種原花青素的制備方法。本發(fā)明的技術方案是將水提取原花青素粗提取液采用乙醇水溶液-水溶性高聚有機溶劑-水難溶性有機溶劑的液相萃取體系，分離過程不經(jīng)過層析住分離工序，分離均在液相中進行。從總提取物中分離純化，干燥得到高純度原花青素產(chǎn)品。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的原花青素的制備方法，是采用乙醇水溶液提取+液液萃取法將原花青素粗提液分離純化方法，將原花青素乙醇水溶液濃縮提液和用水溶性有機高聚物溶劑比例組成雙水相體系，使提取物濃縮液在雙水相體系中進行分配，使之達到在兩相中的平均濃度為30 50 %的分配平衡，然后用與兩水相不相溶的萃取劑進行萃取，分出萃取液，先把極性小于原花青素的雜質去掉，余下雙水相再用另一脂溶性萃取劑進行萃取，后干燥得到原花青素產(chǎn)品，其工藝操作過程為1、預處理將含原花青素原料經(jīng)除雜，粗破碎或剪段后備用。2、提取將預處理的原花青素原料加入提取設備中，按原料與提取液1 3的比例加入70%乙醇溶液，加熱保溫提取三次，控制溫度為60 70°C，保溫時間為0. 5 1. 5h,合并提取液。3、萃取將提取液加入萃取設備中，加入一定量乙醇或水，調節(jié)乙醇的含量為 30% 40%，并加入水溶性有機高聚物，攪拌，靜置0. 5 1.證形成兩相，得到上相萃取液； 在上相萃取液中加入脂溶萃取劑萃取，分離萃取液，并蒸餾回收有機溶劑。4、干燥真空干燥，控制溫度為60°C以下，真空度為0. 08彡MPa,得到高純度原花
青素廣品。以上所述的液液萃取法，是乙醇水溶液-水溶性有機高聚物溶劑-水難溶性有機溶劑的三相萃取體系。以上所述的原料為葡萄籽、松樹皮或紫薯等含原花青素較高的植物。以上所述的水難溶萃取劑，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一種或多種復合物， 加入量為原材料重量的1 1. 5倍。以上所述的水溶有機高聚物萃取劑，包括甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚氧乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基葡聚糖、甲基纖維素、葡聚糖、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺以及聚丙烯酸及其衍生物中的一種或多種復合物，加入量為提取液的重量的2 4%。以上所述的攪拌，為離心分相均勻攪拌。以上所述的提取設備、濃縮設備和萃取設備，包括采用不銹鋼、搪瓷和鋁合金制作的反應罐、反應釜和反應鍋中的一種或多種設備。本發(fā)明的特點為本發(fā)明原花青素的制備方法，是乙醇水溶液-水溶性有機高聚物溶劑-水難溶性有機溶劑三相萃取方法，選擇性地直接富集和分離純化得到原花青素初產(chǎn)品，分離過程不經(jīng)過層析住分離工序，分離均在液相中進行。原花青素初產(chǎn)品經(jīng)過濃縮、結晶后得到98%高純原花青素。該方法與以往傳統(tǒng)大孔吸附樹脂層析方法相比，具有處理量大，工藝流程短， 可進行連續(xù)操作、分離效率高的優(yōu)點，其生產(chǎn)效率是傳統(tǒng)方法的3 10倍，而且為均相體系，易于連續(xù)生產(chǎn)操作。


圖1是本發(fā)明的工藝流程示意圖； 具體實施方案下面結合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步說明。實施例一將經(jīng)除雜、粗破碎或剪段的原花青素原料5重量份加入不銹鋼反應罐中，按原料與70%乙醇1 3的重量份比例加入，加熱保溫提取三次，控制溫度為50 60°C，保溫時間為1.池，合并提取液。將提取液加入不銹鋼反應釜中，加入提取液2%聚丙烯酸和水或乙醇，調節(jié)乙醇的含量為溶液的30 40%的乙醇，攪拌均勻，靜置1. 形成兩相，得到上相萃取液，加入水難溶和水溶的兩相萃取劑乙酸乙脂-石油醚4重量份(5 l，v/v)萃取，分離萃取液，并蒸餾過濾液回收有機溶劑，最后控制溫度為60°C以下，真空度為0. OSMpa以上進行真空干燥，得到高純度原花青素產(chǎn)品。產(chǎn)品原花青素得率為0. 58%，產(chǎn)品用高效液相色譜法測定純度為98. 3%。實施例二 將經(jīng)除雜、粗破碎或剪段的原花青素原料5重量份加入不銹鋼反應罐中，按原料與70%乙醇1 3的重量份比例加入，加熱保溫提取三次，控制溫度為50 60°C，保溫時間為1.2h，合并提取液。再將提取液的浸膏加入搪瓷反應釜中，加入提取液3%甲基聚丙二醇和水或乙醇，調節(jié)乙醇的含量為溶液的30 40%的乙醇，攪拌均勻，靜置Ih形成兩相，得到上相萃取液，加入水難溶和水溶的兩相萃取劑乙酸乙脂-石油醚4重量份(5 l，v/v)萃取，分離萃取液，蒸餾過濾液回收有機溶劑，最后控制溫度為60°C以下，真空度為0. OSMpa 以上進行真空干燥，得到高純度原花青素產(chǎn)品。產(chǎn)品綠原酸得率為0. 53%，產(chǎn)品用高效液相色譜法測定純度為98. 1%。
權利要求
1.一種原花青素的制備方法，其特征在于采用乙醇水溶液提取+液液萃取法將原花青素粗提液分離純化方法，將原花青素乙醇水溶液濃縮提液和用水溶性有機高聚物溶劑比例組成雙水相體系，使提取物濃縮液在雙水相體系中進行分配，使之達到在兩相中的平均濃度為30 50%的分配平衡，然后用與兩水相不相溶的萃取劑進行萃取，分出萃取液，先把極性小于原花青素的雜質去掉，余下雙水相再用另一脂溶性萃取劑進行萃取，后干燥得到原花青素產(chǎn)品，其工藝操作過程為(1)預處理將含原花青素原料經(jīng)除雜，粗破碎或剪段后備用。；(2)提取將預處理的原花青素原料加入提取設備中，按原料與提取液1 3的比例加入70%乙醇溶液，加熱保溫提取三次，控制溫度為60 70°C，保溫時間為0. 5 1.證，合并提取液。(3)萃取將提取液加入萃取設備中，加入一定量乙醇或水，調節(jié)乙醇的含量為30% 40%，并加入水溶性有機高聚物，攪拌，靜置0. 5 1.證形成兩相，得到上相萃取液在上相萃取液中加入脂溶萃取劑萃取，分離萃取液，并蒸餾回收有機溶劑；(4)干燥真空干燥，控制溫度為60°C以下，真空度為0.08彡MPa，得到高純度原花青素廣品。
2.根據(jù)權利要求1所述的原花青素的制備方法，其特征在于乙醇水溶液-水溶性有機高聚物溶劑-水難溶性有機溶劑的三相萃取體系。
3.根據(jù)權利要求1所述原花青素的制備方法，其特征在于所述的原料，包括葡萄籽、 松樹皮和紫薯等含原花青素的植物。
4.根據(jù)權利要求1所述原花青素的制備方法，其特征在于所述的水難溶萃取劑，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一種或多種復合物，加入量為原料的重量的1 1. 5倍。
5.根據(jù)權利要求1所述原花青素的制備方法，其特征在于所述的水溶性有機高聚物萃取劑，包括甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚氧乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基葡聚糖、甲基纖維素、葡聚糖、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺以及聚丙烯酸及其衍生物中的一種或多種復合物， 加入量為提取液重量的2 4%。
6.根據(jù)權利要求1所述原花青素的制備方法，其特征在于所述的攪拌，為離心分相均勻攪拌。
7.根據(jù)權利要求1所述原花青素的制備方法，其特征在于所述的提取設備、濃縮設備和萃取設備，包括采用不銹鋼、搪瓷和鋁合金制作的反應罐、反應釜和反應鍋中的一種或多種設備。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種原花青素的制備方法，該方法以葡萄籽、松樹皮或紫薯等含原花青素較高的植物為原料，以乙醇水溶液為提取溶劑，采用雙水相萃取法高效地從原花青素粗提物中制備原花青素。本發(fā)明原花青素產(chǎn)品收率和純度高，溶劑消耗少，成本低易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。
文檔編號C07D311/62GK102432582SQ201110450058
公開日2012年5月2日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權日2011年12月29日
發(fā)明者關健敏, 羅亞東 申請人:廣西金宏昕生物科技有限公司