專利名稱：新型噬菌體及包含該新型噬菌體的抗菌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型噬菌體，更具體而言，涉及對(duì)選自下列的一種或更多種沙門氏菌 具有特異性殺菌活性的噬菌體腸炎沙門氏菌(Salmonella Enteritidis)、鼠傷寒沙門氏 菌(Salmonella Typhimurium)、雞沙門氏菌禾口 (Salmonella Gallinarum)雞白病沙門氏菌 (SalmonellaPullorum)。進(jìn)一步，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療感染性疾病的組合物，所述感染性 疾病包括由腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的沙門氏菌病和沙門氏菌食物中毒、由雞 沙門氏菌引起的雞傷寒和由雞白痢沙門氏菌引起的雞白痢，所述組合物包含所述噬菌體作 為活性成分。而且，本發(fā)明涉及飼料添加劑、飲用水、清潔劑和衛(wèi)生消毒劑，其包含所述噬菌 體作為活性成分。
背景技術(shù)：
沙門氏菌是腸桿菌科的一個(gè)屬，其特征為革蘭氏陰性、兼性厭氧、非產(chǎn)芽孢、桿狀 細(xì)菌，并且大部分菌株通過鞭毛活動(dòng)。沙門氏菌(Salmonella)具有50-52 %的平均基因 組GC含量，類似于大腸桿菌(Escherichia coli)和志賀氏菌屬(Shigella)。沙門氏菌 屬是引起家畜以及人感染的病原微生物。腸道沙門氏菌——沙門氏菌的一個(gè)種——具有 多種血清型，包括雞沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、傷寒沙門 氏菌(Salmonella Typhi)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella Choleraesuis)和德比沙門氏 菌(Salmonella derby) (Bopp CA, Brenner Fff, Wells JG, Strokebine ΝΑ. Escherichia, Shigella, Salmonella.In Murry PR, Baron EJ, et al eds Manual of Clinical Microbiology. 7th ed. Washington DC American Society for Microbiology 1999 ； 467-74；RyanKJ. Ray CG(editors)(2004). Sherris Medical Microbiology(4th ed). McGraw Hill. ISBN 0-8385-8529-9.)。其中，雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌是家禽適合的 病原體，傷寒沙門氏菌是人適合的病原體，豬霍亂沙門氏菌和德比沙門氏菌是豬適合的病 原體，以及腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌是人和動(dòng)物的病原體。每種血清型在分別的物 種中引起疾病，給農(nóng)民或消費(fèi)者帶來極大的損害。沙門氏菌引起的家禽疾病是禽傷寒(FT)，其由病原體雞沙門氏菌(下文中稱為 SG)引起。禽傷寒(FT)是家禽如雞和火雞的敗血性疾病，該過程可以是急性或慢性的并 且具有高死亡率。最近，據(jù)報(bào)道，在歐洲、南美洲、非洲和東南亞頻繁出現(xiàn)禽傷寒，并且損害 在逐漸增加。自從1992年已有報(bào)道在韓國(guó)FT的爆發(fā)并且在棕色產(chǎn)蛋雞中FT造成的經(jīng)濟(jì) 損失非常嚴(yán)重(Kwon Yong-Kook. 2000 annual report on aviandiseases. Information publication by National Veterinary Research &Quarantine Service. March,2001 ；Kim Ae-Ran et al. ， The prevalence ofpullorum disease-fowl typhoid in grandparent stock and parent stock inKorea，2003，Korean J Vet Res(2006)46(4) :347 353)。沙門氏菌之一一雞白痢沙門氏菌(下文中稱為SP)—一也引起雞白痢。雞白 痢發(fā)生在任意年齡或季節(jié)，但小雞特別易患該病。在上個(gè)世紀(jì)中，其已經(jīng)在1-2周齡或更 小的小雞中成為嚴(yán)重的疾病。從20世紀(jì)80年代起，該病的發(fā)生已大大地減少。然而，從20世紀(jì)90年代中期起，該病已經(jīng)開始增加(Kwon Yong-Kook. 2000 annual report on aviandiseases. Information publication by National Veterinary Research &Quarantine Service. March,2001 ；Kim Ae-Ran et al. , The prevalence ofpullorum disease-fowl typhoid in grandparent stock and parent stock inKorea,2003,Korean J Vet Res (2006) 46 (4) :347 ；353)。在韓國(guó)，從20世紀(jì)90年代起，禽傷寒和雞白痢的爆發(fā)已經(jīng)增加，給農(nóng)民造成經(jīng)濟(jì) 損失。因此，從2004年開始，SG減毒活疫苗已經(jīng)用于肉雞(broilers)中，以預(yù)防禽傷寒(Kim Ae-Ran et al. ， The prevalence ofpullorum disease-fowl typhoid in grandparent stock and parent stock inKorea，2003，Korean J Vet Res (2006) 46 (4) :347 353)。其 效力受到懷疑，并且活疫苗不可以用于產(chǎn)蛋雞，是因?yàn)榇嬖陔u蛋傳播的感染風(fēng)險(xiǎn)。不幸的 是，仍舊沒有針對(duì)雞白痢的商業(yè)可應(yīng)用預(yù)防性策略，而不像禽傷寒那樣。因此，對(duì)于預(yù)防禽 傷寒和雞白痢的新方法存在迫切需求。同時(shí)，腸炎沙門氏菌(下文中稱為SE)和鼠傷寒沙門氏菌(下文中稱為ST)是人 畜共患病病原體，其不顯示宿主特異性，而不像SG或SP那樣(Zoobises Report ；United Kingdom 2003)。SE和ST引起家禽、豬和牛的沙門氏菌病。沙門氏菌引起的沙門氏菌病是家畜 消化道的急性或慢性感染，并且顯示的主要癥狀為發(fā)熱、腸炎和敗血癥，偶爾出現(xiàn)肺炎、關(guān) 節(jié)炎、流產(chǎn)和乳腺炎。沙門氏菌病全世界均發(fā)生，并且最經(jīng)常在夏天發(fā)生(T.R. Callaway et al. Gastrointestinal microbial ecology and the safety of the food supply asrelated to Salmonella. J Anim Sci 2008. 86 :E163_E172)。在牛中，典型的癥狀包括食 欲喪失、發(fā)燒、咖啡色痢疾或帶血黏液便。小牛的急性感染導(dǎo)致快速死亡，而妊娠期間的感 染由于敗血癥而導(dǎo)致死胎，引起早期流產(chǎn)(www, livestock, co. kr)。在豬中，沙門氏菌病的 臨床特征為三個(gè)主要癥狀——急性敗血癥、急性腸炎和慢性腸炎。急性敗血癥發(fā)生在2 4月齡的小豬中，并且在癥狀發(fā)作后2 4天內(nèi)經(jīng)常出現(xiàn)死亡。急性腸炎發(fā)生在育肥期，并 且伴隨有痢疾、高燒、肺炎和神經(jīng)系統(tǒng)體征。在一些嚴(yán)重的病例中可能出現(xiàn)皮膚變色。慢性 腸炎伴隨有持續(xù)的痢疾(www, livestock, co. kr)。一旦SE和ST引起的沙門氏菌病的爆發(fā)出現(xiàn)在家禽、豬和牛中，通過治療劑治愈是 困難的。原因是沙門氏菌在臨床癥狀出現(xiàn)后顯示對(duì)各種藥物強(qiáng)的抗性并且生存在無法滲透 抗生素的細(xì)胞中。到目前為止，沒有有效治療SE和ST引起的沙門氏菌病的方法，包括抗生 素(www, lhca. or. kr) 0如在家畜中一樣，SE和ST經(jīng)由家畜產(chǎn)品引起人感染，導(dǎo)致沙門氏菌食物中 毒。感染的、不恰當(dāng)烹煮的家畜產(chǎn)品(例如，肉類品、家禽產(chǎn)品、雞蛋和副產(chǎn)品)的食用 感染人。人沙門氏菌食物中毒通常包括頭痛的急促發(fā)作、發(fā)燒、腹痛、痢疾、惡心和嘔 吐。癥狀一般出現(xiàn)在攝取該生物體后6-72小時(shí)內(nèi)，并且可以持續(xù)4-7天之久或甚至更長(zhǎng) (NSW+HEALTH. 2008. 01. 14.)。牛艮據(jù) CDC(The Centers for Disease Control and Prevention, USA) 艮道，在 2005年和2008年之間人食物中毒爆發(fā)中的16 %是由于沙門氏菌所致，而其中20 %和18 % 分別由SE和ST引起。對(duì)于1973年和1984年之間人沙門氏菌食物中毒，牽涉的食物傳播 媒介據(jù)報(bào)道有雞肉(5% )、牛肉(19% )、豬肉(7% )、乳制品(6% )和火雞肉(9% )。在1974 1984年中，在屠宰過程中對(duì)肉雞的細(xì)菌污染測(cè)試顯示出35%或更高的沙門氏菌發(fā) 病率。在1983年，在50. 6%的雞肉、68. 8%的火雞肉、60%的鵝肉、11. 6%的豬肉和1. 5%的 牛肉中分離出沙門氏菌。進(jìn)一步，在2007年進(jìn)行的調(diào)查報(bào)道了，5. 5%的生家禽肉和1. 1% 的生豬肉中發(fā)現(xiàn)了沙門氏菌。特別是，披露了 SE普遍源自污染的蛋或家禽肉，ST源自污 染的豬肉、家禽肉和牛肉(www, cdc. rov)。例如，自1988年，SE引起的食物中毒在美國(guó)、 加拿大和歐洲快速增加，流行病學(xué)研究證實(shí)，這歸因于蛋或含蛋食物(Agre-Food Safety Information Service (AGROS). Domestic andforeign food poisoning occurrence and management trend. 2008. 02)。在2002年由FAO和WHO進(jìn)行的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估注意到，通過蛋和 家禽肉傳播的沙門氏菌病的發(fā)病率似乎與所觀察的家禽沙門氏菌流行具有線性關(guān)系。這意 味著，當(dāng)減少家禽沙門氏菌流行時(shí)，人沙門氏菌病的發(fā)病率將會(huì)下降(Salmonella control at the source ；World Health Organization. International Food Safety Authorities Network(INFOSAN) InformationNote No. 03/2007)。最近，有關(guān)食物安全性的恐慌已經(jīng)被 來自下列各種食物的沙門氏菌的爆發(fā)所激發(fā)花生、菠菜、番茄、開心果、胡椒，以及最近地， 曲奇餅(Jane Black and Ed Keefe. Overhaul of Food SafetyRules in the Works. Washington Post Staff Writers Wednesday, July 8，2009)。由于這些原因，沙門氏菌感染必定在德國(guó)有報(bào)道(§6md§7of theGerman law on infections prevention, Infektionsschutzgesetz)。在 1990 年禾口 2005 年之間，官方記載 的病例數(shù)從大約200，000例減少到大約50，000例。據(jù)估計(jì)，在德國(guó)每五個(gè)人中就有一個(gè)是 沙門氏菌攜帶者。在美國(guó)，每年報(bào)道的沙門氏菌感染有大約40，000例(en. wikipedia. org/ wiki/Salmonella#cite_note_2)。因此，對(duì)控制引起家畜和人沙門氏菌病的SE和ST存在迫切需求。USDA和FDA的 合作努力已經(jīng)開發(fā)了許多有效預(yù)防沙門氏菌病的策略，所述沙門氏菌病在美國(guó)引起1百萬 多例食源性疾病。其中是FDA頒發(fā)的最終規(guī)則降低了蛋中的污染。FDA現(xiàn)在要求，蛋生產(chǎn) 商在蛋生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸期間定期測(cè)試致命性沙門氏菌。結(jié)果，每年估計(jì)避免了由于污染 的蛋所致的 79，000 例疾病和 30 例死亡(Jane Black and EdO，Keefe. Overhaul of Food Safety Rules in the Works. Washington PostStaffffriters Wednesday, July 8，2009)。 在丹麥，來自比較在生產(chǎn)部門中沙門氏菌控制成本與總沙門氏菌病公共衛(wèi)生成本的成本 效益分析的保守估計(jì)指出，在2001年沙門氏菌控制措挽回了丹麥經(jīng)濟(jì)1. 41千萬美元。 (Salmonella control at the source. World Health Organization. InternationalFood Safety Authorities Network(INFOSAN) Information Note No. 03/2007)。同時(shí)，噬菌體是一種專門只感染和破壞細(xì)菌的病毒類型，并且可以只在宿主細(xì)菌 中自我復(fù)制。噬菌體由呈單鏈或雙鏈DNA或RNA形式的遺傳物質(zhì)組成，所述單鏈或雙鏈DNA 或RNA被蛋白質(zhì)殼包裹。噬菌體分類是基于它們的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)。根據(jù)形態(tài)學(xué) 結(jié)構(gòu)存在噬菌體的三種基本結(jié)構(gòu)形式有尾部的二十面體(二十面)頭部，無尾部的二十 面體頭部和絲狀形式?；谒鼈兊奈膊拷Y(jié)構(gòu)，具有二十面體頭部和作為它們的遺傳物質(zhì)的 雙鏈、線性DNA的噬菌體被分三個(gè)科肌病毒科、長(zhǎng)尾病毒科和短尾病毒科，他們的特征分 別是可收縮尾、長(zhǎng)的不可收縮尾和短的不可收縮尾。具有無尾部的二十面體頭部和作為它 們遺傳物質(zhì)的RNA或DNA的噬菌體基于它們的頭部形狀和組分以及殼的存在來進(jìn)行分類。 具有作為它們遺傳物質(zhì)的DNA的絲狀噬菌體基于它們的大小、形狀、殼和絲組分進(jìn)行分類(H. W. Ackermann. Frequency of morphological phage descriptions in the year 2000 ； ArchVirol(2001) 146 :843-857 ；Elizabeth Kutter et al. bacteriophages biologyand application ；CRC press)0在感染期間，噬菌體吸附到細(xì)菌并且將其遺傳物質(zhì)插入到細(xì)胞中。其后，噬菌體進(jìn) 行兩種生命周期——溶解性周期或溶原性周期——之一。溶解性噬菌體利用細(xì)胞器產(chǎn)生噬 菌體組分。然后，它們破壞或溶解該細(xì)胞，釋放新的噬菌體顆粒。溶原性噬菌體將它們的核 酸摻入宿主細(xì)胞的染色體中并且用其作為單元進(jìn)行復(fù)制而不破壞該細(xì)胞。在某些條件下， 溶原性噬菌體可以被誘導(dǎo)來進(jìn)行溶解性周期(ElizabethKutter et al. Bacteriophages biology and application. CRC press)。在噬菌體發(fā)現(xiàn)后，大量的努力開始集中于它們?cè)趥魅拘约膊≈委熤械挠猛?。?而，當(dāng)廣譜抗生素進(jìn)入日常應(yīng)用時(shí)，認(rèn)為不需要噬菌體，原因在于具有特異性靶譜。但是， 抗生素的錯(cuò)誤使用和過度使用導(dǎo)致更多關(guān)于抗生素抗性和食物中殘留抗生素的有害影響 的擔(dān)憂(Cislo，Met al. Bacteriophage treatment of suppurative skin infections. ArchImmunol. Ther. Exp. 1987. 2 175-183 ；Kim sung-hun et al.，Bacteriophage ；New Alternative Antibiotics. Biological research information center (BRIC))。具體而 言，已知添加到動(dòng)物飼料以提高生長(zhǎng)的抗微生物生長(zhǎng)促進(jìn)劑(AGP)誘導(dǎo)抗生素抗性，因此， 最近已經(jīng)禁止使用抗微生物生長(zhǎng)促進(jìn)劑(AGP)，在歐盟，從2006年禁止使用抗微生物生長(zhǎng) 促進(jìn)劑(AGP)。從2009年，韓國(guó)已經(jīng)禁止使用一些AGP，并且正在考慮于2013 2015年全 面限制使用AGP。這些對(duì)抗生素使用的越來越多的關(guān)注已經(jīng)導(dǎo)致興起對(duì)噬菌體作為抗生素替代品 的興趣。美國(guó)專利6，485，902中公開了 7種用于控制大腸桿菌0157:H的噬菌體(2002 年授權(quán)，Use of bacteriophages for control ofEscherichia coli 0157)。美國(guó)專利 6，942，858中公開了 2種用于控制多種微生物的噬菌體(Nymox在2005年授權(quán))。許多公 司已經(jīng)積極地設(shè)法開發(fā)使用噬菌體的多種產(chǎn)品。EBI食物系統(tǒng)(歐洲)開發(fā)了一種食物添 加劑，用于預(yù)防單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，名稱為L(zhǎng)istex-PlOO) 引起的食物中毒，其是獲得US FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)噬菌體產(chǎn)品?；谑删w的產(chǎn)品LMP-102 也被開發(fā)，作為針對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌的食物添加劑，被批準(zhǔn)為GRAS (公認(rèn)安全)。在 2007年，OmniLytics生產(chǎn)的基于噬菌體的洗滌劑被開發(fā)來預(yù)防在屠宰期間牛肉的大腸桿 菌0157污染，其獲得USDA的食品安全監(jiān)督服務(wù)局(FoodSafety and Inspection Service, FSIS)批準(zhǔn)。在歐洲，生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)噬菌體NCIMB 30008和酪丁酸梭 菌(Clostridiumtyrobutiricum)噬菌體 NCIMB 30008 分別于 2003 年和 2005 年被注冊(cè)為 針對(duì)飼料梭菌污染的飼料防腐劑。這些研究顯示，對(duì)噬菌體用作針對(duì)家畜產(chǎn)品中人畜共患 病病原體的抗生素的研究目前正在進(jìn)行。然而，大部分噬菌體生物控制研究聚焦于控制大腸桿菌、李斯特菌和梭菌。沙門 氏菌也是人畜共患病病原體，并且由該病原體帶來的損失沒有減少。如上所述，由于SE和 ST顯示多種抗藥性，因此在韓國(guó)全國(guó)性抗微生物劑抗性監(jiān)察接觸性傳染病預(yù)防法的執(zhí)行法 令(Executive Order 16961)、接觸性傳染病預(yù)防法的執(zhí)行條例(Ministry ofHealth and Welfare's Order 179)禾口 National Institute of Health(ExecutiveOrder 17164)的組 織下已經(jīng)進(jìn)行。因此，對(duì)于用來控制沙門氏菌的噬菌體開發(fā)存在需求。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題為了解決使用廣譜抗生素所產(chǎn)生的問題，本發(fā)明人從自然來源分離了新型的沙門 氏菌噬菌體并且鑒定了其形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和遺傳性質(zhì)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該噬菌體具有對(duì)腸 炎沙門氏菌(SE)、鼠傷寒沙門氏菌(ST)、雞沙門氏菌(SG)和雞白痢沙門氏菌(SP)的特異 性殺菌活性而不影響有益菌，并且具有優(yōu)良的耐酸性、耐熱性和耐干燥性，因此可以用于預(yù) 防和治療腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的家畜沙門氏菌病和沙門氏菌食物中毒以 及雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌引起的禽傷寒和雞白痢。還有，本發(fā)明所述的噬菌體可以 應(yīng)用于各種產(chǎn)品以控制沙門氏菌，所述產(chǎn)品包括家畜飼料添加劑和飲用水、畜棚衛(wèi)生消毒 劑和肉類品清潔劑，從而完成本發(fā)明。技術(shù)方案本發(fā)明的目的是提供對(duì)選自下列的一種或更多種沙門氏菌具有特異性殺菌活性 的新型噬菌體腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供預(yù)防或治療感染性疾病的組合物，所述感染性疾病由 選自下列的一種或更多種沙門氏菌引起腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞 白痢沙門氏菌，其包含所述噬菌體作為活性成分。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供家畜飼料添加劑或家畜飲用水，其包含所述噬菌體作 為活性成分。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供衛(wèi)生消毒劑或清潔劑，其包含所述噬菌體作為活性成 分。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供預(yù)防或治療感染性疾病的方法，所述感染性疾病由選 自下列的一種或更多種沙門氏菌引起腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白 痢沙門氏菌，其使用所述噬菌體或包含所述噬菌體作為活性成分的組合物。有益效果本發(fā)明的新型噬菌體對(duì)選自下列的一種或更多種沙門氏菌具有特異性殺菌活性 腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌，并且具有優(yōu)良的耐酸性、 耐熱性和耐干燥性。因此，該新型噬菌體可以用于預(yù)防和治療由腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門 氏菌、雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌引起的感染性疾病，包括沙門氏菌病、沙門氏菌食物中 毒、禽傷寒和雞白痢，并且還可以用于控制腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和 雞白痢沙門氏菌。


圖1是C5CJ3的電子顯微鏡照片，其中OCJ3屬于肌尾噬菌體科的形態(tài)型組，其特 征在于等軸衣殼和可收縮長(zhǎng)尾；圖2是分離的噬菌體OCJ3的SDS-PAGE結(jié)果，其中噬菌體的蛋白質(zhì)模式被顯示 為45kDa、62kDa和80kDa的主蛋白以及17kDaJ8kDa、IlOkDa和170kDa的其它蛋白質(zhì)(參 見 _ 乍為標(biāo)i己物白勺 blue plus2prestained-standard (Invitrogen))；圖3是分離的噬菌體OCJ3的PFGE結(jié)果，其顯示出大約1581Λρ的總基因組大小(5kbp DNA大小標(biāo)準(zhǔn)物(Bio-rad)作為大小標(biāo)記物)；圖4是通過使用ΦCJ3基因組DNA的每個(gè)引物組進(jìn)行的PCR的結(jié)果，其中(Α 使用 SEQ ID NO. 5和6的引物組的PCR擴(kuò)增；B 使用SEQ ID NO. 7和8的引物組的PCR擴(kuò)增；C 使用SEQ ID NO. 9和10的引物組的PCR擴(kuò)增；D 使用SEQ ID NO. 11和12的引物對(duì)的PCR 擴(kuò)增)所有A、B、C和D泳道均具有約1. Okbp的PCR產(chǎn)物；圖5至8是噬菌體OCJ3的一步生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，其中所述噬菌體具有在雞沙門 氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌中2Xl(^pfu或更高的裂解量；圖9是噬菌體OCJ3耐酸性試驗(yàn)的結(jié)果，其顯示噬菌體在pH 2. 1、2. 5、3. 0、3. 5、 4. 0,5. 5,6. 4,6. 9,7. 4,8. 0、9. 0下的存活數(shù)，其中噬菌體OCJ3直到pH 3. 5才失去活性，但 與對(duì)照相比，其在PH 3. 0或更低下才完全失去活性；圖10是噬菌體OCJ3耐熱性試驗(yàn)的結(jié)果，其顯示在37°C、45°C、53°C、60°C、70°C、 80°C和0分鐘、10分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘時(shí)間點(diǎn)下噬菌體存活數(shù)，其中噬菌體 OCJ3即使在60°C下暴露2小時(shí)后也不失去活性，并且在70°C或更高下暴露IOmin完全失 去活性；和圖11是噬菌體OCJ3耐干燥性試驗(yàn)的結(jié)果，其通過使用噴霧干燥器和添加糊精和 糖作為穩(wěn)定劑進(jìn)行，其中比較干燥之前和之后滴度的改變以考查相對(duì)穩(wěn)定性，以及其活性 被降低至約5Χ103。
具體實(shí)施例方式根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明涉及對(duì)選自下列的一種或更多種沙門氏菌具有特異性殺菌 活性的新型噬菌體腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌，其中 所述噬菌體屬于肌尾噬菌體科的形態(tài)型組，并且具有157-1591Λρ的總基因組大小和大小 為 44-46kDa、61-63kDa 和 79_81kDa 的主結(jié)構(gòu)蛋白。具體而言，本發(fā)明的噬菌體具有選擇性感染雞沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒 沙門氏菌和腸炎沙門氏菌的能力，即，種屬特異性。本發(fā)明的噬菌體遺傳上具有157-1591Λρ，優(yōu)選約1581Λρ的總基因組大小，并且在 整個(gè)基因組內(nèi)可以包括一種或更多種核酸分子，其選自SEQ ID Ν0. 1、2、3和4，優(yōu)選在整個(gè) 基因組內(nèi)包括由SEQ ID NO. 1至4代表的核酸分子。當(dāng)將本發(fā)明的噬菌體使用一種或更多種選自SEQ ID N0. 5和6、SEQ ID NO. 7和8、 SEQ ID NO. 9和10以及SEQ ID NO. 11和12的引物組進(jìn)行PCR時(shí)，得到的每個(gè)PCR產(chǎn)物為 約ΙΙΛρ。優(yōu)選地，當(dāng)使用所有引物組進(jìn)行PCR時(shí)，得到的每個(gè)PCR產(chǎn)物為約ΙΙΛρ。本發(fā)明的噬菌體屬于肌尾噬菌體科的形態(tài)型組，其特征在于等軸衣殼和可收縮長(zhǎng) 尾，以及優(yōu)選圖1中描述的形態(tài)學(xué)。 如本文所用，術(shù)語“核酸分子”包括DNA (gDNA和cDNA)和RNA分子，以及作為核酸 基本結(jié)構(gòu)單位，術(shù)語核苷酸包括天然核苷酸和其糖或堿基修飾的類似物。本發(fā)明的噬菌體遺傳上具有大小為44-46kDa、61_63kDa和79_81kDa，以及優(yōu)選大 小為約45kDa、62kDa和80kDa的主結(jié)構(gòu)蛋白。進(jìn)一步，本發(fā)明的噬菌體具有一種或更多種耐酸性、耐熱性和耐干燥性的生物化 學(xué)性質(zhì)。
更具體而言，本發(fā)明的噬菌體可穩(wěn)定地生存在從pH 3. 5至pH 9. 0的寬范圍pH環(huán) 境中，以及從37°C至60°C的高溫環(huán)境中。另外，本發(fā)明的噬菌體對(duì)干燥有抵抗力，以便甚至 在高溫干燥后(例如60°C下120min)也保持生存。這些耐酸性、耐熱性和耐干燥性的性質(zhì) 允許本發(fā)明的噬菌體在各種溫度和PH條件下應(yīng)用于生產(chǎn)污染家畜引起的家畜疾病或人類 疾病的預(yù)防或治療組合物。本發(fā)明人收集了在雞屠宰場(chǎng)的污水樣品，并且分離了具有對(duì)SE、ST、SG和SP 的特異性殺菌活性和上述特征的本發(fā)明的噬菌體，其被命名為。CJ3并且以登錄號(hào) KCCM10977P于2008年12月17保藏在韓國(guó)微生物保藏中心(Korean Culture Center of Microorganisms)(361-221，Honje 1，Seodaemun, Seoul)。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，本發(fā)明人收集了在雞屠宰場(chǎng)的污水樣品，以分離溶解 宿主細(xì)胞ST的噬菌體，并且他們證實(shí)該噬菌體能夠溶解SE、ST、SG和SP。進(jìn)一步，他們?cè)?電子顯微鏡下考察了該噬菌體(Φ 3)，并且發(fā)現(xiàn)其屬于肌尾噬菌體科的形態(tài)型(圖1)。進(jìn)一步，還分析了噬菌體OCJ3的蛋白質(zhì)模式，結(jié)果是其具有大小為45kDa、62kDa 和80kDa的主結(jié)構(gòu)蛋白(圖2)。而且，也分析了噬菌體OCJ3的總基因組大小，結(jié)果是其具有約1581Λρ的總基因 組大小(圖3)。對(duì)其遺傳特征分析的結(jié)果顯示，該噬菌體在總基因組內(nèi)包括SEQ ID NO. 1 至4代表的核酸分子。基于這些結(jié)果，比較了與其它物種的遺傳相似性。發(fā)現(xiàn)該噬菌體顯 示與已知噬菌體非常低的遺傳相似性，這表明該噬菌體是新型噬菌體(表2)。更具體而言， OCJ3-特異性引物組，SP，SEQ ID N0.5 和 6、SEQ ID N0.7 和 8、SEQ ID N0.9 和 10 以及 SEQ ID NO. 11和12被用于進(jìn)行PCR。發(fā)現(xiàn)每種PCR產(chǎn)物具有約IlAp的大小(圖4)。進(jìn)一步，當(dāng)用OCJ3感染SE、ST、SG和SP時(shí)，噬菌斑(通過一個(gè)噬菌體對(duì)宿主細(xì)胞 溶解在軟瓊脂上產(chǎn)生的透明區(qū)域)顯示相同的大小和渾濁度。而且，在各種溫度和pH條件下考查了 OCJ3的穩(wěn)定性，結(jié)果是，0以3在從？!1 3. 5 至PH 9.0的寬范圍pH環(huán)境中(圖9)和從37°C至60°C的高溫環(huán)境中(圖10)，以及甚至在 高溫干燥后(圖11)穩(wěn)定地維持。這些結(jié)果表明本發(fā)明的噬菌體Φ 3可以應(yīng)用于各種產(chǎn) 品，以控制沙門氏菌。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療感染性疾病的組合物，所述感染性疾病 由一種或更多種選自雞沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌引起， 所述組合物包含所述噬菌體作為活性成分。優(yōu)選地，腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的感染性疾病包括沙門氏菌病和沙 門氏菌食物中毒，雞沙門氏菌引起的感染性疾病包括禽傷寒，而雞白痢沙門氏菌引起的感 染性疾病包括雞白痢，但不限于這些。本發(fā)明的噬菌體對(duì)雞沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏 菌具有特異性殺菌活性，因此可以用于預(yù)防或治療由這些細(xì)菌引起的疾病的目的。具體而 言，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以包括抗生素。如本文所用，術(shù)語“預(yù)防”含義是通過施用所述組合物來遏制或延緩疾病進(jìn)展的所 有行為。如本文所用，術(shù)語“治療”含義是通過施用所述組合物患者的狀況已經(jīng)好轉(zhuǎn)或向有 利轉(zhuǎn)變的所有行為。本發(fā)明的組合物包括5 X IO2至5Χ 1012pfu/ml，以及優(yōu)選IX IO6至1 X 101Qpfu/ml的 OCJ3。本發(fā)明組合物可以應(yīng)用的優(yōu)選的感染性疾病實(shí)例包括雞沙門氏菌引起的禽傷寒、 雞白痢沙門氏菌引起的雞白痢和腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的沙門氏菌病或沙 門氏菌食物中毒，但不限于這些。如本文所用，術(shù)語“沙門氏菌病”指沙門氏菌感染引起的癥狀，包括發(fā)燒、頭痛、痢 疾和嘔吐，即沙門氏菌屬的細(xì)菌引起的疾病，其被定義為兩種臨床形式——類似傷寒癥的 急性敗血癥病形式、以及急性腸胃炎形式，包括，腸炎、食物中毒和急性敗血癥。本發(fā)明的組合物可以另外包括藥學(xué)上可接受的載體，并且與所述載體一起配制， 以提供食物、藥物和飼料添加劑。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”指對(duì)有機(jī)體不引起明顯刺激和不消除被 施用化合物生物活性和性質(zhì)的載體或稀釋劑。對(duì)于將組合物配制成液體制劑，可以使用無 菌且生物相容的藥學(xué)上可接受的載體，如鹽水、無菌水、林格氏溶液、緩沖生理鹽水、白蛋白 注射溶液、葡萄糖溶液、麥芽糊精溶液、甘油和乙醇。這些物質(zhì)可以單獨(dú)使用或以其任何組 合使用。如果需要，可以添加其它傳統(tǒng)的添加劑，如抗氧化齊 、緩沖齊 、抑菌劑等。進(jìn)一步， 可以另外將稀釋劑、分散劑、表面活性劑、粘結(jié)劑和潤(rùn)滑劑添加到組合物，以制備可注射制 劑如水溶液、懸浮液和乳狀液，或口服制劑如丸劑、膠囊、顆粒劑或片劑。本發(fā)明的預(yù)防或治療組合物可以被施用或噴霧到患病區(qū)域(afflicted area)，或 通過口服或腸胃外途徑給藥。腸胃外給藥可以包括靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、 皮下給藥或局部給藥。適于施用、噴霧或給藥本發(fā)明組合物的劑量取決于多種因素，包括配制方法、給藥 方式、被治療患者或動(dòng)物的年齡、體重、性別、狀況和飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排泄速度和 反應(yīng)敏感性。具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定并開出所需組合物的有效量。適于本發(fā)明組合物的口服制劑的實(shí)例包括片劑、含片、錠劑、水性或乳狀懸浮液、 粉末或顆粒、乳狀液、硬或軟膠囊、糖漿或酏劑。對(duì)于諸如片劑和膠囊的制劑，有用的是粘結(jié) 劑如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、支鏈淀粉、纖維素或凝膠，賦形劑如磷酸二鈣，崩解 劑如玉米淀粉或甘薯淀粉，潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂富馬酸鈉或聚乙二醇蠟。對(duì) 于膠囊，除上述化合物之外，可以進(jìn)一步使用諸如脂質(zhì)的液體載體。對(duì)于非口服給藥，本發(fā)明組合物可以配制成皮下、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)途徑的注射劑、 栓劑或經(jīng)由呼吸道可吸入的噴霧劑，如氣霧劑。注射制劑可以通過這樣獲得將本發(fā)明組合 物與穩(wěn)定劑或緩沖劑一起溶解或懸浮在水中以及將溶液或懸浮液包裝在安瓿或小瓶單元 中。對(duì)于噴霧劑，如氣霧劑，用于噴射水分散的濃縮物或濕粉末的推進(jìn)劑可以結(jié)合添加劑使 用。如本文所用，術(shù)語“抗生素”含義是施用于動(dòng)物以殺死病原體的任何藥物，并且在 本文其被用作防腐劑、殺菌劑和抗菌劑的一般術(shù)語。所述動(dòng)物是包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物，以 及優(yōu)選家禽。與傳統(tǒng)的抗生素不同，本發(fā)明的噬菌體對(duì)沙門氏菌具有高度特異性，以便殺死 特異性病原體而不影響有益菌，并且不誘導(dǎo)抗性，使得其使用周期(Iifecycling)比較長(zhǎng)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
，對(duì)噬菌體Φ 3防止禽傷寒的毒性測(cè)試通過 評(píng)價(jià)其安全性和對(duì)產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋的影響，包括其在肌肉和雞蛋中的殘留量來完成。發(fā)現(xiàn)，對(duì)照和Φ 3-治療組之間產(chǎn)蛋率沒有差別(表4)，在收集的雞蛋中沒有分離到Φ 3(表 5)，以及在用OCJ3治療SG-感染的雞時(shí)，OCJ3-治療組顯示明顯高于未治療組的保護(hù)率 (protection rate)(表7)，這顯示出其預(yù)防和治療效果。根據(jù)又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及動(dòng)物飼料或飲用水，其包含所述噬菌體作為活性成 分。用于水產(chǎn)業(yè)和家畜業(yè)的飼料添加劑抗生素被用于預(yù)防感染的目的，但導(dǎo)致細(xì)菌的 抗性菌株增加并且家畜產(chǎn)品中的殘留抗生素可以被人攝取，促使人病原體中抗生素抗性和 疾病傳播。另外，因?yàn)榇嬖诙喾N飼料添加劑抗生素，所以抗多藥菌株的全球性出現(xiàn)逐漸增 加，這受到嚴(yán)重關(guān)注。因此，本發(fā)明的噬菌體可以用作飼料添加劑抗生素，其對(duì)生態(tài)環(huán)境更 友好并且能夠解決上述問題。本發(fā)明的噬菌體可以單獨(dú)制備成飼料添加劑，然后添加到動(dòng)物飼料中，或直接添 加到動(dòng)物飼料中。本發(fā)明的噬菌體可以作為液體或以干燥的形式，優(yōu)選以干燥的粉末包含 在動(dòng)物飼料中。干燥過程可以通過風(fēng)干、自然干燥、噴霧干燥和冷凍干燥來完成，但不限于 這些。本發(fā)明的噬菌體可以以基于動(dòng)物飼料重量按重量計(jì)0. 05 %至10 %，優(yōu)選按重量計(jì) 0. 至2%的量作為粉末形式添加。除了本發(fā)明的噬菌體，動(dòng)物飼料還可以包括用于長(zhǎng)期 保存的其他傳統(tǒng)添加劑。本發(fā)明的飼料添加劑可以另外包括其它非病原微生物。另外的微生物可以選自可 以產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶和轉(zhuǎn)化酶的枯草桿菌(Bacillussubtilis)、在厭氧條件下具有分解 有機(jī)化合物的能力和生理活性的乳桿菌(LactcAacillus sp.)、諸如米曲霉(Aspergillus oryzae) (J AnimalSci 43 :910-926,1976)的絲狀真菌，其增加家畜的體重、增強(qiáng)牛奶產(chǎn)生 以及幫助消化和吸收飼料，以及諸如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) (JAnim Sci 56 :735-739,1983)的酵母。包含本發(fā)明Φ 3的飼料可以包括基于植物的飼料，如谷物、堅(jiān)果、食物副產(chǎn)品、 海藻、纖維、藥物副產(chǎn)品、油、淀粉、谷物粗粉和谷物副產(chǎn)品，以及基于動(dòng)物的飼料，如蛋白 質(zhì)、礦物、脂肪、單細(xì)胞蛋白、浮游動(dòng)物和食物廢物，但不限于這些。包含本發(fā)明Φ 3的飼料添加劑可以包括粘結(jié)劑、乳化劑、和用于防止質(zhì)量變壞 的防腐劑、氨基酸、維生素、酶、益生菌、調(diào)味劑、非蛋白質(zhì)氮、硅酸鹽、緩沖劑、著色劑、提取 物、和用于效率改善的低聚糖，以及其它飼料預(yù)混合物，但不限于這些。進(jìn)一步，混合有本發(fā)明噬菌體的飲用水的供應(yīng)可以減少家畜腸道中沙門氏菌的數(shù) 量，從而獲得無沙門氏菌的家畜。根據(jù)又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及衛(wèi)生消毒劑和清潔劑，其包含所述噬菌體作為活性 成分。為了清除沙門氏菌，包含所述噬菌體作為活性成分的衛(wèi)生消毒劑可以用于家畜棚 舍、屠宰場(chǎng)、污染區(qū)域和其它生產(chǎn)設(shè)備，但不限于這些。進(jìn)一步，包含所述噬菌體作為活性成分清潔劑可以施用于活動(dòng)物的污染的皮膚、 羽毛和其它污染的身體部分，以清除沙門氏菌。根據(jù)又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及使用所述噬菌體或組合物來預(yù)防或治療感染性疾病 的方法，所述感染性疾病由選自下列的一種或更多種沙門氏菌引起腸炎沙門氏菌、鼠傷寒 沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。
本發(fā)明的組合物可以以藥物制劑或作為動(dòng)物飼料組分或以它們的飲用水給予動(dòng) 物，優(yōu)選通過作為飼料添加劑混合進(jìn)動(dòng)物飼料來給予。本發(fā)明的組合物可以以典型方式經(jīng)由任何途徑給予，如口服或腸胃外途徑，具體 而言，口服、直腸、局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、經(jīng)皮、鼻內(nèi)和吸入途徑。本發(fā)明的治療所述疾病的方法包括施用藥學(xué)有效量的本發(fā)明組合物?？?cè)談┝?應(yīng)該由醫(yī)師通過適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)判斷來確定，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。患者的 藥學(xué)有效量可以根據(jù)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中公知的各種因素而不同，包括待被實(shí)現(xiàn)的應(yīng)答的種類和程 度、患者的狀況如年齡、體重、健康狀態(tài)、性別和飲食、給藥時(shí)間和途徑、組合物的排泄速率、 治療持續(xù)時(shí)間、根據(jù)是否與其一起使用其它藥劑的具體組成等。在下文中，將參考下述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述。然而，這些實(shí)施例僅僅 是用于說明性目的，本發(fā)明不意圖受這些實(shí)施例限制。發(fā)明方式實(shí)施例1 沙門氏菌噬菌體分離1-1.噬菌體篩選和單噬菌體分離將50ml來自雞屠宰場(chǎng)和下水道污水的樣品轉(zhuǎn)移到離心管中，并且在4000rpm下離 心10分鐘。然后使用0. 45 μ m過濾器過濾上清液。將18ml樣品濾液與150 μ 1 ST振蕩 培養(yǎng)基(OD6tltl = 2)和anl IOXLuria-Bertani培養(yǎng)基(下文為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，胰蛋白胨IOg ； 酵母提取物5g ；NaCl IOg ；最終體積為1L)混合。在37°C下將混合物溫育18小時(shí)，并且在 4000rpm下將培養(yǎng)基離心10分鐘。使用0. 2 μ m過濾器過濾上清液。將:3ml 0. 7%瓊脂(w/ ν)和150 μ 1 ST振蕩培養(yǎng)基(0D_ = 2)混合，并且在LB板上鋪板，使其變?yōu)楣腆w培養(yǎng)基。 在其上涂布10μ 1培養(yǎng)物濾液，并且在37°C下培養(yǎng)18小時(shí)(0. 7%瓊脂被用作“頂層瓊脂 (top-agar)，，以及噬菌體裂解物的滴定在頂層瓊脂上進(jìn)行，稱為軟瓊脂覆蓋法(softagar overlay method))。將含有噬菌體裂解物的樣品培養(yǎng)基稀釋，并與150 μ 1 ST振蕩培養(yǎng)基(0D_ = 2) 混合，接著進(jìn)行軟瓊脂覆蓋法，以便獲得單個(gè)噬菌斑。因?yàn)閱蝹€(gè)噬菌斑代表一個(gè)噬菌體，所 以，為分離單個(gè)噬菌體，將一個(gè)噬菌斑添加到400 μ 1 SM溶液(NaCl，5. 8g ；MgS047H20, 2g ； IM Tris-Cl (pH7. 5), 50ml ;H20，最終體積為1L)，以及在室溫下放置4小時(shí)，以分離單個(gè)噬菌 體。為了大量純化噬菌體，從單個(gè)噬菌體溶液取出100 μ 1上清液，并且與12ml 0. 7%瓊脂 和500 μ 1 ST振蕩培養(yǎng)基混合，接著在LB板上(150mm直徑)進(jìn)行軟瓊脂覆蓋法。當(dāng)裂解 完成時(shí)，將15ml SM溶液添加到該板。輕輕地將該板在室溫下振蕩4小時(shí)，以從頂層瓊脂洗 脫噬菌體?；厥蘸邢疵摰氖删w的SM溶液，并且添加氯仿至最終體積為1%，充分混合 10分鐘。在4000rpm下將該溶液離心10分鐘。使用0. 2 μ m過濾器過濾獲得的上清液，并 且儲(chǔ)存在冰箱中。1-2.噬菌體的大規(guī)模批量化使用ST大量培養(yǎng)選擇的噬菌體。ST被振蕩培養(yǎng)，并且將1.5X IOltlCfu(菌落 形成單位)的試樣在4000rpm下離心10分鐘，并將沉淀重懸浮于細(xì)1 SM溶液中。將 7. 5X l(fpfu (噬菌斑形成單位)噬菌體接種到其上(Μ0Ι 感染復(fù)數(shù)=0. 005)，以及在37°C 放置20分鐘。將該溶液接種到150ml LB培養(yǎng)基中，并且在37°C下培養(yǎng)5小時(shí)。添加氯仿 至最終體積為1%，將培養(yǎng)溶液振蕩20分鐘。添加DNase I和RNase A至最終濃度分別為1 μ g/ml。在37°C下放置該溶液30分鐘。添加NaCl和PEG(聚乙二醇)至最終濃度分別為 IM和10% (w/v)并且在37°C下再放置3小時(shí)。在4°C和12000rpm下將該溶液離心20分 鐘，以棄去上清液。將沉淀重懸浮于5ml SM溶液中，并且在室溫下放置20分鐘。向其中添 加細(xì)1氯仿并充分混合，接著在4°C和4000rpm下離心20分鐘。使用0. 2 μ m過濾器過濾 上清液，并且通過甘油密度梯度超速離心法(密度40%，5(%甘油，在35，000印111和41下1 小時(shí))來純化OCJ3。純化的噬菌體命名為噬菌體ΦCJ3，并且使其重懸浮在300 μ 1 SM溶 液中，接著進(jìn)行滴定。于2008年12月17日以登錄號(hào)KCCM10977P將噬菌體OCJ3保藏于 韓國(guó)微生物保藏中心(Korean Culture Center of Microorganisms) (361—221，Honje 1， Seodaemun, Seoul)。實(shí)施例2 :對(duì)Φ CJ3感染沙門氏菌的考察為考察選擇的噬菌體對(duì)其它沙門氏菌以及ST的裂解活性，嘗試用其它沙門氏菌 進(jìn)行交叉感染。結(jié)果，ΦCJ3不感染SC (豬霍亂血清型腸道沙門氏菌(Salmonella enterica Serotype Choleraesuis))、SD(德比血清型腸道沙門氏菌(Salmonellla enterica Serotype Derby))、SA (腸道沙門氏菌亞利桑那亞種(Salmonella enterica subsp. Arizonae))、SB (腸道沙門氏菌邦戈亞種(Salmonella enterica subsp. Bongori))，但特異 性感染SG、SP、ST和SE(參見實(shí)施例12)。結(jié)果顯示在下列表1中。使用SG作為宿主細(xì)胞 產(chǎn)生的噬菌體Φ 3顯示出與使用ST作為宿主細(xì)胞產(chǎn)生的那些相同的噬菌斑大小和噬菌 斑渾濁度，以及相同的蛋白質(zhì)模式和基因組大小。[表 1]<OCJ3感染沙門氏菌〉
權(quán)利要求
1.一種新型噬菌體，其對(duì)選自腸炎沙門氏菌(SalmonellaEnteritidis)、鼠傷寒沙門 氏菌(Salmonella Typhimurium)、雞沙門氏菌(Salmonella Gallinarum)禾口雞白病沙門氏 菌(Salmonella Pullorum)的一種或更多種沙門氏菌具有特異性殺菌活性，所述噬菌體屬 于肌尾噬菌體科的形態(tài)型組并且具有157-159 kbp的總基因組大小和大小為44-46 kDa、 61-63 kDa和79-81 kDa的主結(jié)構(gòu)蛋白。
2.權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體通過登錄號(hào)KCCM10977P來確定。
3.權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體具有圖1中描述的形態(tài)學(xué)。
4.權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體在整個(gè)基因組中包括選自SEQID NO. 1、 2、3和4的一種或更多種核酸分子。
5.權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中在使用選自SEQID NO. 5和6、SEQ ID NO. 7和8、 SEQ ID NO. 9和10以及SEQ ID NO. 11和12的一種或更多種引物組進(jìn)行PCR后，每個(gè)PCR 產(chǎn)物具有IlAp的大小。
6.權(quán)利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體具有下述1)-3)的一種或更多種性質(zhì)1)在ρΗ3·5至ρΗ9· 0的ρΗ范圍內(nèi)的耐酸性；2)在37°C至60°C的溫度范圍內(nèi)的耐熱性；以及3)在37°C-60°C、0-120分鐘下的耐干燥性。
7.組合物，其用于預(yù)防或治療選自雞沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和腸 炎沙門氏菌的一種或更多種沙門氏菌引起的感染性疾病，所述組合物包含權(quán)利要求1至6 中任一項(xiàng)所述的噬菌體作為活性成分。
8.權(quán)利要求7所述的組合物，其中腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的感染性疾病 是沙門氏菌病或沙門氏菌食物中毒，雞沙門氏菌引起的感染性疾病是禽傷寒，而雞白痢沙 門氏菌引起的感染性疾病是雞白痢。
9.權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述組合物被用作抗生素。
10.動(dòng)物飼料或飲用水，其包含權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的噬菌體作為活性成分。
11.衛(wèi)生消毒劑或清潔劑，其包含權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的噬菌體作為活性成分。
12.預(yù)防或治療感染性疾病的方法，所述感染性疾病由選自腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門 氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌的一種或更多種沙門氏菌引起，所述方法使用權(quán)利要 求1至6所述的噬菌體。
13.預(yù)防或治療感染性疾病的方法，所述感染性疾病由選自腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門 氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌的一種或更多種沙門氏菌引起，所述方法使用權(quán)利要 求7所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型噬菌體，更具體而言，涉及對(duì)選自下列的一種或更多種沙門氏菌具有特異性殺菌活性的噬菌體腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。進(jìn)一步，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療感染性疾病的組合物，所述感染性疾病包括由腸炎沙門氏菌或鼠傷寒沙門氏菌引起的沙門氏菌病和沙門氏菌食物中毒、由雞沙門氏菌引起的雞傷寒和由雞白痢沙門氏菌引起的雞白痢，所述組合物包含所述噬菌體作為活性成分。而且，本發(fā)明涉及飼料添加劑、飲用水、清潔劑和衛(wèi)生消毒劑，其包含所述噬菌體作為活性成分。
文檔編號(hào)C07K7/00GK102149816SQ200980100079
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2009年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日
發(fā)明者姜寅惠, 崔香, 樸敏兌, 申秀安, 趙英郁 申請(qǐng)人:Cj第一制糖株式會(huì)社