專(zhuān)利名稱：一種銀杏內(nèi)酯a、b單體的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種自植物中獲取藥用化合物的方法，確切地說(shuō)是一種自銀杏總內(nèi)酯 中分離純化銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B單體的新方法。
二背景技術(shù)：
銀杏葉提取物(GBE)已列入中華人民共和國(guó)藥典(2005年版)。按該標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的 藥用GBE，總黃酮醇苷含量> 24 % 、萜類(lèi)內(nèi)酯(以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏 內(nèi)酯C的總量計(jì))含量>6%。 銀杏總內(nèi)酯包括銀杏內(nèi)酯A(以下簡(jiǎn)稱GA)、銀杏內(nèi)酯B(以下簡(jiǎn)稱GB)、銀杏內(nèi)酯 C(以下簡(jiǎn)稱GC)、銀杏內(nèi)酯J、銀杏內(nèi)酯M和白果內(nèi)酯等，屬銀杏特有成分。銀杏總內(nèi)酯中各 單體的藥效和功用有一定差異。GA、GB對(duì)治療心腦血管疾病具有顯著療效。而白果內(nèi)酯對(duì) 治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病則藥效獨(dú)特。為開(kāi)發(fā)高效新藥，控制藥品質(zhì)量，有必要對(duì)GA和GB進(jìn)行高 純分離。 見(jiàn)諸于文獻(xiàn)報(bào)道的有銀杏內(nèi)酯單體分離方法主要有醇類(lèi)提取_溶劑萃取_柱色譜 分離法、醇類(lèi)提取_溶劑萃取_反相色譜分離法、色譜分離_重結(jié)晶法、超臨界流體萃取法 (SCFE)等。 經(jīng)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局網(wǎng)站檢索，截至2009年5月18日，與銀杏內(nèi)酯單體分離/制 備方法直接相關(guān)的授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利或申請(qǐng)主要有 (1) ZL98111546. 2 (發(fā)明人潘見(jiàn)、朱劍中，《物質(zhì)成分的超臨界流體結(jié)晶分離方
法》)該發(fā)明是將超臨界流體萃取與結(jié)晶分離技術(shù)方法集成為一體；在超臨界流體、夾帶劑 和結(jié)晶器的共同作用下，在結(jié)晶釜內(nèi)完成萃取、吸附、結(jié)晶和干燥，使混合物料中的有效成 分一步實(shí)現(xiàn)梯度結(jié)晶分離。該法可用于分離銀杏總內(nèi)酯。 (2)ZL200310104958. 7(《模擬移動(dòng)床色譜分離提純銀杏內(nèi)酯B的方法》)該發(fā)明 是一種用模擬移動(dòng)床色譜分離提純銀杏內(nèi)酯B的方法。以銀杏葉為原料，經(jīng)過(guò)水煮，乙酸乙 酯萃取、模擬移動(dòng)床純化、乙醇重結(jié)晶、甲醇重結(jié)晶得到純度大于90X銀杏內(nèi)酯B單體。該 發(fā)明基于模擬移動(dòng)床色譜分離GB。 (3)ZL200410014878. 7(發(fā)明人潘見(jiàn)，《白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法》)該發(fā)明 是一種白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法。白果內(nèi)酯初提物在流動(dòng)相作用下流經(jīng)固定相以及 流份收集、濃縮和干燥，其特征在于在含白果內(nèi)酯初提物中或柱填料添加配位劑。本方法得 到的白果內(nèi)酯純度95%以上。 (4)ZL00117758. 3(《由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法》)該 發(fā)明是一種由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法。該方法是向銀杏葉或其 浸膏加入乙醇等浸取劑，得到的浸取液經(jīng)過(guò)濾、分層，取出有機(jī)相去雜，然后經(jīng)濃縮、干燥獲 得富集GA和GB，采用制備型液相色譜再分離A與B。該發(fā)明的特征在于加入浸取液的同時(shí) 加入氯化物鹽析劑，及去雜過(guò)程加入鉀鹽或鈉鹽；液相色譜的分離柱流動(dòng)相為乙酸乙酯和 石油醚混合液，固定相為硅膠。該發(fā)明的單體純化依賴于制備色譜。
(5)ZL200410061284. l(《銀杏葉中銀杏內(nèi)酯B和白果內(nèi)酯的提取方法》)該發(fā)明 公開(kāi)了一種銀杏葉中GB和白果內(nèi)酯的提取方法。將銀杏葉烘干、去雜、粉碎，用乙醇水溶液 提取，上吸附柱去雜質(zhì)，然后用乙酸乙酯萃取出銀杏內(nèi)酯，上氧化鋁柱純化，分步結(jié)晶及重 結(jié)晶，獲得較純的GB和白果內(nèi)酯。它包括下列步驟①、將銀杏葉烘干，溫度控制在65 75°C ，去雜、粉碎，過(guò)55 65目，在65 75。C用50 60%乙醇分別提取2 3次，每次 90 120分鐘，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，加水為濃縮液的1 2倍，沉淀20 24 小時(shí)，離心，取上清液上吸附柱，先用水沖洗，用75 80%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮；②、將濃縮液加入1 2倍水和濃縮液的30 40%乙酸乙酯萃取2 3次，水相液濃 縮、65 75t:真空干燥，為銀杏黃酮甙產(chǎn)品，萃取分離出的有機(jī)相濃縮、干燥、粉碎到90 100目，為銀杏內(nèi)酯； 、在銀杏內(nèi)酯中，加85 95%乙醇，上酸性氧化鋁柱，收集流出液，濃 縮至固形物25 30%時(shí)，停止加熱，有結(jié)晶析出，為GA、GB，過(guò)濾，再用95%乙醇溶解結(jié)晶， 重結(jié)晶，先析出銀杏內(nèi)酯A，分離出結(jié)晶GA，溶液再結(jié)晶，為GB，用結(jié)晶的20 40 %的95 % 乙醇沖洗，抽濾，再用95%乙醇溶解，重結(jié)晶，銀杏內(nèi)酯B經(jīng)三次重結(jié)晶，分離；④、將母液加 入1 2倍水，在75 80°C蒸去乙醇，冷卻，析出結(jié)晶，結(jié)晶為GC，分離出結(jié)晶，母液減壓 蒸干，粉碎90 100目為黃色粉末白果內(nèi)酯，用結(jié)晶的20 40%無(wú)水乙醇沖洗白果內(nèi)酯， 抽濾，用95%乙醇溶解，重結(jié)晶為白色的白果內(nèi)酯，再用95%乙醇溶液溶解，再重結(jié)晶，白 果內(nèi)酯經(jīng)三次重結(jié)晶，分離。該發(fā)明在銀杏內(nèi)酯B的結(jié)晶過(guò)程③中引入了較多的水(來(lái)自 85% 95%乙醇)。 (6)CN1634925A(申請(qǐng)人潘見(jiàn)，申請(qǐng)?zhí)?00410065104. 7，《一種銀杏內(nèi)酯單體的分離 純化方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯類(lèi)單體的分離純化方法，采用柱色譜-重結(jié)晶-超 臨界(A精制純化組合工藝，制取高純銀杏內(nèi)酯類(lèi)單體。柱色譜采用正相或反相固定填料， 使用水、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、氯仿、石油醚等溶劑梯度洗脫，超臨界C02精制純化和晶型整 理工藝條件為壓力《100MPa，溫度《15(TC，夾帶劑為乙酸乙酯、乙醇等；所得單體含量最 高可達(dá)99.8% ;總收率>90%。該工藝將為GB(原料藥)的工業(yè)生產(chǎn)所采用。
(7)C訓(xùn)1085780A(申請(qǐng)?zhí)?00610014207. X，《銀杏內(nèi)酯的制備方法》)該發(fā)明公
開(kāi)了本發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯的制備方法，按順序包括如下步驟(l)取銀杏葉粗提物， 粉碎，加醋酸乙酯攪拌萃取，濾過(guò)，濾液回收醋酸乙酯至盡，干燥，得銀杏內(nèi)酯粗提物；(2) 取銀杏內(nèi)酯粗提物，粉碎，用乙醇充分溶解，溶液上酸性氧化鋁柱，收集流出液，再用乙醇洗 脫，收集洗脫液，合并流出液和洗脫液，減壓濃縮，結(jié)晶，得銀杏內(nèi)酯晶體混合物；(3)將銀 杏內(nèi)酯晶體混合物用少量乙醇洗滌，濾過(guò)，再重結(jié)晶，即得銀杏內(nèi)酯混合晶體。該發(fā)明的目 標(biāo)產(chǎn)物是銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的混合晶體。 (8)C訓(xùn)1134758A(申請(qǐng)?zhí)?00710050242. 1，《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯A、 B、C、J及白果內(nèi)酯單體的方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯A、B、C、 J及白果內(nèi)酯單體的方法，即以銀杏葉為原料，采用乙醇提取，乙酸乙酯萃取，極性無(wú)孔吸附 樹(shù)脂柱吸附，乙醇結(jié)晶得銀杏總內(nèi)酯，再經(jīng)過(guò)硅膠柱層析，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗 脫，分段收集洗脫液，依次分別得到白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi) 酯，再用不同濃度乙醇結(jié)晶分別得到白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A(60-80X乙醇結(jié)晶)、銀杏內(nèi)酯 B (30-70%乙醇結(jié)晶)、銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯J單體，純度99%以上。此方法采用硅膠柱 層析方法預(yù)分離各單體。
(9)C訓(xùn)1182325A(申請(qǐng)?zhí)?00610097492. 6，《靜脈給藥銀杏內(nèi)酯B及提取方
法》)該發(fā)明公開(kāi)一種靜脈給藥銀杏內(nèi)酯B及提取方法，其中銀杏內(nèi)酯B提取方法是以銀杏
葉為原料，采用乙醇溶液回流提取，活性炭吸附，乙醇結(jié)晶獲得銀杏總內(nèi)酯，再在甲醇溶液
中-l(TC -25t:低溫條件下結(jié)晶，可獲得含量^ 97X銀杏內(nèi)酯B。該發(fā)明采用甲醇結(jié)晶，容易造成產(chǎn)品的甲醇?xì)埩舫瑯?biāo)，需強(qiáng)化過(guò)程安全性控制。 (10)CN1680392A(申請(qǐng)?zhí)?00510023164. 7，《一種高純度銀杏內(nèi)酯的制備方法》)該發(fā)明公開(kāi)了采用高速逆流色譜法(HSCCC)從銀杏葉中分離一種高純度銀杏內(nèi)酯的制備方法。用三個(gè)溶劑體系，分別經(jīng)過(guò)兩次HSCCC分離后，可得到銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J和白果內(nèi)酯，純度均達(dá)到99 %以上。該方法涉及三個(gè)溶劑體系，二次分離。 (11)CN101054384A(申請(qǐng)?zhí)?00710106040. 4，《一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法，采用高速逆流萃取、聚酰胺和大孔樹(shù)脂兩次柱層析分離、重結(jié)晶相結(jié)合的方法。該方法涉及兩次不同的層析分離，會(huì)增加脫除產(chǎn)品中樹(shù)脂殘留物的難度。
(12)CN101302222A(申請(qǐng)?zhí)?00810024206. 2，《一種銀杏內(nèi)酯B原料及其制備方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯B原料制備方法。該銀杏內(nèi)酯B原料是通過(guò)以下方法制備得到的取銀杏葉或銀杏葉提取物，在鹽酸溶液中浸煮，浸煮液過(guò)濾后采用有機(jī)溶劑萃取，得到的萃取液濃縮后添加100 200目硅膠混合干燥，采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯B原料。該發(fā)明的特征在于①所述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為0. 1 1%，用量為銀杏葉或銀杏葉提取物質(zhì)量的5 50倍。②所述銀杏葉或銀杏葉提取物在鹽酸溶液中浸煮的時(shí)間為30 180min。③所述的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、丙酮、正丁醇中的一種，用量為浸煮液體積的2 5倍。 所述的100 200目硅膠的用量與銀
杏葉或銀杏葉提取物的質(zhì)量比為i : o.5 i : io。⑤柱層析時(shí)使用的流動(dòng)相為乙酸乙
酯、正丁醇、石油醚、環(huán)己烷、丙酮中的兩種或兩種以上混合溶劑。⑥柱層析時(shí)流動(dòng)相的流速
控制在每公斤銀杏葉或銀杏葉提取物18 360mL/min。該方法采用硅膠柱層析法收集富含銀杏內(nèi)酯B的洗脫液，經(jīng)結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯B原料。 (13)CN101392000A(申請(qǐng)?zhí)?00810046162. 3，《銀杏內(nèi)酯A、 B、 C、 J和白果內(nèi)酯單體的高效分離純化方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯A、B、C、J和白果內(nèi)酯單體的分離純
化方法，主要操作過(guò)程有銀杏葉提取物脫除銀杏酸，銀杏總內(nèi)酯的獲得，總內(nèi)酯制備溶液
的準(zhǔn)備，總內(nèi)酯中銀杏內(nèi)酯A、B、C、J和白果內(nèi)酯單體的高效液相色譜分離。該方法利用高
效液相色譜分離單體，適合用于實(shí)驗(yàn)室微量產(chǎn)品制備。 (14)CN101412722A(申請(qǐng)?zhí)?00710050239. X，《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯C的方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯C的方法，即以銀杏葉為原料，采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取、極性無(wú)孔吸附樹(shù)脂柱、乙醇結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯類(lèi)化合物、上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內(nèi)酯C的洗脫液，再用乙醇結(jié)晶，得到銀杏內(nèi)酯C單體，純度99X。該發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物是銀杏內(nèi)酯C。
(15)CN101412725A(申請(qǐng)?zhí)?00710050245. 5，《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B
的方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其步驟如下1)取銀杏葉，用由高到低不同濃度的乙醇進(jìn)行提取，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮后的提取液；2)向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有機(jī)相后濃縮至浸膏；
3)將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無(wú)孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇洗脫，所得洗脫液回收乙醇后，再用乙醇結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯類(lèi)化合物；4)將銀杏內(nèi)酯類(lèi)化合物結(jié)晶上硅膠柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫，收集洗脫液，得到富集銀杏內(nèi)酯B的洗脫液；5)回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑，再用乙醇結(jié)晶，得到銀杏內(nèi)酯B單體。該發(fā)明的特征在于①步驟1)中，先用體積濃度為60 80%的乙醇對(duì)銀杏葉進(jìn)行提??；然后用體積濃度為30 55%的乙醇對(duì)銀杏葉進(jìn)行提?。辉儆皿w積濃度為10 25%的乙醇對(duì)銀杏葉進(jìn)行提取。②步驟1)中，所述提取的溫度為50 7(TC。③步驟1)中，第一次提取時(shí)銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉的重量乙醇的體積=1 : 8 10 ;第二次提取時(shí)銀杏葉與乙醇的配
比按銀杏葉的重量乙醇的體積=i : e 8;第三次提取時(shí)銀杏葉與乙醇的配比按銀杏葉的重量乙醇的體積=1 : 5 7。
步驟2)中，所述加入的乙酸乙酯的體積與濃縮后的提取液的體積比為i : 1，萃取的次數(shù)為3次。⑤步驟3)中，所述選擇性極性無(wú)孔吸附樹(shù)
脂型號(hào)為ADS-15，或ADS-17，或ADS-FS。
步驟3)中，所述洗脫用乙醇的體積濃度為50 70%。該發(fā)明屬于色譜分離-結(jié)晶純化工藝。 (16)CN1844125A(申請(qǐng)?zhí)?00510063407. X，《一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的新方法》)該發(fā)明特征在于，采用了液_液萃取后再進(jìn)行精制的方法；萃取的溶劑為正丁醇或其他與正丁醇溶解性與極性相似的溶劑；其提取方法包含以下步驟(1)取銀杏葉或銀杏葉提取物，加水煮沸，冷藏，取上清液，過(guò)濾，收集濾液；(2)濾液中加入正丁醇或其他與正丁醇相似溶解性、相似極性的溶劑萃取，分出水層；(3)萃取液經(jīng)減壓回收正丁醇作為萃取液，并蒸干，收集干燥物；(4)干燥物中加入乙醇溶液煮沸使溶解，冷藏，抽濾，并洗滌得晶體；(5)晶體中加入乙醇使溶解，冷藏，抽濾，得銀杏內(nèi)酯B晶體；(6)銀杏內(nèi)酯B晶體經(jīng)真空干燥后得純度為90X以上的銀杏內(nèi)酯B單體。該方法中正丁醇萃取的浸膏內(nèi)含有較多GA、GC、白果內(nèi)酯和黃酮類(lèi)成分，難以直接結(jié)晶獲得GB。
(17)CN1424315A(申請(qǐng)?zhí)?2128965. 4，《銀杏內(nèi)酯化合物及其制備方法和含有該化合物的藥物組合物》)該發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏內(nèi)酯總提取物當(dāng)中分離獲得新化合物——銀杏內(nèi)酯K的方法。即取銀杏內(nèi)酯粗品3g置索氏提取器中，加乙酸乙酯或丙酮2500mL回流24小時(shí)，回收乙酸乙酯至浸膏狀，用硅藻土拌樣，烘干，研細(xì)，用石油醚乙酸乙酯=9 : 1濕法裝于低壓硅膠柱，壓力0. 2 0. 3kPa/cm3，以石油醚乙酸乙酯梯度遞增洗脫，當(dāng)石油
醚乙酸乙酯=6 : 4時(shí)，97 121流份，經(jīng)TCL檢查，甲苯乙酸乙酯丙酮甲醇=
5 : 2 : 2. 5 : O. 3，4% NaAc硅膠H板，與銀杏內(nèi)酯對(duì)照品比較出現(xiàn)銀杏內(nèi)酯斑點(diǎn)，將其合
并濃縮，放置出現(xiàn)沉淀，母液留用，將沉淀以丙酮溶解，以制備型高效液相純化，即得該化合
物。該發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物是銀杏內(nèi)酯K，純化依賴于制備型高效液相。 (18)CN1594319A(申請(qǐng)?zhí)?00410041120. 2，《銀杏內(nèi)酯提取工藝和銀杏內(nèi)酯注射液及其制備方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯提取工藝和銀杏內(nèi)酯注射液及其制備方法。該提取工藝為稱取一定量銀杏葉粉碎，加數(shù)倍量的稀丙酮液溫浸提取，回收丙酮，除雜，醋酸乙酯萃取純化，醋酸鈉再除雜，回收醋酸乙酯，40 % 95 %乙醇或甲醇中重結(jié)晶，過(guò)濾，40°C 8(TC干燥。此法使用乙醇水或甲醇結(jié)晶，產(chǎn)品脫水困難亦可能有甲醇?xì)埩簟?br> (19)CN1733768A(申請(qǐng)?zhí)?00510041266. 1，《銀杏內(nèi)酯提取和純化工藝》)該發(fā)明公開(kāi)了一種銀杏內(nèi)酯提取和純化工藝，該工藝包含下列步驟稱取銀杏干葉，粉碎，按藥材重量加2 10倍的5 % 95 %乙醇或甲醇提取，提取液回收醇后用脫脂溶劑除雜，萃取，再除雜，得粗制品，用5% 95%乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得銀杏總內(nèi)酯精制品。該發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物是銀杏總內(nèi)酯。 (20) CN101041661A (申請(qǐng)?zhí)?00710051805. 9，《一種用免疫親和層析色譜柱提取銀杏內(nèi)酯B的方法》)該發(fā)明公開(kāi)了一種用免疫親和層析色譜柱提取銀杏內(nèi)酯B的方法，其方法步驟為①銀杏內(nèi)酯B的初步提取將銀杏葉以三倍量的90%乙醇提取，提取三次后，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，將乙醇蒸干至提取物為粘稠；②將步驟1所得粘稠提取的上免疫親和層析色譜柱，然后用磷酸緩沖液沖洗三次，然后以甲醇沖洗，即得銀杏內(nèi)酯B。該發(fā)明建立的是一種免疫親和層析色譜分離方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在為中藥新藥開(kāi)發(fā)提供高純度的原料藥銀杏內(nèi)酯A(ginkgolide A， GA)和銀杏內(nèi)酯B (ginkgo 1 ide B， GB)，所要解決的技術(shù)問(wèn)題是自銀杏總內(nèi)酯中分離并純化目標(biāo)產(chǎn)物GA和GB。 本發(fā)明的技術(shù)方案以純度>95% (指銀杏內(nèi)酯含量>95%，重量百分比。下同)的銀杏總內(nèi)酯為起始原料，包括結(jié)晶分離、純化和干燥，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是所述的純化是用重結(jié)晶-超臨界0)2萃取組合工藝進(jìn)行純化，然后干燥得到純度> 97X的單體GA和GB。所述的結(jié)晶分離是利用單體GA和GB在無(wú)水乙醇中溶解度的差別自起始原料中通過(guò)結(jié)晶分別得到單體GA和GB。所述的重結(jié)晶純化是對(duì)結(jié)晶分離得到的單體GA和GB分別用無(wú)水乙醇按l : 5 80(w/v)的料液比重結(jié)晶至少三次，得到純度^ 95X的單體GA和GB。所述的超臨界C02萃取是對(duì)純度^ 95%的單體GA和GB分別進(jìn)行萃取，萃取壓力10 100MPa，萃取溫度32 150°C 。最后對(duì)萃取純化得到的單體于0. 06Mpa 0. 1Mpa條件下真空干燥至少10小時(shí)，在負(fù)壓條件下脫水，溫度< IO(TC。 所述的起始原料銀杏總內(nèi)酯是自符合藥典規(guī)定要求的銀杏葉提取物(GBE)中用乙酸乙酯萃取得到的，這時(shí)銀杏總內(nèi)酯中基本不含白果內(nèi)酯。作為起始原料，要求銀杏總內(nèi)酯的含量>95%，若含量低于95%，可使用酸性氧化鋁或活性炭等進(jìn)行吸附除雜，除去殘留的黃酮類(lèi)化合物或其它雜質(zhì)。由于銀杏葉提取物中的銀杏內(nèi)酯J、銀杏內(nèi)酯M的含量很少，所得銀杏總內(nèi)酯中的主要成分是GA、 GB和GC，通常GA含量在50% 65 % ， GB含量在25% 35%， GC含量有5% 15%。 所述的結(jié)晶分離是用無(wú)水乙醇對(duì)起始原料銀杏總內(nèi)酯進(jìn)行多次結(jié)晶處理；由于無(wú)水乙醇中GB溶解度低于GA、 GC，所以GB可先結(jié)晶析出；經(jīng)2 3結(jié)晶后，銀杏總內(nèi)酯母液中GB含量已較低，可對(duì)母液濃縮結(jié)晶，得到GA ;當(dāng)GB、GA含量都很低時(shí)，可將銀杏總內(nèi)酯母液與下一批次的銀杏總內(nèi)酯母液混合。由于天然銀杏總內(nèi)酯母液中GC含量很低，析出結(jié)晶甚微，可在重結(jié)晶中作為雜質(zhì)處理。 析出的GB和GA分別經(jīng)2 4次無(wú)水乙醇重結(jié)晶可獲得高純度GB和GA。 GA和GB的重結(jié)晶時(shí)，液固比為5 : 1 80 : 1 (V/W)，通常經(jīng)過(guò)3次以上重結(jié)晶
處理可獲得含量^ 95% GA或GB單體。 所述的超臨界C02萃取就是重結(jié)晶得到的含量^ 95%的GA和GB單體分別進(jìn)行萃取結(jié)晶純化，脫除殘留溶劑和微量雜質(zhì)，萃取壓力10 100MPa、溫度32 150°C。
最后進(jìn)行真空干燥(溫度< IO(TC，真空度0. 06MPa 0. lMPa，時(shí)間10 48h)，可得到含量^ 97X的GA和GB單體。重復(fù)萃取1次，可制備GA、GB單體含量達(dá)99. 5%。以起始原料中單體量計(jì)，收率均^ 90%。 真空度表示設(shè)備系統(tǒng)的壓強(qiáng)低于大氣壓強(qiáng)的數(shù)值，即真空度=大氣壓強(qiáng)(0. lMPa)-絕對(duì)壓強(qiáng)，單位MPa。
本發(fā)明的主要的優(yōu)點(diǎn)在于 ①、利用銀杏總內(nèi)酯中GA、GB和GC含量的天然差異，直接進(jìn)行結(jié)晶粗分，省去了色譜分離過(guò)程。 ②、對(duì)粗分所獲GB或GA的粗晶分別進(jìn)行重結(jié)晶，調(diào)整結(jié)晶溶劑用量，可逐步提高GA和GB單體的純度。 ③、使用無(wú)水乙醇結(jié)晶，可以有效減輕產(chǎn)品最終的脫水負(fù)荷。 ④、GC留在母液中，待積累到一定濃度時(shí)(如20%以上)再結(jié)晶分離。 ⑤、重結(jié)晶剩下的低含量GA和GB，可返回母液循環(huán)套用，從而使各單體的總回收
率達(dá)到90%。，工藝實(shí)用。
、超臨界0)2萃取結(jié)晶過(guò)程中，不外加夾帶劑，利用欲脫除的殘留溶劑的夾帶作用同步脫除微量雜質(zhì)和水分。 ⑦、本工藝所制備的GA、GB單體的含量最高可達(dá)99. 5% 。 本發(fā)明的工藝路線簡(jiǎn)捷，分離全程除乙醇和C02外物料不接觸任何有機(jī)溶劑，用超臨界(A同步脫除殘留溶劑、微量雜質(zhì)和水分，可實(shí)現(xiàn)綠色生產(chǎn)。產(chǎn)品品質(zhì)優(yōu)異，工藝特別適合用于原料藥生產(chǎn)。
四具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 : 取含量高于97%的銀杏總內(nèi)酯(其中，GA含量56. 3%， GB含量31.2X ) 100g，80 IO(TC真空干燥后，用10 30倍無(wú)水乙醇結(jié)晶2 3次，得GB ;合并GB，濾干，再用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，乙醇用量分別為溶質(zhì)量的20、30、50、50倍；再用超臨界(A萃取(操作溫度65t:，壓力12MPa)，以除去微量雜質(zhì)和溶劑；真空干燥(溫度6(TC，真空度0. 090MPa，時(shí)間48h);得含量^ 99 %的GB 28. 3g。
實(shí)施例2 : 取含量高于97%的銀杏總內(nèi)酯(其中，GA含量56. 3%， GB含量31.2X ) 100g，80 IO(TC真空干燥后，用10 30倍無(wú)水乙醇結(jié)晶2 3次，分離GB ;將剩下的母液濃縮，得GA，濾干；用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，乙醇用量分別為溶質(zhì)量的20、30、50、50倍；再用超臨界0)2萃取(操作溫度55t:，壓力14MPa)，以除去微量雜質(zhì)和溶劑；真空干燥(溫度7(TC，真空度0. 095MPa，時(shí)間48h);得含量^ 99%的GA 51. 4g。
實(shí)施例3 : 取含量高于90%的銀杏總內(nèi)酯(其中，GA含量52. 6X，GB含量28. 8% )100g，先用用20 40倍乙醇溶解，加適量酸性氧化鋁脫色，提高銀杏總內(nèi)酯純度；80 IO(TC真空干燥；用10 30倍無(wú)水乙醇結(jié)晶2 3次，得GB ;合并GB，濾干；再用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，乙醇用量分別為溶質(zhì)量的20、40、60倍；然后用超臨界0)2萃取(操作溫度5(TC，壓力15MPa)，以除去微量雜質(zhì)和溶劑；真空干燥(溫度7(TC，真空度0.090MPa，時(shí)間48h);可得含量> 97. 5%的GB 26. 7g。
實(shí)施例4: 取含量高于90%的銀杏總內(nèi)酯(其中，GA含量52. 6X，GB含量28. 8% )100g，先用用10 20倍乙醇溶解，加適量酸性氧化鋁脫色，提高銀杏總內(nèi)酯純度；80 IO(TC真空干燥；用10 30倍無(wú)水乙醇結(jié)晶2 3次，分離GB ;將剩余母液濃縮得GA，濾干；再用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，乙醇用量分別為溶質(zhì)量的20、40、60倍；然后用超臨界C02萃取(操作溫度6(TC，壓力13MPa)，以除去微量雜質(zhì)和溶劑；真空干燥(溫度6(TC，真空度0. 095MPa，時(shí)間48h);可得含量^ 97. 5%的GA48. 8g。
權(quán)利要求
一種銀杏內(nèi)酯A、B單體的分離純化方法，以純度≥95％的銀杏總內(nèi)酯為起始原料，包括結(jié)晶分離、純化和干燥，其特征在于所述的純化是用重結(jié)晶-超臨界CO2萃取組合工藝進(jìn)行純化，所述的重結(jié)晶純化是對(duì)結(jié)晶分離純化得到的單體GA和GB分別用無(wú)水乙醇按1∶5～80的料液比重結(jié)晶至少三次，得到純度≥95％的單體GA和GB；所述的超臨界CO2萃取純化是對(duì)純度≥95％的單體GA和GB分別進(jìn)行萃取，萃取壓力10～100Mpa，萃取溫度32～150℃。
全文摘要
一種銀杏內(nèi)酯A、B單體的分離純化方法，以純度≥95％的銀杏總內(nèi)酯為起始原料，包括結(jié)晶分離、純化和干燥。所述的純化是用重結(jié)晶-超臨界CO2萃取組合工藝進(jìn)行純化，首先對(duì)結(jié)晶分離得到的單體GA和GB分別用無(wú)水乙醇按1∶5～80的料液比重結(jié)晶至少三次，得到純度≥95％單體的GA和GB；然后用超臨界CO2萃取方法對(duì)純度≥95％的單體GA和GB分別萃取，萃取壓力10～100Mpa，萃取溫度32～150℃。重復(fù)萃取一次，可制備純度≥99.5％的單體GA和GB。以起始原料中單體量計(jì)，收率≥90％。在本方法中除乙醇和CO2外不接觸任何其他有機(jī)溶劑，是綠色、環(huán)保工藝，且收率高，特別適合于原料藥的生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D493/22GK101701019SQ20091018491
公開(kāi)日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月21日
發(fā)明者潘見(jiàn) 申請(qǐng)人:潘見(jiàn)