專利名稱：：用于治療胃腸動(dòng)力障礙病癥的促胃動(dòng)素受體的大環(huán)拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及結(jié)合促胃動(dòng)素受體(包括其亞型、異構(gòu)型和/或變體)和/或?yàn)榇傥竸?dòng)素受體(包括其亞型、異構(gòu)型和/或變體)功能調(diào)節(jié)劑的新型構(gòu)象-界定大環(huán)化合物。這些大環(huán)化合物具備適合的藥理學(xué)特征以用作一定范圍的疾病適應(yīng)癥的治療劑。尤其是，這些化合物可用于治療和預(yù)防特征為高胃動(dòng)素血癥(hypermotilenemia)或胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)度的病癥，包括但不限于腹瀉、癌癥治療相關(guān)的腹瀉、癌癥引起的腹瀉、化療引起的腹瀉、放射性小腸炎、放射引起的腹瀉、緊張引起的腹瀉、慢性腹瀉、AIDS相關(guān)的腹瀉、艱難梭菌(C.^^"7e)相關(guān)的腹瀉、旅行腹瀉、移植物抗宿主病(graphversushostdisease)引起的腹瀉、其它類型腹瀉、消化不良、腸易激綜合征、功能性胃腸病癥、化療引起的惡心和嘔吐(嘔吐(emesis))和手術(shù)后惡心和嘔吐。此外，所述化合物具備用于治療特征為胃吸收或腸吸收差的疾病和病癥如短腸綜合征、乳糜瀉和惡病質(zhì)的功歲支。所述化合物還可用于治療胃腸道的炎性疾病和病癥，如炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn病和胰腺炎。
背景技術(shù)：
：大量肽激素牽涉在胃腸(GI)道不同功能(包括吸收、分泌、血流和運(yùn)動(dòng)性)的控制中(Mulvihill,S.J.等在Bcw/c朋JC//w'ca/五"(iocrmo/ogy(基石出和臨床內(nèi)分泌學(xué))，第4版，Greenspan,F.S.;Baxter,J.D.編輯Appleton&Lange:Norwalk,CT,1994，pp551-570)。由于腦和GI系統(tǒng)的相互作用對(duì)這些功能的正確調(diào)節(jié)是關(guān)鍵的，這些肽可就地在GI道產(chǎn)生或遠(yuǎn)在CNS中產(chǎn)生。這些肽激素的一種——促胃動(dòng)素，是線性的22-氨基酸肽，通過(guò)控制空腹胃腸的運(yùn)動(dòng)活性而在GI生理系統(tǒng)中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。因此，在哺乳動(dòng)物(包括人類)空腹期間這種肽周期性地從十二指腸粘膜釋放。更準(zhǔn)確地，促胃動(dòng)素經(jīng)由收縮胃腸平滑肌以刺激胃排空、減少腸通過(guò)時(shí)間并開始小腸中肌移動(dòng)復(fù)合波(MMC)的第III階段而對(duì)胃運(yùn)動(dòng)性施加強(qiáng)大的效應(yīng)。(11;011,2.編輯，^0〃//"(促胃動(dòng)素)，AcademicPress:SanDiego,CA,1990,ASIN:0123757304;Itoh,Z.尸印"tfey1997，18,593-608;Nelson,D.K."g.Sc.1996,41,2006-2015;Peeters,T丄.；Vantrappen,G.;Janssens,J.Ga5tn9e她ro/ogy1980,79,716-719;Itoh,Z.;Sekiguchi,T.Scand.GWrae/^ero/.Sw///.1983,82,121-134;Itoh,Z.;Aizawa,I.;Sekiguchi,T.Clm.G牆固/W.1982,11,497-521;Luikmg,Y.C.;Peeters,T丄.；Stolk,M.F.;Nieuwenhuijs,V.B.;Portincasa,P.;Depoortere,I.;VanBergeHenego麗en,G.P.;Akkermans,L.M.A.Gw/1998,42,830-835.)。促胃動(dòng)素可由主要位于人類竇和近端十二指腸的受體施加這些效應(yīng)，盡管其受體在一些程度發(fā)現(xiàn)于整個(gè)GI道。(Peeters,T丄.；Bormans，V.;Vantrappen,G.尸一.1988,23,171-182;Poitras,P.;Miller，P.;Dickner,M.;Mao,Y.K.;Daniel,E.E.;St-Pierre,S.;Trudel,L."^s1996,17,701-707;Miller,P.;Trudel,L.;St-Pierre,S.;Takanashi，H.;Poitras,P.尸一tfes'2000,21,283-287;TakeshitaE,Mats麗aB,DongM,MillerLJ，MatsuiH,OnjiM.丄Gav^oew^/^/.2006,41,223-230.)因jt匕，促胃動(dòng)素激素牽涉在GI系統(tǒng)上部分和下部分的運(yùn)動(dòng)性中。此外促胃動(dòng)素和其受體已見于CNS和外周，暗示在神經(jīng)系統(tǒng)中還未一皮最終闡明的生理作用。(Peeters,T丄.;Tang,M.2007,28,625-631;Liu,M.;Dong,L.;Duan,Z.;Zhu,W,y.;Cm,Y.;Lei,L.丄Met/.Co〃eges尸丄j2005,20,321-326;Thielemans,L.;Depoortere,I.;VanAssche,G.;Bender,E.;Peeters,T丄.腸m紐2001,895,119-128;Depoortere,I.;Peeters,T丄.」w../.尸/z，w/.1997,272,G994-G999和O'Donohue,T丄.等Pej^^fes19812,461-477.)。近來(lái)發(fā)現(xiàn)促胃動(dòng)素受體在人類和大鼠小腦的浦肯野氏細(xì)胞中表達(dá)。(Chen,H.;Chen,L.;Wang,JJ.;Wei,H.J.;Yung,W.H.A^wrai^/wrt2007，18,1345-1349.)已表明腦中的促胃動(dòng)素受體在許多CNS功能中起調(diào)節(jié)作用，包括喂食和飲水行為、排尿反射、中樞和腦干神經(jīng)元調(diào)節(jié)和垂體激素分泌(Itoh,Z.尸e/7"t/e1997,18,593-608;Asakawa,A.;Inui,A.;Momose,K.M.等尸ef,tfes、1998，19,987-990和Rosenfeld,D丄；Garthwaite,T丄.P/z;wo/.Se/^v.1987,39,753-756)。對(duì)幼兒的研究已表示促胃動(dòng)素在能量平衡的長(zhǎng)期調(diào)節(jié)中的作用。(Savmo,R.;Grassmo,E.C;Fissore，M.F.等C/肌E油固o/.2006,65,158-162.)。最近鑒定和克隆了人類促胃動(dòng)素受體(國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO99/64436;Feighner,S.D.;Tan,C.P.;McKee,K.K.等5""e"ce1999,284,2184-2188)簡(jiǎn)化和加速了可為特定治療目的調(diào)控其活性的藥劑的探尋。由于促胃動(dòng)素牽涉在控制胃運(yùn)動(dòng)性中，降低(在運(yùn)動(dòng)過(guò)度病癥的情形)或增強(qiáng)(在運(yùn)動(dòng)不足病癥的情形)促胃動(dòng)素受體活性的藥劑對(duì)于探尋大量GI適應(yīng)癥的新的有效藥物的進(jìn)一步考察是特別有吸引力的領(lǐng)域。(Besterman，H.S.</.C/m.尸W/w/.Sz^//.1978,8,76-84;Tack,J.B"wcMGa欲固&ra/.2007,21,633-644.)已經(jīng)釆用兩種路線來(lái)尋找和開發(fā)促胃動(dòng)素激動(dòng)劑作為治療劑來(lái)增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)寸生。(Peeters,T.L.iVewrogaWroewtero/.A/o"7.2006,18,1-5;Sandham,D.A.;Plannkuche,H.-.Kep.Med.C/zem.2006,47，211-219.)。這些中的第一種是促胃動(dòng)素受體的肽激動(dòng)劑，臨床應(yīng)用于治療運(yùn)動(dòng)不足病癥,尤其是胃輕癱(Haramura,M.;Tsuzuki,K.;Okamachi,A.等B證g.C/z艮2002,10,1805-1811;美國(guó)專利號(hào)5,422,341;5,432,261;5,459,049;5,695,952;5,721,353;5,734,012;6,018,037;6,380，158;6,420,521,6,838,438;美國(guó)專利申請(qǐng)7^開2001/041791;2003/176640;2004/254345;2005/065156;2005/080116,2005/106146;2005/208626;國(guó)際專利申請(qǐng)/>開WO98/42840;WO01/00830;WO02/059141)。結(jié)構(gòu)活性研究已確定天然肽中的關(guān)鍵殘基(Peeters,T丄.；Macielag,M.J.;Depoortere,I.等尸—^1992,13,1103-1107;Haramum，M.;Tsuzuki,K.;Okamachi,A.等C/ze附.Sw〃.1999,47,1555-1559),NMR研究已經(jīng)確定了其溶液結(jié)構(gòu)(Massad,T.;Jarvet,J.;Taner,R.等J.說(shuō)omo/.A^MW2007,38,107-123)。此外，對(duì)促胃動(dòng)素受體和對(duì)肽和非-肽激動(dòng)劑與促胃動(dòng)素受體相互作用的研究已經(jīng)描繪出受體胞外域?qū)Y(jié)合的不同貢獻(xiàn)。(Matsuura,B.;Dong,M.;Miller,LJ.丄Bzo/.C/z綴2002,277,9834-9839;Mats麗a,B.;Dong，M.;Naik,S.;Miller,LJ.;Onji,M.,/.C/zem.2006,281,12390-12396.)。Atilmotm是一種衍生自促胃動(dòng)素C-末端14殘基的肽類似物，已經(jīng)在早期人類研究中顯示出有希望的結(jié)果。(Park,M.I.;Ferber,I.;Camilleri,M.等A^wragcwtrae/^n/.M^//.2006,18,28-36;國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO2006/138023;WO2006/138026;美國(guó)專利申請(qǐng)公開2006/287243;2006/293243.)。長(zhǎng)期已知大環(huán)內(nèi)酯抗生素紅霉素具有刺激GI運(yùn)動(dòng)性的副作用，并因此已用于治療胃輕癱。隨后顯示該效應(yīng)由在促胃動(dòng)素受體上的相互作用而被介導(dǎo)。(Hasler,W丄.;Heldsinger,A.;Chungal,O.Y.爿w.丄尸—。/.1992,262,G50-G55;Peeters,T丄.GaWroewtera/ogy1993，105,1886-1899;Weber,F.H.,Jr.;Richards,R.D.;McCallum,R.W.爿附.GaWraewtero/.1993,88,485-490.)。然而使用紅霉素治療會(huì)伴有惡心、腹瀉、痙攣和腹部痛且進(jìn)一步地必須限制持久使用以避免發(fā)展細(xì)菌耐藥性。因此，作為目標(biāo)為促胃動(dòng)素激動(dòng)劑治療劑的第二主要策略，開發(fā)具物(通常指促動(dòng)內(nèi)酯(motilide))已經(jīng)成為相當(dāng)數(shù)目的研究工作的主題。(Faghih,R.;Nellans,H.N.;Plattner,J.J.Z>，q/"F幽re1998,23,861-872;Salat,P.;Parikh,V.尸/zw附aco/.1999,31,333-339;Wu,Y.J.Cwr.尸/z^tti2000,6,181-223;Inatomi,N.;Sato,F.;Itoh，Z.;Omura,S.Modeofactionofmacrolideswithmotilinagonisticactivity—motilides(具有促胃動(dòng)素激動(dòng)活性的大環(huán)內(nèi)酯-促動(dòng)內(nèi)酯的作用方式).Macra/^feylw〃力zo"a(大環(huán)內(nèi)酉旨抗生素)，第2版，Omura,S.編輯，AcademicPress:SanDiego,CA,2002,pp501-531;美國(guó)專利號(hào)4,677,097;4,920,102;5，008，249;5,175,1505，523,418;5,538，961;5,554,6055,854,407;5,912,235;5,922,8496,165，985;6,403,775;6,562,7955,418,224;5,470,961;5,523,4015,578,579;5,658,888;5,712,2536,077,943;6,084,079;6，100,2396，750，205;6,939,861;6,946,4827,211,568;美國(guó)專利申請(qǐng)乂>開2002/025936;2002/094962;2003/220271;2004/138150;2004/147461;2005/119195;2006/270616;國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO01/60833;WO02/051855;WO2004/19879;WO2005/18576;WO2006/070937;WO2006/127252.)。對(duì)這類促動(dòng)內(nèi)酯已在臨床試驗(yàn)中觀察到通常令人失望的結(jié)果，如EM-574(Satoh,M.;Sakai,T.;Sano,I.等,/.尸/a畫co/.五平J7^.1994,271,574-579;Choi，M.G.;Camilleri,M.;Burton,D.D.;Johnson,S.;Edmonds,A.J.尸/zarw"co/.Ex/.77zer.1998,285,37-40)、ABT-229(阿蘭西那(alemcmal),Talley,N.J.;Verlinden,M.;Snape,W.等爿/麗e"A尸/wmaco/.77zw.2000,14,1653-1661;Talley,N.J.;Verlinden,M.;Gee腿,DJ.等2001,49,395-401;Chen,C丄.;Orr,W.C.;Verlinden,M.H.等j/we;^.尸/2"rm"co/.T7zer.2002,16,749-757;Netzer,P.;Schmitt,B.;Inauen,W.屈膨wf.尸/2"wzaco/.TTzer.2002,16,1481-1490)和GM-611(米坦西諾(mitemcmal),Peeters,T丄.Cwr.(9pk/"ve《"g.ZVwg乂2001,2,555-557;Koga,H.;Takanashi,H.;Itoh，Z.;Omura，S.jDrwgso/Fw/we2002,27,255-272;Takanashi,H.;Yogo,K.;Ozaki,K.;Koga,H.;Itoh,Z.;Omum,S.尸/w/7waco/ogy2007,79,137-148;Ozaki,K.I.;Yogo,K.;Sudo,H.;Onoma,M.;Kamei,K.;Akima,M.;Koga,H.;Itoh,Z.;Omura，S.;Takanashi,H.尸/7arwaco/ogy2007,79,223-235;Ozaki,K.;Sudo,H.;M腦matsu,H.;Yogo,K.;Kamei,K.;Koga,H.;Itoh,Z.;Omura,S.;Takanashi,H./w^awwc^/zarmaco/ogy2007,15,36-42;McCallum,R.W.;Cynshi,O.j/zmewf.尸/za/7waco/.r/zer2007，26，107-116),主要因?yàn)槔缟锢枚炔睢⒒瘜W(xué)不穩(wěn)定和快速耐受性等問(wèn)題。(Thielemans,L.;Depoortere,I.;Perret,J.等丄/V^rwaco/.Ex/.7%er.2005,313,1397-1405;Mitselos,A.;Depoortere,I.;Peeters，T丄.5謡/z置尸/zwwaco/.2007,73,115-124.)。盡管如此，由于這類藥劑的治療潛力，對(duì)這類中促胃動(dòng)素激動(dòng)劑的尋找仍在繼續(xù)，且最近已描述了KOS-2187(Carreras,C.W.;Liu,Y.;Chen,Y.等GaWrae/^eTO/ogy2005,128，A464;Carreras,C.W.;Burlingame,M.;Carney,J.等Ca"./.G"Wn9ewten9/.2005,19,15)并顯示避開了許多這些問(wèn)題。還已構(gòu)想了可用于分析這些類型分子治療效力的方法(美國(guó)專利號(hào)6,875,576;美國(guó)專利申請(qǐng)公開2002/192709;國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO02/64092)。類似地，已報(bào)道了非肽、非促動(dòng)內(nèi)酯促胃動(dòng)素激動(dòng)劑(美國(guó)專利號(hào)7,262,195;美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/152732;2005/065156;國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO02/137127;WO02/92592;WO2005/027908;WO2005/027637;日本專利摘要公開號(hào)09249620)。其中，BMS-591348已被描述為具有避免困擾此前許多促胃.動(dòng)素激動(dòng)劑研究中的快速耐受性問(wèn)題的藥理學(xué)特征(profile)。(Li,J.J.;Chao,H.G.;Wang,H.等,/.TUfeJ.C/z纖2004,47,1704-1708;Lammn,V.;Rich,A.;Ma,Z.;Li,J.Seethala,R.;Gordon,D.;Dubaqme,Y.A/o/.尸/^w^co/.2006,69,109-118.)另一方面，促胃動(dòng)素受體的拮抗劑潛在地可用于治療性治療高胃動(dòng)素血癥和/或胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)度相關(guān)疾病，包括腹瀉、癌癥治療相關(guān)的腹瀉、癌癥引起的腹瀉、化療引起的腹瀉、放射性小腸炎、放射引起的腹瀉、應(yīng)激引起的腹瀉、慢性腹瀉、AEDS-相關(guān)的腹瀉、艱難梭菌相關(guān)的腹瀉、旅行腹瀉、移植物抗宿主病(graphversushostdisease)引起的腹瀉、其它類型腹瀉、消化不良、腸易激綜合征、功能性胃腸病癥、化療引起的惡心和嘔吐(嘔吐)和手術(shù)后惡心和嘔吐。目前對(duì)這些疾患的治療在^午多病例中無(wú)效。洛哌丁胺是一種阿片樣激動(dòng)劑，可用于輕微腹瀉，在高百分比的患者中不起作用。奧曲肽是一種生長(zhǎng)激素抑制素激動(dòng)劑，標(biāo)注外(off-label)地用作腹瀉治療，但注射使用相對(duì)昂貴，而且在許多情況也無(wú)效。另外還觀察到患有急性腹瀉(Besterman,H.S.;Chnstofides,N.D.;Welsby,P.D.等Gw1983,24,665-67l)和旅行腹瀉(Besterman,H.S.;Cook,G.C.;Sarson,D丄.等份.丄1979,17,1252-1255)的患者的促胃動(dòng)素水平升高。腹瀉是癌癥患者經(jīng)受的由手術(shù)、骨髓移植、化療和放療造成的常見和嚴(yán)重的副作用。(Stern,J.;Ippoliti,C.Sem.(9"co/.2003,19,11-16;Benson,A.B.,III;Ajam,J.A.;Catalano,R.B.等丄C/w.<9腳/.2004,22,2918-2926;O'Brien,B.E.;Kaklamam,V.G.;Benson,A.B.IIIC/z".Co/wecto/Qmc.2005,4,375-381.)。一些化療方案，尤其是包括氟嘧咬和伊立替康的化療方案，造成化療引起的腹瀉(CID)比例高達(dá)50-80%。(Arbuckle,R.B.;Huber,S丄.；Zacker，C.T7ze0腳/ogzW2000,5,250-259;Saltz,L.B.J.(9co/.2003,1,35-46;Goldberg-Arnold,R.J.;Gabrail,N.;Raut,M.;Kim,R.;Sung,J.C.Y.;Zhou,Y.丄Sw;pon1.(9wco/.2005,3,227-232;Sharma,R.;Tobm，P.;Clarke,S.J.丄騰"O腳Z.2005，6,93-102;Gibson,R丄；Keefe,D.M.K.Sz^poW.C"廠eCa"cer2006,14,890-900.)。CID的介入包括發(fā)病率和死亡率的增加。這呈現(xiàn)出顯著問(wèn)題，因?yàn)樵?001年美國(guó)有超過(guò)140萬(wàn)人經(jīng)受癌癥化療。對(duì)所有治療階l殳的癌癥患者的大量混雜研究表示腹瀉的患病率為14%。(M.D.AndersonSymptomInventory(癥4夫i羊細(xì)目錄)，Cawcw2000,89(7),1634-1646)。然而對(duì)某些類型的癌癥，發(fā)生率更高。例如對(duì)于結(jié)腸直腸癌癥，超過(guò)半數(shù)的患者經(jīng)受嚴(yán)重級(jí)別(3級(jí))或更高級(jí)別的腹瀉。由設(shè)計(jì)為阻撓腫瘤細(xì)胞快速生長(zhǎng)的藥物導(dǎo)致的腸中組織損傷造成，該藥物還影響腸壁內(nèi)層的細(xì)胞。對(duì)這種損傷和相關(guān)的腹瀉沒(méi)有有效的治療。總之，10-20%的患者經(jīng)歷CID,而對(duì)一些化療劑發(fā)生率可高達(dá)90%。在大約20%的患者中，不良效應(yīng)如此嚴(yán)重以致需要停止治療方案或減少治療方案并經(jīng)常需要住院。此外，由于患者不能正常地獲取營(yíng)養(yǎng)，通常必須采取胃腸外給養(yǎng)。因此，這對(duì)化療效力有影響。事實(shí)上，結(jié)腸直腸癌癥臨床試驗(yàn)的綜述揭示了更高死亡率，主要由于胃腸毒性。(Rothenberg,M.L.;Meropol,N.J.;Poplin,E.A.;VanCutsem,E.;Wadler,S.丄2001，19,3801-3807.)。目前的藥理學(xué)治療僅對(duì)一些患者起作用，對(duì)更嚴(yán)重級(jí)別的腹瀉效果要差得多。(MacNaughton,W.K.J/騰W.尸/zor層co/.T7zer2000,14,523-528)。急性放射性小腸炎(ARE)或放射引起的腸功能障礙發(fā)生于75%的經(jīng)受放療的患者，通常在治療的第2周或第3周發(fā)生。其特征為腹部絞痛和腹瀉，是一種嚴(yán)重和令人恐懼的副作用，造成總治療時(shí)間增加和生活質(zhì)量降低，甚至可導(dǎo)致死亡。對(duì)5-15%的患者，該疾患是慢性的。除了不舒服，這種副作用還通過(guò)增加總治療時(shí)間而降^氐》文療的治療益處。(MacNaughton,W.K.尸/zw層co/.77^.2000,14,523-528;Nguyen，N.P.;Antome,J.E.;Dutta,S.;Karlsson,U.;Sallah,S.2002,95,1151-1163;Gwede,CK.&附.7V畫"g2003,19,6-10.)。事實(shí)上，慢性腹瀉可作為多種醫(yī)學(xué)疾患的結(jié)果而產(chǎn)生。(Schiller,L.R.Cw/r.7Vea厶(9p/7.o朋G"欣oe/i/^ra/.2005,8,259-266;Spiller,R.Wewrago^oe"^ro/.A/o"7.2006,18,1045-1055.)。例如，慢性腹瀉是人類免疫缺陷病毒感染患者尤其是晚期疾病患者的常見問(wèn)題。這是一種發(fā)生于60-90%的AIDS患者的使人虛弱的副作用。(Cohen，J.;West，A.B.;Bim,E.J.GaW固"ra/.C7/.A^rAj亂2001，30，637-664;Oldfield,E.C.,m細(xì).G她固,era/.Dz.鮮c/.2002,2,176-88;Sestak,K.;C群.歷K2005,3,199-205;Thom,K.;Forrest,G.Cwr.(9/z>2.Gastroe/7fen9/.2006,22,18-23.)。此外，已知心理學(xué)因素如緊張會(huì)不利地影響GI道正常功能中起作用。(North,C.S.;Alpers,D.H.;Thompson,S.J.;Spitznagd,E丄.DkSc/1996,41,633-640;Kamm,M.A.￡wr/Swg,Sw///.1998,583,37-40;Botha,C;Libby,G.Sr.//as/.MeJ.fZwc/.)2006,67,344-349.)。旅行腹瀉影響去一些目的地(尤其是熱帶)的超過(guò)50%的旅行者，估計(jì)每年折磨超過(guò)1100萬(wàn)人。除了破壞商務(wù)、旅行和度假安排之外，這種疾患通常伴有其它臨床現(xiàn)象如惡心、嘔吐、腹痛、便急(fecalurgency),血便和發(fā)燒。(Lima,A.A.M.Cw/r.".ZX、2001,14,547-552;Al-Abri,S.S.;Beechmg,N.J.;Nye,F丄丄朋ce〃w/e"./)"、2005,5,349-360;DuPont,H.L.GaW麼她ra/.油rt/2j附.2006,35，337-353.)。艱難梭菌(C/ostrWwwAj^cz7e)是造成約三分之一抗生素相關(guān)的腹瀉病例的病原，估計(jì)每年在美國(guó)造成$10億的損失?？股叵嚓P(guān)的腹瀉在住院環(huán)境更常見，達(dá)29%的患者發(fā)展該疾患，導(dǎo)致逗留時(shí)間更長(zhǎng)、護(hù)理費(fèi)用增加和死亡率增加。(Bartlett,J.G.ME"g/.Mec/.2002,346,334-339;Kelly，C.P.;Pothoulakis,C;LaMont,J.T.</.1994,330,257-262;Kyne,L.;Farrell，R.J.;Kelly,CP.GaWraewtero/.C/w.爿m.2001,30,753-777;Malnick,S.D.H.;Zimhony,O.^肌尸/^層c癡廣200236,1767-1775;Hull,M.W.;Beck,P丄.Ow.尸/zjav.2004，50,1536-1540;Schroeder,M.S.爿附.尸/z，.2005，71,921-928;Voth,D.E.;Ballard,J.D.Mcra^o/,Aev.2005,18,247-263.)。對(duì)虛弱的老年患者，這是一種死亡率高達(dá)25%的嚴(yán)重疾患。近來(lái)，艱難梭菌相關(guān)的腹瀉(CADD)的發(fā)生率和嚴(yán)重度開始顯著增加。(Frost.F.;Craun,G.F.;Calderon,R丄./"/e".Dm.1998,4,619-625;Olfield，E.C.Wev.G(X57yoe她ra/.D^oni.2006,6,79-96.)。腹瀉也在患有移植物抗宿主病(GVHD)的患者中引起。GVHD是外源造血干細(xì)胞移植的一種常見的可能威脅生命的并發(fā)癥。胃腸GVHD通常涉及結(jié)腸并使得這些患有嚴(yán)重疾病的患者的處理更復(fù)雜。(Flowers,M.E.;Ka謂，E.;Sullivan,K.M.i/e謹(jǐn)fo/(9腳/C/zwWoW/zZm.1999,13，1091-1112;Ross,W.A.;Counel,D.Q#r.(9—.G"Wr,/.2005,21,64-69.)。此外，腹瀉是進(jìn)行其它類型移植后的常見副作用，發(fā)生率從10%至43%。腹瀉還是免疫抑制療法的常見副作用。(Gmsburg,P.M.;Thuluvath,P丄丄h^r7>"似7/.2005,11,881-890.)。腸易激綜合征(IBS)是最常見的功能性GI病癥，估計(jì)全世界患病率為10-15%。(Saito，Y.A.;Schoenfeld,P.;Locke,G.R.爿m.丄GaW簡(jiǎn)wfera/.2002,97,1910-1915;Gilkm,R.J.,Jr.C/w.TT^r.2005,27，1696-1709;Lacy:B.E.;DeLee,R.丄C/z力.G"欲,&ra/.2005,39,S230-S242;Talley,N.J.她m.她t/.丄2006,36,724-728;Ohman，L.;S麗en,M.Dzg.丄z群Z)w.2007,39,201-215.)。每年可歸于IBS的費(fèi)用估計(jì)為300億美元，包括100億美元的看病和處方藥的直接費(fèi)用和誤工的大量費(fèi)用。(Talley,N丄；Gabriel,S.E.;Harmsen,W.S.等GaWrae""ro/ogy1995,109，1736-1741;Maxion-Bergemann,S.;Thielecke,F.;Abel,F.;Bergemann,R.尸/2am^c0ec0"0脂a2006,24,21-37.)。IBS患者,皮再分類為主要-腹瀉(IBS-d)、主要-便秘(IBS-c)或在這兩種類型中交替的(IBS-m)。對(duì)這些各種亞組的治療通常必須以不同和特定的療法進(jìn)行。未能證明解痙藥(Antispasmodics)、三環(huán)抗抑郁藥、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、輕瀉藥、止瀉藥和膨脹劑(bulkmgagent)廣泛有效，并且它們傾向于治療癥狀而非治療潛在的病理生理學(xué)。(Schoenfeld，P.G齡固^。/.C/w.A^rt/z爿附.2005,34,319-335;Cremonmi,F.;Talley,N.J.Ato1.C7z力.尸ra".GWraewfero/.//e戸to/.2005,2,82-88;Andersen,V.;Camilleri,M.Z)rwg《2006,66,1073-1088.)。IBS患者的促胃動(dòng)素血漿水平已顯示升高。(SimrenM.;Bjornsson,E.S.;Abrahamsson,H.A^wrag"欲oe威n9/.Mo"/.2005,17,51-57.)。因此促胃動(dòng)素拮抗劑對(duì)IBS患者會(huì)是有用的治療藥物。它們可能更適合IBS-d,在較低程度上適合IBS-m。IBS-d表現(xiàn)為便急和頻繁的排便(每天>3次)?；加蠭BS-d的患者占整個(gè)IBS患者群體的約三分之一。消化不良是另一種極常見的GI病癥，特征為慢性或復(fù)發(fā)的上GI痛苦，沒(méi)有明顯的生理原因(Tack,J.;Bisschops,R.;Sarndli,G.Ga欣歸,，/ogy2004,127,1239-1255;Kleibeuker,J.H.;Thijs,J.C.C釘.(9戸.Ga自e她TO/.2004,20,546-550;Talley,N丄；Vakil,N.等加.，/G"W麼她TO/.2005，100，2324-2337;Talley,N丄；Vakil,N.;Moayyedi,P.Ga/y固&TO/ogy2005,129,1756-1780;Smith,M丄.丄證Z^.2005,37,547-558;Saad,R.J.;Chey,W.D.j/wie/^.尸/^rmaco/.772e廣2006,24,475-492;S腿ki，H.;Nishizawa,T.;Hibi,T.,/.GaWr固化TO/.2006,41,513-523.;Mahadeva,S.;Goh,K丄.『wW丄Ga欲畫"ra/.2006,12,2661-2666;MonkemullerK,MalfertheinerP.PFo/7(i丄GaWroewfero/.2006,12,2694-2700;Mizuta，Y.;Shikuwa,S.;Isomoto,H.;Mishima,R.;Akazawa,Y.;Masuda,J.;Omagari,K.;Takeshima,F.;Kohno，S.丄2006,41,1025-1040;Chua,A.S.J^or/J丄Gtw^oew化尸o/.2006,12,2656-2659.)。典型的癥狀包括胃潴留(gastricfullness)、肺脹、痛、惡心和嘔吐。在西方國(guó)家該疾病的患病率高達(dá)每年20%。它占所有去初級(jí)護(hù)理內(nèi)科醫(yī)生就"^的5%,占所有去GI專家就i貪的30%。與IBS一樣，患者群體可根據(jù)癥狀分類為各亞組。(Choung,R.S.;Locke,G.R.III;Schleck,C.D.;Zinsmetister,A.R.;Talley,N.J.爿w.G(Xst廠oew^n9/.2007,102,1983-1989.)。然而，最大的患者亞組(達(dá)60%)患有消化不良而沒(méi)有已知的器官原因，或稱為"功能性消化不良(FD)"。FD對(duì)生活質(zhì)量和健康護(hù)理資源有主要影響。與IBS類似，目前不存在治療FD的廣泛接受的療法。(Stanghellmi,V.;DePonti,F.;DeGiorgio,R.等Z)r，2003,63,869-892;Cremonmi,F.;Delgado-Aros,S.;Talley,N.J.BeW尸ra".C/w.G她固fero/.2004,18,717-733;McNally,M.A.;Talley,N.J.Cwr.7VeW附e"/1(9/^.GaWraewfera/.2007,10,157-168.)。在消化不良患者還觀察到循環(huán)血漿促胃動(dòng)素水平升高。(Kusano,M.;Sekiguchi,T.;Kawamura,〇.；Kikuchi,K.;Miyazaki,M.;Tsunoda，T.;Horikoshi，T.;Mori,M.爿肌丄to加e她TO/.1997,92,481-484;Kamerling,I.M.;VanHaarst,A.D.;Burggraaf,J.;Schoemaker,R.C.;Biemond,I.;Heinzerling,H.;Jones,R.;Cohen,A.F.;Masclee,A.A.爿m./■尸/zjas7'o/.Gos"/roz'"/e5t.丄z'ver尸/zjas7》/.2003,284，G776-G781.)。與IBS—樣，促胃動(dòng)素拮抗劑會(huì)減輕促胃動(dòng)素在這類患者的效應(yīng)?；熞鸬膼盒暮蛧I吐(CINV)或嘔吐是癌癥治療造成的最嚴(yán)重不良效應(yīng)之一，通常^t引證為是患者最害怕的副作用。接受癌癥化療的患者的70-80%經(jīng)受CINV。除了顯著惡化生活質(zhì)量，該疾患通常還需要修改或推遲化療方案，伴隨對(duì)治療效力的負(fù)面影響。盡管近來(lái)減輕CINV影響的新方法的開發(fā)和有效性有進(jìn)展，但對(duì)于目前治療不足夠的患者仍迫切需要替代策略。(Lindley,C.M.;H認(rèn)h，J.D.;O'Neill,C.V.;Transau,M.D.;Gilbert,C.S.;Osterhaus,J.T.Q認(rèn)/.Lz/e1992，1,331-340;Martm,M.(9腳/ogy1996，53,26-31;Kovac,A丄./>wgSa/,2003,26,227-259;Grunberg,S.M./5"，orA(9腳/.2004,2,1-12;Jordan,K.;Kasper,C.;Schmoll,H,J.￡",/.Omc.2005,41，199-205;Herrstedt,J.;Dombernowsky,P.S(XS7'cC7z力./Vwrwaco/.rcazco/.2007,101,143-150.》手術(shù)后惡心和嘔吐(PONV)是手術(shù)的常見并發(fā)癥，發(fā)生于30-50%的患者。PONV可導(dǎo)致非計(jì)劃的或延長(zhǎng)的住院、電解質(zhì)異常和手術(shù)縫合線繃緊、以及對(duì)生活質(zhì)量的顯著的負(fù)面影響。因此它增加健康護(hù)理費(fèi)用并降低患者滿意度。在醫(yī)療團(tuán)體中已充分認(rèn)識(shí)到處理PONV的重要性并需要有效治療。(Osoba,D.;Zee,B.;Warr,D.等S甲;or/1,Q/reOwcer1997，5,303-313;Kovac,A丄.Drugs2000,59，213-243;Gan,T丄，/.爿附.爿woc,2002,287,1233-1236;Tramer,MR.C/肌JaeW/2ewo/.2004,18,693-701;Habib,A.S.;Gan,T丄丄爿"eW/.2004,51,326-341;Golembiewski,J.;Chernm,E.;Chopra,T.爿附.i^a/A-5yw.2005,62,1247-1260.)。除了其對(duì)運(yùn)動(dòng)性的作用，促胃動(dòng)素還牽涉在誘導(dǎo)胃腸道內(nèi)的分泌中。促胃動(dòng)素在犬的胃和胰臟分泌中起作用。(Konturek，S丄；Dembmski,A.;Krol,R.;Wunsch,E.Sc朋t/.丄G"欣oe威ra/.1976,11,57-61;Magee,D.F.;Naruse，S.丄尸/2，w/.1984,355,441-447;Lee,K丄.；Shiratori，K.;Chen,Y.F.;Chang，T,M.;Chey，W.Y.j附.J.尸/z，io/.1986,14,G759-764.)。類似地，在人類中腸的促分泌素活性已對(duì)[Nle"]-促胃動(dòng)素作了描述。(Kachel,G.W.;Frase，L丄.；Domschke，W.;Chey,W.Y.;Krejs,G.J.G"Wraew&ra/ogy1984,87,550-556.)。因此促胃動(dòng)素受體拮抗劑可表現(xiàn)抗分泌效應(yīng)并作為止瀉劑起作用。已證明抗分泌劑是有效的抗腹瀉治療劑。(Farthing,M.J.G.￡bc/.(9/z>./"ve"Z>wgs2004,13,777-785;Farthmg,M丄G.Z)zg.2006，24,47-58.)。這種既作為抗-運(yùn)動(dòng)性又作為抗-分泌劑的雙重作用使得促胃動(dòng)素拮抗劑成為治療腹瀉疾患的更有效治療劑。除了治療特征為運(yùn)動(dòng)過(guò)度的病癥，使用促胃動(dòng)素拮抗劑還可用于治療特征為胃吸收和腸吸收差的疾病和病癥。促胃動(dòng)素拮抗劑將減慢胃腸蠕動(dòng)，乂人而允許GI4妻觸時(shí)間更長(zhǎng)，以吸收必需的營(yíng)養(yǎng)。這類疾病和病癥包括乳糜瀉，這是一種折磨幾乎1%人群的慢性病癥。乳糜瀉是一種特征為炎癥的GI病癥，導(dǎo)致小腸粘膜內(nèi)層的損傷。當(dāng)含谷蛋白食物中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)——麩蛋白被遺傳敏感的個(gè)體攝取時(shí)造成炎癥。粘膜損害和隨后的營(yíng)養(yǎng)吸收不良可導(dǎo)致多種并發(fā)癥。(Alaedim,A.;Green,P.H.R.j肌她/7.2005,142,289-298;Konmg,F.Ga欲固"油gy2005,129,1294-1301;Chand,N.;Mihas,A.A.丄C/w.Go^ow化ra/.2006,40,3陽(yáng)14;Westerberg,D.P.;Gill,J.M.;Dave，B.等丄爿w.0^eop"仇2006,106,145-151;Jones,R.B.;Robms,G.G.;Howdle,P.D.Cw/r.G"*，/.2006,22,117-123;Green,P.H.R.;Jabri,B.^肌Wev.Met/.2006,57,207-221;Hill,I.D.Cw;r.7'簡(jiǎn)/.一/騰Ga欲固/era/.2006,9,399-408.)。目前唯一的治療是改變成無(wú)谷蛋白的々大食。短腸綜合征是一種切除小腸相當(dāng)部分后發(fā)生的醫(yī)學(xué)疾患，特征為營(yíng)養(yǎng)不良。(Misiakos,E.P.;Macheras,A.;Kapetanakis,T.;Liakakos,T.J.C7/w.Ga份oe她ro/.2007,41,5-18.;Buchman,A.L.GaWraewfera/ogy.2006,130(Sw/^/./),S5-S15;Jackson,C;Buchman,A丄.Cw".Gas/yoew/^ro/.We/.2005,7,373-378;Scolapio,J.S.(9/z.Ga欲oe她TO/.2004,20,143-145;Buchman,A丄.；Scolapio,J.;Fryer,J.GaWroewfera/ogy2003,124,1111-1134;Westergaard,H.51，.GWroz力/^.Dw.2002,13，210-220.)。該綜合征對(duì)兒童尤其令人痛苦，死亡率和發(fā)病率者卩^艮高。(Vanderhoof,J.A.;Young,R.J.;Thompson,J.S.尸e(^'"/n.cDrwgs2003,5,625-631;Vanderhoof,J.A.G赫固&ra/.淑n.2004,39,5768-5771;Sukhotmk,I.;Comn,A.G.等尸et/^化Swrg./脫2005,21,947-953.)。對(duì)SBS目前沒(méi)有批準(zhǔn)的藥理學(xué)藥劑，其通常經(jīng)由腸適應(yīng)或復(fù)原治療以改善SBS患者的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)。(DiBaise,J.K.;Young,R.J.;Vanderhoof,J.A.j附.丄GaWraem^o/.2004,99，1823-1832.)。此外，通過(guò)使用促胃動(dòng)素拮抗劑來(lái)改善營(yíng)養(yǎng)吸收的能力可用于治療惡病質(zhì)，惡病質(zhì)是一種在嚴(yán)重疾病如癌癥、AIDS、f曼性心力衰竭和其它心血管病、腎病中以及在老年人中常見的消庫(kù)毛性病癥。癌癥惡病質(zhì)是一種治療疾患，特征為體重減輕和肌肉消耗，折磨著所有癌癥患者的大約50%,是超過(guò)20%患者死亡的主要原因。此外，該疾患已顯示為造成死亡的強(qiáng)的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。(Kern,K.A.;Norton,J.A.,/尸五7V1980,12,286-298;Tisdale,M丄《/AA"".Omcw/"W.1997,89，1763-1773;Gagnon,B.;Bmera，E.i>，1998,55,675-688;I讓，A.C4C"匿"C/w.2002,52,72-91.)。類似地，患有慢性心力衰竭的患者有患上類似消耗性綜合;f正的嚴(yán)重風(fēng)P全。(Springer，J.;Filippatos,G.;Akashi,Y.J.;Anker,S.D.Cwr.O戶.C"幽/.2006,21,229-233;Akashi,Y.J.;Sprmger，J.;Anker,S.D.C鮮.腸rtFa,/.鄉(xiāng).2005,2,198-203;Anker,S.D.;Steinborn,W.;Stmssburg,S.^肌2004,36，518-529.)。該疾患還影響比例日益增加的老年人。(Morley,J.E.,Gera"to/ogy，Ser.A'Sw/.Sc.A/ec/.2003，58A,131-137.)。胃動(dòng)素還牽涉在GI系統(tǒng)的炎性病癥中。在炎性腸病(Besterman,H.S.;Mallinson,C.N.等&朋t/.J.G"Wroe",era/.1983,18,845-852)、潰瘍性結(jié)腸炎(Greenberg,G.R.;Buchan,A.M.;McLeod,R.S.;Preston,P.;Cohen,Z.1989,30,1721-1730)和慢性胰腺炎(Besterman,H.S.;Adrian,T.E.;Bloom,S.R.等D7ge加0"1982,24,195-208)患者中觀察到促胃動(dòng)素水平升高。此外在兔結(jié)腸炎才莫型中觀察到促胃動(dòng)素和mRNA表達(dá)增加。(Depoortere,I.;VanAssche,G.;Peeters，T.L.A^wrog(Xs/roe/^ero/.Mo"7.2001,13,55-63.)。還從腸切除(Besterman,H.S.;Adrian,T.E..;Mallmson,C.N.Gwt1982,23,854-861)和回腸造口術(shù)(Kennedy,H丄；Sarson,D丄.；Bloom,S.R.等/^geWo"1982,24,133-136)后的患者獲得血漿促胃動(dòng)素濃度增加。還顯示非膽固醇抗炎藥物可引起高胃動(dòng)素血癥(hypermolitmemia),擾亂消化間期的肌移動(dòng)復(fù)合波，并促使形成胃潰瘍。(Narita,T.;Okabe,N.;Hane,M.等,/.尸/z"rmaco/.T7zer2006,29,569-577.)。因此，促胃動(dòng)素拮抗劑可用作抗炎劑，尤其是用在GI道，相對(duì)于現(xiàn)有治療具有有益的特征。盡管促胃動(dòng)素拮抗劑提供了作為治療運(yùn)動(dòng)過(guò)度和吸收不良病癥新方法的潛力，對(duì)其的研究仍落后于針對(duì)激動(dòng)劑的研究。大量肽化合物已被描述為促胃動(dòng)素受體的拮抗劑[(ANQ-11125:Peeters，T丄.；Depoortere,I.;Macielag,M.J.;Marvin,M.S.;Florance,J.R.;Galdes,A.Bzoc/2置Swp/2>^.Coww.1994,198,411-416);(OHM隱11526:Farrugia,G.;Macielag,M.J.;Peeters,T.L.;Sarr,M.G.;Galdes,A.;Szurszewski,J.H.4m.丄尸—。/.1997,273,G404-G412;Depoortere,I.;Macielag,M.J.;Galdes,A.;Peeters,T丄.五w.,/.尸/^rw〃co/.1995,286,241-247);(MA-2029:Mitselos,A.;Depoortere,I.;Peeters,T.L.fizoc/ze附.尸/z"/tw"co/.2007,73,115-124);Poitras,P.;Miller,P.;Gagnon,D.;St-Pierre,S.Bwc/zew.6w//z^s.Comw.1994,205,449-454;美國(guó)專利號(hào)5,470，830;6,255,285;6,586,630;6,720,433;美國(guó)專利申請(qǐng)公開2003/176643;國(guó)際專利申請(qǐng)7>開WO99/09053;WO00/17231;WO00/44770;WO02/64623)。這些肽拮抗劑具有肽作為藥物分子的已知缺陷，尤其是差的口服生物利用度和降解代謝。肽衍生物的環(huán)化是可用于在代謝穩(wěn)定性和構(gòu)象自由兩方面改良線性肽的方法。環(huán)狀分子趨于對(duì)代謝酶更耐受。已報(bào)道了這種環(huán)狀肽促胃動(dòng)素拮抗劑，尤其是GM-109。(Takanashi,H.;Yogo，K.;Ozaki，M.;Akima,M.;Koga,H.;Nabata,H.././^";m772w.1995,273,624-628;Haramura,M.;Okamachi,A.;Tsuzuki,K.;Yogo,K.;Ikuta,M.;Kozono,T.;Takanashi,H.;M腦yama,E.O綴尸/z"簡(jiǎn).2001,49,40-43;Haramura,M.;Okamachi,A.;Tsuzuki,K.;Yogo,K.;Ikuta,M.;Kozono,T.;Takanashi,H.;Murayama,E.J.C/2e附.2002,45,670-675;美國(guó)專利號(hào)7,018,981;美國(guó)專利申請(qǐng)公開2003/191053;國(guó)際專利申請(qǐng)乂^開WO02/16404;日本專利摘要7>開號(hào)07138284)。大環(huán)模擬肽(peptidomimetics)此前已被描述為促胃動(dòng)素受體拮抗劑并已概述了它們用于治療多種GI病癥和調(diào)節(jié)肌移動(dòng)復(fù)合波的應(yīng)用。(國(guó)際專利申請(qǐng)公開WO2004/111077;美國(guó)專利申請(qǐng)/>開2005/054562;美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/938,655;美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/939,280;Marsault,E.;Hoveyda，H.R.;Peterson,M丄.；Saint-Louis,C;Landry,A.;Vezina,M.;Ouellet,L.;Wang,Z.;Ramaseshan,M.;Beaubien,S.;Benakli,K.;Beauchemin,S.;Deziel,R.;Peeters,T.;Fraser,G.L../Met/.C/zem.2006，49,7190-7197;Marsault,E.;Benakli,K.;Beaubem,S.;Saint-Loms,C;Deziel,R.;Fraser,G.AoorgMet/.Ze".2007,17，4187-4190.)。這些模擬肽大環(huán)促胃動(dòng)素拮抗劑不同于前述的環(huán)狀肽促胃動(dòng)素拮抗劑，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)這種含有D-氨基酸的肽衍生物無(wú)活性。相反，對(duì)于本發(fā)明的三肽才莫擬化合物，D-立體化學(xué)對(duì)三個(gè)構(gòu)建元件(buildmgelement)中的兩個(gè)有利。而且，分子的拴系物(tether)部分提供了非肽組成部分以及不同的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的模擬肽大環(huán)已被證實(shí)具有對(duì)促胃動(dòng)素受體的結(jié)合活性和功能活性。盡管結(jié)合能力和靶親合性是藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)中的因素，優(yōu)化藥代動(dòng)力學(xué)(PK)和藥效學(xué)(PD)參數(shù)對(duì)開發(fā)可行的藥劑也4艮重要。制藥工業(yè)中研究的焦點(diǎn)領(lǐng)域是更好地理解以這種方式確定分子適當(dāng)性的潛在因素，通常俗稱為其"類藥性(dmg-likeness)"。(Lipmski,C.A,;Lombardo,F.;Dominy,B.W.;Feeney,P.J.Jc/v./>wgZ)e/zVer_y1997,23,3-25;Muegge，I.她d紐細(xì).2003,23,302-321;Veber，D.F.;Johnson,S.R.;Cheng,H,Y.;Smith,B.R.;Ward,K.W.;Kopple,K.D.Met/.C/zem.2002,45,2615-2623.)。例如，分子量、logP、膜滲透性、氫4建供體和受體的數(shù)目、總極性表面積(TPSA)和可旋轉(zhuǎn)鍵的數(shù)目都與藥物開發(fā)中成功的化合物相關(guān)聯(lián)。此外，血漿蛋白結(jié)合的試-驗(yàn)測(cè)量值、與細(xì)力包色素P450酶的相互作用和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)被用于制藥工業(yè)以選擇和推進(jìn)新藥物候選者。然而，大環(huán)結(jié)構(gòu)類的這些參數(shù)還未被廣泛探究或報(bào)道。這對(duì)這類分子的藥物開發(fā)產(chǎn)生了巨大挑戰(zhàn)。已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的大環(huán)化合物具有期望的藥理學(xué)特性，同時(shí)保持對(duì)促胃動(dòng)素受體的足夠的結(jié)合親合性和選擇性，如實(shí)施例中所示。這些聯(lián)合的特性使得它們更適于被開發(fā)為藥劑。還已報(bào)道了性質(zhì)為非肽和非大環(huán)的其它促胃動(dòng)素拮抗劑。、口服生物利用度、足以方便配制的溶解度和體內(nèi)效力。相反，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的大環(huán)促胃動(dòng)素拮抗劑具備至少一些(如果不是所有)上述有利特性。發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有改進(jìn)的藥理學(xué)特征的新型構(gòu)象-界定的大環(huán)化合物。這些化合物可作為促胃動(dòng)素受體的拮抗劑起作用。根據(jù)本發(fā)明各方面，本發(fā)明涉及下式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>其中(L5)和(L6)分別表示結(jié)合式I的L5和U的鍵;Ar選自以下基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>&選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、R5和R6獨(dú)立地選自氬、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氫、低級(jí)烴基、羥基和氨基；Rioa和Riob獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；X!、X2、X6、X7、Xs和X9獨(dú)立地選自氫、鹵素、三氟甲基和低級(jí)烴基；X3、X4和X5獨(dú)立地選自氫、羥基、烴氧基、卣素、三氟甲基和低級(jí)烴基；L2、L3和U獨(dú)立地選自CH和N;前才是是環(huán)中氮的總數(shù)必須是0、1、2或3;Ls和L6獨(dú)立地選自O(shè)、CR8aR8b和NR9組成的組；其中118￡1和11813獨(dú)立地選自氬和低級(jí)烴基；且R9選自氳、低級(jí)烴基、曱?；?、酰基和磺?；?。在本發(fā)明的特定方面式I的Ar選自基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>在本發(fā)明另一方面，式I的R!選自曱基、乙基、異丙基和環(huán)丙基。在本發(fā)明另一些方面，式I的R2選自(CH2)mCH3、(CH2)nlR、CH2N3、(CH2)n2NR12R13、(CH2)n3C(=NR14)NR15R16、(CH2)n4NR17C(=NR18)NR19R20和(CH2)n5NHQ^O)NR^R22,其中m是0、1、2或3;nl、n2、n3、n4和n5獨(dú)立i也為1、2、3或4;Rn、R13、R16、R17、R20、1121和1122獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烴基；R12、Ri5和Rw獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基、羧烴基、羧芳基和磺?；?；1114和1118獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基、羧烴基、羧芳基、磺?；颓杌?。在本發(fā)明其它方面，式I的R2選自以下基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage67</formula>其中M選自CH2、O、NH和NCH3。在本發(fā)明另一方面，式I的L^L2、L3和U各為CH，Ls為O,且U為CH2。在本發(fā)明其它方面，式I的R3、R4、Rs和R6各為氫；或R3為曱基且R4、Rs和R6各為氫；或R3為羥基甲基且R4、尺5和116各為氳；或R3、R4和R6各為氫且R5為甲基；或R3和R5各為曱基且R4和R6各為氳。在本發(fā)明另一方面，式I的Y選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage67</formula>其中(L5)和(U)分別表示結(jié)合L5和L6的鍵。在另一方面，本發(fā)明涉及下式II的化合物:其中R25選自氳、烴基、芳基、環(huán)烴基、雜環(huán)和雜芳基；R26選自氫、烴基、芳基、?；Ⅳ葻N基、羧芳基、磺?；陀糜诎被岬臉?biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)；1127選自氫和烴基；且R28選自以下基團(tuán):其中M選自CH2、O、NH和NCHs。在其它方面，本發(fā)明涉及下式III的化合物:其中Xu)和Xu獨(dú)立地選自氪、卣素、三氟曱基和低級(jí)烴基；R40、R41、R42和R43獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R44選自氫、烴基、酰基、羧烴基、羧芳基、磺?；陀糜诎饭倌軋F(tuán)的保護(hù)基團(tuán)；R45選自氬和烴基；R46選自氳、烴基、?；?、磺?；陀糜诹u基官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)；Lu、L12、L^和;U4獨(dú)立地選自CH和N;前提是環(huán)中氮的總凄丈必須是0、1、2或3;Li5和L^獨(dú)立地選自O(shè)、CR47R48和NR49;其中1147和1148獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烴基；且R49選自氫、低級(jí)烴基、曱酰基、酰基和磺?；?。在本發(fā)明另一方面中，式III的化合物可用于提供式I的化合物。式III的化合物還可用于提供包括構(gòu)件結(jié)構(gòu)(buildmgblockstructure)如氨基酸構(gòu)件結(jié)構(gòu)和式in化合物的大環(huán)化合物。療本文所述病癥的藥物的化合物的方法。本發(fā)明的前述方面和其它方面在以下陳述的說(shuō)明書中更詳細(xì)解釋。圖1顯示本發(fā)明的代表性氨基酸構(gòu)件(bmldmgblock)的合成路線。圖2顯示本發(fā)明的另一種代表性氨基酸構(gòu)件的合成路線。圖3顯示本發(fā)明的代表性構(gòu)件的合成路線。圖4顯示本發(fā)明的另一種代表性構(gòu)件的合成路線。圖5顯示本發(fā)明的代表性拴系物構(gòu)件的合成路線。圖6顯示本發(fā)明的另一種代表性拴系物構(gòu)件的合成路線。圖7顯示固相合成本發(fā)明大環(huán)化合物的一般路線。圖8顯示液相合成本發(fā)明大環(huán)化合物的一般路線。圖9顯示本發(fā)明的代表性化合物的合成路線。圖IO顯示本發(fā)明的另一種代表性化合物的合成路線。圖11顯示本發(fā)明的另一種代表性氨基酸構(gòu)件的合成路線。圖12顯示本發(fā)明的代表性化合物的合成路線。圖13呈現(xiàn)描繪本發(fā)明示例性化合物藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的圖，具體為靜脈施用2.0mg/kg化合物502與環(huán)糊津奮后(圖A),皮下注射2.0mg/kg化合物502無(wú)環(huán)糊精后(圖B),靜脈施用1.9mg/kg化合物552與環(huán)糊精后(圖C),皮下施用2.0mg/kg化合物552無(wú)環(huán)糊精后(圖D)，口服施用8.0mg/kg化合物552與環(huán)糊精后(圖E)，靜脈施用2.0mg/kg化合物563與環(huán)糊精后(圖F)，口服施用7.7mg/kg化合物563與環(huán)糊精后(圖G)。圖14顯示本發(fā)明的代表性拴系物構(gòu)件的合成路線。圖15顯示本發(fā)明的另一種代表性拴系物構(gòu)件的合成路線。圖16顯示本發(fā)明的另一種代表性拴系物構(gòu)件的合成路線。圖17顯示本發(fā)明的代表性化合物的合成路線。圖18呈現(xiàn)描繪本發(fā)明代表性化合物對(duì)促胃動(dòng)素-引起的齣歸(shrew)結(jié)腸中收縮(圖A)和[Nle"]-促胃動(dòng)素-引起的駒歸結(jié)腸中收縮(圖B)的作用的圖。的作用的圖。發(fā)明詳述本發(fā)明的前述方面和其它方面將根據(jù)本文所述其它實(shí)施方式而更詳細(xì)描述。應(yīng)理解本發(fā)明可以不同形式實(shí)現(xiàn)，不應(yīng)該認(rèn)為局限于本文所列實(shí)施方式。更確切地，提供這些實(shí)施方式以使本公開徹底和完整，并向本領(lǐng)域技術(shù)人員全面?zhèn)鬟_(dá)本發(fā)明的范圍。本文在本發(fā)明的描述中所用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述特定實(shí)施方式，不意味著限制本發(fā)明。本發(fā)明的描述和所附權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式"一(a)"、"一(an)"和"一(the)"意為包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文清楚地另外指出。此外，本文所用的術(shù)語(yǔ)"和/或"包括相關(guān)列出條目的一種或多種的任意和所有聯(lián)合，并可縮寫為7"。除非另外限定，本文使用的所有技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有的含義與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
普通技術(shù)人員所通常理解的含義相同。本文引述的所有出版物、美國(guó)專利申請(qǐng)、美國(guó)專利和其它參考文件以引用的方式完整地并入本文。術(shù)語(yǔ)"烴基"指具有1至20碳原子的直鏈或支鏈的飽和或部分不飽和碳?xì)杌衔锘鶊F(tuán)，在一些情況具有1至8碳原子。術(shù)語(yǔ)"低級(jí)烴基"指包含1至6碳原子的烴基基團(tuán)。烴基基團(tuán)的例子包括但不限于甲基、乙基、異丙基、叔丁基、3-己烯基和2-丁炔基。"不飽和"指存在l、2或3個(gè)雙鍵或三鍵，或兩者的聯(lián)合。這種烴基基團(tuán)還可如下所述地任選地;波取代。當(dāng)下標(biāo)用在本文界定的烴基或其它碳?xì)浠衔锘鶊F(tuán)時(shí)，下標(biāo)指該基團(tuán)包含的碳原子數(shù)目。例如C2-C4烴基指具有2、3或4碳原子的烴基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)"環(huán)烴基"指環(huán)中具有3至15^灰原子的飽和或部分不々包和的環(huán)狀碳?xì)浠衔锘鶊F(tuán)，在一些情況具有3至7碳原子，并指包含所述環(huán)狀碳?xì)寤衔锘鶊F(tuán)的烴基基團(tuán)。環(huán)烴基基團(tuán)的例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、2-(環(huán)己基)乙基、環(huán)庚基和環(huán)己烯基。本文界定的環(huán)烴基還包括具有多個(gè)碳環(huán)的基團(tuán)，每個(gè)碳環(huán)可為飽和或部分不飽和的，例如十氫萘基(decalinyl)、[2.2.l]-二環(huán)庚基或金剛烷基。所有這種環(huán)烴基基團(tuán)還可如下所述地任選被取代。術(shù)語(yǔ)"芳族"指具有包含4n+2電子的共軛的兀電子系統(tǒng)的不飽和的環(huán)狀碳?xì)杌衔锘鶊F(tuán)，其中n是大于或等于1的整數(shù)。芳族分子通常是穩(wěn)定的，并被描繪為具有共振結(jié)構(gòu)的平面原子環(huán)，該共振結(jié)構(gòu)由交替的雙鍵和單鍵組成，例如苯或萘。術(shù)語(yǔ)"芳基"指以單個(gè)或稠合碳環(huán)系統(tǒng)的具有6至15環(huán)原子的芳族基團(tuán)，在一些情況具有6至10環(huán)原子，并指包含所述芳族基團(tuán)的烴基基團(tuán)。芳基基團(tuán)的例子包括但不限于苯基、l-萘基、2-萘基和芐基。本文界定的芳基還包括具有多個(gè)芳基環(huán)的基團(tuán)，這些環(huán)可為稠合的，如萘基和蒽基，或未稠合，如聯(lián)苯基和三聯(lián)苯基。芳基還指二環(huán)或三環(huán)的碳環(huán)，其中這些環(huán)之一是芳族的，其余的可為飽和、部分不飽和或芳族的，例如茚滿基或四氳萘基(tetralmyl)。所有這種芳基基團(tuán)還可如下所述地任選地被取代。術(shù)語(yǔ)"雜環(huán)"或"雜環(huán)的"指具有3至15原子的飽和或部分不飽和的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)，在一些情況具有3至7原子，至少一個(gè)環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子，所述雜原子選自O(shè)、S或N。雜環(huán)基團(tuán)的每個(gè)環(huán)可包含一個(gè)或兩個(gè)O原子、一個(gè)或兩個(gè)S原子、一個(gè)至四個(gè)N原子，條件是每個(gè)環(huán)中雜原子的總數(shù)為四或更少，且每個(gè)環(huán)包含至少一個(gè)碳原子。完成二環(huán)或三環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)的稠合環(huán)可僅包含碳原子且可為飽和或部分不飽和的。N和S原子可任選地一皮氧化且N原子可任選地,皮季4妄化。雜環(huán)還指包含所述單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)的烴基基團(tuán)。雜環(huán)的例子包括但不限于2-或3-哌啶基、2-或3-哌嗪基、2-或3-嗎啉基。所有這種雜環(huán)基團(tuán)還可如下所述地任選地被取代。術(shù)語(yǔ)"雜芳基"指以單個(gè)或稠合環(huán)系統(tǒng)的具有5至15環(huán)原子的芳族基團(tuán)，在一些情況具有5至10環(huán)原子，至少一個(gè)環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子，所述雜原子選自O(shè)、S或N。雜芳基基團(tuán)的每個(gè)環(huán)可包含一個(gè)或兩個(gè)O原子、一個(gè)或兩個(gè)S原子、一個(gè)至四個(gè)N原子，條件是每個(gè)環(huán)中雜原子的總數(shù)為四或更少，且每個(gè)環(huán)包含至少一個(gè)碳原子。完成二環(huán)或三環(huán)基團(tuán)的稠合環(huán)可僅包含碳原子且可為飽和的、部分不飽和或芳族的。在氮原子的孤立電子對(duì)不牽涉在完成芳族兀電子系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)中，N原子可任選地被季銨化或氧化為N-氧化物。雜芳基還指包含所述環(huán)狀基團(tuán)的烴基基團(tuán)。單環(huán)雜芳基基團(tuán)的例子包括但不限于吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、哺唑基、異噹唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、喁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基和三嗪基。二環(huán)雜芳基基團(tuán)的例子包括但不限于吲哚基、苯并噻唑基、苯丙^惡唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、。引溱基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、會(huì)喔啉基、吲唑基、嘌呤基、吡咯并吡咬基、呋喃并吡啶基、漆吩并吡啶基、二氫異吲哚基和四氳喹啉基。三環(huán)雜芳基基團(tuán)的例子包括但不限于氮藥基、苯并吲哚基(benzmdolyl)、菲咯啉基(phenanthrollmyl)、吖啶基、菲啶基和卩占噸基。所有這種雜芳基基團(tuán)還可如下所述地任選地被取代。術(shù)語(yǔ)"羥基"指基團(tuán)-OH。術(shù)語(yǔ)"烴氧基"指基團(tuán)-ORa,其中Ra是烴基、環(huán)烴基或雜環(huán)。例子包括但不限于曱氧基、乙氧基、叔丁氧基、環(huán)己氧基和四氫吡喃氧基。術(shù)語(yǔ)"芳氧基"指基團(tuán)-ORb,其中Rb是芳基或雜芳基。例子包括但不限于苯氧基、千氧基和2-萘氧基。術(shù)語(yǔ)"?；?指基團(tuán)-C(-O)-Rc，其中Rc是烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。例子包括但不限于乙?；?、苯曱酰基和呋喃曱?；?。術(shù)語(yǔ)"氨基?；?指衍生自氨基酸的?；鶊F(tuán)。術(shù)語(yǔ)"氨基"指-NRdRe基團(tuán)，其中Rd和Re獨(dú)立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基和雜芳基。或者是Rd與Re—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)爛基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；被?、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺酰基、磺?；?、磺酰氨基、脒基、氨基甲酰基、胍基或脲基取代，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"酰氨基"指基團(tuán)-C^O)-NRfRg,其中Rf和Rg獨(dú)立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基和雜芳基?；蛘呤?，Rf與Rg—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞酰酰基、磺?；⒒酋０被?、脒基、氨基曱?；㈦一螂寤〈?，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"脒基"指基團(tuán)-C(-NRh)NR,Rj，其中Rh選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基和雜芳基；且K和R'獨(dú)立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基和雜芳基?；蛘呤?，R^與Rj—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺?；?、磺?；?、磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基取代，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"羧基"指基團(tuán)-C02H。術(shù)語(yǔ)"羧烴基"指基團(tuán)-C02Rk,其中Rk是烴基、環(huán)烴基或雜環(huán)。術(shù)語(yǔ)"羧芳基"指基團(tuán)-C02Rm,其中Rm是芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"氰基"指基團(tuán)-CN。術(shù)語(yǔ)"甲?；?指基團(tuán)-C(-O)H,還表示-CHO。術(shù)語(yǔ)"卣"、"卣素"或"卣化物"分別指氟代、氟或氟化物、氯代、氯或氯化物、溴代、溴或溴化物和碘代、碘或碘化物。術(shù)語(yǔ)"羥基曱基"指基團(tuán)-CH2OH。術(shù)語(yǔ)"巰基"指基團(tuán)-SRn，其中Rn是氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"硝基"指基團(tuán)-N02。術(shù)語(yǔ)"氧"指二價(jià)基團(tuán)=0,其代替同一碳原子上的兩個(gè)氬原子以形成羰基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)"亞磺?；?指基團(tuán)-S^O)Rp,其中Rp是烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"磺?；?指基團(tuán)-S(二0)2-RqD其中Rqi是烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"三氟曱基"指基團(tuán)-CF3。.術(shù)語(yǔ)"氨基磺?；?指基團(tuán)-NRq2-S^O)2-Rq3，其中Rq2是氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基；且Rq3是烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"磺酰氨基"指基團(tuán)-S(二0)2-NRrRs,其中Rr和Rs獨(dú)立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基?；蛘呤牵琑r與Rs—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；被?、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺酰基、磺?；?、磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基取代，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"氨基曱酰基"指式-N(Rt)-Q^O)-ORu的基團(tuán)，其中Rt選自氬、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基；且Ru選自烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。術(shù)語(yǔ)"胍基"指式-N(Rv)-Q^NRw)-NRxRy的基團(tuán)，其中Rv、Rw、Rx和Ry獨(dú)立地選自氳、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基?；蛘呤?，Rx與Ry—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)徑基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；被?、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺酰基、磺?；⒒酋０被?、脒基、氨基曱?；?、胍基或脲基取代，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"脲基"指式-N(Rz)-Q^O)-NRaaRbb的基團(tuán)，其中Rz、Raa和Rbb獨(dú)立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。或者是，Raa和Rbb—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺酰基、磺?；⒒酋０被?、脒基、氨基曱?；㈦一螂寤〈?，且任選地包含1至3個(gè)選自0、S或N的另外雜原子。術(shù)語(yǔ)"任選地取代的"意為清楚地指出指定基團(tuán)是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)合適取代基取代的，除非清楚地指定了任選取代基，在那種情況下術(shù)語(yǔ)指出該基團(tuán)是未取代的或被指定取代基取代的。如以上所定義的，除非另外指出(如，指出指定基團(tuán)是未取代的)，各基團(tuán)可為未取代的或取代的(即它們是任選地取代的)。術(shù)語(yǔ)"取代的"當(dāng)與術(shù)語(yǔ)烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基和雜芳基一起使用時(shí)指該基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)氫原子被取代基代替的烴基、環(huán)烴基、雜環(huán)、芳基或雜芳基基團(tuán)，所述取代基獨(dú)立地選自未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、卣、氧、巰基、亞磺酰基、磺?；?、磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基、脲基和式-NRccC(=0)Rdd、-NReeC(=NRff)Rgg、-OC(=0)NRhhRu、畫OC^O)R"、-OC(=0)ORkk、-NR讓S02Rnn或-NRppS02NRqqRrr的基團(tuán)，其中Rcc、Rdd、Ree、Rff、Rgg、Rhh、Ru、R,，、R腿、Rpp、Rqq和Rrr獨(dú)立地選自氳、未取代的烴基、未取代的環(huán)爛基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基或未取代的雜芳基；且其中Rkk和R皿獨(dú)立地選自未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基或未取代的雜芳基?；蛘呤?，Rgg與R他、R"與Rkk或Rpp與Rqq—起形成3至8元的雜環(huán)，任選地被未取代的烴基、未取代的環(huán)烴基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烴氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰氨基、羧基、羧烴基、羧芳基、巰基、亞磺?；?、磺?；?、磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基取代，且任選地包含1至3個(gè)選自O(shè)、S或N的另外雜原子。此外，對(duì)芳基和雜芳基基團(tuán)的術(shù)語(yǔ)"取代的"包括該基團(tuán)的一個(gè)氫原子被氰基、硝基或三氟甲基代替作為一種選擇。只要不超出任何原子的正常價(jià)數(shù)且取代產(chǎn)生穩(wěn)定化合物，就可進(jìn)行取代。通常，當(dāng)存在基團(tuán)的取代形式時(shí)，這種取代的基團(tuán)優(yōu)選地不被進(jìn)一步取代，或如果被取代，則取代基僅包括有限數(shù)目的取代基團(tuán)，在一些情況包括l、2、3或4個(gè)這種取代基。當(dāng)本文任何組成成分(constituent)或任何式中的任4可變量出現(xiàn)多于一次時(shí)，其在每次出現(xiàn)時(shí)的定義獨(dú)立于其在每次另外出現(xiàn)時(shí)的定義。而且，只有當(dāng)取代基和/或變量的組合產(chǎn)生穩(wěn)定化合物時(shí)這種組合才是被允許的。"穩(wěn)定化合物''.或"穩(wěn)定結(jié)構(gòu)'，指化合物足夠牢固以致能經(jīng)受分離至有用的純度水平和配制為有效治療劑。術(shù)語(yǔ)"氨基酸"指本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的通常天然的(遺傳編碼的)或合成的氨基酸及其通常的衍生物。當(dāng)應(yīng)用于氨基酸時(shí)，"標(biāo)準(zhǔn)"或"蛋白"指處于天然構(gòu)型的遺傳編碼的20種氨基酸。類似地，當(dāng)應(yīng)用于氨基酸時(shí)，"非天然"或"不常見"指廣泛選擇的非天然、稀有或合成氨基酸，如Hunt,S.在C7zem^/>yaw<iBzoc/^/w'Wryo/*^4/w"o^"'(is"(氨基酸的4b學(xué)和生物化學(xué))，Barrett,G.C.編輯，ChapmanandHall:NewYork,1985中描述的。術(shù)語(yǔ)"殘基"有關(guān)氨基酸或氨基酸衍生物時(shí)指下式的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>其中RAA是氨基酸側(cè)鏈，且這種情況n=0、1或2。術(shù)語(yǔ)"片段"有關(guān)二肽、三肽或更高級(jí)肽衍生物時(shí)分別指包含2個(gè)、3個(gè)或更多氨基酸殘基的基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)"氨基酸側(cè)鏈"指來(lái)自標(biāo)準(zhǔn)的或非天然氨基酸的任何側(cè)鏈，標(biāo)為RAA。例如，丙氨酸的側(cè)鏈?zhǔn)菚趸?，纈氨酸的側(cè)鏈?zhǔn)钱惐?，色氨酸的?cè)鏈?zhǔn)?-巧l哚基甲基。術(shù)語(yǔ)"激動(dòng)劑"指加倍蛋白質(zhì)、受體、酶或類似物的內(nèi)源配體的至少一些效力的化合物。術(shù)語(yǔ)"拮抗劑"指抑制蛋白質(zhì)、受體、酶或類似物的內(nèi)源配體的至少一些效力的化合物。術(shù)語(yǔ)"變體"當(dāng)應(yīng)用至受體時(shí)指包括二聚體、三聚體、四聚體、五聚體和包含多個(gè)組成成分的其它生物復(fù)合體。這些組成成分可相同或不同。術(shù)語(yǔ)"肽"指包括兩個(gè)或多個(gè)共價(jià)結(jié)合在一起的氨基酸的化合物。術(shù)語(yǔ)"模擬肽"指設(shè)計(jì)為模擬肽的化合物，但通過(guò)添加或代替肽的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)而包含結(jié)構(gòu)差異，以調(diào)節(jié)其活性或其它特征，如溶解度、代謝穩(wěn)定性、口服生物利用度、親脂性、滲透性等。這可包括肽鍵代替、側(cè)鏈修飾、截短、添加官能團(tuán)等。當(dāng)化學(xué)結(jié)構(gòu)不是衍生自肽但模擬其活性時(shí)，通常稱為"非-肽模擬肽"。術(shù)語(yǔ)"肽鍵"指酰胺[-C(=0)-NH-]官能性，藉此肽中的單獨(dú)氨基酸通常彼此共價(jià)鍵合。術(shù)語(yǔ)"保護(hù)基團(tuán)"指可用于保護(hù)分子上可能的反應(yīng)性官能團(tuán)如胺、羥基或羧基在分子中別處發(fā)生化學(xué)變化時(shí)免受化學(xué)反應(yīng)的任何化合物。本領(lǐng)域」技術(shù)人員已知大量這種保護(hù)基團(tuán)，例子可見于"ProtectiveGroupsmOrganicSynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)),"TheodoraW.Greene和PeterG.Wuts編輯，JohnWiley&Sons,NewYork,第三版，1999[ISBN0471160199]。氨基保護(hù)基團(tuán)的例子包括但不限于苯二甲酰亞氨基、三氯乙?；?、千氧基羰基、叔丁氧基羰基和金剛烷氧基羰基。在一些實(shí)施方式，氨基保護(hù)基團(tuán)為氨基甲酸酯氨基保護(hù)基團(tuán)，其被定義為當(dāng)結(jié)合至氨基基團(tuán)時(shí)形成氨基曱酸酯的氨基保護(hù)基團(tuán)。在其它實(shí)施方式，氨基氨基甲酸酯保護(hù)基團(tuán)為烯丙氧基羰基(Alloc)、千氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)和a,a-二曱基-3,5-二甲氧基芐氧基羰基(Ddz)。近來(lái)研究的新的氮保護(hù)基團(tuán)Theodoridis，G.r"ra/zedro"2000,56，2339-2358。羥基保護(hù)基團(tuán)的例子包括但不限于乙酰基、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三苯甲基(Trt)、叔丁基和四氬吡喃基(THP)。羧基保護(hù)基團(tuán)的例子包括但不限于甲基酯、叔丁酯、芐基酯、三甲基曱硅烷基乙基酯和2,2,2-三氯代乙基酯。術(shù)語(yǔ)"固相化學(xué)反應(yīng)"指進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，其中反應(yīng)的一個(gè)成分共價(jià)鍵合至聚合物材料(如下定義的固體支持物)。在肽和寡核苷酸化學(xué)反應(yīng)傳術(shù)語(yǔ)"固體支持物'V'固相"或"樹脂"指用于進(jìn)行固相化學(xué)反應(yīng)的機(jī)械和化學(xué)穩(wěn)定的聚合基質(zhì)。這表示為"樹脂"、"P-"或如下符號(hào)接枝至或々:價(jià)鍵合至聚苯乙烯的聚乙二-享T也稱為,peg-聚^;乙烯:TentaGel,Rapp,W.;Zhang,L.;Bayer,E.In/朋o淑zom'合成中的新方法和展望。肽、多肽和寡核普酸)；Epton,R.編輯；SPCCLtd.:Birmingham,UK;p205)、聚丙歸酸醋(CLEARtm)、聚丙烯酰胺、聚氨基曱酸酯、PEGA[聚乙二醇聚(N,N-二甲基丙烯酰胺)共聚物，Meldal,M.7^ra/z^/ro"丄e".1992，33,3077-3080]、纖維素等。這些材料可任選地包含其它化學(xué)劑以形成交聯(lián)鍵以便機(jī)械上穩(wěn)定該結(jié)構(gòu)，例如用二乙烯基苯(DVB,通常0.1-5%,優(yōu)選地0.5-2%)交聯(lián)的聚苯乙烯。作為非限制性例子該固體支持物可包括氨基曱基聚笨乙烯、羥基曱基聚苯乙烯、二苯曱基胺聚苯乙烯(BHA)、甲基二苯甲基胺(MBHA)聚苯乙烯和包含自由化學(xué)官能團(tuán)(最經(jīng)常為-NH2或-OH)用于進(jìn)一步衍生作用或反應(yīng)的其它聚合物骨架。該術(shù)語(yǔ)還意味著包括具有高比例("負(fù)載")的這些官能團(tuán)的"超級(jí)樹脂(Ultraresms)",如從聚乙烯亞胺和交聯(lián)分子制備的那些(Barth,M.;Rademann,J.丄CwwZ>.C7ze附.2004，6,340-349)。在合成結(jié)束時(shí)，通常丟棄沖對(duì)脂，盡管已顯示它們能再次使用，如在Frechet，J.M丄；Haque,K.E.r"ra/^t/謂Ae".1975,16，3055中?？傊米鳂渲牟牧鲜遣蝗芫酆衔?，但一些聚合物取決于溶劑而具有不同溶解度，也可用于固相化學(xué)反應(yīng)。例如聚乙二醇可以這種方式它溶劑如乙醚中不溶。因此，反應(yīng)可在溶液中均相地進(jìn)行，然后通過(guò)加入乙醚使聚合物上的產(chǎn)物沉淀，作為固體處理。這已被稱為"液相"化學(xué)反應(yīng)。術(shù)語(yǔ)"連接體"當(dāng)關(guān)于固相化學(xué)反應(yīng)使用時(shí)指一種化學(xué)基團(tuán)，其共價(jià)鍵合至固體支持物并連接在支持物和基質(zhì)之間，通常是為了允許基質(zhì)從固體支持物釋放(裂解)。然而它還可用于對(duì)連接固體支持物的鍵賦予穩(wěn)定性或僅作為間隔元件。市場(chǎng)上有許多已連接有連接體的固體支持物。用于氨基酸的縮寫和肽的名稱遵循生物化學(xué)命名IUPAC-IUB委員會(huì)在Ao/.C7^w.1972,247,977-983中的一見則。該文件已一皮更新歷oc/z縫丄，1984,219,345-373;丄說(shuō)oc/zem.,1984,138，9畫37;1985,152,r，/他簡(jiǎn)f.丄尸，尸n版，1984,24,p84下；丄腸/.C/綴，1985,260,14-42;尸群柳/.C/z謹(jǐn).，1984,56,595-624;j畫o^c油am/尸e/"c/es，1985，16,387陽(yáng)410;禾口在^Swc/2e附w/^少iVowewc/a/i^e<ijRe/"fe<iDocwme"&(生物化學(xué)命名和相關(guān)文件)，第二版，PortlandPress,1992,pp39-67。這些,見則的增訂出片反于JCBN/NC-IUBNewsletter1985,1986,1989;見i^oc/zewwtr_yTVowewc/afwreie/""(iZ)ocwmew&(生對(duì)勿^f匕學(xué)命名和相關(guān)文件)，第二版，PortlandPress，1992，pp68-69。術(shù)語(yǔ)"有效量''或"有效"代表一種劑量，其導(dǎo)致疾病或病癥的癥狀H解，如由臨床測(cè)試和評(píng)價(jià)、患者觀察和/或類似方法注意到的，和/或代表一種劑量，其導(dǎo)致生物活性或化學(xué)活性可檢測(cè)的變化?？蓹z測(cè)的變化通常理解的，劑量將取決于施用途徑、癥狀和患者體重而改變，但也取決于,皮施用的化合物。"聯(lián)合"施用兩種或多種化合物是指這兩種化合物施用的時(shí)間足夠接近以致其中一種的存在改變另一種的生物效應(yīng)。兩種化合物可同時(shí)(一起)或順序地施用。同時(shí)施用可通過(guò)在施用前混合各化合物而實(shí)現(xiàn)，或通過(guò)在同一時(shí)間點(diǎn)在不同解剖學(xué)位置施用或使用不同施用途徑而實(shí)現(xiàn)。本文使用的短語(yǔ)"一起施用"、"聯(lián)合施用"、"同時(shí)施用"或"同時(shí)地施用"意為各化合物在相同時(shí)間點(diǎn)施用或彼此緊接著施用。在后一種情況，兩種化合物施用的時(shí)間足夠接近以致觀察到的結(jié)果與各化合物在相同時(shí)間,A施用所得到的結(jié)果難以區(qū)分。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上活性的代謝物"意為指經(jīng)由體內(nèi)代謝指定化合物產(chǎn)生的藥理學(xué)活性的產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)"溶劑合物"意為指指定化合物的藥學(xué)上可接受的溶劑合物形式，其保持了該化合物的生物有效性。溶劑合物的例子包括但不限于與水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺結(jié)合的本發(fā)明化合物。術(shù)語(yǔ)"同時(shí)"或"一起"當(dāng)應(yīng)用于疾病或病癥時(shí)，指該疾病或病癥是在受治療者患有該疾病或病癥的至少一些時(shí)間(但不必是全部時(shí)間)的相同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生。術(shù)語(yǔ)"順序;也"當(dāng)應(yīng)用于疾病或病癥時(shí)意為指該疾病或病癥不是在相同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生但彼此緊接著發(fā)生。1.化合物結(jié)構(gòu)包括經(jīng)受環(huán)化以形成大環(huán)化合物的拴系物部分。構(gòu)件結(jié)構(gòu)可包括氨基酸(標(biāo)準(zhǔn)和非天然)和如本文所述的拴系物部分。拴系物部分可選自造成下述結(jié)構(gòu)的化合物其中(NHa)表示至式I中CH(CHR7Ar)鍵合的氮原子的鍵；(NHb)表示至式I中羰基(。=0)鍵合的氮原子的鍵；Rw選自氳、曱基和羥基曱基;R32選自氫、曱基和羥基。本發(fā)明的大環(huán)化合物還包括下式I的那些化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物其中(L5)和(L6)分別表示結(jié)合式I的L5和U的鍵;Ar選自以下組成的組X4v^/'〈r^S、.^s、s^〉、Tc/X8t"/^—x,《、和選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、Rs和R6獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氫、低級(jí)烴基、羥基和氨基；Rioa和Ri。b獨(dú)立地選自氬、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；X!、X2、X6、X7、X8和X9獨(dú)立地選自氫、卣素、三氟甲基和低級(jí)烴基；X3、X4和Xs獨(dú)立地選自氫、羥基、烴氧基、卣素、三氟甲基和低級(jí)烴基；U、L2、L3和U獨(dú)立地選自CH和N;前一是是環(huán)中氮的總數(shù)必須是0、1、2或3;Ls和U獨(dú)立地選自O(shè)、CRsaRsb和NR9;其中R^和R能獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烴基；且R9選自氳、低級(jí)烴基、甲?；?、酰基和磺酰基。本發(fā)明包括分離的化合物。分離的化合物指一種化合物，其在一些實(shí)施方式占混合物中化合物的至少10%、至少25%、至少50%或至少70%。在一些實(shí)施方式，化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或包含該化合物的藥物組合物在生物測(cè)定中檢測(cè)時(shí)對(duì)人類促胃動(dòng)素受體表現(xiàn)統(tǒng)計(jì)上顯著的結(jié)合和/或拮抗活性。在化合物、鹽或溶劑合物是固體的情形，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解本發(fā)明化合物、鹽和溶劑合物可以不同晶體或多晶形式存在，所有這些都規(guī)定在本發(fā)明和指定式的范圍內(nèi)。本文公開的式I化合物具有不對(duì)稱中心。本發(fā)明化合物可以單獨(dú)立體異構(gòu)體、外消旋體和/或?qū)τ丑w和/或非對(duì)映體的混合物存在。所有這些單獨(dú)立體異構(gòu)體、外消旋體和其混合物都規(guī)定在本發(fā)明的范圍內(nèi)。然而在特定實(shí)施方式，本發(fā)明化合物以光學(xué)純的形式使用。本文所用的術(shù)語(yǔ)"S"和"R"構(gòu)型是由IUPAC1974RecommendationsforSectionE,FundamentalsofStereochemistry(立體化學(xué)基本原則，對(duì)E部分的建議)(尸匿如/.C/z綴1976,45,13-30.)定義的。除非另外示意為指定方向，本發(fā)明包括所有立體異構(gòu)體形式?；衔锟芍苽錇閱为?dú)的立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物。非消旋形式可由例如通過(guò)形成鹽而形成非對(duì)映對(duì)?；衔镞€可由共價(jià)鍵合至手性部分而被拆分。隨后非對(duì)映體可由色譜分離和/或結(jié)晶分離而被拆分。在手性附加部分的情況，隨后可移除它。作為一個(gè)選擇，可通過(guò)使用手性色譜法而拆分化合物。在一些情況還可使用酶的拆分方法。如本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的，"光學(xué)純的"化合物是僅包含單獨(dú)對(duì)映體的化合物。本文所用的術(shù)語(yǔ)"旋光的"意指化合物包括的一種對(duì)映體比另一種對(duì)映體至少足夠過(guò)量，以致混合物旋轉(zhuǎn)平面偏振光。旋光化合物具有旋轉(zhuǎn)偏振光平面的能力。一種對(duì)映體超過(guò)另一種通常表示為對(duì)映體過(guò)量(e.e.)。在描述旋光化合物時(shí)，前綴D和L或R和S用于表示分子圍繞其手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。前綴"d"和T或(+)和(-)用于表示化合物的光學(xué)旋轉(zhuǎn)(即，偏振光平面被旋光化合物旋轉(zhuǎn)的方向)。T或(-)前綴表示化合物是左旋的(即，向左或逆時(shí)針地旋轉(zhuǎn)偏振光平面)而"d"或(+)前綴表示化合物是右旋的(即，向右或順時(shí)針地旋轉(zhuǎn)偏振光平面)。光學(xué)旋轉(zhuǎn)的符號(hào)(-)和(+)與分子的絕對(duì)構(gòu)型R和S不相關(guān)。具有期望的藥理學(xué)特征的本發(fā)明的化合物應(yīng)是旋光的且可包括至少90%(80%e.e.)、至少95%(90%e.e.)、至少97.5%(95%e.e.)或至少99%(98%e.e.)的單獨(dú)異構(gòu)體。類似地，本文公開的化合物中還可存在雙鍵的許多幾何異構(gòu)體和類似物，除非另外指定，所有這種穩(wěn)定異構(gòu)體均被包括在本發(fā)明中。本發(fā)明還包括式I、11和/或III的互變異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。使用以下符號(hào)表示所指環(huán)的一個(gè)或多個(gè)氫原子被所定義的取代基R取代。使用以下符號(hào)表示單鍵或任選的雙鍵二。2..合成方法式I化合物可使用傳統(tǒng)液相合成技術(shù)或固相化學(xué)方法合成。對(duì)這種一般類型大環(huán)結(jié)構(gòu)的合成方法描述于國(guó)際專利申請(qǐng)WO01/25257、WO2004/111077、WO2005/012331、WO2005/012332、WO2006/009645和WO2006/009674,包括WO2004/111077和WO2005/012331中描述的純化方案。對(duì)本發(fā)明化合物的代表性方案展示在實(shí)施例中。除非另外指明，使用的試劑和溶劑是試劑級(jí)或更高級(jí)別的，是從各市場(chǎng)供應(yīng)商獲得的。使用的DMF、DCM(CH2C12)、DME、CH3CN和THF是DnSolv(EMDChemicals,Inc.,MerckKgaA的成員，Darmstadt,Germany)的或合成級(jí)的，除了用于(i)脫保護(hù)、(ii)樹脂封端反應(yīng)和(iii)洗滌的。用于氨基酸(AA)偶合反應(yīng)的NMP是分析級(jí)的。DMF在使用前通過(guò)置于真空至少30分鐘而充分脫氣。均相催化劑從StremChemicals,Inc.(NewburyPort，MA，USA)獲得。Cbz-、Boc-和Fmoc-保護(hù)的氨基酸和側(cè)鏈保護(hù)的衍生物，包括N-曱基和非天然氨基酸的那些，從市場(chǎng)供應(yīng)商獲得或用本領(lǐng)域已知標(biāo)準(zhǔn)方法合成。Ddz-氨基酸由標(biāo)準(zhǔn)方法合成，或乂人Orpegen(Heidelberg,Germany)或AdvancedChemTech(Louisville,KY,USA)購(gòu)得。Bts-氨基酸用確定的方案合成。分析TLC在包含熒光指示劑的硅膠60F254(厚0.25mm)的預(yù)涂板上進(jìn)行并使用所指出的方法和試劑使其可見，例如使用紫外光(UV)和/或鉬酸鈰(CMA)溶液(混合100mL硫酸、10g硫酸鈰銨和25g鉬酸銨而制備)。術(shù)語(yǔ)"在減壓下濃縮/蒸發(fā)/除去"指使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑和揮發(fā)性成分，在水泵壓力(通常10-30torr)下或?qū)λサ娜軇┖线m的由機(jī)械油真空泵提供的更強(qiáng)真空("高真空，"通常<1torr)下。"在真空"或在"高真空"干燥化合物指在低壓(<1torr)使用油真空泵干燥。"快速色語(yǔ)法"使用硅膠60(230-400目，EMDChemicals,Still，W.C;Kahn,M.;Mitra,A.J.Org.C/zem.1978,43,2923-2925)進(jìn)4亍，是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法。"干燥柱(Drypack)"指在還未用溶劑預(yù)處理的硅膠上進(jìn)行色譜法，通常應(yīng)用于較大規(guī)模的純化，其中在期望產(chǎn)物和任何雜質(zhì)之間存在Rf的大差異。對(duì)于固相化學(xué)過(guò)程，"以標(biāo)準(zhǔn)方式干燥"是指樹脂首先在空氣中干燥(1h),隨后在真空下(通常油泵)干燥直到獲得完全干燥(30mm至0/N(過(guò)夜))。在對(duì)空氣和水敏感的反應(yīng)中使用的玻璃制品在使用前在烤箱中干燥至少0/N(過(guò)夜)并在干燥器中冷卻。B.氨基酸氨基酸、Boc-和Fmoc-保護(hù)的氨基酸和側(cè)鏈保護(hù)的衍生物，包括N-甲基和非天然氨基酸的衍生物，從市場(chǎng)供應(yīng)商獲得[例如AdvancedChemTech(Louisville,KY,USA)、Bachem(Bubendorf,Switzerland)、Chemlmpex(WoodDale,IL,USA)、Novabiochem(MerckKgaA的子7〉司，Darmstadt,Germany)、PepTech(Burlington,MA,USA)、Synthetech(Albany,OR,USA)、AstaTech(Bristol,PA,USA)]或由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知標(biāo)準(zhǔn)方法合成。Ddz-氨基酸從Orpegen(Heidelberg，Germany)或AdvancedChemTech(Louisville,KY，USA)購(gòu)得或以標(biāo)準(zhǔn)方法使用Ddz-OPh或DdZ陽(yáng)Ns合成。(Birr,C;Lochmger,W.;Stahnke,G.;Lang，P..A^toZje^w爿朋.C/zew.1972,763,162-172.)。Bts-氨基酸使用已知方法合成。(Vedejs,E.;Lm，S.;Klapara,A.;Wang,J.丄Jm.C/z綴Soc.1996,118，9796-9797;Vedejs,E.;Kongkittmgam,C.丄(9rg.C/z縱2000,65,2309-2318;以及國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朩O01/25257、WO2004/111077)。N-烴基氨基酸尤其是N-曱基氨基酸，從多個(gè)賣主(Bachem,Novabiochem,AdvancedChemTech,Chemlmpex,Peptech)購(gòu)得。此夕卜，N-烴基氨基酸衍生物由文獻(xiàn)方法獲取。(Hansen,D.W.,Jr.;Pilipauskas,D.<9rg.CAew.1985,50,945-950.)。氮丙啶-2-羧酸使用文獻(xiàn)報(bào)道方法得到。(Baldwm，J.E.等r"ra/ze^o"1993,49,6309-6330;Nakajima,K.等Bw〃.C/zew.Soc.Tpi1978,57,1577-1578.)。3-氯代酪氨酸4吏用文獻(xiàn)方法合成。(Yu,G.;Mason,H.J.;Galdi,K.等5y"A^w2003,403-407.)。特地為在這些大環(huán)中使用而構(gòu)造了其它氨基酸，如式n的那些R27RNC02R25'26^8(II)其中R25選自氫、烴基、芳基、環(huán)烴基、雜環(huán)和雜芳基；R26選自氬、烴基、芳基、?；Ⅳ葻N基、羧芳基、磺?；陀糜诎被岬臉?biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)；1127選自氫和烴基；且1128選自以下基團(tuán),、N、、/NN乂7^7、其中M選自CH2、O、NH和NCH3。構(gòu)造這類代表性氨基酸的方法提供于實(shí)施例。這些氨基酸中的一些可看作是精氨酸和/或其胍部分的模擬物(Peterlm-Masic,L.;Kikelj，D.7Wra/^&o"2001,57,7073和本文引述的參考文獻(xiàn))。C.拴系物拴系物從此前在國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朩O01/25257、WO2004/111077、WO2005/012331、WO2006/009645和WO2006/009674中描述的方法獲得。合成本文所述代表性拴系物的方案還展示于以下的實(shí)施例?？捎糜诒景l(fā)明化合物的拴系物可包括如上引述的參考文獻(xiàn)中描述的合適拴系物以及已知的和/或本文所述新型拴系物。示例性拴系物包括^旦不限于以下及其制備中的中間產(chǎn)物，其中PG!選自氳和用于胺官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)，PG2選自氳和用于羥基官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)?？梢允褂眠@些拴系物合成本發(fā)明示例性化合物的具體方案提供于實(shí)施例中。D.大環(huán)合成申"i青公開號(hào)WO01/25257、WO2004/111077、WO2005/012331和WO2005/012332。液相合成途徑，包括適合更大規(guī)^莫制造的方法，描述于國(guó)際專利申諱v^開號(hào)WO2006/009645和WO2006/009674。這些用于本發(fā)明代表性化合物的方法進(jìn)一步描述于實(shí)施例。表1展示了本發(fā)明90種代表性化合物合成方法的概述。用于構(gòu)造大環(huán)分子的反應(yīng)方法示于第2列并涉及合成策略的特定路線，例如使用圖7所示的固相策略或圖8所示并描述于實(shí)施例9的液相方法。第3-6列指示用于每種化合物的單獨(dú)氨基酸和拴系物構(gòu)件，使用標(biāo)準(zhǔn)命名法或在本申請(qǐng)中別處展示的構(gòu)件名稱。AAi指形成式I化合物-NR衡-CH(CHR7'Ar)-Q^O)-部分的構(gòu)件；AA2指形成式I化合物-NH-CHRrC(^0)-部分的構(gòu)件；AA!指形成式I化合物-NH-CHR2-C^O)-部分的構(gòu)件；拴系物指形成式I化合物在NR1Qa和0b之間的其余部分的構(gòu)件，通常包括NR監(jiān)。應(yīng)注意，對(duì)于1-取代的拴系物，例如T38、T90、T91、T92、T93、T94、T95、T96、T97、T98和T99,引入其的反應(yīng)化學(xué)顛倒了在該中心處的立體化學(xué)。因此，(R)-取代的拴系物構(gòu)件產(chǎn)生具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，(S)-取代的拴系物構(gòu)件產(chǎn)生具有(R)-立構(gòu)中心的式I化合物。拴系物T卯和T91與AA!—起如同實(shí)施例6和5中分別作為片段F2和Fl被引入。組裝環(huán)化前體所需的有關(guān)的脫保護(hù)和偶合步驟^吏用標(biāo)準(zhǔn)方案和WO2004/111077、W〇2006/009645及WO2006/009674中描述的對(duì)構(gòu)件的性質(zhì)合適的方案進(jìn)行。應(yīng)用合適的脫保護(hù)順序后獲得最終的大環(huán)。如果在環(huán)化后需要進(jìn)行任何反應(yīng)，將它們列在第7列。表1中展示的所有大環(huán)化合物都被純4匕并達(dá)到內(nèi)部馬全收標(biāo)準(zhǔn)(Internalacceptancecriteria)。表i.合成本發(fā)明代糸性化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage91</column></row><table>接下來(lái)的表展示了對(duì)化合物501-589獲得的分析數(shù)據(jù)(表2),由純化產(chǎn)物的LC-MS分析確定。使用本文所述的生物檢測(cè)方法，進(jìn)一步檢查了這些化合物與人類促胃動(dòng)素受體相互作用的能力。表2:本發(fā)明代表性化合物的分析數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>度的二維NMR方法選擇試驗(yàn)、性能和解釋的化學(xué)家指南)，JohnWiley&Sons:NewYork,1988,ISBN0471187070.)。HPLC分析在WatersAlliance系統(tǒng)2695上進(jìn)行，以1mL/mm運(yùn)行，使用XterraMSC18柱(或相當(dāng)?shù)?4.6x50mm(3.5pm)和所指出的梯度方法。Waters996PDA對(duì)純度評(píng)估提供UV數(shù)據(jù)(WatersCorporation,Milford,MA)。LCPackings(DionexCorporation,Sunnyvale,CA)分力乾器(50:40:10)使物流分為三部分。第一部分(50%)被轉(zhuǎn)至質(zhì)諳儀(MicromassPlatformIIMS，裝有APCI探測(cè)儀)以證實(shí)身份(identity)。第二部分(40。/。)進(jìn)入蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀(ELSD,PolymerLaboratories,現(xiàn)在是Vanan,Inc.的成員,PaloAlto,CA,PL-ELS-1000"tm)用于評(píng)估純度，最后一部分(10。/。)進(jìn)入化學(xué)發(fā)光氮檢測(cè)儀(CLND,AntekModel8060,AntekInstruments,Houston,TX,RoperIndustries,Inc.的邵分，Duluth,GA的部分)以定量和評(píng)估純度。捕獲數(shù)據(jù)并使用WatersMillennium⑧軟件包的最新版本處理數(shù)據(jù)。使用WatersBreeze(或相當(dāng)?shù)?系統(tǒng)以合適手性HPLC柱評(píng)估對(duì)映體和非對(duì)映體純度。盡管可使用其它填充(packmg)材料，但對(duì)這些分析特別有用的柱是ChiralpakAS-RH和ChiralcelOD-RH(ChiralTechnologies:WestChester,PA,USA)。對(duì)最終脫保護(hù)的大環(huán)化合物使用WatersFractionLynx系統(tǒng)在XTerraMSC18柱(或相當(dāng)?shù)?19x100mm(5pm)上進(jìn)行制備HPLC純化。使用配置有Waters2767注射儀/收集儀和以2mL/mm運(yùn)行的Waters515泵的At-Column-Dilution完成注射。質(zhì)鐠儀、HPLC和質(zhì)量導(dǎo)向(mass-directed)的餾分收集由帶有FractionLynx的MassLynx⑧軟件版本3.5控制。MS分析顯示為包含產(chǎn)物的餾分(13x125mm管)在減壓下蒸發(fā)，最經(jīng)常地在離心蒸發(fā)器系統(tǒng)(Genevac⑧HT-4(GenevacInc，ValleyCottage,NY)、ThermoSavantDiscovery、SpeedVac⑧或相當(dāng)?shù)?ThermoElectronCorporation,Waltham,MA)上蒸發(fā)，或者也可以凍干。隨后化合物由LC-MS-UV-ELSD-CLND分析徹底分析進(jìn)行身份證實(shí)、純度和量評(píng)估。在帶有一次性二氧化硅或C18柱(允許同時(shí)運(yùn)行最多十六(16)樣品)的IscoCombiFlash16x系纟克(TeledyneIsco,Inc.,Lincoln,NE)上進(jìn)4亍自動(dòng)中等壓力色諳純化。在WatersMicromassPlatformII或ZQ系統(tǒng)上記錄MS光譜。以VGMicromassZAB-ZF光譜儀記錄HRMS光譜。儲(chǔ)存化學(xué)和生物信息并使用八(^^*8&36@數(shù)據(jù)庫(kù)軟件(10BusinessSolutionsLtd.,Guildford,Surrey,UK)分析。F.手性純度確定根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)采用HPLC確定立體異構(gòu)體純度的一般方法并進(jìn)一步針對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行優(yōu)化。手性方法A:Grad35A-05(柱ChiralcelAS-RH,0.46cmx15cm):1.在35%ACN、65%50mMCH3COONH4水溶液下的40mm等度平臺(tái)(isocraticplateau)洗脫。2.5mm梯度至70%ACN、30%50mMCH3COONH4水溶液。3.在70%ACN、30%50mMCH3COONH4水溶液的10min等度平4.5mm梯度至35%ACN、65%50mMCH3COONH4水溶液。5.在35。/。ACN、65。/。50mMCH3COONH4水溶液的10mm等度平6.流速0.5mL/min7.柱溫室溫8.樣品溫度室溫手性方法B:Grad40A-05(柱ChiralcelOD-RH,0.46cmx15cm):1.在40%ACN、60%50mMCH3COONH4水溶液40mm等度平臺(tái)。2.5mm梯度至70%ACN、30%50mMCH3COONH4水溶液。3.在70%ACN、30%50mMCH3COONH4水溶液10mm等度平臺(tái)。4.5mm梯度至40%ACN、60%50mMCH3COONH4水溶液。5.在40%ACN、60%50mMCH3COONH4水溶液10mm等度平臺(tái)。6.流速0.5mL/min7.柱溫玄溫8.樣品溫度室溫手性方法C:Gmd55A-Q5(柱ChiralcelOD-RH,0.46cmx15cm):1.40mm等度的(isocratic)55%/45%的ACN/50mMCH3COONH4水溶液2.5mm梯度至70%/30%的ACN/50mMCH3COONH4水溶液3.10mm等度的70%/30%ACN/50mMCH3COONH4水溶液4.5mm梯度至55%/44%ACN/50mMCH3COONH4水溶液5.10mm等度的55%/45%ACN/50mMCH3COONH4水溶液6.流速0.5mL/min7.柱溫室溫8.樣品溫度室溫手性方法D:GradIsolOOB05(柱ChiralcdOD-RH，0.46cmx15cm):1.40mm等度的27%/73%ACN/50mMCH3COONH4水溶液2.5mm梯度至70%/30%ACN/50mMCH3COONH4水溶液3.10mm等度的70%/30o/。ACN/50mMCH3COONH4水溶液4.5mm梯度至27%/73%ACN/50mMCH3COONH4水溶液5.10mm等度的27%/73%ACN/50mMCH3COONH4水溶液6.流速0.5mL/min7.柱溫室溫8.樣品溫度室溫3.生物方法使用下文描述的竟?fàn)幮苑派渑潴w結(jié)合測(cè)定、熒光測(cè)定或水母發(fā)光蛋白功能測(cè)定評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物與人類促胃動(dòng)素受體相互作用的能力。這類方法可以高通量方式進(jìn)行以允許同時(shí)評(píng)價(jià)多種化合物。對(duì)促胃動(dòng)素受體的具體測(cè)定方法和它們?cè)谕ǔｈb定其激動(dòng)劑和拮抗劑中的應(yīng)用是已知的。(Peeters,T丄.；Depoortere,I.;Macielag,M.J.;Marvin,M.S.;Florance,J.R.;Galdes,A.B/oc/z，.Bz'0//2，.C畫m.1994,198,411-416;Farmgia,G.;Macielag,M.J.;Peeters,T丄.；Sarr,M.G.;Galdes,A.;Szurszewski,J.H.j附.丄尸—。/1997,273,G404畫G412;Depoortere,I.;Macielag,M.J.;Galdes,A.;Peeters,T.L.五w.尸/Mrwi3co/.1995,286,241-247;Poitras,P.;Miller,P.;Gag謹(jǐn)，D.;St-Pierre，S.Bwc/zem.A—，.Co畫.1994,205,449-454;Haramura,M.;kamachi,A.;Tsuzuki,K.;Yogo,K.;Ikuta,M.;Kozono,T.;Takanashi,H.;Murayama,E.丄她dCTz綴2002,45,670-675;Beavers,MP.;Gunnet，丄W.;Hageman,W.;Miller,W.;Moore,J.B.;Zhou,L.;Chen，R.H.K.;Xmng,A.;Urbanski,M.;Combs，D.W.;Mayo，K.H.;Demarest,K.T./>wgZ)"'c.2001,17,243-251.)。還在以下描述了確定與人類促胃動(dòng)素受體相互作用的本發(fā)明化合物的功能活性、藥理學(xué)特征和體內(nèi)活性的合適方法。A.竟?fàn)幮苑派渑潴w結(jié)合測(cè)定(促胃動(dòng)素受體)對(duì)人類促胃動(dòng)素受體的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定以與文獻(xiàn)中描述的測(cè)定相似地進(jìn)行。材料細(xì)胞膜從穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染人類促胃動(dòng)素受體的CHO細(xì)胞制備，并以1.5)Lig/測(cè)定點(diǎn)的量使用。[PerkmElmerSignalScreenProduct#6110544]["5l]-促胃動(dòng)素(PerkmElmer,#NEX-378);終濃度0.04-0.06nM促胃動(dòng)素(BachemTM,#H-4385);終濃度1|iMMultiscreenHarvest板-GF/B(MilliporeTM，#MAHFB1H60)深孔聚丙歸滴定板(BeckmanCoulter,#267006)T叩Seal-A(PerkmElmer，#6005185)底封(Bottomseal)(Millipore,#MATAH0P00)MicroScmt-0(PerkmElmer,#6013611)結(jié)合緩沖液50mMTris-HCl(pH7.4)、10mMMgCl2、1mMEDTA、0.1%BSA測(cè)定體積150nL稀釋于結(jié)合緩沖液中的細(xì)胞膜10pL稀釋于結(jié)合緩沖液中的化合物10^L稀釋于結(jié)合緩沖液中的放射配體([mi]-促胃動(dòng)素)化合物的最終測(cè)試濃度(N-ll):10、5.0、2.0、1.0、0.50、0.20、0.10、0.050、0.020、0.010、0.00504匕合物處理提供在干水上凍結(jié)的化合物，以10mM的母液濃度稀釋于100%DMSO中并儲(chǔ)存在-2()GC直到測(cè)試那天。測(cè)試當(dāng)天，允許化合物在室溫融化并隨后根據(jù)期望的測(cè)試濃度稀釋于測(cè)定緩沖液中。在這些條件下，測(cè)定中最大的最終DMSO濃度為0.5%。測(cè)定方案在深孔板中，稀釋的細(xì)胞膜(1.5叱/mL)與10pL結(jié)合緩沖液(總結(jié)合，N=5)、1^M促胃動(dòng)素(非特異結(jié)合，N-3)或合適濃度的測(cè)試化合物混合。通過(guò)向各孔加入10^L[^I]-促胃動(dòng)素(終濃度0.04-0.06nM)而開始反應(yīng)。用T叩Seal-A密封各板，輕柔旋動(dòng)，在室溫培育2小時(shí)。通過(guò)使用TomtecHarvester將樣品過(guò)濾通過(guò)預(yù)浸泡(0.3%聚乙烯亞胺，2h)的MultiscreenHarvest板而停止反應(yīng)，以500冷的50mMTris-HCl(pH7.4)洗滌9次，然后板在通風(fēng)拒中空氣干燥30分鐘。在板上施加底封，然后向每個(gè)孔加入25(iLMicroScint-0。隨后以TopSeal-A密封板，每個(gè)孔在T叩Count微板閃爍和發(fā)光計(jì)數(shù)儀(PerkmElmer)上計(jì)數(shù)30sec,其中結(jié)果表示為每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)。使用可變斜率非線性回歸分一斤以GraphPadPnsm⑧(Gr叩hPadSoftware,SanDiego,CA)分析數(shù)據(jù)。對(duì)[1251]-促胃動(dòng)素使用0.16nM的Kd值(此前在膜表征中確定的)計(jì)算IQ值。Dmax-1-具有最大取代的測(cè)試濃度-非特異結(jié)合x100總結(jié)合-非特異結(jié)合其沖總結(jié)合和非特異結(jié)合分別代表不存在或存在1pM促胃動(dòng)素時(shí)獲得的cpm。本發(fā)明代表性化合物對(duì)人類促胃動(dòng)素受體的結(jié)合活性示于表3。表3的化合物結(jié)構(gòu)展示為帶有對(duì)式I一般結(jié)構(gòu)界定的各種基團(tuán)。表3:本發(fā)明代表性化合物對(duì)人類促胃動(dòng)素受體的結(jié)合活性<table>tableseeoriginaldocumentpage99</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table>535<table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table>a使用標(biāo)準(zhǔn)方法確定結(jié)合活性，IQ值如下表示A^10nM、B^100nM、C^1000nM、D〉1000nMB.水母發(fā)光蛋白功能測(cè)定(促胃動(dòng)素受體)本發(fā)明化合物功能活性的評(píng)價(jià)可根據(jù)文獻(xiàn)方法進(jìn)行或如下所述進(jìn)4亍。(Carreras,CW.;Siani,M.A.;Santi,D.V.;Dillon,S.B.^wa/.5wc/zew.2002,300,146-151.)。材料使用表達(dá)人類促胃動(dòng)素受體的AequoScreen(EUROSCREEN,Belgium)細(xì)胞系(細(xì)胞系ES-380-A;受體獲取號(hào)存AF034632)制備細(xì)胞膜。將人類促胃動(dòng)素受體轉(zhuǎn)染入共表達(dá)Gal6和線粒體靶向的水母發(fā)光蛋白(Ref.^ES-WT-A5)的CHO-K1細(xì)胞而構(gòu)建該細(xì)胞系。促胃動(dòng)素(Bachem,#H-4385)測(cè)定緩沖液含有15mMHEPES和0.1%BSA(pH7.0)的DMEM-F12(Dulbeccoe改良的Eagles培養(yǎng)基)Codenterazine(腔腸素)(MolecularProbes,Leiden,TheNetherlands)化合物的最終測(cè)試濃度(N二5):10、3.16、1.0、0.316、0.10pM?；衔锾幚韺⒒衔镆愿赡ば问胶痛蠹s1.2jimol的量提供于預(yù)先格式化的96-孔板。以10mM的濃度溶解化合物于100%DMSO中并儲(chǔ)存在-20。C直到進(jìn)一步使用。子板以500濃度在30%DMSO和0.1%BSA中準(zhǔn)備并儲(chǔ)存在-2()Gc直到測(cè)試。測(cè)試當(dāng)天，允許化合物在室溫融化并隨后根據(jù)期望的測(cè)試濃度稀釋于測(cè)定緩沖液。在這些條件下，測(cè)定中最大的最終DMSO濃度為0.6%。細(xì)月包制^:以補(bǔ)充了5mMEDTA的無(wú)Ca"和Mg2+的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)從培養(yǎng)板收集細(xì)胞，在1000xg沉淀2分鐘，以5x106細(xì)胞/mL的密度重懸于測(cè)定緩沖液(見上述)中并在5)iMcoelenterazme(腔腸素)存在下過(guò)夜培養(yǎng)。上樣(loadmg)后，細(xì)胞以測(cè)定緩沖液稀釋至5x105細(xì)胞/mL的濃度。測(cè)定方案對(duì)激動(dòng)劑測(cè)試，將50細(xì)胞懸浮液與50)LiL合適濃度的測(cè)試化合物或促胃動(dòng)素(參考激動(dòng)劑)混合于96-孔板中(雙份樣品)。受體活化產(chǎn)生的光發(fā)射使用功能藥物篩選系統(tǒng)6000'FDSS6000'(HamamatsuPhotonicsK.K.，Japan)記錄。對(duì)拮抗劑測(cè)試，激動(dòng)劑測(cè)試結(jié)束后將大約EC8。濃度的促胃動(dòng)素(即0.5nM;100jiL)注射至包含測(cè)試化合物的細(xì)胞懸浮液(雙份樣品)中15-30分鐘，受體活化產(chǎn)生的光發(fā)射如上段所述地測(cè)量。結(jié)果表示為相對(duì)光單位(RLU)。使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,SanDiego，CA)以基于等式E=EMX/(1+EC5Q/C)n的非線性回歸分析(S形劑量響應(yīng))分析濃度響應(yīng)曲線，其中E是在所給激動(dòng)劑濃度(C)測(cè)量的RLU值，Emax是最大響應(yīng)，ECs。是產(chǎn)生50%刺激的濃度，n是斜率指數(shù)。對(duì)激動(dòng)劑測(cè)試，測(cè)試化合物每種濃度的結(jié)果表示為相對(duì)于在EC柳的濃度(即0.5nM)的促胃動(dòng)素引起的信號(hào)的活化百分比。對(duì)拮抗劑測(cè)試，測(cè)試化合物每種濃度的結(jié)果表示為相對(duì)于在ECso的濃度(即0.5nM)的促胃動(dòng)素引起的信號(hào)的抑制百分比。通過(guò)使用CEREP(Poitiers,Fmnce)商業(yè)提供的一種廣靶篩選軟件"ExpresSProfile"，可獲得受體選擇性的廣泛評(píng)價(jià)。在該篩選中，對(duì)來(lái)自四種不同靶類的50種單獨(dú)受體進(jìn)行單點(diǎn)(IOpM)結(jié)合測(cè)定非-肽G-蛋白質(zhì)偶聯(lián)受體(GPCR)、肽GPCR、離子通道和胺轉(zhuǎn)運(yùn)子。本發(fā)明代表性化合物對(duì)人類促胃動(dòng)素受體的結(jié)合活性示于表4。表4的化合物結(jié)構(gòu)展示在表3中，帶有對(duì)式I一般結(jié)構(gòu)界定的各種基團(tuán)。表4:本發(fā)明代表性化合物對(duì)人類促胃動(dòng)素受體的功能活性<table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table>a使用標(biāo)準(zhǔn)方法確定功能活性，IC5Q值如下表示A^lnM、B^10nM、C^lOOnM、D^1000nMC.FlashPlate促胃動(dòng)素[35s]-GTPyS功能測(cè)定材料.細(xì)胞膜從穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染人類促胃動(dòng)素受體的CHO細(xì)胞制備，并以1.5)ig/測(cè)定點(diǎn)的量使用。[PerkinElmerSignalScreenProduct#6110544]GTP-yS(Sigma,#G-8634)[35S]-GTP-yS(PerkmElmer,#NEX-030H)促胃動(dòng)素(Bachem,#H-4385)96-孔FlashPlate微孔板(PerkmElmer,#SMP200)深孔聚丙烯滴定板(BeckmanCoulter,#267006)TopSeal-A(PerkinElmer,#6005185)測(cè)定緩沖液50mMTris(pH7.4)、100mMNaCl、10mMMgCl2、1mMEDTA、1jiMGDP、0.1%BSA測(cè)定體積25pL稀釋于測(cè)定緩沖液中的化合物25)iL測(cè)定緩沖液(激動(dòng)劑測(cè)定)或稀釋于測(cè)定緩沖液中的0.6fiM促胃動(dòng)素(O.lpM終濃度)(拮抗劑測(cè)定)100^L稀釋于測(cè)定緩沖液中的[35S]-GTPyS化合物的最終測(cè)試濃度OsH12):50、20、10、5.0、2.0、1.0、0.50、0.20、0.10、0.050、0.020、0.010|LlM?；衔锾幚硖峁┰诟伤蟽鼋Y(jié)化合物，以10mM的母液濃度稀釋于100%DMSO中并儲(chǔ)存在-2(^C直到測(cè)試那天。測(cè)試當(dāng)天，允許化合物在室溫融化并隨后根據(jù)期望的測(cè)試濃度稀釋于測(cè)定緩沖液中。在這些條件下，測(cè)定中最大的最終DMSO濃度為0.5%。測(cè)定方案CHO細(xì)胞膜固定于96-孔FlashPlate微孔板中。根據(jù)上述測(cè)定體積，將測(cè)試化合物、GTPyS、促胃動(dòng)素和["s]-gtpys混合于各孔。對(duì)于測(cè)量激動(dòng)劑活性的測(cè)定，各孔中除了25緩沖液(基礎(chǔ)值，N=4)，1.0^M(終濃度)促胃動(dòng)素(E咖x值，N=3),25pM(終濃度)GTP了S(非特異值，N二4)或合適濃度的測(cè)試化合物(N二3)之外還加入另外25)iL緩沖液。對(duì)于測(cè)量拮抗劑活性的測(cè)定，各孔中除了25緩沖液(基礎(chǔ)值，N-3),1.0iiM(終濃度)促胃動(dòng)素(Emax值，N=3),25[iM(終濃度)GTPYS(非特異值，N二4)或合適濃度的測(cè)試化合物(N^3)之外還加入另外25pL緩沖液(未刺激的對(duì)照)或促胃動(dòng)素(0.10^vl終濃度)。通過(guò)向各孔加入100mL[35S]-GTPYS而開始反應(yīng)。密封各板(T叩Seal-A)并在黑暗中于室溫下培育150mm。然后在TopCountNXT上對(duì)板的每孔計(jì)數(shù)30秒。通過(guò)GraphPadTMPrism3.0(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)使用非線性回歸分析(S形劑量響應(yīng))分析數(shù)據(jù)以計(jì)算IC5Q/EC5Q值。Emax(激動(dòng)劑)或Dmax(拮抗劑)=頂-底X100底其中頂和底對(duì)應(yīng)GraphPadPrism計(jì)算的劑量響應(yīng)曲線的頂^直和底值。D.兔十二指腸收縮性測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)方法對(duì)兔十二指腸的條帶(strip)進(jìn)行本發(fā)明化合物的活體夕卜活'l"生的i平i^介。(VanAssche,G.;Depoortere,I.;Thijs,T.;Janssens,J.J.;Peeters,T丄.丄尸/zar層co/.1997,337,267-274;Matthijs,G.;Peeters,T.L.;Vantrappen,G.jVaww;/w-Sc/wzet/e6ergkjrc/z.尸/z(2廠m(2co/.1989,339,332-339.)。還可采用對(duì)這類研究的相關(guān)方法。(Tomomasa,T.;Yagi,H.;Kimura,S.;Snape，W.J.,Jr.;Hyman,P.E./W/a/Wci^y.1989,26,458-461;Takamshi，H.;Yogo,K.;Ozaki,M.;Ak腿，M.;Koga,H.;Nabata,H.乂尸/^rw.77^.1995,273,624-628.)。將十二指腸的片段垂直地懸掛在填充有Krebs緩沖液的10mL器官室中并連接至等滲力傳感器(預(yù)負(fù)載1g)。穩(wěn)定階段后，以1()4M乙酰膽堿攻擊肌肉帶并清洗。重復(fù)該步驟直到獲得穩(wěn)定最大收縮(2-3次)，間隔至少20分鐘。到達(dá)穩(wěn)定基線后，將測(cè)試化合物加至該浴。培育15分鐘后，通過(guò)向該浴加入對(duì)數(shù)遞增濃度的促胃動(dòng)素而記錄對(duì)促胃動(dòng)素的劑量響應(yīng)(終濃度10力至1(T6M)。還進(jìn)行空白試驗(yàn)(不存在測(cè)試化合物)。在劑量響應(yīng)曲線的末尾，提供超最大劑量的乙酰膽堿(10—4M),該響應(yīng)用作參考值(100%收縮)。聯(lián)合不同濃度測(cè)試化合物的試驗(yàn)結(jié)果并分析以便從Schild曲線推導(dǎo)出pA2值。E.化療引起腹瀉的動(dòng)物模型可使用合適動(dòng)物模型評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的體內(nèi)效力。大鼠模型已經(jīng)用于評(píng)價(jià)化合物在化療引起的腹瀉(CID)中的效力。(Takasuna,K.;Kasai,Y.;Kitano,Y.等,7/".丄Owce1995,86,978-984;TavakkoHzadeh,A.;Shen,R.;Abraham,P.等,/Swrg.i仏2000,91,77-82;Horikawa,M.;Kato,Y.;Sugiyama.P/^rm.2002,19,1345-1353.)。類似地，小鼠才莫型也已用于測(cè)試用于改善化療劑的胃腸毒性的藥劑。(BousheyRP,YustaB,DmckerDJ.C^mcerA"2001,61,687-93;Zhao,J.;Huang,L.;Belmar,N.;Buelow,R.;Fong,T.C/w.Owe.2004,10,2851-2859.)。此外，已知犬在用普通化療劑治療期間患有腹瀉。(Kawato，Y.;Sekiguchi,M.;Akahane,K.;Tsutomi,Y.;Hirota,Y.;Kuga,H.;Suzuki,W.;Hakusui，H.;Sato,K.丄尸/^肌尸/wr麗co/.1993,45,444-448;Kato,T.;Shimamoto,Y.;Uchida,丄；Ohshimo,H.;Abe,M.;Shirasaka,T.;Fukushima,M.」""c""ceri^s.2001,21,1705-12.)。然而，大鼠和小鼠不具備功能性促胃動(dòng)素受體，不是促胃動(dòng)素拮抗劑的合適動(dòng)物模型，但可用于區(qū)分對(duì)促胃動(dòng)素受體的效應(yīng)和非特異效應(yīng)。犬是合適的^t型物種，因?yàn)樗邆涔δ苄源傥竸?dòng)素受體，此前已用于牽涉促胃動(dòng)素調(diào)節(jié)的研究。適合這種評(píng)價(jià)的其它物種包括倉(cāng)鼠、豬、兔、駒鼠青、豚鼠和負(fù)鼠。此外，與對(duì)大鼠和小鼠描述的方法類似的方法可適于犬科動(dòng)物或其它模型以領(lǐng)'J試本發(fā)明的化合物。因此，本發(fā)明化合物對(duì)犬或其它動(dòng)物模型中腹瀉發(fā)生的頻"犬模^''、'。''、t該研究的目的是確定本發(fā)明代表性大環(huán)化合物在靜脈施用至雄性beagle犬(C""M/a脂7&ra)達(dá)32天后在化療引起的腹瀉(CID)中的效力。與用于該疾患的現(xiàn)有藥劑(奧曲肽和洛哌丁胺)進(jìn)行比專支是另一目標(biāo)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)二十一只(21)初次4妾受實(shí)-驗(yàn)的雄性Beagle犬隨才幾地分配為7組并如下治療表5.治療組<table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table>縮寫IF,靜脈輸注；IV,靜脈彈丸注射；NA,不適用；TA1,伊立替康(對(duì)組1是即用型溶液，對(duì)組2至4、6和7是伊立替康鹽酸鹽)；TA2,化合物552。注意aTAl(伊立替康溶液或伊立替康鹽酸鹽)用于在組1至4、6和7的動(dòng)物引起腹瀉。對(duì)于組1中動(dòng)物，用TA1治療包括三(3)個(gè)循環(huán)循環(huán)1,以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管輸注1小時(shí)施用伊立替康溶液，連續(xù)5天，然后休息9天。循環(huán)2,以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管輸注1小時(shí)施用伊立替康溶液，連續(xù)4天，并在第5天以8mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射(經(jīng)大約1分鐘)施用伊立替康溶液，然后〗木息5天；循環(huán)3,向組l加入一只備用動(dòng)物。以伊立替康鹽酸鹽粉末制備伊立替康制劑，以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射連續(xù)5天向四只動(dòng)物施用。觀察這四只動(dòng)物9天，并在無(wú)食物過(guò)夜階段后處死。對(duì)組2至4、6和7中的動(dòng)物，以4尹立替康鹽酸鹽4分末制備伊立替康制劑，經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射施用達(dá)2個(gè)治療循環(huán)，持續(xù)28-天的研究階段。在每個(gè)治療循環(huán)，以6mg/kg的每日單劑量治療動(dòng)物連續(xù)5天，然后休息9天無(wú)治療。在開始以j尹立替康治療之前(組4)或在開始伊立替康引起的腹瀉后(組2、3、6和7),如下所述地以TA^化合物"2)(組2至4)、奧曲肽(組6)或洛口底丁胺(組7)治療這些動(dòng)物。完成治療/觀察階段和隨后的無(wú)食物過(guò)夜階段后，將所有存活動(dòng)物處死。bTA2(化合物552)經(jīng)由植入的導(dǎo)管在45分鐘內(nèi)輸注施用至組中所有動(dòng)物。如果早上在組中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，以化合物552的治療于腹瀉開始當(dāng)天開始，或如果在下午觀察到腹瀉，則于第二天開始。然后以化合物552的治療持續(xù)28-天研究階段的其余時(shí)間。每曰劑量(即對(duì)組2和3分別為5.0和15.0mg/kg/天)分為2個(gè)相等劑量(即對(duì)組2和3分別為每次2.5和7.5mg/kg)并每天間隔至少6小時(shí)輸注。在每次輸注化合物552之間，動(dòng)物以2.5mL/小時(shí)的速率接受注射用的0.9%氯化鈉(USP)。c以與組2和3相同的程序施用TA2(化合物552)至組中所有動(dòng)物，在開始TA1(伊立替康)治療的4天前開始施用，并持續(xù)28-天研究階段。每曰劑量(5.0mg/kg/天)分為2個(gè)相等劑量(每次2.5mg/kg)并每天間隔至少6小時(shí)輸注。在每次輸注化合物552之間，動(dòng)物以2.5mL/小時(shí)的速率接受注射用的0.9%氯化鈉(USP)。d動(dòng)物媒介物對(duì)照組(5%注射用葡萄糖，USP)中的動(dòng)物以供伊立替康和化合物552用的媒介物治療。伊立替康的媒介物經(jīng)由輸注管以緩慢彈丸注射(大約持續(xù)1分鐘)施用達(dá)兩個(gè)治療循環(huán)。在每個(gè)治療循環(huán)，以每日單劑量治療動(dòng)物連續(xù)5天，然后休息9天?；衔?52的媒介物按照對(duì)化合物552施用的給藥程序施用或施用23天(從第6天至第28天)。e如果早上在組中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則該組中所有動(dòng)物在伊立替康引起的腹瀉開始當(dāng)天皮下注射奧曲肽，或如果在下午觀察到腹瀉，則在第二天皮下注射奧曲肽。在28-天研究階段的其余時(shí)間繼續(xù)該治療。每日劑量(0.021mg/kg/天)分為3個(gè)相等劑量(每次0.007mg/kg)并分別在早上、中午和傍晚由皮下注射施用。每次施用間隔至少4小時(shí)(士30分鐘)。f如果早上在組中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則該組中所有動(dòng)物在伊立替康引起的腹瀉開始當(dāng)天經(jīng)口管飼給藥洛哌丁胺，或如果在下午觀察到腹瀉，則在笫二天經(jīng)口管飼給藥洛哌丁胺。在28-天研究階段的其余時(shí)間保.持該治療。每日劑量(0.18mg/kg/天)分為3個(gè)相等劑量(每次0.06mg/kg)并分別在大約早上、中午和傍晚經(jīng)口管飼施用。每次施用間隔至少4小時(shí)(士30分鐘)。伊立替康(5"e脂.紐;^z力(9wco/ogy1996,23，1l-20)以及洛哌丁胺和奧曲肽(772e0"co/ogzW1998,3,50-53)的劑量水平根據(jù)所述文獻(xiàn)數(shù)據(jù)選擇。制備測(cè)試化合物和對(duì)照以合適的間隔制備測(cè)試化合物、對(duì)照和對(duì)比物。所有將用于施用于測(cè)試動(dòng)物的制劑在2-8。C冷凍儲(chǔ)存。獲得用于靜脈注射的即用型伊立替康無(wú)菌溶液，包含濃度為20mg/mL的三水合伊立替康鹽酸鹽。以5%注射用葡萄糖(USP)稀釋20mg/mL制劑以獲得用于給藥組l(僅循環(huán)1和循環(huán)2)動(dòng)物的伊立替康制劑(0.5mg/mL)。冷凍儲(chǔ)存給藥制劑(2至8°C),避光并在48小時(shí)內(nèi)4吏用。對(duì)于伊立替康的其余治療(即對(duì)組1的循環(huán)3;組2至4;組6和7),從固態(tài)伊立替康(伊立替康鹽酸鹽)制備母液伊立替康制劑并用于制備如下所述的給藥制劑制備媒介物產(chǎn)品注射用無(wú)菌水中4.5。/。山梨醇(w/v)和0.09%乳酸(w/v)采用以下方案。該程序是用于制備10mL。該程序必要時(shí)可放大規(guī)模1.準(zhǔn)確稱量/測(cè)量450mg山梨醇和9mg乳酸并置于合適大小的容器中。'2.向容器逐漸加入注射用無(wú)菌水至終體積的大約90%。充分混合。3.測(cè)量pH。如有必要，以氬氧化鈉和/或鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0-3.8。4.定量加足至終體積。充分混合。制備伊立替康母液制劑(IOmg/mL)采用以下方案1.準(zhǔn)確稱量合適量的伊立替康鹽酸鹽并置于合適大小的無(wú)菌容器中。2.將合適體積的媒介物溶液(終體積的大約90%)加至測(cè)試物粉末。在攪拌盤上混合直到伊立替康鹽酸鹽完全溶解。可使用水浴(即45-55°C)或短時(shí)超聲處理以幫助溶解。3.測(cè)量pH。如有必要，以氫氧^i鈉和/或鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0-3.8。4.定量加足至終體積。充分混合。5.以上溶液以0.22)im濾器無(wú)菌過(guò)濾至無(wú)菌容器。獲得雙份樣品(各1.0mL)并冷凍儲(chǔ)存(大約-80C)直到運(yùn)輸。制備后如果不立即使用，將母液冷凍儲(chǔ)存(2-8。C),并在制備一周內(nèi)使用。6.以5%注射用葡萄糖(USP)稀釋母液制劑而獲得用于對(duì)動(dòng)物給藥的制劑。冷凍儲(chǔ)存給藥制劑(2至8。C),避光并在48小時(shí)內(nèi)使用。奧曲肽提供為無(wú)菌凍干粉劑并以注射用無(wú)菌水重構(gòu)以產(chǎn)生母液(IOmg/mL)。冷凍儲(chǔ)存(2至8。C)母液。在給藥的每天，以注射用無(wú)菌水稀釋母液至終濃度為O.lmg/mL。洛，派丁胺鹽酸鹽溶解于注射用鹽水以產(chǎn)生終濃度為O.lmg/mL的洛，派丁胺石咸(注意1g洛，派丁胺鹽酸鹽=0.929g洛哌丁胺堿。對(duì)制劑制備使用1.076的校正因子)。每周制備洛哌丁胺鹽酸鹽溶液。化合物552配制為10%的羥基丙基^-環(huán)糊精(97%)水溶液。為了驗(yàn)證制劑中測(cè)試物的濃度，研究期間以合適的間隔收集代表性樣品(雙份1.0mL,除了奧曲肽僅各收集0.1mL)。測(cè)試動(dòng)物從供應(yīng)商(例如MarshallBioResources,NorthRose,NewYork)獲得共21只雄性動(dòng)物和2只備用雄性，在治療開始時(shí)5至7個(gè)月大，在治療開始時(shí)重6-9kg。收到動(dòng)物和開始治療之間使動(dòng)物習(xí)慣新環(huán)境，以使犬在開始研究前習(xí)慣實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，對(duì)組1大約3周，對(duì)組2至4大約5周，對(duì)組5至7大約3周。每只犬圈養(yǎng)在裝有適當(dāng)?shù)匮a(bǔ)充水瓶的自動(dòng)供水系統(tǒng)的不銹鋼籠中。每個(gè)籠用表示研究、組和動(dòng)物數(shù)目、性別和劑量水平的彩色編碼籠卡清楚地標(biāo)注。供應(yīng)商將每只動(dòng)物獨(dú)特地以一個(gè)耳廓腹面上紋身標(biāo)記。除了在指定程序期間以外，控制動(dòng)物室內(nèi)環(huán)境(目標(biāo)范圍溫度21士3。C,相對(duì)濕度50±20%,12小時(shí)光照，12小時(shí)黑暗，每小時(shí)更換空氣10-15次)。連續(xù)地監(jiān)控溫度和相對(duì)濕度，每天記錄4次。在最少2小時(shí)但最多4小時(shí)的喂食階段每天一次地向每只犬提供標(biāo)準(zhǔn)合格的商品犬食(chow)(例如400gTeklad合格的25%LabDogDiet#8727C)。在適應(yīng)環(huán)境期間，使動(dòng)物緩慢適應(yīng)2小時(shí)喂食方案。制造商控制并常規(guī)地測(cè)量飲食中各組成成分和污染物(如重金屬、黃曲霉毒素、有機(jī)磷酸鹽、殺蟲劑和氯化烴)的濃度。除了在指定程序期間以外，向動(dòng)物隨意提供市政自來(lái)水(已用反滲透和紫外光純化，并經(jīng)0.2pm濾器進(jìn)一步過(guò)濾)。準(zhǔn)備動(dòng)物在預(yù)治療階段，在開始治療前大約2-3周將所有犬準(zhǔn)備進(jìn)行手術(shù)。手術(shù)程序的前夜對(duì)這些動(dòng)物禁止進(jìn)食，在手術(shù)的早上移去水以插入靜脈導(dǎo)管。對(duì)犬肌內(nèi)注射預(yù)-麻醉混合物(cocktail)(如布托啡諾、乙酰丙溱和甘羅溴4妄)以準(zhǔn)備手術(shù)位點(diǎn)。手術(shù)前和手術(shù)期間，由吸入異氟烷而麻醉動(dòng)物。靜脈導(dǎo)管由一段醫(yī)用級(jí)管組成，插入大腿靜脈并進(jìn)入腔靜脈。在頸背使用套管針使得導(dǎo)管外向化，產(chǎn)生從鼠蹊部區(qū)域至背-頸部區(qū)域的皮下通道。從麻醉恢復(fù)期間，給每只動(dòng)物穿上干凈的外罩。導(dǎo)管由外罩和拴系系統(tǒng)連接至旋轉(zhuǎn)裝置，由另一段醫(yī)用級(jí)管連接至注射器。泵和儲(chǔ)器容納在特殊設(shè)計(jì)的盒子里，盒子放在籠外面。手術(shù)前一天和手術(shù)后2天，每只犬預(yù)防性地接受肌內(nèi)注射抗生素(例如千星青霉素G和普魯卡因青霉素G)。需要時(shí)每天一次對(duì)手術(shù)位點(diǎn)施加局部殺菌劑。在整個(gè)研究階段，每天檢查位于頸背部的導(dǎo)管出口位點(diǎn)。當(dāng)必要時(shí)，刮凈該位點(diǎn)，除去碎片并涂以局部殺菌劑/抗生素。每月更換外罩，或如果認(rèn)為必要?jiǎng)t更頻繁地更換。從手術(shù)恢復(fù)后，動(dòng)物以2.5mL/h的速率接受注射用0.9%氯化鈉(USP),直到開始輸注化合物552。在預(yù)治療階段期間以合適頻率更換包含生理鹽水溶液的注射器/包。施用測(cè)試、對(duì)照/J某介物和對(duì)比物對(duì)于組1中的動(dòng)物，用測(cè)試物No.l(伊立替康)治療由三(3)個(gè)循環(huán)組成循環(huán)1,以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管輸注1小時(shí)施用伊立替康，連續(xù)5天，然后休息9天。循環(huán)2，以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管輸注1小時(shí)施用伊立替康，連續(xù)4天，并在第5天以8mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射(經(jīng)大約1分鐘)施用伊立替康，然后休息5天；循環(huán)3,向組l加入一只備用動(dòng)物。以伊立替康鹽酸鹽粉末制備伊立替康制劑，以4mg/kg/天的劑量水平經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射連續(xù)5天向四只動(dòng)物施用。對(duì)組2至4、6和7中的動(dòng)物，以伊-立替康鹽酸鹽粉末制備伊立替康制劑，經(jīng)植入的導(dǎo)管彈丸注射施用達(dá)2個(gè)治療循環(huán)，持續(xù)28-天的研究階段。在每個(gè)治療循環(huán)，以6mg/kg的每曰單劑量治療動(dòng)物連續(xù)5天，然后休息9天無(wú)治療。對(duì)組5中所有犬施用伊立替康的對(duì)照/媒介物，按照施用伊立替康的相同給藥程序施用。對(duì)組1的循環(huán)1和循環(huán)2前4天的劑量體積為8mL/kg，對(duì)組1循環(huán)2最后一天的為2mL/kg，對(duì)組2至4、6和7為3mL/kg。計(jì)算輸注至每只犬的實(shí)際體積并根據(jù)每只動(dòng)物的最近實(shí)際體重調(diào)整。在開始TA1(伊立替康)治療前4天和在整個(gè)28天研究階段，測(cè)試物No.2(化合物552)經(jīng)由植入的導(dǎo)管靜脈輸注施用至組4中所有動(dòng)物持續(xù)45分鐘。遵循同樣的給藥方案，如果早上在組中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則在伊立替康引起的腹瀉開始當(dāng)天施用TA2(化合物552)于組2和3的所有動(dòng)物，或如果下午在組中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則在第二天施用，并持續(xù)于28-天研究階段的其余時(shí)間。每日劑量(即對(duì)組2至4分別為5.0、15.0和5.0mg/kg/天)分為2個(gè)相等劑量(即對(duì)組2至4分別為每次2.5和7.5和2.5mg/kg)并間隔至少6小時(shí)輸注。每個(gè)劑量以10mL/kg/h的劑量體積輸注。按照對(duì)化合物552施用的相同給藥程序和方案向組5所有犬施用化合物552的J某介物達(dá)23天(從第6天至第28天)。計(jì)算輸注的實(shí)際體積并根據(jù)每只動(dòng)物的最近實(shí)際體重調(diào)整。必要時(shí)以合適間隔更換注射器/包，在開始輸注前和輸注結(jié)束時(shí)記錄重量。如果早上在組6中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則該組中所有動(dòng)嚇在腹瀉開始當(dāng)天開始皮下注射施用奧曲肽，或如果下午在組6中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則在腹瀉開始第二天開始皮下注射奧曲肽。在28-天研究階段的其余時(shí)間繼續(xù)該治療。每日劑量(0.021mg/kg/天)分為3個(gè)相等劑量(每次0.007mg/kg)并分別在大約早上、中午和傍晚由皮下注射施用。每次施用間隔至少4小時(shí)(±30分鐘)。每次施用的劑量體積為0.07mL/kg。計(jì)算實(shí)際劑量體積并根據(jù)每只動(dòng)物的最近實(shí)際體重調(diào)整。如果早上在組7中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則該組中所有動(dòng)物在腹瀉開始當(dāng)天開始以經(jīng)口管伺施用洛哌丁胺，或如果下午在組7中3只動(dòng)物的任何一只觀察到腹瀉，則在腹瀉開始第二天開始經(jīng)口管飼洛哌丁胺。在28-天研究階段的其余時(shí)間保持該治療。每日劑量(0.18mg/kg/天)分為3個(gè)相等劑量(每次0.06mg/kg)并分別在大約早上、中午和傍晚經(jīng)口管飼施用。每次施用間隔至少4小時(shí)(土30分鐘)。每次施用的劑量體積為0.6mL/kg。計(jì)算實(shí)際劑量體積并根據(jù)每只動(dòng)物的最近實(shí)際體重調(diào)整。在研究的治療階段，通過(guò)以2.5mL/h的速率在每次伊立替康、化合物552或々某介物治療之間輸注注射用0.9%氯化鈉USP而維持每只動(dòng)物中的輸注線。在適應(yīng)環(huán)境期間，除了在詳細(xì)臨床片全查天以外，每天記錄兩次籠側(cè)(Cage-side)臨床跡象(不健康、行為改變、糞便變化等)。在治療/觀察階段，除了在詳細(xì)臨床檢查天(記錄1次(PM))以外，每天記錄兩次(am和pm)籠側(cè)臨床跡象。預(yù)治療時(shí)一次、在治療/觀察期間每周一次和處死前對(duì)每只犬進(jìn)行詳細(xì)臨床檢查。對(duì)手術(shù)位點(diǎn)給予特別關(guān)注。在初次伊立替康治療前一周和在整個(gè)28-天研究期間每天兩次記錄糞便稠度的觀察結(jié)果并如下分級(jí)表6.糞便稠度的觀察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table>只要有可.能，每天記錄嘔吐和排泄(discharges)的次數(shù)、腹瀉嚴(yán)重度以及糞便稠度。腹瀉-引起的脫水癥狀由輸注Rmger溶液治療，由獸醫(yī)處置。分配組之前和在開始治療前大約一周對(duì)所有動(dòng)物記錄一次體重。在給藥前最多1天和其后在治療/觀察階段每周兩次以及在處死(禁食)前最后對(duì)所有動(dòng)物記錄體重。在治療前的星期和在整個(gè)治療/觀察階段每天測(cè)量食物消耗。在以化合物552治療第一天的第一次(am)輸注后和在以化合物552治療最后一天的第二次(pm)輸注后，從組2和3的每只犬獲取一系列血液樣品(各大約2.0mL)。(注意在以化合物治療第一天的第二次(pm)輸注在完成最后一次取血后進(jìn)行)。為了此目的，靜脈穿剌使每只犬流血，將樣品收集到包含抗凝血?jiǎng)㎏2EDTA的試管。將試管置于濕水上直到處理。每次在開始輸注前、開始輸注化合物552后5、15、30、45、50、65、95、135分鐘、3和6小時(shí)收集樣品。收集后，以大約1500xg在大約4。C離心樣品至少10分鐘，回收所得的血漿，分為兩等份并冰凍儲(chǔ)存(在大約-80°C)直到運(yùn)輸。將研究進(jìn)行過(guò)程中獲得的數(shù)值數(shù)據(jù)進(jìn)行組平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算，并與所有單獨(dú)數(shù)值和非數(shù)值結(jié)果一起報(bào)告。使用LeveneMedmn分析數(shù)據(jù)的方差齊性，使用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)的正態(tài)性。使用方差分析來(lái)分析同類數(shù)據(jù)，使用Dunnett's檢測(cè)分析組間差異的顯著性。使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析異類數(shù)據(jù)，并使用Dunn's檢驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)照和治療組之間組間差異的顯著性。報(bào)道了p^O.05的顯著性水平。結(jié)果如圖19所示，化合物552作為強(qiáng)效和選擇性促胃動(dòng)素拮抗劑，在犬中伊立替康引起的CID治療中顯示了比現(xiàn)有護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)更高的效力。證明該化合物更有效，作用開始更快以及持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。作為上述試驗(yàn)的部分，確定了接受低和高靜脈劑量的化合物552的雄性beagle犬中化合物552的血漿濃度。制備用于固相萃取分析的血漿樣品并用LC-MS/MS分析。對(duì)于接受2.5mg/kg的動(dòng)物，在以化合物552治療的第一天和最后一天，開始45-mm輸注后的30mm觀察到的平均C皿x分別為約1.5和1.8昭/mL。對(duì)于施用7.5mg/kg的高劑量組觀察到平均Cmax發(fā)生在開始45-min輸注后的15和45mm之間，在以化合物552治療的第一天和最后一天分別為約3.4和5.0pg/mL。對(duì)^^劑量組(每次2.5mg/kg)，在給藥的第一天(78,233ng.mm/mL)和最后一天(83,047ng.mm/mL)的平均AUCo-t相近，對(duì)高劑量組(每次7.5mg/kg),在給藥的第一天的平均AUCo-t(246,073ng.mm/mL)成比例地更高。對(duì)高劑量組在給藥最后一天的平均AUC(m(380,758ng.mm/mL)更高，然而更高的平均值是由于一只動(dòng)物表現(xiàn)出特別高的AUQ)-t。血漿濃度數(shù)據(jù)證實(shí)了在CID效力研究期間beagle犬中對(duì)化合物552劑量-相關(guān)的暴露。在這些模型中也可采用其它治療方案來(lái)引起腹瀉。F.細(xì)月包色素P450^卩制的測(cè)定細(xì)胞色素P450酶牽涉在藥物的I期代謝中。大多數(shù)藥物間相互作用是基于代謝的，而且這些相互作用通常涉及抑制細(xì)胞色素P450。6種CYP450酶(CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)表現(xiàn)為通常負(fù)責(zé)大多數(shù)藥物的代謝和相關(guān)的藥物間相互作用。確定本發(fā)明化合物對(duì)細(xì)胞色素P450代謝酶的各種代謝上重要的異構(gòu)型的結(jié)合的測(cè)定裝置是商業(yè)上可獲得的，例如NoAbBioDiscoveries(Mississaugua,ON,Canada)和AbsorptionSystems(Extern,PA,USA)。同樣，文獻(xiàn)中已描述或綜述了大量合適方法。(White，R.E.爿朋.Wev.尸/zarmaco/,7b;oco/.2000,40,133-157;Li,A.P./>wg.Z)"'c.Zb勿2001,6,357-366;Turpemen,M.;Korhonen,L.E.Tolo腦,A.等,/.尸/2,.S".2006,29,130-138.)試-驗(yàn)方法的關(guān)4建方面如下測(cè)定在從表達(dá)單獨(dú)人類CYP-450亞型的昆蟲細(xì)胞制備的微粒體(Supersomes,BDGentest,Becton-Dickinson)上進(jìn)行,具體地匿CYP亞型1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1、3A4-對(duì)CYP-3A4通常測(cè)試兩種底物，由于這種酶表現(xiàn)出復(fù)雜的抑制動(dòng)力學(xué)測(cè)定由熒光檢測(cè)監(jiān)控微粒體與特定CYP底物培育后萸光代謝物的形成。以雙份樣品，在8個(gè)測(cè)試濃度《吏用3倍連續(xù)稀考奪(濃度范圍0.0457至100)iM)測(cè)試本發(fā)明化合物。對(duì)每種CYP-450酶，以雙份在8個(gè)濃度測(cè)試特定抑制劑作為陽(yáng)性對(duì)照。50%抑制代謝物形成的抑制劑或測(cè)試化合物濃度(IC50)由非線性回歸分析抑制百分比vs.對(duì)數(shù)濃度(M)曲線計(jì)算。本發(fā)明代表性化合物的結(jié)果概述于表5。表7.本發(fā)明代表性化合物的兔十二指腸可收縮測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage115</column></row><table>"吉合活性如下表示A^10nM、B^lOOnM、C^1000nM、D>1000nMG.血漿蛋白質(zhì)結(jié)合藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征很大程度上是藥物與血漿或血清蛋白質(zhì)(如白蛋白和a!-酸糖蛋白)可逆結(jié)合的函數(shù)。通常，只有未結(jié)合的藥物可用于擴(kuò)散或運(yùn)輸穿過(guò)細(xì)胞膜并與藥理學(xué)目標(biāo)相互作用。另一方面，血漿蛋白質(zhì)結(jié)合低的藥物通常具有大體積的分布和快速清除，因?yàn)橹挥形唇Y(jié)合的藥物可用于血管小球過(guò)濾和在一些情況可用于肝清除。因此血漿蛋白質(zhì)結(jié)合的程度可影響效力、分布和排泄。對(duì)大多數(shù)藥物產(chǎn)品，血漿蛋白質(zhì)結(jié)合的理想范圍是87-98%。使用人類血漿進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)合研究。筒略地，使用96-孔微孔板來(lái)在37。C培育不同濃度的測(cè)試物60mm。結(jié)合和未結(jié)合級(jí)分由平tf透析分離，其中保持在未結(jié)合級(jí)分中的濃度由LC-MS或LC-MS-MS分析定量。具有已知血漿蛋白質(zhì)結(jié)合值的藥物如奎寧(35%)、華法林(~98%)和萘普生(~99.7%)用作參考對(duì)照。本發(fā)明代表性化合物的結(jié)果概述于表6。表8:本發(fā)明代表性化合物對(duì)CYPP450同工酶的抑制化<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>an/a表示IC5o值遠(yuǎn)高于lOO)iMH.確定Caco-2滲透性書亍生自人類結(jié)腸直腸癌的Caco-2細(xì)月包系已成為用于預(yù)測(cè)藥物^爭(zhēng)人腸吸收的確認(rèn)的體外模型。(Sun,D.;Yu,L.X.;Hussain,M.A.;Wall,D.A.;Smith,R.L.;Amidon,G.L.Cwtt.Z>wgDmcov.Z)eve/.2004,7,75-85;Bergstrom,C.A.i(XS7'cC7z力.尸/2a環(huán)ac0/.7"cucz'co/.2005,96,156-61;Balimane,P.V.;Han,Y.H.;Chong,S.A4尸SJ.2006,8,El-13;Shah,P.;Jogani,V.;Bagchi，T.;Misra,A.Bzofec/wo/.2006,22,186-198)。在半透膜上培養(yǎng)時(shí)，Caco-2細(xì)胞分化為高度功能化的上皮屏障，與小腸柱狀上皮具有顯著的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)相似性。完全分化的細(xì)胞單層可用于評(píng)估新型化合物的膜運(yùn)輸特征。此外，從Caco-2細(xì)胞運(yùn)輸研究獲得的表觀滲透性系數(shù)(P叩p)已顯示出與人類腸吸收合理地相互關(guān)聯(lián)。使用Caco-2細(xì)胞確定本發(fā)明化合物滲透性的測(cè)定是商業(yè)上可獲得的,例如NoAbBioDiscoveries(Mississaugua,ON,Canada)禾口AbsorptionSystems(Exton,PA，USA)?；蛘呤?，平行人造膜滲透性測(cè)定(PAMPA)可用于評(píng)估腸滲透性。(Avdeef,A.ix/erfMeto6.rox/co/.2005,1，325-42.)方法由在置于兩個(gè)(供體和受體)室之間的膜上生長(zhǎng)細(xì)胞來(lái)確定跨Caco-2細(xì)胞層的滲透性。通常將候選藥物加至細(xì)胞層的頂(A)側(cè)，隨著培養(yǎng)時(shí)間測(cè)量它們?cè)诨淄鈧?cè)(B)的出現(xiàn)。這個(gè)方向的滲透性代表腸吸收。還可確定從Caco-2細(xì)胞的基底外側(cè)至頂側(cè)的滲透性。頂至基底外側(cè)Papp比基底外側(cè)至頂Papp高表示載體介導(dǎo)的運(yùn)輸。當(dāng)觀察到基底外側(cè)至頂P卿相對(duì)于頂至基底外側(cè)Papp高時(shí)表示P-gp介導(dǎo)的運(yùn)輸。雙份試樣測(cè)試本發(fā)明的化合物在頂至基底外側(cè)和基底外側(cè)至頂方向的滲透性(IO^M)。開始時(shí)(Omm)和隨后在37。C培育的60mm內(nèi)從供體室和受體室收集樣品，在-70。C冷凍儲(chǔ)存直到生物分析。Caco-2滲透性測(cè)定產(chǎn)生的每種測(cè)試化合物的樣品進(jìn)一步用LC-MS-MS分析。平行確定[3司-甘露醇和[3司-普萘洛爾的滲透性作為對(duì)照。每種化合物和放射標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品的滲透性系數(shù)(Papp)使用以下等式確定P叩p:^Qx1/CiX1/AdT其中dQ/dT代表滲透率，d表示供體室中初始濃度，A表示濾器表面積。從加入至供體室之前取得的重復(fù)樣品的平均濃度確定d。將受體室中測(cè)量的化合物累積量對(duì)時(shí)間繪圖并以線性回歸分析確定曲線斜率而計(jì)算滲透率。對(duì)每種化合物和標(biāo)準(zhǔn)品報(bào)告重復(fù)和平均的頂至基底外側(cè)和基底外側(cè)至頂Papp。本發(fā)明代表性化合物的結(jié)果概述于表7。表9:本發(fā)明代表性化合物的Caco-2滲透性測(cè)定化合物PappA至Bcm/secxl0"6PappB至Acm/secxlO"6B至A/A至B5025112508155511151715120,3113751539353119181S54151815805715902116I.本發(fā)明代表性化合物的藥代動(dòng)力學(xué)分析本發(fā)明化合物的藥代動(dòng)力學(xué)行為可由本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法確定。(Wilkinson,G.R."Pharmacokinetics:TheDynamicsofDrug117Absorption,Distribution,andElimmation(藥代動(dòng)力學(xué)藥物吸收、分布和葉非泄的動(dòng)力學(xué))"在Goofimaw&T7ze尸/2arw"co/ogzca/j5<xs7'so/T7zera/^w"a(治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)),第十版，Hardman,J.G.;Limbird,L.E.,Eds.,McGmwHill,Columbus,OH,2001，第1章.)。如下方法用于研究本發(fā)明化合物靜脈、皮下和口服施用的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(消除半衰期、總血漿清除等)。收集血漿大鼠雄性，Sprague-Dawley(250g)大鼠/治療組6(2個(gè)亞組，各3只大鼠，交替取血)測(cè)試化合物的每個(gè)樣品以適合給藥的制劑(如與環(huán)糊精)"溶^提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明白，需要時(shí)可對(duì)本方案進(jìn)行合適的修改以適當(dāng)?shù)販y(cè)試所分析化合物的特4正。典型劑量1.靜脈(i.v.):2mg/kg2.皮下(s.c):2mg/kg3.口月l(p.o.):8mg/kg表10:代表性靜脈血液取樣計(jì)劃。<table>tableseeoriginaldocumentpage118</column></row><table>表ll:代表性皮下和口H血液取樣計(jì)劃。<table>tableseeoriginaldocumentpage118</column></row><table>血漿收集1.所有給藥組相同方案2.對(duì)每組，2亞組(A和B)3只大鼠/亞組以上述的時(shí)間間隔，從每只動(dòng)物收集0.7mL血液。預(yù)期該體積的血液將產(chǎn)生至少0.3mL血漿樣品。使用EDTA作為全血收集用的抗凝劑。冷凍全血樣品，立即離心處理以獲得血漿。冷凍儲(chǔ)存血漿樣品(-70。C)直到分析。以合適制備方案由LC-MS在血漿樣品中進(jìn)行母體化合物的分析檢測(cè)使用固相萃取(SPE)柱(OasisMCX,OasisHLB)或液-液萃取來(lái)萃取。HPLC-MS方法柱來(lái)自Waters的AtlantisdC18,2.1x30mm流動(dòng)相A:95%MeOH,5%水，0.1%TFAB:95%水，5%MeOH，0.1%TFA流速0.5mL/min梯度(線性)<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table>基于標(biāo)準(zhǔn)曲線和用內(nèi)標(biāo)^驗(yàn)證的方法測(cè)定分析物。表12.本發(fā)明代表性化合物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table>ai.v二靜脈(10個(gè)時(shí)間點(diǎn)持續(xù)150mm);s.c.二皮下(10個(gè)時(shí)間點(diǎn)持續(xù)360min),p.o=口服(10個(gè)時(shí)間點(diǎn)持續(xù)240mm)b肌=不適用c10%(3-環(huán)糊精存在下進(jìn)行d無(wú)環(huán)糊精下進(jìn)行對(duì)化合物502、552和563時(shí)間過(guò)程的結(jié)果提供于圖13A-13G。J.評(píng)價(jià)從駒歸胃、十二指腸和結(jié)腸分離的肌肉帶的可收縮活性。此前的研究已證實(shí)促胃動(dòng)素在從兔胃竇(VanAssche,G.;Depoortere:I.;Thijs,T.;Janssens,J.J.;Peeters,T丄.Concentration-dependentstimulationofcholinergicmotornervesorsmoothmuscleby[Nle]-motilinmtheisolatedrabbitgastricantrum(分離的兔胃竇中[Nle^-促胃動(dòng)素濃度依賴性地刺激膽堿能運(yùn)動(dòng)神經(jīng)或平滑肌).E丄尸/zwwaco/.1997,337,267-274.)或從十二指腸環(huán)肌(如上在方法3-D中所述的)分離的平滑肌帶中刺激可收縮活性。促胃動(dòng)素(閾值濃度10—8M)通過(guò)與膽堿能神經(jīng)傳遞的神經(jīng)節(jié)后相互作用增強(qiáng)由電場(chǎng)刺激(4Hz)引起的收縮。在更高濃度，促胃動(dòng)素導(dǎo)致直接與竇平滑肌相互作用的強(qiáng)直性收縮。類似地研究了促胃動(dòng)素和[Nle13]-促胃動(dòng)素(Calbiochem)作為促胃動(dòng)素受體的選擇性激動(dòng)劑，對(duì)從駒鼯的胃竇、十二指腸的環(huán)肌和結(jié)腸分離的平滑肌帶的效力。免疫化學(xué)研究已顯示麝駒GI道中的內(nèi)分泌細(xì)胞表達(dá)促胃動(dòng)素(Kanamon,Y.;Nakazawa，S.;Kitoh,J.;Hoshino,M.Thedistributionofendocrinecellsinthemucosaofthegastrointestinaltractofthehousemuskshrew,Sw"cws(Insectivora)(內(nèi)分泌細(xì)胞在家養(yǎng)麝駒(臭駒)(食蟲類)胃腸道粘膜中的分布).Ce〃.T"mwe1989,258,365-71;Kitamura,N.;Yamada,J.;Watanabe,T.;Yamashita,T.Animmunohistochemicalstudyonthedistributionofendocrinecellsinthegastrointestinaltractofthemuskshrew,5"麗cmmwrww(對(duì)內(nèi)分泌細(xì)胞在麝駒(臭鼠句)胃腸道中分布的免疫化學(xué)研究).歷Wo///w^w^o/.1990,5,83-88.)。對(duì)駒鼯禁食8-10h,吸入C02處死，立即分離胃、十二指腸和結(jié)腸并置于充有95%02和5%C02的Krebs緩沖液中。具體地，使用解剖顯微鏡從竇區(qū)、十二指腸和結(jié)腸分離無(wú)粘膜的環(huán)肌帶。使用PowerLab數(shù)據(jù)獲取系統(tǒng)在最優(yōu)張力平衡后記錄器官浴中的等長(zhǎng)收縮。電場(chǎng)刺激(EFS:0.5ms脈沖時(shí)間、1-32Hz脈沖頻率)用于引起神經(jīng)介導(dǎo)的收縮。尤其是，對(duì)每種動(dòng)物制備四個(gè)結(jié)腸段(10-12mm)。將各段以1g初始張力懸掛在10-mL器官浴中并平衡90mm。進(jìn)行試驗(yàn)以研究促胃動(dòng)素和^^13]-促胃動(dòng)素(10-9-10-7M):a)對(duì)基礎(chǔ)緊張性和發(fā)展自發(fā)相位收縮的效力；b)對(duì)EFS引起的神經(jīng)介導(dǎo)的可收縮響應(yīng)的效力。在0.3的浴濃度施加的促胃動(dòng)素或[Nle"]-促胃動(dòng)素引起的收縮作用在治療的前4mm內(nèi)達(dá)到最大值并在8-10min內(nèi)降低。結(jié)果證實(shí)促胃動(dòng)素受體牽涉在駒鼯GI肌肉收縮性的調(diào)節(jié)中。為了確定測(cè)試化合物對(duì)駒歸GI道不同區(qū)域(胃竇、回腸和結(jié)腸)的效力并評(píng)價(jià)測(cè)試化合物在該模型系統(tǒng)中的拮抗親合性，在如上述的器官浴中測(cè)量不同濃度的測(cè)試化合物拮抗促胃動(dòng)素或[Nle"]-促胃動(dòng)素引起的收縮的能力。如圖18所示，化合物552劑量依賴性地抑制促胃動(dòng)素和[Nle"]促胃動(dòng)素活化促胃動(dòng)素受體在從齣鼯分離的結(jié)腸段中引起的收縮?；衔?52(0.01)iM-lO)iM)導(dǎo)致劑量依賴性地抑制對(duì)0.3jiM促胃動(dòng)素或0.3pM[Me"]-促胃動(dòng)素的收縮性響應(yīng)。對(duì)每個(gè)試驗(yàn)，數(shù)據(jù)是平均值士SEM,動(dòng)物的數(shù)目如對(duì)每個(gè)治療所指出的?；衔?52未引起基礎(chǔ)可收縮活性的顯著變化(數(shù)據(jù)未顯示)。K.應(yīng)激引起的腹瀉或PGEr引起的腹瀉的動(dòng)物模型的(尤其是應(yīng)激或PGE2引起的)腹瀉癥狀的緩解或預(yù)防發(fā)展的效力。由于大鼠和小鼠不表達(dá)促胃動(dòng)素受體，麝駒(臭駒(Sw"cmmwm2^))是一種表達(dá)促胃動(dòng)素受體并適于這種研究的合適動(dòng)物模型。此外，負(fù)鼠、兔或豬也是這類評(píng)價(jià)的合適動(dòng)物模型。動(dòng)物本研究中使用實(shí)驗(yàn)室麝駒(臭駒)。麝駒不群居，放在一起時(shí)具有攻擊性行為，因此將動(dòng)物單獨(dú)圈養(yǎng)在樹脂玻璃籠，籠中有松樹刨花和碎紙作為床(合適處理禾呈序參見Temple,J丄.Themuskshrewwwr/聰力amodelspeciesforstudiesofnutritionalregulationofreproduction(麝駒(臭駒)用于研究營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)生殖的模式物種)./Z^4WJ.2004,45,25-34)。整個(gè)研究中溫度保持在70-72°F,保持14:10h的光121亮黑暗周期。由于駒鼯在黎明和黃昏時(shí)最活躍，在光亮階段的第一個(gè)小時(shí)內(nèi)開始試驗(yàn)。根據(jù)物種需求隨意提供食物和水食物3份普瑞納貓糧和1份貂糧(例如Wisconsin"MmkCompletePellets-Grow-Fur":粗蛋白質(zhì)<34%、粗脂肪>20%、粗纖維〉4%)。食物放在籠中小塑料盤里。水略酸性(pH5.5)蒸餾水，以減少自來(lái)水供應(yīng)的污染。每周更換籠和水瓶。開始研究前使所有動(dòng)物習(xí)慣于動(dòng)物場(chǎng)所至少1周。實(shí)-驗(yàn)i殳計(jì)和方法首先，獲得關(guān)于駒歸正常食物攝取量和糞粒排量的信息。使動(dòng)物適應(yīng)于處理，在12只駒鼯的組中測(cè)量每日食物攝取量和糞粒排量。將動(dòng)物帶至實(shí)驗(yàn)室它們的圈養(yǎng)籠中，并停留3h。在此時(shí)間，將每只動(dòng)物帶出籠并用折疊毛巾覆蓋。輕輕按壓并提升背部頂部的皮膚以模擬用于施用皮下注射的步驟。然后動(dòng)物回到圏養(yǎng)籠中，隨后排糞2h。當(dāng)建立PGE2-引起的排便模型時(shí)，該數(shù)據(jù)用作對(duì)初次接受試驗(yàn)的動(dòng)物的參考。適應(yīng)處理時(shí)，將駒鼯隨機(jī)分為兩組(每組n-6)并經(jīng)過(guò)不同步驟以引起表明腹瀉的糞粒排量。在第一組，在室溫將駒鼯置于單獨(dú)約束籠1h。在抑制活動(dòng)的1h期間和束縛應(yīng)激后1h內(nèi)測(cè)量糞便排量(粒數(shù))。使用3級(jí)評(píng)分系統(tǒng)評(píng)價(jià)稠度0,正常；1,軟；2無(wú)定形。(Saito,T.;Mizutani，F(xiàn).;Iwanaga,Y.;Morikawa，K.;Kato,H.Laxativeandanti-diarrhealactivityofpolycarbophilinmiceandrats(纟爰瀉藥和聚卡波非在小鼠和大鼠中的抗腹瑪活性).J/w.J.尸/z"rmaco/.2002,89,133-141.)。在第二組，施用PGE2(0.3mg/kg,i.p.)引起糞便排量增加并監(jiān)測(cè)糞便稠度變化2小時(shí)。使用3級(jí)評(píng)分系統(tǒng)評(píng)價(jià)糞便稠度。根據(jù)Saito對(duì)小鼠獲得的文獻(xiàn)結(jié)果，應(yīng)在PGE2給藥后15-30mm內(nèi)產(chǎn)生軟或無(wú)定形糞便。還記錄了從PGE2施用到引起腹瀉(首次出現(xiàn)軟的水樣糞便)所測(cè)量的時(shí)間。此外，在施用PGE2或約束之前和之后測(cè)量糞粒的濕重/干重比。為了研究測(cè)試化合物或其媒介物對(duì)束縛應(yīng)激引起的加速排便(作為應(yīng)激引起的腹瀉的模型)的影響，動(dòng)物(每劑量水平8只)以測(cè)試化合物(0.1、1和10mg/kgs.c.或其它合適劑量和施用方式)或媒介物治療。在室溫將動(dòng)物置于單獨(dú)約束籠中1h,如上所述地測(cè)量糞便排量。試驗(yàn)前讓動(dòng)物自由獲取食物和水。為了研究測(cè)試化合物或其媒介物對(duì)PGE2-引起的腹瀉的效力，將動(dòng)物隨機(jī)分為8組，每組以測(cè)試化合物(O.l、1和10mg/kgs.c.或其它適合劑量和施用方式)或媒介物治療。施用PGE2(0.3mg/kg,i.p.)而引起腹瀉并如上評(píng)價(jià)糞便稠度的變化。讓動(dòng)物習(xí)慣于環(huán)境，自由獲取食物和水。統(tǒng)計(jì)分析所有〗直表示為對(duì)每個(gè)治療組的8次成功試驗(yàn)的平均值士SE。由單向ANOVA和Dunnett's多重比較檢驗(yàn)(與媒介物對(duì)照的差異)確定值的統(tǒng)計(jì)顯著性。認(rèn)為〈5y。(pO.05)的概率是顯著的。L.炎癥的動(dòng)物模型大量炎癥(尤其是GI道炎性疾病和病癥)的動(dòng)物才莫型已在本領(lǐng)域中充分建立并可用于評(píng)價(jià)本發(fā)明代表性化合物對(duì)治療胃腸炎癥的效力。(Wirtz,S.;Neurath,M.F.Int.J.Co/,""/.Dw.2000,15,144-160;Powne,F.;Ulbig,H.tV歸W"'5>年2004,263,164-178;J，s,A.R.;Khoury,N.N.;Reimund,J.-M.尸/zar廳co/.r。;a'co/.A/"/zotfe2004,50,81-92;Eckmann,L.^肌iVnd2006,1072,28-38;Byrne,F.R.;Viney,J.L.Cw/r.(9/z>./>wgZ)&c.Deve/op.2006,9,207-217.)。4.藥物組合物本發(fā)明的大環(huán)化合物或其根據(jù)本發(fā)明的藥理學(xué)上可接受的鹽可配制為不同劑型的藥物組合物。為了制備本發(fā)明的藥物組合物，根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)，將一種或多種化合物(包括其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物)或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分與合適載體和添加劑緊密混合。藥學(xué)上可接受的鹽指本發(fā)明化合物的鹽形式，以允許其應(yīng)用或配制為藥品并保持指定化合物的游離酸和堿的生物有效性，并且不是生物上或其他方面不合要求的。這類鹽的例子描述于Z/朋必ooA尸/2flrw"cew/7ca/A、a/^v尸ro/er"e《，Se/ec/7ow，a<i(藥對(duì)勿鹽手冊(cè)凈爭(zhēng)4正、選牙奪和應(yīng)用)，Wermuth,CG.和Stahl,P.H.(編輯)，Wiley-VerlagHelveticaActa,Zurich,2002[ISBN3-906390-26-8]。這類鹽的例子包括石威金屬鹽和游離酸和堿的加成鹽。藥學(xué)上可接受的鹽的例子非限制地包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氬鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氬鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、曱酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丁炔-l,4-二酸鹽、己炔-l,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、123氯代苯甲酸鹽、曱基苯甲酸鹽、二硝基苯曱酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯曱酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、Y-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、丙磺酸鹽、曱苯磺酸鹽、萘-l-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽和扁^J菱鹽。如果本發(fā)明化合物是堿，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適合方法制備期望的鹽，包括以無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸處理游離堿，無(wú)機(jī)酸如但不限于鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、^友酸、；危酸、硝酸、4f酸和類似物，有機(jī)酸如但不限于甲酸、乙酸、丙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、延胡索酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、硬脂酸、抗壞血酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖苷酸(pyranosidylacid)如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、a-羥基酸如檸檬酸或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳香酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、環(huán)己基-氨基磺酸或類似物。如果本發(fā)明化合物是酸，可由本領(lǐng)域已知的任何適合方法制備期望的鹽，包括以無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿處理游離酸，所述堿如胺(伯胺、仲胺或叔胺)；堿金屬或堿土金屬氳氧化物或類似物。適合鹽的示例性例子包括衍生自氨基酸如甘氨酸、賴氨酸和精氨酸；氨；伯胺、仲胺和4又胺如乙二胺、N,N'-二千基乙二胺、二乙醇胺、膽堿和普魯卡因，和環(huán)狀胺如哌啶、嗎淋和咪漆的有機(jī)鹽；以及衍生自鈉、4丐、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰的無(wú);^幾鹽。取決于預(yù)期的施用方式，用于這種藥物組合物的載體和添加劑可采取多種形式。因此，用于口服施用的組合物可為例如固態(tài)制劑，如片劑、糖包衣片劑、硬膠嚢劑、軟膠嚢劑、粒劑、粉末劑和類似物，適合的載體和添加劑為淀粉、糖、粘合劑、稀釋劑、?；瘎?、潤(rùn)滑劑、崩解劑和類似物。由于它們易于使用和高度的患者順應(yīng)性，片劑和膠嚢劑對(duì)許多醫(yī)學(xué)疾患代表最有利的口服劑型。類似地，液態(tài)制劑的組合物制備包括溶液、乳劑、分散劑、懸浮劑、糖漿、酏劑和類似物，適合載體和添加劑為水、醇、油、二元醇、防腐劑、調(diào)味劑、著色劑、懸浮劑和類似物。用于胃腸外施用的典型制劑包括活性成分和載體如無(wú)菌水或胃腸外可接受的油，包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油，還可包括其它幫助溶解或保存的添加劑。在溶液情形，其可凍干為粉末，然后在使用前即刻重構(gòu)。對(duì)分散劑和懸浮劑，合適載體和添加劑包括水性膠、纖維素、硅酸鹽或油。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式的藥物組合物包括適合口服、直腸、局部、吸入(如，由氣溶膠)、含服(如舌下)、陰道、局部(即，皮膚和粘膜表面，包括氣道表面)、透皮施用和胃腸外(如皮下、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、胸膜內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、腦內(nèi)、顱骨內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或靜脈)的藥物組合物，盡管在給定情形最適合的途徑將取決于被治療疾患的性質(zhì)和嚴(yán)重度和所用特定活性劑的性質(zhì)。注射用組合物將包括活性成分和適合載體，包括丙二醇-乙醇-水、等滲水、注射用無(wú)菌水(USP)、emulPhorTM-乙醇-水、cremophor-ELTM或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它適合載體。這些載體可單獨(dú)使用或聯(lián)合其它常見增溶劑如乙醇、丙二醇或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它試劑一起使用。當(dāng)本發(fā)明大環(huán)化合物將以溶液或注射液形式應(yīng)用時(shí)，可將化合物溶解或懸浮在任何常規(guī)稀釋劑中使用。稀釋劑可包括，例如生理鹽水、林才各氏溶液、葡萄糖水溶液、右旋糖水溶液、醇、脂肪酸酯、甘油、乙二醇、植物或動(dòng)物來(lái)源的油、石蠟和類似物。可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何常規(guī)方法制備這些制劑。鼻施用的組合物可配制為氣溶膠、滴劑、粉末劑和凝膠劑。氣溶膠制劑通常包括活性成分在生理學(xué)可接受的水性或非水性溶劑中的溶液或細(xì)小懸浮液。這種制劑通常以密封容器中無(wú)菌形式的單劑量或多劑量的量提供。密封容器可為與霧化裝置一起使用的藥筒或填充器(refill)。或者是，密封容器可為單分配裝置如單次使用鼻吸入器、泵霧化器或裝有設(shè)置為遞送治療有效量的計(jì)量閥的氣溶膠分配器，以便在內(nèi)含物已用完時(shí)即丟棄。當(dāng)劑型包括氣溶膠分配器時(shí)，它將包含推進(jìn)劑如壓縮氣體，例如空氣，或包括氟氯烴或氟代烴等有機(jī)推進(jìn)劑。適合含服或舌下施用的組合物包括片劑、糖錠劑和錠劑，其中活性成分與載體如糖和阿拉伯膠、黃蓍樹膠或明膠和甘油一起配制。直腸施用的組合物包括包含常規(guī)栓劑基料如可可脂的栓劑。適合透皮施用的組合物包括軟膏、凝膠劑和貼劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它組合物也可用于透皮或皮下施用，如膏藥。125頁(yè)進(jìn)一步地，制備這種包含一種或多種活性成分混合配制組合物所需的組分的藥物組合物時(shí)，可并入藥理學(xué)上可4妻受的其它常^L添加劑，例如賦形劑、穩(wěn)定劑、殺菌劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、潤(rùn)滑劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、等滲劑、緩沖劑、抗氧化劑和類似物?？商峒盀樘砑觿┑挠欣绲矸?、蔗糖、果糖、右旋糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、沉淀碳酸鈣、結(jié)晶纖維素、羧曱基纖維素、糊精、明膠、阿拉伯膠、EDTA、硬脂酸鎂、滑石、羥丙基甲基纖維素、焦亞硫酸鈉和類似物。在一些實(shí)施方式中，以單元?jiǎng)┬吞峁┙M合物，如片劑或膠嚢劑。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括一個(gè)或多個(gè)容器的藥盒，該容器包括包含有效量的本發(fā)明一種或多種化合物的藥物劑量單本發(fā)明進(jìn)一步提供包括本文所述化合物的前藥。術(shù)語(yǔ)"前藥"意指一種化合物，其在生理?xiàng)l件下或由溶劑分解或代謝轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上活性的指定化合物。"前藥"可以是本發(fā)明的化合物，其已被化學(xué)衍生以使(l)其保持其母體藥物化合物的一些、全部生物活性或不保持，且(ll)其在受治療者中代謝以產(chǎn)生母體藥物化合物。本發(fā)明的前藥還可為"部分前藥"，因生物活性或不保持，且(ll)其在受治療者中代謝以產(chǎn)生化合物的生物活性的衍生物?？墒褂醚苌衔镆蕴峁┣八幍囊阎夹g(shù)。這種方法可利用形成與化合物的可水解的偶合。本發(fā)明還提供了，本發(fā)明化合物可與用于預(yù)防和/或治療代謝和/或內(nèi)分泌病癥、胃腸病癥、心血管病癥、月巴胖和肥胖相關(guān)病癥、中樞系統(tǒng)病癥、遺傳病癥、增生過(guò)多病癥和炎性病癥的治療劑聯(lián)合施用。示例性治療劑包括鎮(zhèn)痛劑(包括阿片樣鎮(zhèn)痛劑)、麻醉劑、抗真菌劑、抗生素、抗炎藥(包括非類固醇抗炎劑)、驅(qū)腸蟲劑、止吐藥、抗組胺劑、抗高血壓藥、抗精神病藥、抗關(guān)節(jié)炎藥、鎮(zhèn)咳藥、抗病毒劑、心活性藥物、瀉藥、化療劑(如DNA-相互作用劑、抗代謝物、微管蛋白-相互作用劑、激素劑和藥劑如天門冬酰胺酶或羥基脲)、腎上腺皮質(zhì)激素(類固醇)、抗抑郁劑、抑制劑(depressant)、利尿劑、安眠藥、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑、擬副交感神經(jīng)藥、激素(如促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、生長(zhǎng)激素釋放激素、生長(zhǎng)激素、促甲狀腺激素(thyrptr叩m)-釋放激素和甲狀腺刺激激素)、鎮(zhèn)靜劑(sedative)、磺酰胺、興奮劑、擬交感神經(jīng)物4匕合物的一些、全部藥、鎮(zhèn)定劑、血管收縮劑、血管擴(kuò)張劑、維生素和黃噤呤衍生物。適合根據(jù)本發(fā)明治療的受治療者包括但不限于鳥類和哺乳動(dòng)物受治療者，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物。本發(fā)明的哺乳動(dòng)物包括但不限于犬科、貓科、牛、山羊、馬、羊、豬、嚙齒類(如大鼠和小鼠)、兔類、靈長(zhǎng)類、人類、和類似物種、和在子宮內(nèi)Ow化TO)的哺乳動(dòng)物。需要根據(jù)本發(fā)明被治療的任何哺乳動(dòng)物受治療者都是適合的。人類受治療者是優(yōu)選的。兩種性別的和處在任何發(fā)育階段(即初生嬰兒、幼兒、少年、青少年、成年)的人類受治療者都可根據(jù)本發(fā)明被治療。根據(jù)本發(fā)明示例性鳥類包括雞、鴨、火雞、鵝、鵪鶉、雉、走鳥類(如鴕鳥)和馴化鳥類(如鸚鷸和金絲雀)、和卯內(nèi)OOW)鳥。本發(fā)明主要關(guān)于治療人類受治療者，但本發(fā)明也可為獸醫(yī)目的實(shí)施于動(dòng)物受治療者，尤其是哺乳動(dòng)物受治療者如小鼠、大鼠、犬、貓、家畜和馬。本發(fā)明可進(jìn)一步用于藥物篩選和藥物開發(fā)目的。在用于治療哺乳動(dòng)物(即人類或動(dòng)物)疾患(促胃動(dòng)素受體的拮抗劑對(duì)該疾患有效)的治療應(yīng)用中，本發(fā)明的化合物或其合適的藥物組合物可以有效量施用。由于化合物的活性和治療效果的水平不同，施用的實(shí)際劑量將根據(jù)公認(rèn)的因素確定，如年齡、受治療者疾患、遞送途徑和受治療者體重。劑量可從約0.1至約100mg/kg,每天口服施用1-4次。此外，化合物可以每劑量大約0.01-20mg/kg注射施用，每天施用1-4次。治療可持續(xù)數(shù)周、數(shù)月或更長(zhǎng)。對(duì)具體情況確定最佳劑量在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。5.應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的式I化合物可用于預(yù)防和治療特征為運(yùn)動(dòng)過(guò)度或高胃動(dòng)素血癥的一系列胃腸病癥。在特定實(shí)施方式，本發(fā)明的大環(huán)化合物可用于治療腹瀉、癌癥治療相關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、放射性小腸炎、放射引起的腹瀉、應(yīng)激引起的腹瀉、慢性腹瀉、AIDS相關(guān)的腹瀉、艱難梭菌相關(guān)的腹瀉、旅行腹瀉、移植物抗宿主病(graphversushostdisease)引起的腹瀉和其它類型腹瀉。在其它實(shí)施方式，本發(fā)明涉及對(duì)人類和其它哺乳動(dòng)物治療腸易激綜合征、炎性腸病、消化不良、功能性胃腸病癥、化療引起的惡心和嘔吐(嘔吐)、手術(shù)后的惡心和嘔吐、Crohn病、胃食管反流(gastroesophogealreflux)病癥、潰瘍性結(jié)腸炎、胰腺炎、幼兒肥厚性幽門狹窄、類癌綜合127征、吸收不良綜合征、糖尿病、肥胖、胃腸吻合術(shù)后綜合征(postgastroenterectomysyndrome)、萎縮性結(jié)腸炎或胃炎、胃；豬留、胃腸排空綜合征、乳糜瑪、短腸綜合征、惡病質(zhì)和導(dǎo)致肥胖的飲食病癥的方法，該方法包括施用治療有效量的式I化合物。本文所用的"治療"不一定表示治愈或完全消除與其相關(guān)的病癥或癥狀。本發(fā)明的化合物可進(jìn)一步用于制備用于治療牽涉胃腸蠕動(dòng)病癥的一系列醫(yī)學(xué)疾患的藥物?，F(xiàn)在將參考以下實(shí)施例描述本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方式。應(yīng)理解，這些實(shí)施例是為了闡明本發(fā)明的實(shí)施方式而不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例]合成Boc-Dap(口塞唑-2-基)的標(biāo)準(zhǔn)程序(Boc-AAl，圖1)步驟1-1.[2-羥基-1-(甲氧基-甲基-氨基曱?；?-乙基]-氨基甲酸叔丁酉旨(AA1-1)。向Boc-Ser-OH(AAl-O,3.0g,0.015mol)的DMF(40mL)溶液加入DIPEA(2.6mL,15.0mmol)和HBTU(5.53g,15.0mmol),然后在室溫?cái)嚢杌旌衔镏钡将@得均勻溶液。然后加入w,a二甲基羥基胺鹽酸鹽(1.60g,16.5mmol)和DIPEA(2.85mL,16.0mmol)。在室溫4覺(jué)拌溶液0/N。加入0°CNaHCO3飽和水溶液而使混合物驟冷，然后以乙酸乙酯萃取。有^/L相在Na2S04上干燥并在減壓下濃縮至干燥。使用乙酸乙酯為洗脫液的快速色譜法以85%產(chǎn)率得到AA1-1。TLC(100%乙酸乙酯)R尸0.40(CMA)。步驟1-2.瘞唑-2-基-氨基甲酸千基酯(AAl-2)。向2-氨基噻唑(AAl-A,3.0g,30.0mmol)和三乙基胺(6.30mL,45.0mmol)在(TC的攪拌溶液加入氯甲酸節(jié)酯(5mL,36mmol)。反應(yīng)體系在室溫下攪拌〇/N。依次以NaHC03飽和水溶液和水洗滌反應(yīng)混合物，并在減壓下濃縮至干燥。所得的黃色固體從乙醇結(jié)晶以70%產(chǎn)率得到AAl-2。步驟1-3.Boc-Dap(Z-噻唑-2-基)(Boc-AAl)。該程序是基于在GautamPanda等5y"丄ert2004,4,714-716中對(duì)其他物質(zhì)提出的程序。Boc-Ser-Wemreb酰胺AA1-1(3.0g,12.0mmol)和三苯基膦(4.75g,]8mmol)在無(wú)水THF(100mL)中的混合物在冰浴中冷卻。將DIAD(3.63g,18mmol)的THF(20mL)溶液逐滴加入至該混合物?；旌显撊芤?mm后，緩慢加入AAl-2(5.65g,24mmol)的THF(50mL)溶液。允許混合物升溫至室溫并攪拌0/N。在減壓下除去溶劑。以快速色謙法(石油醚乙酸乙酯，8:2)純化粗制殘余物以得到40%產(chǎn)率的AAl-3。TLC(石油醚/乙酸乙酯8:2):R產(chǎn)0.30(CMA)下一反應(yīng)順序是基于文獻(xiàn)中所述程序(Evans，D.A.等7Wra/ze^o"1987，28,6141.)。向AA1-3(1.0g,2.15mmol)的THF(50mL)和水(10mL)溶液加入LiOH(150mg,3.22mmol)并在0。C攪拌反應(yīng)12h。以飽和NH4C1水溶液猝滅反應(yīng)混合物并以乙酸乙酯萃取?？焖偕V法(乙酸乙酯曱醇，8:2)得到80%產(chǎn)率的Boc-AAl。TLC(乙酸乙酯甲醇，8:2):R產(chǎn)0.40(CMA);^雇R(CD30D):51.28(s,9H),4.48(m,2H),4.63(m,1H),5.30(s,2H),7.09(m,1H),7.34-7.39(m,4H),7.47(m,1H);LC-MS(Grad一A4):^=7.67分鐘;對(duì)C19H23N3〇6S計(jì)算的質(zhì)量421.4674,實(shí)測(cè)值421實(shí)施例2合成Boc-咪唑-l-基-Ala(AA2)的標(biāo)準(zhǔn)程序<formula>formulaseeoriginaldocumentpage129</formula>步驟2-1.Boc-絲氨酸-P-內(nèi)酯(AA2-l)。該程序是基于文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)的程序(Vederas,J.C.等丄爿附.C/z縫1987,109,4649-4659)。在氮氛下向裝有機(jī)械攪拌器的干燥250mL3-頸燒瓶加入三苯基膦(4.5g,17.1mmol,1.1當(dāng)量)，接著加入100mL無(wú)水THF:CH3CN(1:9)混合物。攪拌混合物直到獲得溶液，然后冷卻至-55。C(浴溫度)并逐滴加入偶氮二羧酸二甲酯(DMAD,1.9mL,17.1mmol,1.1當(dāng)量)持續(xù)10mm。加入后，攪拌混合物20mm并逐滴加入Boc-Ser-OH(3.18g,15.5mmol,1.0當(dāng)量)的50mL無(wú)水THF:CH3CN(1:9)溶液持續(xù)30mm。在-55。C攪拌混合物1.5h,然后除去浴并允許溶液緩慢升溫至室溫。混合物到達(dá)室溫后，在減壓下蒸發(fā)溶劑?？焖偕玦普法[梯度，己烷EtOAc,(80:20)至(60:40)]純化所得的黃色油以得到白色固體的2.10gAA2-1,產(chǎn)率72%。最好在反應(yīng)當(dāng)天純化粗制材料以避免分解?？杉尤隓CM以幫助溶解粗制殘余物。TLC(Hex/EtOAc，60/40):Rf=0.55(CMA)步驟2-2.l-三曱基甲硅烷基咪唑(AA2-2)。在氬氛下向咪唑(5.0g,0.074mol,2當(dāng)量)的150ml曱苯溶液逐滴加入HMDS(11.46mL,0.055mol,1.5當(dāng)量)持續(xù)20mm,然后加熱反應(yīng)混合物至回流達(dá)3h。然后在減壓下濃縮反應(yīng)混合物至干燥。蒸餾殘余物得到無(wú)色油狀的AA2-2，產(chǎn)率85%。為了最好的結(jié)果，該產(chǎn)物應(yīng)在氬氛下儲(chǔ)存在0。C。步驟2-3.Boc-咪唑-l畫基國(guó)Ala(AA2).類似于Vederas,J.C.等丄C/z綴Soc.1985，107,7105-7109中所述的方法，在氬氛下以AA2-1(0.5g，2.67mmol,1當(dāng)量)的無(wú)水CH3CN(10mL)溶液逐滴處理三甲基甲硅烷基咪唑AA2-2(0.488g,3.50mmol,1.3當(dāng)量)的無(wú)水CH3CN(10mL)溶液持續(xù)5mm，然后攪拌混合物28h。然后在水-水浴中冷卻反應(yīng)并加入10ml氯化銨(O.lM)的冷水溶液。將混合物升至室溫并攪拌5mm。以DCM(3x50mL)萃取水相并在d8柱(10g)上經(jīng)受色譜法[梯度，水甲醇，(100:00)至(90:10)]以提供0.48g白色固體的AA2,55%產(chǎn)率。TLC(乙酸乙酯曱醇:水，8:2:1):Rf=0.30(CMA);&NMR(D20):S1.20(s,9H),4.20(m,2H),4.50(M,1H),7.30(s,m),7.32(s,1H),8.50(s,1H);LC陽(yáng)MS(Grad—A4):tR=3.02mm;對(duì)CnH17N304計(jì)算的質(zhì)量255.2704;實(shí)測(cè)值255.實(shí)施例3合成Boc-吡唑-l-基-Ala(AA3)的標(biāo)準(zhǔn)程序AA2-1AA3該程序是基于文獻(xiàn)中所述的程序(Vederas，J.C等爿m.C/zew.Soc.1985,107,7105-7109)。在氬氛下以內(nèi)酯AA3-1(如前述地合成，0.50g，2.67mmol,1.0當(dāng)量)的無(wú)水CH3CN(10mL)溶液逐滴地處理吡唑(0.80g,11.5mmo1,1.5當(dāng)量)的無(wú)水CH3CN(10mL)溶液持續(xù)5mm,在50。C攪拌所得混合物12h。然后在減壓下濃縮反應(yīng)體系至干燥并以快速色譜法(乙酸乙酯曱醇，8:2)純化粗制殘余物以提供1.0g(60%產(chǎn)率)白色固體的AA3。TLC(乙酸乙酯曱醇，8:2):Rf=0.30(CMA);LC-MS(Grad一A4):tR=5.14mm;對(duì)CnH17N304計(jì)算的質(zhì)量255.2704,實(shí)測(cè)值255。實(shí)施例4合成Ddz-Dap(Boc-Me)-OH的標(biāo)準(zhǔn)程序(Ddz-AA4，圖2)步驟4-1.Z-絲氨酸-卩-內(nèi)酯(AA4-2)。以此前對(duì)Boc衍生物AA3-1所述的相似方式制備該中間產(chǎn)物。在氮氛下向裝有機(jī)械攪拌器的干燥250mL3-頸燒瓶加入三苯基膦(4.5g,17.1mmol,1.1當(dāng)量)，接著加入100mL無(wú)水THF:CH3CN(1:9)溶劑混合物。攪拌混合物直到獲得溶液，然后冷卻至-55。C(浴溫度)，逐滴加入偶氮二羧酸二甲酯(DMAD,1.9mL,17.1mmo1,1.1當(dāng)量)持續(xù)10mm。完成加入后，攪拌混合物20mm,然后逐滴加入Z-Ser-OH(AA4-1,3.7g,15.5mmol,1.0當(dāng)量)的50mL無(wú)水THF:CH3CN(1:9)溶液持續(xù)30mm。在-55。C攪拌反應(yīng)混合物1.5h,然后除去冷卻浴并允許溶液緩慢升溫至室溫?；旌衔镞_(dá)到室溫后，在減壓下蒸發(fā)溶劑。以快速色譜法[梯度，己烷/EtOAc，(80:20)至(60:40)]純化所得的黃色油以提供2.5g白色固體的AA4-2,72%產(chǎn)率。優(yōu)選在當(dāng)天進(jìn)行純化粗品油以避免分解?？杉尤隓CM以幫助溶解殘佘物。TLC(己烷/EtOAc(60/40):Rf=0.55(UV，CMA)步驟4-2.Z-Dap(Me)-OH鹽酸鹽(AA4-3)。在氮氛下向干燥的500mL圓底燒瓶裝入60ml無(wú)水CH3CN,接著裝入N-甲基三曱基甲硅烷基胺(AA4-0,如步驟4-6中所述的合成，1.9mL,13.3mmol,1.5當(dāng)量)。加入AA4-2(2.0g,8.9mmol,1.0當(dāng)量)的40mL無(wú)水MeCN溶液至燒瓶并在氮氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔镏钡絋LC指示無(wú)痕量的起始材料[己烷EtOAc(60:40),UV,CMA]。然后冷卻混合物至0°C,加入180mL冷0.1MHC1。允許混合物升溫至室溫并攪拌30mm。在減壓下蒸發(fā)溶劑，所得的殘余物與曱苯共沸兩次然后真空下干燥以提供3.1g為淡黃色泡沫狀的粗制AA4-3。不經(jīng)任何純化〗吏用該粗制材料。步驟4-3.Z-Dap(Boc-Me)-OH(AA4-4)。向包含粗制AA4-3(8.9mmol,1.0當(dāng)量基于理^侖產(chǎn)率)的燒瓶加入90mL無(wú)水DCM。冷卻混合物至0°C并逐滴加入二異丙基乙基胺(DEPEA,7.8mL,44.5mmol,5.0當(dāng)量)，其幫助溶解粗制物質(zhì)。一次性加入二碳酸二叔丁酯(2.1g,9.8mmol,1.1當(dāng)量)，然后將混合物升溫至室溫并攪拌0/N。在減壓下蒸發(fā)溶劑，將所得的殘余物吸收入50mLEt20:NaOH(1M,l:l)混合物。確認(rèn)pH為9至10，如果不是則調(diào)節(jié)至該水平。以Et20(2x25mL)洗滌分離的水相，以1MHC1酸化至pH2并以EtOAc(3x25mL)萃取。以鹽水(2x25mL)洗滌合并的有機(jī)相，在MgS04上干燥，過(guò)濾，在減壓下蒸發(fā)并真空下干燥以提供2.5g(S0。/o產(chǎn)率)為白色泡沫的AA4-4。步驟4-4.H-Dap(Boc-Me)-OH(AA4-5)。在氮氛下將AA4-4(2.5g,7.1mmol,1.0當(dāng)量)的75mLMeOH溶液加入至10%鈀碳(250mg,10%w/w)。然后對(duì)混合物吹入氫直到反應(yīng)完成。[TLCBuOH:AcOH:水(4:1:1),UV，水合茚三酮]。然后以氮清洗混合物，在Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊上過(guò)濾并以MeOH(3x25mL)充分漂洗。在減壓下蒸發(fā)濾液并真空下干燥以提供1.5g(93。/。)淡黃色固體的AA5-5。步驟4-5.Ddz-Dap(Boc-Me)-OH(Ddz-AA4)。向AA4-5(1.9g,8.7mmol,1.0當(dāng)量)的20mLMeOH溶液加入TritonB(4.3mL,9.5mmol,1.1當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?0mm,然后在減壓下濃縮。將殘余物與曱苯(2x)共沸以除去多余水和MeOH。所得的漿狀物溶解于一次性加入的20mL無(wú)水DMF和Ddz-OPh(3.1g,9.5mmol,1.1當(dāng)量)。在氮氛下在50°C攪拌混合物36-48h。然后在高度真空下除去DMF,將殘余物稀釋于水(50mL)。以Et20洗滌所得的水相(檢查以確保pH為9，如有必要?jiǎng)t調(diào)節(jié))直到TLC指示水相中無(wú)苯酚。冷卻堿性水相至0°C,加入Et20(50mL)，以檸檬酸鹽緩沖液(l.OM,pH3.5)酸化水相。以Et20(2x50mL)萃取分離的水相。然后順序地以4寧檬酸鹽緩沖液(2x50mL)、水(2x50mL)和鹽水(lx50mL)洗滌合并的有機(jī)相，以MgS〇4干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮以提供2.5g(65Q/o)淡褐色固體的Ddz-AA4。^NMR(DMSO-d6):512.65(s，1H),7.45-7.35(dd,1H),6.50(s,2H),6.35(2,1H),4.10(q，1H),3.70(s,6H)，3.65-3.55(dd，1H),3.25-3.15(dd,IH)，2.75(d,3H),1.60(d,6H),1.35(s,9H).步驟4-6.合成N-甲基三曱基曱硅烷基胺(AA4-0)。曱胺(25.0mL，0.56mol,2.5當(dāng)量)在-20。C冷凝，然后在氮氛下在-20。C加入至250mL無(wú)水Et20中。在-20。C向溶液逐滴加入新蒸餾的(從LAH)氯代三曱基硅烷(28.1mL,0.22mol,1.0當(dāng)量)。形成白色沉淀。完成加入后，將反應(yīng)體系升溫至室溫并攪拌4h。然后冷卻混合物至0。C并冷過(guò)濾。以無(wú)水Et20(2x50mL)洗滌過(guò)濾的鹽，然后濾液蒸餾通過(guò)45cmVigreux柱以除去Et20。殘余物然后在15cmVigreux柱上再蒸餾以分離9.7g(44。/。)無(wú)色液體的N-甲基三甲基甲硅烷基胺(bp68-72。C)。實(shí)施例5合成片段F1的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖3)步驟5-1.3-(3-氟代苯基)-2-鞋基-丙酸千酯(Fl-2)。將亞硝酸鈉(3.77g,54.6mmol)分批加入至L-3-氟代苯基丙氨酸(F1-1,5.0g,27.3mmol)的乙酸(82mL)溶液，該溶液通過(guò)浸入帶有熱電偶的;水-水浴而保持在室溫。在室溫?cái)嚢枞芤簂hr,然后在減壓下濃縮。然后加入水至殘余物，以Et20萃取產(chǎn)物，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮以產(chǎn)生2.57g(42%)的相應(yīng)酸。將粗產(chǎn)物溶解于曱苯(120mL)，然后加入對(duì)甲苯石黃酸(pTSA,216mg,1.14mmol)和BnOH(5.62mL,56.9mmol)，溶液以Dean-Starki殳備回流0/N。所^f尋的溶液冷卻至室溫，在減壓下濃縮并以快速色i普法(梯度，100%己烷至己烷/乙酸乙酯，4/1)純化以產(chǎn)生1.63g(52%)的千基酯Fl-2和不純餾分(3.14g)。TLC:Rf=0.5(4/1己烷/乙酸乙酯)；&NMR(CDC13):52.77(brs,1H,O助2.95(dd,J=4.39和13.67Hz，1H,Cg2CHOH);3.11(dd,J=6.45和13.78Hz,1H,Cg2CHOH);4.48(m,1H，CH2CHOH);5.18(s,2H，PhCg20);6.86至6.93(m,3H);7.17至7.20(m,1H);7.31至7.39(m,5H);LC-MS(Grad—A4):tR=7.16mm;(M+Na)+297。步驟5-2.{3-[2-(2-氨基-3-甲基-丁氧基)-苯基]-丙基}-氨基曱酸叔丁酯(Fl-5)。在氮氛下在0。C將偶氮二羧酸二異丙酉旨(DIAD，3.13mL,15.9mmol)逐滴加入至三苯基膦(4.17g,15.9mmol)在THF(150mL)中的充分?jǐn)嚢璧娜芤豪?。?。C攪拌混合物30mm,然后升溫至室溫。PPh3-DIAD加合物應(yīng)沉淀為白色固體。將Cbz-纈氨醇(Fl-4，3.43g,14.5mmol)的THF(150mL)溶液加入至該溶液，接著加入碘代苯酚(Fl-3，3.18g,14.5mmol)并在氮氛下攪拌所得的溶液0/N。然后在減壓下濃縮溶液，以快速色譜法(梯度，9/1至8/2己烷/乙酸乙酯)純化粗產(chǎn)物以產(chǎn)生相應(yīng)加合物(2.98g,47%)。將其溶解于CH3CN(70mL)并加入Boc-丙炔胺(1.31g，8.48mmol)至溶液。向該溶液吹入氬氣15min,然后力口入Et3N(23mL)。向所得的溶液吹入氬氣5mm，然后加入Cul(45mg)和PdCl2(PPh3)2(145mg),在氬氛下攪拌所^f尋的溶液0/N。在減壓下濃縮溶液，以Et20溶解，順序地以檸檬酸鹽緩沖液(2x)、飽和NaHC03(2x)水溶液和鹽水(lx)洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(8/2己烷/乙酸乙酉旨)純化所得的油以產(chǎn)生相應(yīng)的炔(2.39g，76%)。粗產(chǎn)物還可不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一反應(yīng)。工HNMR(CDC13):31.01(d,J=6.7Hz,3H,Cg3CH);1.02(d,J=6,7Hz,3H,CH3CH);1.22至1.28(m,1H);1.43(s,9H,(CH3)3C);2.01至2.16(m,1H,CHCH(CH3)2);3.79至3.84(m,1H);3.99至4.03(m，1H);4.08至4.15(m，2H);5.04(br.S,1H);5.12(s,2H,PhCg20);5.28(d,J=9.4Hz,1H);6.83(d，J=8.2Hz,1H);6.90(t,J=7.6Hz,1H);7.21至7.37(m,7H);LC-MS(Grad—A4):tR=12.45mm,(M+H-Boc)十367。將該炔(2.39g,5.13mmol)溶解于95%EtOH(50mL)。加入Pt02(116mg)，以H2(2x)清洗溶液，然后在H2(120psi)下加壓并攪拌0/N。將所得的溶液減壓，過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA),以乙酸乙酯洗滌并在減壓下濃縮。將殘余物溶解于乙酸乙酯(50mL)。加入10%Pd/C(500mg)，以H2(2x)清洗溶液，然后在H2(120psi)下加壓并攪拌0/N。將所得的混合物減壓，過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)，以乙酸乙酯洗滌，在減壓下濃縮并以快速色譜法(梯度，100%乙酸乙酯至10%MeOH/90。/o乙酸乙酉旨)純化殘余物以產(chǎn)生相應(yīng)的胺Fl-5(1.15g,67%)。工HNMR(CDCl3):50.99(d,J=6.39Hz,6H，(Qi3)2CH);1.44(s,9H,(Cii3)3C);1.79(qumt.,J=6.45Hz,(CH3)2Qi);2.66(t,J=7.62Hz,2H);2.98至3.00(m,1H);3.09至3.11(m,2H);3.80(t,J=8.21Hz);3.99(dd);5.04至5.06(m);6.82至6.91(m，2H);7.11至7.18(m,2H)。步驟5-3.2-{1-[2-(3-叔丁氧基羰基氨基丙基)-苯氧基曱基]-2-甲基-丙基-氨基}-3-(3-氟代苯基)-丙酸芐基酯F。在0。C將新蒸餾的(CF3S02)20(29.5pL,175)imol)加入至醇Fl-2(45mg,164jimol)的(^12(312溶液持續(xù)5mm,接著加入2，6-二曱基吡啶(22jliL,189pmol)。在0。C攪拌所得的溶液10mm,然后加入DIPEA(32jiL,181jimol)并立即接著加入胺Fl-5(55mg,164)imol)的CH2C12(1mL)溶液持續(xù)15mm。在氮氛下在室溫?cái)嚢杷玫娜芤?/N。然后加入CH2Cl2，順序地以水、飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌有沖幾溶液，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法純化所得的油以產(chǎn)生千基酯Fl(40mg,41%)。實(shí)施例6合成片段F2的標(biāo)準(zhǔn)程序按照如圖4所示的對(duì)片段Fl描述的相同合成路線制備相關(guān)片段F2。實(shí)施例7合成受保護(hù)的拴系物Ddz-T38(S)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖5)步驟7-1.硪代醇T38-2(S)。向2-碘代苯酚(T38畫l，19.0g，86.2mmol1.0當(dāng)量)的丙酮(150mL)溶液加入碳酸鉀(13.1g，94.8mmol,1.1當(dāng)量)，接著加入(S)-(-)-環(huán)氧丙烷(T38-A,30.1mL,0.431mol,5.0當(dāng)量)。在75°C在密封高壓燒瓶中攪拌混合物過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫，過(guò)濾且用丙酮漂洗濾器兩次。在減壓下濃縮合并的濾液和漂洗液，將所得的殘余物溶解于Et20(150mL)。以1NNaOH(3x100mL)和鹽水(2x100mL)洗滌有機(jī)層，在硫酸鎂上干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)以提供23.9g定量產(chǎn)率的黃色油狀T38-2(S)。這步驟中使用(R)-(+)-環(huán)氧丙烷經(jīng)相同程序?qū)е滦纬蓪?duì)映體的受保護(hù)的拴系物[Ddz-T38(R)]。步驟7-2.Ddz隱氨基曙炔[T38陽(yáng)4(S)]。向T38-2(S)(23.9g,86.0mmol,1.0當(dāng)量)和Ddz-丙炔胺(T38-3，29.8g,107.5mmol,1.25當(dāng)量)的CH3CN(130mL)溶液吹入氬氣10mm。然后加入蒸餾的(與CaH2攪拌0/N后)三乙胺(45mL)至溶液，向混合物吹入氬氣清洗5min。力口入重結(jié)晶的石典4b4同(1)(572mg,3.0mmol，0.035當(dāng)量，O"gtwometo〃icm5^wf/e力s，爿M朋編/(合成中的有機(jī)金屬，手冊(cè))，ManfredSchlosser,第二版，2002，p.669.)和反式-二氯代雙(三苯基膦)4巴(n)(2.1g,3.0mmol,0.035當(dāng)量)，在氬氛下在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物0/N。由TLC監(jiān)控反應(yīng)[(EtOAc/Hex，60/40),Rf=0.62,UV,CMA]。將混合物過(guò)濾通過(guò)硅膠墊并以EtOAc漂洗。在減壓下濃縮合并的濾液和漂洗液直到干燥并以DCM:Et20混合物(15:85,300mL)稀釋殘余的油狀物。順序地以1.0M種檬酸鹽緩沖液(3x150mL)、飽和NaHC〇3(2x150mL，小心，產(chǎn)生壓力)和鹽水(1x150mL)洗滌有機(jī)相，然后以硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)。以快速色譜法[梯度,EtOAc:Hex:Et3N(3(h70:0.5)至EtOAc:Hex:Et3N(60:40:0.5)]純化粗產(chǎn)物以提供35.0g定量產(chǎn)率的為褐色漿狀的T38-4(S)。步驟7-3.Ddz-氨基-醇[Ddz-T38(S)]。在氮氛下向T38-4(S)(35.0g,81.9mmol,1.0當(dāng)量)的95%EtOH(400mL)溶液加入氧化柏(1.86g,8.2mmol,0.1當(dāng)量)。將氮吹入混合物0/N并攪拌。以^NMR監(jiān)控反應(yīng)直到完成。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，將氮吹入10mm以除去多余的氫。然后將混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以95%EtOH洗滌直到洗脫不到材料[TLC(EtOAc/Hex,60/40)]。在減壓下除去溶劑。將產(chǎn)物稀釋于DCM(300mL)中并加入MP-TMT清除劑樹脂(5當(dāng)量，基于催化劑的量)。攪拌混合物O/N,過(guò)濾并以DCM漂洗樹脂兩次。在減壓下蒸發(fā)合并的濾液和漂洗液以提供34.1g(89%)黃色至才登色油狀的Ddz畫T38(S)。'H薩R(CDC13):S7.20-7.10，(m,2H)，6.95-6.80(m，2H)，6.55(bs,2H)，6.35(s，1H),5.18(bt,1H),4.12(m,1H),3.95(m，2H),3.80(s，6H),3.15(bq,2H),2.65(t,2H),1.98(bs,2H),1.65(bs，6H),1.25(m，3H).13C畫R(CDC13):5160.8，156.6，155.8,149.6,130.4，127.5,121.3,111.7，103.2，98.4，80.7，73.5,66.6，55.5，40.2,30.5，29.3,29.1,27.3，19.5.LC-MS(Grad一A4):tR=8.46min注意T38(S)用于制備具有(R)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，T38(R)用于合成具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物，如進(jìn)一步在實(shí)施例10和11中描述的。此外，可使用與實(shí)施例7的方法相似的方法，分別從3-氟代-2-石典代苯酚和6-氟代-2-碘代苯酚、或相應(yīng)的2-溴代苯酚開始，獲得拴系物T92和T93的受^f呆護(hù)的書t生物。實(shí)施例8合成受保護(hù)的拴系物Boc-T81(lR,8S)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖6)步驟8-1.3-(2-曱氧基-苯基)-2-甲基-丙烯酸乙基面旨(T81隱2)。在0°C向氫化鈉(油中65%,26.4g,661mmol,以己烷徹底洗滌以除去油)的THF(746mL)懸浮液加入(EtO)2P(0)CH(Me)C02Et(144mL,661mmol)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?0mm，然后冷卻溶液至0。C,緩慢加入醛T81-l(60.0g,441mmo1)。在O/N期間攪拌反應(yīng)并由TLC[(乙酸乙酯己烷，2:7),Rf=0.49(UV,CMA)]監(jiān)控。加入氯化銨的飽和溶液，以Et20(3x)萃取水相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色i普法(乙酸乙酯/己烷，2/8)純化殘余物以提供為黃色油狀的T81-2(97-100%產(chǎn)率)。步驟8-2.3-(2-甲氧基-苯基)-2-曱基-丙酸乙基酯(T81-3)。向T81匿2(7.3g,23mmol)的95%乙醇(100ml)溶液小心地加入10%Pd/C(730mg)。向溶液吹入氬，然后在氳氛下攪拌溶液0/N。將懸浮液過(guò)濾通過(guò)珪膠墊并以乙酸乙酯洗滌。在減壓下濃縮合并的濾液和洗滌液以得到T81-3,其適合用于下一步驟而不經(jīng)任何進(jìn)一步純化(產(chǎn)率86-90%)。步驟8-3.3-(2-曱氧基-苯基)-2-甲基-丙-l-醇(T81-4)。在0。C向T81-3(55.1g,248mmol)的THF(1.2L)溶液分批加入LiAlH4(18.8g,496mmol)。完成加入后，在0。C攪拌溶液15mm,并由TLC[(30%EtOAc,70%己烷)，Rf=0.30(UV,CMA)]監(jiān)控直到完成。非常緩慢地加入水(18.8mL)(在氮流下)4妻著加入15%氳氧化鈉(18.8mL)溶液，然后加入水(56mL)。過(guò)濾殘余鹽并在減壓下濃縮濾液以^是供醇T81-4(99。/。)，其在下一步驟使用而不經(jīng)任何進(jìn)一步純化。步驟8-4.乙酸3-(2-曱氧基-苯基)-2-甲基-丙基酯[T81-5(S)]和3-(2-甲氧基-苯基)-2-曱基-丙-l-醇(T81-5(R)]。酶AmanoPS(1.7g)和外消旋醇T81-4(30.7,0.67mol)與TBME(292mL)在包含磁性攪拌棒而無(wú)蓋的反應(yīng)燒瓶中混合。在另一燒瓶中，將TBME置于水提取器中并用于在24h后恢復(fù)反應(yīng)體積(由于蒸發(fā)而損失)。在飽和MgCl2(制備5-10mLMgCl2在水中的飽和溶液并儲(chǔ)存在水提取器中不加蓋)存在下在水提取器中攪拌混合物24h。24h后，將預(yù)平tf的溶劑加入至反應(yīng)燒瓶以補(bǔ)償蒸發(fā)造成的損失。加入乙酸乙烯酯(56mL,3.7當(dāng)量)至反應(yīng)燒瓶,，立即用隔膜密封燒瓶。在室溫?cái)嚢杌旌衔镏钡接蒐C-MS(2h后開始取小份直到5.5h(此時(shí)通常已完成反應(yīng)))確定獲得42%的轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)中級(jí)多孔玻璃燒結(jié)的漏斗。以己烷洗滌殘余物并在減壓下濃縮合并的濾液和洗滌液。以快速色語(yǔ)法(梯度，乙酸乙酯/己烷，10/90至50/50)純化殘余物以提供乙酸酯T81-5(S)(18.3g)和醇T81-5(R)。為了確定對(duì)映體純度，將小量的乙酸酯T81-5(S)通過(guò)與K2C03(3當(dāng)量)一起在MeOH中攪拌lh而水解。(后處理)加入水并在減壓下蒸發(fā)MeOH,然后以Et20萃取水相。合并的有機(jī)相在MgS04上干燥并濃縮以提供定量產(chǎn)率的醇。)使用LC-MS以手性HPLC柱分析粗制醇以確定。/。ee。以用于外消旋醇的相同程序以AmanoPS再處理醇T81-5(R),只是允許反應(yīng)進(jìn)行直到由LC-MS確定20%的轉(zhuǎn)化(2h后開始取小份，通常8.5h后達(dá)到此水平)。然后如對(duì)T81-5(S)所述地處理混合物以提供醇T81-6(R)(14.1g)和乙酸酯T81-5(S).(./,C7zew.Soc，7>"朋./2000,367.)。該醇可以代替在以下步驟8-6中的T81-6(S)異構(gòu)體并轉(zhuǎn)化為包含8R-立構(gòu)中心的T81。步驟8-5.3-(2-曱氧基-苯基)-2-曱基-丙-l-醇[T81-6(S)]。在-30。C向乙酸酯T81-5(S)(3.0g,13.4mmol,1.0當(dāng)量)的DCM(65mL)溶液加入1MBBr3的DCM(33.8mL,34mmol,2.5當(dāng)量)溶液。在(TC攪拌混合物3h并由TLC[(30%AcOEt,70%己烷)，Rf=0.30(UV,CMA)]監(jiān)控。在(TC緩t曼加入甲醇(l35mL,4倍于BBr3的體積)，接著加入水。攪拌混合物0/N。以DCM(3xl50mL)萃取水相。在MgS04上干燥有機(jī)相，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(乙酸乙酉旨/己烷，8/2,Rf:0.3)純化殘余物以提供2.25g的T81-6(S)(98%)。步驟8-6.3-[2-(2-羥基-丙氧基)-苯基]-2-甲基-丙-1-醇[T81隱7(1R,8S)]。向苯酚T81-6(S)(1.4g,8.42mmol,1.0當(dāng)量)的DMF(16mL)溶液加入碳酸鉀(1.6g,8.42mmol,1當(dāng)量)和(R)-碳酸曱酯(T81-A,0.73mL，8.42mmol,1.0當(dāng)量)。在85。C攪拌所得的混合物72h并以TLC[(乙酸乙酯/己烷2/8);Rf=0.30,UV,CMA]監(jiān)控反應(yīng)。將混合物冷卻至室溫，加入鹽水。以乙酸乙酯萃取水相，以鹽水萃取合并的有機(jī)相。有機(jī)相在MgS04上干燥并在減壓下濃縮。由快速色諳法(乙酸乙酯/己烷,2/8,Rf=0.30)純化殘余物以提供T81-7(lR,8S)(1.45g,76%)。該反應(yīng)中使用(S)-碳酸甲酯反應(yīng)，經(jīng)過(guò)如下對(duì)相應(yīng)(lR)-異構(gòu)體所述的相同轉(zhuǎn)化，得到包含(lS)-立構(gòu)中心的T81(1S,8S)。步驟8-7.曱苯-4-磺酸3-[2-(2-羥基-丙氧基)-苯基]-2-曱基-丙基酯[T81-8(1R,8S)]。在0。C向醇T81畫7(1R,8S)(2.0g,8.9mmol,1.0當(dāng)量)的外匕啶:二氯曱烷(1:5,25mL)的溶液逐滴加入Ts-Cl(1.90g,9.8mmol,1.1當(dāng)量)的10mL二氯曱烷溶液，并在0。C度攪拌所得的混合物O/N,以TLC[(乙酸乙酯己烷，3:7)Rf=0.50(UV)]監(jiān)控反應(yīng)。加入水并以CH2Cl2萃取水相。以0.1NHC1溶液洗滌合并的有坤幾相3次，然后在MgS04上干燥并在減壓下濃縮。以快速色i普法(乙酸乙酯/己烷，3/7,Rf=0.5)純化殘余物以提供T81-8(1R,8S)(2.29g,70%)。還以~10%產(chǎn)率分離小量的二-曱苯磺酸化的化合物。步驟8-8.1-[2-(3-疊氮-2-甲基-丙基)-苯氧基]-丙-2-醇[T81-9(1R,8S)〗。向曱苯磺酸酯T81-8(1R,8S)(2.2g,5.85mmol,1.0當(dāng)量)的DMF(25mL)溶液加入NaNg(1.85g,0.03mol,5當(dāng)量)，在50。C攪拌所得的混合物24h或直到完成。由TLC[(乙酸乙酯己烷，3:7),Rf=0.35(UV,CMA)]監(jiān)控反應(yīng)。加入水并以Et20萃取水相。以鹽水洗滌合并的有機(jī)相，然后在MgS04上干燥并在減壓下濃縮。以快速色"i普法(乙酸乙酉旨/己烷，3〃)純化殘余物以提供T81-9((1R,8S)(1.2g,80%)。步驟8-9.1-[2-(3-氨基-2-曱基-丙基)-苯氧基]-丙-2-醇[T81-10(1R,8S)]。向T81誦9((1R,8S)(1.20g,4.8mmol,1.0當(dāng)量)的乙酸乙酯(25mL)溶液小心地加入10%Pd/C(0.12g)。向溶液持續(xù)吹入氳，在室溫?cái)嚢杷玫幕旌衔?/N。由TLC[(乙酸乙酉旨/己烷；3/7),&=基線，UV,CMA]監(jiān)控反應(yīng)。將溶液過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以乙酸乙酯漂洗。在減壓下蒸發(fā)合并的濾液和漂洗液以提供粗制胺T81-10((1R,8S)(1.12g,98%)。步驟8-10.{3-[2-(2-羥基-丙氧基)-苯基]-2-甲基-丙基}-氨基曱酸叔丁基酯[Boc隱T81(1R,8S)]。向T81隱10(1R,8S)(1.12g,5.01mmol,1.0當(dāng)量)的THF:水(1:1,20mL)溶液加入K2C03(1.43g,10.0mmol,2.0當(dāng)量)和Boc20(3.30g,15.0mmol,3當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。由TLC[(乙酸乙酉旨/己烷，4/6).Rf=0.50(UV,水合茚三酮)]監(jiān)控反應(yīng)。加入檸檬酸鹽緩沖液并以Et20(3x)萃取混合物。順序地以檸檬酸鹽緩沖液、水和鹽水洗滌合并的有^幾相。在MgS04上干燥有^/L相并過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液。以快速色譜法(乙酸乙酯/己烷，4/6)純化殘余物以提供Boc-T81(lR,8S)(1.0g,75%)。&NMR(CDC13):50.9(d,3H),1.25(d,3H)，1.42(s,9H),1.90(m,IH),2.30(m,1H),2.80-3.05(m,4H),3.82(m,1H),4.01(m，1H)，4.25(m，1H),6.85(m,2H),7.15(m,2H);LC-MS(Grad—A4):tR=8.52mm;實(shí)測(cè)質(zhì)量323;13C羅R(CDC13):519.0129.10,35.10,36.2Q,38.10,46.20,62.20,70.00,80.10,115.20，120.15,128.10,130.00,132.10,158.50.注意T81(1R,8S)和T81(1R,8R)用于制備具有(1S)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，T81(1S,8S)和T81(lS,8R)用于合成具有(lR)-立構(gòu)中心的式I化合物。實(shí)施例9(圖8)液相合成本發(fā)明化合物的一般程序A.)片段1合成步驟9-1.在裝備有Dean-Stark儀器的圓底燒瓶中，將氨基酸G-l(0.2mol,1.0當(dāng)量)懸浮在甲苯(每0.2mol用1L,該程序中溶劑/洗液的量根據(jù)更小或更大規(guī)模而依比例確定)中。加入對(duì)甲苯磺酸(pTSA,1.2當(dāng)量)和節(jié)基醇(5.0當(dāng)量)，并回流攪拌混合物16-18h。冷卻混合物至室溫并形成白色沉淀。以MTBE(500mL)稀釋沉淀，過(guò)濾并以MTBE(3x500mL)研碎。在高度真空下干燥固體16-18h以提供中間產(chǎn)物曱苯磺酸鹽。將曱苯磺酸鹽吸收入1MNa2C03(200mL)水溶液。以EtOAc(4x150mL)萃取該;咸性水相并以鹽水(lx100mL)洗滌合并的有才幾相，在MgSO4上干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮并真空干燥以提供游離的氨基酯G-2。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，對(duì)于修改脫保護(hù)方案的程序，也可以使用爺基酯的替代酯。步驟9-2.向新鮮游離堿化的G-2(1.0當(dāng)量)的DCM(90-100mL)溶液加入三乙胺(TEA,1.1當(dāng)量)、吡啶(3.4當(dāng)量)和Bts-C1(2.0當(dāng)量)。在室溫?fù)璋璺磻?yīng)0/N。以DCM(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，順序地以檸檬酸鹽緩沖液(2x)、鹽水(lx)洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色鐠法純化所得的殘余物以提供Bts保護(hù)的氨基酯G-3。步驟9-3.將受保護(hù)的拴系物G-4(1.5當(dāng)量)、三苯基膦(8.5g,32.4mmol,1.5當(dāng)量)和G-3(1.0當(dāng)量)溶解于無(wú)水THF(100mL)。將溶液在水-水浴中冷卻至O'C并逐滴加入偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD,1.45當(dāng)量)。預(yù)形成的DIAD:PPh3加合物(實(shí)施例38)也可用于該步驟。加入后，在0。C攪拌混合物lh,然后緩慢升溫至室溫并在氮下攪拌16-18h。在減壓下除去THF并以快速色語(yǔ)法純化粗制殘余物以提供烴基化的氨基酸酯G-5。注意當(dāng)拴系物G-4包含鍵合至手性碳原子的羥基基團(tuán)時(shí)，在該中心發(fā)生倒轉(zhuǎn)。因此，拴系物中的(S)-立構(gòu)中心產(chǎn)生在該手性碳原子處具有(R)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，具有(R)-立構(gòu)中心的拴系物產(chǎn)生在該手性碳原子處具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物。步驟9-4.向G-5(1.0當(dāng)量)的DMF(75mL)溶液加入固體碳酸鈉(5.0當(dāng)量)，接著加入2-巰基乙醇(5.0當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-18h。反應(yīng)由HPLC(Grac^A4)監(jiān)控。加入水(150mL)且以EtOAc(3x75mL)萃取水相。以鹽水(lxlOOmL)洗滌合并的有才幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色鐠法純化粗制殘余物以提供去苯并噻唑-2-磺酰化的(debetsylated)氨基酸酯G-6。反應(yīng)后由LC-MS確定確保苯并噻唑巰基乙醇加合物無(wú)剩余是重要的，因?yàn)樵摳碑a(chǎn)物已顯示會(huì)抑制隨后的氫解反應(yīng)。步驟9-5.該步驟針對(duì)大約15mmol的規(guī)模描述。在氮氛下向圓底燒瓶裝入10%Pd/C(50%濕，10%重量)和95%EtOH(70mL),接著裝入G-6(15mmol,1.0當(dāng)量)的EtOH95%(70mL)溶液。使用氣體分散管在氬吹入下攪拌混合物4小時(shí)。2h后混合物中形成沉淀。加入EtOAc或THF(100mL)以獲得攪拌的懸浮液。以氮清洗混合物10min以除去多余氫，過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以EtOAc和MeOH洗滌直到TLC指示不再洗脫出材料。在減壓下蒸發(fā)溶劑并在高度真空下干燥所得的固體以提供氨基酸G-7。B.)片段2合成步驟9_6.對(duì)于氨基酸千基酯的鹽(G-8，1當(dāng)量，描述為對(duì)15mmol規(guī)模)，將固體吸收入1MNa2C03水溶液(50mL)。以EtOAc(4x50mL)萃取該石咸性水相并以鹽水(lx600mL)洗滌合并的有才幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮并在高度真空下干燥4-6h以提供游離氨基酯G-9。步驟9_7.將G-9(商業(yè)上可獲得的或如步驟9-l或9-6中所述的合成，15.5mmol,1.0當(dāng)量)和受保護(hù)的氨基酸(G-IO，1.05當(dāng)量)溶解于無(wú)水THF/CH2C12(1:1)(80mL)。然后加入6-Cl-HOBt(1.0當(dāng)量)和DIPEA(5.0當(dāng)量)。在冰-水浴中冷卻混合物至0。C并加入EDCI(1.1當(dāng)量)。在0。C攪拌混合物1h,允許升溫至室溫并攪拌16-18h。在減壓下蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解于EtOAc(100mL)。順序地以檸檬酸鹽纟爰沖液(lM，pH3.5)(2x50mL)、水(lx50mL)、飽和NaHC03水溶液(2x50mL)和鹽^qix50mL)洗滌有才幾相。在MgS04上干燥有才幾相，過(guò)濾，在減壓下濃縮并在高度真空下干燥16-18h以提供粗制二肽。將粗制二肽(1.0當(dāng)量)溶解于3.3M的HCl/EtOAc溶液(由在0。C吹入氣態(tài)HC1至EtOAc而制備，10當(dāng)量)并在室溫?cái)嚢杌旌衔?h，形成白色沉淀。過(guò)濾沉淀并順序地以EtOAc(1x50mL)和MTBE(1x50mL)洗滌，然后在高度真空下干燥16-18h以提供鹽酸鹽G-ll。C.)大環(huán)合成步驟9-8.在0。C向酸片段G-7(1.0當(dāng)量)和二肽鹽酸鹽G-ll(1.05當(dāng)量)的無(wú)水THF/DCM(1:1)(10mL,對(duì)1.50mmol描述)溶液加入DIPEA(5.0當(dāng)量)，4妻著加入HATU(1.05當(dāng)量)。在0。C攪拌混合物1h,允許升溫至室溫并在氮下攪拌16-18h。在減壓下除去溶劑并將殘余物溶解于EtOAc(50mL)。順序地以檸檬酸鹽緩沖液(lM,pH3.5)(2x25mL)、飽和NaHC03水溶液(2x25mL)和鹽水(lx25mL)洗滌有機(jī)相。在MgS04上干燥有機(jī)相，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色謙法純化粗制殘余物以提供期望的受保護(hù)的烴基化三肽G-12。步驟9-9.在氮氛下向圓底燒瓶裝入10%Pd/C(50%濕，10%重量)和95%EtOH95%(5mL,對(duì)1.30mmol描述)，接著裝入G-12(1.0當(dāng)量)的950/。EtOH(8mL)溶液。在氳吹入下攪拌混合物4h。2-3h后反應(yīng)混合物變得很稠。加入THF以便至少部分地溶解懸浮液。以氮清洗混合物5min以除去多余的氬，過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以THF洗滌直到不再洗脫出材料。在減壓下蒸發(fā)溶劑并在高度真空下干燥所得的固體以提供酸G-13。步驟9-10.將Boc保護(hù)的G-13(1.0當(dāng)量，對(duì)1.30mmol描述)溶解于TFA/TES/DCM(33/3/64)(9.8當(dāng)量，大約3mL)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?0mm并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物與THF共蒸發(fā)兩次，然后在高度真空下干燥16-18h以提供大環(huán)前體G-14。步驟9-ll.向G-14(1.0當(dāng)量，對(duì)1.30mmol描述)的無(wú)水THF溶液(足以形成25mM溶液，盡管10mM濃度的溶液也是可接受的)加入DIPEA(5.0當(dāng)量)和DEPBT(l.l當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔飈&18h。在減壓下蒸發(fā)THF并將殘余物吸收入1MNa2C03(水溶液)EtOAc(1:1)(50mL)。以鹽水(2x25mL)洗滌分離的石成性水相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)。以快速色鐠法或反相HPLC純化粗制殘余物以提供大環(huán)G-15。下表13的該最終大環(huán)化步驟的產(chǎn)率表13.步驟9-11的代表性產(chǎn)率<table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table>a硅膠純化后確定產(chǎn)率，根據(jù)脫BOC保護(hù)之前的線性前體。實(shí)施例10合成化合物552的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖9)步驟10-1.H-(D)Tyr-OMe的氯化。在5。C向H-(D)Tyr-OMe(游離堿，10-1,0.11mol,21.7g)的冰乙酸(550mL)溶液逐滴加入S02C12(12.1mL,0.15mmol,1.35當(dāng)量)。攪拌1h后加入Et20并沉淀產(chǎn)物。將其過(guò)濾并以Et20洗滌以提供20.8g(85.4%)10-2。LC畫MS(UV,CLND,ELSD》98.2/98.4/99.4;tR=3.39mm,(M+H)+229。步驟10-2.雙Bts保護(hù)。向10-2鹽酸鹽的DCM(50mL)溶液加入吡咬(5.8mL,68mmol,6.8當(dāng)量)和Et3N(3.0mL,22mmol,2.2當(dāng)量)，接著加入固體Bts-Cl(9.3g,40mmol,4當(dāng)量)。然后在室溫?cái)嚢杌旌衔?6h。將其以DCM(100mL)稀釋，順序地以檸檬酸鹽緩沖液(2x50mL)、飽和^友酸氫鈉水溶液(2x50mL)和鹽水(一次)洗滌，然后在MgS04上并濃縮。以快速色譜法(梯度，EtOAc:己烷30:70至50:50)純化產(chǎn)物以提供灰白色固體的10-3(5.3g,85%)。或者是，可以1.0M鹽酸/EtOAc研碎而以定量產(chǎn)率分離產(chǎn)物。!HNMR(CDCl3):與結(jié)構(gòu)一致LC-MS(UV,CLND,ELSD):94.2/95.2/100;tR=8.88mm,(M+H)+624步驟10-3.Fukuyama-Mitsunobu法。在0。C在N2下向10-3(3.2g，5.1mmol)、Boc陽(yáng)T38(R)(2.2g,7.2mmol,1.4當(dāng)量)、PPh3(1.9g,7.2mmol,1.4當(dāng)量)的THF(25mL)溶液逐滴加入DIAD(1.5mL,7.2mmol,1.4當(dāng)量)。加入后，在室溫?cái)嚢杌旌衔?6h然后在減壓下濃縮?？焖偕玦普法(梯度，EtOAc:己烷，30:70至45:55)純化殘余物以提供黃色油狀的10-4，其靜置固化(5.7g,〉100%)。該材料可直接用于下一步驟?；蛘呤牵鸪?，PPhg和DIAD可減少至1.1當(dāng)量，然后如果需要，各另加入0.3-0.4當(dāng)量以馬區(qū)動(dòng)反應(yīng)至完成。LC-MS(UV,CLND,ELSD):91/80/100;tR=14.53min,(M+H)+229步驟10-4.苯并噻唑-2-磺酰化(Debetsylation)。向10-4(5.2g)的DMF(50mL)溶液加入碳酸鈉(3.3g，31mmol,5當(dāng)量)和2-巰基乙醇(2.2mL,31mmol，5當(dāng)量)。然后在N2下攪拌混合物16h,然后蒸發(fā)DMF并以水(200mL)稀釋混合物，且調(diào)節(jié)pH至8。以EtOAc(3x100mL)萃取水層。以鹽水洗滌合并的有機(jī)層，然后以MgS04干燥并在減壓下濃縮。以快速色譜法(EtOAc:己烷，梯度，40:60至70:30)純化產(chǎn)物以提供為黃色油的10-5，4.98g。LC/MS指示該材料含有顯著量的苯并噻唑巰基乙醇加合物(UV顯示84%)。對(duì)更高反應(yīng)濃度，還可以THF/水(1:2)作為溶劑，以LiOH作為石咸進(jìn)行反應(yīng)。步驟10-5.酯水解。向4且制10-5(4.98g，污染有苯并噻唑巰基乙醇加合物)在THF:水的1:1混合物(共40mL)的溶液加入2.6gLiOH'H20(62mmol)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6h，然后在減壓下除去THF。向混合物加入200mL水并調(diào)節(jié)pH至6。形成白色沉淀，將其濾出并以冷水(2x40mL)洗滌，然后以冷MTBE(2x40mL)洗滌并以iPrOH:庚烷(l:2)研碎。獲得灰白色固體的10-6(1.94g,對(duì)最后3步驟為75%)。還可在95%EtOH中重結(jié)晶產(chǎn)物，使用庚烷以引起固體形成。LC-MS(UV,CLND,ELSD):65/98/100(保留16%苯并噻唑加合物，tR=5.05mm):tR=6.48min,(M+H)+507。步驟10-6.片段偶合。向10-6(1.94g,3.8mmol,1.0當(dāng)量)和10-7(如步驟10-9中所述的合成，1.24g,4.6mmol,1.2當(dāng)量)在DMF(20mL)中的混合物加入HATU(1.75g，4.6mmol,1.2當(dāng)量)和DIPEA(4.0ml,23mmol,5當(dāng)量)。在N2下在室溫?cái)嚢杌旌衔?6h,然后在減壓下蒸發(fā)溶劑。將殘余物吸收入水(20mL),調(diào)節(jié)pH至8-9并以EtOAc(2x20mL)和DCM(2x20mL)萃取產(chǎn)物。將THF加入至合并的有才幾層以溶解懸著的固體，在MgS04上干燥混合物并在減壓下濃縮。以快速色語(yǔ)法(梯度，EtOAc:己烷，40:60至60:40)純化產(chǎn)物以提供為微黃色油的10-8(1.5g,52%)。重復(fù)反應(yīng)提供產(chǎn)率高至73.6%的粗品。LC-MS(UV,CLND,ELSD):90.7/100/98.7;tR=11.33mm;(M+H)+761。步驟10-7.脫保護(hù)。向10-8(1.5g,2.0mmol)加入TFA(70mL)、DCM(30mL)和Et3SiH(3mL)的混合物。在室溫?cái)嚢杌旌衔?h，然后在減壓下濃縮。以DCM蒸發(fā)兩次，然后真空干燥。在步驟X-8中大環(huán)化之前，將粗制殘余物10-9與THF(2x)共沸。步驟10-8.大環(huán)化。向上述粗制]0-9的THF(100mL)溶液加入DEPBT(1.2g,4.0mmol,2當(dāng)量)和DIPEA(4.2mL,24mmol,6當(dāng)量)并在N2下在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-86h。除去THF并以快速色譜法(100。/。EtOAc)純化產(chǎn)物以提供為白色泡沫的化合物552(0.80g,對(duì)兩步驟68.3%)。以通過(guò)硅膠墊代替快速色語(yǔ)法來(lái)修改上述程序，獲得類似產(chǎn)率(70.9%)和純度(89.3/91.1/100，UV,CLND,ELSD)。LC-MS(UV,CLND,ELSD):92.9/100/98.6;tR=5.84mm;(M+H)+586。步驟10-9.鹽酸鹽形成。將化合物552溶解于乙腈(60mg.mL)，加入1.5當(dāng)量0.5M鹽酸(水溶液)以立即形成固體沉淀。過(guò)濾收集固體并以乙腈洗滌。所得的化合物552的鹽酸鹽可從95%EtOH重結(jié)晶一次或多次，使用庚烷以引起固體形成。步驟10-10.二肽氬解10-10_in-7將二肽10-10(由標(biāo)準(zhǔn)方法從Cbz-Val-OH和H-Nva-OtBu形成，2.4g,6.0mmol)和10%Pd/C(50%濕，0.5g)在95%EtOH(150mL)中的混合物在Parr儀器中在30psi氫下?lián)u動(dòng)。6h后，TLC指示反應(yīng)結(jié)束。過(guò)濾混合物通過(guò)充分填充的Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)塞并以乙醇洗滌，然后在減壓下濃縮合并的濾液和洗滌液以提供10-7,其145純度足夠用于上述步驟10-6。:HNMR:與結(jié)構(gòu)一致LC-MS:tR=5.86min;(M+H)+272。實(shí)施例11合成代表性化合物556的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖10)A.)AAi-拴系物片段合成步驟ll-l.在裝備有Dean-Stark儀器的圓底燒瓶中，在曱苯(lL)中懸浮H-(D)Phe(3F)-OH(11-1,35.6g,194mmol,1.0當(dāng)量)。加入對(duì)甲苯磺酸(44.3g,233mmol，1.2當(dāng)量)、千基醇(101mL,970mmol,5.0當(dāng)量)，回流攪拌混合物16-18小時(shí)。冷卻混合物至室溫，形成白色沉淀。以MTBE(500mL)稀釋沉淀，過(guò)濾并以MTBE(3x500mL)研碎。在高度真空下干燥固體16-18h以提供為白色固體的曱苯磺酸鹽(85.1g,98.6%)。將曱苯磺酸鹽(85.1g)吸收入lMNa2CO3水溶液(210mL)。以EtOAc(4x150mL)萃取堿性水相，然后以鹽水(lx100mL)洗滌合并的有機(jī)相，在MgS04上干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮并在高度真空下干燥以提供為澄清油的游離氨基酯11-2(49.5g,95%)。步驟11-2.向新鮮游離堿化的11-2(49.5g,181mmol,1.0當(dāng)量)的DCM(卯mL)溶液加入三乙胺(27.8mL,616mmol,1.1當(dāng)量)、魂。定(49.8mL,616mmol,3.4當(dāng)量)和Bts陽(yáng)C1(84.7g,363mmol,2.0當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)O/N,此期間溶液變?yōu)槌壬?。以DCM(100mL)稀釋反應(yīng)混合物，順序地以檸檬酸鹽緩沖液(2x)和鹽水(lx)洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法[梯度，己烷EtOAc(8:2)至己烷EtOAc(7:3)]純化殘余的油以提供為微黃色固體的Bts保護(hù)的氨基酯11-3(63.4g,74.4%)。TLC[己烷EtOAc(1:l)]:Rf=0.30(UV,CMA)。步驟11-3.將Boc-T38(R)拴系物(n陽(yáng)4，10.0g,32.4mmol,1.5當(dāng)量)、三苯基膦(8.5g,32.4mmol,1.5當(dāng)量)和Bts隱(D)Phe(3F)陽(yáng)OBn(11-3,10.2g,21.6mmol,1.0當(dāng)量)溶解于無(wú)水THF(108mL)。在水-水浴中冷卻溶液至(TC并逐滴加入偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD,6.2mL,31.3mmol，1.45當(dāng)量)。加入后，在0。C攪拌混合物1h，然后緩慢升溫至室溫并在氮下攪拌16-18h。在減壓下除去THF并以快速色"i普法[梯度，己烷/EtOAc(9:l)至己烷/EtOAc(75:25)]純化粗制殘余物以提供為淡黃色固體的烴基化氨基酸酯11-5(15.1g,91%)。TLC[己步克EtOAc(l:l)]:Rf=0.67(UV，CMA)。步驟11-4.向烴基化氨基酸11-5(14.0g,18.4mmol,1.0當(dāng)量)的DMF(74mL)的溶液加入碳酸鈉(9.8g,92.0mmol,5.0當(dāng)量)，接著加入2-巰基乙醇(6.5mL,92.0mmol,5.0當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-18h。反應(yīng)由HPLC[(Grad一A4):9.69mm(產(chǎn)物)，15.37mm(起始材料)]監(jiān)控。加入水(150mL)并以EtOAc(3x75mL)萃取水相。以鹽水(lx100mL)洗滌合并的有機(jī)相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以干燥填充的珪膠色譜[己烷EtOAc(8:2)]純化粗制殘余物以提供為黃色油的去苯并p塞唑-2-磺?；陌被狨?1-6(7.95g,76%)。反應(yīng)后由LC-MS確定確保苯并p塞唑巰基乙醇加合物無(wú)剩余是4艮重要的。已知該副產(chǎn)物抑制隨后的氫解反應(yīng)。步驟11-5.在氮氛下向圓底燒瓶裝入10%Pd/C(50%濕，785mg，10%重量)和95%EtOH(70mL),接著裝入氨基酸酯11-6(7.85g,13.9mmol,1.0當(dāng)量)的95%EtOH(70mL)溶液。使用氣體分散管在氬吹入下攪拌混合物4h。2h后形成沉淀。加入EtOAc(100mL)以獲得攪拌的懸浮液。以氮清洗反應(yīng)混合物10mm以除去多余的氬，過(guò)濾通過(guò)。61116@(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以EtOAc和MeOH洗滌直到不再洗脫出材料。在減壓下蒸發(fā)溶劑并在高度真空下千燥所得的固體以提供為白色固體的氨基酸11-7(6.2g,94%)。TLC[己烷/EtOAc(l:l)]:Rf=基線(UV,CMA);LC-MS(Grad一A4):7.04mm。B.)AA二-AA二-二肽合成步驟11-6.將市售的H-Leu-OBn甲苯磺酸鹽(l1-8,6.1g)吸收入1MNa2CCb水溶液(50mL)。以EtOAc(4x50mL)萃取堿性水相并以鹽水(lx580mL)洗滌合并的有才幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮并真空下干燥4-6h以提供為淡黃色油的游離氨基酯11-9(3.44g,100%)。步驟11-7.將新鮮游離堿化的H-Leu-OBn(11-9,3.44g,15.5mmol,1.0當(dāng)量)和Boc-(D)Val隱OH(11-10,3.54g,16.3mmol,1.05當(dāng)量)溶解于無(wú)水THF:CH2C12(1:1,81mL)。加入6-Cl-HOBt(2.63g,15.5mmol,1.0當(dāng)量)和DIPEA(14.2mL,81.5mmol,5.0當(dāng)量)。在水-水浴中冷卻混合物至0。C并加入EDC(3.28g,17.1mmol,1.1當(dāng)量)。在0。C攪拌混合物1小時(shí)，允許升溫至室溫并攪拌16-18h。在真空下蒸發(fā)溶劑并將殘余物溶解于EtOAc(100mL)。順序地以檸檬酸鹽緩沖液(lM,pH3.5)(2x50mL)、水(1x50mL)、飽和NaHC03水溶液(2x50mL)和鹽水(lx50mL)洗滌有機(jī)相。有機(jī)相在MgS04上干燥，過(guò)濾，在減壓下濃縮并在高度真空下干燥16-18h以提供為淡黃色固體的粗制二肽(6.6g,〉100%粗制)。TLC[己烷/EtOAc(l:l)]:Rf=0.40(UV,CMA)。將粗制二肽(6.6g,15.7mmol,1.0當(dāng)量)溶解于3.3M的HCl/EtOAc溶液(由在(TC吹入氣態(tài)HC1至EtOAc而制備，43.6mL,157mmol,10當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?h,形成白色沉淀。過(guò)濾沉淀并以EtOAc(lx50mL)和MTBE(lx50mL)洗滌，然后真空下干燥16-18h以提供為白色固體的鹽酸鹽11-11(4.38g,對(duì)2步驟79%)。TLC[己烷EtOAc(l:l)]:Rf=基線(UV,水合茚三酮)；LC畫MS(Grad一A4):6.59min。C.)大環(huán)合成步驟11畫8.在0。C向11-7(750mg,1.58mmo1,1.0當(dāng)量)和11-11(591g,1.66mmol,1.05當(dāng)量)的無(wú)水THF.DCM(1:1,10.5mL)溶液加入DIPEA(1.4mL,7.9mmol,5.0當(dāng)量)，接著加入HATU(631mg,1.66mmol,1.05當(dāng)量)。在0。C攪拌混合物1h,允許升溫至室溫并在氮下攪拌16-18h。在減壓下除去溶劑，并將殘余物溶解于EtOAc(50mL)。以檸檬酸鹽緩沖液(lM,pH3.5,2x25mL)、飽和NaHC03水溶液(2x25mL)和鹽水(lx25mL)洗滌有機(jī)相。在MgS04上干燥有機(jī)相，過(guò)濾，然后在減壓下濃縮。以快速色"i普法[梯度，己烷EtOAc(75:25)至己烷EtOAc(6:4)]純化粗制殘余物以提供期望的受保護(hù)的烴基化三肽11-12(988mg,81%),為淡黃色膠質(zhì)固體。TLC[己烷/EtOAc(l:l)]:Rf=0.43(UV,CMA)。步驟11-9.在氮氛下向圓底燒瓶裝入Pd/C10%(50%濕，208mg,10%重量)和95%EtOH(5mL),接著裝入千基酯X-12(1.04g,1.34mmol,1.0當(dāng)量)的95%EtOH(8.4mL)溶液。在氫吹入下攪拌混合物4h。2-3h后反應(yīng)混合物變得很濃，加入THF以溶解懸浮液。以氮清洗混合物5min以除去多余的氳，過(guò)濾通過(guò)Celite⑧(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊并以THF洗滌直到不再洗脫出材料。在減壓下蒸發(fā)溶劑并在高度真空下干燥所得的固體以提供為白色固體的酸11-13(911mg,100%)。TLC:[己烷/EtOAc(l:l)]:Rf=基線(UV,CMA)。步驟11-10.將Boc保護(hù)的烴基化三肽11-13(911mg,1.33mmol,1.0當(dāng)量)溶解于TFA/TES/DCM(33/3/64,3.0mL,12.9mmol,9.8當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?0min并在減壓下蒸發(fā)。將油狀殘余物與THF共蒸發(fā)兩次，然后在高度真空下干燥16-18h以提供為淡黃色膠質(zhì)固體的大環(huán)前體11-14(1.27g,〉100%)。TLC:[EtOAc:MeOH(9:l)]:Rf=基線(UV,水合茚三酮)。步驟11-11.向大環(huán)前體11-14[1.27g,1.33mmol(基于氳解后獲得的量)，1.0當(dāng)量)的無(wú)水THF(53.6mL,對(duì)25mM溶液)溶液加入DIPEA(1.17mL，6.79mmol,5.0當(dāng)量)和DEPBT(440mg,1.47mmol,1.1當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-18h。在減壓下蒸發(fā)THF并將殘余物吸收入1MNa2C03:EtOAc(l:1,50mL)。以鹽水(2x25mL)洗滌分離的堿性水相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)。以快速色譜法[梯度，100%EtOAc至EtOAc:MeOH(98:2)]純化粗制殘余物以提供為淡黃色固體的大環(huán)556(617mg,81%)。TLC[EtOAc/MeOH(9:l)]:Rf=0.45(UV,CMA);LC/MS(Grad—B4):10.88mm。實(shí)施例12合成咪唑啉基和二氫嘧啶堿基大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序12-A(m=1)12-B(m=2>該合成是基于文獻(xiàn)中為引入該官能性的合成方法(StLaurent,D.R.等B證g.她dC/z譜.1995,3，1145)。向伯胺大環(huán)12-1(0.030mmol)的15mL無(wú)水THF的溶液加入石克醚試劑12-A或12-B(0.30mmol,10當(dāng)量,14965mg)，接著加入EtsN(0.60mmol,20當(dāng)量，0.083mL)。在氮下回流攪拌混合物16h,然后在減壓下蒸發(fā)至干燥。兩種情形下LC-MS分析都指示Boc-保護(hù)的(12-2)和Boc-脫保護(hù)的(12-3)大環(huán)產(chǎn)物的混合物。Boc-脫保護(hù)的產(chǎn)物由MS-觸發(fā)的反相HPLC乂人混合物分離?；蛘呤牵梢訣tOAc中的HC1處理混合物以在純化前裂解Boc基團(tuán)。對(duì)代表性大環(huán)519(12-3,m=l)和521(12-3,m=2)施用該一般程序。實(shí)施例13合成胍基(Guamdmyl)大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序<image>imageseeoriginaldocumentpage150</image>向完全脫J呆護(hù)的大環(huán)13-1(7.0mg,12.9jimol,1.0當(dāng)量)的無(wú)水THF(1.5mL)溶液加入Et3N(18jiL,129pmol,10當(dāng)量)，接著加入胍基化(guamdylation)試劑13-A(10.1mg，25.8拜ol，2.0當(dāng)量)。(Fechtmger,K.;Zapf,C;Smgs,H.L.;Goodman,M./CVg.C/2e肌1998,63,3804.)。在氮氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。在減壓下蒸發(fā)溶劑并以快速色譜法[梯度，MeOH/DCM(l:99)至(5:95)]純化粗制殘余物以提供13-2。蒸發(fā)期望的級(jí)分后，在20mL小瓶中將TFA/Et3SiH/DCM(50/3/47,2mL)溶液加入至雙Boc保護(hù)的大環(huán)產(chǎn)物13-2。在室溫?cái)嚢杌旌衔?h，然后在減壓下濃縮以提供期望的TFA鹽形式的胍類似物13-3。以反相HPLC純化粗制產(chǎn)物。TLC[MeOH:DCM(l:9)]:Rf=0.57(UV,CMA)。實(shí)施例14合成氰基胍基大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序MeSSMea.14-A,Et3N,EtOH50°C;b.NH3,MeOH55。C對(duì)4戈表性大環(huán)522例示一4殳程序。向大環(huán)14-1(0.01mmol)的EtOH(3mL)的溶液加入三乙胺(O.lmmol,10當(dāng)量)和試劑14-A。在55。C攪拌混合物16h,然后在減壓下濃縮。使用ISCOCombiFlash(TeledyneIsco,Inc.,Lmcoln,NE,USA)純化產(chǎn)物，然后直接進(jìn)行下一步驟。將中間產(chǎn)物硫醚溶解于7N的NH3/MeOH,然后在壓力瓶中在55。C攪拌16h。蒸發(fā)溶劑并使殘余物經(jīng)受制備型HPLC以提供氰基胍大環(huán)522。實(shí)施例15合成Boc-AA5的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖11)步驟15-1.(Panda,G.;Rao,N.V.2004,714.)。在室溫向攪拌的Boc-L-Ser-OH(15-l，5.0g,24.5mmol,1.0當(dāng)量)的160mL無(wú)水DMF懸浮液加入N,N-二異丙基乙胺(DIPEA,4.25mL,24.5mmol,1.0當(dāng)量)。向混合物加入HBTU(9.30g,24.5mmol,1.0當(dāng)量)并在室溫劇烈攪拌反應(yīng)5-10mm,然后在冰-水浴中冷卻，加入N,0-二甲基羥胺鹽酸鹽(2.65g,27mmol,1.1當(dāng)量)接著加入N,N-二異丙基乙胺(4.70mL,27mmol，1.1當(dāng)量)。攪拌混合物1h，然后除去水浴并在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)0/N。將反應(yīng)混合物冷卻至0。C并緩慢加入飽和NaHC03水溶液(200mL)。以乙酸乙酯(4x200mL)萃取反應(yīng)混合物。以鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，在硫酸鈉上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色語(yǔ)法(100。/。EtOAc)純化粗制殘余物以提供為無(wú)色固體的15-2(5.50g，90%)。TLC(100%EtOAc):Rf=0.40(水合茚三酮)。步驟15-2.在N2下向醇15-2(5.0g,20mmol,1當(dāng)量)和三乙胺(5.60mL,40.3mmol,2當(dāng)量)在100mL無(wú)水二氯曱烷中的混合物逐滴加入新蒸餾的曱磺酰氯(2.35mL,30mmol,1.5當(dāng)量)持續(xù)5mm。允許反應(yīng)體系升溫至室溫并攪拌3h。順序地以冷水、1M檸檬酸鹽緩沖液、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌混合物。在硫酸鎂上干燥有機(jī)層并在減壓下濃縮以提供15-3(98%合并的產(chǎn)率)，其足以用于下一步驟。該化合物應(yīng)在制備的同一天使用。步驟15-3.在氬氛下向15-3(5.0g,15.3mmol,1當(dāng)量)的60ml無(wú)水DMF溶液加入疊氮化鈉(3.0g,46mmol,3當(dāng)量)并在50。C攪拌混合物12h。(7、心./^理這##^#"^>##7、心)。將反應(yīng)混合物冷卻至(TC并非常緩慢地加入水(IOOmL)。以乙酸乙酯(3x100mL)萃取反應(yīng)混合物。以鹽水(2x200mL)洗滌合并的有機(jī)萃取物，在疏酸鈉上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(己烷EtOAc，l:l)純化油狀殘余物以提供為無(wú)色固體的Boc-AA5(3.35g，80%)。TLC[己烷:EtOAc(l:l)〗:Rf=0.5(水合茚三酮)；'HNMR(CDC13，):S1.42.(s，9H),3.21(s，3H),3.45-3.55(m,2H),3.75(s,3H),楊(m，1H),5.50(brs，1H);LC-MS:tR=5.66min;[M+H]+:275。實(shí)施例16Boc保護(hù)大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序<formula>formulaseeoriginaldocumentpage152</formula>在室溫向537(1g,1.66mmol,1當(dāng)量)的THF:水(l:l,10mL)溶液加入Boc2。(1.08g,4.97mmol,1當(dāng)量)和K2C03(0.352g，3.33mmol,2當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?2h。以乙酸乙酯萃取溶液，然后以鹽水洗滌有機(jī)層，在硫酸鎂上干燥并在減壓下濃縮至干燥。以快速柱色諳法(乙酸乙酯己烷，1:1)純化所得的殘余物以提供受保護(hù)的大環(huán)Boc-537(75Q/o產(chǎn)率)。實(shí)施例17,人疊氮大環(huán)形成胺大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序537(Y=CF3,^-H,R2=H)17.2<Y=CF3,=H,R2=H)538<Y=F,Ri-Me,R2=H)17.13(丫=F,R，=Me,R2-H)545(Y=F'Ri=Me,R2=Me)17-20(Y=F,=Me,R2-Me)在室溫向大環(huán)(537,由實(shí)施例9的一般程序合成，1.0g,1.65mmol,1當(dāng)量)的THF(10mL)溶液加入三苯基膦(0.440g,1.65mmol,1當(dāng)量)和1ml水。在4CTC攪拌混合物以反應(yīng)過(guò)夜。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物至干燥并以乙酸乙酯萃取水相(3次)，在MgS04上干燥，過(guò)濾并濃縮。以快速柱色譜法在硅膠(乙酸乙酯甲醇，9:l)上純化殘余物以提供17-2(90%產(chǎn)率)。類似地，對(duì)化合物538(也由實(shí)施例9的一般程序合成，0.940g,1.65mmol,1當(dāng)量)進(jìn)行該程序提供17-13(90%產(chǎn)率)，對(duì)化合物545(也由實(shí)施例9的一般程序合成，0.960g,1.65mmol,1當(dāng)量)進(jìn)4亍該程序提供17-20(90%產(chǎn)率)。這種氨基大環(huán)也可使用實(shí)施例9以適當(dāng)保護(hù)的Dap衍生物組裝或圖7所示的固相程序來(lái)合成。實(shí)施例18合成包含嗎啉的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Υ硇源蟓h(huán)525例示該程序。在室溫向大環(huán)17-2(50mg,86.5jimol1當(dāng)量)的乙腈/原曱酸三曱酯(TMOF,2mL/0.5mL)溶液加入戊二醛(35pl86.5|imol,1當(dāng)量)、NaBH3CN(8.10mg,0.13mmol,1當(dāng)量)和l滴乙酸。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。將溶液冷卻至0°C,緩慢加入1mLNaOH溶液(25%)。攪拌反應(yīng)5mm。以乙酸乙酯(3x)萃取水相，然后以鹽水洗滌合并的有4幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色i普法(100%EtOAc)純化殘余物以提供525(50%產(chǎn)率)。使用實(shí)施例18的標(biāo)準(zhǔn)程序從17-13合成化合物534,50%產(chǎn)率。實(shí)施例19合成包含吡咯的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序<formula>formulaseeoriginaldocumentpage154</formula>在室溫向大環(huán)17-2(50mg,86.5jumol,1當(dāng)量)的乙腈/TMOF(2mL/0.5mL)溶液加入1,4-丁二醛(7.5mg,86.5jumol,1當(dāng)量)和1滴乙酸。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。冷卻溶液至0°C,緩慢加入1mL25%NaOH溶液。攪拌反應(yīng)5min,然后以乙酸乙酯(3x)萃取水相。以鹽水洗滌合并的有機(jī)相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速柱色鐠法(100%EtOAc)純化所得的殘余物以提供大環(huán)19-1(50%產(chǎn)率)。使用實(shí)施例19的標(biāo)準(zhǔn)程序從17-13合成化合物540,對(duì)3個(gè)步驟序列的總產(chǎn)率為50%。實(shí)施例20合成包含吡咯烷的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序<formula>formulaseeoriginaldocumentpage154</formula>在室溫向大環(huán)19-1(50mg,86.5|umol,1當(dāng)量)的95%乙醇(2mL)溶液加入PtO2(10mg,20%重)和1滴乙酸。使用氣瓶在氫氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。將Pt02過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)并以乙醇洗滌。在減壓下除去所有溶劑。以HPLC純4t所得的殘余對(duì)代表性大環(huán)526例示該程序，它以文獻(xiàn)中對(duì)該官能團(tuán)的程序?yàn)榛A(chǔ)(Rostovstev,V.;Green,L.K.;Fokin,V.V.;Sharpless,K.B.C/2ew./W.￡>2g/.2002,41,2596和引用的文獻(xiàn))。在室溫向大環(huán)537(100mg，O.165mmol,1當(dāng)量)、Cul(3.4mg,0.0165mmol,0.1當(dāng)量)和DIPEA(30pL,0.165mmol,1當(dāng)量)的乙腈/曱醇(2mL/0.5mL)溶液。將反應(yīng)體系冷卻至-78。C并向溶液吹入過(guò)量的丙烯氣體(超過(guò)10當(dāng)量)，密封燒瓶。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。將反應(yīng)體系冷卻至0。C，緩慢釋放丙烯，并通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)過(guò)濾出Cu，以乙腈洗滌。在減壓下除去所有溶劑。以快速色諳法(乙酸乙酯甲醇，95:實(shí)施例22合成包含4,5-二甲基-三唑的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Υ硇源蟓h(huán)528例示該程序。在室溫向537(100mg，0.165mmol，1當(dāng)量)的曱苯(1mL)溶液加入2-丁炔(3mL,過(guò)量)并密封燒瓶。在140。C攪拌混合物48h。將反應(yīng)體系冷卻至0。C,緩慢釋放2-丁炔并在減壓下除去所有溶劑。以快速色譜法(100%乙酸乙酯)純化殘余物以提供155528(65%產(chǎn)率)。實(shí)施例23合成包含5-甲基-四唑的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Υ硇源蟓h(huán)527例示該程序。在室溫向537(100mg,0.165mmol,1當(dāng)量)的DMSO(1mL)溶液加入ZnBr2(37mg,0.165mmol，1當(dāng)量)、乙腈(5mL,過(guò)量)。在14(TC攪拌混合物48h。冷卻反應(yīng)體系至室溫，然后在減壓下除去溶劑。在硅膠上以快速色鐠法(l00%乙酸乙酯)純化所得的殘余物以提供527(35%產(chǎn)率)。實(shí)施例24合成包含4-氨基甲基-三唑的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序523<R=H)對(duì)4戈表性大環(huán)523例示該牙呈序。向537溶液(IOOmg,0.165mmol,1當(dāng)量)力口入Boc-丙炔胺(28mg，0.184mmol,1.1當(dāng)量)、DIPEA(30^L,0.165mmol,l當(dāng)量)和Cul(3.4mg,0.0165mmol,0.1當(dāng)量)的乙腈/曱醇(2mL/0.5mL)溶液并在室溫?cái)嚢?/N。在減壓下除去溶劑并以快速色鐠法(乙酸乙酯曱醇，95:05)純化所得的殘余物以提供24-1(80%產(chǎn)率)。以2mLHCl/二嗝烷(4N,0.79mmol,20當(dāng)量)處理24-1并在室溫?cái)嚢杌旌衔?h。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物至干燥以纟是供523(98%產(chǎn)率)。實(shí)施例25合成包含單甲氨基的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序15625-3(R=K=Me)步驟25-1.在室溫向17-2(1.0g,1.73mmol,1當(dāng)量)的DCM(10mL)溶液加入Bts-Cl(0.41g,1.73mmol,1當(dāng)量)和三乙胺(0.175g,1.73mmol,1當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。以0.1N鹽酸洗滌反應(yīng)混合物，在硫酸鎂上干燥并在減壓下濃縮至干燥。以快速色譜法(EtOAc:己烷，1:l)純化所得的殘余物以提供2S1(95%產(chǎn)率)。步驟25-2.在室溫向25-1(50mg，64.5jumol,1當(dāng)量)的THF(10mL)溶液加入甲醇(26|iL,0.645mmol,10當(dāng)量)、預(yù)形成的三苯基膦-DIAD加合物(如實(shí)施例38中所述的合成，32mg,0.071mmol,1.1當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物至干燥。以快速色譜法(乙酸乙酯己烷，1:1)純化殘余物以提供25-2(98%產(chǎn)率)。步驟25-3.在室溫將25-2(50mg)溶解于乙醇THF(1:1,2mL)，以苯辟u酚樹脂(lg)處理并在定軌搖動(dòng)器上攪動(dòng)2h。濾去樹脂并以乙醇THF洗滌數(shù)次。在減壓下除去濾液和洗滌液，將粗制殘余物經(jīng)受HPLC純化以提供25-3(50%產(chǎn)率)。使用實(shí)施例25的標(biāo)準(zhǔn)程序從17-20合成化合物546,對(duì)3個(gè)步驟序列~44%總產(chǎn)率。使用實(shí)施例25的標(biāo)準(zhǔn)程序從17-13合成化合物548,對(duì)3個(gè)步驟序列40%總產(chǎn)率。包含單曱氨基的大環(huán)也可使用構(gòu)件Boc-AA4以如圖7所示的固相方法或如實(shí)施例9中所述的液相程序合成。實(shí)施例26合成包含嘧啶的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Υ硇源蟓h(huán)524例示該程序。在室溫向17-2(0.10g,0.173mmol,1當(dāng)量)的DMF(1.7mL)溶液加入2-溴代嘧啶(0.136g,0.865mmol,5當(dāng)量)和K2C03(60mg,0.432mmol,.2.5當(dāng)量)。在7CTC攪拌混合物O/N,然后冷卻至室溫。以10mL乙酸乙酯辦「考奪反應(yīng)混合物，以0.1N鹽酸和鹽水洗滌，然后在硫酸鎂上干燥并在減壓下濃縮至干燥。以快速色譜法(乙酸乙酯己烷，l:l)純化所得的殘余物以提供524(96%產(chǎn)率)。使用實(shí)施例26的標(biāo)準(zhǔn)程序從17-13合成化合物535,產(chǎn)率96%。使用實(shí)施例26的標(biāo)準(zhǔn)程序從X-13合成化合物550,產(chǎn)率80%。實(shí)施例27合成包含二甲基氨基的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖12A)步驟27-1.在室溫向27-1(從包含游離仲胺和受保護(hù)的伯胺的相應(yīng)大環(huán)合成，類似于步驟11-2中所述的以Bts-Cl處理，接著在標(biāo)準(zhǔn)條件下脫Boc保護(hù)，3.3g,3.63mmol,1當(dāng)量)的TFA(50mL,0.653mol,180當(dāng)量)溶液加入聚苯乙錄(PS)磺酰胺樹脂(ArgonautTechnologies,現(xiàn)在是BiotageAB的——部分，Uppsala,Sweden,1.1mmol/g,，16.8g,18.2mmol，5當(dāng)量)。在70。C攪拌混合物2h。濾去樹脂并以TFA和DCM洗滌數(shù)次。在減壓下除去濾液和洗滌液。以快速色謙法(100%乙酸乙酯)純化所得的殘余物以才是供27-2(70%產(chǎn)率)。步驟27-2.在室溫向27-2(1.2g,1.55mmol,1當(dāng)量)的乙腈/TMOF(6mL/2mL)溶液加入甲醛(0.426ml，15.5mmol,10當(dāng)量)、NaBH3CN(97mg，15.5mmol，10當(dāng)量)和1滴乙酸。在室溫?cái)?半反應(yīng)2h。將溶液冷卻至0。C,然后緩慢加入1mL25Q/oNaOH溶液，攪拌反應(yīng)5mm。以乙酸乙酯(3x)萃取水相，以鹽水洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(乙酸乙酯曱醇，95:5)純化所得的殘余物以提供27-3(75%產(chǎn)率)。步驟27-3.在室溫向27-3(1.33g,1.66mmol,1當(dāng)量)的DMF(10mL)溶液加入巰基丙酸(0.9g,8.30mmol,5當(dāng)量)和&2(:03(1.15g,8.30mmol,5當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?2h。以乙酸乙酯和水稀釋反應(yīng)混合物，然后以乙酸乙酯萃取。以鹽水洗滌合并的有機(jī)層，在硫酸鎂上干燥并在減壓下濃縮至干燥。以快速色譜法(乙酸乙酯甲醇，9:l)純化所得的殘余物以提供27-4(80%產(chǎn)率)。實(shí)施例28合成包含二曱基氨基的大環(huán)的其它標(biāo)準(zhǔn)程序(圖12B)步驟28畫1.在室溫向538(0.200g,0.352mmol,1當(dāng)量)的DCM(2mL)溶液加入三氟乙酸酐(TFAA,122]iL,0.882mmol,2.5當(dāng)量)和三乙胺(TEA,250^L,1.76mmol,5當(dāng)量)。在0。C攪拌反應(yīng)1h。然后以10mL二氯曱烷稀釋混合物并以0.1N鹽酸和鹽水洗滌，在石克酸4美上干燥并在減壓下濃縮至干燥。以快速色i普法(乙酸乙酯己烷，1:l)純化殘余物以提供28-l(35%產(chǎn)率)。步驟28-2.在室溫向28-1(66mg,0.0994mmol,1當(dāng)量)的乙酸乙酯(5mL)溶液加入Pd/C(15mg,20%重量)和1滴乙酸。使用氣瓶在氫氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。將Pd/C過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)并以乙酸乙酯洗滌。在減壓下除去濾液和洗滌液以換二供28-2。步驟28-3.在室溫將粗制28-2溶解于乙腈/TMOF(6mL/2mL)并加入甲醛(22)LiL,0.0995mmol,3當(dāng)量)、NaBH3CN(6.15mg,0.0298mmol,2當(dāng)量)和l滴乙酸。在室溫?cái)嚢杌旌衔?h。將溶液冷卻至0。C并緩慢加入1mL25%NaOH溶液，攪拌混合物5mm。以乙酸乙酯(3x)萃取水相，以鹽水洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。在室溫將殘余物直接溶解于甲醇(5mL),加入K2C03(15mg)并在室溫?cái)嚢杌旌衔?h。將溶液冷卻至0。C并緩慢加入1mL0.1N鹽酸溶液，攪拌混合物5mm。以乙酸乙酯(3x)萃取水相，以鹽水洗滌，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將粗制殘余物經(jīng)受HPLC純化以提供549(<5mg)。實(shí)施例29包含AA1的本發(fā)明化合物的標(biāo)準(zhǔn)脫保護(hù)程序在室溫向29-1(36mg,1當(dāng)量)的TFA(10mL,180當(dāng)量)溶液加入聚苯乙烯(PS)磺酰胺樹脂(ArgonautTechnologies,現(xiàn)在是BiotageAB的一部分，Uppsala，Sweden,1.1mmol/g,0.5g,5當(dāng)量)。在70。C攪拌混合物2h。濾去樹脂并以TFA和DCM洗滌數(shù)次。在減壓下除去濾液和洗滌液。以快速色譜法(100%乙酸乙酯)純化所得的殘余物以才是供509(50%)。實(shí)施例30合成支鏈磺酰胺的標(biāo)準(zhǔn)程序30-1(R-Bts)30-2(R=Bts>576(R=H>a.MsCI,Et3N.DMAP,DCM;b.PS"C6H5S-K+，THF/95%EtOH對(duì)合成化合物576例示該程序。向Bts保護(hù)的大環(huán)30-1(50mg,67.6pmol,1.0當(dāng)量)的無(wú)水DCM(4mL)溶液加入Et3N(188jliL,,1.35mmol,20當(dāng)量)接著加入DMAP(l.6mg,l3.5(imol,0.2當(dāng)量)。在冰-水浴中冷卻混合物至(TC并加入MsCl(105piL,1.35mmol,20當(dāng)量)。在(TC攪拌混合物1h,升溫至室溫并在氮氛下攪拌0/N。在減壓下蒸發(fā)溶劑并在THF:95%EtOH(l:l)的溶液中使用結(jié)合苯硫酚的聚合物(lg新制備樹脂)從30-2除去Bts保護(hù)基團(tuán)，持續(xù)2h。在減壓下過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑提供粗制576，其由反相HPLC純化。160TLC[MeOH:DCM(5:95)]:Rf=0.24(UV,CMA)。實(shí)施例31合成支鏈曱酰胺的標(biāo)準(zhǔn)程序a.TMS異氰酸酯.Et3N,DMAP,DCM:b.PS-C6H5SK+,THF/95%BOH對(duì)合成化合物577例示該程序。向Bts保護(hù)的大環(huán)31-1(/人包含游離仲胺和受保護(hù)的伯胺的相應(yīng)大環(huán)合成，類似于步驟11-2中所述的以Bts-Cl處理，接著在標(biāo)準(zhǔn)條件下脫Boc保護(hù)，40mg，54.0pmol,1.0當(dāng)量)的無(wú)水DCM(3.5mL)溶液加入Et3N(150jliL,1.08mmol,20當(dāng)量)接著加入DMAP(1.3mg,10.8pmol,0.2當(dāng)量)。在水-水浴中將混合物冷卻至0°C,然后加入TMS異氰酸酯(143)LiL,1.08mmol,20當(dāng)量)。在(TC攪拌混合物1h,升溫至室溫并在氮氛下攪拌0/N。由HPLC-MS監(jiān)控反應(yīng)。在減壓下蒸發(fā)溶劑并以快速色語(yǔ)法[梯度，DCM至MeOH:DCM(l:9)]純化粗制殘余物。蒸發(fā)合并的包含產(chǎn)物的級(jí)分后，在THF:95%EtOH(l:1)的溶液中使用結(jié)合苯硫酚的聚合物(1g新制備樹脂)從31-2除去Bts保護(hù)基團(tuán)，持續(xù)2h。在減壓下過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑提供粗制577，其由反相HPLC純化。實(shí)施例32合成支鏈烴基胺的標(biāo)準(zhǔn)程序32-1(R=Bts)32-2(R=Bte)581(R=H>a.丙鵬，NaBH3CN,AcOH.TMOF/MeCN:b.PS"CSH5SK+,THF/95%EtOH對(duì)合成代表性化合物581例示該程序。向32-1(60mg,81.1pmol,1.0當(dāng)量)的TMOF:MeCN(l:1,5mL)溶液加入丙酮(148pL,2.02mmol,25當(dāng)量)接著加入NaBH3CN(126mg,2.02mmol，25當(dāng)量)和水乙酸(11.6^L,202.8umol,2.5當(dāng)量)。在氮氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。然后加入氪氧化鈉溶液(lM)直到pH10-12,并以DCM(3x)萃取所得的水相。以鹽水洗滌合并的有機(jī)相一次，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)以提供粗制32-2,其由反相HPLC純化。如對(duì)實(shí)施例31所述的除去Bts基團(tuán)。該程序中使用其它脂肪族醛和酮代替丙酮產(chǎn)生其它類似的烴基化胺產(chǎn)物。實(shí)施例33合成包含脒基的大環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)程序33-1(n=1>33"3(n=1，R=Bts)33-2(n=2>334(n=2,R=Bts)506(n-1,R-H)518(n=2,R=H)對(duì)合成代表性化合物506例示該程序，并也適用于從33-2開始合成代表性化合物518。在0。C將腈33-1(根據(jù)圖7所示程序以合適氨基酸構(gòu)件從固相合成獲得，218mg粗制)溶解于1.25M的HCl/EtOH(25mL)溶液，并將氣態(tài)HC1吹入溶液30mm。然后在室溫?cái)嚢杌旌衔?h。在減壓下蒸發(fā)溶液，然后在高度真空下干燥。將粗制殘余物溶解于2M的氨/乙醇溶液(25ml)并在室溫?cái)嚢杌旌衔?/N。在減壓下蒸發(fā)溶液并以反相HPLC純化以提供33-3(17.4mg)。如對(duì)實(shí)施例31所述的除去Bts基團(tuán)。實(shí)施例34合成拴系物Boc-T94(R)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖14)步驟34畫1.3-(2-(R)羥基乙基-l-氧基)-2-溴代吡啶[T94-2(R)]。在氮氛下在室溫將2-溴代-3-他啶酚T94-l(2.0g,12mmol,1當(dāng)量)溶解于DMF(無(wú)水，50mL)。加入碳酸鉀(1.6g,12mmol,1當(dāng)量)和(R)-碳酸甲酯(lmL,12mmol,1當(dāng)量)并劇烈攪拌混合物15mm。然后使用油浴將反應(yīng)體系加熱至85。C達(dá)72h。向混合物加入100mL水，并以乙酸乙酯(5x100mL)萃取水層。以鹽水(200mL)洗滌合并的有機(jī)層并在MgS04上干燥。在減壓下濃縮有機(jī)層。將所得的殘余物經(jīng)受快速色譜法(100%乙酸乙酯)以獲得淡黃色油狀的T94-2(R)(2.12g，76%)。TLC(100o/o乙酸乙酯)Rf:0.55(UV,CMA)步驟34-2.3-(2-(尺)羥基乙基-1-氧基)-2-(1-叔丁氧基羰基氨基-丙-2-炔-3-基)他咬[T94-3(R)]。將T94-2(R)(1g,4.3mmol，1當(dāng)量)和Boc-丙炔胺衍生物(1.1g,6.46mmol,1.5當(dāng)量)溶解于Et3N(經(jīng)CaH2蒸餾)DMF(1:3,15mL)且通過(guò)向溶液吹入氬氣將反應(yīng)混合物脫氣。加入反式-二氯代-雙(三苯基膦)4巴(n)(91mg,3mol%,0.13mmol)和新重結(jié)晶的碘化銅(1)(28.5mg,0.15mmol,3.5mol%)，將混合物升溫至50。C并攪拌〇/N。在減壓下(油泵真空)除去溶劑并以快速色譜法(100%乙酸乙酯)純化所得的殘余物以獲得淡褐色固體的T94-3(R)(1.12g,85%)。TLC(100。/o乙酸乙酯)Rf:0.33(UV,CMA)步驟34-3.3-(2-(R)羥基乙基-l-氧基)-2-(l-叔丁氧基羰基氨基丙-3-基)吡咬[Boc-T94(R)]。將炔化合物T94-3(R)(5.0g,16mmol)溶解于EtOH(80mL),然后加入Pt02(4mol%,150mg)并在氳氛下(使用充滿氫的氣瓶)攪拌混合物0/N。這階段后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)墊，以THF洗滌，然后在減壓下濃縮合并的濾液和洗滌液以提供相對(duì)純(以&NMR)但仍有色的Boc-T94(R)樣品，定量產(chǎn)率。使該材料經(jīng)受快速色譜法(100。/。乙酸乙酉旨)可實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步純化。產(chǎn)物Boc-T94(R)與起始材料具有相同Rf，因此&NMR是區(qū)分它163們的最好方式。TLC(100o/o乙酸乙酯)Rf:0.33(UV,CMA)NMR(CDC3):S1.30(d，3H)，1.4(s，9H),1.90(m，2H)，2.80(m,2H),3.15(m，2H)，3.80-3.90(m,2H),4.150(m，1H)，5,01(m,1H)'7.10(m，2H),8.01(sb，1H).13CNMR(CDC!3):$19.69，28.62，29.77，40.25,66.07,73,62，76.卯，77.32,79.18,118.21，122.19,128.80,132.49,140.74，151.63,153.08，156.41.注意T94(R)用于制備具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，T94(S)用于合成具有(R)-立構(gòu)中心的式I化合物。實(shí)施例35合成拴系物Boc-T95(R)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖15)該順序是基于文獻(xiàn)中報(bào)道的反應(yīng)方法。(Lm,N.W。org.她dC/ze附.1998,8,249-254;Swindell,C.//"wocjc/m1986,24,3373-3377;Shimano,Masanao,7>/r"/zet/,owZ^/T.1998,39,4363-4366;Snieckus,V.</.Og.C/zew.1985,50,5436-5438.)步驟35-1.將3-羥基吡啶(T95-l，14.0g,0.147mmol)的THF/DMF(315mL/315mL)溶液冷卻至0°C,然后分批加入叔丁醇鉀(24.7g,221mmol)。攪拌混合物5mm,然后逐滴加入MOM-C1(13.0mL,162mmol)持續(xù)10mm。加入氯化銨飽和水溶液并在減壓下除去THF。然后以Et20(3x)萃取水相。在MgS04上干燥合并的有才幾相，過(guò)濾并在減壓下濃縮。所獲得的粗制T9S2(橙色油)用于下一步驟。步驟35-2.將T95隱2(6.0g,43mmol)和TMEDA(7.8mL,52mmol)的THF(175mL)溶液冷卻至-78。C并用初4戒攪拌器攪動(dòng)。逐滴加入nBuLi(己烷中1.56M,31.4mL,49mmol)。形成粘的才登色稠漿并隨時(shí)間溶解。攪拌溶液1h然后加入I2(14.2g,56mmol),在-78。C再攪拌溶液1h然后升溫至室溫0/N。加入水至反應(yīng)體系并在減壓下除去THF。以Et20(3x)萃取水相。合并有機(jī)相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(梯度，8/2EtOAc/己烷至6/4EtOAc/己烷)純化所得的殘余物以提供7.0g(68。/o)微黃色固體的T95-3。步驟35-3.在室溫向T95-3(6.5g,24.6mmol)的DCM(49mL)溶液加入TFA(49mL)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?h。在減壓下除去溶劑并在相同條件下以相同試劑再處理1小時(shí)。通過(guò)對(duì)處理過(guò)的小份反應(yīng)液的NMR光鐠監(jiān)控反應(yīng)。加入碳酸氫鈉飽和水溶液并以EtOAc(3x)萃取水相。在MgS04上干燥合并的有才幾相，過(guò)濾并在減壓下濃縮以纟是供5.1g(94%)為微黃色固體的T95-4,其原樣用于下一步驟。步驟35-4.向3-羥基-4-碘代吡啶(5.09g,23.0mmol)的DMF(95mL)溶液加入(R)-碳酸丙烯酯(T95-A,2.35g,23.0mmol))和碳酸鉀(3.18g,23.0mmo1)。在85。C撹拌溶液72h。加入水并以EtOAc(3x)萃取水相。以鹽水(lx)和水(lx)洗滌合并的有才幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(100%EtOAc)純化所得的殘余物以提供1.4g(24%)T95-4(R)。步驟35-5.以氬氣對(duì)械化物T95-4(R)(1.27g,4.56mmol)和Boc-丙炔胺(1.06g,6.83mmol)的CH3CN/TEA(13.2mL/5.4mL)溶液脫氣5min,然后加入Pd(Cl)2(PPh3)2(95mg)和Cul(25mg)。在50。C加熱溶液〇/N。在減壓下除去溶劑并以快速色語(yǔ)法(100%EtOAc)純化所得的殘余物以提供1.23g(89%)WT95-5(R)。步驟35-6.向T95-5(R)(935mg,3.05mmol)的95%EtOH(20mL)溶液加入Pt02(28mg,0.122mmol)。以氬飽和該溶液(將H2氣體吹入反應(yīng)混合物2h),然后在氬氛下攪拌〇/N。將混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA),以EtOAc、然后以MeOH洗滌數(shù)次。在減壓下濃縮濾液，如此獲得的殘余物適合用于構(gòu)建本發(fā)明大環(huán)化合物而無(wú)需任何進(jìn)一步純化(見實(shí)施例37)。LC-MS(GradB4):tR=4.83mm注意T95(R)用于制備具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物，如實(shí)施例37中進(jìn)一步描述的。類似地，T95(S)用于合成具有(R)-立構(gòu)中心的式I化合實(shí)施例36合成拴系物Boc-T96(R)的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖16)該順序是基于文獻(xiàn)中4艮道的反應(yīng)方法。(Meana,A.5y"/e"2003,1678-1682;Cambano,V.5>"/^es"'2001,2175-2179.)步驟36-1.在室溫向4-羥基吡咬(T96-1,7.0g,74mmol)的CC14(360mL)溶液加入NBS(26.2g,0.147mol)。在黑暗中攪拌溶液24h(覆蓋鋁箔)。在減壓下濃縮混合物并依次以MeOH和丙酮研碎所得的殘余物，以提供18.9g(100%)的T96-2。步驟36-2.在-90。C向T96-2(8.0g,31.3mmol)的THF(307mL)的溶液緩慢加入n-BuLi(己烷中1.15M,71mL)溶液。攪拌混合物40mm,然后加入水(IO當(dāng)量)并將混合物升溫至室溫。在減壓下除去溶劑并以快速色鐠法(丙酮MeOH,10:l)純化所得的殘余物以提供3.22g(60%)的T96-3。步驟36-3.將T96-3(3.22g,18.4mmol)、PPh3(4.82g,18.4mmol)和(R)-甘油的單-PMB醚(T96-A,使用標(biāo)準(zhǔn)方法從相應(yīng)二醇合成，1.8g,9.2mmol)溶解于THF(14mL)。冷卻混合物至(TC,然后逐滴加入DIAD(3.5mL,17.9mmol)并保持溫度在0°C。在0。C攪拌溶液1h,然后在室溫0/N。在減壓下濃縮混合物并以快速色譜法(50/50EtOAc/己烷)純化殘余物以產(chǎn)生T96-4(R)(42%)。步驟36-4.向T96隱4(R)(1.25g,3.56mmol)的DIPEA(20mL)溶液力口入Boc-丙炔胺并以氬氣7于混合物脫氣10min。然后加入三苯基膦(121mg)、CuI(29mg)和Pd(Cl)2PPH3(160mg)。在70。C攪拌溶液0/N。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物并以快速色譜法(梯度，40%至卯％EtOAc/己烷)純化所得的殘余物以提供1.3g(80。/o)的T96刁(R)。步驟36-5.將Pd/C(10%,50%濕,628mg)加入至T96陽(yáng)5(R)(900mg)和AcOH(1.5當(dāng)量)的95%EtOH(20mL)溶液。以1300psi的H2飽和該'溶液。將混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)并以EtOAc、然后以MeOH洗滌數(shù)次。在減壓下濃縮合并的濾液和洗滌液，獲得的粗制Boc-T96(R)用于合成本發(fā)明的大環(huán)化合物而不經(jīng)任何進(jìn)一步純化。'H應(yīng)R(CDC13):51.4(d,CH3)，1,5(s,Boc),l,S(t，CH2)，2.6(t，CH2),3.15(t，CH2)，4.0(m,2xCH)，4.3(m,IH)，4.98(1H,NH)，6.8(d,1H芳族)，8.3(d，1H),8.4(s,1H芳族).注意T96(R)用于制備具有(S)-立構(gòu)中心的式I化合物。類似地，T96(S)用于合成具有(.R)-立構(gòu)中心的式I化合物。實(shí)施例37合成化合物565的標(biāo)準(zhǔn)程序(圖17)步驟37-1.將Boc-T95(R)(901mg,2.90mmol)、三苯基膦(762mg,2.卯mmol)和Bts-(D)Phe(3F)隱OBn(976mg,2.07mmol)溶解于無(wú)水THF(10mL)。將溶液在水-水浴中冷卻至(TC并逐滴加入偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD,551|iL)。完成加入后，在0。C攪拌混合物lh,然后緩慢升溫至室溫并在氮下再攪拌16-18h。在減壓下除去THF并以快速色鐠法(梯度，50/50EtOAc/己烷至80/20EtOAc/己烷)純化獲得的粗制殘余物以提供858mg的37-1。該步驟的產(chǎn)率通常為80-90%。步驟37-2.向經(jīng)基化氨基酸37-1(778mg，1.02mmol)的DMF(6mL)溶液加入碳酸鈉(519mg,5當(dāng)量)，接著加入2_巰基乙醇(346^L,5當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-18小時(shí)。加入水并以EtOAc(3x)萃取水相。以鹽水(lx)洗滌合并的有才幾相，在MgS04上干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色譜法(梯度6/3EtOAc/己烷至100%EtOAc)純化粗制殘余物以提供552mg的37-2(96%)。步驟37-3.將Pd/C(100/。，50%濕，628mg)小心地加入至37-2(502mg,0.888mmol)和AcOH(2滴)的95%EtOH(6mL)溶液。以氳飽和該溶液(將H2氣體吹入反應(yīng)混合物2h),然后在H2氛下攪拌0/N。將混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)并以EtOAc、然后以MeOH洗滌數(shù)次。在減壓下濃縮濾液，如此獲得的粗制37_3(94%)用于下一步驟而不經(jīng)任何進(jìn)一步純化。步驟37-4.在(TC向氨基酸兩性離子37-3(293mg,0.617mmol)和H畫D-Val-Nva陽(yáng)OBn鹽酸鹽(422mg,1.23mmol)的無(wú)水THF(3.0mL)溶液加入DIPEA(l.lmL,6.17mmol),接著加入HATU(469mg,1.23mmol)。在氮下攪拌混合物16-18h。在減壓下除去溶劑并將所得的殘余物溶解于EtOAc。順序地以檸檬酸鹽緩沖液(lM,pH3.5，2x)、碳酸氬鈉飽和水溶液(2x)和鹽水(2x)洗滌有機(jī)相。在MgS04上干燥有一幾相，過(guò)濾并在減壓下濃縮。如此獲得的殘余物以快速色鐠法(80/20EtOAc/己烷)純化以提供290mg的37-4(62%)。步驟37-5.將Pd/C(10%,50%濕，28mg)加入至37-4(284mg,0.373mmol)的95%EtOH(4mL)溶液。以氫々包和該溶液(將H2氣體吹入反應(yīng)混合物2h),然后在H2氛下攪拌0/N。將混合物過(guò)濾通過(guò)Celite(WorldMineralsInc.,SantaBarbara,CA)并以EtOAc、然后以MeOH洗滌數(shù)次。在減壓下濃縮濾液，獲得的256mg粗制37-5(100%)用于下一步驟而不經(jīng)任何進(jìn)一步純化。步驟37-6.將Boc保護(hù)的烴基化三肽37-5(256mg)溶解于TFA/TES/DCM(33/3/64,17mL)混合物。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1h,然后在減壓下濃縮。所得的油狀殘余物與DCM(3x)、然后與THF(3x)共蒸發(fā)并在減壓下干燥以提供大環(huán)前體37-6。步驟37-7.向37-6(0.380mmol)的無(wú)水THF(33mL)溶液加入DIPEA(330|iL,5當(dāng)量)和DEPBT(136mg,1.2當(dāng)量)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?6-18h。在減壓下蒸發(fā)THF,將殘余物吸收入EtOAc并以鹽水(2x)洗滌。在MgS04上干燥有機(jī)溶液，過(guò)濾并在減壓下濃縮。以快速色"i普法(95/5LC/MS(Grad—B4):tR=5.26min。實(shí)施例38合成PPh3-DIAD加合物o義ToDIAD(1當(dāng)量)PPh，(1當(dāng)量)THF,0。C30min加合物在0。C在氮下向充分?jǐn)嚢璧娜交?1當(dāng)量)的THF(0.4M)溶液逐滴加入偶氮二羧酸二異丙酯(DIAD,1當(dāng)量)。完成加入后，在0。C再攪拌混合物30mm。過(guò)濾收集獲得的白色固體(使用中等大小的多孔濾器)并以冷的無(wú)水THF洗滌直到洗滌液為無(wú)色。最后以無(wú)水Et20洗滌白色沉淀一次。然后在真空下充分干燥加合物并在氮下儲(chǔ)存。(^尤7A襲伴7/漆存該試W淡f要0。該加合物可在Mitsunobu型反應(yīng)中代替分別加入的各試劑使用。實(shí)施例39制備本發(fā)明化合物的代表性制劑設(shè)計(jì)為增強(qiáng)藥物溶解度的制劑通常導(dǎo)致口服生物利用度和臨床效力都增加。最流行的方法是向惰性脂質(zhì)媒介物中加入活性親脂成分(ChristopherJ.H.Porter&al.Lipidandlipid-basedformulation;optimizingtheoraldeliveryoflipophilicdmgs(月旨質(zhì)和基于月旨質(zhì)的制劑；4尤化親脂藥物的口服遞送).Aev.i>wg.Z)wc.2007，6,231-246;Aungst,B.J.Novelformulationstrategiesforimprovingoralbioavailabilityofdrugswithpoormembranepermeationorpresystemicmetabolism(改進(jìn)膜滲透性差或體循環(huán)前代謝差的藥物的口服生物利用度的新配制策略).丄P/2^mScz1993,82,979-987),如油(Burcham,D.L.;Maurm,MB.;Hausner,168DMP565indogsfollowingoraldosinginoilandglycolsolutions(以油和乙二醇溶液口服給藥后降血膽固醇的DMP565在犬的口服生物利用度改善).Ao/7/2^mDrwgZ)z^o&1997,75,737-742)、表面活性劑分散劑(Serajuddin,A.T.M.;Sheen,P.-C;Mufson,D.;Bernstein,D.F.;Augustine,M.A.Effectofvehicleamphiphilicityonthedissolutionandbioavailabilityofapoorlywater-solubledrugfromsoliddispersion(貝武形齊'J的兩親性只十？K溶性差的藥物從固態(tài)分散劑的溶出度和生物利用度的效應(yīng)).</.尸/2"r肌Scl1988,77,414-417)、自乳化制劑(Charman,S.A.;Charman,W.N.;Rogge,M.C;Wilson,T.D.;Dutko,FJ.;Pouton,CW.Self-emulsifymgdrugdeliverysystems:formulationandbiopharmaceuticalevaluationofaninvestigationallipophiliccompound(自乳4t藥物遞送系統(tǒng)研究的親月旨葉匕合物的配制和生物藥物"i平^介).i^y.1992,9,87-93;Craig,D.Q.M.;Lievens,H.S.R.;Pitt,K.G.;Storey,D.E.Aninvestigationintothephysicochemicalpropertiesofself-emulsifyingsystemsusinglowfrequencydielectric'spectroscopy,surfacetensionmeasurementsandparticlesizeanalysis(使用低頻介電譜、表面張力測(cè)量和粒徑分析研究自乳化系統(tǒng)的物理化學(xué)特征)./敗丄尸/z,.1993,96,147-155;Shah,N.H.;Carvajal,M.T.;Patel,C.I;Infeld,M.H.;Malick,A.W.Self-emulsifyingdrugdeliverysystems(SEDDS)withpolyglycolysedglyceridesforimprovinginvitrodissolutionandoralabsorptionoflipophilicd.rugs(含有聚乙二酉孚4b甘、;由酉旨以改善親脂藥物的體外溶出度和口服吸收的自乳化藥物遞送系統(tǒng)(SEDDS))./W.尸/w/7Ti1994,106,15-23)和乳液劑(Palm,K.J.;Phillips,A.J.;Ning,A.Theoralabsorptionofcefoxitinfromoilandemulsionvehiclesmmts(大鼠中頭孢西丁從油和乳液賦形劑的口月l吸收)./獻(xiàn)J.尸/wr肌1986,33,99-104;Kararli,T.T.;Needham,T.E.;Grifaen,M.;Schoenhard,G.;Ferro,L.J.;Alcorn,L.Oraldeliveryofarenininhibitorcompoundusingemulsionfoumulations(腎素抑制劑4b合物4吏用乳液制劑的口服遞送).尸/z,.L1992,9,888-893)。代表性制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的確定的方法測(cè)定，如此前在方法3-I中提及的。本發(fā)明代表性化合物的代表性制劑的結(jié)果示于以下。表14.化合物552的代表性制劑在大鼠中口服生物利用度媒介物水中5%HP-j3-CD水中5%HP妥CDCremophorEL/Lysorbate80/大豆油油酸/Labrafil給藥途徑IV口服口服口服n(大鼠)3333劑量(mg/kg)2888給藥體積(mL/kg)41611給藥溶液濃度(mg/mL)0.50.588ti/2(min)45±13---C顯(ng/mL)1719±299369±97229±162143±77T隨(min)55/1515/3030/60清除率(mL/min/kg)55±10---AUCinf(ng.min/mL)36977±698015291±681123806±214121412±10039F(o/。)(單獨(dú)結(jié)果)6,15，918，15,167,21，15F(%)(平均)-10±516±114±7CD=環(huán)糊精上述是本發(fā)明的說(shuō)明，并不應(yīng)解釋為對(duì)其的限制。本發(fā)明由如下的權(quán)利要求所限定，并包括權(quán)利要求的等同物。170權(quán)利要求1.一種下式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物其中Y是id="icf0002"file="A2007800334940002C2.tif"wi="36"he="26"top="125"left="31"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中(L5)和(L6)分別表示結(jié)合式I的L5和L6的鍵；Ar選自以下基團(tuán)R1選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、R5和R6獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氫、低級(jí)烴基、羥基和氨基；R10a和R10b獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；X1、X2、X6、X7、X8和X9獨(dú)立地選自氫、鹵素、三氟甲基和低級(jí)烴基；X3、X4和X5獨(dú)立地選自氫、羥基、烴氧基、鹵素、三氟甲基和低級(jí)烴基；L1、L2、L3和L4獨(dú)立地選自CH和N；前提是環(huán)中氮的總數(shù)必須是0、1、2或3；且L5和L6獨(dú)立地選自O(shè)、CR8aR8b和NR9；其中R8a和R8b獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烴基；且R9選自氫、低級(jí)烴基、甲?；?、?；突酋；?。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中Ar選自以下基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>和3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R4選自甲基、乙基、異丙基和環(huán)丙基。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2選自(CH2)mCH3、(CH2)mRu、CH2N3、(CH2)n2NR12R13、(CH2)n3C(=NR14)NR15R16、(CH2)n4NR17C(=NR18)NR19R2C^p(CH2)n5NHC(=0)NR21R22，其中m是O、1;2或3;nl、n2、n3、n4和n5獨(dú)立地為1、2、3或4;Rn、R13、R16、R17、R2o、R21和1122獨(dú)立地選自氬和低級(jí)烴基；R12、1115和1119獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基、羧烴基、羧芳基和磺酰基；1114和1118獨(dú)立地選自氳、低級(jí)烴基、羧烴基、羧芳基、磺酰基和氰基。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2選自以下基團(tuán)其中M選自CH2、O、NH和NCH3。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中L!、L2、L3和U各為CH，1>5為0,且U為CH2。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3、R4、R5和Rg各為氫；或R3為甲基且R4、Rs和R6各為氫；或R3為羥曱基且R4、R5和R6各為氫；或R3、R4和Rs各為氫且Rs為曱基；或R3和R5各為曱基且R4和R6各為氬。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中Y是其中(L5)和(U)分別表示結(jié)合L5和L6的鍵。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下述結(jié)構(gòu):<image>imageseeoriginaldocumentpage5</image><image>imageseeoriginaldocumentpage6</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage9</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。10.—種具有如下結(jié)構(gòu)的化合物或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物:，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中R25選自氬、烴基、芳基、環(huán)烴基、雜環(huán)和雜芳基；R26選自氬、烴基、芳基、?；?、羧烴基、羧芳基、磺?；陀糜诎被岬臉?biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)；1127選自氫和烴基；且1128選自以下基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中M選自CH2、O、NH和NCH3。11.一種具有如下結(jié)構(gòu)的化合物或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中Xu)和Xn獨(dú)立地選自氳、鹵素、三氟曱基和低級(jí)烴基；R40、R41、1142和R"獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R44選自氳、烴基、?；?、羧烴基、羧芳基、磺酰基和用于胺官能團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)；R45選自氬和烴基；R46選自氳、烴基、酰基、磺?；陀糜诹u基官能團(tuán)的標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)；Lu、L12、U3和Lw獨(dú)立地選自CH和N;前才是是環(huán)中氮的總數(shù)必須是0、1、2或3;且L15和L16獨(dú)立地選自、CR47R48和NR49;其中R47和R48獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烴基；且R49選自氳、低級(jí)烴基、曱?；?、?；突酋；?。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其具有如下結(jié)構(gòu)或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中PGi選自氫和用于胺官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)，并且PG2選自氫和用于羥基官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。13.—種大環(huán)化合物，其包括(a)構(gòu)件結(jié)構(gòu)；和(b)根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I的化合物。14.一種使用權(quán)利要求11所述的化合物合成式I化合物的方法。15.—種藥物組合物，其包括(a)根據(jù)權(quán)利要求1所述的式(I)的化合物；和(b)藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。16.—種藥物組合物，其包括(a)根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物；和(b)藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。17.—種藥物組合物，其包^fe:(a)根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物；和(b)藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。18.—種抑制胃腸能動(dòng)性的方法，該方法包括向患有胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)度或高胃動(dòng)素血癥造成的一種或多種病癥的受治療者施用有效量的式i化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物X!￡2—1^\2,其中(L5)和(L6)分別表示結(jié)合式I的L5和L6的鍵;Ar選自以下基團(tuán)#巾Rj選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、R5和R6獨(dú)立地選自氳、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氳、低級(jí)烴基、羥基和氨基；Rioa和Riob獨(dú)立地選自氬、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；XhX2、X6、X7、Xg和X9獨(dú)立地選自氫、卣素、三氟曱基和低級(jí)烴基；X3、X4和X5獨(dú)立地選自氬、羥基、烴氧基、卣素、三氟曱基和低級(jí)烴基；I小L2、L3和U獨(dú)立地選自CH和N;前提是環(huán)中氮的總數(shù)必須是0、1、2或3;且L5和U獨(dú)立地選自O(shè)、CR8aR8l^pNR9;其中R8a和R8b獨(dú)立地選自氳和低級(jí)烴基；且R9選自氫、低級(jí)烴基、甲?；Ⅴ；突酋；?。19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述化合物具有下述任何一種結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物口服施用。21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物胃腸外施用。22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述受治療者是哺乳動(dòng)物。23.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述受治療者是人類。24.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述化合物與用于抑制胃腸能動(dòng)性的其它藥劑共施用。25.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中胃腸病癥選自腹瀉、癌癥治療相關(guān)的腹瀉、癌癥引起的腹瀉、化療引起的腹瀉、放射性小腸炎、放射引起的腹瀉、應(yīng)激引起的腹瀉、慢性腹瀉、AIDS相關(guān)的腹瀉、艱難梭菌相關(guān)的腹瀉、旅行腹瀉、移植物抗宿主病引起的腹瀉、消化不良、腸易激綜合征、化療引起的惡心和嘔吐(嘔吐)和手術(shù)后惡心和嘔吐以及功能性胃腸病癥。26.—種治療受治療者與異常胃吸收或腸吸收相關(guān)的病癥的方法，該方法包括施用治療有效量的式I化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>Ar選自以下基團(tuán)其中(L5)和(U)分別表示結(jié)合式I的Ls和U的R4選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、Rs和R6獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氪、低級(jí)烴基、羥基和氨基；Rioa和R艦獨(dú)立地選自氳、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；X2、X6、X7、Xs和X9獨(dú)立地選自氫、鹵素、三氟甲基和低級(jí)烴基；X3、X4和X5獨(dú)立地選自氫、羥基、.烴氧基、鹵素、三氟甲基和低級(jí)烴基；L!、L2、L3和L4獨(dú)立地選自CH和N;前提是環(huán)中氮原子的總凄丈必須是0、1、2或3;且L5和U獨(dú)立地選自O(shè)、CRsaRsb和NR9;其中R&和Rsb獨(dú)立地選自氳和低級(jí)烴基；且R9選自氫、低級(jí)烴基、曱酰基、?；突酋；?。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述化合物具有下述任何一種結(jié)構(gòu)I和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage30</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage36</image>或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述病癥是短腸綜合征或乳糜瀉。29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述病癥是惡病質(zhì)。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述病癥是癌癥相關(guān)的惡病質(zhì)、AIDS相關(guān)的惡病質(zhì)或腎病相關(guān)的惡病質(zhì)。31.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述受治療者是哺乳動(dòng)物。32.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述受治療者是人類。33.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述受治療者接受調(diào)節(jié)胃吸收或腸吸收的其它化合物治療。34.—種治療受治療者與胃腸道炎癥相關(guān)的病癥的方法，該方法包括施用治療有效量的式I化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物Ar選自以下基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>、和Ri選自低級(jí)烴基和環(huán)烴基；其中(L5)和(U)分別表示結(jié)合式I的Ls和U的鍵;R2選自低級(jí)烴基、取代的低級(jí)烴基、環(huán)烴基和取代的環(huán)烴基；R3、R4、Rs和R6獨(dú)立地選自氳、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；R7選自氫、低級(jí)烴基、羥基和氨基；Rioa和Riob獨(dú)立地選自氳、低級(jí)烴基和取代的低級(jí)烴基；X!、X2、X6、X7、Xs和X9獨(dú)立地選自氫、卣素、三氟曱基和低級(jí)烴基；X3、X4和Xs獨(dú)立地選自氬、羥基、烴氧基、卣素、三氟甲基和低級(jí)烴基；"、L2、Ls和U獨(dú)立地選自CH和N;前4是是環(huán)中氮原子的總^:必須是0、1、2或3;且L5和U獨(dú)立地選自〇、CR8aR8(^pNR9;其中R8a和1181>獨(dú)立地選自氳和低級(jí)烴基；且R9選自氫、低級(jí)烴基、曱?；?、?；突酋；?。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述化合物具有下述任何一種結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage47</image>或其旋光異構(gòu)體、對(duì)映體、非對(duì)映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述病癥位于胃或腸中。37.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述病癥是炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn病或胰腺炎。38.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述受治療者是哺乳動(dòng)物。39.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述受治療者是人類。40.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述受治療者接受調(diào)節(jié)炎癥的其它化合物治療。全文摘要本發(fā)明提供了結(jié)合促胃動(dòng)素受體(包括其亞型、異構(gòu)型和/或變體)和/或?yàn)榇傥竸?dòng)素受體(包括其亞型、異構(gòu)型和/或變體)功能調(diào)節(jié)劑的構(gòu)象界定的大環(huán)化合物。這些大環(huán)化合物至少具備足夠的藥理學(xué)特征以用作一系列疾病適應(yīng)癥的治療劑。尤其是，這些化合物可用于治療和預(yù)防特征為高胃動(dòng)素血癥和/或胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)度的病癥，包括但不限于腹瀉、癌癥治療相關(guān)的腹瀉、癌癥引起的腹瀉、化療引起的腹瀉、放射性小腸炎、放射引起的腹瀉、應(yīng)激引起的腹瀉、慢性腹瀉、AIDS相關(guān)的腹瀉、艱難梭菌相關(guān)的腹瀉、旅行腹瀉、移植物抗宿主病引起的腹瀉、其它類型腹瀉、消化不良、腸易激綜合征、化療引起的惡心和嘔吐(嘔吐)和手術(shù)后惡心和嘔吐以及功能性胃腸病癥。此外，所述化合物具備用于治療特征為胃吸收或腸吸收差的疾病和病癥如短腸綜合征、乳糜瀉和惡病質(zhì)的功效。所述化合物還可用于治療胃腸道的炎性疾病和病癥，如炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn病和胰腺炎。因此還提供了治療這類病癥的方法和包含本發(fā)明化合物的藥物組合物。文檔編號(hào)C07K5/08GK101528765SQ200780033494公開日2009年9月9日申請(qǐng)日期2007年9月11日優(yōu)先權(quán)日2006年9月11日發(fā)明者A·魯伊蘭德,C·圣-路易斯,E·馬薩特,G·弗拉塞爾,H·托馬斯,K·貝納克里申請(qǐng)人:特蘭齊姆制藥公司