專(zhuān)利名稱(chēng)：：Glp-1藥物組合物的制作方法GLP-1藥物組合物相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求了2006年6月30日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/696,142的優(yōu)先權(quán)。發(fā)明背景本發(fā)明涉及胰高血糖素樣肽-1的肽類(lèi)似物、其藥學(xué)上可接受的鹽、使用這類(lèi)類(lèi)似物治療哺乳動(dòng)物的方法和因此有用的包含所述類(lèi)似物的藥物組合物。胰高血糖素樣肽-l(7-36)酰胺(GLP-l)是在腸L-細(xì)胞中通過(guò)胰高血糖素前體胰高血糖素原(preproglucagon)的組織特異性翻譯后加工合成的(Vamdell，J.M.等，J.HistochemCytochem，1985:33:1080-6)并且作為對(duì)膳食的反應(yīng)而被釋放入循環(huán)中。GLP-1的血漿濃度從約15pmol/L的禁食水平上升至40pmol/L的餐后峰值水平。已經(jīng)證實(shí)，就給定的血糖濃度上升而言，當(dāng)口服施用葡萄糖時(shí)血漿胰島素的增加比靜脈內(nèi)施用葡萄糖時(shí)大約高3倍(Kreymann，B.等，Lancet1987:2，1300-4)。這種稱(chēng)作腸降血糖素作用的胰島素釋放的飲食性增加主要是體液性的，認(rèn)為GLP-1是人最有效的生理腸降血糖素。除了促胰島素作用外，GLP-1還抑制胰高血糖素分泌，延緩胃排空(WettergrenA.等，DigDisSci1993:38:665-73)，并且可以促進(jìn)外周葡萄糖處理(D'Alessio，D.A.等，J.ClinInvest1994:93:2293-6)。在1994年，在觀(guān)察到GLP-1的單次皮下(s/c)劑量能完全使具有非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)的患者的餐后葡萄糖水平正常這一結(jié)果后就提示了GLP-1的治療潛能(Gutniak，M.K.等，DiabetesCare1994:17:1039-44)。認(rèn)為該作用既受胰島素釋放增加介導(dǎo)，又受胰高血糖素分泌減少介導(dǎo)。此外，已經(jīng)證實(shí)靜脈內(nèi)輸注GLP-1可延遲NIDDM患者的餐后胃排空(Williams，B.等，J.ClinEndoMetab1996:81:327-32)。不同于磺酰脲類(lèi)，GLP-1的促胰島素作用依賴(lài)于血糖濃度(Holz，G.G.4th等，Nature1993:361:362-5)。因此，在低血糖濃度下GLP-1-介導(dǎo)的胰島素釋放損失可防止嚴(yán)重的低血糖。這種聯(lián)合作用使得GLP-1具有超過(guò)目前用于治療NIDDM的其它活性劑的獨(dú)特的潛在治療優(yōu)勢(shì)。大量研究已經(jīng)證實(shí)在給予健康個(gè)體時(shí)，GLP-1有效地影響血糖水平以及胰島素和胰高血糖素濃度(Orskov，C，Diabetologia35:701-711，1992;Hoist,J.J.等，PotentialofGLP-1indiabetesmanagement,GlucagonIII，HandbookofExperimentalPharmacology,LefevbrePJ編輯，柏林，SpringerVerlag，1996，第311-326頁(yè))，這些作用是葡萄糖依賴(lài)性的(Kreymann，B.等,Lancetii:1300-1304，1987;Weir,G.C.等，Diabetes38:338-342，1989)。此外，它在糖尿病患者中也是有效的(Gutniak，M.，N.EnglJMed226:1316-1322，1992;Nathan,D.M.等，DiabetesCare15:270-276，1992)，可使2型糖尿病個(gè)體的血糖水平正常(Nauck，M.A.等，Diabetologia36:741-744，1993)和改善1型患者的血糖控制(Creutzfeldt，W.O.等，DiabetesCare19:580-586，1996)，從而表明了其尤其可增加胰島素敏感性/減少胰島素抵抗的能力。已經(jīng)提出將GLP-1及其激動(dòng)劑用于處于發(fā)生非胰島素依賴(lài)型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體(參見(jiàn)WO00/07617)以及用于治療妊娠糖尿病(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.加040266670)。除了上述內(nèi)容外，還存在許多在哺乳動(dòng)物例如人中的治療應(yīng)用，對(duì)它們而言，已經(jīng)顯示GLP-1及其激動(dòng)劑的應(yīng)用包括但不限于改善學(xué)習(xí)，促進(jìn)神經(jīng)保護(hù)和/或緩解中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或障礙(例如通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)生)和例如帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、中風(fēng)、ADD和神經(jīng)精神病綜合征的癥狀(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20050009742和20020115605);將肝臟干細(xì)胞/祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化成功能性胰腺細(xì)胞(WO03/033697);預(yù)防p-細(xì)胞衰退(deterioration)(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040053819和20030220251)和刺激(5-細(xì)胞增殖(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20030224983);治療肥胖(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040018975;W098/19698);抑制食欲和誘導(dǎo)飽感(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20030232754);治療腸易激惹綜合征(WO99/64060);降低與心肌梗死相關(guān)的發(fā)病率和/或死亡率(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040162241，WO98/08531)和中風(fēng)(參見(jiàn)WO00/16797);治療以不存在Q-波心肌梗死為特征的急性冠狀動(dòng)脈綜合征(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040002454);減弱術(shù)后分解代謝改變(美國(guó)專(zhuān)利No.6，006，753);治療冬眠心肌或糖尿病性心肌病(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20050096276);抑制去甲腎上腺素的血漿水平(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20050096276);增加尿鈉排泄、降低尿鉀濃度(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20050037958);治療與中毒性血容量過(guò)多(toxichypervolemia)相關(guān)的病癥或障礙，例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫和高血壓(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20050037958);誘導(dǎo)變力反應(yīng)(inotropicresponse)和增加心臟收縮力(美國(guó)專(zhuān)利7>開(kāi)No.20050037958);治療多嚢卵巢綜合征(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040266678&20040029784);治療呼吸窘迫(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040235726);通過(guò)非飲食途經(jīng)、即通過(guò)靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜或其它注射或輸注途經(jīng)改善營(yíng)養(yǎng)(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040209814);治療腎病(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040209803);治療左心室收縮功能障礙，例如具有異常左心室射血分?jǐn)?shù)的左心室收縮功能障礙(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20040097411);抑制胃竇十二指腸運(yùn)動(dòng)性，例如用于治療或預(yù)防胃腸道障礙如腹瑪、術(shù)后傾倒綜合征和腸易激惹綜合征和作為內(nèi)窺鏡檢查操作中的術(shù)前用藥法(美國(guó)專(zhuān)利乂^開(kāi)No.20030216292);治療危重病性多發(fā)性神經(jīng)病(criticalillnesspolyneuropathy,CIPN)和全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20030199445);調(diào)節(jié)甘油三酯水平和治療血脂異常(dyslipidemia)(美國(guó)專(zhuān)利7>開(kāi)No.20030036504和20030143183);治療局部缺血后血流再灌注導(dǎo)致的器官組織損傷(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20020147131);治療冠心病危險(xiǎn)因子(coronaryheartdiseaseriskfactor,CHDRF)綜合征(美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)No.20020045636)等。然而，GLP-l代謝不穩(wěn)定，在體內(nèi)的血漿半衰期(11/2)僅為1-2分鐘。外源性施用的GLP-l也快速降解(Deacon，C.F.等，Diabetes44:1126-1131，1995)。這種代謝不穩(wěn)定性限制了天然GLP-1的治療潛能。已經(jīng)進(jìn)行了大量嘗試以通過(guò)制劑的改進(jìn)來(lái)改善GLP-1和其類(lèi)似物的治療潛能。例如，國(guó)際專(zhuān)利^HfNo.WO01/57084描述了用于生產(chǎn)GLP-1類(lèi)似物的晶體的方法，據(jù)說(shuō)這些類(lèi)似物可用于制備包含所述晶體和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物如可注射藥物。已經(jīng)從鹽水溶液中生長(zhǎng)出了GLP-l(7-37)OH的非均勻微晶簇并且在用鋅和/或間-甲酚進(jìn)行晶體浸入處理后進(jìn)行了檢查(Kim和Haren，Pharma.Res.第12巻，第11期(1995))。已經(jīng)由含有鋅或魚(yú)精蛋白的磷酸鹽溶液制備了含有針狀晶體和無(wú)定形沉淀的GLP(7-36)NH2的粗結(jié)晶混懸液(Pridal等，InternationalJournalofPharmaceutics第136巻，第53-59頁(yè)(1996))。歐洲專(zhuān)利公開(kāi)No,EP0619322A2描述了通過(guò)混合蛋白質(zhì)在pH7-8.5緩沖液中的溶液與鹽和低分子量聚乙二醇(PEG)的某些組合制備GLP-l(7-37)OH的微晶形式的方法。美國(guó)專(zhuān)利No.6，566，490描述了尤其是GLP-1的微晶種晶，據(jù)說(shuō)它有助于生產(chǎn)純化的肽產(chǎn)品。美國(guó)專(zhuān)利6，555，521(US'521)中披露了具有四方平滑桿或板狀形狀的GLP-1晶體，據(jù)說(shuō)它們具有改善的純度并且表現(xiàn)出延長(zhǎng)的體內(nèi)活性。US'521教導(dǎo)了這類(lèi)晶體相對(duì)均勻并且比現(xiàn)有的結(jié)晶簇和無(wú)定形結(jié)晶混懸液更長(zhǎng)時(shí)間地保持混懸狀態(tài)，據(jù)說(shuō)現(xiàn)有的結(jié)晶簇和無(wú)定形結(jié)晶混懸液快速沉降、聚集或彼此團(tuán)簇，阻塞注射器針頭并且一般加重不可預(yù)知的給藥量。已經(jīng)提示將生物可降解的聚[(dl-丙交酯-共-乙交酯)-p-乙二醇-p-(-丙交酯-共-乙交酯)的三嵌段共聚物用于GLP-1的控釋制劑。然而，類(lèi)似于其它聚合物系統(tǒng)，三嵌段共聚物的制備涉及復(fù)雜的方案和不一致的顆粒形成。類(lèi)似地，還提示將生物可降解的聚合物例如聚[(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)用于肽類(lèi)的持續(xù)遞送制劑。然而，在本領(lǐng)域中并不贊成應(yīng)用這類(lèi)生物可降解聚合物，因?yàn)檫@些聚合物一般具有較差的水溶性，需要與水不混溶的有機(jī)溶劑例如二氯甲烷和/或在生產(chǎn)過(guò)程中需要苛刻的制備條件。認(rèn)為這類(lèi)有機(jī)溶劑和/或苛刻的制備條件會(huì)增加誘導(dǎo)所關(guān)注的肽或蛋白質(zhì)構(gòu)象改變的風(fēng)險(xiǎn)，從而導(dǎo)致結(jié)構(gòu)完整性下降和生物活性受損(Choi等，Pharm.Research,第21巻，第5期(2004))。泊洛沙姆同樣存在缺陷。(Id.)ii上述參考文獻(xiàn)中所述的GLP-1組合物在制備GLP的藥物制劑方面不太理想，因?yàn)樗鼈冓呄蛴诜@雜質(zhì)和/和還難以可再現(xiàn)地生產(chǎn)和施用。此夕卜，已知GLP類(lèi)似物在濃度升高時(shí)誘發(fā)惡心，因此需要提供具有降低的初始血漿濃度的持續(xù)藥物作用。因此，需要更易于和可靠地生產(chǎn)、更易于和可再現(xiàn)地施用于患者并且提供降低的初始血漿濃度以減少或消除不希望的副作用的GLP-1制劑。發(fā)明概述本發(fā)明可概括在下面的段落以及權(quán)利要求中。因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種藥物組合物，其包含式(I)的GLP-1類(lèi)似物(Aib8'35)hGLP-l(7-36)NH2(I)或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述組合物的制劑提供優(yōu)良的生產(chǎn)、施用、藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)特性以及減弱的不良副作用。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選不由具有pH4的澄清的ZnCl2水溶液組成，其中所述的[Aib8，35]hGtP-l(7-36)NH2的存在濃度為4mg/ml且所述的ZnCl2的存在濃度為0.5mg/ml。在所述第一個(gè)目的的第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了具有改善的藥物釋放特性、優(yōu)選具有減少的初始突釋(burst)的藥物組合物。在所述第一個(gè)目的的第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了具有延長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間的包含式(I)化合物的藥物組合物。在所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。所述的載體或稀釋劑優(yōu)選包含水。在所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的第一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的藥物組合物進(jìn)一步包含鋅。更優(yōu)選地，鋅在所述藥物組合物中的存在濃度為約0.0005mg/mL至約50mg/ml。甚至更優(yōu)選地，鋅在所述藥物組合物中的存在濃度為約0.01mg/mL至約0.50mg/mL。更優(yōu)選地，所述的藥物組合物包含稀釋劑，其中所述稀釋劑包含藥學(xué)上可接受的水溶液。該稀釋劑可以包含無(wú)菌水。更優(yōu)選地，所述的藥物組合物包含含水混合物、混懸液或溶液，其中所述的式(I)化合物的存在濃度為約0.5。/。至30。/。(w/w)。更優(yōu)選地，所述的式(I)化合物在所述的含水混合物、混懸液或溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%(w/w)。更優(yōu)選地，所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2°/、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、14%、15%、16%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、29%或30%(w/w)。還更優(yōu)選地，所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、9%、10%、11%、22%、23%、24%、25%或26%(w/w)。甚至還更優(yōu)選地，所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、10%、22%、23%、24%、25%或26%(w/w)。還更優(yōu)選地，所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、5%、10%、23%或25%(w/w)。"約"意指如下含義對(duì)于約0.5%至約4%的濃度而言，±0.5%目標(biāo)值是期望的范圍(例如0.5%至1.5%即約1%);對(duì)于約5%和5%以上的目標(biāo)濃度而言，20%目標(biāo)值是期望的范圍(例如8%至12%即約10%)。在所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的藥物組合物進(jìn)一步包含鋅，其中在所述藥物組合物中所述的式(I)化合物與鋅的摩爾比為約6:1至約1:1。更優(yōu)選地，所迷的比例為約5.5:1至約1:1。還更優(yōu)選地，所述的比例為約5.4:1至約1.5:1。甚至還更優(yōu)選地，所述的比例為約5.4:1、4.0:1或1.5:1。最優(yōu)選地，所述的比例為約1.5:1。在本發(fā)明的該方面中"約"意指的是1.5:1±10%各目標(biāo)值的比例，因此期望的比例包括涵蓋例如1.35-1.65:0.85-1.15的比例。優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，Aib"shGLP-lC7J6)NH2在所述藥物組合物中的濃度為約1。/。(重量/體積)且[Aib8，3shGLP-l(7-36)NH2與鋅的摩爾比為約1.5:1。另外優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib"shGLP-l(7-36)NH2在所迷藥物組合物中的濃度為約20/0(重量/體積)且[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2與鋅的摩爾比為為1.5:1。進(jìn)一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib^shGLP-l(7-36)NH2在所述藥物組合物中的濃度為約10。/。(重量/體積)且[AibS"hGLP-l(7-36)NH2與鋅的摩爾比為約1.5:1。還進(jìn)一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib8，35lhGLP-l(7-36)NH2在所述藥物組合物中的濃度為約23%或約25。/。(重量/體積)且Aib8，3shGLP-l(7-36)NH2與鋅的摩爾比為約1.5:1。優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述藥物組合物中的濃度為約5%(重量/體積)且所述的比例為約5.4:1。另外優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib8，35lhGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約5%(重量/體積)且所述的比例為約4.0:1。另外優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約10%(重量/體積)且所述的比例為約5.4:1。還進(jìn)一步優(yōu)選地，在本發(fā)明的所迷第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約10%(重量/體積)且所述的比例為約4.0:1。優(yōu)選地，在所述第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的鋅以氯化鋅或乙酸鋅的形式^皮提供。更優(yōu)選地，所述的乙酸鋅以ZnAc2'2H20的形式被提供。優(yōu)選地，在所迷第一個(gè)目的的所述第三個(gè)方面的所述第一個(gè)和第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，使用堿向上調(diào)整所述藥物組合物的pH。更優(yōu)選地，使用NaOH進(jìn)行所述的pH調(diào)整。還更優(yōu)選地，使用NaOH調(diào)整所述藥物組合物的pH，使得當(dāng)使用0,9。/。NaCl稀釋至約1/2初始濃度時(shí)，使用直接電位須寸定法(directpotentiometricdetermination)獲4尋約5.0曙5.5的pH值。正如藥物制劑領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解的，甚至可以使用合適的藥學(xué)上可接受的酸和堿對(duì)本發(fā)明的組合物的pH進(jìn)行比上述更寬泛的調(diào)整。這類(lèi)對(duì)最終組合物的pH的進(jìn)一步調(diào)整使得可調(diào)節(jié)諸如肽濃度、鋅濃度和體內(nèi)釋放特性等參數(shù)。在所述第一個(gè)目的的所述笫二個(gè)方面的第一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的特征在于所述第三個(gè)方面的藥物組合物，對(duì)每種情況而言獨(dú)立地包括所述第三個(gè)方面的各所述優(yōu)選實(shí)施方案，其中對(duì)組合物進(jìn)行配制以便式(I)化合物在需要其的個(gè)體例如哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人體內(nèi)釋放延長(zhǎng)的時(shí)間。優(yōu)選地，所述化合物的所述釋放延長(zhǎng)至少1小時(shí)，更優(yōu)選至少4、6、12或24小時(shí)。還更優(yōu)選地，對(duì)所述組合物進(jìn)行配制以便式(I)化合物在個(gè)體體內(nèi)釋放至少36、48、60、72、84或96小時(shí)。還更優(yōu)選地，對(duì)所述組合物進(jìn)行配制以便式(I)化合物在個(gè)體體內(nèi)釋放至少約5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。還更優(yōu)選地，對(duì)所述組合物進(jìn)行配制以《更式(I)化合物在個(gè)體體內(nèi)釋放至少約2、3或4周。甚至更優(yōu)選地，對(duì)所述組合物進(jìn)行配制以便式(I)化合物在個(gè)體體內(nèi)釋放至少約1、1.5、2或3個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供引起GLP-1激動(dòng)劑作用的方法，所述方法包括使GLP-1(7-36)NH2配體的受體與式(I)化合物接觸，從而將所述式(I)化合物通過(guò)所述第三個(gè)方面的組合物直接或間接提供給所述受體，所述第三個(gè)方面對(duì)每種情況而言獨(dú)立地包括所述第三個(gè)方面的各所述優(yōu)選實(shí)施方案。在本發(fā)明的所述第二個(gè)目的的第一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述GLP-1(7-36)NH2配體的受體存在于動(dòng)物個(gè)體、優(yōu)選靈長(zhǎng)類(lèi)、更優(yōu)選人中。因此，在該實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在需要其的個(gè)體中引起來(lái)自GLP-1受體的激動(dòng)劑作用的方法，該方法包括對(duì)所述個(gè)體施用本發(fā)明的組合物，其中所述組合物包含有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的所述第二個(gè)目的的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述個(gè)體是患有疾病或病癥或者處于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中的人，所述疾病或病癥選自I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖、食欲過(guò)盛(excessiveappetite)、飽感不足(insufficientsatiety)和代謝紊亂。優(yōu)選所述的疾病是I型糖尿病或II型糖尿病。在本發(fā)明的所述第二個(gè)目的的另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述個(gè)體是患有疾病或者處于發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的人，所述疾病選自I型糖尿?。籌I型糖尿?。环逝?；胰升糖素瘤；氣道分泌障礙；關(guān)節(jié)炎；骨質(zhì)疏松；中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾??；再狹窄；神經(jīng)變性疾??；腎衰竭；充血性心力衰竭；腎病綜合征；肝硬化；肺水腫；高血壓；和其中需要減少食物攝入的障礙；中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或障礙(例如通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)生，且例如帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、中風(fēng)、ADD和神經(jīng)精神病綜合征(neuropsychiatricsyndromes));腸易激惹綜合征；心肌梗死(例如降低與其相關(guān)的發(fā)病率和/或死亡率)；中風(fēng)；急性冠狀動(dòng)脈綜合征(例如以不存在Q-波心肌梗死為特征的急性冠狀動(dòng)脈綜合征)；術(shù)后分解代謝改變；冬眠心肌或糖尿病小生心肌病；尿4內(nèi)湘卜泄不足(insufficienturinarysodiumexcretion);尿鉀濃度過(guò)高(excessiveurinarypotassiumconcentration);與中毒性血容量過(guò)多相關(guān)的疾患或障礙(例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫和高血壓)；多嚢卵巢綜合征；呼吸窘迫；腎??；左心室收縮功能障礙(例如具有異常左心室射血分?jǐn)?shù)的左心室收縮功能障礙)；胃腸道障礙如腹瀉、術(shù)后傾倒綜合征和腸易激惹綜合征(即通過(guò)抑制胃竇十二指腸運(yùn)動(dòng)性)；危重病性多發(fā)性神經(jīng)病(CIPN);全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS);血脂異常；局部缺血后血流再灌注導(dǎo)致的器官組織損傷；和冠心病危險(xiǎn)西子(CHDRF)綜合征。在所述第二個(gè)目的的另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于在需要其的個(gè)體中將肝臟干細(xì)胞/祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化成功能性胰腺細(xì)胞、預(yù)防p-細(xì)胞衰退和刺激p-細(xì)胞增殖、抑制去甲腎上腺素血漿水平、誘導(dǎo)變力反應(yīng)和增加心臟收縮力、通過(guò)非飲食途徑(例如通過(guò)靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜或其它注射或輸注途經(jīng))改善營(yíng)養(yǎng)、預(yù)處理進(jìn)行內(nèi)窺鏡檢查操作的個(gè)體和調(diào)節(jié)甘油三酯水平的方法，所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用本發(fā)明的包含有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制劑。所述個(gè)體優(yōu)選是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選是靈長(zhǎng)類(lèi)，還更優(yōu)選是人。附圖簡(jiǎn)述圖1描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c.)施用約lmg[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。在每種情況中，將肽以包含約1%(重量/體積)的肽并且具有約1,5的肽:Zn摩爾比的含7jC鋅組合物的形式進(jìn)行施用。實(shí)心正方形和空心正方形代表其中如本文所述用NaOH調(diào)整pH的組合物；實(shí)心三角形代表其中未用NaOH調(diào)整pH的組合物；實(shí)心圓圏代表用AcOH/AcO-緩沖的組合物。圖2描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c)施用約15mgAib8，35hGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。在每種情況中，將肽以包含約10%(重量/體積)的肽并且具有約1.5的肽:Zn摩爾比的含7jc鋅組合物的形式進(jìn)行施用。實(shí)心正方形和空心正方形代表其中如本文所述用NaOH調(diào)整pH的組合物；實(shí)心三角形代表其中未用NaOH調(diào)整pH的組合物；實(shí)心圓圈代表用AcOH/AcO-緩沖的組合物。圖3描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c)施用約1mg[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。在每種情況中，將肽以如下的半固體含水鋅組合物形式進(jìn)行施用實(shí)心圓圏約5%(重量/體積)的肽，肽:Zn摩爾比為約5.4:1，無(wú)pH調(diào)整；空心圓圏約10%(重量/體積)的肽，肽:Zn摩爾比為約5.4:1，無(wú)pH調(diào)整；空心正方形約10%(重量/體積)的肽，肽:Zn摩爾比為約5.4:1，用NaOH調(diào)整pH;實(shí)心正方形約10%(重量/體積)的肽，肽:Zn摩爾比為約4:1，用NaOH調(diào)整pH。圖4提供了可用于制備本發(fā)明的某些制劑的各種裝置的示意圖。圖5描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c.)施用約1mg[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。將肽以肽濃度為約2。/。且肽:Zn摩爾比為約1.5:1的含7jC鋅組合物形式進(jìn)行施用。圖6描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c)施用約15mg[Aib8，35jhGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。將肽以肽濃度為約25。/。且肽:Zn摩爾比為約4:1的半固體鋅組合物形式進(jìn)行施用。圖7描繪了對(duì)狗單次皮下(s.c)施用約15mg[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2后獲得的血漿特征圖(中位值)。將肽以肽濃度為約23。/。且肽:Zn摩爾比為約1.5:1的半固體鋅組合物形式進(jìn)行施用。詳細(xì)描述本發(fā)明的肽在本文中由下式表示，例如(Aib"s)hGLP-l(7-36)NH2，其中來(lái)自天然序列的被置換的氨基酸位于第一組圓括號(hào)之間(例如Aib8，35表示用Aib置換hGLP-l中的Ala8和Gly35)。Aib是a-氨基異丁酸的縮寫(xiě)。縮寫(xiě)GLP-1意指胰高血糖素樣肽-l;hGLP-l意指人胰高血糖素樣肽-1。第二組圓括號(hào)之間的數(shù)字指的是存在于肽中的氨基酸的編號(hào)(例如hGLP-l(7-36)指人GLP-l的肽序列的第7到第36個(gè)氨基酸)。hGLP-l(7-37)的序列列在Mojsov，S.，Int.J.PeptideProteinRes,.40，1992，第333-342頁(yè)中。hGLP-l(7-36)NH2中的命名"NH2"表示肽的C-末端被酰胺化。hGLP-l(7-36)意指C-末端是游離酸。在hGLP-l(7-38)中，除非另有說(shuō)明，否則第37和38位上的殘基分別為Gly和Arg。本發(fā)明中所用的肽類(lèi)有利地可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式提供。這類(lèi)鹽的實(shí)例包括但不限于那些與有機(jī)酸(例如乙酸、乳酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、曱磺酸、甲苯磺酸或樸姆酸)、無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、硫酸或磷酸)和聚合酸(例如單寧酸、羧甲基纖維素、聚乳酸、聚乙醇酸或聚乳酸-乙醇酸共聚物)形成的鹽。制備本發(fā)明的肽的鹽的典型方法在本領(lǐng)域中是眾所周知的并且可以通過(guò)鹽交換的標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)進(jìn)行。因此，可以通過(guò)將肽溶于少量0.25N乙酸水溶液中而將本發(fā)明的肽的TFA鹽(由使用制備型HPLC純化肽得到TFA鹽，用含有TFA的緩沖溶液洗脫)轉(zhuǎn)化成另一種鹽，如乙酸鹽。將所得的溶液應(yīng)用在半-制備型HPLC柱(Zorbax，300SB,C-8)上。用如下溶液洗脫柱(1)0.1N乙酸銨水溶液，0.5小時(shí)；(2)0.25N乙酸水溶液，0.5小時(shí)；和(3)線(xiàn)性梯度(20%至100%的溶液B，30分鐘內(nèi))，流速4ml/分鐘(溶液A為0.25N乙酸水溶液；溶液B為0.25N在乙腈/水80:20中的乙酸)。收集含有肽的級(jí)分并且冷凍至干。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，GLP-1的已知和潛在用途可以改變并且是多種多樣的(參見(jiàn)Todd，J.F.等，ClinicalScience,1998，95，第325-329頁(yè)；和Todd,J.F.等，EuropeanJournalofClinicalInvestigation,1997,27，第533-536頁(yè))。因此，以引起激動(dòng)劑作用為目的的本發(fā)明的化合物的施用可以具有與GLP-l本身相同的作用和用途?？梢詫LP-l的這些可變的用途概括如下，治療I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰升糖素瘤、氣道分泌障礙、代謝紊亂、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病、腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫、高血壓、其中需要減少食物攝入的障礙以及本文所述的各種其它病癥和障礙。因此，本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括本文所定義的包含式(I)化合物作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明的制劑中活性成分的劑量可以改變；然而，必要的是活性成分的量使得可獲得合適的劑量。選擇的劑量取決于所需的治療作用、使用途徑和治療的持續(xù)時(shí)間，并且一般由主治醫(yī)師決定。一般而言，用于本發(fā)明的活性的有效劑量在lxl(T7至200mg/kg/天、優(yōu)選1x10"至100mg/kg/天的范圍內(nèi)，可以將其作為單劑量或分成多個(gè)劑量進(jìn)行施用。本發(fā)明的制劑優(yōu)選胃腸外施用，例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下施用等。用于胃腸外施用的本發(fā)明的制劑包括無(wú)菌的水性或非水性的溶液、混懸劑、凝膠劑或乳劑，條件是可達(dá)到所需的體內(nèi)釋放特性。非水性溶劑或介質(zhì)的實(shí)例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和玉米油、明膠和可注射的有機(jī)酯類(lèi)如油酸乙酯。這類(lèi)劑型還可以含有輔劑(adjuvant)如防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑和分散劑?？梢酝ㄟ^(guò)例如經(jīng)截留細(xì)菌的濾器過(guò)濾、通過(guò)向組合物中摻入滅菌劑、通過(guò)照射組合物或通過(guò)加熱組合物對(duì)它們進(jìn)行滅菌。19也可以將它們制成可在使用前即刻被溶解在無(wú)菌水或一些其它無(wú)菌可注射溶媒中的無(wú)菌固體組合物形式。肽類(lèi)的合成過(guò)標(biāo)準(zhǔn)固相肽合成制得。例如，參見(jiàn)Stewart,J.M.等，SolidPhaseSynthesis(PierceChemicalCo"第2版.1984)。肽類(lèi)的合成方法，所述合成方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。其它方法也是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。提供實(shí)施例的目的在于進(jìn)行舉例說(shuō)明，并不意味著以任何方式限制本發(fā)明的范圍。Boc-卩Ala-OH、Boc-D-Arg(Tos)-OH和Boc-D-Asp(OcHex)購(gòu)自NovaBiochem,圣地亞哥，加利福尼亞。Boc-Aun-OH購(gòu)自Bachem，KingofPrussia,PA。Boc-Ava-OH和Boc-Ado-OH購(gòu)自Chem畫(huà)lmpexInternational,WoodDale,IL。Boc-2Nal-OH購(gòu)自Synthetech,Inc.奧爾巴尼，OR。本文中使用的其它縮寫(xiě)的全名如下Boc:叔丁氧羰基；HF:氟化氫；Fm:甲?；籜an:站噸基；Bzl:節(jié)基；Tos:甲苯磺?；籇NP:2,4-二硝基苯基；DMF:二甲基甲酰胺；DCM:二氯甲烷；HBTU:2-(lH-苯并三唑-l-基)-l，l，3，3-四甲基脲錄六氟磷酸鹽；DIEA:二異丙基乙基胺；HOAc:乙酸；TFA:三氟乙酸；2C1Z:2-氯節(jié)氧羰基；2BrZ:2-溴千氧羰基；OcHex:O-環(huán)己基；Fmoc:9-茴基曱氧羰基；HOBt:N-羥基苯并三唑；PAM樹(shù)脂4-羥甲基苯基乙酰氨基甲基樹(shù)脂；Tris:三(羥甲基)氨基曱烷；和Bis-Tris:雙(2-羥乙基)氨基-三(羥甲基)甲烷(即2-雙(2-羥乙基)氨基-2-(羥甲基)-l，3-丙二醇)。術(shù)語(yǔ)"鹵代"或"鹵素"包括氟、氯、溴和碘。除非另有定義，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。另外，將本文提及的所有公開(kāi)物、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利和其它參考文獻(xiàn)均引入作為參考。實(shí)施例1(Aib83S)hGLP-l(7-36)NH2(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的詳細(xì)合成操作步驟已經(jīng)在國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)No.WO00/34331(PCT/EP99/09660)中提供，將該文獻(xiàn)的內(nèi)容完整地引入本文作為參考。簡(jiǎn)言之，在AppliedBiosystems(FosterCity,CA)430A型肽合成儀上合成化合物，調(diào)節(jié)所述儀器以進(jìn)行加速Boc-化學(xué)固相合成。參見(jiàn)Schnolzer等，Int.J.PeptideProteinRes.，90:180(1992)。使用具有0.91mmol/g取代的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹(shù)脂(Peninsula,Belmont,CA)。使用具有下列側(cè)鏈保護(hù)的Boc氨基酸(Bachem，CA，Torrance,CA;NovaBiochem.，LaJolla，CA):Boc-Ala-OH，Boc-Arg(Tos)-OH，Boc-Asp(OcHex)-OH，Boc-Tyr(2BrZ)-OH，Boc-His(DNP)-OH，Boc曙Val-OH,Boc畫(huà)Leu-OH,Boc畫(huà)Gly-OH,Boc-Gln-OH，Boc-lle-OH，Boc-Lys(2ClZ)-OH，Boc畫(huà)Thr(Bzl)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH，Boc-Phe-OH,Boc-Aib-OH，Boc畫(huà)Glu(OcHex)-OH和Boc畫(huà)Trp(Fm)畫(huà)OH。通過(guò)用100%TFA處理2xl分鐘除去Boc基團(tuán)。使用在4mLDMF中的HBTU(2.0mmol)和DIEA(l.OmL)預(yù)活化Boc氨基酸(2.5mmol)并且在不對(duì)肽-樹(shù)脂TFA鹽進(jìn)行在先中和的情況下將其偶聯(lián)。偶聯(lián)時(shí)間為5分鐘，Boc-Aib-OH殘基和下列殘基除外Boc-Lys(2ClZ)-OH和Boc-His(DNP)-OH，其中偶聯(lián)時(shí)間為2小時(shí)。在肽鏈裝配結(jié)束時(shí)，用20%巰基乙醇/10%DIEA在DMF中的溶液將樹(shù)脂處理2x30分鐘以除去His側(cè)鏈上的DNP基團(tuán)。然后通過(guò)用100%TFA處理2x2分鐘除去N-末端Boc基團(tuán)。在用含10%DIEA的DMF中和肽-樹(shù)脂(lxl分鐘)后，通過(guò)用15%乙醇胺/15%水/70%DMF的溶液處理2x30分鐘除去Trp的側(cè)鏈上的甲?；Ｓ肈MF和DCM洗滌肽-樹(shù)脂并且在減壓下干燥。通過(guò)在OX:將肽-樹(shù)脂在包含1mL茴香醚和二硫蘇糖醇(24mg)的10mLHF中攪拌75分鐘進(jìn)行最終的裂解。用氮?dú)饬鞒F。用乙醚(6x10mL)洗滌殘余物并且用4NHOAc(6xl0mL)萃取。使用反相制備型高效液相色i普法(HPLC)應(yīng)用反相VYDACds柱(NestGroup,Southborough,MA)純化水性萃取物中的肽混合物。用線(xiàn)性梯度(20%至50%的溶液B，105分鐘)以10mL/分鐘的流速(溶液A=含0.1%TFA的水；溶液B-含0.1。/。TFA的乙腈)洗脫柱。收集級(jí)分并且用分析型HPLC檢驗(yàn)。合并那些含有純產(chǎn)物的級(jí)分并且冷凍至干。在該化合物的合成的一個(gè)實(shí)例中，獲得了135mg白色固體。基于分析型HPLC分析的純度為98.6%。電噴霧質(zhì)鐠儀(MS(ES))S分析得到分子量為3339.7(與計(jì)算的分子量3339.7—致)。實(shí)施例2配制操作步驟I2.1材料，儲(chǔ)備溶液，計(jì)算A)材料:ZnCl2，NaOH片狀物和35%的鹽酸獲自PanreacQuimica,巴塞羅那，西班牙。WFI(無(wú)菌注射/灌洗用7jC)獲自B.BraunMedical,巴塞羅那，西班牙。B)儲(chǔ)備溶液(i)ZnCl7DH=3:1.在攪拌下，將35%的HC1加入到WFI中以達(dá)到pH=3。2.在容量瓶中，轉(zhuǎn)移稱(chēng)量量的ZnCl2。在攪拌下，加入pBN3HCl以達(dá)到約1-4mgZnCl2/mL的終濃度。ZnCh，dH=21.在攪拌下，將35%的HC1加入到WFI中以達(dá)到pH=2。2.在容量瓶中，轉(zhuǎn)移稱(chēng)量量的ZnCl2。在攪拌下，加入pH-2HCI以達(dá)到約4-12mgZnCl2/mL的終濃度。NaOH,0.1至10mg/ml:1.在容量瓶中，轉(zhuǎn)移稱(chēng)量量的NaOH。在攪拌下，加入WFII以達(dá)到約0.1-10mgNaOH/mL的終濃度。(iv)凍干的20mg等分試樣(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NHV小瓶1.制備0.04。/。(v/v)的乙酸和WFI稀釋液。2.在容量瓶中，轉(zhuǎn)移稱(chēng)量量的(Aib"s)HGLP-l(7-36)NH2(乙酸鹽)。在攪拌下，加入足量的0.04%乙酸以使終濃度達(dá)到20mg(Aib8，3S)HGLP-l(7-36)NH2/mL。在使用0.45微米濾器進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾后，將lml該溶液的等分試樣轉(zhuǎn)入凍千小瓶，冷凍干燥，將干燥的產(chǎn)物儲(chǔ)存在-22。C。(v)冷凍干燥的50mg等分試樣(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2/小瓶1.制備0.1。/。(v/v)的乙酸和WFI稀釋液。2.在容量瓶中，轉(zhuǎn)移稱(chēng)量量的(Aib8")hGLP-l(7-36)NH2(乙酸鹽)。在攪拌下，加入足量的0.1%乙酸以使終濃度達(dá)到50mg(Aib8'3S)HGLP-l(7-36)NH2/mL。在進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾后，將lml該溶液的等分試樣轉(zhuǎn)入凍干小瓶并且冷干。C)計(jì)算(i)確定用于組合物的賦形劑(E)的總重量/體積E=(Ax100/T)-(A/P)其中-.E-以mg計(jì)的賦形劑；A=純肽的含量(mg);T-組合物的目標(biāo)濃度；例如，如果目標(biāo)為2%,則該值為2;且P=純肽的濃度(mg肽/100mg制劑)。關(guān)于賦形劑的總體積，使用1mL=1g的假i殳。(ii)確定向每ml或g組合物溶液中加入的ZnCl2的體積/重量(W):a)對(duì)于其中不進(jìn)行pH調(diào)整的組合物而言，W=100%E;b)對(duì)于其中肽為約1%或約2%或高至約10。/o且使用堿調(diào)整pH的液體制劑而言，W=80%E;c)對(duì)于其中肽為約1%或約2%或高至約10%JU吏用堿調(diào)整pH的半固體或凝膠制劑而言，W=50%E;d)對(duì)于其中肽為約25%且使用堿調(diào)整pH的半固體或凝膠制劑而言，W=66.66%E;23e)對(duì)于其中肽是由凍干制劑重構(gòu)的并且使用堿調(diào)整pH的制劑而言，W,0%E。(iii)確定向每ml或g組合物溶液中加入的NaOH的體積/重量(W):a)對(duì)于其中肽為約1%或約2%或高至約10。/。且使用堿調(diào)整pH的制劑而言，W=20%E;b)對(duì)于其中肽為約1%或約2%或高至約10%且使用堿調(diào)整pH的半固體或凝膠制劑而言，W=50%E;c)對(duì)于其中肽為約25%且使用堿調(diào)整pH的半固體或凝膠制劑而言，W=33.33%E;d)對(duì)于其中肽是由凍干制劑重構(gòu)的并且使用堿調(diào)整pH的制劑而言，W=10%E。(iv).確定用于各組合物中的ZnCl2的濃度(mg/ml或mg/g):[ZnCl2]=(136.29xA)/(Wx3339.76xR)其中A=純肽的含量(mg)R=肽/Zn的摩爾比對(duì)于其中肽為約1%或約2%或約10%或高至約23%的制劑而言，R=1.5;對(duì)于其中肽為約25。/。的制劑而言，R=4.0;且W=每g或ml組合物溶液中加入的ZnCl2溶液的重量(g)或體積(mL)。2.2具有l(wèi)-10y。凍干的肽和ZnCli的不進(jìn)行pH調(diào)整的組合物的制備如本文所用的那樣，包含一定百分比的肽的制劑描述了每個(gè)組合物總重量包含一定重量的肽的制劑，例如1%肽描述了每100g總組合物包含lg肽的制劑。如下制備包含約1%或約2%高至約10%肽的制劑。將如所述的那樣制備的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2的凍干樣品與pH3的ZnCl2儲(chǔ)備溶液以100。/。的總賦形劑體積和[肽:Znl=1.5:1進(jìn)行充分混合。A)通過(guò)混合20mg凍干的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(iv))與2mlZnCl2溶液(0.272mg/ml;參見(jiàn)上文2.1B(i))制備1%組合物；B)通過(guò)混合20mg凍干的(Aib8，3s)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(iv))與1mlZnCl2溶液(0.544mg/ml;參見(jiàn)上文2.1B(i))制備2%組合物；C)通過(guò)混合50mg凍干的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(v))與0.45mlZnCI2溶液(3.023mg/ml;參見(jiàn)上文2.1B(i))制備10%組合物。使凍千的肽類(lèi)和溶液平衡至室溫。將指定體積的ZnCl2溶液注入含有凍干的肽的小^f瓦，使1%或2%肽組合物水化約2分鐘，使10%肽組合物7K化約60分鐘，或直到所有凍干的肽完全水化并且溶液中不含肽的團(tuán)塊。在水化后，將重構(gòu)的肽振搖約l分鐘。可取出適量的溶解的肽進(jìn)行給藥，例如，100ul按照上文A制備的1%肽溶液等于1mg劑量，50ul按照上文B制備的2%肽溶液等于1mg劑量，150ul按照上文C制備的10%肽溶液等于15mg劑量等。使用本申請(qǐng)中的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得下文詳述的1%、2%和10%組合物以外的組合物以及所需的劑量。2.3具有l(wèi)-10。/。凍干的肽和ZnCl2的進(jìn)行pH調(diào)整的組合物的制備如下制備包含約1%或約2%高至約10%肽的制劑。將如所述的那樣制備的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2的凍千樣品與pH3的ZnCl2儲(chǔ)備溶液以卯％的總賦形劑體積充分混合。通過(guò)添加稀NaOH溶液達(dá)到所需的溶液pH。A)通過(guò)混合20mg凍干的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(iv))與1.8mlZnCl2溶液(參見(jiàn)上文2.1B(i))制備1%組合物；B)通過(guò)混合20mg凍干的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(iv))與0.9mlZnCl2溶液(參見(jiàn)上文2.1B(i))制備2%組合物；C)通過(guò)混合50mg凍干的(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2(參見(jiàn)上文2.1B(v》與0.40mlZnCl2溶液(參見(jiàn)上文2.1B(i))制備10%組合物。向上述溶液中加入必須體積(10。/。的賦形劑總體積)的稀NaOH溶液以達(dá)到目標(biāo)濃度和pH。例如，對(duì)每種情況而言濃度的NaOH溶液2%組合物加入0.1mL合適濃度的NaOH溶液10%組合物加入0.05mL合適濃度的NaOH溶液使用本申請(qǐng)中的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得下文詳述的1%、2%和10%組合物以外的組合物。2.4具有1-10%肽和ZnCl7:的不進(jìn)行pH調(diào)整的液體組合物的制備如下制備包含約1%或約2%高至約10%肽的液體制劑。稱(chēng)量(Ail)8，35)HGLP-l(7-36)NH2樣品并且與pH3的ZnCl2儲(chǔ)備溶液混合以達(dá)到1%、2%、高至10%肽的目標(biāo)濃度。在混合后，將組合物進(jìn)4亍無(wú)菌過(guò)濾，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.5具有l(wèi)-10n/。肽和ZnCl^的進(jìn)行pH調(diào)整的液體組合物的制備如下制備包含約1%或約2%高至約10%肽的液體制劑。稱(chēng)量(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2樣品并且與pH3的ZnCl;j儲(chǔ)備溶液以80%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以為ZnCl2或ZnAc2.2H20。通過(guò)添加稀NaOH溶液達(dá)到溶液的所需pH。使用這種方法制備制劑C5至C13。使用本申請(qǐng)中的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的1%、2%和10%以外的組合物。2.6具有25%肽和ZnCl^的不進(jìn)行PH調(diào)整的半固體/凝膠組合物的制備如下制備包含約25%肽的半固體或凝膠制劑。稱(chēng)量(Aib8，35)HGLP-l(7-36)NH2樣品并且與pH2的ZnCl2儲(chǔ)備溶液以66.66%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以是ZnCU或ZnAc2.2H20。使用這種方法制備制劑Cl和C2。更具體地，使用"推-拉(push-pull)"混合法制備半固體或凝膠組合物a)將所需量的肽稱(chēng)量入預(yù)先安裝了專(zhuān)用雙路手動(dòng)閥HV(I.D.=0.5mm)的一次性注射器Sl的柱桶并且將管放入注射器Luer孔內(nèi)；b)使用不銹鋼桿SR固定注射器柱塞；c)使Sl中的HV與泵源連接并且打開(kāi)HV。在10分鐘后，關(guān)閉HV;d)將鋅溶液準(zhǔn)確稱(chēng)量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然后使S2與HV的自由部分連接；f)打開(kāi)HV，用真空將溶劑抽入包含肽粉末S1的柱桶；g)關(guān)閉HV，取出溶劑注射器S2，從而水化S1中的肽粉末；h)取出SR，緩慢釋放注射器柱塞；i)在不打開(kāi)HV的情況下移動(dòng)注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶劑完全浸濕；j)將雙路不銹鋼連接器SC(I.D.=1.0mm)放入具有位于注射器Luer孔內(nèi)的管的注射器S2中并且將其柱塞推至末端；k)打開(kāi)Sl中的HV以排出真空，然后取出HV。使注射器柱塞移動(dòng)以便將注射器柱桶中的空氣減少至最低限度；和1)通過(guò)SC連接Sl和S2并且使組合物從Sl通過(guò)SC到S2進(jìn)行捏合。使用本申請(qǐng)中的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的25%以外的組合物。2.7具有25%肽和ZnCl^的進(jìn)行PH調(diào)整的半固體/凝膠組合物的制備如下制備包含約25%肽的半固體或凝膠制劑。稱(chēng)量(Aib8，3s)HGLP-l(7-36)NH2樣品并且與pH2的ZnCl2儲(chǔ)備溶液以66.66%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以是ZnCl2或ZnAc2.2H20。通過(guò)添加稀NaOH溶液達(dá)到所需的溶液pH。在本實(shí)施例中，必須在鋅與NaOH溶液之間分割加入到粉末中的液體總體積。因此，調(diào)整鋅溶液的濃度，以便所需的鋅溶液的總體積降至添加至肽粉末中的總液體積的50。/。(步驟d)。如下所詳述的那樣向加入到肽粉末中的剩余50%的總液體體積中加入NaOH溶液。使用這種方法制備制劑C3和C4。使用"推-拉"混合法制備進(jìn)行pH調(diào)整的半固體或凝膠組合物a)將所需量的肽稱(chēng)量入預(yù)先安裝了專(zhuān)用雙路手動(dòng)閥HV(I.D.=0.5mm)的一次性注射器Sl的柱桶并且將管放入注射器Luer孔內(nèi)；b)使用不銹鋼桿SR固定注射器柱塞；c)使S1中的HV與泵源連接并且打開(kāi)HV。在IO分鐘后，關(guān)閉HV;d)將鋅溶液準(zhǔn)確稱(chēng)量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然后使S2與HV的自由部分連接；f)打開(kāi)HV，用真空將溶劑抽入包含肽粉末S1的柱桶；g)關(guān)閉HV，取出溶劑注射器S2，從而水化S1中的肽粉末；h)取出SR，緩慢釋放注射器柱塞；i)在不打開(kāi)HV的情況下移動(dòng)注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶劑完全浸濕；j)將雙路不銹鋼連接器SC(I.D.-l.Omm)放入具有位于注射器Luer孔內(nèi)的管的注射器S2中并且將其柱塞推至末端；k)打開(kāi)Sl中的HV以排出真空，然后取出HV。使注射器柱塞移動(dòng)以便將注射器柱桶中的空氣減少至最低限度；1)通過(guò)SC連接Sl和S2并且使組合物從Sl通過(guò)SC到S2進(jìn)行捏合。m)在勻化后，取出混合產(chǎn)物的等分試樣以測(cè)定肽的濃度；n)準(zhǔn)確稱(chēng)量剩余的中間主體產(chǎn)物并且計(jì)算達(dá)到所需pH所需的NaOH溶液的量；o)將NaOH溶液準(zhǔn)確稱(chēng)量入第三支一次性注射器S3;和p)將注射器柱塞緩慢壓縮以將注射器腔中的空氣減少至最低限度。通過(guò)SC連接兩支注射器并且通過(guò)SC捏合組合物。使用本申請(qǐng)中的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的25%以外的組合物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>4:5.4:1.5:14:C41050%ZnCl22.28mg/mL，50%4:11mgNaOH1mg/mLC5580%ZnCl20.674mg/mL，20%NaOH3.81mg/mLC6280%ZnCl20.26mg/mL，20%NaOH2.15mg/mLC71080%ZnCl23.81mg/mL，20%NaOH4.47mg/mLC81080%ZnAc2，2H202.3mg/mL,20%NaOH6,1mg/mLC9280%ZnCl20.695mg/mL，20%NaOH1.75mg/mLCIO280%ZnAc2.2H201.12mg/mL,20%NaOH1,44mg/mLCll280%ZnCl20.695mg/mL,20%NaOH1.75mg/mLC12180%ZnCl20.384mg/mL，20%NaOH0.875mg/mLC131080%ZnCl23.85mg/mL,20%NaOH4.47mg/mL*所示為目標(biāo)值。在所有情況中，實(shí)際值在目標(biāo)值的5%范圍內(nèi)。**所示為目標(biāo)值。在所有情況中，實(shí)際值在目標(biāo)值的10%范圍內(nèi)。3.0GLP-1受體親和力的測(cè)定可以使用下列操作步驟測(cè)試可用于實(shí)施本發(fā)明的化合物結(jié)合GLP-1受體的能力。細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)表達(dá)GLP-1受體的RIN5F大鼠胰鳥(niǎo)素瘤細(xì)胞(ATCC-弁CRL-2058,美國(guó)模式mg1mgmg1mgmgL.5:l1mg1.5:11mg1.5:11mg15mg培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),馬納薩斯，VA)，將其于約37。C維持在5%C02/95。/o空氣的加濕氣氛中。放射性配體結(jié)合通過(guò)使用BrinkmanPolytron(Westbury，NY)(設(shè)定6，15秒)在20ml水冷的50mMTris-HCl中勻化RIN細(xì)胞制備用于放射性配體結(jié)合研究的膜。通過(guò)離心(39，000g/10分鐘)將勻化物洗滌兩次并且將最終的沉淀重新混懸于含有2.5mMMgCl2、0.1mg/ml桿菌肽(SigmaChemical,圣路易，MO)和0.1。/。BSA的50mMTris-HCl中。為了進(jìn)行測(cè)定，將等分試樣(0.4ml)與0.05nM(125I)GLP-l(7-36)(2200Ci/mmol，NewEnglandNuclear,波士頓，MA)在有和沒(méi)有0.05ml未標(biāo)記的竟?fàn)幮詼y(cè)試肽類(lèi)存在下一起孵育。在100分鐘孵育(25。C)后，通過(guò)經(jīng)預(yù)先在0.5%聚乙烯亞胺中浸泡過(guò)的GF/C濾器(Brandel，蓋瑟斯堡，MD)快速過(guò)濾將結(jié)合的。Sl)GLP-l(7-36)與游離的(^I)GLP-l(7-36)分開(kāi)。然后用5ml水冷的50mMTris-HCl的等分試樣將濾器洗滌3次并且通過(guò)y光鐠測(cè)定法(WallacLKB，蓋瑟斯堡，MD)對(duì)截留在濾器上的結(jié)合的放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)。將特異性結(jié)合定義為結(jié)合的總(^1)GLP-1(7畫(huà)36)減去在有1000nMGLPl(7畫(huà)36)(Bachem，Torrence，CA)存在下結(jié)合的(125I)GLP-1(7-36)。4.溶解度與PH關(guān)系的測(cè)定4.1.在緩沖鹽水中化合物溶解度與pH關(guān)系的測(cè)定可以使用以下操作步驟測(cè)試可有利地用于實(shí)施本發(fā)明的化合物以測(cè)定其在不同pH和溫度下在PBS中的溶解度。通過(guò)將1袋預(yù)混合粉末(SIGMA，產(chǎn)品編號(hào)P-3813)溶于1升去離子水以得到包含138mMNaCl，2.7mMKCl且pH為7.4的10mM磷酸緩沖鹽水來(lái)制備PBS緩沖儲(chǔ)備溶液?？赏ㄟ^(guò)用磷酸和/或氫氧化鈉調(diào)整該儲(chǔ)備溶液的pH來(lái)制備具有不同pH值的PBS緩沖液?？梢詫?mg待測(cè)試的化合物樣品、例如2mg實(shí)施例1的化合物稱(chēng)量入玻璃小瓶中。向每個(gè)小瓶中加入在一定pH下的50ulPBS緩沖液的等分試樣。將溶液進(jìn)行渦旋，如果必要，進(jìn)行聲處理，直到澄清。對(duì)每一測(cè)試30pH，記錄溶解2mg化合物所需的緩沖液的總體積并且計(jì)算溶解度。將在室溫(20-25'C)下澄清的肽溶液放入冷藏箱(4。C)內(nèi)過(guò)夜，然后檢查肽在4。C的溶解度。4.2.在鹽水中化合物溶解度與pH關(guān)系的測(cè)定可以使用以下操作步驟測(cè)試可有利地用于實(shí)施本發(fā)明的化合物以測(cè)定其在不同pH值和溫度下在鹽水中的溶解度。通過(guò)將9gNaCl溶于1升去離子水來(lái)制備鹽水儲(chǔ)備溶液。可通過(guò)用HCl和/或NaOH調(diào)整該儲(chǔ)備溶液的pH來(lái)制備具有不同pH值的鹽水溶液?？梢詫?mg待測(cè)試的化合物樣品、例如2mg實(shí)施例1的化合物稱(chēng)量入玻璃小瓶中。向每個(gè)小瓶中加入在一定pH下的50ul鹽水溶液的等分試樣。對(duì)小瓶進(jìn)行渦旋，如果必要，進(jìn)行聲處理，直到澄清。對(duì)每一測(cè)試pH,記錄溶解2mg化合物所需的鹽水的總體積并且計(jì)算溶解度。將在室溫(20-25'C)下澄清的肽溶液放入冷藏箱(4。C)內(nèi)過(guò)夜，然后檢查肽在4'C的溶解度。4.3.化合物在PH7的鹽水中的溶解度的測(cè)定可以使用以下操作步驟測(cè)試可有利地用于實(shí)施本發(fā)明的化合物以測(cè)定其在室溫下在pH=7的鹽水中的溶解度。通過(guò)將9gNaCl溶于l升去離子水來(lái)制備鹽水溶液?？梢詫?mg待測(cè)試的化合物樣品、例如實(shí)施例1的化合物稱(chēng)量入玻璃小瓶并且加入1ml鹽水的等分試樣，同時(shí)進(jìn)行渦旋和聲處理，直到澄清。記錄用于溶解2mg肽的鹽水的總體積并且計(jì)算在室溫下的溶解度。4.4.化合物在不同pH的鹽水中的溶解度的測(cè)定可以使用以下操作步驟測(cè)試可有利地用于實(shí)施本發(fā)明的化合物以測(cè)定其在室溫下在具有不同pH的鹽水溶液中的溶解度。通過(guò)將9gNaCl溶于1升去離子水來(lái)制備鹽水儲(chǔ)備溶液。通過(guò)用HC1和NaOH處理該鹽7jc儲(chǔ)備溶液的等分試樣獲得具有不同pH值的鹽水溶液。可以將2mg待測(cè)試的化合物樣品、例如實(shí)施例1的化合物稱(chēng)量入玻璃小瓶。加入50ul在一定pH下的鹽水緩沖液的等分試樣。將溶液進(jìn)行渦旋并且進(jìn)行聲處理，直到澄清。記錄溶解2mg肽所用的緩沖液的總體積并且計(jì)算溶解度。5.化合物的水溶解度與鋅濃度關(guān)系的測(cè)定可以使用以下操作步驟測(cè)試可有利地用于實(shí)施本發(fā)明的化合物以測(cè)定其在不同鋅濃度下在pH7的水中的溶解度。通過(guò)將ZnCl2溶于去離子水至100mg/ml的濃度并且使用HC1將pH調(diào)整至2.7來(lái)制備鋅儲(chǔ)備溶液。通過(guò)制備儲(chǔ)備溶液的適合稀釋液來(lái)制備具有不同ZnCl2濃度的溶液("Zn測(cè)試溶液")。將1mg待測(cè)試的化合物、例如1mg實(shí)施例1的化合物溶于250ul各Zn測(cè)試溶液以得到具有4mg/ml化合物的溶液。然后使用0.2NNaOH調(diào)整該溶液的pH,直到觀(guān)察到白色沉淀形成。離心沉淀溶液并且使用HPLC分析母液。測(cè)量測(cè)試化合物峰的UV吸收面積，通過(guò)與校正曲線(xiàn)比較確定母液中測(cè)試化合物的濃度。作為可用于實(shí)施本發(fā)明的化合物的代表性實(shí)例，在上文剛剛描述的測(cè)定法中測(cè)試實(shí)施例1的化合物，獲得了如下結(jié)果(鹽水溶液，pH7.0，室溫):<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>6.使用IEF凝膠測(cè)定pIInvitrogen，sNovexIEFpH3-10凝膠可用于測(cè)定GLP-1肽類(lèi)的pl。將待測(cè)試的肽基化合物溶于水至濃度為0.5mg/ml。就每一這類(lèi)化合物而言，將5ul所得溶液與5ulNovex⑧樣品緩沖液2X(由20mM精氨酸游離堿、20mM賴(lài)氨酸游離堿和15%甘油組成)混合，將所得的10ul樣品溶液與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品一起荷載在凝膠上。電泳緩沖液也獲自Invitrogen并且按照制造商的說(shuō)明運(yùn)行凝膠，一般如下IOOV恒定I小時(shí)，隨后200V恒定1小時(shí)，隨后500V恒定30分鐘。然后將凝膠在包含3.5%磺基水楊酸的12%TCA中固定30分鐘，然后用膠體考馬斯藍(lán)(ColloidalCoomassieBlue)按照此后用Novex⑧ColloidalBlueKit建立的說(shuō)明染色2小時(shí)，然后在水中脫染色過(guò)夜。對(duì)凝膠進(jìn)行掃描并且用程序FragmentAnalysis1.2進(jìn)行分析。相對(duì)于具有如下pl值的標(biāo)準(zhǔn)化合物的pl計(jì)算未知肽類(lèi)的pi:10.7，9.5，8.3,8.0，7.8,7.4,6.9，6，0,5.3，5.2，4.5,4.2和3.5。7.大鼠的體內(nèi)測(cè)定強(qiáng)作用的能力。7.1.實(shí)驗(yàn)操作步驟在實(shí)驗(yàn)前一天，在chlorohydrate麻醉下給重約300-350g的成年雄性Sprague-Dawley大鼠(Taconic，Germantown，NY)植入右心房頸靜脈套管。然后將大鼠禁食18小時(shí)，此后在0時(shí)間注射適當(dāng)?shù)臏y(cè)試組合物或介質(zhì)對(duì)照。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中繼續(xù)使大鼠禁食。通過(guò)將100mg/mlZnCl2溶液在具有pH2.7的HC1水溶液中進(jìn)行稀釋來(lái)制備0.5mg/mlZnCl2溶液。將1mg式(I)化合物((Aib8，3s)hGLP-l(7-36)NH2)溶于250pl該溶液以得到在pH4下具有4mg/ml化合物和0.5mg/mlZn的澄清溶液。在0時(shí)間，給大鼠皮下(sc)注射(a)上文剛剛描述的(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2溶液或介質(zhì)對(duì)照。在兩種情況中，注射體積均非常小(4-6施用于個(gè)體的GLP-1化合物的劑量為75ng/kg。在sc注射后適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，通過(guò)靜脈內(nèi)(iv)套管抽取500jil血樣并且給予大鼠靜脈內(nèi)葡萄糖攻擊以測(cè)試是否存在增強(qiáng)的胰島素分泌。葡萄糖攻擊的時(shí)間為化合物注射后0.25、1、6、12和24小時(shí)。在抽取最初的血樣后，靜脈內(nèi)注射葡萄糖(lg/kg)并且用500jil肝素化鹽水(10U/ml)沖洗。此后，在葡萄糖注射后2.5、5、10和20分鐘時(shí)抽取500nl血樣。在這些各自之后即刻通過(guò)套管靜脈內(nèi)注射500^1肝素化鹽水(10U/ml)。離心血樣，從每一樣品中采集血漿并且將樣品儲(chǔ)存在20匸，以備檢測(cè)它們的胰島素含量。使用大鼠胰島素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒(AmericanLaboratoryProductsCo.,Windham，NH)測(cè)定每一樣品中的胰島素量。7.1.1.結(jié)果觀(guān)察到持續(xù)的胰島素增強(qiáng)活性，其可由本實(shí)驗(yàn)整個(gè)24小時(shí)期間的葡萄糖注射誘導(dǎo)。8.狗的體內(nèi)測(cè)定有許多本領(lǐng)域已知的體內(nèi)測(cè)定法使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能測(cè)定組合物促進(jìn)活性化合物在體內(nèi)延長(zhǎng)釋放的能力。8.1.1%肽組合物作為實(shí)例，制備在ZnCl2的緩沖溶液中包含1。/q(w/w)式(I)化合物的含水測(cè)試制劑(肽:Zn比=1.5:1.0)。維持年齡在42-78個(gè)月的14-21kg體重的總計(jì)6只雄性比哥(Beagle)狗自由飲水并且每天進(jìn)食一次(約400g干標(biāo)準(zhǔn)膳食(SAFE125)。將狗禁食18小時(shí)，然后施用測(cè)試組合物。通過(guò)皮下途徑在肩胛間區(qū)施用測(cè)試化合物。用0.3mL具有0.33-12mm的Terumo注射器(BS-30M2913)制成施用體積(約20微升/動(dòng)物)。由此達(dá)到約0.2mg肽的理論劑量。在施用后約=0，8,15，30，45分鐘和1，2，4，8和12小時(shí)以及1，2，3，4，5和6天的時(shí)間定期采集血樣。在采樣后快速冷凍血液，以備離心，蓬析血漿且在測(cè)定期間快速冷凍。在離線(xiàn)固相提取后對(duì)肽血漿濃度進(jìn)行測(cè)定，隨后進(jìn)行與LC-MS/MS聯(lián)合的在線(xiàn)相提取，用Analystvl.2軟件處理獲得的數(shù)據(jù)。組合物表現(xiàn)出至少2天的活性肽的延長(zhǎng)釋放。8.2.1%(Aib8，3s)hGLP-l(7-36)NH，)溶液使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。就以下4種組合物中的每一種而言，肽的濃度均為約l%(wt/wt),肽與鋅的比為約1.5:1，施用的肽劑量為約1mg。溶液8.2.A:在含有(i)卯％ZnCl2(0.298mg/mL)和(ii)10%NaOH(0.975mg/mL)的溶液中的(Ail)8，35)hGLP-l(7-36)NH2;溶液8.2,B:在ZnCl2溶液(0.286mg/mL)中的(Aib835)hGLP-l(7-36)NH2;溶液8.2.C:基本上與溶液8丄B類(lèi)似并且使用AcOH/AcCT緩沖溶液8.2.D:基本上與溶液8丄A類(lèi)似。組合物提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋放，如圖1中所示。8.3.1%OUb8，35)hGLP-l(7-36)NH^)溶液使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。就以下組合物而言，肽的濃度為約2。/。(wt/wt)，肽與鋅的比為約1.5:1，施用的肽劑量為約1mg。溶液8.3.:在含有(i)80%ZnCl2(0.695mg/mL)和(ii)20%NaOH(1.75mg/mL)的溶液中的(Aib835)hGLP-l(7-36)NH2。組合物提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋放，如圖5中所示。8.4.10%肽溶液使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。就以下4種組合物中的每一種而言，肽的濃度均為約10%(wt/wt)，肽與鋅的比為約1.5:1，施用的肽劑量為約15mg。溶液8.4.A:在含有(i)卯％ZnCl2(3,367mg/mL)和(ii)10%NaOH(5.01mg/mL)的溶液中的(Aib835)hGLP-1(7-36)NH2;溶液8.4.B:在ZnCl2溶液(2.993mg/mL)中的(Aib835)hGLP-l(7-36)NH2;溶液8.4.C:基本上與溶液8.4.B類(lèi)似并且^f吏用AcOH/AcO—緩沖溶液8.4.D:基本上與溶液8.4丄類(lèi)似。組合物提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋放，如圖2中所示。8.5.半固體組合物使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列半固體組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。就組合物8.5.A.而言，肽的濃度為約5%,而就組合物8.5,B、8.4.<:和8.5.0.而言，肽的濃度為約10%(wt/wt)。組合物8.5,A、8.5.B和8.5.C的肽與鋅的比為約5.4:1，而就組合物8.5.D而言，該比例為約4.0:1。就所有4種組合物而言，施用的肽劑量均為約lmg。溶液8.5.A:在含有在WFI中的ZnCl2(0.40mg/mL)的半固體組合物中的(Ail)8，35)hGLP-l(7-36)NH2。溶液8.5.B:基本上與組合物8.5.A類(lèi)似，其中將ZnCL2濃度向上調(diào)整以維持肽:Zn的比為約5.4:1。溶液8.5.C:在含有(i)50%ZnCl2(1.69mg/mL)和(ii)50%NaOH(lmg/mL)的半固體中的(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2。溶液8.5.D:在含有(i)50%ZnCl2(2.28mg/mL)和(ii)50%NaOH(lmg/mL)的半固體中的(Aib8")hGLP-l(7-36)NH2。組合物提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋放，如圖3中所示。8.6.半固體組合物使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列半固體組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。使用5.22mg/mlZnCl2溶液在pH=2.0下配制組合物。提供足夠的肽以產(chǎn)生具有約4:1的肽與鋅之比的25%肽的半固體組合物。如本文提供的那樣，使用10mg/mlNaOH調(diào)整組合物的pH。施用的肽劑量為約15mg。組合物8.6提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋放，如圖6中所示。8.7.半固體組合物36使用基本上與以上8.1節(jié)中所述相同的體內(nèi)測(cè)定操作步驟，檢查下列半固體組合物在延長(zhǎng)的時(shí)間中釋放受試肽的能力。使用8.5mg/mlZnCl2溶液在pH=2.0下配制組合物。提供足夠的肽以產(chǎn)生具有約1.5:1的肽與鋅之比的23%肽的半固體組合物。按照以上2.6節(jié)中詳述的方法配制組合物。施用的肽劑量為約15mg(相當(dāng)于約65微升組合物)。組合物8.6提供了(Aib8，35)hGLP-l(7-36)NH2的延長(zhǎng)釋方文，如圖7中所示。用所披露的制劑的各種變體進(jìn)行的另外的測(cè)定同樣進(jìn)行體內(nèi)測(cè)定并且已經(jīng)確認(rèn)本發(fā)明的組合物為式(I)化合物提供了有用的藥物遞送平臺(tái)。使用本申請(qǐng)的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以改變肽、ZnCl2的量和pH以制備本文所述的本發(fā)明的組合物。權(quán)利要求1.藥物組合物，其包含式[Aib8，35]hGLP-1(7-36)NH2的類(lèi)似物以及鋅和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，條件是所述組合物不由具有pH4的ZnCl2澄清水溶液組成，其中所述的[Aib8，35]hGLP-1(7-36)NH2的存在濃度為4mg/ml且所述的ZnCl2的存在濃度為0.5mg/ml。2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述的鋅的存在濃度為0.0005mg/mL至50mg/ml。3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述的鋅的存在濃度為0.01mg/mL至0.50mg/mL。4.權(quán)利要求l的藥物組合物，其中所述的稀釋劑包含藥學(xué)上可接受的含水溶液。5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中所述的稀釋劑包含無(wú)菌水。6.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述的藥物組合物包含含水混合物、混懸液或溶液，其中所述的式(I)化合物的存在濃度為約0.5%-30%(w/w)。7.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物在所述的含水混合物、混懸液或溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%(w/w)。8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、14%、15%、16%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、29%或30%(w/w)。9.權(quán)利要求8的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、9%、10%、11%、22%、23%、24%、25%或26%(w/w)。10.權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物在所述的含水溶液中的濃度為約1%、2%、3%、4%、5%、6%、10%、22%、23%、24%、25%或26%(w/w)。11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述的式(I)化合物在所述的水溶液中的濃度為約1%、2%、5%、10%、23%或25%(w/w)。12.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中在所述的藥物組合物中所述的式(I)化合物與鋅的摩爾比為約6:1至約1:1。13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中所述的比為約5.5:1至約1:1。14.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中所述的比為約5.4:1至約1.5:1。15.^=又利要求14的藥物組合物，其中所述的比為約5,4:1、4.0:1或16.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中所述的比為約1.5:1。17.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述的鋅以氯化鋅或乙酸鋅的形式被提供。18.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述的乙酸鋅以ZnAc2.2H20的形式被提供。19.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述的藥物組合物的pH是使用堿調(diào)整的。20.權(quán)利要求19的藥物組合物，所述的pH調(diào)整是使用NaOH進(jìn)行的。21.權(quán)利要求20的藥物組合物，其中所述的藥物組合物的pH是用NaOH調(diào)整的，使得當(dāng)使用0.9°/。NaCl稀釋至約1/2初始濃度時(shí)，獲得約5.0-5.5的pH值。22.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述的藥物組合物的pH是使用堿調(diào)整的。23.權(quán)利要求22的藥物組合物，其中所述的pH調(diào)整是使用NaOH進(jìn)行的。24.權(quán)利要求23的藥物組合物，其中所述的藥物組合物的pH是用NaOH調(diào)整的，使得當(dāng)使用0.9%NaCl稀釋至約1/2初始濃度時(shí)，獲得約5.0-5.5的pH值。25.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中式(I)化合物在需要其的個(gè)體內(nèi)被釋放延長(zhǎng)的時(shí)間。26.權(quán)利要求25的藥物組合物，其中所述化合物的所述釋放延長(zhǎng)至少約1小時(shí)至約12小時(shí)。27.權(quán)利要求26的藥物組合物，所述化合物的所述釋放延長(zhǎng)至少約24小時(shí)。28.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中式(I)化合物被釋放至少約48小時(shí)，更優(yōu)選至少約72小時(shí)，還更優(yōu)選至少約96小時(shí)。29.權(quán)利要求28的藥物組合物，其中式(I)化合物在個(gè)體內(nèi)被釋放至少約5天至約7天，更優(yōu)選至少約14天，更優(yōu)選至少約2周，還更優(yōu)選至少約4周。30.權(quán)利要求6的藥物組合物，其中式(I)化合物在需要其的個(gè)體內(nèi)被釋放延長(zhǎng)的時(shí)間。31.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中所述化合物的所述釋放延長(zhǎng)至少約1小時(shí)至約12小時(shí)。32.權(quán)利要求31的藥物組合物，所述化合物的所述釋放延長(zhǎng)至少約24小時(shí)。33.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中式(I)化合物被釋放至少約48小時(shí)，更優(yōu)選至少約72小時(shí)，還更優(yōu)選至少約96小時(shí)。34.權(quán)利要求33的藥物組合物，其中式(I)化合物在個(gè)體內(nèi)被釋放至少約5天至約7天，更優(yōu)選至少約14天，更優(yōu)選至少約2周，還更優(yōu)選至少約4周。35.權(quán)利要求25-29中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的個(gè)體是哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人。36.權(quán)利要求30-34中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的個(gè)體是哺乳動(dòng)物2優(yōu)選人。37.引起GLP-1激動(dòng)劑作用的方法，所述方法包括使GLP-1(7-36)NH2配體的受體與式(I)化合物接觸，從而將所述式(I)化合物通過(guò)權(quán)利要求1的組合物直接或間接提供給所述受體。38.在需要其的個(gè)體中引起來(lái)自GLP-1受體的激動(dòng)劑作用的方法，所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用權(quán)利要求1的藥物組合物。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述的GLP-1(7-36)NH2配體的受體存在于動(dòng)物個(gè)體中。40.權(quán)利要求39的方法，其中所述的個(gè)體是人。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述的人個(gè)體患有疾病或病癥或者處于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，所述的疾病或病癥選自I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖、食欲過(guò)盛、飽感不足和代謝紊亂。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述的疾病是I型糖尿病或II型糖尿病。43.權(quán)利要求40的方法，其中所述的人個(gè)體患有疾病或病癥或者處于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，所述的疾病或病癥選自胰升糖素瘤、氣道分泌障礙、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病、腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫、高血壓和其中需要減少食物攝入的障礙、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或病癥、帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、中風(fēng)、ADD和神經(jīng)精神病綜合征、腸易激惹綜合征、心肌梗死、中風(fēng)、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、術(shù)后分解代謝改變、冬眠心肌或糖尿病性心肌病、尿鈉排泄不足、尿鉀濃度過(guò)高、與中毒性血容量過(guò)多相關(guān)的病癥或障礙(例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水肺和高血壓)、多嚢卵巢綜合征、呼吸窘迫、腎病、左心室收縮功能障礙、胃腸道障礙如腹瀉、術(shù)后傾倒綜合征和腸易激惹綜合征、危重病性多發(fā)性神經(jīng)病(CIPN)、全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)、血脂異常、局部缺血后血流再灌注導(dǎo)致的器官組織損傷和冠心病危險(xiǎn)因子(CHDRF)綜合征。44.在需要其的個(gè)體中將肝臟干細(xì)胞/祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化成功能性胰腺細(xì)胞、預(yù)防卩-細(xì)胞衰退和刺激P-細(xì)胞增殖、抑制去甲腎上腺素血漿水平、誘導(dǎo)變力反應(yīng)和增加心臟收縮力、通過(guò)非飲食途徑改善營(yíng)養(yǎng)、預(yù)處理進(jìn)行內(nèi)窺鏡檢查操作的個(gè)體和調(diào)節(jié)甘油三酯水平的方法，所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用權(quán)利要求l的藥物組合物。45.權(quán)利要求44的方法，其中所述的個(gè)體是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選靈長(zhǎng)類(lèi)，更優(yōu)選人。46.引起GLP-1激動(dòng)劑作用的方法，所述方法包括使GLP-1(7-36)NH2配體的受體與式(I)化合物接觸，從而將所述式(I)化合物通過(guò)權(quán)利要求6的組合物直接或間接提供給所述受體。47.在需要其的個(gè)體中引起來(lái)自GLP-1受體的激動(dòng)劑作用的方法，所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用權(quán)利要求6的藥物組合物。48.權(quán)利要求47的方法，其中所述的GLP-1(7-36)NH2配體的受體存在于動(dòng)物個(gè)體中。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述的個(gè)體是人。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述的人個(gè)體患有疾病或病癥或者處于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，所述的疾病或病癥選自I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖、食欲過(guò)盛、飽感不足和代謝紊亂。51.權(quán)利要求50的方法，其中所述的疾病是I型糖尿病或II型糖尿病。52.權(quán)利要求49的方法，其中所述的人個(gè)體患有疾病或病癥或者處于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，所述的疾病或病癥選自胰升糖素瘤、氣道分泌障礙、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病、腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水肺、高血壓和其中需要減少食物攝入的障礙、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病或病癥、帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、中風(fēng)、ADD和神經(jīng)精神病綜合征、腸易激惹綜合征、心肌梗死、中風(fēng)、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、術(shù)后分解代謝改變、冬眠心肌或糖尿病性心肌病、尿鈉排泄不足、尿鉀濃度過(guò)高、與中毒性血容量過(guò)多相關(guān)的病癥或障礙(例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫和高血壓)、多嚢卵巢綜合征、呼吸窘迫、腎病、左心室收縮功能障礙、胃腸道障礙如腹瀉、術(shù)后傾倒綜合征和腸易激惹綜合征、危重病性多發(fā)性神經(jīng)病(CIPN)、全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)、血脂異常、局部缺血后血流再灌注導(dǎo)致的器官組織損傷和冠心病危險(xiǎn)因子(CHDRF)綜合征。53.在需要其的個(gè)體中將肝臟干細(xì)胞/祖細(xì)胞轉(zhuǎn)化成功能性胰腺細(xì)胞、預(yù)防P-細(xì)胞衰退和刺激P-細(xì)胞增殖、抑制去曱腎上腺素血漿水平、誘導(dǎo)變力反應(yīng)和增加心臟收縮力、通過(guò)非飲食途徑改善營(yíng)養(yǎng)、預(yù)處理進(jìn)行內(nèi)窺鏡檢查操作的個(gè)體和調(diào)節(jié)甘油三酯水平的方法，所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用權(quán)利要求6的藥物組合物。54.權(quán)利要求53的方法，其中所述的個(gè)體是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選靈長(zhǎng)類(lèi)，更優(yōu)選人。55.權(quán)利要求16的組合物，其中[Aib8'35lhGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約1%(重量/體積)。56.權(quán)利要求16的組合物，其中[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約2%(重量/體積)。57.權(quán)利要求16的組合物，其中[Aib8，35lhGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約10%(重量/體積)。58.權(quán)利要求16的組合物，其中[AibS"lhGLP-l(7-M)NH2在所述組合物中的濃度為約25%(重量/體積)。59.權(quán)利要求15的組合物，其中[Aib^lhGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約5%(重量/體積)，且所述的比為約5.4:1。60.權(quán)利要求15的組合物，其中[Aib8，35lhGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約5%(重量/體積)，且所述的比為約4.0:1。61.權(quán)利要求15的組合物，其中[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約10%(重量/體積)，且所述的比為約5.4:1。62.權(quán)利要求15的組合物，其中[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約10%(重量/體積)，且所述的比為約4.0:1。63.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中[Aib8，35hGLP-l(7-36)NH2在所述組合物中的濃度為約23%(重量/體積)。全文摘要本發(fā)明涉及胰高血糖素樣肽-1的肽類(lèi)似物、其藥學(xué)上可接受的鹽、使用這類(lèi)類(lèi)似物治療哺乳動(dòng)物的方法和因此有用的包含所述類(lèi)似物的藥物組合物。文檔編號(hào)C07K14/605GK101258163SQ200680031646公開(kāi)日2008年9月3日申請(qǐng)日期2006年6月30日優(yōu)先權(quán)日2005年6月30日發(fā)明者F·拉孔貝,J-A·戈德羅里戈?duì)?M·D·托巴利納馬埃斯特雷,R·謝里夫-謝赫,R·阿略薩米拉韋特,董正欣申請(qǐng)人:科學(xué)研究和應(yīng)用咨詢(xún)股份公司