專(zhuān)利名稱(chēng)：作為金屬蛋白酶抑制劑的哌啶和哌嗪取代的n－羥基甲酰胺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于抑制金屬蛋白酶的化合物并且尤其涉及包含這些化合物的藥物組合物及其應(yīng)用。
本發(fā)明化合物是一種或多種金屬蛋白酶的抑制劑。金屬蛋白酶是蛋白酶(酶)的總科，其數(shù)目近年來(lái)戲劇性地增加?；诮Y(jié)構(gòu)和功能的考慮，這些酶已分類(lèi)為科和亞科，如N.M.Hooper(1994)FEBS Letters3541-6中所述。金屬蛋白酶的實(shí)例包括基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)如膠原酶(MMP1、MMP8、MMP13)，明膠酶(MMP2、MMP9)，基質(zhì)溶素(MMP3、MMP10、MMP11)，metrilysin(MMP7)，金屬?gòu)椥缘鞍酌?MMP12)，enamelysin(MMP19)，MT-MMPs(MMP14、MMP15、MMP16、MMP17)；reprolysin或adamalysin或MDC科，后者包括分泌酶和sheddase如TNF轉(zhuǎn)換酶(ADAM10和TACE)；蝦紅素科，包括酶如前膠原加工蛋白酶(PCP)；和其他金屬蛋白酶如聚集蛋白聚糖酶，內(nèi)皮轉(zhuǎn)換酶科和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶科。
金屬蛋白酶被認(rèn)為在生理性病變導(dǎo)致的多血癥中是重要的，所述生理性病變涉及組織改造如胚胎發(fā)育、骨形成和月經(jīng)期間的子宮改變。這基于金屬蛋白酶具有將大量基質(zhì)底物如膠原、蛋白聚糖和粘連蛋白分開(kāi)的能力。金屬蛋白酶也被認(rèn)為在生物學(xué)重要的細(xì)胞介質(zhì)，如腫瘤壞死因子(TNF)的加工或分泌中是重要的；在生物學(xué)重要的膜蛋白，如低親和力IgE受體CD23的翻譯后蛋白水解加工或脫落中是重要的(詳見(jiàn)N.M.hooper等人，(1997)Biochem J.321265-279)。
金屬蛋白酶與很多疾病狀態(tài)有關(guān)。抑制一種或多種金屬蛋白酶的活性在這些疾病狀態(tài)中可能是非常有益的，這些疾病狀態(tài)的實(shí)例包括各種炎性和變應(yīng)性疾病如關(guān)節(jié)炎癥(特別是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng))，胃腸道炎癥(特別是炎性腸道疾病、潰瘍性結(jié)腸炎和胃炎)，皮膚炎癥(特別是牛皮癬、濕疹、皮炎)；腫瘤轉(zhuǎn)移或侵入；與細(xì)胞外基質(zhì)降解失控有關(guān)的疾病如骨關(guān)節(jié)炎；骨再吸收疾病(如骨質(zhì)疏松癥和佩吉特氏病)；與血管生成異常有關(guān)的疾病；與糖尿病、牙周病(如齒齦炎)、角膜潰瘍、皮膚潰瘍、術(shù)后狀況(如結(jié)腸吻合術(shù))和皮膚創(chuàng)傷修復(fù)有關(guān)的膠原改變?cè)鰪?qiáng)；中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病(如多發(fā)性硬化)；早老性癡呆；在心血管疾病如再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化中觀(guān)察到的細(xì)胞外基質(zhì)改變；和慢性阻塞性肺病，COPD(例如，MMPs如MMP12的作用在Anderson & Shinagawa，1999，Current Opinion inAnti-inflammatory and Immunomodulatory Investigational Drugs，1(1)29-38中討論)。
許多金屬蛋白酶抑制劑是已知的；對(duì)抑制各種金屬蛋白酶而言，不同種類(lèi)的化合物可能具有不同程度的效力和選擇性。我們已發(fā)現(xiàn)了一類(lèi)新的化合物，它們是金屬蛋白酶抑制劑并且是在抑制MMP-13以及MMP-9中是特別有效的。本發(fā)明化合物具有有益的效力和/或藥動(dòng)學(xué)特性。
MMP13或膠原酶3最初是由得自乳房腫瘤的cDNA庫(kù)克隆的[J.M.P.Freije等人(1994)Journal of Biological Chemistry269(24)16766-16773]。來(lái)自大量組織的RNAs的PCR-RNA分析表明，MMP13的表達(dá)限制在乳房癌，因?yàn)?，在乳房纖維腺瘤、正常的或休止的乳腺、胎盤(pán)、肝臟、卵巢、子宮、前列腺或腮腺或在乳房癌細(xì)胞系(T47-D、MCF-7和ZR75-1)中未發(fā)現(xiàn)它。隨后，在轉(zhuǎn)化的表皮角質(zhì)化細(xì)胞[N.Johansson等人，(1997)Cell Growth Differ.8(2)243-250]鱗狀細(xì)胞癌[N.Johansson等人，(1997)Am.J.Pathol.151(2)499-508]和表皮腫瘤[K.Airola等人，(1997)J.Invest.Dermatol.109(2)225-231]中檢測(cè)到MMP13。這些結(jié)果提示，MMP13是由轉(zhuǎn)換的上皮細(xì)胞分泌的并且可以在與轉(zhuǎn)移有關(guān)的細(xì)胞外基質(zhì)降解和細(xì)胞基質(zhì)相互作用中涉及，特別是可在侵襲性乳房癌病損和在皮膚癌發(fā)生時(shí)的惡性上皮生長(zhǎng)中觀(guān)察到。
新近公開(kāi)的資料提示，MMP3在其他結(jié)締組織的更新中發(fā)揮作用。例如，與降解II型膠原的MMP13的底物特異性和優(yōu)先性一致[P.G.Mitchell等人，(1996)J.Clin.Invest.97(3)761-768；V.Knauper等人，(1996)The Biochemical Journal 2711544-1550]，假設(shè)MMP13在初級(jí)骨化和骨架改型期間[M.Stahle-Backdahl等人，(1997)Lab.Invest.76(5)717-728；N.Johansson等人，(1997)Dev.Dyn.208(3)387-397]，在破壞性關(guān)節(jié)疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎中[D.Wernicke等人，(1996)J.Rheumatol.23590-595；P.G.Mitchell等人，(1996)J.Clin.Invest.97(3)761-768；O.Lindy等人，(1997)Arthritis Rheum 40(8)1391-1399]；和在髖部復(fù)位無(wú)菌松動(dòng)期間[S.Imai等人，(1998)J.Bone Joint Surg.Br.80(4)701-710]發(fā)揮作用。因?yàn)榫窒拊谡衬らL(zhǎng)期發(fā)炎的人齦組織上皮，所以MMP13也包含在成人慢性牙周炎中[V.J.Uitto等人，(1988)Am.J.Pathol 152(6)1489-1499]和在慢性創(chuàng)傷膠原基質(zhì)的改型中[M.Vaalamo等人，(1997)J.Invest.Dermatol.109(1)96-101]。
MMP9(明膠酶B；92kDa IV型膠原酶；92kDa膠原酶)是分泌蛋白，它在1989年首次提純，然后被克隆并測(cè)序(S.M.Wilhelm等人(1989)J.Biol Chem.264(29)17213-17221.Published erratum in J.Biol Chem.(1990)265(36)22570.)。對(duì)MMP9的近期評(píng)論提供了關(guān)于蛋白酶詳細(xì)資料和參考的最佳原始資料T.H.Vu & Z.Werb(1998)(InMatrix Metalloproteinases 1998.Edited by W.C.Park &R.P.Mecham.Pp115-148.Academic Press.ISBN 0-12-545090-7)。根據(jù)T.H.Vu & Z.Werb(1998)的評(píng)論來(lái)描述下列要點(diǎn)。
MMP9的表達(dá)在正常情況下限定在幾種細(xì)胞，包括滋養(yǎng)層、破骨細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。然而，其表達(dá)可在這些相同的細(xì)胞和在其他類(lèi)型的細(xì)胞中由幾種介質(zhì)誘導(dǎo)，包括將細(xì)胞暴露到生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子中。這些是在引發(fā)炎性反應(yīng)中經(jīng)常涉及的相同的介質(zhì)。與其他分泌的MMPs一樣，MMP9以非活性的酶原形式釋放，然后斷裂形成具有酶活性的酶。體內(nèi)激活所需要的蛋白酶是未知的。體內(nèi)活性MMP9和非活性酶之間的平衡進(jìn)一步通過(guò)與天然存在的蛋白質(zhì)TIMP-1(組織金屬蛋白酶抑制劑-1)之間的相互作用調(diào)節(jié)。TIMP-1與MMP9的C-端結(jié)合，導(dǎo)致抑制MMP9的催化區(qū)。所誘導(dǎo)的前MMP9表達(dá)平衡、前MMP9斷裂成活性MMP9和有TIMP-1存在，聯(lián)合決定局部存在的具有催化活性的MMP9的量。具有水解蛋白質(zhì)活性的MMP9攻擊底物，所述底物包括明膠、彈性蛋白和天然的IV型和V型膠原；MMP9對(duì)天然的I型膠原、蛋白聚糖或?qū)诱尺B蛋白無(wú)活性。
表明MMP9在各種生理學(xué)和病理學(xué)過(guò)程中起作用的資料一直在不斷增加。生理學(xué)作用包括胚胎的滋養(yǎng)層在胚胎植入早期通過(guò)子宮上皮侵入；在骨生長(zhǎng)和發(fā)育中的某些作用；和炎性細(xì)胞從脈管系統(tǒng)遷移到組織。已觀(guān)察到，在某些病理狀態(tài)下MMP表達(dá)增加，因此推斷，MMP9存在于疾病進(jìn)程中，所述疾病如關(guān)節(jié)炎、腫瘤轉(zhuǎn)移、早老性癡呆、多發(fā)性硬化和動(dòng)脈粥樣硬化中的蝕斑破裂，它導(dǎo)致急性冠心病如心肌梗塞。
WO-99/38843中提出下列通式化合物B-X-(CH2)m-(CR1R2)n-W-COY該化合物可用來(lái)生產(chǎn)用于治療或預(yù)防與基質(zhì)金屬蛋白酶有關(guān)疾病的藥物。具體地說(shuō)，所公開(kāi)的是化合物N{1S-[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-磺酰甲基]-2-甲基丙基}-N-羥基甲酰胺。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了一些化合物，它們是有效的MMP13抑制劑并且具有所需要的活性特征。
在本發(fā)明第一方面，我們提供式I化合物 其中B表示在3-或4-位由鹵素或三氟甲基一取代的，或3-或4-位由鹵素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B表示在4-、5-或6-位由鹵素、三氟甲基、氰基或C1-4烷基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B表示在6-位由鹵素或C1-4烷基任選取代的4-嘧啶基；X表示碳或氮原子；R1表示三甲基-1-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基；在3-或4-位由鹵素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；苯基-SO2NHC2-4烷基；2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；2-嘧啶-SCH2CH2；由一個(gè)鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、由鹵素任選取代的2-哌嗪基，由鹵素任選取代的2-哌嗪基C2-4烷基之一任選一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基；上述任何烷基都可以是直鏈或支鏈的。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是那些化合物，其中任何一項(xiàng)或多項(xiàng)下列內(nèi)容適用B表示4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基或4-三氟苯基；在4-或5-位一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基如5-氯-2-吡啶基、5-溴-2-吡啶基、5-氟-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、5-氰基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基；特別是4-氟苯基、5-氯-2-吡啶基或5-三氟甲基-2-吡啶基；X表示氮原子；R1表示3-氯苯基、4-氯苯基、3-吡啶基、2-吡啶基丙基、2-或4-嘧啶基乙基(未取代的或由氟一取代的)、2-或4-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)；特別是2-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)或5-氟-2-嘧啶基乙基。
在式I化合物中，特定小組由化合物表示，在所述化合物中，B為在3-或4-位由鹵素或三氟甲基一取代，或在3-或4-位由鹵素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B為5-或6-位由鹵素、三氟甲基或氰基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B為未取代的或在6-位由鹵素或C1-4烷基取代的4-嘧啶基；X為碳或氮原子；R1為三甲基-1-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基；或者R1為在3-或4-位由鹵素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1為苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1為2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1為3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1為2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1為未取代的或由鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、2-哌嗪基或2-哌嗪基C2-4烷基一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基；并且任何烷基都可以是直鏈的或支鏈的。
可以理解，為了避免在空間上不需要的結(jié)合，應(yīng)選擇B和/或R1上特定的取代基和取代基的數(shù)目。
各范例化合物代表本發(fā)明特定的和獨(dú)立的方面。
對(duì)于存在光學(xué)活性中心的式I化合物，我們討論了所有獨(dú)立的光學(xué)活性形式和作為本發(fā)明特定實(shí)例的這些化合物的組合物及其相應(yīng)的外消旋體。外消旋體可以用已知的方法(參見(jiàn)Advanced OrganicChemistry3rdEditionauthor J March，p104-107)拆分成獨(dú)立的光學(xué)活性形式，所述方法包括，例如形成具有輔助種的非對(duì)映異構(gòu)體衍生物，其中所述輔助種具有適宜的光學(xué)活性，分離，然后將輔助種斷裂。
可以理解，本發(fā)明化合物可包含一種或多種不對(duì)稱(chēng)取代的碳原子。在式I化合物中存在一個(gè)或多個(gè)這些不對(duì)稱(chēng)中心(手性中心)可產(chǎn)生立體異構(gòu)體，可以理解，在各情況下，本發(fā)明包含所有立體異構(gòu)體，包括對(duì)映體和非對(duì)映體及其混合物包括其外消旋混合物。
在實(shí)施例中，我們討論了某些對(duì)映異構(gòu)體的分離和特性。可通過(guò)將外消旋物與手性輔助物反應(yīng)，用色譜層析法分離所形成的非對(duì)映異構(gòu)體，然后將所述手性輔助物斷開(kāi)來(lái)制備對(duì)映異構(gòu)體。將非對(duì)映異構(gòu)體從第二個(gè)柱子上洗脫下來(lái)(利用本文所描述的方法)并隨后斷開(kāi)，得到測(cè)試時(shí)活性更大的對(duì)映異構(gòu)體。在各情況下，我們相信活性對(duì)映異構(gòu)體具有S立體化學(xué)，但不希望受到該最初測(cè)定的限制?；钚詫?duì)映異構(gòu)體的特征由第二個(gè)從分離柱上洗脫下來(lái)的衍生物確定。利用不同的式I化合物，其他柱子和/或不同的溶劑可以影響最大活性對(duì)映異構(gòu)體的洗脫順序。
在實(shí)施例中，我們討論了某些非對(duì)映異構(gòu)體的分離和特性。色譜分離和隨后的測(cè)試顯示，更大活性的非對(duì)映異構(gòu)體第一個(gè)從分離柱上洗脫下來(lái)(即活性更大的非對(duì)映異構(gòu)體的特性是由第一個(gè)從分離柱上洗脫下來(lái)的衍生物確定的)。利用不同的式I化合物，其他柱子和/或不同的溶劑可以影響最大活性對(duì)映異構(gòu)體的洗脫順序?qū)τ诰哂袃蓚€(gè)手性中心的式I化合物來(lái)說(shuō)，我們相信，活性對(duì)映異構(gòu)體具有S，S立體化學(xué)，但不希望受到該最初測(cè)定的限制。
對(duì)于存在互變異構(gòu)體的式I化合物，我們討論了所有獨(dú)立的互變異體形式和作為本發(fā)明特定實(shí)例的這些化合物的組合物。
如上所述，本發(fā)明化合物是金屬蛋白酶抑制劑，特別地，它們是MMP13抑制劑。上述關(guān)于式I化合物的各適應(yīng)癥代表本發(fā)明獨(dú)立的和特定的實(shí)例。盡管我們不希望受理論原因的束縛，但認(rèn)為，相對(duì)于任何MMP1抑制劑活性而言，本發(fā)明化合物選擇性抑制上述任何適應(yīng)癥，通過(guò)非限制性實(shí)施例，它們顯示，其選擇性為任何MMP1抑制活性的100-1000倍。
本發(fā)明某些化合物特別用作聚集蛋白聚糖酶抑制劑，即聚集蛋白聚糖降解抑制劑。本發(fā)明某些化合物特別用作MMP9和/或MMP12抑制劑。
本發(fā)明化合物可以以可藥用鹽的形式提供。這些包括酸加成鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、枸櫞酸鹽和馬來(lái)酸鹽以及與磷酸和硫酸形成的鹽。另一方面，適宜的鹽是堿鹽如堿金屬鹽，例如鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽，或有機(jī)胺鹽，例如三乙胺鹽。
它們也可以以體內(nèi)可水解酯的形式提供。這些是在人體水解產(chǎn)生母化合物的可藥用酯。例如，所述酯可通過(guò)靜脈內(nèi)給予試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)化合物并隨后測(cè)定試驗(yàn)動(dòng)物的體液來(lái)識(shí)別。羧基適宜的體內(nèi)可水解酯包括甲氧基甲基酯并且羥基適宜的可水解酯包括甲酸酯和乙酸酯，特別是乙酸酯。
為了利用式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯來(lái)治療(包括預(yù)防性治療)哺乳動(dòng)物包括人，通常將其按照標(biāo)準(zhǔn)制藥習(xí)慣配制成藥物組合物。
因此，另一方面，本發(fā)明提供包含式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯和可藥用載體的藥物組合物。
對(duì)于需要治療的疾病狀態(tài)，本發(fā)明藥物組合物可用標(biāo)準(zhǔn)方法給藥，例如，通過(guò)口服、局部、非腸道、口腔、鼻、陰道或直腸給藥或通過(guò)吸入給藥。為此，本發(fā)明化合物可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法配制成下列形式，例如片劑、膠囊劑、水或油溶液、懸浮液、乳劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、凝膠、鼻噴霧劑、栓劑、細(xì)碎的粉劑或吸入氣霧劑，和非腸道用(包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或輸注)滅菌水或油溶液或懸浮液或滅菌乳劑。
除了本發(fā)明化合物外，本發(fā)明藥物組合物也可以包含一種或多種治療一種或多種上述疾病狀態(tài)有價(jià)值的藥物，或者與其聯(lián)合給予(同時(shí)或相繼給予)。
例如，本發(fā)明藥物組合物通常這樣給予人，使得所服用的每日劑量為0.5-75mg/kg體重(并且優(yōu)選0.5-30mg/kg體重)。如果需要，所述每日劑量可以分劑量給予，所服用化合物的精確量和給藥途徑取決于所治療病人的體重、年齡和性別以及按照本領(lǐng)域已知的原則治療的特定疾病狀態(tài)。
典型地，單位劑量形式將包含大約1mg-500mg本發(fā)明化合物。
因此，另一方面，本發(fā)明提供在人或動(dòng)物體治療方法中使用的本發(fā)明式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯。尤其，我們公開(kāi)了在由MMP13和/或聚集蛋白聚糖酶和/或MMP9和/或MMP12介導(dǎo)的疾病或狀態(tài)的治療中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明提供治療金屬蛋白酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)的方法，它包括給予溫血?jiǎng)游镏委熡行Я渴絀化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯。金屬蛋白酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)包括關(guān)節(jié)炎(如骨關(guān)節(jié)炎)、動(dòng)脈粥樣硬化、慢性阻塞性肺病(COPD)。
另一方面，本發(fā)明提供制備式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯的方法，它包括將式II化合物與適宜的式R1CHO化合物反應(yīng)得到式III鏈烯烴，然后將其轉(zhuǎn)化為式IV化合物，它是化合物I的前體，然后可有可無(wú)地形成式I化合物的可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，如下所述 通過(guò)將式V化合物與式VI化合物反應(yīng)很方便地制備式II化合物，其中B’為B的前體并且X’代表X或者X’為X的前體或者適用于與B’反應(yīng)的X的激活形式。II也可以如下所述由式VII化合物制備
可以知道，很多有關(guān)的起始物是通過(guò)商業(yè)渠道獲得的。此外，下表顯示了醛中間使及其在化學(xué)文摘相應(yīng)登記號(hào)的詳細(xì)情況。
沒(méi)有化學(xué)文摘登記號(hào)的醛3-(2-嘧啶基)-丙醛向2-溴嘧啶(7.95g，0.05M)的乙腈(150ml)溶液中加入炔丙醇(4.2g，0.075M)，雙-(三苯膦)-鈀(II)氯化物(750mg，1mM)，碘化銅(100mg，0.5mM)和三乙胺(25ml，0.25M)，將混合物攪拌并在70℃下加熱2小時(shí)。然后，將補(bǔ)充量的炔丙醇(2.1g，0.038M)，雙-(三苯膦)-鈀(II)氯化物(375mg，0.5mil)和碘化銅(50mg，0.25mil)加到反應(yīng)混合物中，將其攪拌并在70C下再加熱1小時(shí)。
將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干并將預(yù)先吸附到硅膠上的殘?jiān)M(jìn)行色譜層析。用乙酸乙酯洗脫得到3-(2-嘧啶基)-丙-2-炔-3-醇的黃色固體4.45g(66％)。NMR(CDCl3)2.9(1H，t)，4.5(2H，d)，7.3(1H，d)，8.8(2H，t)，MS發(fā)現(xiàn)MH+135。
將3-(2-嘧啶基)-丙-2-炔-1-醇的黃色固體(4.45g，0.033M)溶解在乙酸乙酯(140ml)，加入10％Pd/C(890mg)并將混合物在氫環(huán)境下攪拌6小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾并將濾液蒸發(fā)得到3-(2-嘧啶基)-丙-1-醇的黃色油狀物4.15g(91％)。NMR(CDCl3)2.1(2H，m)，3.2(2H，t)，3.8(2H，t)，7.2(1H，t)，8.7(2H，d)，MS發(fā)現(xiàn)MH+139。
利用下列Swern條件將3-(2-嘧啶基)-丙-1-醇氧化得到3-(2-嘧啶基)-丙炔。向溶解在二氯甲烷(700ml)中的草酰氯(14.3ml)中加入DMSO(21.3ml)，保持溫度低于-60℃。16分鐘后，緩慢地加入溶解在二氯甲烷(20ml)中的醇(20.8g)，30分鐘后加三乙胺(125ml)。15分鐘后，當(dāng)加入水(100ml)時(shí)，使反應(yīng)混合物升至室溫，分層溶劑，用(3×150ml)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)得到油狀物，通過(guò)閃式柱色譜層析，用乙酸乙酯/甲醇(5％)洗脫進(jìn)行純化得到油狀物產(chǎn)品(8.71g，43％)。NMR CDCl33.0(2H，t)，3.4(2H，t)，7.1(1H，t)，8.7(2H，d)，9.9(1H，s)。
利用上述方法制備下列醛4-(2-嘧啶基)-丁醛用3-丁炔-1-醇代替炔丙醇。NMR CDCl39.8(1H，s)，8.6(2H，m)，7.15(1H，m)，3.0(2H，m)，2.5(2H，m)，2.2(2H，m)。3-(2-哌嗪基)-丙醛用2-溴哌嗪代替2-溴嘧啶。NMR(d6-DMSO)9.77(s，1H)，8.61(d，1H)，8.54(dd，1H)，8.46(d，1H)，3.10(t，2H)，2.292(t，2H)。4-(2-哌嗪基)-丁醛用2-溴哌嗪代替2-溴嘧啶并且用3-丁炔-1-醇代替炔丙醇。NMR(d6-DMSO)9.68(s，1H)，8.56(m，2H)，8.49(m，1H)，2.80(t，2H)，2.5(m，2H)，1.96(m，2H)。
4-(4-三氟甲基嘧啶-2-基)-丁醛用2-氯-4-三氟嘧啶[CAS登記號(hào)為33034-67-2]代替2-溴嘧啶并且用3-丁炔-1-醇代替丙醇。1HNMR(CDCl3)9.80(s，1H)，8.92(d，1H，J＝5.0Hz)，7.47(d，1H，J＝5.0Hz)，3.11(dd，2H，J＝7.5，7.5Hz)，2.60(dd，2H，J＝6.1，6.1Hz)，2.21(m，3H)。4-(5-氟嘧啶-2-基)-丁醛用2-氯-5-氟嘧啶[CAS登記號(hào)62802-42-0]代替2-溴嘧啶并且用3-丁炔-1-醇代替炔丙醇。1H NMR(CDCl3)9.90(s，1H)，8.52(s，2H，J＝5.0Hz)，7.47，3.47(m，2H)，3.33(dd，2H，J＝6.8，6.8Hz)，3.02(m，2H)。4-(4-甲氧基嘧啶-2-基)-丁醛用2-氯-4-甲氧基-嘧啶[CAS登記號(hào)22536-63-6]代替2-溴嘧啶并且用3-丁炔-1-醇代替炔丙醇。1H NMR(CDCl3)9.80(s，1H)，8.34(d，1H，J＝5.0Hz)，6.55(d，1H，J＝5.0Hz)，3.97(s，3H)，2.91(dd，2H，J＝6.8，6.8Hz)，2.58(m，2H)，2.20(m，2H)。4-(5-乙基嘧啶-2-基)-丁醛用2-氯-5-乙基-嘧啶[CAS登記號(hào)111196-81-7]代替2-溴嘧啶并且用3-丁炔-1-醇代替炔丙醇。1H NMR(CDCl3)9.79(s，1H)，8.51(s，2H)，2.99(dd，2H，J＝7.4，7.4Hz)，2.54(m，4H)，2.17(p，1H，J＝7.4Hz)，1.04(t，2H，J＝7.2Hz)。5-(2-嘧啶基)-戊醛用2-溴嘧啶和4-戊炔-1-醇代替炔丙醇。NMR(CDCl3)9.8(1H，s)，8.65(2H，m)，7.1(1H，m)，3.0(2H，m)，2.5(2H，m)，1.9(2H，m)，1.7(2H，m)。3-(5-溴嘧啶-2-基)-丙醛用2-碘-5-溴嘧啶代替2-溴嘧啶。1H NMR(CDCl3)9.90(s，1H)，8.70(s，2H)，3.30(dd，2H)，3.0(dd，2H)。4-(4-嘧啶基)-丁-1-醛將2，4-二氯嘧啶(4.47g，0.03M)在氬環(huán)境下溶解在三乙胺(250ml)溶液中。加入(Ph3P)2PdCl2(420mg，0.006M)，CuI(28mg，0.00015M)和3-丁炔-1-醇(2.36ml，0.03M)并將混合物攪拌并在室溫下攪拌18小時(shí)。蒸發(fā)至干，加入水(250ml)并用二氯甲烷提取。將合并的有機(jī)相干燥并蒸發(fā)至干。將殘余油的狀物進(jìn)行色譜層析，用異己烷/乙酸乙酯1∶1洗脫，得到4-(2-氯-4-嘧啶基)-3-丁炔-1-醇油狀物(3.3g)。NMR(CDCl3)d 8.5，(d 1H)；7.3，(d 1H)；3.9，(t 2H)；2.8，(m H)；1.6(s 1H)。質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)MH+183。該物質(zhì)如上所述，但在1當(dāng)量三乙胺存在下氫化得到所需要標(biāo)準(zhǔn)醇，將起用先前所描述的Swern氧化方法氧化得到所需要4-(4-嘧啶基)-丁-1-醛。NMR CDCl3d 9.8，(s 1H)；9.1，(s 1H)；8.5，(d 1H)；7.1(d 1H)；2.8，(t 2H)；2.5，(t，2H)；2.1，(m 2H)。質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)MH-149。3-(5-氟嘧啶基-2-基)-丙醛在室溫氬環(huán)境下，向(E)-1-乙氧基-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙-2-烯乙醚和(Z)-1-乙氧基-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙-2-烯乙醚(9.7g，43mmol)的無(wú)水乙醇(100ml)溶液中加入10％披活性炭(1.0g)。然后，將反應(yīng)瓶抽真空并通入氫氣。然后，將混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物通過(guò)硅藻土濾板過(guò)濾并減壓蒸發(fā)，得到黃色油狀物(8.7g，89％)。在室溫下，向該油狀物(15g，66mmol)的THF(200ml)溶液中加入鹽酸水溶液(36ml，2M溶液，72mmol)并將反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)。然后，將反應(yīng)物用乙酸乙酯(100ml)稀釋并通過(guò)加入碳酸氫鈉水溶液(飽和水溶液，100ml)將混合物pH調(diào)至pH＝9。然后，分離兩層并將水相用乙酸乙酯(3×100ml)提取。然后，將合并的提取液干燥(NaSO4)，過(guò)濾并減壓蒸發(fā)，得到不必進(jìn)一步純化即可使用的3-(5-氟嘧啶-2-基)-丙醛(16g)。1H NMR(CDCl3)9.90(s，1H)，8.50(s，2H)，3.33(dd，2H，J＝6.9，6.9Hz)，3.00(dd，2H，J＝6.9，6.9Hz)。
通過(guò)下列方法獲得其始物在氬環(huán)境下，向2-氯-5-氟-嘧啶[CAS登記號(hào)62802-42-0](9.0g，68mmol)和1-三丁基甲錫烷基-3，3-二乙氧基丙-1-烯(42.8g，102mmol，5∶1的E∶Z異構(gòu)體混合物)的無(wú)水DMF(140ml)溶液中相繼加入固體碳酸鉀(9.4g，68mmol)，氯化四乙銨(11.2g，68mmol)和雙(三苯膦)鈀(II)氯化物(2.4g，3.4mmol)。然后，將所得到的混合物加熱至120℃ 3小時(shí)。然后，將反應(yīng)物冷卻至室溫并用水(100ml)和乙醚(150ml)稀釋。然后，將該混合物通過(guò)硅藻土濾板過(guò)濾。分層，水相用乙醚(3×100ml)提取。然后，將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓蒸發(fā)。閃式色譜層析(硅膠，10％乙酸乙酯/己烷)得到產(chǎn)品的淡黃色油狀物和3∶1的E∶Z異構(gòu)體混合物(9.7g，63％)。
E-異構(gòu)體1H NMR(CDCl3)8.53(s，2H)，6.99(dd，1H，J＝15.4，4.1Hz)6.86(d，1H，J＝15.4Hz)，5.14(d，1H，J＝4.1Hz)，3.56(m，4H)，1.24(t，6H，J＝7.1Hz)。
Z-異構(gòu)體1H NMR(CDCl3)8.57(s，2H)，6.65(d，1H，J＝12.1Hz)6.49(d，1H，J＝7.5Hz)，6.09(dd，1H，J＝12.1，7.5Hz)，3.70(m，4H)，1.21(t，6H，J＝7.1Hz)。
用類(lèi)似的方法和適當(dāng)取代的2-氯-嘧啶來(lái)制備下列醛3-(4-甲氧基嘧啶-2-基)-丙醛1H NMR(CDCl3)9.82(s，1H)，8.34(d，1H，J＝8.4Hz)，6.55(d，1H，J＝7.4Hz)，3.91(s，3H)，3.28(dd，2H，J＝7.4，7.4Hz)，2.99(dd，2H，J＝7.4，7.4Hz)。3-(4-三氟甲氧基嘧啶-2-基)-丙醛1H NMR(CDCl3)9.92(s，1H)，8.90(d，1H，J＝5.0Hz)，7.47(d，1H，J＝5.0Hz)，3.43(dd，2H，J＝6.8，6.8Hz)，3.07(dd，2H，J＝6.8，6.8Hz)。3-(5-乙基嘧啶-2-基)-丙醛1H NMR(CDCl3)9.91(s，1H)，8.49(s，2H)，3.31(dd，2H，J＝6.9，6.9Hz)，2.98(dd，2H，J＝6.9，6.9Hz)，2.61(q，2H，J＝7.6Hz)，1.26(t，3H，J＝7.6Hz)。3，5，5-三甲基-1-丙醛乙內(nèi)酰脲 將3，5，5-三甲基乙內(nèi)酰脲[CAS(6345-19-3)](3.5g，0.025mol)，2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)(4.8ml，0.041mol)，K2CO3(8.5g，0.062mol)，氯化芐基三甲基銨(2.23g，0.012mol)的MeCN(100ml)溶液一起回流24小時(shí)。讓反應(yīng)物冷卻至室溫并過(guò)濾，濾液真空蒸發(fā)。殘?jiān)芙庠贒CM中，用水(×3)洗滌，然后真空蒸發(fā)。殘?jiān)c甲苯(×3)共沸得到黃色油狀物(5.4g)。在室溫下，將油狀物與濃HCl(4ml)一起在THF(30ml)中攪拌20小時(shí)。用NaHCO3水溶液中和并用DCM(×8)提取。將合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并真空蒸發(fā)，得到黃色油狀物(4.3g)。
1H NMR(CDCl3)9.82(s，1H)，3.62(t，2H)，3.04(s，3H)，2.09(m，2H)，1.37(s，6H)。1，5，5-三甲基-3-丙醛乙內(nèi)酰脲 將1，5，5-三甲基乙內(nèi)酰脲[CAS(6851-81-6)](5.0g，35.0mol)加到NaOEt(0.02g，0.298mmol，催化劑)和EtOH(8ml)的混合物中并在氬氣下攪拌。將該混合物溫?zé)嶂?0℃，然后緩慢地加入丙烯醛(2.35ml)，反應(yīng)物放熱至45℃。讓反應(yīng)物冷卻至室溫并再攪拌2小時(shí)。將AcOH(0.136ml，2.4mmol)和硅膠(3.5g)加到該混合物中，然后真空蒸發(fā)。將硅膠上的產(chǎn)品在硅膠柱上急性色譜層析(洗脫劑5％丙酮/DCM)，得到澄清的油狀物(6.2g)。在氧化鋁(丙酮DCM)上將殘余物進(jìn)一步純化，得到澄清的油狀物(2.7g)。1H NMR(CDCl3)9.78(s，1H)，3.88(t，2H)，2.86(s，3H)，2.82(m，2H)，1.37(s，6H)。
用類(lèi)似的方法制備1，5，5-三甲基-3-丁醛乙內(nèi)酰脲[M+H 213]。3(3-氯苯基)丁醛將3-氯碘苯(2.38g)，乙酸鈀(20mg)，碳酸氫鈉(1.01g)和巴豆醇(1.28ml)的N-甲基吡咯烷酮(4ml)混合物攪拌并在130℃下加熱2小時(shí)。讓反應(yīng)混合物冷卻，加入水(50ml)并將混合物用乙醚(2×50ml)提取。將合并的有機(jī)提取液干燥，除去溶劑所得到的殘?jiān)ㄟ^(guò)在硅膠上色譜層析，用乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(1∶20)洗脫，得到標(biāo)題化合物的油狀物，收率519mg，M-H＝181。3-(2-吡啶基)丁醛通過(guò)將相應(yīng)的醇進(jìn)行Swern氧化(CAS 90642-86-7)。3-(5-氟嘧啶-2-基)丁醛
在室溫下，將濃鹽酸(1ml)加到攪拌下的2-[2-(1，3-二氧戊烷-2-基)-1-甲基乙基]-5-氟嘧啶(1.1g)的四氫呋喃(10ml)溶液中，攪拌3小時(shí)，加入固體碳酸氫鈉酯中性pH。將該混合物傾入Chemelutecarrtridge上并用乙酸乙酯洗滌(3×20ml)，將合并的有機(jī)相用NaSO4干燥并真空蒸發(fā)，得到不必進(jìn)一步純化即可使用的3-(5-氟嘧啶-2-基)丁醛(300mg，35％)。
如下制備起始物2-[2-(1，3-二氧戊烷-2-基)-1-甲基乙基]-5-氟嘧啶 在攪拌下，向活化“Rieke”鋅的四氫呋喃(21ml，1.53M)懸浮液中加入2-(2-溴丙基)-1，3-二氧戊烷(6.6g)的四氫呋喃(50ml)溶液，觀(guān)察到溫度從21℃升至40℃，在40℃下加熱1小時(shí)，然后冷卻至室溫，加入2-氯-5-氟嘧啶(3g)和[1，2-雙(二苯基膦)-丙烷]二氯鎳(II)氯化物(368mg)。將該混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土濾板過(guò)濾并將濾液減壓蒸發(fā)。閃式色譜層析(硅膠，己烷-25％乙酸乙酯/己烷)，得到產(chǎn)品的淡黃色油狀物(1.1g)；1H NMR(d6-DMSO)8.81(s，2H)，4.73(dd，1H)，3.66-3.87(m，4H)，3.21-3.30(m，1H)，2.19(ddd，1H)，1.83(ddd，1H)，1.27(d，3H)；m/z 213(M+1)。2-(2-溴丙基)-1，3-二氧戊烷 在0℃攪拌下，將巴豆醛(9.18g，108mmol)滴加到溴代三甲基硅烷(24g，156mmol)，在0℃下攪拌1小時(shí)，然后溫?zé)嶂潦覝夭⒃贁嚢?小時(shí)。加入乙二醇(9.5g，156mmol)和對(duì)甲苯磺酸(100mg)，將溶液加熱回流，通過(guò)使用Dean Stark裝置除去水。反應(yīng)結(jié)束后，將混合物冷卻至室溫并用碳酸氫鈉水溶液(飽和的，2×50ml)洗滌。殘?jiān)ㄟ^(guò)真空蒸餾純化，得到2-(2-溴丙基)-1，3-二氧戊烷(18.8g，40-42℃@ 1mmHg，89％)。
1H NMR(CDCl3)5.05(dd，1H)，4.18-4.33(m，1H)，3.84-4.0(m，4H)，2.25(ddd，1H)，2.03(ddd，1H)，1.75(d，3H)。
用類(lèi)似的方法和適當(dāng)取代的2-氯-嘧啶和1，3-二氧戊烷來(lái)制備下列醛3-(5-氯嘧啶-2-基)丙醛 1H NMR(CDCl3)9.90(s，1H)，8.60(s，2H)，3.32(dd，2H)，3.04(dd，2H)。3-(5-氯嘧啶-2-基)丁醛 1H NMR(CDCl3)9.85(s，1H)，8.60(s，2H)，3.65(m，1H)，3.14(dd，1H)，2.75(dd，1H)，1.39(d，3H)。3-[2-(6-氯哌嗪基)丙醛 在室溫下，將3-[2-(6-氯哌嗪基)丙醛二乙基縮醛(200mg，0.82mmol)用2N鹽酸(450μl)的四氫呋喃(2.5ml)溶液處理18小時(shí)。用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)至pH＝8后，將反應(yīng)物用乙酸乙酯提取(×3)并將有機(jī)相干燥(無(wú)水硫酸鈉)，過(guò)濾并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物的暗棕色油狀物(137mg，98％)。該未知不必進(jìn)一步純化即可使用。
1H NMR(CDCl3)δ9.85(1H，s)；8.4(2H，2×s)；3.5(2H，t)；3.0(2H，t)。
通過(guò)下列方法得到起始物3-[2-(6-氯哌嗪基)]丙醛二乙基縮醛 將3-[2-(6-氯哌嗪基)丙炔醛二乙基縮醛(5.5g，22.9mmol)的乙醇(55ml)溶液用氬氣脫氣并加入氧化鈀(IV)(52mg，0.2 3mmol)。將反應(yīng)容器升溫并引入氫氣。2天后，將反應(yīng)混合物真空濃縮并通過(guò)閃式色譜層析純化，用0-50％乙酸乙酯/異己烷梯度洗脫，得到3-[2-(6-氯哌嗪基)丙醛二乙基縮醛的淡黃色油狀物(1.17g，21％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.4(1H，s)；8.35(1H，s)；4.5(1H，t)；3.75-3.55(2H，m)；3.55-3.4(2H，m)；2.9(2H，dd)；2.1(2H，dd)；1.2(6H，t)。3-[2-(6-氯哌嗪基)丙炔醛二乙基縮醛 在室溫氬氣環(huán)境下，向2，6-二氯哌嗪(1g，6.7mmol)和丙醛二乙基縮醛(1.1ml，7.4mmol)的乙腈(10ml)溶液中加入雙(三苯基膦)鈀(II)氯化物(94mg，0.13mmol)和碘化銅(I)(51mg，0.27mmol)，然后加入三乙胺(4.7ml，33.6mmol)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑并將殘?jiān)ㄟ^(guò)閃式色譜層析純化，用10-20％乙酸乙酯/異己烷洗脫，得到3-[2-(6-氯哌嗪基)丙炔醛二乙基縮醛的黃色油狀物(660mg，41％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.6(1H，s)；8.55(1H，s)；5.5(1H，s)；3.9-3.75(2H，m)；3.7-3.4(2H，m)；1.25(6H，t)。m/s(EI+)241/243(MH+)。
制備式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯的另一方法包括將式II化合物與式R1COOR化合物反應(yīng)得到式VIII化合物，將其轉(zhuǎn)化為式IX化合物，將式IX化合物轉(zhuǎn)化為式III鏈烯烴，然后將其轉(zhuǎn)化為式IV化合物，它是化合物I的前體，然后可有可無(wú)地形成式I化合物的可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，如下所述。
適宜的式R1COOR的酯可以通過(guò)商業(yè)渠道或其他渠道獲得的或者，例如，可以利用實(shí)施例10所描述的類(lèi)似的方法制備。應(yīng)該理解，使用任何式R1COOR的酯(其中R1如上定義)都是可能的-R可以是任何基團(tuán)包括，例如烷基、芳烷基、雜芳基等。
例如，可通過(guò)下列方法評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物分離酶的分析基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)包括例如MMP13可以如Knauper等人[V.Knauper等人，(1996)The BiochemicalJournal 2711544-1550(1996)]所述方法表達(dá)和提純重組人前MMP13。所提純的酶可如下用于監(jiān)測(cè)抑制劑的活性在21℃下，將提純的前MMP13用1mM氨基苯汞酸(APMA)活化20小時(shí)；將活化的MMP13(每次分析11.25ng)在35℃下，在抑制劑存在或不存在下，使用合成底物7-甲氧基香豆素-4-基乙?；?Pro.Leu.Gly.Leu.N-3-(2，4-二硝基苯)-L-2，3-二氨基丙酰基.Ala.Arg.NH2，在分析緩沖液(0.1MTris-HCl，pH＝7.5，包含0.1M NaCl，20mM CaCl2，0.02mM ZnCl和0.05％(w/v)Brij 35)中溫育4-5小時(shí)。通過(guò)在λex 328nm和λem 393nm下測(cè)定熒光性來(lái)測(cè)定活性。如下計(jì)算抑制百分?jǐn)?shù)％抑制等于[熒光加抑制劑-熒光背景]/[熒光減抑制劑-熒光背景]。
例如，如C.Graham Knight等人，(1992)FEBS Lett.296(3)263-266所述，可通過(guò)使用最適于特定MMP的底物和條件，用類(lèi)似的方法來(lái)表達(dá)和提純其他前MMPs。Adamalysin類(lèi)包括例如TNF轉(zhuǎn)換酶化合物抑制前TNFα轉(zhuǎn)換酶的能力可利用部分提純的分離酶的分析來(lái)評(píng)定，所述酶由THP-1膜獲得，如K.M.Mohler等人，(1994)Nature370218-220所述。通過(guò)在26℃下，將部分提純的酶在試驗(yàn)化合物存在或不存在下，使用底物4’，5’-二甲氧基-熒光素基Ser.Pro.Leu.Ala.Gln.Ala.Val.Arg.Ser.Ser.Ser.Arg.Cys(4-(3-琥珀酰亞胺-1-基)-熒光素)-NH2，在分析緩沖液(50mM Tris HCl，pH＝7.4，包含0.1％(w/v)Triton X-100和2mM CaCl2)中溫育18小時(shí)來(lái)測(cè)定提純的酶的活性和抑制作用。除了使用λex 490nm和λem530nm外，如MMP13測(cè)定抑制量。底物如下合成。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法，包括用Foc-氨基酸和O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)作為偶聯(lián)劑和至少4-或5-倍過(guò)量的Fmoc-氨基酸和HBTU，將底物的肽部分通過(guò)手工或自動(dòng)的肽合成器裝配到Fmoc-NH-Rink-MBHA-聚苯乙烯樹(shù)脂上。Ser1和Pro2雙倍偶聯(lián)。使用下列側(cè)鏈保護(hù)策略；Ser1(But)，Gln5(三苯甲基)，Arg8，12(Pmc或Pbf)，Ser9，10，11(三苯甲基)，Cys13(三苯甲基)。裝配后，通過(guò)在DMF中處理Fmoc-肽基-樹(shù)脂除去N-端Fmoc保護(hù)基。所得到的氨基-肽基-樹(shù)脂通過(guò)在70℃下，用1.5-2當(dāng)量預(yù)先經(jīng)二異丙基碳化二亞胺和1-羥基苯并三唑的DMF液活化的4’，5’-二甲氧基-熒光素-4(5)-羧酸[Khanna & Ullman，(1980)Anal Biochem.108156-161]處理1.5-2小時(shí)進(jìn)行乙?；Ｈ缓螅ㄟ^(guò)用含5％水和5％三乙基硅烷的三氟乙酸處理，將二甲氧基熒光素-肽同時(shí)脫保護(hù)并從樹(shù)脂上裂解下來(lái)。通過(guò)蒸發(fā)，用乙醚研磨和過(guò)濾分離二甲氧基熒光素-肽。將所分離的肽與4-(N-馬來(lái)酰亞胺基)-熒光素在含二異丙基乙胺的DMF中反應(yīng)，產(chǎn)物通過(guò)RP-HPLC純化并最后通過(guò)冷凍干燥從乙酸水溶液中分離。通過(guò)MALDI-TOFMS和氨基酸分析來(lái)確定產(chǎn)物的特性。中性底物例如，可使用以公開(kāi)E.C.Arner等人，(1998)Osteoarthritisand Cartilage 6214-228；(1999).Journal of BiologicalChemistry，274(10)，6594-6601為基礎(chǔ)的方法和其中所描述的抗體來(lái)分析本發(fā)明化合物作為聚集蛋白聚糖降解抑制劑的活性?？扇鏣.Cawston and A.Barrett(1979)Anal.Biochem.99340-345所述來(lái)測(cè)定化合物作為膠原酶抑制劑的效力。在基于細(xì)胞/組織活性試驗(yàn)中作為抑制膜脫落酶(sheddase)(如TNF轉(zhuǎn)換酶)藥物的金屬蛋白酶活性的抑制作用基本上如K.M.Mohler等人，(1994)Nature 370218-220所述，可通過(guò)使用ELISA檢測(cè)所釋放的TNF，在THP-1細(xì)胞中評(píng)定本發(fā)明化合物抑制細(xì)胞處理TNFα產(chǎn)生的能力。用類(lèi)似的方式，通過(guò)使用適宜的細(xì)胞系并用適宜的抗體檢測(cè)脫落蛋白來(lái)測(cè)試其他膜分子如N.M.Hooper等人(1997)Biochem.J.321265-279中所描述的那些膜分子的加工和脫落。作為抑制基于細(xì)胞侵襲性藥物的試驗(yàn)如A.Albini等人，(1987)Cancer Research 473239-3245所述，可在侵襲分析中測(cè)定本發(fā)明化合物抑制細(xì)胞遷移的能力。作為抑制全血TNF脫落酶活性藥的試驗(yàn)在用LPS刺激TNFα釋放的人全血分析中評(píng)定本發(fā)明化合物抑制TNFα產(chǎn)生的能力。將從志愿者獲得的肝素化(10單位/ml)人血用培養(yǎng)基(RPMI 1640+碳酸氫鹽，青霉素，鏈霉素和葡糖胺)稀釋1∶5并在加入20μl LPS(E.Coli.0111B4；最終濃度為10μg/ml)前，在37℃潮濕的(5％CO2/95％空氣)細(xì)菌培養(yǎng)器中，將該稀釋血(160μl)與20μl試驗(yàn)化合物(一式三份)在DMSO或適宜的載體中培養(yǎng)30分鐘。每次分析包括單獨(dú)與培養(yǎng)基一起培養(yǎng)的稀釋血對(duì)照(6孔/平板)或已知的作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的TNFα抑制劑。然后，將培平板在37℃下培養(yǎng)6小時(shí)(潮濕的細(xì)菌培養(yǎng)器)，離心(2000rpm，10分鐘；4℃)，收獲血漿(50-100μl)并在隨后通過(guò)ELISA分析TNFα濃度前，在-70℃下貯存在96孔平板中。作為體外抑制軟骨降解藥的試驗(yàn)可基本上如K.M.Bottomley等人，(1997)Biochem J.323483-488所述評(píng)定本發(fā)明化合物抑制軟骨中聚集蛋白聚糖或膠原組分降解的能力。藥效學(xué)試驗(yàn)采用體外藥效學(xué)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的清除特性和生物利用度，該試驗(yàn)利用了上述合成底物分析或HPLC或質(zhì)譜分析。這是可用于在一系列物種中評(píng)價(jià)化合物清除率的一般試驗(yàn)。靜脈內(nèi)或口服給予動(dòng)物(例如大鼠、狨)化合物的可溶性制劑(如20％ w/vDMSO，60％w/vPEG400)并且在接下來(lái)的時(shí)間點(diǎn)(例如5，15，30，60，120，240，480，720，1220分鐘)，將血樣從適宜的容器中取出加到10U肝素中。通過(guò)離心得到血漿并用乙腈(80％ w/v最終濃度)沉淀血漿蛋白。在-20℃下放置30分鐘后，通過(guò)離心沉積血漿蛋白并用Savant speed vac將上清液部分蒸發(fā)至干。將沉積物在分析緩沖液中重新構(gòu)成并隨后利用合成底物分析來(lái)分析化合物的含量。簡(jiǎn)單地說(shuō)，作進(jìn)行評(píng)價(jià)化合物的濃度-反應(yīng)曲線(xiàn)。評(píng)定重新構(gòu)成血漿的系列稀釋液的活性并且通過(guò)使用濃度-反應(yīng)曲線(xiàn)和考慮總血漿稀釋因素來(lái)計(jì)算原血漿樣品中存在的化合物的活性和量。體內(nèi)評(píng)定作為抗TNF藥的試驗(yàn)用大鼠評(píng)定本發(fā)明化合物作為體外TNFα抑制劑的能力。簡(jiǎn)單地說(shuō)，通過(guò)適宜的途徑，例如口服(p.o.)、腹膜內(nèi)(i.p.)、皮下(s.c.)給予雄性Wistar Alderley Park(AP)鼠(180-210g)化合物(6只鼠)或藥物載體(10只鼠)。90分鐘后，用高濃度CO2將大鼠處死并通過(guò)后腔靜脈放血得到5單位肝素鈉/ml血的血樣。將血樣立即放到冰上并在4℃以2000rpm的速度離心10分鐘，將所收獲的血漿在-20℃下冷凍以供分析它們對(duì)LPS-刺激的人血產(chǎn)生TNFα的作用。將大鼠血漿樣品解凍并將175μl各樣品加到96U孔平板的固定樣式的孔中。然后，將50μl肝素化的人血加到各孔中，混合并將平板在37℃(潮濕的細(xì)菌培養(yǎng)器)下培養(yǎng)30分鐘。將LPS(25μl；最終濃度10μg/ml)加到所述孔中并再繼續(xù)培養(yǎng)5.5小時(shí)。對(duì)照孔單獨(dú)與25μl培養(yǎng)基一起培養(yǎng)。然后，將平板在2000rpm下離心10分鐘，將200μl上清液轉(zhuǎn)移到96孔平板中并在-20℃下冷凍以供隨后通過(guò)ELISA分析TNF濃度使用。
通過(guò)專(zhuān)用軟件分析數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算各化合物/劑量 作為抗關(guān)節(jié)炎藥的試驗(yàn)如D.E.Trentham等人，(1977)J.Exp.Med.146，857所述，在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)中測(cè)試化合物作為抗關(guān)節(jié)炎藥的活性。在該模型中，當(dāng)在Freunds不完全配料中給予時(shí)，酸可溶性天然II型膠原引起大鼠多關(guān)節(jié)炎?？墒褂妙?lèi)似的條件誘導(dǎo)老鼠和靈長(zhǎng)目動(dòng)物關(guān)節(jié)炎。作為抗癌藥的試驗(yàn)基本上如I.J.Fidler(1978)Methods in Cancer Research15399-439所述，例如，使用B16細(xì)胞系(如B.Hibner等人，Abstract283 p75 10thNCI-EORTC Symposium，Amsterdam June 16-19 1998)來(lái)評(píng)定化合物作為抗癌藥的活性。
下面將通過(guò)下列實(shí)施例說(shuō)明但不限制本發(fā)明。實(shí)施例1N-[1-([4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺?；谆?-4-嘧啶-2-基丁基]-N-羥基甲酰胺
在攪拌下，向冷卻至0℃的N-[1-([4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺酰基甲基)-4-嘧啶-2-基丁基]羥胺(497mg，1.0mmol)的THF(5.0ml)和甲酸(2.5ml)溶液中加入預(yù)先形成的乙酸酐(566μl，6.0mmol)和甲酸(2.0ml)混合物。將該混合物在0℃下攪拌1小時(shí)并放置至室溫。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑并將殘?jiān)ㄟ^(guò)色譜層析(50g Silica Bond Elute，洗脫劑0→15％甲醇/二氯甲烷)純化，將純化的餾分蒸發(fā)，并從熱的乙酸乙酯中結(jié)晶，得到N-[1-([4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺?；谆?-4-嘧啶-2-基丁基]-N-羥基甲酰胺的白色結(jié)晶粉末(262mg，51％)。NMR(300MHz DMSO-d6)δ/ppm9.87(s，1H*)，9.55(s，1H*)，8.70(m，2H)，8.29(s，1H*)，7.98(s，1H*)，7.33(m，3H)，6.92(dd，2H)，4.68(m，1H*)，4.13(m，1H*)，3.55-3.31(m，5H，部分隱藏的)，3.25-3.09(m，7H，部分隱藏的)，1.80-1.50(m，4H).
*旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體標(biāo)志MSES+，(M+H)+＝512，514(Br同位素型)如下制備起始物i)、向1-(4-溴苯基)哌嗪鹽酸鹽(5.09g，18.3mmol)和三乙胺(7.67ml)的二氯甲烷(100ml)溶液中滴加甲磺酰氯(2.83ml，36.3mmol)。將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入二氯甲烷(100ml)。有機(jī)相用水(2×)、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并真空蒸發(fā)得到黃色固體，將其從乙醇中結(jié)晶并用乙醚洗滌得到1-(4-溴苯基)-4-(甲磺?；?哌嗪(4.74g，81％收率)的白色蓬松粉末。1H NMR(300MHz CDCl3)δ/ppm7.38(d，2H)，6.91(d，2H)，3.21(m，8H)，2.89(s，3H)MSES+，(M+H)+＝318，320(Br同位素型)ii)、在氮環(huán)境下，向懸浮在無(wú)水THF(15ml)中的冷卻至-20--30℃的1-(4-溴苯基)-4-(甲磺酰基)哌嗪(902mg，2.0mmol)中相繼加入雙(三甲硅烷基)酰胺鋰(1.0M的THF液，4.0ml)、氯代三甲基硅烷(217mg，2.0mmol，253μl)和4-嘧啶-2-基丁醛(300mg，2.0mmol)。將該混合物在-20℃下攪拌1小時(shí)，用飽和氯化銨溶液淬滅并在室溫下放置過(guò)夜。真空除去溶劑并將殘?jiān)诙燃淄?15ml)和水(5ml)之間分配，分離有機(jī)相并進(jìn)行色譜層析(50g Silica Bond Elute，用0→100％甲醇/己烷梯度洗脫)純化)得到2-(5-[4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺?；?4-烯基)嘧啶的白色結(jié)晶物(759mg，84％收率)。
MSES+，(M+H)+＝451，453(Br同位素型)iii)、在攪拌下，向2-((E)-5-[4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺?；?4-烯基)嘧啶(451mg，1.0mmol)的THF(10ml)溶液中加入羥胺(50％水溶液，500μl)并將混合物攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑，與甲苯(3×)共沸得到N-[1-([4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺酰基)-4-嘧啶-2-基丁基]羥胺(497mg，定量的)。
MSES+，(M+H)+＝484，486(Br同位素型)實(shí)施例2N-[1-([4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；谆?-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺 將乙酸酐(0.51ml)直接加到已冷卻至0℃的甲酸(2.0ml)中，然后加入2-[4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；?3-(羥基氨基)丁基]-5-氟嘧啶(0.485g)的四氫呋喃(11ml)溶液。將該溶液在室溫下攪拌3小時(shí)，然后真空蒸發(fā)，所得到的殘?jiān)c甲苯共沸，然后將其溶解在甲醇中并加熱至40℃ 30分鐘。將溶液蒸發(fā)至干，然后加入乙醚并在室溫下攪拌10分鐘，將固體過(guò)濾，真空干燥得到N-[1-([4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基甲基)-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺(0.218g)，mp 154-155℃。NMR(d6-DMSO 373°K)2.20(m，2H)，2.95(m，2H)，3.23(dd，1H)，3.30(m，4H)，3.49(dd，1H)，3.60(m，4H)，4.42(vbs，1H)，6.88(d，1H)，7.59(dd，1H)，8.05(vbs，1H)，8.12(dd，1H)，8.71(s，2H)，9.40(vbs，1H)；m/z 473(M+1).
如下制備起始物(i)、在氬氣環(huán)境下，在加入雙(三甲硅烷基)酰胺鋰(4.8ml 1.0M的四氫呋喃溶液)前，將1-(5-氯吡啶-2-基)-4-(甲基磺?；?哌嗪(0.600g)在無(wú)水四氫呋喃(22ml)中攪拌，然后冷卻至-10℃。將該混合物在-10℃下攪拌30分鐘并加入氯磷酸二乙酯(0.345ml)。將該混合物在-10℃下攪拌15分鐘，然后加入3-(5-氟嘧啶-2-基)丙醛(0.334g)，在-10℃下再攪拌30分鐘。將該混合物放置至室溫，然后用氯化銨洗滌并用乙酸乙酯提取。有機(jī)層用Na2SO4干燥。
將在硅膠上，用70％乙酸乙酯30％己烷洗脫進(jìn)行純化得到2-((E)-4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；?3-烯基)-5-氟嘧啶和2-((Z)-4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；?3-烯基)-5-氟嘧啶的6∶4混合物(0.44g)。1H NMR(CDCl3)8.55(d，1H)，8.48，(s，1H)，7.46，(dd，1H)，6.85，(m，1H)，6.60，(d，1H)，*6.45，(m，1H)，6.15，(d，1H)，*6.03，(d，1H)，3.61，(m，4H)，3.28，(m，2H)，3.15，(m，4H)，*2.81，(m，2H)；MS(ES+)412.3(MH+).
*代表次要的異構(gòu)體(ii)、向2-((E)-4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；?3-烯基)-5-氟嘧啶和2-((Z)-4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基丁-3-烯基)-5-氟嘧啶(0.44g)的四氫呋喃(5ml)溶液中加入羥胺(1.0ml，50％水溶液)。將該混合物攪拌18小時(shí)，然后用EtOAc(10ml)稀釋?zhuān)⒂蔑柡吐然@溶液(10ml)洗滌。有機(jī)層用NaSO4干燥并真空蒸發(fā)，得到2-[4-[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基-3-(羥基氨基)丁基)-5-氟嘧啶(0.483g)。1H NMR(CDCl3)8.45(s，2H)，8.08(d，1H)，7.39(dd，1H)，6.55(d，1H)，5.76(bs，2H)，3.59(m，4H)，3.46(m，1H)，3.42(m，2H)，3.33(m，4H)，3.10(m，4H)，2.82(m，1H)，2.15(m，1H)，2.01(m，1H)；MS(ES+)445.3(MH+).實(shí)施例3制備下列化合物 B XR1 mpt M+H 用下列實(shí)施例中的方法制備5-Cl-2-N1，5，5-三甲基-3-乙 517.32吡啶基 內(nèi)酰脲CH2CH2(5-Cl-2- C4-Cl-苯基 474.31吡啶基)氧基5-Cl-2-N3，5，5-三甲基-1-乙 517.31吡啶基 內(nèi)酰脲CH2CH2(5-Cl-2- C2-嘧啶基CH2CH2470.31吡啶基)氧基5-Cl-2-N2-嘧啶-SCH2CH2487 1吡啶基(5-Br-2- C2-嘧啶基CH2CH2CH2 528.21吡啶基)氧基5-Cl-2-N3-(OCH2Ph)-Ph 531 1吡啶基3，4-二氯 N2-嘧啶基CH2CH2CH2 502 1-苯基4-Cl-苯N2-嘧啶基CH2CH2CH2 468 1基5-Cl-2-N3-CF3-Ph 493 1吡啶基4-Cl-苯N3-吡啶基 397.42基5-Cl-2-N4-CF3-Ph 493 1吡啶基5-Cl-2-N3-硫苯基 4311吡啶基5-Cl-2-N2-哌嗪基CH2CH2CH24692吡啶基5-Cl-2-N2-哌嗪基CH2CH2 455.4 2吡啶基3-Cl-苯N2-嘧啶基CH2CH2CH2468.4 2基6-Me-4-N2-嘧啶基CH2CH2CH2450.5 2嘧啶基5-氰基-N2-哌嗪基CH2CH2CH2460.5 22-吡啶基5-氰基-N2-哌嗪基CH2CH2 446.5 22-吡啶基4-F-Ph N2-嘧啶基CH2CH2 43815-CF3-2- N2-嘧啶基CH2CH2 4891吡啶基5-氰基-N2-嘧啶基CH2CH2 44612-吡啶基5-CF3-2- N2-嘧啶基CH2CH2CH25031吡啶基5-Cl-2-N4-嘧啶基CH2CH2CH24691吡啶基4-F-Ph C2-嘧啶基CH2CH2CH245124-F-Ph C2-嘧啶基CH2CH2 43725-Cl-2-N2-(4-MeO-嘧啶4852吡啶基 基)CH2CH25-Cl-2-C2-嘧啶基CH2CH2CH24682吡啶基5-Cl-2-C2-嘧啶基CH2CH2 4542吡啶基5-Cl-2-N2-(4-CF3-嘧啶 5232吡啶基 基)CH2CH25-Cl-2-N2-(5-乙基-嘧啶4832吡啶基 基)CH2CH25-Cl-2-N2-(4-Me-嘧啶 4992吡啶基 基)CH2CH2CH25-氰基-N2-(4-Me-嘧啶 49022-吡啶基基)CH2CH2CH25-Cl-2-N2-(5-F-嘧啶 4872吡啶基 基)CH2CH2CH25-Br-2-N2-(4-CF3-嘧啶 5832吡啶基 基)CH2CH2CH25-Cl-2-N2-(4-CF3-嘧啶 5372吡啶基 基)CH2CH2CH25-氰基-N2-(4-CF3-嘧啶 52822-吡啶基基)CH2CH2CH25-Cl-2-N2-(5-乙基-嘧啶4972吡啶基 基)CH2CH2CH25-Br-2-N2-(5-乙基-嘧啶541/5432吡啶基 基)CH2CH2CH25-氰基-N2-(5-乙基-嘧啶48822-吡啶基基)CH2CH2CH24-F-Ph NPhSO2NHCH2CH2 51515-Cl-2-CPhCH(Me)CH2 64-65 2吡啶基4-F-Ph N1，5，5-三甲基-3-乙 85 1內(nèi)酰脲CH(Me)CH24-F-Ph N4-MeO-PhCH(Me)CH2 48014-F-Ph N3-MeO-PhCH(Me)CH2 48014-F-Ph C1，5，5-三甲基-3-乙 77-79 1內(nèi)酰脲CH(Me)CH24-Cl-PhN3-Cl-PhCH(Me)CH2 500，502 16-Cl-2-N2-哌嗪基CH(Me)CH2 79-81 470 1嘧啶基5-Cl-2-N2-吡啶基CH(Me)CH2468 2吡啶基5-氰基-N2-吡啶基CH(Me)CH2459 22-吡啶基5-氰基-N2-哌嗪基CH(Me)CH2 80 460 22-吡啶基5-CN-2-N2-嘧啶基 474.51吡啶基 CH2CH2CH2CH24-Cl-苯N2-嘧啶基 482.45 1基 CH2CH2CH2CH25-Cl-2-N2-嘧啶基 483.41吡啶基 CH2CH2CH2CH25-Cl-2-N4-Cl-苯基459.31吡啶基5-F-2-吡 N2-嘧啶基CH2CH2CH2453.22啶基5-F-2-吡 N2-(5-F-嘧啶 457.12啶基基)CH2CH25-Br-2-N2-(5-F-嘧啶 517/519 2吡啶基 基)CH2CH24-Cl-苯N2-(5-F-嘧啶 472.12基 基)CH2CH25-CN-2-N2-(5-F-嘧啶 464.18 2吡啶基 基)CH2CH25-CF3-2- N2-(5-F-嘧啶 507.14 2吡啶基 基)CH2CH25-Cl-2-N2-(5-Br-嘧啶 533/535 2吡啶基 基)CH2CH25-F-2-吡 N2-(5-Br-嘧啶 517/519 2啶基基)CH2CH24-F-苯基 N2-(5-Br-嘧啶516/518 2基)CH2CH25-F-2-吡 N2-(5-Me-嘧啶453.42啶基基)CH2CH24-Cl-苯N2-(5-Me-嘧啶468.41基 基)CH2CH25-Br-2-N2-(5-Me-嘧啶513/515 2吡啶基 基)CH2CH25-CF3-2- N2-(5-Me-嘧啶503.42吡啶基 基)CH2CH25-F-2-吡 N2-(4-CF3-嘧啶 507.06 2啶基基)CH2CH24-Cl-苯N2-(4-CF3-嘧啶 521.92基 基)CH2CH25-CF3-2- N2-(4-CF3-嘧啶 556.95 2吡啶基 基)CH2CH25-Br-2-N2-(4-CF3-嘧啶 566/568 2吡啶基 基)CH2CH25-Cl-2-N2-(5-Cl-嘧啶489/491 2吡啶基 基)CH2CH25-Br-2-N2-(5-Cl-嘧啶523/534 2吡啶基 基)CH2CH25-F-2-吡 N2-(5-Cl-嘧啶473 2啶基基)CH2CH24-F-苯基 N2-(5-Cl-嘧啶472 2基)CH2CH24-Cl-苯N2-(5-Cl-嘧啶488/490 2基 基)CH2CH25-Br-2-N2-(5-Br-嘧啶576/578 2吡啶基 基)CH2CH2 /5804-Cl-苯N2-(5-Br-嘧啶531/533 2基 基)CH2CH2 /5355-CN-2- N3-(5-吡啶基)CH2CH2 479/481 2吡啶基4-CF3-苯 N2-嘧啶基CH2CH2CH2502 2基4-Br-苯 N2-(5-F-嘧啶 518.32基基)CH2CH23，4-N2-(5-F-嘧啶 506.34 2DiCl-苯 基)CH2CH2基3-Cl-苯 N2-(5-F-嘧啶 472.38 2基基)CH2CH24-CF3-苯 N2-(5-F-嘧啶 506.42基基)CH2CH24-F-Ph N2-嘧啶基CH2CH2 87-8913，4-di- N2-嘧啶基CH2CH2 489 1Cl-Ph4-Cl-Ph N2-嘧啶基CH2CH2 455 15-Me-2- N2-嘧啶基CH2CH2CH2449 1吡啶基5-Me-2- N2-嘧啶基CH2CH2 435 1吡啶基4-F-Ph N2-哌嗪基CH2CH2CH2452 14-F-Ph N(6-Cl-2-哌嗪 91-92 2基)CH2CH2CH24-F-Ph N5-F-2-嘧啶基 143-4 2CH(CH3)CH24-Cl-Ph N2-哌嗪基CH(CH3)CH2 468 14-F-Ph C5-F-2-嘧啶基 469 1CH(CH3)CH2用于合成化合物的起始哌嗪和哌啶磺胺可通過(guò)商業(yè)渠道獲得或者如下所述制備1-(4-氟苯基)-4-(甲磺?；?哌嗪 在0℃下，向1-(4-氟苯基)-哌嗪(35g，194mmol)和哌啶(17.5ml)分無(wú)水二氯甲烷(200ml)溶液中滴加(20ml，258mmol)。將該混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。該混合物用水洗滌并用二氯甲烷(2×100ml)提取。有機(jī)層用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)。將殘?jiān)心ゲ⒂眉状枷礈斓玫?-(4-氟苯基)-4-(甲磺?；?哌嗪(39.35g)的白色結(jié)晶。1H NMR(CDCl3)7.00(m，2H)，6.90(m，2H)，3.40(m，4H)，3.20(m，4H)，2.83(s，3H).
用作起始物的芳基/雜芳基哌嗪和哌啶可通過(guò)商業(yè)渠道獲得或者描述于科學(xué)文獻(xiàn)中。1-(6-氯嘧啶-4-基)-4-甲磺?；哙簩?，6-二氯嘧啶(39.4g)、1-甲磺酰基哌嗪鹽酸鹽(55.7g)和三乙胺(116ml)在乙醇(500ml)中的混合物在回流溫度下攪拌4小時(shí)。然后將該混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集已分離的固體，結(jié)晶漿液用乙醇(2×80ml，160ml)洗滌，然后用乙醚(150ml)洗滌，并干燥得到1-(6-氯嘧啶-4-基)-4-甲磺?；哙旱娜榘咨腆w(71.9g)。mp 200-202℃。NMR(d6-DMSO)2.88(s，3H)，3.18(m，4H)，3.80(m，4H)，7.04(s，1H)，8.38(m，1H)；m/z 277.3(M+1).
用類(lèi)似的方法，將1-甲磺?；哙蝴}酸鹽、CAS(161357-89-7)與適宜的氯代吡啶反應(yīng)得到下列化合物
2-(4-哌啶氧基)-5-氯吡啶i)、將NaH(2.88g，66mmol，55％的礦物油分散體在無(wú)水DME(200ml)和氬氣環(huán)境下攪拌。用30分鐘的時(shí)間將溶解在無(wú)水DME(200ml)中的2，5-二氯吡啶(8.87g，60mmol)和4-羥基哌啶(6.67g，66mmol)滴加到NaH的懸浮液中。加完后，將該反應(yīng)加熱至82℃48小時(shí)，保持在氬氣環(huán)境下。在除去大部分THF前，反應(yīng)緩慢地用水淬滅。用DCM(×3)提取水相。有機(jī)層用Na2SO4干燥并真空蒸發(fā)，得到2-(4-哌啶氧基)-5-氯吡啶的黃色油狀物(12.7g，定量)。1H NMR(DMSO)8.17(d，1H)，7.76(dd，1H)，6.81(d，1H)，4.96(m，1H)，2.93(m，2H)，2.53(m，2H)，1.91(m，2H)，1.46(m，2H)；MS(ES+)213.3(MH+)，225.3(MNa+).
通過(guò)類(lèi)似的方法制備2-(4-哌啶氧基)-5-溴吡啶。MH+ 257.3。實(shí)施例4-拆分N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺
向溶解在THF(76ml)中的氨基甲酸酯1(3.8g，5.66mmol)中加入甲醇(76ml)，然后加入水(38ml)，并向該溶液中加入氫氧化鋰一水合物(2.37h，56.6mmol)。在室溫下攪拌2小時(shí)后，減壓除去溶劑并將殘?jiān)芙庠谒?250ml)中，用乙酸乙酯(200ml)和乙醚(2×250ml)洗滌。加入飽和氯化銨水溶液直至水層大約為pH8并用二氯甲烷(3×250ml)提取。將合并的二氯甲烷提取液干燥(MgSO4)并蒸發(fā)得到成為的白色粉末(2.2g，83％)。用Chiralpak AS柱進(jìn)行的手性HPLC顯示所分離的產(chǎn)物為96％ee(確信具有S立體化學(xué))。Mpt(從EtOH獲得)124.5-126.5℃；[a]D25＝-17.2(MeOH)；NMR CDCl3d 9.9(br s，1H)*；8.7(m，2H)；8.5(s，1H)*；8.1(brs，1H)；8.0(s，1H)*；7.5(dd，1H)；7.2(m，1H)；6.6(d，1H)；4.9(m，1H)*；4.2(m，1H)*；3.7-3.5(m，4H)；3.5(m，1H)*；3.4-3.2(m，4H)；3.3(m，1H)*；3.1-2.9(m，3H)；2.0-1.6(m，4H).MS for C19H25ClN6O4S(M+H)計(jì)算值469，實(shí)測(cè)值469。
*旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體標(biāo)志步驟A 向溶解在二氯甲烷(300ml)中并冷卻至0℃的反異羥肟酸酯2(18.76g，40mmol)中加入三乙胺(10.4ml，75mmol)，然后加入(4S)-4-芐基-2-噁唑烷酮-3-羰基氯(10.55g，44mmol)[CAS號(hào)139149-49-8]。在-3℃下攪拌3小時(shí)后，將該混合物用水(250ml)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)得到米色泡沫物(27.1g)。用制備HPLC分離非對(duì)映異構(gòu)體，用乙酸乙酯/EtOH(5％)洗脫。分離得到極性較大的非對(duì)映異構(gòu)體，收率為35％。C30H34ClN7O7S的MS(M+H)計(jì)算值672，實(shí)測(cè)值672。
用實(shí)施例2的方法制備化合物2(M+H 469)，mpt 131-134℃；NMR(DMSO)9.8(1H，br)，8.7(2H，m)，8.3 and 7.9(1H，s)，8.1(2H，s)，7.6(1H，m)，6.9(1H，m)，4.1(1H，br m)，3.6(4H，m)，3.2(6H，m)，2.8(2H，m)，1.8(4H，m)實(shí)施例5用類(lèi)似于實(shí)施例4的方法制備下列化合物N-[(1S)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺 NMR CDCl3d 11.9(br s，1H)*；8.5(s，1H)*；8.5-8.4(m，1H)；8.2(m，1H)；8.1(s，1H)*；7.8-7.7(m，1H)；7.6(m，1H)；7.3-7.2(m，2H)；6.6(m，1H)；5.0-4.9(m，1H)*；4.3-4.2(m，1H)*；3.7-3.6(m，4H)；3.6(m，1H)*；3.4-3.3(m，4H)；3.3(m，1H)*；3.1(dd，1H)*，2.9(m，1H)*，2.9-2.8(m，2H)；2.1-1.6(m，4H).MS for C20H26BrN5O4S(M+H)計(jì)算值514，實(shí)測(cè)值514.
*旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體標(biāo)志[a]D25＝-14(c＝2.3，MeOH)用實(shí)施例2的方法制備外消旋起始物。M+H＝512/514。
N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺 1H NMR(DMSO，373K)9.44(br s，1H)，8.70(s，2H)，8.10(d，1H，J＝2.6Hz)，8.05(brs，1H)，7.57(dd，1H，J＝9.1，2.6Hz)，6.86(d，1H，J＝9.1Hz)，4.40(br s，1H)，3.59(dd，4H，J＝5.3，5.0Hz)，3.47(dd，1H，J＝14.6，7.4Hz)，3.28(dd，4H，J＝5.3，5.0Hz)，3.24(dd，1H，J＝14.6，4.3Hz)，2.93(m，2H)，2.16(m，2H).MS(ESI)473(MH+)ad＝-11.03(MeOH，c＝1.242).
在實(shí)施例2中制備外消旋起始物。
N-[(1S)-1-({[4-(4-氟苯基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺 M+H 452.44；NMR CDCl3d9.9(br s，1H)*；8.7(m，2H)；8.5(s，1H)*；8.05(s，1H)*；7.2(m，1H)；7.0-6.9(m，4H)；4.9(m，1H)*；4.2(m，1H)*；3.5-3.4(m，4H)；3.5(m，1H)*；3.2-3.1(m，4H)；3.3(m，1H)*；3.1-2.9(m，3H)；2.0-1.6(m，4H).
*旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體標(biāo)志用實(shí)施例3的方法制備外消旋起始物。
NMR(DMSO)10.0(1H，br s)，8.6(2H，m)，8.2(1H，d)，7.2(1H，m)，6.9(4H，m)，4.9 and 4,2(1H，br)，3.4(6H，m)，3.0(6H，m)，1.9(4H，m).實(shí)施例6-色譜分離N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺和N-[(1R)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺 通過(guò)在充滿(mǎn)Chiralpak AD No.AD00CJ-HK002的柱子上色譜分離并用乙醇洗脫，將所制備的外消旋形式的N-[1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺分離成單一的對(duì)映異構(gòu)體形式。生物活性存在于第二個(gè)從柱子上洗脫下來(lái)的化合物-經(jīng)確定具有S立體化學(xué)。
第一個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體MH+455。
第二個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體MH+455。
用實(shí)施例2的方法制備外消旋起始物。MH+＝455.NMR(DMSO)9.9，9.6(1H br s)，8.6(2H，m)，8.3 and 7.9(1H，s)，8.1(1H，dd)，7.3(1H，m)，6.9(1H，d)，4.7 and 4.2(1H，broad m)，3.6(4H，m)，3.4-3.2(6H，m)，2.8(2H，m)，2.1(2H，m).實(shí)施例7-色譜分離的其他實(shí)施例用實(shí)施例6的條件分離下列化合物N-[(1S)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺和N-[(1R)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺 第一個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體M+H 489.5。
第二個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體M+H 489.5。
在實(shí)施例3中制備外消旋起始物。
N-[(1S)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺和N-[(1R)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺 第一個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體M+H 513/515。
第二個(gè)洗脫下來(lái)的對(duì)映異構(gòu)體M+H 513/515。
用實(shí)施例2所描述的方法制備外消旋起始物M+H 513/515。實(shí)施例8制備下列化合物 B XR1 mpt M+H用下列實(shí)施例中的方法制備5-Cl-2- C2-嘧啶基 484 4(吡啶基) CH2CH2CH2氧基 (S對(duì)映異構(gòu)體)5-CF3-2-N2-嘧啶基141-142 503 4吡啶基 CH2CH2CH2(S對(duì)映異構(gòu)體)4-F-苯基N2-(5-F-嘧啶 456.24 6**基)CH2CH2(S對(duì)映異構(gòu)體)4-F-苯基 N2-(5-F-嘧啶456.2 2基)CH2CH24-Br-Ph N2-哌嗪基 5121CH(CH3)CH2混合非對(duì)映異構(gòu)體3∶1(A∶B)4-Cl-Ph C 2-哌嗪基 4671CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A4-Cl-Ph C 2-哌嗪基 4671CH(CH3)CH2混合非對(duì)映異構(gòu)體1∶2(A∶B)4-Br-Ph C 2-哌嗪基 5111CH(CH3)CH2混合非對(duì)映異構(gòu)體3∶1(A∶B)5-Cl-2-N 5-F-2-嘧啶基 4871吡啶基CH(CH3)CH2混合非對(duì)映異構(gòu)體1∶2(A∶B)4-Cl-PhN 5-F-2-嘧啶基157-9 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A4-Cl-PhN 5-F-2-嘧啶基164-7 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體B4-Br-PhN 5-F-2-嘧啶基167-9 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A4-Br-PhN 5-F-2-嘧啶基 183-5 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體B4-Cl-PhC 5-F-2-嘧啶基 195-8 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A4-Cl-PhC 5-F-2-嘧啶基 155-8 1CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體B3，4-di- N 5-F-2-嘧啶基 172-3 1Cl-Ph CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A3，4-di- N 5-F-2-嘧啶基 172-3 1Cl-Ph CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體B5-CN-2-N 5-F-2-嘧啶基 478 1吡啶基CH(CH3)CH2非對(duì)映異構(gòu)體A4-F-Ph N (S)5-F-2-嘧啶基 470 7CH(CH3)CH2(S對(duì)映異構(gòu)體)4-F-Ph N (R，S)5-哌嗪基 452 4CH(CH3)CH2(S對(duì)映異構(gòu)體)在上表中**代表按照實(shí)施例6中的方法，使用柱子Chiralpak AD(250mm×4.6mm)No.AdooCE-JJ122和洗脫劑MeOH/MeCN 15/85制備的化合物(S對(duì)映異構(gòu)體)；非對(duì)映異構(gòu)體A和B是指用3-5％乙醇/二氯甲烷洗脫，從硅膠的洗脫順序(非對(duì)映異構(gòu)體A是第一個(gè)洗脫下來(lái)的餾分，非對(duì)映異構(gòu)體B是第二個(gè))。實(shí)施例9我們提供實(shí)施例8中所列出的下列化合物的數(shù)據(jù)N-[(1S)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]]-N-羥基甲酰胺 NMR CDCl3δ10.1(br s，1H)*；8.7(m，2H)；8.5(s，1H)*；8.4(br s，1H)；8.1(s，1H)*；7.7(dd，1H)；7.2(m，1H)；6.7(d，1H)；4.9(m，1H)*；4.2(m，1H)*；3.9-3.7(m，4H)；3.6(m，1H)*；3.4-3.2(m，4H)；3.3(m，1H)*；3.1-2.9(m，3H)；2.0-1.6(m，4H).*旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體標(biāo)志.N-({[4-氟苯基哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-[(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺 1H NMR(DMSO，373K)9.46(br s，1H)，8.73(s，2H)，7.08-6.96(m，4H)，4.42(br s，1H)，3.50(dd，J＝14.8，7.5Hz，1H)，3.35(m，4H)，3.28(dd，J＝14.8，4.4Hz，1H)，3.18(m，4H)，2.97(m，2H)，2.21(m，2H).N-[(1R或1S)-({[4-氯哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺(單一的非對(duì)映異構(gòu)體A) 1H NMR(CDCl3)(大約等比例的2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.72(s，0.5H)，8.57(d，2H)，8.25(s，0.5H)，7.89(s，0.5H)，7.23(dd，2H)，6.83(dd，2H)，4.94(sext，0.5H)，4.30(m，0.5H)，3.57(dd，0.5H)，3.44(m，2H)，3.37(m，2.5H)，3.16(m，5.5H)，3.02(dd，0.5H)，2.52(ddd，0.5H)，2.35(ddd，0.5H)，2.02(dt，0.5H)，1.89(ddd，0.5H)，1.40(dd，3H)；N-[(1R或1S)-({[4-溴苯基哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺(單一的非對(duì)映異構(gòu)體A) 1H NMR(CDCl3)(大約等比例的2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.72(s，0.5H)，8.57(d，2H)，8.25(s，0.5H)，7.89(s，0.5H)，7.38(dd，2H)，6.80(dd，2H)，4.94(sext，0.5H)，4.30(m，0.5H)，3.57(dd，0.5H)，3.44(m，2H)，3.37(m，2.5H)，3.16(m，5.5H)，3.02(dd，0.5H)，2.52(ddd，0.5H)，2.35(ddd，0.5H)，2.02(dt，0.5H)，1.89(dt，0.5H)，1.40(dd，3H)；N-[(1R或1S)-({[4-氯苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺(單一的非對(duì)映異構(gòu)體A) 1H NMR(CDCl3)(大約等比例的2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.69(s，0.5H)，8.57(d，2H)，8.25(s，0.5H)，7.89(s，0.5H)，7.27(obscured)，7.13(dd，2H)，4.91(sext，0.5H)，4.30(m，0.5H)，3.87(m，2H)，3.57(dd，0.5H)，3.35(dd，0.5H)，3.18(m，1.5H)，3.00(dd，0.5H)，2.85(m，2H)，2.55(m，1.5H)，2.35(ddd，0.5H)，2.06(dt，0.5H)，1.88(m，2.5H)，1.7(obscured)，1.40(dd，3H)；N-[(1R或1S)-({[3，4-二氯苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺(單一的非對(duì)映異構(gòu)體A) 1H NMR(CDCl3)(大約等比例的2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.62(s，0.5H)，8.55(d，2H)，8.22(s，0.5H)，7.86(s，0.5H)，7.28(m，1H)，6.95(m，1H)，6.73(m，1H)，4.92(sext，0.5H)，4.30(m，0.5H)，3.57(dd，0.5H)，3.44(m，2H)，3.37(m，2.5H)，3.16(m，5.5H)，3.02(dd，0.5H)，2.52(ddd，0.5H)，2.37(ddd，0.5H)，2.04(dt，0.5H)，1.89(dt，0.5H)，1.40(dd，3H)；N-[(1R或1S)-({[4-(5-氰基吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺(單一的非對(duì)映異構(gòu)體A) 1H NMR(CDCl3)(大約等比例的2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.72(s，0.5H)，8.55(s，2H)，8.41(s，1H)，8.22(s，0.5H)，7.86(s，0.5H)，7.65(m，1H)，6.61(dd，1H)，4.92(m，0.5H)，4.30(m，0.5H)，3.78(m，4H)，3.57(dd，0.5H)，3.38(m，2H)，3.30(m，2.5H)，3.16(m，1.5H)，3.02(dd，0.5H)，2.52(m，0.5H)，2.37(m，0.5H)，2.04(dt，0.5H)，1.84(dt，0.5H)，1.40(dd，3H)；N-[(1S)-({[4-(4-氟苯基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺 1H NMR(DMSO-d6)9.9，9.53(2s，1H)，8.78(s，2H)，7.98(d，1H)，7.12-6.91(m，4H)，4.8，4.17(2s，1H)，3.13(m，4H)，3.0(m，1H)，1.86(m，1H)，1.22(m，3H).實(shí)施例101-({[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]磺?；鶀甲基)-3-(5-氯吡啶-3-基)丙基(羥基)甲酰胺 在0℃下，向甲酸(400μl，10.8mmol)中加入乙酸酐(102μl，1.1mmol)并將該混合物在室溫下攪拌15分鐘。然后，將該混合物再冷卻至0℃并通過(guò)注射器滴加1-(4-氯苯基)-4-{[4-(5-氯吡啶-3-基)-2-(羥基氨基)丁基]磺?；鶀哌嗪(100mg，0.22mmol)的THF溶液。在室溫下攪拌1.5小時(shí)后，真空除去揮發(fā)物并將殘?jiān)c甲苯(2ml)共沸。然后，將溶劑蒸發(fā)并將殘?jiān)芙庠诩状?5ml)中并在40℃攪拌1小時(shí)。室溫冷卻后，蒸發(fā)該溶劑，該殘余物溶解在甲醇(0.5ml)中。加入乙醚(5ml)并將混濁的懸浮液在室溫下攪拌1小時(shí)。過(guò)濾所沉淀的固體，用乙醚洗滌并真空干燥得到標(biāo)題化合物的灰白色固體(48mg，0.099mmol)。
1H NMR(DMSO，373K)9.55(br s，1H)，8.43(d，1H)，8.41(d，1H)，8.17(br s，1H)，7.76(dd，1H)，7.25(m，2H)，6.96(m，2H)，4.35(br s，1H)，3.49(dd，1H)，3.34(m，4H)，3.25(m，5H)，2.67(m，2H)，2.02(m，2H).
MS(ESI)487.06，489.04，490.08(MH+2xCl)如下制備起始物(i)、3-(5-氯吡啶-3-基)丙酸乙酯
在0℃氬氣環(huán)境下，向攪拌下的(2E)-3-(5-氯吡啶-3-基)丙-2-烯酸乙酯(338mg，1.6mmol)[CAS號(hào)163083-45-2]的無(wú)水乙醇(10ml)溶液中加入固體硼氫化鈉(67mg，1.75mmol)。將反應(yīng)混合物放置至室溫并攪拌4小時(shí)，然后再加入硼氫化鈉(67mg，1.75mmol)。再攪拌18小時(shí)后，加入飽和氯化銨水溶液(5ml)。真空除去揮發(fā)物，并將殘?jiān)谒?10ml)和乙酸乙酯(3×10ml)之間分配。分離兩層并將水相用乙酸乙酯(3×10ml)提取。然后，將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。閃式色譜層析(硅膠，20％-100％乙酸乙酯/己烷)得到標(biāo)題化合物(132mg，0.62mmol)和飽和醇(70mg)。
1H NMR(CDCl3)8.43(m，1H)，8.34(m，1H)，7.55(m，1H)，4.16(q，2H)，2.96(dd，2H)，2.63(dd，2H).
(ii)、1-{[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]磺?；鶀-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-2-酮 在-10℃氬氣環(huán)境下，用4分鐘的時(shí)間向攪拌下的1-(4-氯苯基)-4-(甲基磺酰基)哌嗪(235mg，0.85mmol)的無(wú)水THF(7.5ml)溶液中滴加LiHMDS(1.71ml，1.0M的THF溶液，1.71mmol)。將溶液在該溫度下攪拌40分鐘。然后用5分鐘的時(shí)間通過(guò)套管滴加3-(5-氯吡啶-3-基)丙酸乙酯(201mg，0.94mmol)的THF(1ml)溶液。在用飽和氯化銨水溶液(5ml)淬滅前，將該反應(yīng)在-10℃下再攪拌30分鐘。真空除去揮發(fā)物，殘?jiān)肅H2Cl2(3×5ml)提取。合并的有機(jī)提取液用水(10ml)和鹽水(10ml)洗滌，然后干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。閃式色譜層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)得到標(biāo)題化合物(228mg，0.52mmol)并回收到3-(5-氯吡啶-3-基)丙酸乙酯(74mg，0.35mmol)。
1H NMR(CDCl3)8.46(m，1H)，8.38(m，1H)，7.58(m，1H)，7.21(m，2H)，6.83(m，2H)，3.96(s，2H)，3.37(m，4H)，3.17(m，6H)，2.95(dd，2H)，MS(ESI)442.07，444.06，445.1(MH+2xCl).
(iii)、1-{[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]磺?；鶀-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-2-醇 在室溫下，向攪拌下的1-{[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]磺?；鶀-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-2-酮(228mg，0.51mmol)在CH2Cl2/MeOH(1∶1，5ml)混合溶劑系統(tǒng)的溶液中一次加入固體硼氫化鈉。在用飽和鹽酸水溶液(1M，2ml)淬滅前，將該反應(yīng)再攪拌40分鐘。然后分離兩層并用CH2Cl2(3×5ml)提取水相。將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。粗品通過(guò)硅膠塞子過(guò)濾，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物(111mg，0.25mmol)。
1H NMR(CDCl3)8.47(m，1H)，8.40(m，1H)，7.59(m，1H)，7.21(m，2H)，6.86(m，2H)，4.21(m，1H)，3.45(m，4H)，3.24(m，4H)，3.11(m，2H)，2.88(m，2H)，1.89(m，2H).
(iv)、1-(4-氯苯基)-4-{[(1E)-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-1-烯基]磺?；鶀-哌嗪 在室溫氬氣環(huán)境下，向攪拌下的1-{[4-(4-氯苯基)-哌嗪-1-基]磺酰基}-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-2-醇(111mg，0.25mmol)的無(wú)水CH2Cl2(2.5ml)溶液中加入三甲胺鹽酸鹽(2mg，0.02mmol)，三乙胺(52μl，0.25mmol)和甲磺酰氯(21μl，0.25mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌30分鐘，然后通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)淬滅。分離兩層，水相用乙酸乙酯(3×6ml)提取。然后將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。殘?jiān)芙庠贑H2Cl2(2.5ml)中并用三乙胺(100μl，1.36mmol)處理。30分鐘后，反應(yīng)通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)淬滅。分離兩層，水相用乙酸乙酯(3×6ml)提取。然后將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。粗品在下一步中使用。MS(ESI)446.06，428.06，430.07(MH+2xCl)(v)、1-(4-氯苯基)-4-{[4-(5-氯吡啶-3-基)-2-(羥基氨基)丁基]磺酰基}-哌嗪 在室溫下，向攪拌下的1-(4-氯苯基)-4-{[(1E)-4-(5-氯吡啶-3-基)丁-1-烯基]磺?；鶀哌嗪(上一步的粗品)的THF(10ml)溶液中加入羥胺(2ml，50％水溶液)。將反應(yīng)在室溫下攪拌3小時(shí)，然后通過(guò)加入飽和氯化銨水溶液(5ml)淬滅。分離兩層，水相用乙酸乙酯(3×10ml)提取。然后將合并的有機(jī)提取液干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮。殘?jiān)ㄟ^(guò)閃式色譜層析(二氧化硅，100％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(100mg，0.22mmol)。
權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯 其中B為在3-或4-位由鹵素或三氟甲基一取代的，或在3-或4-位由鹵素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B為在4-、5-或6-位由鹵素、三氟甲基、氰基或C1-4烷基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B為在6-位由鹵素或C1-4烷基任選取代的4-嘧啶基；X為碳或氮原子；R1為三甲基-1-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基；或者R1為在3-或4-位由鹵素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1為苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1為2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1為3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1為2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1為由鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、由鹵素取代的2-哌嗪基或由鹵素取代的2-哌嗪基C2-4烷基之一任選一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中B為在3-或4-位由鹵素或三氟甲基一取代的，或在3-或4-位由鹵素(可以相同或不同)二取代的苯基；或者B為在5-或6-位由鹵素、三氟甲基或氰基一取代的2-吡啶基或2-吡啶氧基；或者B為在6-位由鹵素或C1-4烷基任選取代的4-嘧啶基；X為碳或氮原子；R1為三甲基-1-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基或三甲基-3-乙內(nèi)酰脲C2-4烷基；或者R1為在3-或4-位由鹵素、三氟甲基、硫或C1-3烷基或C1-3烷氧基一取代的苯基或C2-4烷基苯基；或者R1為苯基-SO2NHC2-4烷基；或者R1為2-吡啶基或2-吡啶基C2-4烷基；或者R1為3-吡啶基或3-吡啶基C2-4烷基；或者R1為2-嘧啶-SCH2CH2；或者R1為由鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、2-哌嗪基或2-哌嗪基C2-4烷基之一任選一取代的2-或4-嘧啶基C2-4烷基。
3.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中B選自4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-三氟苯基、5-氯-2-吡啶基、5-溴-2-吡啶基、5-氟-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、5-氰基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基。
4.權(quán)利要求3的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中B為4-氟苯基、5-氯-2-吡啶基或5-三氟甲基-2-吡啶基。
5.上述任一權(quán)利要求的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中X為氮原子。
6.上述任一權(quán)利要求的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中R1選自3-氯苯基、4-氯苯基、3-吡啶基、2-吡啶基丙基、2-或4-嘧啶基乙基(未取代的或由氟一取代的)、2-或4-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)。
7.權(quán)利要求6的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中R1選自2-嘧啶基丙基、2-(2-嘧啶基)丙基(未取代的或由氟一取代的)或5-氟-2-嘧啶基乙基。
8.權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中以式I化合物作為本文的范例。
9.權(quán)利要求8的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中所述化合物選自N-[1-([4-(4-溴苯基)哌嗪基]磺?；谆?-4-嘧啶-2-基丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[1-([4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基甲基)-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(4-氟苯基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R)-1-({[4-(5-氯吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-(嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R)-1-({[4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-1-({[4-(5-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪基]磺?；鶀甲基)-4-(嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-({[4-三氟苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(5-氟嘧啶-2-基)丙基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R或1S)-({[4-氯苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R或1S)-({[4-溴苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R或1S)-({[4-溴苯基哌啶基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R或1S)-({[3，4-二氯苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1R或1S)-({[4-(5-氰基吡啶-2-基)哌嗪基]磺酰基}甲基)-3-[(3R或3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，N-[(1S)-({[4-(4-氟苯基哌嗪基]磺?；鶀甲基)-3-[(3S)-(5-氟嘧啶-2-基)丁基]-N-羥基甲酰胺，1-({[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-基]磺?；鶀甲基)-3-(5-氯嘧啶-3-基)丙基(羥基)甲酰胺。
10.上述任一權(quán)利要求的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中式I化合物是活性最大的對(duì)映異構(gòu)體。
11.上述任一權(quán)利要求的化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，其中式I化合物是S對(duì)映異構(gòu)體或S，S對(duì)映異構(gòu)體。
12.一種藥物組合物，它包含權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯和可藥用載體。
13.在人或動(dòng)物體的治療方法中使用的權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯。
14.用作治療劑的權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯。
15.治療金屬蛋白酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)的方法，它包括給予溫血?jiǎng)游镏委熡行Я渴絀化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯。
16.權(quán)利要求5的治療金屬蛋白酶介導(dǎo)的疾病狀態(tài)的方法，它包括治療由一種或多種下列酶MMP13，聚集蛋白聚糖酶，MMP9，MMP12介導(dǎo)的疾病狀態(tài)。
17.式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解前體在制備治療由一種或多種金屬蛋白酶介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
18.式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解前體在制備治療關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
19.式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解前體在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的應(yīng)用。
20.式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解前體在制備治療慢性阻塞性肺病的藥物中的應(yīng)用。
21.制備式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯的方法，它包括將式II化合物與式R1CHO化合物反應(yīng)得到式III鏈烯烴，將式III鏈烯烴轉(zhuǎn)化為式IV化合物，然后將式IV化合物轉(zhuǎn)化為式I化合物，并可有可無(wú)地形成式I化合物的可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，如下所述
22.制備式I化合物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯的方法，它包括它包括將式II化合物與適宜的式R1COOR化合物反應(yīng)得到式VIII化合物，然后將式VIII化合物轉(zhuǎn)化為式IX化合物，將式IX化合物轉(zhuǎn)化為式III鏈烯烴，將式III鏈烯烴轉(zhuǎn)化為式IV化合物，然后將式IV化合物轉(zhuǎn)化為式I化合物，并可有可無(wú)地形成式I化合物的可藥用鹽或其體內(nèi)可水解酯，如下所述
全文摘要
本發(fā)明涉及用作金屬蛋白酶，特別是用作MMP13抑制劑的式(I)化合物。
文檔編號(hào)C07D233/74GK1418197SQ0180539
公開(kāi)日2003年5月14日 申請(qǐng)日期2001年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月21日
發(fā)明者B·C·巴拉姆, R·I·多維爾, M·R·V·芬利, N·J·紐科姆, H·塔克, D·瓦特森 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司