一種富勒烯橄欖油組合物及其在治療帕金森病中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種富勒締橄攬油組合物及其在治療帕金森病中的應用，屬于生物醫(yī) 藥領域。
【背景技術】
[0002] 帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一種常見的W黑質(zhì)紋狀體通路的退變?yōu)?主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，多發(fā)于老年人當中，平均發(fā)病年齡為60歲左右。ro主要 的病理改變是中腦黑質(zhì)多己胺能神經(jīng)元的變性死亡，由此導致紋狀體多己胺含量顯著減少 而致病。其臨床表現(xiàn)主要有靜止性震顫、運動遲緩、肌強直和姿勢步態(tài)障礙等。
[0003] 據(jù)調(diào)查，帕金森病在65歲W上的發(fā)病率達1-2%，隨著人口老齡化的發(fā)展，帕金森 病的研究也漸漸得到人們的關注。對于PD的發(fā)病原因目前尚不清楚，年齡老化、遺傳因素、 環(huán)境因素、氧化應激等都有可能與PD有關。目前，大多數(shù)學者較為認同的學說是線粒體功能 障礙和氧化應激，線粒體I復合物的抑制導致大量的自由基生成，氧化應激產(chǎn)生大量的自由 基，又相應的降低線粒體I復合物的活性，從而加重對神經(jīng)元的毒害。但是，現(xiàn)階段對于PD還 沒有很好的治療方法，藥物治療仍是主要的治療方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種富勒締橄攬油組合物及其在治療帕金森病中的應用，本 發(fā)明將富勒締單分散于橄攬油中，利用富勒締的清除自由基功效和單分散性富勒締通過血 腦屏障來治療帕金森病，具有較好的效果，并將在治療此類自由基疾病中有更大的應用前 景。
[0005] 本發(fā)明首先提供一種富勒締橄攬油組合物，為富勒締和/或金屬富勒締的橄攬油 分散液。
[0006] 所述的富勒締橄攬油組合物中，所述富勒締和/或所述金屬富勒締的濃度可為 0.0 lmg/mL~0.8mg/mL，具體可為0.4~0.8mg/mL、0.4mg/mL 或0.8mg/mL。
[0007] 所述的富勒締橄攬油組合物中，所述富勒締或所述金屬富勒締的粒徑可為0.7nm ~lnm〇
[000引所述的富勒締橄攬油組合物中，所述富勒締可表示為C2n，30含η含60,具體可為C60 或〔70;
[0009] 所述金屬富勒締可表示為臟C2n，30如^60,所述Μ選自Sc、Y和銅系金屬元素化a- Lu)中的任意一種，具體可為Gd@Cs2。
[0010] 本發(fā)明同時提供了所述富勒締橄攬油組合物的制備方法，包括如下步驟：
[0011] 將所述富勒締和/或所述金屬富勒締分散于所述橄攬油中，得到混合液;所述混合 液經(jīng)球磨或超聲后，依次經(jīng)離屯、和過濾，收集濾液即得到所述富勒締橄攬油組合物。
[0012] 上述的制備方法中，經(jīng)球磨或超聲后，將所述混合液置于陰涼干燥避光保存，靜置 一定的時間，再進行所述離屯、操作。
[0013] 經(jīng)本發(fā)明證明，富勒締、金屬富勒締能夠用于預防和/或治療帕金森病。
[0014] 富勒締和/或金屬富勒締 W及所述富勒締橄攬油組合物在預防和/或治療帕金森 病中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0015] 上述預防和/或治療帕金森病的應用表現(xiàn)為清除自由基，其中，所述帕金森病由1- 甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氨化晚引起。
[0016] 富勒締和/或金屬富勒締 W及所述富勒締橄攬油組合物在制備清除自由基的產(chǎn)品 中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0017] 本發(fā)明富勒締橄攬油組合物中，其中的所述橄攬油是一種健康的植物油，通過球 磨或超聲的方式，能夠使富勒締和/或金屬富勒締 W單分散形式存在;單分散富勒締和/或 金屬富勒締可W通過血腦屏障，進入腦組織。
[0018] 在本發(fā)明提供的一個具體的實施例中，C60-橄攬油組合物中，C60的濃度為0.8mg/ mL，實際使用富勒締橄攬油在生物體內(nèi)建議劑量為0.1~lOmg/kg，最佳劑量為4mg/kg。另一 個具體的實施例中，Gd@C82-橄攬油組合物中，Gd@C82的濃度為0.8mg/mL，其在生物體內(nèi)的劑 量為10~1000yg/kg。所述生物體為哺乳動物，如:人。
[0019] 本發(fā)明富勒締橄攬油組合物可W采用口服或腹腔給藥的方式。服用療程為15天， 根據(jù)病情，可服用短期或長期服用。
[0020] 本發(fā)明富勒締橄攬油組合物中的富勒締和/或金屬富勒締具有多個不飽和鍵，極 易與自由基反應，具有很好的清除自由基的能力，因此對于治療氧化應激引起的帕金森病 具有好的功效。
[0021] 本發(fā)明通過體外的ESR測試證明富勒締具有強的清除自由基的能力，然后通過細 胞水平實驗證明其對細胞是沒有損傷反而有保護的，并且能夠修復自由基引起的細胞損 傷，最后通過構(gòu)建帕金森小鼠模型，利用本發(fā)明富勒締橄攬油組合物進行治療，發(fā)現(xiàn)確實可 W改善小鼠的運動能力，證明本發(fā)明富勒締橄攬油組合物具有治療帕金森病的功效。
[0022] 本發(fā)明具有W下優(yōu)點：
[002；3] (1)生物相容性好，安全無毒副作用。
[0024] 富勒締進入體內(nèi)后可W快速代謝，不會對臟器產(chǎn)生損害，反而可W對由于其他自 由基產(chǎn)生損傷的細胞進行修護，橄攬油本身就是保健品，安全，無毒副作用，具有好的生物 相容性。
[0025] (2)效果顯著。
[0026] 現(xiàn)階段治療帕金森病的主要方法還是藥物治療，本發(fā)明經(jīng)過實驗證明，其治療效 果顯著，提高患者生活質(zhì)量。
【附圖說明】
[0027] 圖1為Gd@C82的電子自旋核磁共振巧SR)圖，其中，虛線為空白，實線為Gd@C82。
[00%]圖2為C60的電子自旋核磁共振化SR)圖，其中，虛線為空白，實線為C60。
[0029] 圖3為Gd@C82對化la細胞的藥物毒性實驗結(jié)果。
[0030] 圖4為C60對化la細胞的藥物毒性實驗結(jié)果。
[0031] 圖5為Gd@Cs2對雙氧水誘導自由基細胞損傷的保護結(jié)果示意圖。
[0032] 圖6為C60對雙氧水誘導自由基細胞損傷的保護結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0033] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0034] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0035] 實施例1、富勒締橄攬油組合物的制備
[0036] (1 )Gd@C8廣橄攬油組合物的制備
[0037] 量取20mL橄攬油，稱取20mgGd@C82(粒徑為0.7~Inm)，混合攬拌均勻，然后將混合 液置于球磨機中球磨，1化，球磨結(jié)束后將混合液取出，陰涼干燥避光保存，靜置化離屯、，使 用220nm濾膜過濾，得到富勒締-橄攬油溶液，即Gd@Cs2-橄攬油組合物，其中Gd@Cs2的含量為 0.4mg/mL
[003引（2)C60-橄攬油組合物
[0039] 量取20mL橄攬油，稱取20mgC6Q(粒徑為0.7~Inm)，混合攬拌均勻，然后將混合液置 于球磨機中球磨，1化，球磨結(jié)束后將混合液取出，陰涼干燥避光保存，靜置比后離屯、，220nm 濾膜過濾，得到富勒締-橄攬油溶液，即C60-橄攬油組合物，其中C60的含量為0.8mg/mL。
[0040] 實施例2、富勒締清除自由基能力檢測
[0041] 通過電子自旋共振波譜化SR)來檢測富勒締清除自由基的能力。
[0042] 測試中WDMP0為電子捕獲劑，徑基自由基通過化ton反應產(chǎn)生，室溫加入出化溶液 引發(fā)徑基自由基產(chǎn)生后3min，開始檢測，得到ESR數(shù)據(jù)，如圖1和圖2所示。
[00創(chuàng)圖1為Gd@C82的電子自旋核磁共振化SR)圖，其中，虛線為空白，實線為Gd@C82,與空