遠(yuǎn)程裝載略微水溶性藥物至脂質(zhì)體的制作方法
【專利說(shuō)明】遠(yuǎn)程裝載略微水溶性藥物至脂質(zhì)體
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C. § 119(e)要求2013年2月1日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?61/759, 914的優(yōu)先權(quán)，為了所有的目的通過(guò)引用W其整體并入本文。
[000引發(fā)明背景
[0004] 本發(fā)明設(shè)及藥學(xué)組合物、制備它們的方法和所得組合物在藥物治療中的用途的領(lǐng) 域。藥學(xué)組合物包括封裝在脂質(zhì)體膜泡的水性內(nèi)部?jī)?nèi)的活性治療劑。
[0005] 相關(guān)技術(shù)描述
[0006] 制藥工業(yè)，在其尋找改善的藥物時(shí)，已經(jīng)產(chǎn)生了許多有力的化合物，其略微可溶于 使得可能有生命的無(wú)處不在的溶劑水中。運(yùn)些新藥物的低水溶解度已經(jīng)使得其難W在包括 人的動(dòng)物中遞送它們。運(yùn)已經(jīng)需要可溶解略微水溶性藥物W確保能夠在身體中遞送它們的 藥物遞送系統(tǒng)。
[0007] 脂質(zhì)體是膜泡結(jié)構(gòu)，通常由捕獲水性核屯、的雙層膜的兩性分子比如憐脂組 成。各種類型的脂質(zhì)體的直徑和形態(tài)圖解在圖1中。藥物封裝在水性核屯、中或交錯(cuò)在 雙層膜中。當(dāng)在身體中稀釋時(shí)，膜中交錯(cuò)的藥物轉(zhuǎn)移離開脂質(zhì)體。重要地，封裝在水 性核屯、或在水性核屯、中W復(fù)合物保持的藥物明顯比雙層中的藥物保持更長(zhǎng)。充分闡 釋了藥物封裝在水性核屯、中的脂質(zhì)體用于藥物遞送的應(yīng)用化化ummond等，J.化arm. Sci., (2008)97(11):4696-4740,PMID10581328)〇
[0008] 可使用用于在脂質(zhì)體中封裝功能化合物，尤其藥物的各種裝載方法。例如，親水化 合物可通過(guò)水化功能化合物和形成膜泡的脂質(zhì)的混合物封裝在脂質(zhì)體中。該技術(shù)稱為被動(dòng) 裝載。隨著納米顆粒形成，功能化合物封裝在脂質(zhì)體中。可用的脂質(zhì)膜泡（脂質(zhì)體）產(chǎn)生 方法滿足了封裝水溶性藥物的大部分應(yīng)用（G.Gregoriadis，Ed.，LiposomeTechnology， (2006)LiposomePr巧arationandRelatedTechniques, 3rdEd.)。但是，在脂質(zhì)體的水 性內(nèi)部腔室中制造封裝略微水溶性的藥物（例如，水溶解度小于2mg/mL)的脂質(zhì)膜泡非常 困難GXZucker等JournalofControlledRelease(2009) 139:73-80,PMID19508880)。
[0009] 被動(dòng)裝載親脂和在較小程度上兩性分子功能化合物比親水功能化合物些許更有 效，因?yàn)樗鼈冊(cè)谥|(zhì)雙層和脂質(zhì)體內(nèi)（內(nèi)部）水性介質(zhì)中分開。但是，使用被動(dòng)裝載，最終 功能化合物與脂質(zhì)比例W及封裝效率通常是低的。脂質(zhì)體中藥物的濃度等于周圍流體的并 且不捕獲在內(nèi)部水性介質(zhì)的藥物在封裝之后被沖洗掉。而且裝載至雙層的藥物當(dāng)脂質(zhì)體注 入對(duì)象時(shí)，非常快速?gòu)闹|(zhì)體釋放。為了藥物在患者中的持續(xù)釋放，優(yōu)選地藥物被封裝在脂 質(zhì)體的內(nèi)部。
[0010] 某些親水或兩性分子化合物可使用跨膜抑-或離子-梯度裝載至實(shí)施的脂質(zhì)體 (D.Zucker等，JournalofControlledRelease(2009) 139:73-80)。該技術(shù)稱為主動(dòng)或遠(yuǎn) 程裝載。容易主動(dòng)裝載的化合物應(yīng)能夠從可橫跨脂質(zhì)體膜擴(kuò)散的不帶電形式改變?yōu)椴荒苓\(yùn) 樣的帶電形式。典型地，通過(guò)將其添加至制備的脂質(zhì)體懸液，W具有更低的內(nèi)側(cè)/更高的外 偵UpH-或離子-梯度，裝載功能化合物。經(jīng)主動(dòng)裝載，可實(shí)現(xiàn)高的功能化合物與脂質(zhì)質(zhì)量比 和高的裝載效率（多達(dá)100% )。例子是抗癌藥物多柔比星、柔紅霉素和長(zhǎng)春新堿的主動(dòng)裝 載化R.Cullis等，Biochimica et Bio地ysica Acta,(1997) 1331:187-211，和其中的參考 文獻(xiàn)）。
[0011] 僅僅認(rèn)為疏水藥物能夠通過(guò)膜插入經(jīng)一些被動(dòng)裝載/裝配機(jī)制裝載至脂質(zhì)體。 Wasan等在使用膠束將微溶性試劑轉(zhuǎn)移至脂質(zhì)體雙層的說(shuō)明扣S2009/0028931)中聲稱 "具有疏水性質(zhì)的試劑可插入脂質(zhì)雙層并且運(yùn)可通過(guò)將試劑添加至實(shí)施的脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)"。
[0012] 在藥物高于其溶解度界限并且為沉淀形式的條件下將微溶性藥物遠(yuǎn)程裝載至脂 質(zhì)體是出人意料的事件。D.Zucker等，Journal of Controlled Release (2009) 139:73-80 聲稱"疏水的分子可聚集，并且運(yùn)些聚集橫跨脂質(zhì)體膜具有低的通透性。因此，當(dāng)非極性/ 極性表面積比〉2. 31時(shí)（見(jiàn)Zucker等Journal of Controlled Release(2009) 139:73-80 的圖4)，藥物必須具有合理的溶解度，〉1.9mM，W便實(shí)現(xiàn)高裝載，因?yàn)閮H僅可溶性不帶電的 分子可進(jìn)入脂質(zhì)體。"化Zucker等，Journal of Controlled Release(2009) 139:73-80)。
[0013] 迄今為止，還未開發(fā)從沉淀用略微水溶性試劑主動(dòng)裝載脂質(zhì)體的水性核屯、的方 法。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1圖解了各種類型的脂質(zhì)體的直徑和形態(tài)。
[0015] 圖2.由包含硫酸鋼（淺陰影）或硫酸錠（深陰影）的服PC/化ol/Peg-DS陽(yáng)組成 的脂質(zhì)體制劑用卡非佐米W2的輸入藥物與脂質(zhì)比使用下述條件溫育。從未封裝的藥物純 化脂質(zhì)體并且顯示脂質(zhì)體中封裝的卡非佐米的量，表達(dá)為y g卡非佐米/y mol脂質(zhì)。
[0016]圖3是顯示捕獲試劑對(duì)卡非佐米的脂質(zhì)體裝載的作用的條形圖。
[0017] 圖4是條形圖，顯示藥物引入對(duì)卡非佐米的脂質(zhì)體裝載的作用的方法。
[0018]圖5是線圖，顯示由在600nm下的光散射降低表明的卡非佐米從沉淀裝載。
[0019] 圖6是卡非佐米的HPLC色譜圖，為從沉淀裝載至脂質(zhì)體之前（上），W及裝載至脂 質(zhì)體之后并且然后使用其中其在脂質(zhì)體外溶液中逆向回到沉淀的反向硫酸錠梯度從脂質(zhì) 體釋放（下）。
[0020] 圖7是顯示作為[DMS0]函數(shù)的脂質(zhì)體封裝效率的線圖。輸入藥物與脂質(zhì)比例是 200 y g/ y mol〇
[0021]圖8是顯示卡非佐米溶液的光散射作為DMSO濃度的函數(shù)的線圖?？ǚ亲裘椎臐?度是 0. 2mg/mL。
[0022] 圖9是顯示形成藥物沉淀和沉淀的脂質(zhì)體裝載之間延遲時(shí)間作用的條形圖。
[0023] 圖10是顯示硫酸錠捕獲試劑濃度對(duì)從沉淀裝載的卡非佐米脂質(zhì)體藥物載荷的作 用的線圖。
[0024] 圖11是顯示硫酸錠捕獲試劑濃度對(duì)從沉淀的卡非佐米脂質(zhì)體裝載效率作用的線 圖。
[00巧]圖12是使用=乙基硫酸錠梯度將不溶解的卡非佐米沉淀裝載至脂質(zhì)體的線圖。
[0026] 圖13是顯示通過(guò)遠(yuǎn)程裝載將不溶解的卡非佐米沉淀轉(zhuǎn)移至脂質(zhì)體的線圖。
[0027] 圖14是顯示當(dāng)與作為SBCD復(fù)合物（Abilify)的脂質(zhì)體混合或當(dāng)從原料DMS0溶 液直接稀釋至脂質(zhì)體產(chǎn)生藥物懸液時(shí)比較阿立贓挫的脂質(zhì)體裝載的條形圖。
[002引圖15是顯示藥物溶液（深色條）和脂質(zhì)體藥物混合物（灰色條）在600nm的吸 光度（散射）的條形圖。矩形指示其中當(dāng)與脂質(zhì)體溫育時(shí)測(cè)量到散射明顯下降的樣品，指 示藥物裝載。
[0029] 圖16是顯示DFX在乙酸巧脂質(zhì)體中裝載效率的條形圖。
[0030] 圖17是顯示包含乙酸巧作為捕獲試劑的脂質(zhì)體中DFX裝載容量的圖。
[0031] 圖18是顯示包含不同乙酸醋捕獲試劑的脂質(zhì)體中DFX裝載容量的圖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0032] 在使用脂質(zhì)體用于遞送功能化合物時(shí)，一般期望將脂質(zhì)體裝載至高濃度，產(chǎn)生高 的功能化合物與脂質(zhì)質(zhì)量比，因?yàn)檫\(yùn)減少每次治療待施用的脂質(zhì)體的量，W獲得需要的療 效，所有的都因?yàn)橹|(zhì)體中使用的數(shù)個(gè)脂質(zhì)本身具有劑量限制性的毒性。裝載百分?jǐn)?shù)也對(duì) 成本效率具有重要性，因?yàn)椴畹难b載導(dǎo)致活性化合物的大量損失。
[0033] 在示例性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了脂質(zhì)體，其包含封裝內(nèi)部水性介質(zhì)的脂質(zhì)體 脂質(zhì)膜。內(nèi)部水性介質(zhì)包含捕獲試劑和略微水溶性治療劑之間的復(fù)合物的水溶液。
[0034] 在進(jìn)一步示例性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了藥物制劑，其包含本發(fā)明的脂質(zhì)體。制 劑包括脂質(zhì)體和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或賦形劑。在各種實(shí)施方式中，藥物制劑為單位劑 量形式，提供單位劑量的封裝在脂質(zhì)體中的治療劑。
[0035]在另一示例性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的脂質(zhì)體的方法。在各種實(shí) 施方式中，提供了用略微水溶性的試劑遠(yuǎn)程裝載脂質(zhì)體的方法。方法包括：a)溫育水性混 合物，其包含：（i)脂質(zhì)體懸液，其具有橫跨脂質(zhì)體膜存在的質(zhì)子和/或離子梯度；（ii)與 微溶性藥物的水懸液，（iii)其中通過(guò)將藥物完全溶解在非質(zhì)子溶劑或多元醇中并且將其 稀釋為超過(guò)形成沉淀的藥物溶解度點(diǎn)的水溶液制備藥物懸液，其中溫育組合的脂質(zhì)體藥物 沉淀混合物一段時(shí)間響應(yīng)質(zhì)子/離子梯度產(chǎn)生積聚在脂質(zhì)體內(nèi)部的藥物。制備用于用試劑 裝載脂質(zhì)體的混合物，W使橫跨內(nèi)部水性膜和外部水性介質(zhì)之間的脂質(zhì)體膜存在質(zhì)子-和 /或離子-梯度。溫育可為任何有用的時(shí)間段，但是優(yōu)選地為足W使至少部分不溶解的藥物 沉淀在質(zhì)子和/或離子梯度的作用下積聚在內(nèi)部水性介質(zhì)中的時(shí)間段。
[0036] 在下面詳細(xì)說(shuō)明中闡釋了其他實(shí)施方式、目的和優(yōu)勢(shì)。
[0037] 優(yōu)選實(shí)施方式詳述 [00測(cè) 介紹
[0039] 在利用脂質(zhì)體用于遞送功能化合物時(shí)，一般期望將脂質(zhì)體裝載至高濃度，產(chǎn)生高 的試劑-脂質(zhì)質(zhì)量比，因?yàn)檫\(yùn)減少每次治療待施用的脂質(zhì)體的量，W獲得需要的療效，所有 的都因?yàn)橹|(zhì)體中使用的數(shù)個(gè)脂質(zhì)本身具有劑量限制的毒性。裝載百分?jǐn)?shù)也對(duì)成本效率具 有重要性，因?yàn)椴畹难b載導(dǎo)致在將試劑裝載至脂質(zhì)體期間試劑的損失。
[0040] 本發(fā)明提供了脂質(zhì)體封裝試劑，例如，略微水溶性的，制備運(yùn)樣的脂質(zhì)體的方法， 包含運(yùn)樣的脂質(zhì)體的制劑和制備本發(fā)明的脂質(zhì)體和制劑的方法。
[0041]在示例性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了具有封裝水性腔室的膜的脂質(zhì)體。制備脂質(zhì) 體使得橫跨內(nèi)部水性腔室和外部水性介質(zhì)之間的脂質(zhì)體膜存在質(zhì)子-和/或離子-梯度。 試劑W下述濃度溶解在非質(zhì)子溶劑中，所述濃度是當(dāng)稀釋在脂質(zhì)體懸液中形成遠(yuǎn)程裝載混 合物時(shí)其在懸液中的溶解度超出并且試劑形成沉淀。一部分試劑沉淀使用橫跨內(nèi)部水性腔 室和外部水性介質(zhì)之間脂質(zhì)體膜的質(zhì)子-和/或離子-梯度裝載至脂質(zhì)體水性腔室。
[0042]在一些實(shí)施方式中，遠(yuǎn)程裝載混合物中基本上所有量的不溶解的試劑沉淀裝載至 脂質(zhì)體的水性腔室。在示例性實(shí)施方式中，遠(yuǎn)程裝載混合物中至少約95%，至少約90%，至 少約85%，至少約80%或至少約70%的不溶解的藥物沉淀裝載至脂質(zhì)體的水性腔室。
[004引脂質(zhì)體
[0044] 本文根據(jù)其通常的含義使用術(shù)語(yǔ)脂質(zhì)體，指由雙層憐脂或任何類似的封裝內(nèi)部水 性介質(zhì)的兩性脂質(zhì)組成的顯微脂質(zhì)膜泡。本發(fā)明的脂質(zhì)體可W是單層膜泡比如小單層膜泡 (SUV)和大單層膜泡（LUV)和多層膜泡（MLV)，尺寸通常從30nm至200nm改變。對(duì)本發(fā)明 中的脂質(zhì)體膜結(jié)構(gòu)沒(méi)有具體限制。術(shù)語(yǔ)脂質(zhì)體膜指分離內(nèi)部水性介質(zhì)與外部水性介質(zhì)的雙 層憐脂。
[0045] 本發(fā)明使用的示例性脂質(zhì)體膜可由各種形成膜泡的脂質(zhì)形成，通常包括雙脂族鏈 脂質(zhì)，比如憐脂、甘油二醋、雙脂族糖脂，單個(gè)脂質(zhì)比如銷憐脂和銷糖脂、膽固醇和其衍生 物，和其組合。如本文定義，憐脂是兩性分子試劑，具有長(zhǎng)鏈烷基鏈形成的疏水基團(tuán)，和包 含憐酸鹽部分的親水基團(tuán)。憐脂的基團(tuán)包括憐脂酸、憐脂酷丙=醇、憐脂酷膽堿、憐脂酷乙 醇胺、憐脂酷肌醇、憐脂酷絲氨酸和其混合物。優(yōu)選地，憐脂選自1,2-雙棟桐酷-sn-甘 油-3-憐酸膽堿值PPC)、二肉豆違酷基-憐脂酷膽堿值MPC)、氨化大豆卵憐脂化SPC)、大豆 憐脂酷膽堿（SPC)、二肉豆違酷基憐脂酷甘油值MPG)、二硬脂酷憐脂酷甘油值SPG)、1-棟桐 酷基-2-油酷基-sn-甘油-3-憐酸膽堿（P0PC)、1，2-二油酷-sn-甘油-3-憐酸膽堿值0PC) 二硬脂酷基憐脂酷膽堿值SPC)、卵黃憐脂酷膽堿巧YPC)或氨化卵黃憐脂酷膽堿（肥PC)、固 醇改性的脂質(zhì)（SML)、陽(yáng)離子脂質(zhì)和反兩性脂質(zhì)。
[0046] 根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體膜可進(jìn)一步包括離子載體，如尼日利亞菌素（nigericin)和 A23187。
[0047] 在根據(jù)本發(fā)明的方法中，示例性脂質(zhì)體相變溫度在-25°C和100°C之間，例如，在 4°C和65°C之間。相變溫度是誘導(dǎo)組成脂質(zhì)體的脂質(zhì)物理狀態(tài)從有序的凝膠相變成無(wú)序的 液晶相需要的溫度，所述凝膠相中控鏈充分延伸并且緊密堆積，所述液晶相中控鏈?zhǔn)请S機(jī) 定向的和流動(dòng)的。高于脂質(zhì)體的相變溫度，脂質(zhì)體膜的通透性增加。選擇其中脂質(zhì)體總處 在凝膠狀態(tài)的高轉(zhuǎn)變溫度，可提供非滲漏脂質(zhì)體組合物，即在暴露于環(huán)境期間，保持內(nèi)部水 性介質(zhì)中略微水溶性試劑的濃度?？蛇x地，轉(zhuǎn)變溫度在所暴露環(huán)境的開始和結(jié)束溫度之間 的脂質(zhì)體提供當(dāng)脂質(zhì)體超過(guò)其轉(zhuǎn)變溫度時(shí)，釋放略微水溶性試劑的方式。因此，主動(dòng)裝載技 術(shù)的過(guò)程溫度通常高于脂質(zhì)體相變溫度，W利于主動(dòng)裝載過(guò)程。如本領(lǐng)域通常已知的，脂質(zhì) 體的相變溫度可受憐脂的選擇和添加類固醇如膽固醇、羊毛固醇、膽醬燒醇、豆醬醇、麥角 固醇等參數(shù)的影響。因此，在本發(fā)明的實(shí)施方式中，提供根據(jù)任何前述的方法，其中脂質(zhì)體 包含W數(shù)個(gè)摩爾比選自不同憐脂和膽固醇的一個(gè)或多個(gè)組分，W便改變轉(zhuǎn)變、需要的過(guò)程 溫度和血漿中脂質(zhì)體穩(wěn)定性?；旌衔镏休^少的膽固醇導(dǎo)致血漿中較不穩(wěn)定的脂質(zhì)體。本發(fā) 明中使用的示例性憐脂組合物包括約10和約50mol%之間的類固醇類，優(yōu)選地膽固醇。
[0048] 根據(jù)本發(fā)明，可通過(guò)現(xiàn)在已知的或隨后為制備脂質(zhì)體開發(fā)的任何技術(shù)制備脂質(zhì) 體。例如，脂質(zhì)體可通過(guò)制備多層脂質(zhì)膜泡（MLVs)的常規(guī)的技術(shù)形成，即，通過(guò)將一個(gè)或多 個(gè)選擇的脂質(zhì)沉積在適當(dāng)?shù)娜萜鞯膬?nèi)側(cè)壁上通過(guò)將脂質(zhì)溶解在氯仿中并且然后蒸發(fā)氯仿， 和然后通過(guò)添加待封裝在容器中的水溶液，允許水溶液使脂質(zhì)水合，和使所得脂質(zhì)懸液縱 滿或起滿流。該過(guò)程產(chǎn)生了包括期望脂質(zhì)體的混合物?？蛇x地，用于產(chǎn)生大單層脂質(zhì)膜泡 (LUV)的技術(shù)，比如反相蒸發(fā)、注入法和去污劑稀釋，可用于產(chǎn)生脂質(zhì)體。產(chǎn)生脂質(zhì)膜泡的 運(yùn)些和其他方法的綜述可見(jiàn)文本LiposomeTechnology,VolumeI，GregoryGregoriadis Ed.，CRCPress,BocaRaton,Fla.，（1984)，其通過(guò)引用并入本文。例如，包含脂質(zhì)的顆粒 可為下述形式：醬族脂質(zhì)膜泡，穩(wěn)定的多層脂質(zhì)膜泡（SPLV)、單相膜泡（MPV)或脂質(zhì)基質(zhì)載 體（LMC)。在MLV的情況下，如果期望，脂質(zhì)體可進(jìn)行多個(gè)（五個(gè)或更多個(gè)）冷凍-融化輪， W增強(qiáng)它們的捕獲體積和捕獲效率并且提供溶質(zhì)更均勻?qū)娱g分布。
[0049] 脂質(zhì)體制備之后，任選地調(diào)整脂質(zhì)體的尺寸，W實(shí)現(xiàn)期望的尺寸范圍和相對(duì)窄的 脂質(zhì)體尺寸的分布。約20-200納米的尺寸范圍使得脂質(zhì)體懸液通過(guò)常規(guī)的過(guò)濾器，通常為 0. 22或0. 4微米過(guò)濾器，過(guò)濾滅菌。如果脂質(zhì)體的尺寸下降至約20-200納米，可W高通量 基礎(chǔ)進(jìn)行過(guò)濾器消毒方法。數(shù)個(gè)技術(shù)可用于調(diào)整脂質(zhì)體的尺寸至期望的尺寸。通過(guò)浴或探 針超聲法超聲脂質(zhì)體懸液，產(chǎn)生連續(xù)尺寸下降至小單層膜泡，尺寸小于約50納米。勻化是 另一方法，其依賴于剪切能使大脂質(zhì)體片段化成更小的脂質(zhì)體。在典型的勻化方法中，通過(guò) 標(biāo)準(zhǔn)乳液勻化器使多層膜泡再循環(huán)，直到觀察到選擇的脂質(zhì)體尺寸，通常在約50和500納 米之間。在兩種方法中，可通過(guò)常規(guī)的激光束顆粒尺寸測(cè)定，監(jiān)測(cè)顆粒尺寸分布。通過(guò)小孔 聚碳酸醋膜或不對(duì)稱的陶瓷膜擠出脂質(zhì)體也是使脂質(zhì)體尺寸降低至相對(duì)良好限定尺寸分 布的有效方法。典型地，懸液通過(guò)膜循環(huán)一次或多次，直到實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì)體尺寸分布?？?通過(guò)連續(xù)更小的孔膜擠出脂質(zhì)體，W實(shí)現(xiàn)逐漸減小的脂質(zhì)體尺寸?？蛇x地，可使用微流體技 術(shù)制備控制尺寸的脂質(zhì)體，其中有機(jī)溶劑中，比如乙醇或乙醇-非質(zhì)子溶劑混合物中的脂 質(zhì)與水性介質(zhì)快速混合，從而在尺寸小于300微米和優(yōu)選寬度小于150微米和高度50微米 的微通道中有機(jī)溶劑/水比例小于30%。然后從脂質(zhì)體通過(guò)透析去除有機(jī)溶劑。其他可用 的調(diào)整尺寸的方法比如超聲法、溶劑蒸發(fā)或反相蒸發(fā)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
[0050] 用于本發(fā)明各種實(shí)施方式的示例性脂質(zhì)體的尺寸為約30納米至約40微米。
[0051] 本文提及的內(nèi)部水性介質(zhì)，通常是其中制備脂質(zhì)體并且當(dāng)形成脂質(zhì)體時(shí)初始封裝 的初始介質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，新鮮制備的封裝初始水性介質(zhì)的脂質(zhì)體可直接用于主動(dòng)裝載。 但是，實(shí)施方式也設(shè)想其中脂質(zhì)體制備之后脫水，例如用于儲(chǔ)存。在運(yùn)樣的實(shí)施方式中，該 方法可設(shè)及直接添加脫水脂質(zhì)體至用于產(chǎn)生跨膜梯度的外部水性介質(zhì)。但是也可能首先在 另一外部介質(zhì)中使脂質(zhì)體水合，如本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的。任選地在減壓下使用標(biāo)準(zhǔn)冷凍 干燥裝置或等同裝置使脂質(zhì)體脫水。在各種實(shí)施方式中，脂質(zhì)體和它們的周圍介質(zhì)冷凍在 液氮中，然后脫水并且放置在減壓下。為了確保脂質(zhì)體在脫水過(guò)程中幸存，而不損失大部分 部分它們的內(nèi)部包含物，通常采用一種或多種保護(hù)糖，W與脂質(zhì)膜泡膜相互作用并且隨著 去除系統(tǒng)中的水，保持它們完整?？墒褂酶鞣N糖，包括運(yùn)樣的糖，如海藻糖、麥芽糖、薦糖、 葡萄糖、乳糖和葡聚糖。一般而言，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)二糖比單糖更好，二糖海藻糖和薦糖是最有效 的。也可使用其他更復(fù)雜的糖。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)包括鏈霉素和雙氨鏈霉素的氨基糖巧類在 脫水期間保護(hù)脂質(zhì)體。典型地，包括一種或多種糖作為脂質(zhì)膜泡的內(nèi)部或外部介質(zhì)的一部 分。最優(yōu)選地，糖包括在內(nèi)部和外部介質(zhì)中，從而它們可與脂質(zhì)體膜的內(nèi)側(cè)和外側(cè)表面相互 作用。通過(guò)在脂質(zhì)體形成過(guò)程期間添加糖或糖至封裝在脂質(zhì)膜泡中的緩沖液實(shí)現(xiàn)包括在內(nèi) 部介質(zhì)中。在運(yùn)些實(shí)施方式中，在主動(dòng)裝載過(guò)程中使用的外部介質(zhì)，也應(yīng)優(yōu)選地包括一種或 多種保護(hù)糖。
[0052] 如本領(lǐng)域技術(shù)人員一般理解，聚乙二醇（PEG)-脂質(zhì)綴合物已經(jīng)