專利名稱：礦物質(zhì)通過腸細(xì)胞的吸收的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種用于便利或增加哺乳動物從普通膳食中吸收礦物質(zhì)的方法。具體地，本發(fā)明涉及的是一種包括施用一種含有乳桿菌微生物的腸道組合物的方法。
礦物質(zhì)是主要生理過程的關(guān)鍵元素。例如，鈣對骨及牙齒的形成、肌肉的收縮以及激素的合成具有至關(guān)重要的作用。鈣同時也是大部分細(xì)胞激活現(xiàn)象的必不可少的第二信使。
礦物質(zhì)主要來源于膳食，它穿過腸道粘膜從而進(jìn)入血流而被身體同化。身體對礦物質(zhì)的同化(或吸收)程度實際上取決于它們在腸道介質(zhì)中的溶解性以及腸細(xì)胞把它們同化并運輸進(jìn)入血流的能力(R.Wasserman等人，Minerd Absorption in the Monogastric GITrac.Aduances in Experrmental Medicine and Biology，249，45-65，Plenum Press，N.Y.1989)。
許多年來已經(jīng)對鼠及雞中鈣沿著整個腸道被吸收的位置、效率及機制進(jìn)行了研究(Bronner F.，J.Nutr.，122，641-643，1992；Schachter D.，Am.J.Physiol.，196，357-362，1959)。由于明顯的倫理及技術(shù)的原因，對人進(jìn)行的此類研究是有限的(Hylander E.等人，Scand.J.Gastroenterol.25，705，1990)，而且也僅進(jìn)行了少數(shù)的體外研究(Elsherydan A.等人，Gastroenterology，109，876，1995；Feher J.J.，Am.J.Physiol.，244 C303，1983；Feher J.J.，Cell Calcium，10，189，1989)。
對礦物質(zhì)吸收研究得最為廣泛的一個方面是取決于日常膳食組成情況的礦物質(zhì)的生物利用度(Bronner F.，J.Nutr.，123 797，1993)。然而，許多生物利用度高的礦物質(zhì)同時也是不穩(wěn)定的，而且也不適合被用于膳食中。而且，單純地往膳食中添加更多數(shù)量的礦物質(zhì)通常對膳食的感官性質(zhì)會產(chǎn)生消極影響。
這個問題的一個可能的解決方案就是便利或改善礦物質(zhì)從膳食中的吸收。然而，對便利或改善礦物質(zhì)從膳食中吸收的方法所進(jìn)行的研究很少而且結(jié)果也不一致。
Rasic等人已經(jīng)報導(dǎo)說如果乳制品被發(fā)酵，其中所含的礦物質(zhì)將能被更好地同化。這一效果歸因于經(jīng)過發(fā)酵的乳制品中存在酸(XP002052238；Fermented Fresh Milk Product，第一卷，第114-115頁，1978)。
最近，Yaeshima等人也示明當(dāng)給小鼠提供鈣強化乳清膳食并同時喂食寡聚糖及雙岐桿菌時，鈣的吸收得以增加(XP002052237Bukketinof the International Dairy Fermentation，No.313，1996)。
然而，Kot等人則報導(dǎo)說嗜酸乳桿菌正常情況下使Fe2+內(nèi)在化并把其氧化為Fe3+，F(xiàn)e3+是一種不溶性形式并且更難以被同化(J.Agric.Food Chem.，43，1276-1282，1995)。
因此，需要獲得一種便利或增加膳食中礦物質(zhì)吸收的方法。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種用以增加從膳食中吸收礦物質(zhì)的方法。該方法包括通過腸道給哺乳動物施用一種含有乳桿菌的營養(yǎng)組合物。
我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過使用一個體外模型，乳桿菌可以直接便利或改善人腸細(xì)胞對礦物質(zhì)，特別是鈣的吸收。我們不受理論束縛地認(rèn)為這是與腸細(xì)胞及與其接觸的細(xì)菌周圍的微環(huán)境所誘發(fā)的酸化有關(guān)聯(lián)的。細(xì)菌和腸細(xì)胞都可能參與了酸化的誘發(fā)。因此，這一局部的酸化作用可能對礦物質(zhì)的溶解從而以及身體對它們的同化能力具有積極的作用。
另一方面，本發(fā)明還提供了把乳桿菌用于制備一種用于便利或改善哺乳動物對礦物質(zhì)吸收的腸道營養(yǎng)組合物的用法。這種腸道營養(yǎng)組合物可被用于治療或預(yù)防礦物質(zhì)缺乏癥。
現(xiàn)在以示例的形式參照附圖來描述本發(fā)明的實施例，其中

圖1代表在沒有乳桿菌存在時，腸細(xì)胞Caco-2對鈣的基本吸收；圖2代表大約6.7×107cfu/ml的各種不同的乳桿菌菌株對腸細(xì)胞Caco-2對鈣的吸收的影響；圖3代表大約3.4×108cfu/ml的各種不同的乳桿菌菌株對腸細(xì)胞Caco-2對鈣的吸收的影響；本發(fā)明涉及通過腸道施用一種營養(yǎng)組合物，此種組合物含有乳桿菌以便利或改善對日常膳食中的礦物質(zhì)的吸收。礦物質(zhì)的例子有鈣、錳、鐵及/或鋅。乳桿菌的攝取增加了礦物質(zhì)的生物利用度，也就是說這使得通常在腸中并不很好溶解的礦物質(zhì)變得更易于被腸細(xì)胞吸收。
可以使用任何食品級的乳桿菌菌株。例如可以使用下列的乳桿菌嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)，卷曲乳桿菌(LactobacillusCrispatus)，Lactobacillus amylovorous，雞乳桿菌(Lactobacillusgallinarum)，加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)以及Lactobacillusjohnsonii；Lactobacillus paracasei；路氏乳桿菌(Lactobacillusreuterii)；Lactobacillus brevis；Lactobacillus fermentum；Lactobacillus plantarum；Lactobacillus casei特別是L.casei subsp.casei以及L.casei subsp.rhamnosus；Lactobacillus delbruckii特別是L.delbruckii subsp.lactis、L.delbruckii subsp.helveticus以及L.delbruckii subsp.bulgaricus；以及Leuconstoc mesenteroides特別是例如L.mesenteroides subsp.cremoris(Bergey′s Manualof Syslemntio Bacteriology，第二卷，1986；Fujisawa等人，Int.Syst.Bact.42，487-491，1992)。
乳桿菌可以是能夠粘附到腸細(xì)胞上的，但這并非是必須的。然而，優(yōu)選的乳桿菌應(yīng)是那些在體外每100個腸細(xì)胞可以粘附到50個，特別地至少80個的細(xì)菌。為了挑選出這樣一種粘附型的細(xì)菌，可以在一腸上皮細(xì)胞永生系的匯合培養(yǎng)物上涂布細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行培養(yǎng)(EP0802257)，然后把匯合培養(yǎng)物進(jìn)行清洗并計數(shù)粘附到細(xì)胞系被長絨毛上的細(xì)菌數(shù)目。
益生型(probiotic)的乳桿菌是特別令人感興趣的。有一些菌株實際上能夠粘附到人的腸細(xì)胞上、能夠把位于人腸細(xì)胞上的病原性細(xì)菌排除，以及/或者能夠通過允許人的免疫系統(tǒng)對外來侵襲產(chǎn)生更強的反應(yīng)來對人的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生作用(即具有免疫調(diào)控能力)，例如通過增強來源于人血的粒性白細(xì)胞的噬菌作用來實現(xiàn)(J.of Dairy Science，78，491-497，1995；具有免疫調(diào)控能力的La-1菌株于1992年6月30日被Nestec SA根據(jù)Budapest條約存放于Conection Nationale deCulture de Microorganisme(CNCM)，25 rue docteur Roux，75724 Paris，于此它的存放號碼被標(biāo)志為CNCM I-1225)。這一菌株被描述于EP 0577904中。
作為示例，可以使用益生型菌株Lactobaciuas acidophilus(嗜酸乳桿菌)CNCM I-1225。這一菌株最近被根據(jù)Fujisawa等人提出的新分類法重新分類到Lactobacillus johnsonii細(xì)菌中，上述這一新的分類法現(xiàn)在是嗜酸乳桿菌分類學(xué)領(lǐng)域的權(quán)威性分類法(Int.J.Syst.Bact.42，487-791，1992)。還有其他的益生菌可供使用，如在EP0199535(Gorbach等人)、US 5296221(Mitsuoka等人)、US 556785(Institut Pasteur)或US 5591428(Probi AB)中所描述的那一些。
營養(yǎng)組合物優(yōu)選地包含有足量的活乳桿菌以便利礦物質(zhì)被腸細(xì)胞吸收，例如至少為106cfu/ml，特別的為107-1011cfu/ml，優(yōu)選的為108-1011cfu/ml(“cfu”表示“菌落形成單位”)。
營養(yǎng)組合物也可以同時根據(jù)需要包含有其它的細(xì)菌如其它的益生菌。
營養(yǎng)組合物也可以同時包含有合適的蛋白質(zhì)來源；如動物或植物蛋白來源。合適的蛋白來源有乳蛋白、大豆蛋白、大米蛋白、小麥蛋白、高梁蛋白等等。這些蛋白質(zhì)可以是未經(jīng)過處理的，也可以是經(jīng)過水解的。
營養(yǎng)組合物也可以同時包含有合適的碳水化合物來源；例如蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖糊精等等。
營養(yǎng)組合物也可以同時包含有合適的類脂來源；例如一種合適的動物或植物類脂來源。合適的類脂來源包括乳脂肪、向日葵油、油菜籽油、橄欖油、紅花油等等。
營養(yǎng)組合物也可以同時強化有礦物質(zhì)或維生素。特別優(yōu)選的是用鈣對營養(yǎng)組合物進(jìn)行強化。
營養(yǎng)組合物可被制備成食品組合物形式以便供人或動物食用。合適的食品組合物可以被制備成液體、粉末以及固體形式。
營養(yǎng)組合物可以經(jīng)過發(fā)酵以獲得足量的乳桿菌。因此基于乳的經(jīng)過發(fā)酵的組合物是特別合適的。術(shù)語“乳”不僅指動物乳，還指通常被稱為蔬菜乳的物質(zhì)，好即一種經(jīng)過處理或未經(jīng)過處理的植物材料，如，豆類(大豆、鷹嘴豆、扁豆等)或含油種子(油菜、大豆、芝麻、棉花等等)的提取物，這些提取物含有溶解的或呈膠狀懸浮的蛋白質(zhì)，它們可以通過化學(xué)反應(yīng)、酸發(fā)酵及/或加熱而凝固。與動物乳類似，可以把這些蔬菜乳進(jìn)行熱處理。也可以對它們進(jìn)行專門的處理，如進(jìn)行脫色，除臭或通過處理消除其不受歡迎的味道。最后，這一術(shù)語也可以代表動物乳及植物乳的混合物。
可以在制備的過程中給營養(yǎng)組合物添加、混合或涂覆適當(dāng)量的乳桿菌培養(yǎng)物，這一培養(yǎng)物根據(jù)需要可以呈液體、濃縮、干燥或膠囊化等形式。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)乳桿菌的微型膠囊化對治療是有利的。首先，微型膠囊化顯著地增加了乳桿菌的存活從而增加了到達(dá)腸道的活乳桿菌的數(shù)目。更為重要的是，乳桿菌是被逐步釋放進(jìn)入腸道的，這使乳桿菌對礦物質(zhì)經(jīng)由腸細(xì)胞的吸收所產(chǎn)生的作用得以延長。
優(yōu)選地，當(dāng)要把乳桿菌進(jìn)行微型膠囊化時，先把乳桿菌凍干或噴干(EP 0818529)，然后把它們摻合到含有，例如，固化脂肪酸、海藻酸鹽、聚合的羥丙基甲基纖維素或聚合的多聚乙烯吡咯烷酮的凝膠中。為了實際這一點，F(xiàn)R 2,443,247中的教導(dǎo)被作為參照結(jié)合于本文中。
營養(yǎng)組合物并不必含有乳桿菌在腸道介質(zhì)中進(jìn)行主動發(fā)酵所需的碳水化合物。相反地，被易化的礦物質(zhì)的吸收并不依賴于乳桿菌的發(fā)酵活動，而是乳桿菌與腸細(xì)胞直接接觸的結(jié)果。這被認(rèn)為誘導(dǎo)了微環(huán)境的酸化從而使礦物質(zhì)的溶解度得到改善。
然而，為乳桿菌在腸道介質(zhì)中進(jìn)行更新或進(jìn)行特異性增殖提供條件從而延長礦物質(zhì)吸收的易化作用是合乎需要的。這可以通過在營養(yǎng)組合物中添加纖維來實現(xiàn)，這些纖維便利了乳桿菌在腸道介質(zhì)中的特異性增殖。這些纖維是可溶性的而且是可以被發(fā)酵的。
這些纖維可以選自，例如植物果膠、寡聚殼糖、寡聚果糖、寡聚龍膽糖、寡聚半乳糖、寡聚異麥芽糖、寡聚甘露糖或寡聚木糖或者例如來源于大豆的寡聚糖(Playne等人。Bulletin of the IDF 313，Group B42，Annuol Session of September 95，Vienna)。
優(yōu)選的果膠有分子量為10至400 KDa之間的α-1，4-D-半乳糖醛酸多聚物，它可以被提取自，例如，胡蘿卜或西紅柿(JP 60104432)。優(yōu)選的寡聚半乳糖包含一個含有2至5個〔-α-D-Glu-(1→4)-β-D-Gal-(1→6)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元的糖部分(Yakult HonsaCo.，Japan)。優(yōu)選的寡聚果糖是從菊苣中提取的菊淀粉-寡聚果糖，它可以包含有，例如，1至9個〔-β-D-Fru-(1→2)-β-D-Fru-(1→2)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元(WO 94/12541；RaffinerieTirlemontoise S.A.，Belgium)或者由蔗糖單元合成的寡聚糖，它可以包含有，例如，一個包括2至9個〔-α-D-Glu-(1→2)-β-D-Fru-(1→2)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元的糖部分(Meiji Seika KasihaCo.，Japan)。優(yōu)選的寡聚麥芽糖包含有一個由2至7個〔-α-D-Glu-(1→4)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元組成的糖部分(Nihon Shokuhin KakoCo.，Japan)。優(yōu)選的異麥芽糖包括一個由2至6個〔-α-D-Glu-(1→6)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元組成的糖部分(Showa Sangyo Co.，Japan)。優(yōu)選的寡聚殼糖包括一個由2至5個〔-β-D-Glu-(1→6)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元組成的糖部分(Nihon Shokuhin Kako Co.，Japan)。最后，優(yōu)選的寡聚木糖包括，例如，一個由2至9個〔-β-xyl-(1→4)-〕結(jié)構(gòu)重復(fù)單元組成的糖部分(Suntory Co.，Japan)。
營養(yǎng)組合物中纖維的數(shù)量取決于它們促進(jìn)乳桿菌發(fā)育的能力。通常營養(yǎng)組合物可以含有1-50％的此類纖維(相對于干物質(zhì)的比重)。乳桿菌的濃度至少為每克纖維103CFU，優(yōu)選的為每克纖維104-107CFU。
纖維所提供的另一個優(yōu)點是它可以阻滯腸的運輸。如果纖維的數(shù)量多，如有組合物重量的20-50％，情況更是如此。乳桿菌被腸的運輸作用逐漸除去，這樣就可以延長乳桿菌對礦物質(zhì)經(jīng)由腸道的吸收所產(chǎn)生的有益作用。
營養(yǎng)組合物可以采取任何經(jīng)由腸道施用的食品的形式，例如，營養(yǎng)組合物可以采取經(jīng)過發(fā)酵的乳的形式(EP 0577904)、嬰兒食品的形式(EP 0827697)、清爽干酪的形式(PCT/EP97/06947)、成熟干酪的形式、冰激凌的形式(WO 98/09535)、填充有奶油的餅干的形式(EP 704164；EP 66031)、干的香腸及/或餡餅的形式(EP 689769)。
營養(yǎng)組合物也可以采取適合于不能忍受乳制品的人們的形式。這些營養(yǎng)組合物不含有可引起過敏癥的乳衍生物。例如，可以給對乳蛋白過敏的兒童配制一種含有不足以引起過敏癥的乳衍生物的營養(yǎng)組合物。這些乳衍生物可以是附合歐洲指令96/4/EC的，這一指令聲明不足以引起過敏癥的乳中所含的可引起過敏癥的蛋白通過免疫監(jiān)測至少應(yīng)比未經(jīng)水解的乳中的少100倍(off J.Europ.Comm.，NOL49/12，annex point 5.a.1996；Fritsche等人，Int.Arch.Aller.andAppl.Imm.93，289-293，1990)。
營養(yǎng)組合物特別適合于對患有礦物質(zhì)缺乏癥的人進(jìn)行治療或預(yù)防，或者用于彌補因為膳食中礦物質(zhì)含量少而引起的生理性缺乏，或者用于滿足少年兒童、孕婦、哺乳期婦女及老年人對礦物質(zhì)的較大的生理需求。
現(xiàn)在通過具體的例子對本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行描述。百分比除了特別標(biāo)示的以外，都表示重量百分比。這些例子僅是解釋性的，并不對本發(fā)明構(gòu)成任何意義上的局限。例1-材料45CaCl2，Amersham產(chǎn)品，熒光黃，Sigmao產(chǎn)品膠原質(zhì)I，Centrix Pharmaceuticals產(chǎn)品，PBS，HEPES及細(xì)胞培養(yǎng)基的組分，Gibco產(chǎn)品，培養(yǎng)載體，F(xiàn)alcon產(chǎn)品。-細(xì)胞培養(yǎng)人Caco-2細(xì)胞系，提取自結(jié)腸腺癌，來自AmericanType Culture Collection(第41代)。把細(xì)胞放置于含有4.5g/l葡萄糖、20％熱滅活胎牛血清、1mg/ml兩性霉素B、100U/ml青霉素/鏈霉素、200ug/ml慶大霉素及1％非必需氧基酸的DMEM中培養(yǎng)，數(shù)量為4×104個細(xì)胞/cm2。定期用胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化，然后再把其1∶20重新培養(yǎng)。用于運輸實驗的細(xì)胞是在一預(yù)先涂覆有一層50ug/ml的膠原質(zhì)I的可通透內(nèi)眼板上進(jìn)行培養(yǎng)的，數(shù)量為1×105個細(xì)胞/cm2。在所有的情況中細(xì)胞都被保持在37℃的10％CO2/90％空氣的培養(yǎng)箱中，而且培養(yǎng)基都是每兩天換一次。-CaCo-2細(xì)胞的生存力為了排除在有乳桿菌存在時鈣經(jīng)由腸細(xì)胞的吸收的增強是由細(xì)胞的損壞造成的這樣一種可能性，取用每一樣品的一部分用于對鈣進(jìn)行化驗，把其用于氨基己糖苷酶活性化驗(Landegren等人，J.Immunol.Method，67，379-378，1984)。這一比色測驗可以通過測量從損壞細(xì)胞的胞質(zhì)液釋放進(jìn)入上清的氨基己糖苷酶的活性來對細(xì)胞裂解及/或死亡進(jìn)行定量。結(jié)果表明在所有的實驗中，當(dāng)有乳桿菌存在時，氨基己糖苷酶的活性是相當(dāng)?shù)摹?細(xì)胞層的通透性Caco-2細(xì)胞生長終了時所形成的細(xì)胞層的完整性及其分化是通過用一伏特表/歐姆表Millicell-ERS對跨上皮電阻(transepithelial electrical resistance，TEER)進(jìn)行測量而得以評估的。當(dāng)這一電阻達(dá)到700歐姆x cm2時即進(jìn)行鈣吸收實驗。在鈣吸收實驗過程中細(xì)胞層的通透性是通過對熒光黃(一種不跨越細(xì)胞膜的分子)的擴散水平(％)進(jìn)行測量而得以評估的。-鈣的運輸把Caco-2細(xì)胞在內(nèi)眼板上培養(yǎng)3至5周。實驗當(dāng)天把細(xì)胞層在PBS中清洗2次，然后往加入漿膜的內(nèi)眼板的底腔(細(xì)胞基底橫向極)中加入2.5ml添加有2.5mM Cacl2的載體緩沖液(140mMNaCl，5.8mM KCl，0.34mM NaH2PO4，0.44mM KH2PO4，0.8mMMgSO4，20mM HEPES，4mM谷氨酸鹽，25mM葡萄糖，pH 7.4)，往結(jié)合腸腔的內(nèi)眼板的頂腔(細(xì)胞的頂極)中加入1.5ml的添加有10mMCaCl2及痕量的45CaCl2及熒光黃的載體緩沖液。把內(nèi)眼板放置于37℃并定期從底腔及頂腔取出50μl的樣品。
用液體閃爍計數(shù)法來評估這些樣品中所含的放射性，這樣就可以推斷常溫下被吸收的鈣的數(shù)量。鈣的基本運輸量被表達(dá)為被運輸?shù)絻?nèi)眼板底腔的鈣的n mol數(shù)。通過分光熒光測定法監(jiān)測到的熒光黃在底腔的擴散量被表達(dá)為被引入到頂腔中的數(shù)量的百分比(％)。-乳桿菌的影響在厭氧條件下對菌株Lactobacillus johnsonii La1(CNCM I-1225)、La17、La22、La31；Lactobacillus acidophilusLa10、La18、La31；Lactobacillus bulgaricus Lfi5、YL8；Lactobacillusparacasei ST11；Lactobacillus gasseri LGA7；Lactobacillus reuteriLR7及Streptococcus thermophilus Sfi20、YS4(Nestec Collection，Lausanne，Switzerland)進(jìn)行培養(yǎng)，Lactobacillus用MRS肉湯培養(yǎng)，Streptococcus用M17培養(yǎng)，時間為兩個24小時，用PBS清洗并用載體緩沖液重懸，然后再把其引入內(nèi)眼板的頂腔。根據(jù)試驗此時的Caco-2；細(xì)菌的比率大約為1∶100(在圖2及3所代表的實驗中，內(nèi)眼板頂腔的數(shù)量為6.7×107或3.4×108cfu/ml)。根據(jù)上述的方案對鈣的吸收進(jìn)行評估。-鈣基本運輸?shù)慕Y(jié)果通過往底腔中加入2.5mM的CaCl2來在內(nèi)眼板中建立一個鈣梯度，這是與人血漿中正常的濃度相對應(yīng)的，同時任意地往頂腔中加入10mM的CaCl2，這對應(yīng)于食物中鈣的含量。如圖1中所圖解的一個代表性實驗的結(jié)果所示，鈣經(jīng)由Caco-2細(xì)胞的基本吸收量隨時間增加并在4小時后達(dá)到600 n mol/內(nèi)眼板，每個內(nèi)眼板含有3×106個細(xì)胞。作為對實驗期間細(xì)胞層完整性的一個檢驗，對熒光黃的擴散量進(jìn)行了測量并證明其擴散量少于2％。-乳桿菌影響的測量在圖2及3中，當(dāng)有粘附性的Lactobacillusjohnsonii菌株La1及La22存在時、當(dāng)有非粘附性的La10及La18Lactobacillus acidophilus菌株存在時、以及當(dāng)有L.paracasei(ST11)，L.gssseri(LGA7)及L.reuterii(LR7)菌株存在時，Caco-2細(xì)胞對鈣的吸收顯著增加。
因此，細(xì)菌粘附到腸細(xì)胞上的能力并不與它們增加這些細(xì)胞的鈣吸收能力有直接的關(guān)聯(lián)。在所有的實驗中，都用類似的方法對熒光黃的擴散進(jìn)行了調(diào)控，但其擴散量是可以忽略不計的。
當(dāng)Caco-2細(xì)胞與乳桿菌(除Sfi20菌株之外的任何菌株)同時存在時，可以觀察到內(nèi)眼板頂腔的pH值降低(表格1)。因此，鈣吸收的增加與這一pH值的降低并不存在關(guān)聯(lián)。然而，某些能夠增加鈣吸收的特定的細(xì)菌菌株在沒有Caco-2細(xì)胞存在的時候并無法將實驗性的培養(yǎng)基酸化。這意味著在有Caco-2細(xì)胞存在時細(xì)菌的酸化作用需要這兩種有機物之間的相互協(xié)作并且可能歸因于Caco-2細(xì)胞。表格1在沒有Caco-2細(xì)胞存在時乳桿菌對實驗性培養(yǎng)基pH的影響
>例2進(jìn)行類似于例1中的試驗以確定當(dāng)有經(jīng)過標(biāo)記的菊淀粉(3H-菊淀粉，Amershcm，示蹤生物前纖維)存在時，乳桿菌對鈣經(jīng)由腸細(xì)胞吸收的影響。結(jié)果證實了乳桿菌在體外增加了礦物質(zhì)經(jīng)由腸細(xì)胞的吸收。例3進(jìn)行類似于例1中的試驗以確定乳桿菌對錳、鐵及鋅經(jīng)由腸細(xì)胞吸收的影響。結(jié)果證實了乳桿菌在體外增加了礦物質(zhì)由腸細(xì)胞的吸收。例4 乳酸細(xì)菌的膠囊化在一個100升的槽中制備80升含有以下組分(％)的培養(yǎng)基
用1升經(jīng)過20小時培養(yǎng)的Lactobacillus johnsonii La1(CNCMI-1225)培養(yǎng)物進(jìn)行接種。把培養(yǎng)基在30℃溫育12小時。把肉湯培養(yǎng)物離心獲得240g細(xì)胞。把它們稀釋在250ml添加有7％乳糖的脫脂乳中。用液氮把混合物冷凍。在40℃凍干過夜。用一種溶點為42℃并在45℃液化的氫化蔬菜脂肪把所獲得的粉末制備成5％的分散體。在一個直徑1.5米高10米的垂直圓筒的頂部把分散體在45℃用千微巴(bar)的壓力與液氮按1∶5的份額進(jìn)行注射。把一容器放置于圓筒的底部并于其中盛上液氮，讓含有細(xì)菌的直徑介于0.1至0.5mm之間的微珠收集于液氮中。接著把微珠放置于一液化的填充物(bed)中，把一含有8％玉米蛋白的乙醇溶液噴灑于填充物上，其數(shù)量應(yīng)使得包繞著微珠而形成的玉米蛋白層占兩者總重量的5％。
接著把這些微珠摻合到食品組合物中以便利礦物質(zhì)被腸細(xì)胞吸收。例5把大約11％的乳脂肪、8.8％的乳固體(無脂肪固體)、25％蔗糖、5％葡萄糖漿及0.6％的EmulstabSE30在60-65℃混合20分鐘以制備濃縮的冰激凌主料。把主料在72-75℃，210微巴(bar)下進(jìn)行勻漿(分210/50微巴兩個階段進(jìn)行)，然后把其在85℃進(jìn)行22秒的巴氏法滅菌(APV巴氏法滅菌器，F(xiàn)rance，Evreux，400升/小時)，把其冷卻到4℃，往其中加入40％的用Lactobacillus johnsonii La-1(5×108cfu/ml)和Bifidobacterium longum Bi16(3×108cfu/ml)酸化的乳。下表給出了濃縮后的主料的組成
當(dāng)奶油在5℃下熟化12小時之后，把它冷凍使其體積膨脹95％(Crepaco速凍機，F(xiàn)rance，Evreuk；160升產(chǎn)品/小時)。
根據(jù)下面的配方制備一含有10％寡聚果糖RaftiloseL30(Raffinerie Tirlemontoise S.A.，BE)的薄餅生面團。經(jīng)過烘烤之后，把薄餅做成通常的錐形。經(jīng)過冷卻之后，在錐形薄餅的內(nèi)側(cè)噴涂一薄層的脂肪然后往薄餅中填入經(jīng)過如上攪拌的冰激淋。每一個11.5g的錐形薄餅使用130ml經(jīng)過攪拌的冰激淋(大約65g)及5g的巧克力(噴灑于奶油之上)。
這樣，每個冰激淋錐形薄餅可以提供1.1g的纖維和大約108cfu/g的乳桿菌，這些纖維通過促進(jìn)乳桿菌在腸道中的特異性發(fā)育而促進(jìn)了礦物質(zhì)的同化作用。
權(quán)利要求
1.乳桿菌在制備腸道營養(yǎng)組合物以便利或改善哺乳動物對礦物質(zhì)的吸收中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其中的乳桿菌是能夠粘附到腸細(xì)胞上的乳桿菌。
3.如權(quán)利要求2中所述的應(yīng)用，其中的乳桿菌是Lactobacillusjohnsonii CNCM I-1225菌株。
4.如權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其中的腸道營養(yǎng)組合物含有107至1011cfu的乳桿菌。
5.如權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其中的腸道營養(yǎng)組合物可以便利鈣、錳、鐵及/或鋅的吸收。
6.如權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其中的腸道營養(yǎng)組合物含有乳蛋白。
7.如權(quán)利要求6中所述的應(yīng)用，其中的腸道營養(yǎng)組合物是一種由不足以引起過敏反應(yīng)的乳蛋白水解物組成的嬰兒配方。
8.如權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其中的腸道營養(yǎng)組合物進(jìn)而包含益生型纖維。
9.乳桿菌在制備腸道營養(yǎng)組合物以對礦物質(zhì)缺乏癥進(jìn)行治療或預(yù)防中的應(yīng)用。
10.一種用以增加從膳食中吸收礦物質(zhì)的方法，該方法包括給哺乳動物通過腸道施用一種含有乳桿菌的營養(yǎng)組合物。
全文摘要
一種用于增加或便利從膳食中吸收礦物質(zhì)的方法。給哺乳動物通過腸道施用一種含有乳桿菌的營養(yǎng)組合物。該種營養(yǎng)組合物適用于對受治療者進(jìn)行礦物質(zhì)缺乏癥的治療或防止,或者用于彌補由于膳食中礦物質(zhì)含量少而造成的生理性缺乏,或者用于滿足少年兒童、孕婦、哺乳期婦女及老年人對礦物質(zhì)的較大的生理需要。
文檔編號A61P3/12GK1269724SQ98806891
公開日2000年10月11日 申請日期1998年6月26日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月5日
發(fā)明者D·布拉薩特, E·維伊 申請人:雀巢制品公司