專利名稱：甲紅霉素的晶形i的制作方法
技術范圍本發(fā)明涉及具有治療用途的化合物和涉及其制備方法。更確切地說本發(fā)明涉及新化合物6-O-甲基紅霉素A晶形I、其制備方法、含該化合物的藥用組合物及作為治療藥物的使用方法。
本發(fā)明背景6-O-甲基紅霉素A(甲紅霉素)是具有下式的半合成大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，
6-O-甲基紅霉素A對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌、厭氧菌、支原體屬和衣原體屬表現(xiàn)出良好的抗菌活性。在酸性條件下穩(wěn)定并口服時有效。甲紅霉素用于治療兒童及成人的上呼吸道感染。
圖表簡述

圖1a、1b和1c分別表示6-O-甲基紅霉素A晶形I的粉末X-線衍射圖譜、紅外光譜和示差掃描量熱法(DSC)熱分析圖。
圖2a、2b和2c分別表示6-O-甲基紅霉素A晶形II的粉末X-線衍射圖譜、紅外光譜和示差掃描量熱法(DSC)熱分析圖。
本發(fā)明概述我們已發(fā)現(xiàn)6-O-甲基紅霉素A可存在至少兩種不同的晶形，為了鑒別原因，表示為“晶形I”和“晶形II”。通過其紅外光譜示差掃描量熱法熱分析圖和粉末X-線衍射圖樣鑒別所述的晶形。晶形I和晶形II晶體具有相同的抗菌活性譜，但未預料晶形I晶體的體內(nèi)溶解速率為晶形II晶體的體內(nèi)溶解速率的約3倍。在我們實驗室的研究中揭示了當由乙醇、四氫呋喃、乙酸異丙酯和異丙醇或乙醇、四氫呋喃、乙酸異丙酯或異丙醇與其它常用有機溶劑的混合物重結(jié)晶時，6-O-甲基紅霉素A只形成唯一的晶形I晶體，該晶形在此之前尚未鑒別。
目前市場上的藥物是由熱力學更穩(wěn)定的晶形II晶體配制。因此，目前市場上的所有制劑需要將晶形I晶體轉(zhuǎn)化成晶形II。一般可通過在真空下于80℃以上溫度加熱晶形I晶體來實施。因此，不經(jīng)高溫處理即可制備新的形式的6-O-甲基紅霉素A的發(fā)現(xiàn)將導致工藝成本的很大節(jié)省。另外，晶形I相對于晶形II的易溶特性可增加抗菌素的生物利用度和提供有意義的配制優(yōu)點。
因此，本發(fā)明的主要實施例提供新的結(jié)晶抗菌素，表示為6-O-甲基紅霉素A晶形I或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明也提供藥用組合物，該組合物包括治療有效用量的6-O-甲基紅霉素A晶形I與藥學上可接受的載體組合。
本發(fā)明進一步涉及對需要此種治療的宿主哺乳動物的細菌感染進行治療的方法，該治療方法包括對乳哺動物給予治療有效用量的6-O-甲基紅霉素A晶形I。
在另一實施例中，本發(fā)明提供制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，該方法包括(a)將紅霉素A轉(zhuǎn)化成6-O-甲基紅霉素A；(b)用溶劑處理6-O-甲基紅霉素A，所述溶劑選自(i)乙醇，(ii)乙酸異丙酯，(iii)異丙醇，(iv)四氫呋喃和(v)下面兩類溶劑的混合物，第一類溶劑選自乙醇、乙酸異丙酯、異丙醇和四氫呋喃，第二類溶劑選自5-12個碳原子的烴、3-12個碳原子的酮、3-12個碳原子的羧酸酯、4-10個碳原子的醚、苯、選自1-4個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基、硝基和鹵素的1個或多個取代基取代的苯以及極性非質(zhì)子溶劑，(c)分離從步驟(b)中形成的結(jié)晶的6-O-甲基紅霉素A；和(d)在室溫和約70℃之間的溫度范圍內(nèi)干燥從步驟(c)中分離的6-O-甲基紅霉素A以形成6-O-甲基紅霉素A晶形I。
詳細描述通過紅霉素A的6-羥基甲基化可制備6-O-甲基紅霉素A。然而，除6位外，紅霉素A在11、12、2’和4”位含有羥基和在3’位有氮原子，所有這些基團都有可能與烷基化試劑反應。因此，在6-羥基烷基化之前保護各個反應官能度是必要的。代表性的制備6-O-甲基紅霉素方法在美國專利4331803、4670549、4672109和4990602及歐洲專利說明書260938 B1中有介紹，在此結(jié)合本發(fā)明作具體參考。隨后脫去保護基，6-O-甲基紅霉素A可以是固體，半固體或含有來自脫保護反應的殘留溶劑、無機鹽和其它雜質(zhì)的於漿。使用上述的溶劑可直接從於漿或半固體中結(jié)晶6-O-甲基紅霉素A晶形I。另外，如果反應產(chǎn)物粗品固體化，可以從上述的任何溶劑中重結(jié)晶所述的固體物。由上述的任何溶劑系統(tǒng)重結(jié)晶晶形II或晶形I和晶形II的混合物也可獲得純品6-O-甲基紅霉素A晶形I。在此使用的術語“6-O-甲基紅霉素A”指包括任何純品狀態(tài)下的6-O-甲基紅霉素A晶形I或II，或其混合物。
術語“處理”指從如上述定義的任何溶劑中結(jié)晶或重結(jié)晶6-O-甲基紅霉素A。
在此使用的術語“烴”指具有式CnH2n-2的直鏈或支鏈烷烴。在本發(fā)明溶劑混合物中使用的烴包括己烷、庚烷、辛烷等。
術語“烷基”指衍生于直鏈或支鏈飽和烴僅移走單個氫原子的一價基團。烷基的實例有甲基、乙基、正-和異-丙基、正-、仲-、異-和叔-丁基等。
術語“酮”指式RC(O)R’的溶劑，其中R和R’是直鏈或支鏈烷基。在本發(fā)明溶劑混合物中使用的酮包括丙酮、甲乙基酮、2-和3-戊酮等。
術語“羧酸酯”指式RCO2R’的溶劑，其中R和R’是直鏈或支鏈烷基。在本發(fā)明溶劑混合物中使用的羧酸酯包括乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丁酯等。
術語“醚”指式ROR’的溶劑，其中R和R’是直鏈或支鏈烷基。在本發(fā)明溶劑混合物中使用的醚包括乙醚、二異丙醚、甲基叔-丁基醚等。
術語“極性非質(zhì)子”指不含羥基但有相對高的偶極矩的溶劑。在本發(fā)明溶劑混合物中使用的極性非質(zhì)子溶劑包括乙腈、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亞砜(DMSO)、1，1-二甲氧乙烷(DME)、六甲基磷酰三胺(HMPA)等。
至于“藥學上可接受的鹽”，它的意思是指在正確的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)，適合用于與人和較低等動物組織接觸，并無過度的毒性、刺激性、過敏反應等，以及與合理的利益/風險(benefit/risk)比相稱的鹽。本領域熟知藥學上可接受的鹽。例如，S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences，1977，661-19中詳細介紹藥學上可接受的鹽。在本發(fā)明化合物最后的分離和純化過程中原地制備所述鹽或使游離堿官能團與適當有機酸反應分離所述鹽。代表性的酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、環(huán)腺苷酸磺酸鹽(camphersulfonate)、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酰鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘烯磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、pamoate、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫腈酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。有代表性的堿或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、季銨和氨陽離子，包括(但不限于此)四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
通過各種合成路線從紅霉素A制備6-O-甲基紅霉素A。在一個方法中，將紅霉素A轉(zhuǎn)化成2’-O-3’-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲紅霉素A(1)
然后與烷基化試劑如溴代甲烷或碘甲烷和堿反應將6-羥基甲基化。通過催化水解脫去苯甲?；⑦€原3’N的甲基得到6-O-甲基紅霉素A，參見美國專利4331803。
另一合成路線包括6-O-甲基紅霉素A-9-肟的甲基化。通過本領域熟知的方法如紅霉素A與羥胺鹽酸鹽在堿存在下的反應或如美國專利5274085中所述在酸存在下與羥胺反應制備6-O-甲基紅霉素A-9-肟。使所述肟與RX反應，其中R是烯丙基或芐基和X是鹵素，導致形成2’-O-3’-N-二烯丙基或二芐基紅霉素A-9-O-烯丙基或芐肟鹵化物。上述的季銨鹽甲基化后，經(jīng)消除R基團后及脫肟反應得到6-O-甲基紅霉素A。參見美國專利4670549。
式II6-O-甲基紅霉素A肟衍生物的甲基化，
其中R是烷基、鏈烯基、取代或未取代的芐基、氧烷基、或取代的苯基硫烷基，R2是苯甲?；蚏3是甲基或苯甲?；?，當R3是苯甲?；鶗r，經(jīng)去保護，脫肟反應和還原性甲基化反應可得到6-O-甲基紅霉素A。參見美國專利4672109。
特別用于6-O-甲基紅霉素A的制備方法包括肟衍生物III的甲基化，
其中R1是鏈烯基、取代的或未取代的芐基或烷氧基烷基，R2是取代的甲硅烷基和R3是R2或H。然后經(jīng)用酸處理一步完成脫保護基和脫肟反應得到6-O-甲基紅霉素A。參見歐洲專利說明書260938 B1和美國專利4990602。
6-O-甲基紅霉素A的優(yōu)選路線列于圖式1中。將由紅鏈絲菌發(fā)酵制備的紅霉素A經(jīng)肟化反應得到肟4，其中R1是烷氧基烷基。通過紅霉素A與取代的羥胺R1ONH2反應，或通過紅霉素A與羥胺鹽酸鹽在堿存在下或與羥胺在酸存在下反應，隨后與R1X反應可以引入基團R1。然后兩個羥基同時被保護，其中R2或R3是相同的，或先后被保護，其中R2和R3是不同的。特別有用的保護基是取代的甲硅烷基如三甲基甲硅烷基、叔-丁基二甲基甲硅烷基，叔-丁基二苯基甲硅烷基等。然后脫去保護基并使化合物脫肟產(chǎn)生6-O-甲基紅霉素A。脫保護/脫肟的順序并不重要。當保護基是取代的甲硅烷基時，通過用酸例如使用甲酸或亞硫酸氫鈉處理可一步完成脫保護和脫肟反應。參見美國專利4990602。
圖示1
根據(jù)本發(fā)明的方法方面，由上述任何方法制備的6-O-甲基紅霉素A可懸浮于所需的溶劑中并加熱至溶劑回流的溫度。然后繼續(xù)加熱并攪拌懸浮液足夠量的時間，以使大部分固體溶解，一般約10分鐘-2小時。然后熱濾懸浮液。若必要，可以加熱濾液至或約溶劑的回流溫度形成澄清溶液。然后緩慢冷卻濾液至室溫并任選在冰-水浴中進一步冷卻。對本說明書的目的而言，室溫是從約20℃至約25℃。然后分離出結(jié)晶的6-O-甲基紅霉素A，優(yōu)選過濾方法和通過在真空爐內(nèi)于室溫至約70℃溫度之間干燥，優(yōu)選從約40至約50℃和在約2吋汞柱和大氣壓之間的壓力下干燥除去任何殘留溶劑來將濕固體轉(zhuǎn)化成6-O-甲基紅霉素A晶形I。
根據(jù)本發(fā)明的方面，其中由溶劑混合物重結(jié)晶6-O-甲基紅霉素A，將6-O-甲基紅霉素A懸浮于第一類溶劑中并加熱至約為該溶劑的回流溫度。然后繼續(xù)加熱并攪拌懸浮液足夠量的時間以使大部分固體溶解，一般約10分鐘至2小時。然后，熱濾懸浮液。若必要可以將濾液加熱至回流形成澄清溶液。然后將第二類溶劑加入熱的濾液中并緩慢冷卻混合物至室溫并在冰浴中任選進一步冷卻。代表性的第二類溶劑包括(但不限于)己烷、庚烷、辛烷、丙酮、甲乙基酮、2-和3-戊酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丁酯、乙醚、二異丙醚、甲基叔-丁基醚、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、1，1-二甲氧乙烷、六甲基磷酰三胺、苯、甲苯和氯苯。第二類溶劑優(yōu)選為5-12個碳原子的烴。最優(yōu)選的第二類溶劑是庚烷。冷卻之后，經(jīng)過濾分離出6-O-甲基紅霉素A結(jié)晶形I并按上述進行干燥。加入的第二類溶劑的用量取決于藥物在第一類溶劑和第二類溶劑中的溶解度，通過本領域常用的一種方法可容易測得。一般比率在約1∶10-約2∶1的第二類溶劑份數(shù)(體積)。優(yōu)選第一類溶劑對第二類溶劑的比率為1∶1份(體積)。
優(yōu)選分離6-O-甲基紅霉素A晶形I的溶劑是乙醇、乙酸異丙酯、四氫呋喃和異丙醇。
最優(yōu)選分離6-O-甲基紅霉素A晶形I的溶劑是乙醇。
藥用組合物本發(fā)明也提供藥用組合物，其中包括6-O-甲基紅霉素A晶形I與一種或多種無毒的藥學上可接受的載體配制?？蓪ｉT配制藥用組合物為口服給藥的固體或液體形式、非腸道注射或直腸給藥。
對人和其它動物可以經(jīng)口服、直腸、非腸道、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(如粉劑、軟膏劑或滴劑)、舌下或作為口腔或鼻腔噴霧劑給予本發(fā)明的藥用組合物。在此所用的術語“胃腸外”給藥指包括靜脈、肌肉、腹膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關節(jié)內(nèi)注射和輸注的給藥模式。
對非腸道注射的本發(fā)明藥用組合物包括藥學可接受的無菌水溶液或非水溶液、分散液、懸浮液或乳化液以及使用前將無菌粉末再組合成無菌可注射溶液或分散液。合適的水溶的和非水溶的載體、稀釋劑、溶劑或溶媒包括水、乙醇、多元醇(如丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等)和其適合的混合物、植物油(如橄欖油)、和可注射的有機酯如油酸乙酯。例如使用包衣材料(如卵磷酯)，在分散的情況下保持所需的粒度和使用表面活性劑來保持適當?shù)牧鲃有浴?br> 所述的組合物也含有輔料如保護劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。為了確保防止微生物的作用可加入各種抗菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、山梨酸苯酚酯等。含有等滲劑如糖、氯化鈉等也是所需的。通過加入延緩吸收劑如單硬脂酸鋁和明膠可引起可注射的藥用形式的延長吸收。
在某些情況下，為了延長藥物的療效，需要從皮下或肌肉注射，可延緩藥物的吸收。這可使用水溶性差的結(jié)晶的或非結(jié)晶原料的液體懸浮液來完成。藥物的吸收取決于其溶解速率，而溶解速率依次取決于結(jié)晶大小和晶形。另外，通過在油性溶媒中溶解或懸浮來完成非腸道給藥形式的延緩吸收。
通過在生物降解聚合物如聚交酯-聚乙交酯中形成藥物的微囊基質(zhì)可制備注射的儲藥形式。根據(jù)藥物對聚合物的比率和所用具體聚合物的性質(zhì)，可以控制藥物的釋放速度，其它生物降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。通過在脂質(zhì)體或為身體組織相容的微乳劑中截留藥物也可制備儲藥可注射的制劑。
例如通過除菌過濾器過濾或?qū)⑾緞┘尤霟o菌固體組合物形式(在使用之前用無菌水或其它無菌可注射的介質(zhì)溶解或分散)來使可注射的制劑滅菌。
口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這樣的固體劑型中，將活性化合物混合于至少一種惰性，藥學上可接受的賦形劑或載體如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或a)填充劑或膨脹劑如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合劑例如像羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯樹膠，c)濕潤劑如甘油，d)崩解劑如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶液抑制劑如石蠟，f)加速吸收劑如季銨化合物，g)潤濕劑例如像十六烷醇和單硬脂酸甘油酯，h)吸收劑如高嶺土和皂土和i)潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和其混合物。在膠囊、片劑和丸劑情況下，劑型也可包括緩沖劑。
使用像乳糖或乳糖這樣的賦形劑以及高分子量聚乙二醇等作為軟和硬填充明膠膠囊的填充劑也可以用于相似類型的固體制劑。
用包衣和外層如腸溶衣和藥學制劑技術上熟知的其它包衣可制備片劑、糖衣丸、膠囊、丸劑和顆粒劑的固體劑型。它們可任選含有不透明劑和也是僅釋放活性成分的制劑或優(yōu)選在某部分腸道，優(yōu)選以延緩方式釋放。所用的包埋組合物實例包括聚合物和蠟。
活性化合物也可以是微囊包裹制型，若合適與一種或多種上述賦形劑組合。
口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳化劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。除活性化合物外，液體劑型可含有本領域中所常用的惰性稀釋劑，例如像水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉仔油、落花生油、谷物油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氫呋喃基醇、聚乙二醇和脫水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服制劑也包括輔料如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑，甜味劑、調(diào)味劑和香味劑。
除活性化合物外，懸浮液可含有懸浮劑例如像乙氧化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯，微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)皂土、瓊脂和黃蓍膠及其混合物。
直腸或陰道給藥的制劑優(yōu)選栓劑，通過將本發(fā)明化合物與合適的非刺激性的賦形劑或載體如可可脂、聚乙二醇混合或在室溫為固體但在體溫為液體的栓劑蠟來制備，因而可在直腸或陰道腔融化并釋放活性化合物。
本發(fā)明化合物也可以是脂質(zhì)體形式給藥。如本領域所熟知，脂質(zhì)體一般衍生于磷脂或其它脂質(zhì)物質(zhì)。通過分散于含水介質(zhì)中的單一或多薄層水化液晶來形成脂質(zhì)體?？梢允褂萌魏螣o毒、生理上可接受的和能形成脂質(zhì)體的可代謝脂質(zhì)。除本發(fā)明化合物外，本發(fā)明的脂質(zhì)體形式的制劑可含有穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂質(zhì)是磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)，兩者可以是天然的和合成的。
本領域熟知形成脂質(zhì)體的方法。例如見Prescott，Ed.，Methods inCell Biology，Volume XIV，Academic Press，New York，N，Y，(1976)，P.33 et seq。
本發(fā)明化合物的表面給藥劑型包括粉劑、噴霧劑、軟膏劑和吸入劑、在無菌條件下將活性化合物混合于藥學上可接受的載體和任何需要的防腐劑、緩沖劑或拋射劑(需要時)中。眼科(Opthalmic)用制劑、眼膏、粉劑和溶液也設計在本發(fā)明范圍內(nèi)。
對特定患者、制劑及給藥模式而言，本發(fā)明的藥用制劑中活性成分的實際劑量水平是可以改變的，以使獲得有效取得所需的治療反應的活性化合物用量。選擇劑量水平將取決于特定化合物的活性，給藥途徑、所治療病癥的嚴重性和所治療患者的癥狀和治療史。然而，在本領域技術人員內(nèi)開始的化合物劑量水平低于所要求取得所需的治療效果的用量并逐步增加劑量直到取得所需的效果為止。
對哺乳綱病者每天每公斤體重一般給予約1至約1000mg，更優(yōu)選約5至約200mg的6-O-甲基紅霉素A晶形I的劑量水平。若所需，有效的日劑量可以分為多次劑量的給藥方式，如每日分為2-4次分開的劑量。
提供下面實施例使本領域技術人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明，但僅僅為說明本發(fā)明。它們并不構(gòu)成如權(quán)利要求中所定義的對本發(fā)明范圍的限制。
實施例1制備6-O-甲基紅霉素晶形I根據(jù)美國專利4990602的方法，通過C-9羰基的肟化、C-2’和C-4”羥基的保護、C-6羥基的甲基化、脫肟和除去保護基團和由乙醇重結(jié)晶從紅霉素A制備6-O-甲基紅霉素A。在真空干燥箱(40-45℃，4-8吋汞柱)中干燥經(jīng)重結(jié)晶得到的物質(zhì)獲得6-O-甲基紅霉素A晶形I。
通過紅外光譜、示差掃描量熱法(DSC)熱分析圖和粉末X-線衍射圖樣鑒定6-O-甲基紅霉素A晶形I。通過本領域已知方法可得到示差掃描量熱法熱分析圖并表示于圖1C中。在圖1C中，在132.2℃可見放熱傳遞，確信是由相變引起的。在223.4℃也可見吸熱峰，由熔化引起。在283.3℃的另一個吸熱峰后跟隨著306.9℃的放熱峰，可由分解引起。DSC掃描后，樣品呈黑色。
用本領域熟知的方法可獲得粉末X-線衍射圖樣。圖1a顯示了粉末X-線衍射圖譜。在6-O-甲基紅霉素A晶形I的粉末X-線衍射圖樣中2-θ角位是5.16°±0.2、6.68°±0.2、10.20°±0.2、12.28°±0.2、14.20°±0.2、15.40°±0.2、15.72°±0.2和16.36°±0.2。
實施例2將6-O-甲基紅霉素晶形I晶體轉(zhuǎn)化成晶形II晶體將實施例1制備的6-O-甲基紅霉素A晶形I晶體(0.40g)置于管形瓶中并在真空干燥箱(4-9吋汞柱，100-110℃)加熱18小時得到6-O-甲基紅霉素A晶形II晶體。6-O-甲基紅霉素A晶形II熔點為223.4℃。在6-O-甲基紅霉素A晶形II的示差掃描量熱法熱分析圖中可在283.3℃見到吸熱峰。這是由分解引起的。DSC掃描后，樣品呈黑色。在6-O-甲基紅霉素A晶形I的粉末X-線衍射圖樣中2-θ角位是8.52°±0.2、9.48°±0.2、10.84°±0.2、11.48°±0.2、11.88°±0.2、12.36°±0.2、13.72°±0.2、14.12°±0.2、15.16°±0.2、16.48°±0.2、16.92°±0.2、17.32°±0.2、18.08°±0.2、18.40°±0.2、19.04°±0.2、19.88°±0.2和20.48°±0.2。
實施例3通過重結(jié)晶分離6-O-甲基紅霉素晶形I從四氫呋喃重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(20g)的四氫呋喃(100ml)的混合物溫熱至回流并攪拌15分鐘。過濾熱溶液除去極少量的不溶物質(zhì)并冷卻至室溫。無結(jié)晶生成，所以將10g 6-O-甲基紅霉素A加入溶液中并再加熱懸浮液至回流，熱過濾，在冰浴中冷卻。經(jīng)過濾收集得到的固體并在真空干燥箱(40-45℃，4-8吋汞柱)中干燥得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(16.74g)。
從異丙醇重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(15g)和異丙醇(100ml)的混合物溫熱至回流并加熱20分鐘。過濾熱溶液除去極少量的不溶物質(zhì)。將濾液轉(zhuǎn)移至只用50ml異丙醇輕洗的另一燒瓶中并再加熱溶液至回流。然后緩慢冷卻澄清溶液至室溫并放置7小時。經(jīng)過濾收集得到的固體并在真空干燥箱(40-45℃，4-8吋汞柱)中干燥得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(13.3g)。
從乙酸異丙酯重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(10g)和乙酸異丙酯(100ml)的混合物溫熱至73℃。過濾熱溶液除去少量不溶物質(zhì)。然后將澄清溶液緩慢冷卻至室溫。經(jīng)過濾收集得到的固體并在真空干燥箱(40-45℃，4-8吋汞柱)干燥得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(3.6g)。
從乙酸異丙酯-庚烷重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(10g)和乙酸異丙酯(100ml)的混合物溫熱至回流。經(jīng)過濾除去少量不溶物質(zhì)并將濾液轉(zhuǎn)移至另一容器中。用乙酸異丙酯(5ml)輕洗濾瓶并合并濾液和洗液，加熱至回流。向得到的澄清溶液加入庚烷(100ml)并冷卻澄清溶液至室溫1.5小時以上，其間形成沉淀。經(jīng)過濾收集固體并在真空干燥箱(45-50℃、4-8吋汞柱)干燥過夜得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(7.0g)。
從乙酸異丙酯-N，N-二甲基甲酰胺重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(12g)和乙酸異丙酯(100ml)的混合物溫熱至回流。經(jīng)過濾除去少量不溶物質(zhì)并將濾液轉(zhuǎn)移至另一容器中。將濾液加熱至回流，加入N，N-二甲基甲酰胺(30ml)。將澄清溶液冷卻至室溫1.5小時以上，其間形成沉淀，經(jīng)過濾收集固體并在真空干燥箱(49-50℃，4-8吋汞柱)中干燥過夜，得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(6.4g)。
從四氫呋喃-庚烷重結(jié)晶向如實施例1所述制備的6-O-甲基紅霉素A(10g)的四氫呋喃(75ml)澄清溶液加入庚烷(150ml)。將得到的混濁溶液加熱至71.5℃，在此溫度點溶液變清。將混合物冷卻至室溫2小時以上，然后在冰-水浴中冷卻0.5小時。過濾得到的固體并在真空干燥箱(45-50℃，3-4吋汞柱)中干燥4天得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(0.50g)。
從乙醇-庚烷重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(10g)和乙醇(100mol)的混合物溫熱至回流。經(jīng)過濾除去少量不溶物質(zhì)并將濾液轉(zhuǎn)移至另一容器中。用乙醇(20ml)輕洗濾瓶，合并濾液和洗液并在78℃加熱，直至得到澄清溶液為止。向澄清溶液加入庚烷(100ml)并緩慢地冷卻澄清溶液至室溫并攪拌4天。經(jīng)過濾收集得到的固體并在真空干燥箱(45-50℃，4-8吋汞柱)中干燥得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(4.5g)。
從異丙醇-庚烷重結(jié)晶將如實施例1中所述制備的6-O-甲基紅霉素A(4.0g)和異丙醇(50ml)的混合物溫熱至回流。加入庚烷(50ml)并緩慢冷卻溶液至室溫，然后在冰-水浴中冷卻。經(jīng)過濾收集得到的固體并在真空干燥箱(4-8吋汞柱)中干燥得到6-O-甲基紅霉素A晶形I(3.6g)。
實施例46-O-甲基紅霉素晶形I和II的溶解速率使用恒定表面積(13/32”直徑)的藥塊，在37℃于300ml的0.05M磷酸鹽緩沖液中在60rpm下進行溶解性研究。定時除去等分量(alliquote)并經(jīng)HPLC[5cm×4.6mm 3μODS-2“Little Champ”(Regis)柱；50∶50乙腈-0.05M pH4.0磷酸鹽緩沖液流動相；1.0ml/min流速]直接測定。如表1所示6-O-甲基紅霉素A晶形I的固有溶解速率比晶形II約大3倍。
表16-O-甲基紅霉素A晶形I和II的固有溶解速率晶形 溶解速率±SD(μg/min/cm2)I 636±2.5II 203±14為說明目的提供上述實施例，但并不限制本發(fā)明的范圍。對本領域技術人員來說，明顯的改變和變化均在如附錄的權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的范圍和本質(zhì)內(nèi)。
權(quán)利要求
1.名為6-O-甲基紅霉素A晶形I的化合物，其在粉末X-線衍射2-θ的特征峰值為5.16°±0.2、6.68°±0.2、10.20°±0.2、12.28°±0.2、14.20°±0.2、15.40°±0.2、15.72°±0.2和16.36°±0.2，或其藥學上可接受的鹽。
2.包括治療有效量的6-O-甲基紅霉素A晶形I與藥學上可接受的載體組合的制劑。
3.對需要此種治療的宿主哺乳動物治療細菌感染的方法，該方法包括對所述哺乳動物給予治療有效量的6-O-甲基紅霉素A晶形I。
4.制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其包括(a)將紅霉素A轉(zhuǎn)化為6-O-甲基紅霉素A；(b)用選自下面的溶劑處理6-O-甲基紅霉素A(i)乙醇(ii)乙酸異丙酯，(iii)異丙醇，(iV)四氫呋喃，和(V)兩類溶劑的混合物，第一類溶劑選自乙醇、乙酸異丙酯、異丙醇和四氫呋喃和第二類溶劑選自5-12個碳原子的烴，3-12個碳原子的酮，3-12個碳原子的羧酸酯，4-10個碳原子的醚，苯，用選自下面一個或多個取代基取代的苯1-4個碳原子的烷基，1-4個碳原子的烷氧基，硝基，和鹵素，和極性非質(zhì)子溶劑；(c)分離步驟(b)中形成的結(jié)晶的6-O-甲基紅霉素A；和(d)在室溫至約70℃的溫度下干燥步驟(c)中分離的6-O-甲基紅霉素A形成6-O-甲基紅霉素A晶形I。
5.權(quán)利要求4的方法，其中在從約40℃至約50℃的溫度干燥所述的6-O-甲基紅霉素A。
6.權(quán)利要求4的方法，其中步驟(a)包括(i)將紅霉素A轉(zhuǎn)化成紅霉素A 9-肟衍生物；(ii)保護步驟a中制備的紅霉素A 9-肟衍生物的2’和4”羥基；(iii)使步驟b的產(chǎn)物與甲基化試劑反應；(iv)將步驟C產(chǎn)物脫保護和脫肟形成6-O-甲基紅霉素A。
7.權(quán)利要求6的方法，其中6-O-甲基紅霉素A是在從約40℃至約50℃溫度下進行干燥的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述溶劑選自(a)乙醇，(b)乙酸異丙酯，(c)異丙醇，和(d)四氫呋喃。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述的溶劑是乙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述溶劑包括兩類溶劑的混合物，第一類溶劑選自乙醇、乙酸異丙酯、異丙醇和四氫呋喃和第二類溶劑選自5-12個碳原子的烴，3-12個碳原子的酮，3-12個碳原子的羧酸酯，4-10個碳原子的醚，苯，用選自下面一個或多個取代基取代的苯1-4個碳原子的烷基，1-4個碳原子的烷氧基，硝基，和鹵素，和極性非質(zhì)子溶劑；
11.根據(jù)權(quán)利要求10的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述第二類溶劑是5-12個碳原子的烴。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述第二類溶劑是庚烷。
13.根據(jù)權(quán)利要求7的制備6-O-甲基紅霉素A晶形I的方法，其中所述溶劑選自(a)乙醇，(b)乙酸異丙酯，(c)異丙醇，(d)四氫呋喃(e)乙酸異丙酯-庚烷，(f)乙酸異丙酯-N，N-二甲基甲酰胺，(g)四氫呋喃-庚烷，(h)乙醇-庚烷，和(i)異丙醇-庚烷。
14.根據(jù)權(quán)利要求7的方法制備的6-O-甲基紅霉素晶形I。
全文摘要
本發(fā)明涉及新抗生素6－O－甲基紅霉素A晶形Ⅰ,其制備方法,包括所述化合物的藥物制劑和作為治療劑的應用方法。
文檔編號A61P31/04GK1229411SQ97196819
公開日1999年9月22日 申請日期1997年7月25日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月29日
發(fā)明者劉日華, D·A·里萊, S·G·斯潘頓 申請人:艾博特公司