專利名稱：：含有穩(wěn)定生物有效化合物的組合物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的領(lǐng)域是通過使用一種多組分配制系統(tǒng)對(duì)含有穩(wěn)定生物有效化合物的組合物的應(yīng)用。酶的局部應(yīng)用在化妝品和制藥領(lǐng)域已有描述。例如，蛋白酶的使用被認(rèn)為維持或替代了去皮劑中的α-羥酸(日本專利申請(qǐng)?zhí)朖04027388)。谷胱甘肽巰基氧化酶被認(rèn)為可用于發(fā)型固定中(日本專利申請(qǐng)?zhí)朖04005220)。另外，國(guó)際專利申請(qǐng)WO93/19731中描述了使用糖苷酶以改善去皮步驟并提到了溶菌酶在處理痤瘡中的應(yīng)用(HUT057608)。最近公開了許多使用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的專利申請(qǐng)(WO94/18945，J02204407)。然而，在液體含水組合物中的酶的有限的存儲(chǔ)穩(wěn)定性被認(rèn)為是對(duì)這些酶進(jìn)行廣泛應(yīng)用的主要限制因素。含酶的商品試劑通常利用酶在干燥狀態(tài)下的存儲(chǔ)穩(wěn)定性。根據(jù)這一構(gòu)思，銷售含酶產(chǎn)品的最簡(jiǎn)單的辦法是將酶與產(chǎn)品分開輸送，比如將酶壓成合適的片狀。在另外的方法中，可將干燥的酶粉末均勻地分散于一種基本上無水的疏水基料中，例如一種與油脂膠凝劑組合的合適的油脂。第一種方法的缺點(diǎn)是在含水組合物中所需進(jìn)行的酶片劑的溶解是緩慢的和不方便的?？紤]第二種方法，應(yīng)該提到的是酶需要水來活化。為了提高效率，水相和油相的混合通常需要相對(duì)較高的能量輸入而不能通過簡(jiǎn)單的手工混合來完成。因此，含水組合物與含酶的疏水相的混合被認(rèn)為是效率很低的。在實(shí)際應(yīng)用中可以通過使用用于局部應(yīng)用的在水相中穩(wěn)定的酶組合物來避免上述問題的發(fā)生。不幸的是，含水酶組合物中需要高濃度的可溶于水的穩(wěn)定劑以降低組合物中的水活度。多元醇經(jīng)常被用于這一目的，而且只有在多元醇的濃度剛好高于40％(V/V)時(shí)才能達(dá)到長(zhǎng)期的穩(wěn)定性。然而，在含有高濃度多元醇的組合物中，酶通常不具有活力。尤其是對(duì)用這種方法穩(wěn)定的酶組合物的直接應(yīng)用將不能提供足夠的水以使酶重新活化。另外，在組合物中這樣高濃度的多元醇的存在在局部應(yīng)用中被認(rèn)為是不可接受的。因此，在水環(huán)境中穩(wěn)定酶所需的高多元醇濃度阻止了對(duì)用這種方法穩(wěn)定的含水酶組合物的直接應(yīng)用。另一個(gè)能夠有效地使用酶的領(lǐng)域是洗衣業(yè)中的手洗領(lǐng)域。盡管在歐洲與北美，與手洗相比人們更傾向于機(jī)洗，但是對(duì)于易損的織物來說手洗還是普遍的。對(duì)于具有易損織物的少數(shù)毛織品和絲織品，污漬的去除、防止織物起球、顏色的復(fù)原以及織物的收縮仍然存在著很大的問題。這類特殊的織物需要特殊的酶，例如在中性pH值附近和/或低溫下具有活力的蛋白酶，或諸如蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶的硫橋重排酶，其作用是防止洗滌過程中對(duì)毛織品的損壞(EP276547)。這種使用范圍狹窄的產(chǎn)品的缺點(diǎn)是它們顯然不適于降低廣泛使用的洗滌劑的成本或酶配方的開發(fā)。同樣地，除了酶之外，已知還有許多生物有效化合物在含水的最終組合物中是不穩(wěn)定的，這些組合物適合于在特定用途中的直接應(yīng)用。通常，諸如酶、抗生素、維生素、多不飽和化合物以及類似的生物有效化合物在含水組合物中長(zhǎng)期存儲(chǔ)會(huì)失去它們的活性。盡管已知有特殊的配方，其中穩(wěn)定地含有上述生物有效化合物，但目前的配方通常還不適于在所希望的用途中直接地使用。本發(fā)明涉及一種配制系統(tǒng)，其中分別裝有第一和第二含水組合物，第一組合物是一種含有被穩(wěn)定配制的生物有效化合物的組合物，其中在通過配制而混合時(shí)，第一和第二組合物形成一種最終的組合物，而其中最終的組合物對(duì)于以活性形式應(yīng)用上述生物有效化合物是有利的。在本發(fā)明的配制系統(tǒng)中分別裝有一種包含一種穩(wěn)定生物有效化合物的含水組合物以及一種含水的基礎(chǔ)組合物。使用該配制系統(tǒng)能夠同時(shí)輸送兩種含水組合物。在輸送過程中，兩種組合物都被混合，導(dǎo)致了含有穩(wěn)定生物有效化合物的組合物在基礎(chǔ)組合物中的稀釋，產(chǎn)生了一種適于直接應(yīng)用的最終組合物。用于本發(fā)明配制系統(tǒng)的優(yōu)選的生物有效化合物是酶、維生素、多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素、二羥基丙酮以及醛類香料。本發(fā)明的配制系統(tǒng)特別適于生物有效化合物的局部應(yīng)用。在本發(fā)明的配制系統(tǒng)中分別裝有一種含有一種被穩(wěn)定配制的生物有效化合物的含水組合物以及一種含水的基礎(chǔ)組合物。使用上述配制系統(tǒng)能夠同時(shí)輸送含有一種被穩(wěn)定配制的生物有效化合物的含水組合物(在本發(fā)明中通稱為“有效組合物”或“第一組合物”)以及含水的基礎(chǔ)組合物(也被稱作“第二組合物”)。在輸送過程中，或者在原位、或者在配制系統(tǒng)中，兩種組合物都被混合。兩種組合物的混合形成了一種最終組合物，其中含有處于活性狀態(tài)的生物有效化合物，它還適于直接的使用。術(shù)語“基礎(chǔ)組合物”是指一種與含有生物有效化合物的含水組合物組合時(shí)產(chǎn)生一種最終組合物的組合物，該最終組合物適于對(duì)生物有效化合物的直接應(yīng)用?；A(chǔ)組合物的性質(zhì)將主要取決于所希望的用途。已知含水基礎(chǔ)組合物中含有水包油乳化劑。優(yōu)選地，含水基礎(chǔ)組合物是一種適用于局部、洗滌劑或清潔用途的組合物。更優(yōu)選地，含水基礎(chǔ)組合物是一種適用于局部應(yīng)用的組合物。最優(yōu)選地，含水基礎(chǔ)組合物是一種適用于化妝品的組合物。含水基礎(chǔ)組合物可以是一種膏狀物、一種凝膠、一種香波、一種清潔液、一種洗液、一種液體洗滌劑、一種硬表面清潔組合物以及類似的物質(zhì)。適合于在本發(fā)明的配制器中使用的生物有效化合物是那些能夠顯示生物活性而且在含水的最終組合物中不穩(wěn)定的化合物，在該最終組合物中應(yīng)該可以應(yīng)用這些生物有效化合物。另外，適合于在本發(fā)明的配制器中使用的生物有效化合物是那些為它們開發(fā)了穩(wěn)定含水組合物的化合物，而該穩(wěn)定組合物不適于在所希望的用途中直接使用。適合于在本發(fā)明的配制器中使用的生物有效化合物就獲得化合物的來源以及該化合物的性質(zhì)來說是有分別的。就生物有效化合物的來源來說，該化合物可從動(dòng)物、植物以及微生物來源中獲得。優(yōu)選地，該化合物從微生物或植物來源中獲得。更優(yōu)選地，該化合物從微生物來源中獲得。就生物有效化合物的性質(zhì)來說，該化合物選自初級(jí)和次級(jí)代謝產(chǎn)物，優(yōu)選是選自酶、抗生素、(多)不飽和化合物、維生素、香料、二羥基丙酮，更優(yōu)選是選自酶、維生素、多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素、醛類香料化合物以及二羥基丙酮。在水存在的環(huán)境中生物有效化合物的不穩(wěn)定性在長(zhǎng)期存儲(chǔ)后尤其明顯，這可能是由于其化學(xué)性質(zhì)引起的，例如由結(jié)構(gòu)損壞(例如酶和其它蛋白質(zhì)的變性)、氧化侵蝕以及諸如非最適pH值的其它不利條件而導(dǎo)致的不穩(wěn)定。氧氣、光以及來自微量鐵或銅的金屬離子的存在會(huì)對(duì)生物有效化合物產(chǎn)生有害的氧化作用，這些化合物包括維生素、類胡蘿卡素、(多)不飽和油脂以及(多)不飽和脂肪酸(例如參見CRCHandbookofFoodAdditives，secondedition)。另外，在水存在的環(huán)境中微生物的生長(zhǎng)或者含有生物有效化合物的含水組合物的物理不穩(wěn)定性可能也是導(dǎo)致不穩(wěn)定性產(chǎn)生的原因?；趯?dǎo)致生物有效化合物不穩(wěn)定的因素，開發(fā)了一種穩(wěn)定的含水配方，舉例來說，其特征在于下述的一個(gè)或幾個(gè)條件低的水活度、或低或高的pH、高濃度的抗氧化劑、高濃度的多價(jià)螯合劑、高濃度的抗微生物劑、生物有效化合物的結(jié)晶以及高濃度的增粘劑。通常，在含水組合物中穩(wěn)定生物有效化合物所需的上述條件不允許直接使用上述含水組合物。本發(fā)明的配制系統(tǒng)能夠使用較高濃度的化學(xué)穩(wěn)定劑以得到原本不穩(wěn)定的生物有效化合物的穩(wěn)定組合物，即該濃度可以比最終組合物中允許的濃度高很多，原因是配制時(shí)穩(wěn)定劑被含水的基礎(chǔ)組合物稀釋。合適的穩(wěn)定劑包括諸如鹽類或多元醇的水活度降低劑、諸如EDTA的多價(jià)螯合劑、肌醇六磷酸鹽或葡糖酸鹽或諸如亞硫酸鹽的抗氧化劑、谷胱甘肽、半胱氨酸或抗壞血酸。在本發(fā)明的另一方面，配制系統(tǒng)的使用保證了在基礎(chǔ)組合物中稀釋了有效組合物后，生物有效化合物能夠達(dá)到有效的濃度。因此，生物有效化合物可以以一種比所需要的有效濃度更高的濃度存在于有效組合物中。在這樣的高濃度下，許多生物有效化合物在含水組合物中是不溶的。這意味著生物有效化合物可以以晶體形式存在。這種晶體形式對(duì)于保證化合物的穩(wěn)定性是十分有利的。然而，對(duì)于包含有結(jié)晶化合物的組合物來說，一個(gè)重要的問題是在該組合物中結(jié)晶易于沉淀，也就是說這種組合物在物理上是不穩(wěn)定的。本發(fā)明揭示了通過使用合適的增粘劑可以防止結(jié)晶化合物的沉淀。所述增粘劑最好能在含水環(huán)境中形成一種三維網(wǎng)絡(luò)。更優(yōu)選該增粘劑選自合成生物聚合膠(xanthan)、Carbopol或相關(guān)的樹脂或者角叉膠。最優(yōu)選地，該增粘劑是合成生物聚合膠。合適的增粘劑的濃度主要取決于維持在懸浮液中的顆粒的重量和大小。合適的濃度范圍為0.1-3％，優(yōu)選為0.2-0.6％。本發(fā)明的配制系統(tǒng)能夠通過與基礎(chǔ)組合物一起分散來稀釋存在于含有生物有效化合物的組合物中的穩(wěn)定劑。本發(fā)明的配制系統(tǒng)還能夠?qū)⒂行ЫM合物稀釋至有效的濃度。含有生物有效化合物的組合物(有效組合物)在基礎(chǔ)組合物中的稀釋倍數(shù)被合適地選擇，即在這種情況下穩(wěn)定劑的最終濃度不會(huì)妨礙最終組合物的使用，而且此時(shí)生物有效化合物以其合適的有效濃度存在于最終組合物中。稀釋倍數(shù)取決于配制系統(tǒng)所輸送的有效組合物和基礎(chǔ)組合物的比率。優(yōu)選地，有效組合物和基礎(chǔ)組合物的比率從1∶1變化為1∶50，更優(yōu)選是從1∶2到1∶20，最優(yōu)選的比率是1∶5到1∶10。根據(jù)本發(fā)明，有效組合物的粘度值優(yōu)選與基礎(chǔ)組合物的粘度相類似，其中基礎(chǔ)組合物與含有生物有效化合物的組合物同時(shí)使用。例如，兩種組合物都可具有洗液狀的、膏狀的或凝膠狀的粘稠度。另外，有效組合物的粘度將取決于用于輸送組合物的配制系統(tǒng)的類型。例如，管的使用需要兩種組合物的相對(duì)較高的濃度。將要加入到有效組合物中的增粘劑的量將取決于所希望的該組合物的粘度。本領(lǐng)域的技術(shù)人頁已知的任何增粘劑，只要它適用于最終組合物以及所希望的用途，就可以使用。例如，對(duì)于局部應(yīng)用來說就要考慮其對(duì)于局部應(yīng)用的可接受性。增粘劑的例子包括角叉膠、織物素衍生物、聚丙烯酸、粘土、聚乙二醇、諸如合成生物聚合膠的氫化膠體。如果需要的話，可以將某些試劑加入到有效組合物和/或基礎(chǔ)組合物中，這樣兩種組合物就可具有相同或不同的外觀。這種試劑的典型的例子是染色劑。已知含水的有效組合物中包含水包油乳化劑。為獲得易于氧化的含有生物有效化合物的組合物的理想的存儲(chǔ)穩(wěn)定性，氧氣的透過性很低的非半透明(non-translucent)的包裝材料將是理想的。本發(fā)明的配制系統(tǒng)提供了這樣一種可能，即將含有生物有效化合物的組合物填充在由即使在高濕度下也具有極低的氧氣透過率的非半透明材料制成的小室中，其目的是使光的作用和氧氣的侵入減至最小。優(yōu)選的包裝材料包括PVdC、EVOH和礬土涂覆的聚合物(參見FoodManufacture，June1991，pp49-53)。如果在大容量的配制器中使用，另外的要求是使用一臺(tái)無空氣的洗液泵來配制生物有效化合物。將要在本發(fā)明的方法中使用的配制系統(tǒng)對(duì)于本發(fā)明來說不是關(guān)鍵的。本發(fā)明考慮了任何能夠分別容納穩(wěn)定的有效組合物和基礎(chǔ)組合物的系統(tǒng)。分別的容納被認(rèn)為包括任何形式的隔離方式，它能夠阻止水從一種組合物向另一種組合物的顯著的擴(kuò)散。例如，一種配制系統(tǒng)可從多組分配制系統(tǒng)中選出，它被開發(fā)用于包裝和輸送不相容化學(xué)物質(zhì)，即當(dāng)接觸時(shí)相互之間發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。例如，多組分配制器已知是來自粘合劑領(lǐng)域。多組分粘合劑的包裝需要樹脂與固化劑完全分開。還有就是方便的使用方法要求同時(shí)輸送兩種組分。除了粘合劑外，多組分配制系統(tǒng)還在牙膏的不相容化合物的配制中得到了描述。具有兩個(gè)小室的軟管牙膏描述于美國(guó)專利US4,487,757、US4,098,435和US4,211,341中。后者公開了對(duì)諸如在多元醇溶液中的羧甲基織物素凝膠的可擠壓物質(zhì)的使用，其目的是分隔不相容的化合物。一種把無水的酶組合物與含水的牙膏組合物分隔存儲(chǔ)的具有兩個(gè)小室的管被描述于FR2,051,922。在另一個(gè)極為簡(jiǎn)單的方法中，一對(duì)塑料袋只能提供單獨(dú)使用的物質(zhì)。兩個(gè)袋的出口彼此之間很近，其內(nèi)容物的排出可以通過撕開袋的末端完成(德國(guó)專利申請(qǐng)DE3,630,849)。本發(fā)明還考慮了在分隔的容器中配制和存儲(chǔ)穩(wěn)定的有效組合物和基礎(chǔ)組合物，分隔的容器被置于一起和/或由使用者提供一個(gè)合適的配制器。也可能的情況是已經(jīng)提供了盛有一種組合物(例如穩(wěn)定的有效組合物)的容器的配制系統(tǒng)又另外提供了盛有其它組合物(例如基礎(chǔ)組合物)的容器。本發(fā)明的配制系統(tǒng)可被方便地用于任何用途，在該用途中，生物有效化合物的不穩(wěn)定作用是所期望的。本發(fā)明的配制系統(tǒng)特別地提供了一種用于所感興趣的生物有效化合物的局部應(yīng)用的方便和簡(jiǎn)單的方法。已知所述的局部應(yīng)用包括在皮膚和毛發(fā)上的應(yīng)用以及在口腔中的應(yīng)用，例如在牙齒上的應(yīng)用?，F(xiàn)在借助一些生物有效化合物來闡述本發(fā)明的配制系統(tǒng)的適用性。酶通常，用高濃度的水活度降低劑—諸如多元醇或鹽類—來穩(wěn)定含水的酶組合物，最好用多元醇來穩(wěn)定。使用本發(fā)明的配制器，酶和基礎(chǔ)組合物的混合導(dǎo)致了酶組合物在基礎(chǔ)組合物中的實(shí)際上的稀釋。在酶組合物中諸如多元醇的高濃度物質(zhì)保證了稀釋后酶的活力，即使酶組合物經(jīng)過了長(zhǎng)時(shí)間的存儲(chǔ)也是如此。上述的酶組合物的稀釋導(dǎo)致了多元醇的稀釋，從而又導(dǎo)致了酶被重新激活。根據(jù)所使用的酶和多元醇，可以預(yù)計(jì)酶的重新激活在多元醇濃度低于40％w/w時(shí)開始。由配制系統(tǒng)所輸送的酶組合物和基礎(chǔ)組合物的比率取決于諸如酶組合物中的多元醇濃度等因素，該比率應(yīng)調(diào)節(jié)至能夠保證酶的重新激活。另外，如果希望進(jìn)行局部使用，上述比率應(yīng)按如下方式調(diào)節(jié)，即在將酶與基礎(chǔ)組合物混合后，多元醇的濃度水平不超過用于局部配方的可接受的水平。使用本發(fā)明的配制系統(tǒng)能對(duì)任何感興趣的酶進(jìn)行穩(wěn)定配制和應(yīng)用。優(yōu)選地，感興趣的酶從下組酶中選出氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶或異構(gòu)酶。更優(yōu)選地，該酶是葡萄糖氧化酶、過氧化物酶、脂肪氧合酶、超氧化物歧化酶、酪氨酸酶、蛋白酶、磷酸酶、肌醇六磷酸酶、糖苷酶、變位酶(α-1，3-葡聚糖酶)、葡聚糖酶、溶菌酶、脂肪酶、磷脂酶、硫酸酯酶、脲酶、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶或蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶。也可以使用含有兩種或多種酶的混合物的穩(wěn)定的組合物。在酶組合物中酶的濃度主要取決于其用途的類型。本發(fā)明還考慮了酶以顆粒形式配制的酶組合物。以顆粒形式配制的酶大大減小了產(chǎn)生致敏作用的危險(xiǎn)，致敏作用可能是由于使用完干燥后的酶分子的潛在吸入物而產(chǎn)生。優(yōu)選地，以顆粒形式配制的酶的顆粒大小至少為約5-10μm。酶顆粒大小的上限的主要決定因素是較大的顆粒將具有不利的表面載荷而且在用于皮膚時(shí)會(huì)產(chǎn)生一種砂礫狀的感覺。顆粒大小的上限通常為大約100μm。獲得大小至少為約5-10μm的酶顆粒的一種方法是將酶共價(jià)固定化在合適的載體上，參見MethodinEnzymology，vol.44(1976)中描述的方法。另一個(gè)合適的顆粒形式的例子是所謂的Chi-roCLEC(AltusBiologicsInc.，Cambridge，MA，USA)，它包含交聯(lián)的酶晶粒。這些交聯(lián)的酶顆粒不需要諸如多元醇的穩(wěn)定配方用的水活度降低劑的存在；由于它們的晶體形式，它們?cè)诤M合物中是化學(xué)穩(wěn)定的。但是還需要加入水活度降低劑以改進(jìn)含水組合物的微生物穩(wěn)定性。對(duì)用來穩(wěn)定酶組合物的多元醇的選擇對(duì)于本發(fā)明來說不是十分關(guān)鍵的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的能夠在水溶液中有效地穩(wěn)定酶的任何多元醇都可以使用。十分有效的多元醇從下組多元醇中選出甘油、山梨醇、丙二醇、麥芽糖糊精，或者從下組糖中選出蔗糖、乳糖、葡萄糖或海藻糖。為了局部應(yīng)用，應(yīng)該考慮一種在局部使用時(shí)可接受的多元醇，即甘油、聚乙二醇、丁二醇、丙二醇、海藻糖或山梨醇。在高濃度下使用多元醇，即該濃度能夠使酶組合物有足夠低的水活力以恰當(dāng)?shù)胤€(wěn)定酶。在本
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)已知這些濃度將隨所使用的多元醇而有某些改變。優(yōu)選地，多元醇在20-90％的濃度下使用，更優(yōu)選的濃度是30-90％，再優(yōu)選一點(diǎn)的濃度是40-90％，再優(yōu)選一點(diǎn)的濃度是50-90％，最優(yōu)選的濃度是60-80％。在含水組合物中較低的水活度對(duì)防止組合物中微生物的生長(zhǎng)也是有利的。除了多元醇外，諸如NaCl的鹽類也可被用于在產(chǎn)品的存儲(chǔ)過程中促進(jìn)酶的穩(wěn)定性。為進(jìn)一步提高酶的穩(wěn)定性，可以加入低濃度的酶穩(wěn)定劑，例如還原劑、鈣鹽或底物或與底物有關(guān)的配體(Gray，1993，Thermostab.Enzymes，pp.124-143.Narosa，NewDelhi)。可選擇性地向酶組合物中加入增粘劑，尤其是當(dāng)加入多元醇或其它有關(guān)組分后酶組合物的濃度不如希望的高時(shí)。將要加入到酶組合物中的增粘劑的量取決于被用于穩(wěn)定酶組合物的多元醇的增粘特性以及所希望的酶組合物的粘度。如果使用固定化的或結(jié)晶的酶制劑，酶組合物的粘度應(yīng)該能防止酶顆粒的沉淀。優(yōu)選地，如上所述，所使用的增粘劑應(yīng)該能夠在含水組合物中形成一種三維的網(wǎng)絡(luò)。根據(jù)本發(fā)明，酶組合物將與適當(dāng)?shù)暮A(chǔ)組合物被基本上同時(shí)輸送。對(duì)于本發(fā)明來說，含水基礎(chǔ)組合物的性質(zhì)不是很重要，它將主要取決于所希望的用途的類型。還應(yīng)注意避免含水基礎(chǔ)組合物中含有能夠使酶在瞬間失活的組分。對(duì)化妝品洗液來說，一種能夠使酶失活的組分的典型例子是高濃度的乙醇。本發(fā)明的配制系統(tǒng)可被方便地用于任何需要酶作用的用途中。本發(fā)明的配制系統(tǒng)尤其提供了一種對(duì)所感興趣的酶進(jìn)行局部應(yīng)用的方便和簡(jiǎn)單的方法。局部用于本發(fā)明的配制器中的優(yōu)選的酶是蛋白酶。本發(fā)明的配制系統(tǒng)還適于同時(shí)輸送一種酶組合物和一種含有前活化底物的第二組合物，這樣，在兩種組合物的輸送和混合時(shí)，酶將前活化底物轉(zhuǎn)化為一種活性組分。當(dāng)在特定的組合物中活性組分不穩(wěn)定而且存在配制更穩(wěn)定的活性組分的前體即所謂的前活化底物的可能性時(shí)，本發(fā)明的這一實(shí)施方案是優(yōu)選的。例如，乙酸維生素E、乙酸維生素A以及棕櫚酸維生素A是把這些不穩(wěn)定但又需要的維生素施用于皮膚時(shí)通常使用的前體分子。由于皮膚中或皮膚上的酶活力，部分前體被認(rèn)為慢慢地轉(zhuǎn)化成為活性化合物(例如參見Boehnleinetal.，PharmaceuticalResearchVol.II，no.8(1994)，1155-1159)。按照本發(fā)明的配制方法，將這些存儲(chǔ)穩(wěn)定的前體與適當(dāng)?shù)乃饷赶嘟Y(jié)合，活性的視黃醇或生育酚就能夠釋放到皮膚上。使用本發(fā)明的配制系統(tǒng)的一個(gè)重要的優(yōu)點(diǎn)是，與依靠存在于皮膚中的相關(guān)酶的情況相比，前體分子的水解率明顯地增高。在某些應(yīng)用中，例如在防曬用途中，維生素A立即就能釋放至合適的濃度的優(yōu)點(diǎn)是十分明顯的(例如參見BeijersbergenvanHenegouwenetal，F(xiàn)atSc.Technol.94(1992)，24-27)。為了激活或者維生素A或者維生素E的棕櫚酸衍生物，使用一種合適的脂肪酶是一種明顯的選擇?？梢灶A(yù)計(jì)許多商品脂肪分解酶能夠?qū)⑦@些前體分子水解為活化的維生素和棕櫚酸。然而，在化妝品應(yīng)用中使用脂肪酶有一些嚴(yán)重的缺點(diǎn)，其中包括存在于化妝品組合物中的油脂的破壞以及存在于人皮膚中的相當(dāng)部分的保護(hù)性脂類化合物的降解(Cosmetics&amp;Toiletries102(1987)，36-42)。為避免這種不利情況的發(fā)生，使用各種維生素的乙酸衍生物而不是棕櫚酸衍生物將是有利的，這樣就可以使用能夠選擇性地除去維生素前體中的乙酸部分而不破壞皮脂的酶。例如，某些酯酶/脂酶優(yōu)先選擇短鏈的脂?；?2-10個(gè)碳原子)而不能水解更長(zhǎng)一些的脂酰基(≥16個(gè)碳原子)。舉例來說，這些酯酶可從RecombinantBiocatalysisInc.(Philadephia，USA)購(gòu)得。另外，木聚糖乙酰酯酶(cf.EP507369)和鼠李半乳糖乙酰酯酶(cf.WO93/20190)對(duì)植物細(xì)胞壁組分是有活力的，而且不大可能水解存在于人皮膚中的脂類。除了這類酶外，酯酶活力也被認(rèn)為是由某種絲氨酸蛋白酶造成的。在本發(fā)明中使用合適的絲氨酸蛋白酶是有利的，因?yàn)樗軌驅(qū)⑷テぷ饔门c所選的維生素前體的快速轉(zhuǎn)化結(jié)合起來。另一種維生素抗壞血酸被認(rèn)為在化妝品中是有好處的，原因是它對(duì)人皮膚中黑素形成的抑制作用、對(duì)膠原蛋白形成的刺激作用以及它的抗氧化劑活力。遺憾的是，由于抗壞血酸的不穩(wěn)定性，它不能被應(yīng)用于任何化妝品。因此，磷酸抗壞血酸鎂，一種穩(wěn)定的和可溶于水的抗壞血酸衍生物，被許多公司開發(fā)和商品化。由于在皮膚上存在磷酸酯酶(fosfatase)，磷酸抗壞血酸鎂可在原處被轉(zhuǎn)化為有活力但不穩(wěn)定的抗壞血酸。遺憾的是，自然產(chǎn)生于皮膚上的磷酸酯酶的活力相當(dāng)?shù)?Mimaetal.Vitamins41(1970)，387)。本發(fā)明的配制系統(tǒng)能夠?qū)⒘姿峥箟难崤c合適的磷酸酶組合起來以保證在皮膚上快速形成抗壞血酸。肌醇六磷酸酶催化磷酸從肌醇六磷酸酯中的釋放，尤其是來自黑曲霉的肌醇六磷酸酶顯示出是用于這一方面的十分合適的磷酸酶。與用原位除去衍生物中的穩(wěn)定部分來激活前活化維生素衍生物的方法十分類似，可對(duì)其它類型的前體分子進(jìn)行酶修飾。已知許多糖基化的天然色素包括花青素苷和食品級(jí)的胭脂紅。按照Blom的描述(FoodChemistry12(1983)，197-204)，β-葡糖苷酶和紅色花青素苷顏料的組合產(chǎn)生了一種不溶于水的、有顏色的糖苷配基。使用本發(fā)明的配制系統(tǒng)，通過含有穩(wěn)定的β-葡糖苷酶的組合物與含有紅色花青素苷的合適的化妝品組合物的配制與混合形成了糖苷配基。由于其疏水性的增加，糖苷配基將更加緊密地附著在諸如皮膚和毛發(fā)的疏水表面，因而不能夠用水將它從表面上有效地除去。其它酶法的目的是使用本發(fā)明的配制系統(tǒng)產(chǎn)生可反應(yīng)的染色劑以用于毛發(fā)的氧化染色。為達(dá)到這一目的，將穩(wěn)定化的漆酶組合物與含有染色劑前體的合適的組合物相組合，后者的例子為單或多酚化合物(例如參見FR2,694,018；EP504005)。本發(fā)明的配制系統(tǒng)還被方便地用于原位的過氧化物酶催化形成殺菌化合物。將穩(wěn)定的過氧化物酶與合適的前體分子——可選擇性地加入清潔劑——分別盛放，這在應(yīng)用特定的具有有限時(shí)間的細(xì)菌活力的殺菌劑時(shí)是重要的(cf.US4,476,108，US4,588,586)。這些自然形成的殺生物化合物的典型的例子是次鹵酸，它由鹵過氧化物酶催化過氧化氫加鹵化物制得；以及次硫氰酸，它由乳過氧化物酶催化過氧化氫加硫氰酸制得。在所有情況下，過氧化氫都是一種十分重要但相當(dāng)不穩(wěn)定的前體。在本發(fā)明的配制系統(tǒng)中，通過使用諸如錫酸鈉或膦酸(例如De-quest2010)的穩(wěn)定劑，過氧化氫溶液可被穩(wěn)定地加入到第二含水組合物中。這些穩(wěn)定劑優(yōu)選與合適的諸如Carbopol934或RheovisCRXCA(AlliedColloids)的增粘劑組合使用。在該法中，第一組合物含有穩(wěn)定的酶以及任何與過氧化氫不相容的化學(xué)物質(zhì)。本發(fā)明的配制系統(tǒng)還可以通過過氧化氫生成酶(例如一種乙醇氧化酶)原位酶法生成過氧化氫。上述過氧化氫生成酶與過氧化物酶包含在同樣的組合物中。這種可選擇性地與清潔相組合的溫和的消毒形式不僅可以用于局部應(yīng)用領(lǐng)域中以治療各種形式的濕疹或痤瘡，還可以用于諸如隱形眼鏡的清洗以及家庭硬質(zhì)表面清潔劑等的用途中。使用本發(fā)明的配制器的另一個(gè)實(shí)施例是脂過氧化物的原位生成。為達(dá)到這一目的，將穩(wěn)定的脂氧合酶組合物與含有亞油酸的組合物分別存放并通過配制來混合。也可以將脂氧合酶與亞油酸配制在一種組合物中，原因是被用于穩(wěn)定酶的高濃度的多元醇還確保了酶的失活。原位產(chǎn)生的脂過氧化物適合于局部應(yīng)用，例如用于脫毛或抑制毛發(fā)的生長(zhǎng)(PuigMusetetal.，Arzneimittel&amp;Forschung，10(1960)，234-239)。還可以將含有酶的第一組合物與含有附加的活性成分的第二組合物組合起來，這樣，附加的活性成分在上述用途中也顯示出理想的活性。例如，在酶和附加的活性成分之間存在最佳協(xié)同作用。在一個(gè)與局部應(yīng)用完全不同的用途中，例如在面包制作中，配制器被用于將諸如淀粉酶、半織物素酶、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、脂氧合酶以及其它氧化還原酶這些發(fā)酵酶與液體面包改良劑中的附加組分相組合，這樣，合適的酶底物存在于生面團(tuán)中。能夠產(chǎn)生最佳協(xié)同作用的組合的例子是將蛋白酶與一種角質(zhì)蛋白分解劑-例如一種α-羥酸—相組合。所謂的果酸(α-羥酸或AHA′s)在化妝品工業(yè)中被用作能夠引起皮膚脫落的試劑，從而產(chǎn)生了防衰老的效果。其缺點(diǎn)是高的細(xì)胞更新速率所需的低pH值通常伴有過敏現(xiàn)象(參見Smith，W.P.，Cosmetics&amp;ToiletriesVol109，pp41-48，1994)。為減弱過敏現(xiàn)象，一種方案是或者降低AHA濃度或者升高化妝品組合物的pH值以及通過向組合物中加入蛋白水解酶以補(bǔ)償減弱的皮膚脫落效果。另一個(gè)實(shí)施例是在牙齒護(hù)理產(chǎn)品領(lǐng)域中。自從將氟化物加入牙膏中后，齲齒的發(fā)病率得以明顯地降低，原因是氟化物增強(qiáng)了牙齒的琺瑯層。結(jié)果是生長(zhǎng)在牙斑中的突變鏈球菌(Streptococcusmutans)成為導(dǎo)致齲齒的一個(gè)剩余的主要因素。有效地除去突變鏈球菌只能通過溶解保護(hù)性的和不溶于水的多糖基質(zhì)來實(shí)現(xiàn)，而突變鏈球菌正是通過這種基質(zhì)附著在琺瑯上(例如參見HamadaandSlade，Micro-biol.Rev.44(1980)，331-384)。按照US4,438,093中公開的內(nèi)容，諸如變位酶和葡聚糖酶的酶類會(huì)防止和抑制牙斑的形成。因此，本發(fā)明的酶配制系統(tǒng)提供了一種方便的方法以將含有氟化物的牙膏與用多元醇穩(wěn)定的降解多糖的酶組合物相組合。除了局部用途外，本發(fā)明的配制系統(tǒng)還可被方便地用于其它用途。例如用于洗衣業(yè)中對(duì)易損織物(如毛織品)的手洗。在本發(fā)明的配制系統(tǒng)中，將一種簡(jiǎn)單的液體洗滌劑與穩(wěn)定的酶組合物分別盛放，然后按照所需的比例同時(shí)配制。多烯抗生素含有多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素(例如那他霉素、制霉菌素、兩性霉素-B)的穩(wěn)定含水組合物的開發(fā)通常是困難的，因?yàn)檫@些抗生素在水溶液中極其不穩(wěn)定。對(duì)于用那他霉素處理真菌感染來說，需要使用具有較高增溶化的那他霉素濃度的那他霉素組合物，特別是因?yàn)檎婢枰粋€(gè)相對(duì)較高的最小抑制濃度。通常，那他霉素在諸如二甲基甲酰胺、DM-SO、甘油或丙二醇等有機(jī)溶劑或在或低或高pH下的含水組合物中都有相對(duì)較高的溶解度。為了獲得具有高濃度增溶那他霉素的含水組合物，優(yōu)選在酸性或堿性條件下對(duì)這種抗生素進(jìn)行增溶。然而，在這種情況下那他霉素的穩(wěn)定性很差。因此，這種那他霉素制劑優(yōu)選是在剛使用前配制。例如，在荷蘭專利申請(qǐng)NL7613253中，描述了將那他霉素與檸檬酸組合以處理受發(fā)癬菌感染的馬和牛，此時(shí)用于處理的溶液必須在剛使用前制備，方法是向那他霉素和檸檬酸的固體混合物中加入適量的水。然而，那他霉素和檸檬酸的固體混合物十分容易吸濕，因而也只能在相當(dāng)短的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。穩(wěn)定的含水那他霉素組合物描述于歐洲專利申請(qǐng)EP678241中，其內(nèi)容被并入本文作參考。公開于EP678241中的穩(wěn)定的那他霉素組合物是在含水介質(zhì)中的那他霉素晶體懸浮液，其中通過加入合適的增粘劑防止了晶體的沉淀。穩(wěn)定的那他霉素組合物，例如公開于EP678241中的組合物，可被方便地用于本發(fā)明的配制系統(tǒng)中。可以將穩(wěn)定的那他霉素懸浮液與合適的基礎(chǔ)組合物同時(shí)配制。當(dāng)需要在最終的配方中有大量的增溶的那他霉素時(shí)，上述的合適的基礎(chǔ)組合物優(yōu)選是一種具有或低或高的pH值的組合物。如果可以得到一個(gè)合適的那他霉素配方的話，人皮膚的真菌感染也是那他霉素處理的一個(gè)潛在目標(biāo)。治療這些感染的合適的那他霉素配方包括含有那他霉素與檸檬酸的組合的組合物。使用本發(fā)明的配制系統(tǒng)能夠?qū)⒎€(wěn)定的含水那他霉素懸浮液與第二種含有檸檬酸的組合物相組合。合適的基礎(chǔ)(第二)組合物的另一個(gè)例子是一種去頭皮屑香波。其它化合物二羥基丙酮(DHA)是通過發(fā)酵產(chǎn)生的，它是化妝品中的活性組分，能夠?qū)⑷斯妨蟼鬟f到人皮膚中。很久以前就發(fā)現(xiàn)了DHA在水溶液中很不穩(wěn)定，這種不穩(wěn)定性導(dǎo)致了皮膚鞣制能力的喪失以及諸如甲醛和甲酸等皮膚刺激劑的形成。穩(wěn)定的DHA溶液是通過將DHA溶液的pH調(diào)節(jié)至較低的范圍而得到的，優(yōu)選的pH值為3以下。由于這種酸性pH值對(duì)于局部應(yīng)用是不合適的，因此在本發(fā)明的配制系統(tǒng)中將局部應(yīng)用的組合物(例如一種化妝品的組合物)與含有DHA的酸性組合物共同使用將是有利的。穩(wěn)定的酸性DHA組合物通過與大量經(jīng)過良好緩沖的化妝品組合物的混合后被中和。醛類香料化合物是最不穩(wěn)定的香料化合物之一，尤其是在堿性的條件下。因此，在諸如洗液、液體肥皂和香波的堿性個(gè)人護(hù)理用品中如何穩(wěn)定地加入諸如香葉醛、橙花醛和香茅醛的醛類香料就成為一個(gè)主要的問題。本發(fā)明的配制系統(tǒng)方便地保證了含香料組合物與合適的化妝品組合物的分別盛放，從而可以將所需的香料化合物用于個(gè)人護(hù)理用品中。圖1顯示了純的和稀釋的穩(wěn)定含水蛋白酶組合物的蛋白水解活力。蛋白水解活力通過用凝膠覆蓋的薄膜板上的透明斑來測(cè)量。圖2顯示的是在pH4和7下，在α-羥酸存在時(shí)不同蛋白酶的蛋白水解活力。圖3顯示的是一臺(tái)配制泵，其中兩種組合物被分別存儲(chǔ)。兩種組合物被同時(shí)配制，而且可以在配制泵內(nèi)混合或分別輸送并當(dāng)場(chǎng)混合。實(shí)施例1在含有不同種類多元醇的組合物中蛋白酶的存儲(chǔ)穩(wěn)定性為了顯示各種中性蛋白酶在不同種類的多元醇中的存儲(chǔ)穩(wěn)定性，將不同來源的部分純化的蛋白酶溶于含有70％(w/w)的丁二醇、丙二醇或PEG6000的液體中并在5℃、25℃或40℃下存儲(chǔ)。在緩沖水溶液中稀釋后，在不同的時(shí)間間隔測(cè)定剩余的酶活力。所使用的酶來自地衣型芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)的絲氨酸蛋白酶粉末購(gòu)自GeneneorInternational，Brughes，Belgium。非標(biāo)準(zhǔn)化的中性蛋白酶[來自液化淀粉桿菌(Bacillusamyloliq-uefaciens)的金屬蛋白酶]購(gòu)自Gist-brocades，Séclin，F(xiàn)rance。含有絲氨酸蛋白酶或中性蛋白酶的穩(wěn)定的酶組合物是通過將所需數(shù)量的酶粉末溶于70％(w/w)的丁二醇(1，3-丁二醇；BG)、丙二醇(1，2-丙二醇；BG)或PEG6000(聚乙二醇6000；PEG)而制備的。為了最大的酶穩(wěn)定性，以0.1％的濃度向每種溶液中加入pH6.0的醋酸鈣。通過離心將任何所產(chǎn)生的沉淀除去，然后將各種穩(wěn)定的酶溶液存儲(chǔ)于5℃、25℃或40℃下。在不同的時(shí)間間隔取樣并測(cè)定剩余的絲氨酸和中性蛋白酶活力。在蛋白酶測(cè)定中對(duì)含有多元醇的酶組合物的一千倍以上的稀釋保證了不會(huì)有來自化學(xué)雜質(zhì)的與蛋白酶無關(guān)的影響。按照用于中性蛋白酶活力的Gist-brocades標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定酶活力。該方法(ISLMethodNumber61195)可要求Gist-brocadesDelft提供。簡(jiǎn)而言之，該方法如下在40℃、pH7.0下向0.3％的Hammersten酪蛋白溶液中加入高度稀釋的酶溶液。保溫60分鐘后通過加入TCA終止蛋白酶的活力。經(jīng)充分混合并在4℃下另外保溫30分鐘后，將樣品離心。以蒸餾水為空白，在275nm的波長(zhǎng)下測(cè)定上清液的吸光度。通過與標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶樣品比較就獲得了最終的蛋白酶活力。結(jié)論——溶解于70％丁二醇或丙二醇中的絲氨酸蛋白酶比中性蛋白酶更穩(wěn)定?！诿傅姆€(wěn)定化方面，丁二醇和丙二醇明顯地優(yōu)于PEG6000。表2.絲氨酸蛋白酶<>表3.中性蛋白酶實(shí)施例2穩(wěn)定組合物中蛋白酶的重新激活材料來自液化淀粉桿菌的非標(biāo)準(zhǔn)化的中性蛋白酶購(gòu)自Gist-bro-cadesSéclin(France)。穩(wěn)定的酶的配方重量(g)最終濃度水24.2548.5％中性蛋白酶25mg丙二醇25.050％羥丙基織物素0.751.5％(klucelH型，來自Hercules)制備在將增粘劑羥丙基織物素與丙二醇混合后，加入溶有酶的水并混合過夜。水溶液配方重量(g)最終濃度水48.597％羥丙基織物素0.751.5％丙二醇1.02％制備將羥丙基織物素與丙二醇混合，隨后加入水并混合過夜。將一定量的穩(wěn)定蛋白酶組合物(純的或用含水組合物稀釋的)在Agfapan25薄膜板上點(diǎn)樣。如果酶是有活力的，薄膜板上的明膠將被蛋白水解，留下一個(gè)或多或少的透明斑。該檢測(cè)方法模擬了蛋白酶在體內(nèi)降解角蛋白的粗糙表面的能力。在將純的穩(wěn)定蛋白酶組合物點(diǎn)到薄膜板上后，沒有觀察到透明斑，這說明由于高的多元醇濃度，蛋白酶沒有活力。用上述含水組合物以1∶1和1∶2的比例稀釋穩(wěn)定的蛋白酶組合物，所得到的丙二醇濃度分別為26％和18％，這導(dǎo)致了透明斑的直徑隨稀釋率的增加而增加，這表明蛋白酶被重新激活(參見圖1)。盡管1∶1的稀釋率已經(jīng)導(dǎo)致了蛋白酶的部分激活，但這時(shí)的多元醇濃度對(duì)于局部應(yīng)用來說還是高得不能接受。一種非穩(wěn)定的酶制劑，即沒有丙二醇的酶制劑，在大約一周內(nèi)都不顯示活性。因此，根據(jù)本發(fā)明穩(wěn)定的酶在通過用一種合適的組合物稀釋以使其重新激活前，基本不具有活性。實(shí)施例3含有不同的α-羥酸的組合物的蛋白水解活力本實(shí)施例顯示了在酸性條件以及在α-羥酸(AHA′s)存在的條件下許多蛋白水解酶的效力。在攝影明膠膠片上測(cè)定蛋白水解活力。所使用的酶和材料來自地衣型芽孢桿菌的絲氨酸蛋白酶購(gòu)自GenencorInterna-tional，Brughes，Belgium，將其溶解于含有35％(w/w)的丁二醇、35％(w/w)的甘油、0.1％(w/w)pH6.0的Ca(Ac)2以及水的混合物中。將溶液中的酶活力調(diào)節(jié)至在37℃、pH7.0下可獲得大約500中性蛋白酶單位的活力(參見實(shí)施例1)。來自Rhizomucormiehei的天冬氨酸蛋白酶液體(210.000凝乳單位/ml)購(gòu)自Gist-brocades，Séclin，F(xiàn)rance。來自番木瓜的半胱氨酸蛋白酶粉末(六千萬木瓜酶單位/克，根據(jù)FoodChemicalCodexIII測(cè)定)購(gòu)自Gist-brocades，Séclin，F(xiàn)rance。在使用前先配制新鮮的半胱氨酸蛋白酶溶液，方法是將20mg的酶粉末溶于2ml的軟水中。根據(jù)下面的標(biāo)準(zhǔn)制備AHA儲(chǔ)備液。將5克的1-乳酸(BoomChemie，Netherlands)和5克的乙醇酸(Merck，Germany)分別溶于80ml的水中，用25％的NaOH將pH調(diào)節(jié)至4.0，然后將水加至100ml以分別得到5％的1-乳酸和乙醇酸溶液。將5克的水楊酸(Acros，Belgium)溶于80ml的水中并用25％的NaOH將pH調(diào)節(jié)至4.4(在pH4.0下不可能溶解)，然后將水加至100ml以得到5％的水楊酸溶液。pH7.0的磷酸緩沖液和pH4.0的檸檬酸HCl緩沖液購(gòu)自Mer-ck，Germany。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備好分別含有0.1克絲氨酸蛋白酶溶液的五個(gè)玻璃小瓶、分別含有0.1克天冬氨酸蛋白酶的五個(gè)玻璃小瓶以及分別含有0.1克半胱氨酸蛋白酶溶液的五個(gè)玻璃小瓶。向每一組的五個(gè)小瓶中分別加入0.9ml的pH7.0的緩沖液、pH4.0的緩沖液、5％的1-乳酸、5％的乙醇酸以及5％的水楊酸。在將酶與緩沖液或酸混合后，分別將十五種溶液的40微升樣品加在AgfapanAPX100照相膠片的基質(zhì)上。然后將有樣品的膠片在一個(gè)潮濕的和有蓋的培養(yǎng)皿中在37℃下保溫1小時(shí)。保溫結(jié)束后用自來水充分沖洗照相膠片并使其干燥。明膠層的去除被用來作為蛋白水解活力的量度。由所得結(jié)果(參見圖2)可知，不管各種AHA′s存在與否，絲氨酸蛋白酶似乎只在pH7.0左右時(shí)有活力，而在pH4.0左右時(shí)無活力。而在水楊酸的存在下，天冬氨酸蛋白酶在pH7.0或pH4.4時(shí)都沒有活力，不管5％的1-乳酸或5％的乙醇酸存在與否，在pH4.0下酶有充分的活力。在1-乳酸、乙醇酸或水楊酸的存在下，半胱氨酸蛋白酶在pH7.0以及更低的pH值下具有活力。令人驚奇的是，不管缺少哪一種AHA′s，在pH4.0下都有極低的蛋白水解活力。結(jié)論——在低pH值和AHA′s存在下，天冬氨酸蛋白酶優(yōu)于絲氨酸蛋白酶?！谥行院退嵝詐H值下來自番木瓜的半胱氨酸蛋白酶都顯示出蛋白水解活力?！鶕?jù)條件應(yīng)該選擇最合適的蛋白水解酶。實(shí)施例4磷酸抗壞血酸的酶活化在70％的丙二醇中加入三種不同的具有文獻(xiàn)記錄的磷酸酯酶活力的酶，在不同的條件下與磷酸抗壞血酸鎂一同保溫。使用600MHz的質(zhì)子核磁共振來計(jì)量磷酸抗壞血酸鎂的脫磷酸作用。酶肌醇六磷酸酶[黑曲霉(Aspergillusniger)；不含甘油，含有大約12.000FTU/克]以及酸性磷酸酶(黑曲霉；凍干的粉末，含有大約10.000單位/克)購(gòu)自Gist-brocades，Delft，theNetherlands。馬鈴薯磷酸酶(凍干的冰末)購(gòu)自Sigma。實(shí)驗(yàn)在D2O中含有70％(w/w)的丙二醇和2mmol/l的EDTA(pH7-8)的液體中分別溶解大約1％(w/w)的上述每種酶制劑。將這些在D2O中含有1％(w/w)的磷酸抗壞血酸鎂(NIKKOChemicalsCo，Japan)的酶儲(chǔ)備液稀釋十倍，用乙酸將pH緩沖至5.0并保存在37℃下，在4小時(shí)內(nèi)導(dǎo)致了50％的磷酸抗壞血酸鎂的降解。將含有70％丙二醇的酶儲(chǔ)備液在37℃下存儲(chǔ)1周，在本檢測(cè)中這不會(huì)明顯地影響酶活力。在70％(w/w)的丙二醇的存在下，酶與底物的組合明顯地顯示出在這些條件下酶不具有活性。從在D2O中含有5％(w/w)的磷酸抗壞血酸鎂的儲(chǔ)備液開始，所制備的混合物含有——70％(w/w)丙二醇——1％(w/w)磷酸抗壞血酸鎂——2mmol/lEDTA——pH7-7.5在完全溶解后(其間形成了一種凝膠狀結(jié)構(gòu))，加入1％(w/w)(預(yù)溶解的)酸性磷酸酶和馬鈴薯磷酸酶。將所得到的混合物在37℃下保溫1周，然后以不含酶的相似樣品為對(duì)照，測(cè)定水解的磷酸抗壞血酸鎂的濃度。由于檢測(cè)不到酶水解，這又一次顯示了在高濃度多元醇的存在下酶活力的缺乏。實(shí)施例5在應(yīng)用條件下肌醇六磷酸酶水解磷酸抗壞血酸鎂的性能已知在應(yīng)用條件下肌醇六磷酸酶(NatuPhos5000L，Gist-bro-cades，Delft，theNetherlands)是有效的。在測(cè)試中，將2ml在pH6.0的100mM的醋酸鈉中1％的磷酸抗壞血酸鎂與200μl的酶溶液混合。通過將NatuPhos5000L在一種含有70％甘油的溶液中稀釋5倍來獲得酶溶液(用以獲得377U/g的磷酸抗壞血酸鎂；1U就是在pH6.0和30℃下，每分鐘從1％磷酸維生素C中釋放1μmol磷酸的酶量)。在經(jīng)過不同的保溫時(shí)間后，通過加入1ml20％的TCA來終止反應(yīng)。通過使用31P-NMR測(cè)定磷酸濃度來跟蹤磷酸抗壞血酸鎂的轉(zhuǎn)化?？梢钥吹皆?0℃下在30分鐘內(nèi)就可獲得85％的磷酸抗壞血酸鎂的轉(zhuǎn)化率。在37℃下，在相同的時(shí)間內(nèi)獲得了89％的轉(zhuǎn)化率。保溫60分鐘后，產(chǎn)率上升至大約90％。在30分鐘內(nèi)進(jìn)行完全轉(zhuǎn)化所需的最小活力是122U/g磷酸維生素C。實(shí)施例6酶促生成過氧化氫將含有低濃度的過氧化氫酶的乙醇氧化酶(HansenulaSP.，來自Sigma)粉末溶于水中，然后加入甘油，使甘油的最終濃度為60％(w/w)。將這種穩(wěn)定的酶溶液在室溫下存儲(chǔ)1個(gè)月后，在含有2％乙醇和0.01M磷酸、pH7的水溶液中將該酶溶液稀釋10倍。過氧化氫的生成是通過將Perid試驗(yàn)片條(BoehringerMannheim，Ger-many)浸入乙醇水溶液中所形成的藍(lán)綠顏色來顯示的。這樣產(chǎn)生的過氧化氫可隨后被用作過氧化氫酶的底物。通過使存在于一個(gè)容器中的過氧化氫產(chǎn)生酶和合適的過氧化物酶[例如在一種穩(wěn)定液中的乳過氧化物酶(Sigma)]與存在于另一個(gè)容器中的所需的酶前體相結(jié)合，根據(jù)本發(fā)明的方法混合兩個(gè)容器中的內(nèi)容物，就得到了有活性的殺生物化合物。實(shí)施例7乙酸維生素A的脫乙酰作用酶Piccantase濃縮液(Rhizomucormiehei，含有大約30.000BGLE/g)自Gist-brocades，Seclin，F(xiàn)rance)。純Maxatase[枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，含有大約2.16BYU/kg)來自GenencorInternationalB.V.，Delft，Netherlands。G999磷酯酶L(黑曲酶，含有大約1000u/g)來自EnzymeBio-SystemsLtd.，EnglewoodCliffs，NJ，U.S.A.。木聚糖乙酰酯酶(黑曲霉轉(zhuǎn)化體TrA10，描述于EP0507369中，通過保藏的微生物獲得)。在接種后，轉(zhuǎn)化體TrA10在每升含有30克大豆?jié){的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)以引入酶活力。在最低pH4.0、30℃下通風(fēng)生長(zhǎng)48小時(shí)后，將發(fā)酵液離心并過濾上清液。第一次過濾在SeitzK700過濾器上進(jìn)行，第二次過濾在SeitzSupra250過濾器上進(jìn)行，細(xì)菌過濾在SeitzSupraEKS進(jìn)行。通過超濾使得到的液體濃縮10倍，然后將濃縮液凍干。在最終的粉末中木聚糖乙酰酯酶的活力被估計(jì)為大約300單位/克粉末。乙酸視黃醇水解通過將6毫克的酶粉末(即Piccantase、Maxatase和木聚糖乙酰酯酶)溶于1毫升的軟水中制得酶溶液。將16微升的液體G999制劑稀釋于1毫升的軟水中。通過將55毫克的乙酸視黃醇溶于1毫升的甲醇中制得乙酸視黃醇(Sigma)的儲(chǔ)備液。通過將100微升pH5.5的磷酸緩沖液、100微升酶溶液以及200微升乙酸視黃醇儲(chǔ)備液加入到500微升的軟水中對(duì)酶進(jìn)行培養(yǎng)。混合后，將各種溶液在氬氣中在37℃下保溫1或4小時(shí)。隨后將溶液凍干并加入氘化氯仿(Merck，Germany)。使用600MHz的質(zhì)子核磁共振來測(cè)量乙酸視黃醇中被除去的乙酸部分。-＝無水解；0＝可檢測(cè)到的水解；+＝明顯的水解；++＝完全的水解脂類水解在一些酯化維生素的使用中，用具有分解脂肪活力的酶重新活化維生素是不夠理想的。例如在重新活化包含于化妝品中的維生素前體時(shí)，應(yīng)該避免包含于化妝品中的油脂的酶促降解。因此使用對(duì)甘油三酯無降解作用的維生素活化酶將是有利的。為了確定上述的乙酸視黃醇降解酶的甘油三酯降解效果，對(duì)三種活性酶進(jìn)行測(cè)試，其中計(jì)量了乳化橄欖油的水解。制備了一種橄欖油在聚乙烯醇和水中的乳化液。不存在大于10微米的油滴。在加入酶溶液后，由于脂肪酸的酶促釋放而產(chǎn)生的pH降低用不斷滴入氫氧化鈉來補(bǔ)償。在pH7.5和37℃下經(jīng)過一段固定的保溫時(shí)間后，計(jì)量所使用的氫氧化鈉的總量并將其作為解脂活力的(相對(duì))值。該方法的詳細(xì)內(nèi)容描述于文獻(xiàn)CQA4047中，而且可要求Gist-brocades，Seclin，F(xiàn)rance提供。<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="826">酶分解脂肪活力/克酶G999＜1木聚糖乙酰酯酶110Piccantase濃縮液20.000</table></tables>結(jié)論——包括脂酶的多種酶可以使乙酸維生素A脫乙?；??！狦999和木聚糖乙酰酯酶都是十分令人感興趣的，因?yàn)檫@些酶將脫乙酰活力與非常低的解脂活力結(jié)合起來。另外，這些酶的天然底物(例如溶血磷脂和乙?；哪揪厶?通常不存在于人皮膚中。實(shí)施例8晶體蛋白酶的懸浮液在多組分的配制系統(tǒng)中，適當(dāng)?shù)貞腋」潭ɑ头€(wěn)定化的物質(zhì)對(duì)于保證將活性物質(zhì)均勻地配入最終組合物中是重要的。懸浮方法應(yīng)該能夠使固定化的活性物質(zhì)長(zhǎng)期保存而不沉淀。材料ChiroCLEC-BL，交聯(lián)的蛋白酶(枯草溶菌素)晶體的水溶液，得自AltrusBiologicsInc.，Cambridge，MA，USA。Carbopol-Ultrez-10，一種增粘聚合物，得自BFGoodrich，TheHague，Netherlands。從ChiroCLEC-BL的均勻含水懸浮液中取出4.8克樣品并離心以收集晶體物質(zhì)。將上清液除去后，將晶體在無離子水中清洗一次并再次離心，然后將該晶體懸浮于最終的量為10克的含有35％甘油、35％丁二醇和0.4％Carbopol的組合物中。使用三乙醇胺將所得懸浮液的pH調(diào)節(jié)至5.5。在經(jīng)過充分均質(zhì)化后，將懸浮液放置于40℃下。在這個(gè)溫度下保溫一個(gè)月后，沒有觀察到晶體的沉淀。對(duì)酶懸浮液的最終的稀釋能夠恢復(fù)酶的活力。實(shí)施例9二羥基丙酮的穩(wěn)定使用不同的抗氧化添加劑以及在不同的溫度和pH值下分析DHA溶液的穩(wěn)定性。NMR分析DHA降解產(chǎn)物的鑒別以及定量化在一臺(tái)BrukerAMX-600光譜儀上進(jìn)行，在600MHz的1H頻率下操作。使用一個(gè)5mm的反向探針。巨大的水信號(hào)通過簡(jiǎn)單預(yù)飽和方法(2S)或使用組合脈沖(2S)的預(yù)飽和方法消除。2秒的延遲使得被觀察的脈沖之間不能充分地舒張，因此計(jì)量結(jié)果應(yīng)被認(rèn)為是半計(jì)量性的，即可能產(chǎn)生一個(gè)達(dá)100％的系統(tǒng)誤差。然而一組內(nèi)的測(cè)量結(jié)果可被用于有意義的比較。HPLC分析用HPLC方法對(duì)一些樣品進(jìn)行分析。向每種為2ml的樣品中分別加入400μl20％的高氯酸。使用了下述裝備和條件HPLC泵VarianLC5010注射體積20μl檢測(cè)器IOTA差動(dòng)式折射計(jì)VarianUV-5，215nm柱AminexHpx87H300×7.8mm洗脫液0.01NH2SO4流量0.6ml/min該方法只用于計(jì)量第一組實(shí)驗(yàn)中的DHA。在50℃的水中DHA的降解在0.1M磷酸(pH7)緩沖液中或0.1M焦磷酸(pH5.5和pH8.5)的D2O溶液中制備5％的DHA溶液。在一些情況下加入抗壞血酸。將樣品在一個(gè)50℃的爐子中保溫7天以上。50℃水中DHA的降解，樣品條件和2、5、7天后的剩余DHA<tablesid="table5"num="005"><tablewidth="550">pH抗壞血酸g/l保溫下列天數(shù)后的DHA(g/l)0257最終pH5.57.08.5---493122174918131146241.10.84.95.67.57.05.79948181311472819145.75.3</table></tables>結(jié)論——酸性pH條件促進(jìn)DHA的存儲(chǔ)穩(wěn)定性?！T如抗壞血酸的還原劑的存在對(duì)DHA的存儲(chǔ)穩(wěn)定性沒有明顯的影響。在不同條件下DHA在40℃下的降解在0.2M的焦磷酸緩沖溶液中制備5％的DHA溶液。向所有的樣品中加入10％的D2O，其中含有叔丁醇，它作為一種內(nèi)標(biāo)物。叔丁醇的最終濃度為0.45mg/ml。在H2O/乙二醇＝1/1的混合物中制備4號(hào)和5號(hào)樣品。另外，向上述樣品中加入10％的叔丁醇，而在樣品5中還加入15mg(dl)α-生育酚。用氮?dú)饣蚩諝鈱悠窙_洗30分鐘。這些條件也在下面加以匯總。將樣品在40℃下保溫35天。樣品組成和處理<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="826">樣品編號(hào)DHApH沖洗添加123456555555665552.6空氣N2空氣N2N2空氣---丙二醇/H2O/叔丁醇45/45/10見4+0.3生育酚</table></tables>在40℃下35天后的DHA降解<tablesid="table7"num="007"><tablewidth="711">樣品編號(hào)剩余DHA所形成的甲所形成的初始＝100％酸ppm乙酸ppm12345620％1600240020％1400260040％1000120030％ndnd30％ndnd90％200300</table></tables>na＝未測(cè)定結(jié)論未確定——只有將pH值調(diào)至很低后才能得到明顯的DHA穩(wěn)定性。實(shí)施例10香波中的那他霉素在本實(shí)施例中描述了對(duì)一種配制系統(tǒng)的使用，設(shè)計(jì)該系統(tǒng)是為了以1∶10的比率同時(shí)輸送含有那他霉素的組合物和一種香波組合物。將11g三水合那他霉素、1g合成生物聚合膠(KeltrolRD，Kel-coInternationalLimited)、8g乳糖、0.5g檸檬酸以及0.055g二水合檸檬酸鈉在一臺(tái)Turbul混合器中混合。然后將全部混合物懸浮于480ml的水中。所得到的懸浮液pH為4.8，含有2％的純那他霉素。將25ml的上述懸浮液放入配制器的一個(gè)小室中，而在另一個(gè)小室中充有225ml的香波組合物。在使用時(shí)得到了一種含有2000ppm那他霉素的香波。實(shí)施例11用于發(fā)蘚菌病的那他霉素將110g三水合那他霉素與1g生物合成聚合膠懸浮于388ml的蒸餾水中，然后通過加熱處理滅菌。懸浮液的pH為6.5。放置至少4周后沒有觀察到沉淀。HPLC分析顯示在剛制備完和在室溫下存儲(chǔ)4周后那他霉素的含量分別為20.1和20.2％(w/w)。將200g一水檸檬酸和4g生物合成聚合膠溶于876ml的蒸餾水中并通過熱處理滅菌。溶液的pH為3.0。通過使用一種配制系統(tǒng)(該系統(tǒng)的設(shè)計(jì)目的是以1∶9的比率同時(shí)輸送那他霉素組合物和檸檬酸溶液)，每一劑量都含有大約2％的那他霉素。為獲得用于處理動(dòng)物的含有200或100ppm那他霉素的溶液，可以通過與水混合將劑量簡(jiǎn)單地稀釋100至200倍。這樣含有250g樣品(25g那他霉素懸浮液和225g檸檬酸溶液)的配制器將足以生產(chǎn)總量為25至50升的處理溶液。通過使用能夠同時(shí)輸送穩(wěn)定的含有那他霉素的懸浮液和檸檬酸組合物的配制系統(tǒng)(兩種組合物被分隔盛放)，就得到了一種能夠經(jīng)濟(jì)地制備小劑量的系統(tǒng)。實(shí)施例12配制系統(tǒng)適合于同時(shí)配制兩種分開盛放的不相容化合物的配制系統(tǒng)是眾所周知的。因此大略描畫于圖3中的配制系統(tǒng)只是眾多產(chǎn)品中的一個(gè)例子，這些產(chǎn)品的范圍從微小的、兩室的單一用途的袋到使用不同產(chǎn)品的小室的管或使用可擠壓的、粘性的和相對(duì)惰性的物質(zhì)以分離不相容化合物的分隔成小室的管。示于圖3中的配制器能夠通過擠壓配制頭C來同時(shí)配制分別存儲(chǔ)于A和B中的兩種化合物。擠壓配制頭C激活了兩臺(tái)小泵，它們隨后以大約相同的量配制兩種化合物。根據(jù)所設(shè)計(jì)的配制頭，化合物可以在兩股分開的物流中配制或只在一股物流中配制。根據(jù)本發(fā)明，需要一個(gè)配制單元，它可以以例如1∶2的比率同時(shí)輸送一種穩(wěn)定的含水酶組合物與一種不含酶的基礎(chǔ)組合物。換成描畫于圖2中的配制器，這將意味著在只擠壓配制頭一下時(shí)兩個(gè)泵中的一個(gè)能夠以另一個(gè)泵的至少兩倍的量進(jìn)行配制。換成一個(gè)兩室的單一用途的袋子，這將意味著含有酶組合物的小室至少可以容納另一個(gè)小室可以容納的體積的一半。換成一個(gè)兩室的管，這將意味著在相同的壓力下，包含不含酶組合物的小室的排出口允許至少兩倍于另一個(gè)小室的排出口所允許的通量。換成用可擠出材料分隔成小室的管，這將意味著在管內(nèi)的不含酶的組合物至少兩倍于含酶產(chǎn)品的體積。權(quán)利要求1.一種分別裝有第一和第二含水組合物的配制系統(tǒng)，所說第一組合物是一種含有生物有效化合物的組合物，所說生物有效化合物是被穩(wěn)定配制的，在通過配制而混合時(shí)，第一和第二組合物產(chǎn)生一種最終組合物，而且所說最終組合物對(duì)于以一種活性形式使用所說的生物有效化合物是有效的。2.權(quán)利要求1的配制系統(tǒng)，其中第一和第二組合物以從1∶1變化到1∶50的比率配制，優(yōu)選的比率是從1∶2變化到1∶20，更優(yōu)選的比率是從1∶5變化到1∶10。3.權(quán)利要求1或2的配制系統(tǒng)，其中第二組合物含有一種附加的活性成分。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中第一組合物附加地含有一種增粘劑。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中生物有效化合物被以一種顆粒的形式配制。6.權(quán)利要求5的配制系統(tǒng)，其中的顆粒是一種晶體。7.權(quán)利要求5或6的配制系統(tǒng)，其中第一組合物附加地含有一種增粘劑，它在含水組合物中形成一種三維網(wǎng)絡(luò)。8.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中生物有效化合物是一種酶。9.權(quán)利要求8的配制系統(tǒng)，其中酶以一種顆粒形式配制。10.權(quán)利要求9的配制系統(tǒng)，其中所說顆粒形式是通過將酶固定化在固體載體上獲得的。11.權(quán)利要求9的配制系統(tǒng)，其中所說顆粒形式是通過酶的結(jié)晶獲得的。12.權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中所說第一組合物附加地含有一種增粘劑，它在含水組合物中形成一種三維網(wǎng)絡(luò)。13.權(quán)利要求8-12中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中第二組合物含有一種對(duì)應(yīng)于第一組合物中的酶的前活化底物。14.權(quán)利要求13中的配制系統(tǒng)，其中前活化底物是一種維生素前體。15.權(quán)利要求8-14中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中酶組合物被使用一種高濃度的多元醇穩(wěn)定地配制。16.權(quán)利要求15的配制系統(tǒng)，其中多元醇以20-90％的濃度使用，優(yōu)選的濃度為30-90％，更優(yōu)選的濃度為40-90％，更加優(yōu)選的濃度為50-90％，最優(yōu)選的濃度為60-80％。17.權(quán)利要求8-16中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中的酶是蛋白酶。18.權(quán)利要求8-16中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中的酶是一種優(yōu)先選擇短鏈脂酰基的酯酶，優(yōu)選是少于10個(gè)碳原子的短鏈脂?；?。19.權(quán)利要求8-16中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中的酶是磷酸酶。20.權(quán)利要求19的配制系統(tǒng)，其中的磷酸酶是肌醇六磷酸酶。21.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中生物有效化合物是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素。22.權(quán)利要求21的配制系統(tǒng)，其中的多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素是那他霉素。23.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)，其中的生物有效化合物是二羥基丙酮。24.一種用物理法穩(wěn)定含有生物有效化合物的組合物的方法，所說生物有效化合物以一種顆粒形式配制，其中向組合物中加入一種增粘劑，它在含水組合物中形成一種三維網(wǎng)絡(luò)。25.一種含有生物有效化合物的含水組合物，所說生物有效化合物被穩(wěn)定配制，它被用于權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)。26.權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)的配制系統(tǒng)在局部使用生物有效化合物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明描述了一種配制系統(tǒng),它能夠應(yīng)用一種被適當(dāng)穩(wěn)定化了的含有生物有效化合物的含水組合物。使用一個(gè)兩室配制系統(tǒng),其中分別盛有含有生物有效化合物的穩(wěn)定化了的組合物以及一種含水基礎(chǔ)組合物。從配制系統(tǒng)中同時(shí)輸送兩種組合物,隨后將組合物混合以產(chǎn)生一種適于直接應(yīng)用的最終組合物。文檔編號(hào)A61K38/46GK1178460SQ97190052公開日1998年4月8日申請(qǐng)日期1997年1月31日優(yōu)先權(quán)日1996年1月31日發(fā)明者L·愛德斯,H·S·譚,J·W·J·拉比爾斯申請(qǐng)人:吉斯特·布羅卡迪斯股份有限公司