專利名稱：硫代乙烯酮衍生物用于預防或治療乙型肝炎的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預防或治療乙型肝炎的新用途。
現有技術已知許多類型的致病病毒會引起各種病毒性肝臟疾病。特別是乙型肝炎病毒(HBV)的傳染可以誘發(fā)嚴重的、被稱為急性和慢性乙型肝炎的肝臟疾病，它可以引發(fā)致死的疾病，如肝硬化或肝細胞癌癥。據報道世界上有將近3億患者遭受著乙型肝炎的折磨。因此，人們做了多種努力來開發(fā)預防或治療乙型肝炎的有效藥物。
U.S.4,035,387揭示了馬洛替雷特(malotilate)及其衍生物在治療肝臟疾病方面是有效的。在本發(fā)明以前，本發(fā)明人已經開發(fā)了對肝臟疾病具有優(yōu)異治療和預防活性的硫代乙烯酮衍生物及其無毒性的鹽(參見U.S.5,103,013和U.S.5,158,950)。
盡管它們在用于治療由CCl4誘發(fā)的急性肝損傷時基本無毒且特別有效，但它們的抗HBV活性仍是未知的。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明的首要的目的是提供一種硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預防或治療乙型肝炎的新用途。發(fā)明的詳細描述本發(fā)明提供了下式(I)的硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽的新用途 其中，Y是-CH2-或-CH＝CH-；A是NH或O；R1是有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基；和當A是0時，R2是具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，當A是NH時，R2是芐基，2-吡啶基，2-噻唑基，4-甲基噻唑-2-基，4-羧基-噻唑-2-基或1，3，4-噻二唑-2-基。
本發(fā)明優(yōu)選使用的式(I)硫代乙烯酮衍生物是2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)丙二酸二異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基(dithio1-2-ylidene))-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(1，3，4-噻二唑-2-基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基(di thietan-2-ylidene))-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-羧基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸乙酯或其藥物可接受的鹽；2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-噻唑基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽；
2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-(N-芐基氨基甲?；?乙酸異丙酯或其藥物可接受的鹽。
硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽的抗HBV活性可以用傳統(tǒng)的方法測定，其中使用Sells，M.A.等人在Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.,84,1005-1009(1 987)中描述的2.2.15細胞系。
2.2.15細胞系是用HBV DNA轉染Hep G2(人的肝胚細胞瘤)細胞制備的培養(yǎng)細胞系。故其具有HBV的基本特征，用它進行效力評價有如下的優(yōu)點，如篩分容易，病毒復制水平高，DNA形式穩(wěn)定。此外，病毒特異性RNA轉錄本和由其得到的蛋白質以適宜的大小和形式存在，使HBV病毒粒子以高的水平釋放。因此，2.2.15細胞系特別適于評價一種藥物的抗HBV效力(Korba and Milman，Antiviral Research，15，217-228(1991))。
式(I)硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽能有效地抑制HBV DNA在2.2.15細胞系中的復制，又由于其細胞毒性低而具有寬的安全區(qū)，如試驗實施例所述。因此，式(I)硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽可以用于預防或治療乙型肝炎。
式(I)硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽能通過U.S.4,327,223,5,103,013和5,158,950所述的方法容易地制得。
本發(fā)明還提供了一種預防或治療乙型肝炎的藥物組合物，包括有效量的式(I)硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽和藥物可接受的載體。
用藥物可接受的載體可以將本發(fā)明藥物組合物制備成各種制劑形式。本發(fā)明可以使用的藥物可接受的載體包括但不限于，適宜的稀釋劑、溶劑、填充劑、粘合劑、分散劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑和濕潤劑。如果需要，本組合物可以進一步包括增溶劑、緩沖劑、防腐劑、著色劑、香料、甜味劑等等。
本組合物的藥物組合物可以根據所希望的治療方式配制。例如，諸如配制成口服形式的片劑、膠囊和顆粒劑；可以通過任何常規(guī)的方法使用稀釋劑(如，蔗糖、乳糖、葡萄糖、淀粉、甘露糖醇)，粘合劑(如，糖漿、阿拉伯樹膠、山梨醇、黃耆膠、羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、淀粉漿)；崩解劑(如，淀粉、羧甲基纖維素或其鈣鹽、微晶纖維素、交聯(lián)吡咯烷酮(crospovidone)、淀粉-甘醇酸鈉)；潤滑劑(如，滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、二氧化硅)；濕潤劑(如，十二烷基硫酸鈉、甘油)等制備。
本發(fā)明進一步提供了一種預防或治療某一對象的乙型肝炎的方法，包括向該對象給人有效量的式(I)硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽。
劑量可以根據給藥方式和配劑類型以及患者的年齡、體重、敏感度和狀況而定。在口服給藥的情況下，有效日劑量可以在20mg-1.0g的范圍。含有20mg-200mg式(I)化合物或其藥物可接受的鹽的劑量單位可以方便地用以滿足日劑量的要求。用藥量和劑量單位可以超過上述的范圍。
下面的試驗實施例和實施例以舉例說明本發(fā)明的某些方面為目的，對本發(fā)明的范圍不構成任何限制。試驗實施例1抗病毒活性試驗用Sells，M.A.等人在Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.,84,1005-1009(1987)中描述的常規(guī)方法評價本發(fā)明化合物對HBV DNA復制的抑制活性。
用六個獨立的培養(yǎng)物、以四個濃度測定下面列出的化合物的抗HBV活性1、2-(1，3-二硫環(huán)丁2-基亞基)丙二酸二異丙酯；2、2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯；3、2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(1，3，4-噻二唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯；4、2-(1，3-二硫環(huán)丁-2基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯；5、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯；6、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯；7、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-羧基噻唑-2-基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯；8、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸乙酯；
9、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-噻唑基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯；和10、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-(N-芐基氨基甲酰基)乙酸異丙酯。
將每個試驗化合物溶解在DMSO中，濃度為7、20、67、或200μM得到試驗溶液。在室溫下將測定量的試驗溶液加入得到裝有培養(yǎng)基的24孔平底組織培養(yǎng)皿中，然后，向其中加入2.2.15細胞系。然后不間斷地以日劑量用試驗化合物處理所得的培養(yǎng)物8天。第9天處理后24小時，通過Southern印跡雜交試驗分析法(Korva and Gerin，AntiviralResearch，19，55-70(1992))分析胞外HBV DNA的量。此測量結果示于表I。
在未處理的培養(yǎng)物(對照)中的HBV病毒DNA量為81±9pg/ml培養(yǎng)基。在此分析中，1.0pg胞外HBV DNA/ml培養(yǎng)基對應于約3×105病毒粒子/ml培養(yǎng)基。
表I
一般認為，與對照物相比，當處理過的培養(yǎng)基的胞外HBV DNA量降低3倍或更多倍時，在統(tǒng)計學上是明顯的(p＜0.05)。
如表1所示，本發(fā)明的每個化合物均表現出優(yōu)異的抗HBV活性。試驗實施例2毒性試驗用廣泛用于評價細胞在各種病毒宿主體系，包括HSV(單純性皰疹病毒)和HIV(人免疫缺損病毒)的生存性的常規(guī)中性紅色染料吸收分析法進行本發(fā)明化合物的胞毒性試驗(參見，Finter，N.B.，“Dye uptake method for assessing viral cytopathogenicity and theirapplication to interferon assays”，J.Gen Viral，5，419-427(1969))。
用六個獨立的培養(yǎng)物、以四種試驗濃度進行本化合物的毒性分析1、2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)丙二酸二異丙酯；2、2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(1，3，4-噻二唑-2-基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯；3、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯；4、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯；5、2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-(N-芐基氨基甲?；?乙酸異丙酯。
培養(yǎng)用于毒性分析的細胞，用試驗化合物以相同于抗病毒活性試驗所用的方法(參見試驗實施例1)處理這些細胞。
用分光光度計定性測定內化染料在510nm(A510)的吸收率。試驗化合物的中性紅色染料吸收值(％)表示為平均A510值(±標準誤差，n＝6)相對于未經處理的對照物的平均A510值(n＝9)的百分數，并用作表示相對毒性的指數。結果示于表II。
表II
如表II所示，本發(fā)明化合物的毒性沒有顯示出隨濃度的提高。這些結果表明本發(fā)明化合物的胞毒性非常低，特別在有效劑量范圍內是安全的。實施例1片劑的配制用表III列出的成分制備片劑形式的本發(fā)明藥物組合物。
用聚乙烯基吡咯烷酮溶液將2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯(活性成分)，乳糖，預凝膠淀粉，十二烷基硫酸鈉，交聯(lián)吡咯烷酮和膠體二氧化硅的混合物制成顆粒狀，通過20目的篩。所得的顆粒與硬脂酸鎂混合，將混合物制成片。
表III
實施例2片劑的制備重復實施例的操作方法，除了用微晶纖維素代替預凝膠淀粉。
表IV
實施例3膠囊的配制用表V所列的成分制備膠囊形式的本發(fā)明藥物組合物。
2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯(活性成分)，乳糖，微晶纖維素，十二烷基硫酸鈉，交聯(lián)吡咯烷酮和膠體二氧化硅通過20目的篩然后混合。混合物與硬脂酸鎂混合并被填充在明膠硬膠囊中。
表V
實施例4膠囊的配制重復實施例3的方法，除了用8g淀粉-甘醇酸鈉代替交聯(lián)吡咯烷酮。實施例5顆粒劑的配制用表VI所列的成分制備顆粒形式的本發(fā)明藥物組合物。
將聚乙烯基吡咯烷酮溶液加入到2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯(活性成分)，乳糖，交聯(lián)吡咯烷酮，微晶纖維素，和膠體二氧化硅的混合物中然后混合。用擠壓機將所得的混合物造粒，然后干燥得到顆粒。
表VI
雖然本發(fā)明是以具體的實施方案描述的，但應認識到本發(fā)明領域的技術人員可以作出的各種改進和變化也落入由所附權利要求定義的本發(fā)明范圍中。
權利要求
1.式(I)的硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預防或治療乙型肝炎的用途 其中，Y是-CH2-或-CH＝CH-；A是NH或O；R1是有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基；和當A是0時，R2是具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，當A是NH時，R2是芐基，2-吡啶基，2-噻唑基，4-甲基噻唑-2-基，4-羧基-噻唑-2-基或1，3，4-噻二唑-2-基。
2.權利要求1的用途，其中的硫代乙烯酮衍生物選自2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)丙二酸二異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(1，3，4-噻二唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)丁-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-吡啶基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-羧基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸異丙酯，2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(4-甲基噻唑-2-基)氨基甲?；鵠乙酸乙酯，2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-[N-(2-噻唑基)氨基甲酰基]乙酸異丙酯和2-(1，3-二硫環(huán)戊烯-2-基亞基)-2-(N-芐基氨基甲?；?乙酸異丙酯。
全文摘要
式(I)的硫代乙烯酮衍生物或其藥物可接受的鹽用于預防或治療乙型肝炎的用途，其中，Y是-CH
文檔編號A61P1/16GK1152259SQ96190391
公開日1997年6月18日 申請日期1996年4月26日 優(yōu)先權日1995年4月28日
發(fā)明者李鐘郁, 俞重根, 李相昊 申請人:株式會社柳韓洋行