專利名稱：雙脲衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及阻斷細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并抑制白介素-2(IL-2)產(chǎn)生的雙脲衍生物、其制備方法、包含該衍生物的組合物以及用于自身免疫性疾病、炎性疾病、器官移植排斥和與IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)有關(guān)的其它病癥以及惡性瘤形成的臨床治療的方法和應(yīng)用。由于它們具有選擇性免疫調(diào)節(jié)性，所以本發(fā)明的這些化合物以及藥物組合物可用于預(yù)防和治療急性或慢性炎癥、自身免疫性疾病(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬)、移植物抗宿主病(以及其它形式的器官或骨髓移植排斥)和惡性瘤形成病。本發(fā)明更特定地涉及適用于治療例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和移植物抗宿主病的新型雙脲衍生物。
背景技術(shù)：
T淋巴細(xì)胞在免疫響應(yīng)中起著重要作用，其既可作為直接效應(yīng)細(xì)胞又可作為調(diào)節(jié)許多其它類型細(xì)胞的細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)細(xì)胞，所說(shuō)的其它類型的細(xì)胞主要是參與機(jī)體防御機(jī)理的細(xì)胞。這種調(diào)節(jié)功能是通過(guò)直接的細(xì)胞-細(xì)胞接觸或者通過(guò)分泌各種細(xì)胞因子而提供的。因此，T細(xì)胞的適宜功能對(duì)于維持免疫系統(tǒng)內(nèi)外的正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定而言是很重要的。相反，其功能異?？蓪?dǎo)致免疫疾病，例如自身免疫性、變應(yīng)性和免疫缺陷。實(shí)際上，在許多炎性和自身免疫性疾病中，最初常常發(fā)生T-細(xì)胞活化。
1型T輔助細(xì)胞(Th1)的CD4+T細(xì)胞在和諧的炎性免疫響應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。Th1細(xì)胞產(chǎn)生致炎細(xì)胞因子，這些致炎因子常常與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性有關(guān)并常常誘導(dǎo)器官特異性的自身免疫性疾病(Abbas等人，1996)。細(xì)胞因子IL-2是Th1活性的主要調(diào)節(jié)劑(Waldmann等人，2001)。IL-2是一種在調(diào)節(jié)T-細(xì)胞的活化和增殖中起著重要作用的自分泌生長(zhǎng)因子。當(dāng)機(jī)體對(duì)其自己的細(xì)胞發(fā)動(dòng)Th1響應(yīng)時(shí)，會(huì)發(fā)生自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病和牛皮癬。類似地，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫造成了移植器官的排斥(同種異體移植物排斥)和移植物抗宿主病(GVHD)——一種在骨髓移植后發(fā)生的嚴(yán)重的并發(fā)癥。除IL-2外，表明在炎性和自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理中還涉及其它致炎性Th1細(xì)胞因子(包括TNF-α和IFN-γ)失調(diào)(Sacca等人，1997)。臨床研究已經(jīng)表明干擾IL-2活性有效抑制了體內(nèi)免疫響應(yīng)(Waldmann等人，1993)。因此，抑制IL-2產(chǎn)生的物質(zhì)在治療上可用于選擇性抑制需要該類免疫抑制的患者體內(nèi)的免疫響應(yīng)。
許多自身免疫性炎性疾病的常見(jiàn)的免疫病理學(xué)標(biāo)志為發(fā)炎組織中的T-細(xì)胞侵入和積聚。這種過(guò)程中涉及的一種機(jī)理是由于激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡方面的缺陷而使得不能除去自體反應(yīng)性的T-細(xì)胞(Eguchi等人，2001)，這表明在自身免疫性的發(fā)病機(jī)理中涉及細(xì)胞凋亡的缺乏。因此，努力糾正導(dǎo)致自身免疫性疾病的免疫調(diào)節(jié)缺陷的方法可能包括目標(biāo)在于抑制細(xì)胞因子(如IL-2)和/或消除自體反應(yīng)性Th1細(xì)胞的發(fā)明。淋巴細(xì)胞不適當(dāng)?shù)拇婊钜才c淋巴瘤的發(fā)生增加有關(guān)(Bleesing等人，2003)。此外，腫瘤發(fā)育的一個(gè)重要方面通常是抑制細(xì)胞凋亡，并且人類的腫瘤似乎利用了一些不同的機(jī)理來(lái)逃避細(xì)胞自殺(White等人，2001)。因此，克服抗細(xì)胞凋亡機(jī)理以及激活腫瘤細(xì)胞細(xì)胞凋亡的策略將抑制腫瘤形成。
在文件WO03051797中描述了一些IL-2/IL-2受體(IL-2R)結(jié)合的小分子抑制劑。這種方法可阻斷IL-2/IL-2R結(jié)合的增殖活性，但是其不能抑制其它致炎細(xì)胞因子。此外，還對(duì)抗IL-2Rα的抗體的應(yīng)用進(jìn)行了描述。但是，這些抗體不能被口服利用。還可以通過(guò)使用多種常見(jiàn)的免疫抑制藥，如糖皮質(zhì)激素、環(huán)孢菌素、硫唑嘌呤或麥考酚酸莫酯來(lái)抑制IL-2的作用。這些化合物相對(duì)沒(méi)有選擇性并且具有限制劑量的副作用。因此，需要可有效抑制IL-2產(chǎn)生從而可用來(lái)預(yù)防和治療免疫病癥的化合物。
用小分子抑制IL-2的現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有描述與本發(fā)明的雙脲化合物結(jié)構(gòu)相關(guān)的化合物。但是，在文獻(xiàn)中已經(jīng)對(duì)一些涉及相關(guān)雙脲衍生物的其它應(yīng)用進(jìn)行了描述。
在US 5,358,946中描述了一些作為?；?輔酶A膽固醇酰基-轉(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑的脲衍生物以及其用于治療動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用。
在US 6,316,623中描述了用于在生物學(xué)試驗(yàn)中進(jìn)行篩選以確定藥用化合物的乙二胺化合物庫(kù)。
在EP 0325397中描述了用于制備用來(lái)抑制個(gè)體的酰基-輔酶A膽固醇?；?轉(zhuǎn)移酶(ACAT)的藥物的雙脲衍生物。
在J.Am.Chem.Soc.1995，117，89-99中描述了1，2-二氨基乙烷和1，3-二氨基丙烷雙脲的合成和構(gòu)象。
在CA Chem-cat數(shù)據(jù)庫(kù)中也可以找到雙脲衍生物。但是沒(méi)有明確這些化合物的藥理學(xué)活性。
特定提及的上述取代方式和應(yīng)用、雙脲類物質(zhì)都在本發(fā)明的范圍之外。
本發(fā)明的概述本發(fā)明的化合物通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制了由T-細(xì)胞進(jìn)行的IL-2和其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。IL-2的這種抑制作用在治療學(xué)上可用于選擇性抑制免疫功能。這些化合物還可促進(jìn)誘導(dǎo)活化T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡。該類選擇性抑制免疫性的結(jié)果包括降低了外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞增殖和細(xì)胞免疫響應(yīng)，并且同時(shí)不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性或者不希望的副作用。因此，抑制IL-2產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)活化T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡是有吸引力的預(yù)防和治療各種免疫病癥的方法，所說(shuō)的免疫病癥包括炎性疾病、自身免疫性疾病、器官和骨髓移植排斥和與IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)和細(xì)胞調(diào)節(jié)缺陷有關(guān)的其它病癥。這些化合物特別是可用于預(yù)防或治療急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病(和其它形式的器官或骨髓移植排斥)以及惡性瘤形成病。


圖1.化合物A對(duì)PMA/伊屋諾霉素刺激的人T-細(xì)胞中IL-2產(chǎn)生的作用(未進(jìn)行處理的受刺激的細(xì)胞的％)。該曲線得自一種典型的實(shí)驗(yàn)。
本發(fā)明的描述本發(fā)明要解決的問(wèn)題是要提供一些由于其藥理學(xué)性質(zhì)、在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械母吖πШ偷退降母弊饔枚徽J(rèn)為在與病理性炎癥、自身免疫性或其它病理性細(xì)胞調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病的治療中很有價(jià)值的化合物。本發(fā)明還包括所說(shuō)化合物用于制備抑制IL-2產(chǎn)生的藥物的應(yīng)用。這些化合物還抑制了其它致炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和干擾素-γ(IFN-γ)的產(chǎn)生并促進(jìn)細(xì)胞凋亡(激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡)。在一個(gè)特定的方面，本發(fā)明提供了用于抑制IL-2產(chǎn)生的藥物的制備、治療其中可以通過(guò)抑制IL-2產(chǎn)生和T-細(xì)胞活化來(lái)在治療學(xué)上改變所說(shuō)疾病病理學(xué)的疾病的方法。該類疾病的實(shí)例有炎性和自身免疫性疾病、器官移植排斥以及惡性瘤形成病。這些化合物特別是可用于預(yù)防或治療急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病(以及其它形式的器官或骨髓移植排斥)和惡性瘤形成疾病。本發(fā)明更特定地涉及適用于治療例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和移植物抗宿主病的新型雙脲衍生物。
本發(fā)明的一個(gè)方面涉及通式I的化合物或通式I化合物的可藥用的鹽 其中A是Ph-Y(1-3)或Ar-X(0-2)；R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基，以及未被取代或被選自氟、氯、溴和甲基的取代基取代的苯基；
Ar選自苯基、1-萘基、2-萘基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、6-喹啉基和5-嘧啶基；X(0-2)表示0至2個(gè)選自C1-C6支鏈或直鏈的烷基、C1-C6支鏈或直鏈的烷氧基、C1-C6支鏈或直鏈的?；?、氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基、二乙基氨基和三氟甲氧基的取代基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是1-4，優(yōu)選地是2-4。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的化合物為通式Ia的化合物或通式Ia化合物的可藥用的鹽 其中R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是2-4。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的化合物為通式Ib的化合物或通式Ib化合物的可藥用的鹽
其中R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基；Ar選自苯基、1-萘基、2-萘基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、6-喹啉基和5-嘧啶基；X(0-2)表示0至2個(gè)選自C1-C6支鏈或直鏈的烷基、C1-C6支鏈或直鏈的烷氧基、C1-C6支鏈或直鏈的?；?、氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基、二乙基氨基和三氟甲氧基的取代基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是2-4。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、4-甲基-哌嗪-1-基；m選自2和3；n選自1和2；Y(1-3)是一個(gè)選自氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基和二乙基氨基的取代基。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，Ar選自苯基、2-萘基和4-吡啶基，m選自2和3；Y(1-3)是選自氟、氯、溴和三氟甲基的取代基之一。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的化合物選自1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲；1-{2-[3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二甲基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；3-(4-溴-苯基)-1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(2，6-二氯-吡啶-4-基)-脲；3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲；
1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-氟-苯基)-1-{2-[3-(3-氟-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[1-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二乙基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二-乙基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲；1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-二甲基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(4-溴-苯基)-3-{3-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-丙基}-脲；1-(2-二異丙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；
3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲；3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[3-(3-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；并且1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基)-脲。
本發(fā)明第二方面涉及用作藥物的上述化合物。
本發(fā)明第三方面涉及上述化合物在制備用于治療可以由抑制IL-2和其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)活化T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡而受益的免疫病癥的藥物中的應(yīng)用。
在所說(shuō)應(yīng)用的一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的免疫病癥選自炎性疾病、自身免疫性疾病、器官和骨髓移植排斥以及與致炎細(xì)胞因子，尤其是IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)和細(xì)胞調(diào)節(jié)缺陷有關(guān)的其它病癥。
在所說(shuō)應(yīng)用的另一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的免疫病癥選自急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病和惡性瘤形成疾病。
本發(fā)明第四方面涉及一種包含上述化合物和一種或多種可藥用的賦形劑或載體的藥物組合物。
在所說(shuō)藥物組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的賦形劑選自填充劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、著色劑、甜味劑、緩沖劑、酸化劑、稀釋劑和防腐劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的藥物組合物被口服給藥、肌內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥或皮下給藥、通過(guò)植入物給藥、直腸給藥、鼻內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥、局部給藥、或胃腸外給藥。
本發(fā)明第五方面涉及一種治療方法，其包括給患有可以由抑制IL-2或其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)自體反應(yīng)性T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡而受益的免疫病癥的患者施用藥學(xué)有效量的上述化合物或藥物組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的免疫病癥選自炎性疾病、自身免疫性疾病、器官和骨髓移植排斥和與致炎細(xì)胞因子，尤其是IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)和細(xì)胞調(diào)節(jié)缺陷有關(guān)的其它病癥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所說(shuō)的免疫病癥選自急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病和惡性瘤形成病。
權(quán)利要求中所公開(kāi)的本發(fā)明的所有實(shí)施方案由此被包括在本說(shuō)明書(shū)中。用下面的實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非限制性說(shuō)明。
通式(I)的化合物可以用文獻(xiàn)中已知的方法和下面的方法來(lái)進(jìn)行制備。
方法A通式(I)的化合物可以用現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的方法來(lái)進(jìn)行制備。制備的一般方法如流程圖A(“對(duì)稱的”雙脲衍生物)和流程圖B(“不對(duì)稱的”雙脲衍生物)所示。
流程圖A
流程圖B 式(Ia)的“對(duì)稱的”雙脲衍生物可以用常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行制備，例如，可以通過(guò)將異氰酸酯衍生物(II)與二胺衍生物(III)在惰性溶劑如二氯甲烷中進(jìn)行反應(yīng)(流程圖A)來(lái)進(jìn)行制備?？梢允紫扔贸Ｒ?guī)方法，如t-BOC對(duì)該二胺(III)進(jìn)行保護(hù)(中間體(V))，或者其可以過(guò)量使用以降低二?；?，從而制得一種“不對(duì)稱的”雙脲衍生物(Ib)(流程圖B)。
在下面的實(shí)驗(yàn)描述中，用AutoNom Standard來(lái)產(chǎn)生所說(shuō)的化合物名稱。
中間體衍生物(III)的合成實(shí)施例1N1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-乙烷-1，2-二胺將1-(2-氯-乙基)-吡咯烷鹽酸鹽(34g，0.2mol)在水(20mL)中的溶液加入到乙二胺(24g，1mol)在水(70mL)中的溶液中。將該反應(yīng)混合物攪拌回流一整夜。向其中加入NaOH(約20g)直至該溶液飽和。將該溶液用乙醚萃取幾次。將所合并的有機(jī)層用碳酸鉀干燥并對(duì)其進(jìn)行蒸發(fā)。將所得的油狀物蒸餾(108-109℃/9mbar)，得到標(biāo)題化合物(16g，51％)。
用與上面方法相似的方法來(lái)合成不能通過(guò)商業(yè)途徑獲得的其它中間體衍生物(III)。
N-(2-氨基-乙基)-N′，N′-二甲基-乙烷-1，2-二胺b.p.75-80℃/12-10mbar，收率為40％。
N1-(2-哌啶-1-基-乙基)-乙烷-1，2-二胺b.p.118℃/14mbar，收率為71％。
N-(2-氨基-乙基)-N′，N′-二甲基-丙烷-1，3-二胺b.p.92-95℃/12-15mbar。
N-(2-氨基-乙基)-N′，N′-二異丙基-乙烷-1，2-二胺b.p.110-113℃/11-14mbar。
N1-(2-二甲基氨基-乙基)-丙烷-1，3-二胺b.p.82℃/10mbar。
N1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-丙烷-1，3-二胺b.p.114-120℃/11mbar。
式(I)的雙脲衍生物的合成流程圖A(式Ia的“對(duì)稱的”雙脲)實(shí)施例21-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲，(化合物J)在N2下，在0℃下，將1-異氰酸酯-4-三氟甲基-苯(1.05g，5.6mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液滴加到N1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-乙烷-1，2-二胺(0.4g，2.5mol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌一整夜。將該溶液減壓濃縮并將殘余物用CHCl3進(jìn)行處理。標(biāo)題化合物沉淀出來(lái)，對(duì)其進(jìn)行收集，得到標(biāo)題化合物(0.9g，80％)。
1H NMR(CD3OD)δ1.83-1.90(4H，m)，2.69(4H，s)，2.81(2H，t)，3.43(2H，t)，3.55(4H，q)，7.44-7.60(8H，m)。
用實(shí)施例2中所述的方法制得的其它“對(duì)稱的”雙脲衍生物有1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲；收率為81％。
1H NMR(CDCl3)δ1.03(6H，t)，2.65(4H，q)，2.74(2H，d)，3.66(2H，d)，3.95(2H，s)，4.11(2H，s)，7.11(2H，d)，7.16-7.30(4H，m)，7.35(2H，d)，7.50(1H，s，寬峰)，7.70(1H，s，寬峰)，12.41(1H，s，寬峰)。
1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲，(化合物K)；收率為77％。
1H NMR(CDCl3)δ1.60-1.70(6H，m)，2.50-2.67(6H，m)，3.40-3.54(6H，m)，6.37(1H，s，寬峰)，7.14-7.26(4H，m)，7.35(1H，t)，7.53-7.71(4H，m)，11.07(1H，s，寬峰)。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲，鹽酸鹽，(化合物A)；收率為65％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.25(6H，t)，3.1-3.4(8H，m)，3.51(2H，t)，3.72(2H，t)，6.9(1H，s)，7.23(1H，d)，7.28(1H d)，7.42(2H，t)，7.51(1H，d)，7.87(1H，d)，8.02(2H，d)，9.14(1H，s)，9.6(1H，s)，9.94(1H，s，寬峰)。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為82％。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.99(6H，t)，2.54-2.67(6H，m)，3.28-3.48(6H，m)，6.40(H，s，寬峰)，7.54-7.64(8H，m)，9.13(1H，s)。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-氟-苯基)-1-{2-[3-(3-氟-苯基)-脲基]-乙基}-脲，鹽酸鹽，收率為83％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.22(6H，t)，3.3-3.4(8H，m)，3.50(2H，t)，3.68(2H，t)，6.68-6.8(3H，m)，7.1(1H，d)，7.21-7.28(2H，m)，7.38(1H，d)，7.48(1H，t)，7.53(1H，d)，8.96(1H，s)，9.34(1H，s)，9.77(1H，s，寬峰)。
3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.05(6H，t)，2.58-2.73(6H，m)，3.35-3.50(6H，m)，6.67(1H，s寬峰)，6.93(2H，d)，7.05(2H，d)，7.08-7.20(4H，m)，7.67(1H，s寬峰)，11.34(1H，s，寬峰)。
3-(4-溴-苯基)-1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲，(化合物E)；收率為72％。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.25(6H，s)，2.48(2H，t)，3.22-3.42(8H，m)，6.34(1H，s)，7.36-7.42(8H，m)，8.81(1H，s)。
3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲；用CHCl3結(jié)晶，(化合物C)；收率為71％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.72(4H，s)，2.54(4H，s)，2.64(2H，t)，3.21-3.29(2H，t)，3.35-3.45(4H，m)，6.31(1H，s)，7.23-7.30(4H，m)，7.40-7-46(4H，m)，8.79(1H，s)，9.67(1H，s，寬峰)。
1-(3-氟-苯基)-3-(2-[3-(3-氟-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-脲；用乙醚結(jié)晶；收率為85％。
1H NMR(CDCl3)δ1.66(2H，s)，1.90(4H，s)，2.73(4H，s)，2.83(2H，d)，3.40-3.50(4H，m)，6.59(1H，s，寬峰)，6.61(1H，t)，6.67(1H，t)，6.74(1H，d)，6.91(1H，d)，7.00-7.20(4H，m)，7.52(1H，s，寬峰)，11.26(1H，s，寬峰)。
1-{2-[1-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；用CH2Cl2結(jié)晶；收率為85％。
1H NMR(CDCl3)δ1.81-1.89(6H，m)，2.55-2.60(6H，m)，3.47-3.54(6H，m)，6.25(1H，s，寬峰)，7.35(2H，d)，7.43(4H，d)，7.51(2H，d)，10.32(1H，寬峰)。
1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為52％。
1H NMR(CD3OD)δ1.78-1.88(2H，m)，2.28(6H，s)，2.39(2H，t)，3.40-3.54(6H，m)，7.24(2H，s)，7.40(2H，t)，7.53(1H，d)，7.64(1H，d)，7.88(2H，d)。
1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為78％。
1H NMR(CD3OD)δ1.10(12H，d)，2.77(2H，s)，3.10-3.22(2H，m)，3.43-3.54(6H，m)，7.45-7.59(8H，m)。
1-苯乙基-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為91％。
1H NMR(CDCl3)δ2.88(2H，t)，3.17(2H，s)，3.35(2H，t)，3.53(2H，t)，6.60(1H，s)，7.18(2H，d)，7.21-7.40(6H，m)，7.41-7.49(5H，m)，7.90(1H，s)。
流程圖B(式Ib的“不對(duì)稱的”雙脲)中間體衍生物(V)的合成，方法1實(shí)施例3[2-(2-二乙基氨基-乙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯在0℃下，將二碳酸二叔丁酯(690mg，3.1mmol)在甲醇(15mL)中的溶液滴加到進(jìn)行著攪拌的N1-(2-二乙基氨基-乙基)-乙烷-1，2-二胺(570μl，3.1mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中。將該反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后將其濃縮。將該粗品用快速硅膠色譜純化，用MeOH和MEOH/TEA 99∶1作為洗脫劑。將富含產(chǎn)物的級(jí)分真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(728mg，89％)。1H NMR(CDCl3)δ1.02(6H，t)，1.46(9H，s)，2.48-2.58(6H，m)，2.67(2H，t)，2.74(2H，t)，3.17-3.29(2H，m)，3.40-3.51(1H，s)，5.19(1H，s，寬峰)。
如實(shí)施例3所述的那樣合成下面的(V)型中間體[2-(2-吡咯烷-1-基-乙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
-氨基甲酸叔丁酯。
中間體衍生物(V)的合成，方法2實(shí)施例4[2-(3-吡咯烷-1-基-丙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯將(2-溴-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.2mmol)加入到進(jìn)行著攪拌的3-吡咯烷-1-基-丙基胺(250mg，2.0mmol)、NaCO3(504mg，3.6mmol)和NaI(166mg，1.0mmol)在乙腈(30mL)中的溶液中。將該反應(yīng)混合物回流一整夜。向其中加入水(50mL)并將該混合物用CH2Cl2進(jìn)行萃取。將有機(jī)層用Na2SO4干燥并將其減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(411mg，76％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.43(9H，s)，1.67(2H，t)，1.76(4H，s)，2.49(4H，s)，2.55(2H，m)，2.65(2H，t)，2.71(2H，t)，3.20(2H，t)。
如實(shí)施例4所述的那樣合成下面的(V)型中間體[2-(3-二乙基氨基-丙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
中間體衍生物(VII)的合成實(shí)施例5{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯將[2-(2-二乙基氨基-乙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(262mg，1.0mmol)和1-異氰酸酯-4-三氟甲基-苯(188mg，1.0mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮。將殘余物溶解于氯仿中并使其通過(guò)一根Bond Elute NH2柱。將該粗品用快速色譜進(jìn)行純化(SiO2，首先用EtOAc，然后用MeOH進(jìn)行洗脫)，得到標(biāo)題化合物(180mg，40％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.07(6H，t)，1.40(9H，s)，2.66(6H，q)，3.30(2H，q)，3.38(2H，d)，3.45(2H，t)，5.33(1H，s)，7.41(2H，d)，7.48(2H，d)，11.21(1H，s，寬峰)。
用實(shí)施例5所述的方法來(lái)合成下面的(V)型中間體{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-硫脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-二乙基氨基-苯基)-硫脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[3-(4-甲氧基-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{3-[1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
{2-[1-(3-二乙基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯。
中間體衍生物(VIII)的合成實(shí)施例61-(2-氨基-乙基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲將[2-(2-二乙基氨基-乙基氨基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.4mmol)混懸于2M HCl在乙醇中的溶液中并將其在環(huán)境溫度下攪拌30分鐘。將該反應(yīng)混合物減壓濃縮。將殘余物溶解于CHCl3中并用飽和NaHCO3溶液對(duì)其進(jìn)行洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并將其減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物粗品(124mg，89％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(6H，t)，1.43(2H，s)，2.60-2.70(6H，m)，2.90(2H，t)，3.36-3.43(4H，m)，7.40(2H，d)，7.46(2H，d)，11.15(1H，s)。
用實(shí)施例6的方法合成其它(VIII)型的中間體。
1-(2-氨基-乙基)-3-(4-氯-苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-硫脲。
1-(2-氨基-乙基)-3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲。
1-(2-氨基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲。
1-(2-氨基-乙基)-3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲。
式(Ib)的“不對(duì)稱的”雙脲衍生物的合成實(shí)施例71-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲，(化合物B)將1-(2-氨基-乙基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲(78.5mg，0.23mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液在環(huán)境溫度下進(jìn)行攪拌并向其中加入1-異氰酸酯-3-三氟甲基-苯(31.2μl，0.23mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后將其減壓濃縮。將該粗品材料通過(guò)硅膠快速色譜純化，用MeOH作為洗脫劑。將富含產(chǎn)物的級(jí)分真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(92mg，76％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(6H，2t)，2.65-2.77(6H，m)，3.45(6H，s)，6.64(1H，s，寬峰)，7.06-7.23(3H，m)，7.35(2H，d)，7.46(2H，d)，7.58(1H，s)，7.98(1H，s，寬峰)，11.70(1H，s，寬峰)。
用實(shí)施例7的方法制得的其它式(I)的“不對(duì)稱的”雙脲衍生物有1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二-乙基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-脲；收率為51％。
1H NMR(CDCl3)δ1.01(6H，t)，2.63(4H，q)，2.72(2H，d)，3.55-3.69(4H，m)，4.04(2H，t)，6.18(1H，s，寬峰)，7.18(4H，t)，7.25-7.32(2H，m)，12.6(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二甲基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲，鹽酸鹽(化合物L(fēng))。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.82(6H，2s)，3.20-3.40(4H，m)，3.49(2H，t)，3.71(2H，t)，6.79(1H，t)，7.26(2H，d)，7.43(2H，d)，7.58(2H，d)，7.81(2H，d)，9.14(1H，s)，9.31(1H，s)，9.91(1H，s，寬峰)。
1-(2-二甲基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為71％。
1H NMR(CDCl3)δ2.37(6H，s)，2.60(2H，s)，3.34(6H，s)，6.52(1H，s)，6.91-6.99(1H，m)，7.15(4H，d)，7.34(2H，d)，7.46(2H，d)，7.71(1H，s)，11.58(1H，s，寬峰)。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲，(化合物F)；收率為74％。
1H NMR(CDCl3)δ1.06(6H，t)，2.59-2.71(6H，m)，3.45(6H，s)，6.54(1H，s)，6.89-6.97(1H，m)，7.14(4H，d)，7.35(2H，d)，7.46(2H，d)，7.77(1H，s)，11.55(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二乙基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為45％。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(6H，t)，2.61-2.74(6H，m)，3.45(6H，s)，6.59(1H，s)，6.96-7.10(4H，m)，7.32(2H，d)，7.46(2H，d)，7.80(1H，s)，11.64(1H，s，寬峰)。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2哌啶-1-基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲。
1H NMR(CDCl3)δ1.45-2.07(6H，m)，3.06(2H，s，寬峰)，3.47(2H，s)，3.63(2H，s，寬峰)，3.77(3H，s)，3.87(2H，d)，3.93(2H，d)，4.34(2H，s)，6.79(1H，d)，7.00(1H，d)，7.06(1H，s)，7.23(1H，t)，7.28-7.39(4H，m)。
1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為100％，(化合物G)。
1H NMR(CDCl3)δ1.54(2H，s)，1.65(4H，s)，2.61(6H，d)，3.47(6H，d)，6.66(1H，s)，7.03(1H，s)，7.11-7.21(2H，m)，7.38-7.52(4H，m)，7.63(1H，s)，8.05(1H，s，寬峰)，11.04(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為51％。
1H NMR(CDCl3)δ1.53(2H，s)，1.64(4H，m)，2.68(6H，s)，3.45(6H，d)，6.61(1H，s)，7.01(4H，d)，7.45(4H，d)，7.75(1H，s)，10.97(1H，s，寬峰)。
1-(4-氯-芐基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為73％。
1H NMR(CD3OD)δ3.30(2H，t)，3.51(2H，t)，4.65(2H，s)，7.23(2H，d)，7.29-7.39(6H，m)，7.52(2H，d)，7.71(2H，d)。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(2，6-二氯-吡啶-4-基)-脲，(化合物M)；收率為21％。
Esi-Ms m/z 547(M+H+)1-{3-[3-(3-氯-苯基)-脲基]-丙基}-1-(2-二甲基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為87％。
1H NMR(CDCl3)δ1.66-1.79(2H，m)，2.39(6H，s)，2.56-2.65(2H，m)，3.19-3.28(2H，m)，3.29-3.34(2H，m)，3.38(2H，t)，6.44(1H，t)，6.89(1H，d)，7.03-7.15(2H，m)，7.33(2H，d)，7.40(1H，s)，7.45(2H，d)，7.86(1H，s)，11.47(1H，s，寬峰)。
1-{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲；收率為69％。
1H NMR(CDCl3)δ1.01(6H，2t)，2.52-2.63(6H，m)，3.28(2H，d)，3.39-3.49(4H，m)，6.27(1H，s)，7.16(2H，d)，7.25-7.37(3H，m)，7.42(2H，t)，7.56-7.71(3H，m)，7.82(1H，d)，7.98(1H，d)，11.25(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲；收率為69％。
1H NMR(CDCl3)δ0.97(6H，t)，2.43-2.58(6H，m，寬峰)，3.22(2H，s)，3.39(4H，s)，6.47(1H，s)，6.96(2H，d)，7.10(2H，d)，7.29(1H，t)，7.35-7.44(2H，m)，7.64(2H，t)，7.80(1H，d)，7.91-7.99(2H，m)，10.98(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(3-氯-苯基)-脲基)-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為100％。
1H NMR(CDCl3)δ1.05(6H，t)，1.79-1.90(2H，m)，2.53(2H，t)，2.65(4H，q)，3.46(6H，s)，6.47(1H，s，寬峰)，6.90(1H，d)，6.96(1H，s，寬峰)，7.04(1H，t)，7.33(1H，s)，7.41(2H，d)，7.48(2H，d)，7.72(1H，s，寬峰)，10.32(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為100％。
1H NMR(CDCl3)δ1.04(6H，t)，1.79-1.89(2H，m)，2.52(2H，t)，2.65(4H，q)，3.45(6H，s)，6.40(1H，s，寬峰)，7.06(2H，d)，7.25(2H，d)，7.37-7.57(5H，m)，10.30(1H，s，寬峰)。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-硫脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；收率為70％。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(6H，t)，1.16(6H，t)，2.61-2.74(6H，m)，3.30-3.45(6H，m)，3.53(2H，t)，3.80(2H，q)，6.64(2H，d)，7.04(2H，m)，7.22(2H，d)，7.43(1H，s)，7.45(2H，d)，11.26(1H，s，寬峰)。
3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為78％。
1H NMR(CD3OD)δ1.79-1.90(4H，m)，2.69(4H，s)，2.80(2H，t)，3.41(2H，t)，3.48-3.59(4H，m)，7.16-7.28(3H，m)，7.34-7.45(3H，m)，7.49(1H，d)，7.91(1H，s)。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-脲；收率為25％。
1H NMR(CDCl3)δ1.52(2H，s)，1.58-1.68(4H，m)，2.47-2.66(6H，m)，3.35-3.50(6H，m)，6.56(1H，s)，6.96-7.11(5H，m)，7.16(2H，d)，7.40(1H，s)，7.80(1H，s)，10.76(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲，(化合物D)；收率為10％。
1H NMR(CDCl3)δ1.51(2H，s)，1.56-1.66(4H，m)，2.45-2.64(6H，m)，3.37-3.50(6H，m)，6.55(1H，s)，6.91-6.97(1H，m)，7.06-7.24(5H，m)，7.38(1H，s)，7.62(1H，s)，7.99(1H，寬峰)，10.89(1H，寬峰)。
1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為59％。
1H NMR(CDCl3)δ2.42(6H，s)，2.68(2H，d)，3.41-3.53(6H，m)，6.51(1H，s)，7.13-7.23(3H，m)，7.32(2H，d)，7.46(2H，d)，7.62(1H，s)，7.87(1H，s，寬峰)，11.74(1H，s，寬峰)。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-脲；用CHCl3己烷重結(jié)晶；收率為63％。
1H NMR(CDCl3)δ1.52(2H，s)，1.61-1.70(4H，m)，2.50-2.64(6H，m)，3.41(4H，s)，3.46-3.52(2H，m)，3.70(3H，s)，6.58(1H，d)，6.79(1H，s)，6.85-6.96(3H，m)，7.03(2H，d)，7.17(1H，t)，7.74(1H，s)，10.65(1H，s，寬峰)。
1-{2-[3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲；收率為58％。
1H NMR(CDCl3)δ1.48(2H，s)，1.57-1.66(4H，m)，2.54-2.62(6H，m)，3.36-3.49(6H，m)，3.71(3H，s)，6.47(1H，s)，6.56(1H，d)，6.89(1H，d)，6.94(1H，s)，7.16(2H，t)，7.24(2H，d)，7.70(1H，s)，8.39(1H，d)，10.52(1H，寬峰)。
1-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲(化合物H)；收率為68％。
1H NMR(CDCl3)δ1.85(4H，s)，2.59(2H，s，寬峰)，2.90-2.97(2H，m)，3.30-3.49(6H，m)，3.61(2H，s，寬峰)，7.25(1H，d)，7.38(1H，t)，7.49(3H，d)，7.61(1H，s)，7.84(2H，d)，8.28(1H，s)，9.35(1H，s，寬峰)，10.13(1H，s，寬峰)。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為84％。
1H NMR(CDCl3)δ1.80-1.94(4H，m)，2.74(4H，s)，2.84(2H，d)，3.40-3.52(6H，m)，6.30(1H，s)，7.07-7.16(4H，m)，7.22(1H，寬峰)，7.32(2H，d)，7.50(2H，d)，11.41(1H，寬峰)。
1-(4-甲氧基-苯基)-3-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為52％。
1H NMR(CDCl3)δ1.87(4H，s)，2.69(4H，s)，2.79(2H，s)，3.44(6H，s)，3.74(3H，s)，6.21(1H，s)，6.74(2H，d)，7.06(2H，d)，7.19(1H，s)，7.31(2H，d)，7.45(2H，d)，11.21(1H，s，寬峰)。
1-(4-溴-苯基)-3-{3-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-丙基}-脲；收率為65％。
1H NMR(CD3OD)δ1.77-1.93(6H，m)，2.71-2.80(4H，m)，2.86(2H，t)，3.25(2H，t)，3.46(2H，t)，3.52(2H，t)，7.27-7.38(4H，m)，7.46-7.56(4H，m)。
1-(3-氯-苯基)-3-{3-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙基}-脲；收率為78％。
1H NMR(CD3OD)δ1.80-1.91(2H，m)，1.96(4H，s)，2.91-3.11(6H，m)，3.27(2H，t)，3.49(2H，t)，3.61(2H，t)，6.95(1H，d)，7.14-7.23(2H，m)，7.51-7.60(4H，m)，7.90(1H，s)。
3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為70％。
1H NMR(CD3OD)δ1.78-1.90(4H，m)，2.69(4H，s)，2.80(2H，t)，3.41(2H，t)，3.43-3.56(4H，m)，7.21(2H，d)，7.35(2H，d)，7.50-7.60(4H，m)。
1-(3-氯-苯基)-3-{2-[1-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為94％。
1H NMR(CDCl3)δ1.75-1.91(6H，m)，2.57(6H，s)，3.40-3.53(6H，m)，6.49(1H，s)，6.89(1H，d)，6.95(1H，s)，7.04(1H，t)，7.35(1H，s)，7.40(2H，d)，7.47(2H，d)，7.76(1H，s，寬峰)，10.28(1H，s)。
1-(4-溴-苯基)-3-{2-[1-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；收率為43％。
1H NMR(CDCl3)δ1.77-1.94(6H，m)，2.52-2.64(6H，m)，3.43-3.53(6H，m)，6.18(1H，s，寬峰)，7.15(3H，d)，7.30(2H，d)，7.41(2H，d)，7.51(2H，d)，10.25(1H，s)。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二甲基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CD3OD)δ1.75-1.86(2H，m)，2.27(6H，s)，2.36(2H，t)，3.38-3.51(6H，m)，7.20(2H，d)，7.35(2H，d)，7.51(2H，d)，7.60(2H，d)。
1-(3-二甲基氨基-丙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CD3OD)δ1.75-1.85(2H，m)，2.27(6H，s)，2.37(2H，t)，3.40-3.55(6H，m)，6.98(1H，t)，7.24(2H，t)，7.35(2H，d)，7.51(2H，d)，7.61(2H，d)。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CD3OD)δ1.10(12H，d)，2.77(2H，t)，3.10-3.21(2H，m)，3.39-3.53(6H，m)，7.22(2H，d)，7.36(2H，d)，7.46-7.57(4H，m)。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CD3OD)δ1.09(12H，d)，2.75(2H，s)，3.06-3.21(2H，m)，3.38-3.53(6H，m)，7.28-7.39(4H，m)，7.45-7.57(4H，m)。
1-(2-二異丙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CD3OD)δ1.10(12H，d)，2.77(2H，t)，3.11-3.22(2H，m)，3.40-3.54(6H，m)，6.99(1H，t)，7.25(2H，t)，7.36(2H，d)，7.46-7.56(4H，m)。
1-{2-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲。
1H NMR(CD3OD)δ2.28(6H，s)，2.53(2H，t)，3.36-3.51(6H，m)，7.36-7.52(7H，m)，7.60-7.64(2H，2d)，7.82(1H，d)，7.98(1H，d)。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1H NMR(CDCl3)δ1.74-1.83(2H，m)，2.25(3H，s)，2.31-2.58(10H，m)，3.40(6H，s)，6.30(1H，s，寬峰)，7.06(2H，d)，7.26(2H，d)，7.50(4H，s)，7.66(1H，s，寬峰)，9.32(1H，s)。
實(shí)施例81-{2-[1-(2-吡略烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-喹啉-6-基-脲，(化合物I)在0℃下，將4-甲基-嗎啉(584mg，5.8mmol)加入到2，4，6-三氯-[1，3，5]三嗪(355mg，1.92mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中。向其中加入喹啉-6-甲酸(1.00g，5.8mmol)在CH2Cl2中的漿液。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌4.5小時(shí)。將該溶液用硅藻土過(guò)濾并向?yàn)V液中加入NaN3(375mg，5.8mmol)。將該混合物在室溫下放置一整夜并一直對(duì)其進(jìn)行攪拌。首先用Na2CO3，然后用水對(duì)該溶液進(jìn)行萃取。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥并對(duì)其進(jìn)行蒸發(fā)。將該產(chǎn)物粗品用硅膠快速色譜進(jìn)行純化，用EtOAc∶庚烷1∶1作為洗脫劑。將富含產(chǎn)物的級(jí)分真空濃縮，得到喹啉-6-羰基疊氮化物(310mg，28％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.49(1H，q)，8.15(1H，d)，8.26(2H，d)，8.57(1H，s)，9.02(1H，d)。
用微波爐在進(jìn)行溫度和壓力控制的情況下在蓋著帽的小瓶中進(jìn)行微波輔助的反應(yīng)。將喹啉-6-羰基疊氮化物(29.9mg，0.15mmol)在1.5mL CH2Cl2中的溶液在110℃下加熱15分鐘。向其中加入1-(2-氨基-乙基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲(52mg 0.15mmol)并將該反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。將該產(chǎn)物用硅膠色譜純化，用MeOH∶Et3N 100∶1作為洗脫劑。將包含產(chǎn)物的級(jí)分真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(45mg，55％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.90(4H，s)，2.75(4H，s)，2.87(2H，d)，3.52(6H，s)，6.52(1H，s，寬峰)，7.22-7.32(2H，m)，7.35(2H，d)，7.48(2H，d)，7.72(1H，s)，7.85(1H，d)，7.94(2H，d)，8.75(1H，d)，11.42(1H，s)。
可以用實(shí)施例2所述的方法制備的其它式(Ia)的“對(duì)稱的”雙脲衍生物有1-芐基-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-乙基}-硫脲。
3-(2-氯-4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(2-氯-4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲。
1-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(3-三氟甲基苯基)-硫脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-硫脲。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲。
1-(4-氯-芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-{2-[1-(4-甲基-芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-(3-二乙基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3-(4-三氟-甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-{2-[1-芐基-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-[1-芐基-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-硫脲。
3-(3-氟-苯基)-1-{2-[3-(3-氟-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-脲。
1-{2-[1-(2-氟-芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{3-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙基}-脲。
可以用實(shí)施例7的方法制備的其它式(Ib)的“不對(duì)稱的”雙脲衍生物有1-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)硫脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-二甲基氨基-乙基)-1-{2-[3-(4-甲氧基-苯基)脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(3-二甲基氨基-丙基)-1-{2-[3-(4-甲氧基-苯基)脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-{2-[3-(4-甲氧基-苯基)脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-硫脲基]-乙基}-1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-甲氧基-苯基)-硫脲。
1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-甲氧基-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(4-氯芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-二異丙基氨基-乙基)-1-{2-[3-(4-甲氧基-苯基)脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{3-[3-(3-氯-苯基)-脲基]-丙基}-1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲。
1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-硫脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-二乙基氨基-苯基)硫脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(4-氯-苯基)-3-{2-[1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(3-甲氧基-苯基)-硫脲基]-乙基}-硫脲。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-乙基}-硫脲。
1-{2-[3-(4-氯-苯基)-硫脲基]-乙基}-3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-硫脲。
1-(4-溴-苯基)-3-{2-[1-(4-甲基-芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-(3-氯-苯基)-3-{2-[1-(4-甲基-芐基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲。
1-{3-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-丙基}-1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{3-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-丙基}-1-(3-二甲基氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-萘-1-基-脲。
1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(2，6-二氯-吡啶-4-基)-脲。
1-{2-[3-(3-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-硫脲基]-乙基}-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-硫脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-硫脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-{2-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
1-(3-二乙基氨基-丙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲。
藥理學(xué)方法測(cè)定式(I)化合物對(duì)IL-2產(chǎn)生的抑制作用。
對(duì)IL-2產(chǎn)生的抑制將所評(píng)估的化合物溶解于DMSO中并用DMSO制備一系列該化合物的稀釋液。用細(xì)胞培養(yǎng)基(含有Ultraglutamine，10％胎牛血清(FCS)的RPMI1640)進(jìn)一步對(duì)這些系列進(jìn)行稀釋，使得在200μl的總體積中DMSO的最終試驗(yàn)濃度為0.1％。將這些化合物與對(duì)照一起涂覆(2μl/孔)到不透明的白色試驗(yàn)板上。
在Ficoll-Paque上用密度梯度分離法從抽取自健康志愿者的人血中分離出外周血單核細(xì)胞(PBMC)。用磁性細(xì)胞分選(MACS)通過(guò)正向選擇獲得T-細(xì)胞(CD4+)。將這些細(xì)胞以1×106個(gè)細(xì)胞/ml的密度重新混懸于細(xì)胞培養(yǎng)基(含有Ultraglutamine，10％FCS，10mM hepes，1mM丙酮酸鈉和0.1mg/ml慶大霉素的RPMI1640)中。
將這些細(xì)胞(1×105/孔)加入到包含進(jìn)行了稀釋的化合物并在37℃下在5％二氧化碳的潮濕氣氛下預(yù)培養(yǎng)了30分鐘的試驗(yàn)板中。用10ng/ml肉豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(PMA)和250ng/ml伊屋諾霉素對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行刺激并將這些板在37℃下在5％二氧化碳的潮濕氣氛下培養(yǎng)4小時(shí)。取出約100μl上清液并將其轉(zhuǎn)移到獨(dú)立的微量滴定板中并將剩余的細(xì)胞溶解(Nucleotide Releasing Reagent，ViaLightTM，Cambrex)。在等待分析期間將所有的板都保持在-20℃下。根據(jù)制造商的指導(dǎo)，用標(biāo)準(zhǔn)ELISA試劑盒(OptEIATM，Pharmingen)對(duì)人白介素-2(IL-2)進(jìn)行分析。通過(guò)向被溶解的細(xì)胞中加入熒光素酶(ATP監(jiān)測(cè)試劑，ViaLightTM，Cambrex)并測(cè)量發(fā)光來(lái)測(cè)量三磷酸腺苷(ATP)含量并由此來(lái)對(duì)活力進(jìn)行評(píng)估，所有的測(cè)定都是根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行的。
通過(guò)與未被處理的進(jìn)行了刺激的細(xì)胞進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算各濃度化合物的作用％。用非線性回歸，一種進(jìn)行了修改的Hill-plot(y＝(a-d)/(1+(x/c)^b)+d)來(lái)計(jì)算y＝50％的濃度(IC50)。
對(duì)其它細(xì)胞因子的抑制作用對(duì)于特定的細(xì)胞因子而言，用外周血單核細(xì)胞、適宜的刺激和可通過(guò)商業(yè)途徑獲得的ELISA試劑盒通過(guò)類似的方法來(lái)證明對(duì)IL-6、TNF-α和IFN-γ的抑制作用。
誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡通過(guò)測(cè)量膜聯(lián)蛋白V與細(xì)胞的結(jié)合來(lái)觀察誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(VanEngeland等人，1998)。如上所述那樣從得自健康志愿者的外周血中分離出初級(jí)人CD4+T細(xì)胞。在純化后立即將這些細(xì)胞以2×106個(gè)細(xì)胞/ml的密度在補(bǔ)加了10％FCS、慶大霉素(100μg/ml)、Hepes(10mM)和丙酮酸鈉(1mM)的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)根據(jù)制造商的教導(dǎo)使用ApoAlert膜聯(lián)蛋白V-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒(Clontech)將這些細(xì)胞用膜聯(lián)蛋白V-FITC和碘化丙錠染色。用FACScan(Becton Dickinson)進(jìn)行流式細(xì)胞計(jì)分析。
或者，可以通過(guò)測(cè)量半胱天冬酶-底物PARP(聚(ADP-核糖)聚合酶)的裂解來(lái)證明誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(Tang等人，1996)。通過(guò)將2×106個(gè)PBS-洗滌的細(xì)胞在50μl包含20mM Tris-HCl，pH7.7、250mM NaCl、3mM EDTA、3mM補(bǔ)加有1mM對(duì)-硝基苯基磷酸酯(PNPP)的EGTA 0.5％NP-40、10mM β-甘油磷酸酯、100μM釩酸Na和1mM苯基甲磺酰氟(PMSF)的緩沖液中進(jìn)行溶解來(lái)制備細(xì)胞溶胞產(chǎn)物。用Bio-Rads蛋白試驗(yàn)來(lái)測(cè)定蛋白濃度并且其后將等量的蛋白負(fù)載到預(yù)制NuPAGETMTris-Bis凝膠(Novex)上。在電泳后，將這些蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上并用抗PARP的多克隆兔抗體(Roche)來(lái)對(duì)其進(jìn)行探測(cè)。在用辣根過(guò)氧化物酶-軛合的次級(jí)抗體和ECL試劑(Amersham Bioscience)培養(yǎng)后這些蛋白顯形。
另一種測(cè)量細(xì)胞凋亡的方法包括使特定的DNA斷裂顯形(Willingham等人，1999)。根據(jù)制造商的教導(dǎo)用Suicide-Track DNA Ladder Isolation試劑盒(Oncogene Research Products)對(duì)DNA進(jìn)行萃取。在1.5％瓊脂糖凝膠上在存在溴化乙錠的情況下使DNA斷裂顯形。
試驗(yàn)結(jié)果概述優(yōu)選的化合物是1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲，鹽酸鹽，其在下文被稱為化合物A。
測(cè)定了化合物A對(duì)人T-細(xì)胞中PMA/伊屋諾霉素刺激的IL-2產(chǎn)生的作用(圖1)?；衔顰的IC50為2±1μM(均值±S.D.，n＝30)。
在下面的表1中示出了對(duì)IL-2產(chǎn)生表現(xiàn)出類似作用的其它化合物的實(shí)例(包括化合物A的結(jié)果)。
表1.化合物A-M對(duì)人T-細(xì)胞中PMA/伊屋諾霉素刺激的IL-2產(chǎn)生的抑制作用(均值，n＝2).

測(cè)定了化合物A對(duì)人外周血單核細(xì)胞中PMA/伊屋諾霉素刺激的IL-6、TNF-α和IFN-γ產(chǎn)生的作用。對(duì)于IL-6而言，化合物的IC50值為3±1μM(均值±S.D.，n＝3)，對(duì)于TNF-α而言為3±1μM(均值±S.D.，n＝3)，對(duì)于IFN-γ而言為4±1μM(均值±S.D.，n＝3)。
用上述方法測(cè)定了化合物A對(duì)人T-細(xì)胞中誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用。在≥4μM的化合物A濃度下觀察到顯著誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。
優(yōu)選地用常規(guī)給藥途徑給需要該類治療的患者施用有效量的式(I)化合物并將其制備為包含有效量活性成分和一種或多種適宜的可藥用賦形劑或載體的常用藥物組合物。該類組合物可以采取各種形式，例如溶液、混懸液、乳液、片劑、膠囊、和所制備的用于口服給藥的粉末、用于吸入的氣霧劑、用于胃腸外給藥的無(wú)菌溶液、用于直腸給藥的栓劑或適宜的局部制劑。例如在“藥劑學(xué)-劑型設(shè)計(jì)的學(xué)科(Pharmaceuticals-The Science ofDosage Form Design)”，M.B.Aulton，Churchill Livingstone，(1988)中對(duì)選擇和制備適宜藥物制劑的常規(guī)方法進(jìn)行了描述。
所考慮的用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的適宜日劑量為0.0005mg/kg至約10mg/kg體重，特別是0.005mg/kg至1mg/kg體重，其取決于被治療的特定情況、特定患者的年齡和體重、以及患者對(duì)該藥物的特定響應(yīng)。精確的個(gè)體劑量以及日劑量將在醫(yī)生的指導(dǎo)下根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)原則來(lái)確定。
可以使用用于增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性或易化其給藥的各種添加劑。除式(I)的化合物外，所說(shuō)的藥物組合物還可包含另外的有治療作用的物質(zhì)。
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權(quán)利要求
1.通式I的化合物或通式I化合物的可藥用的鹽 其中A是Ph-Y(1-3)或Ar-X(0-2)；R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基；Ar選自苯基、1-萘基、2-萘基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、6-喹啉基和5-嘧啶基；X(0-2)表示0至2個(gè)選自C1-C6支鏈或直鏈的烷基、C1-C6支鏈或直鏈的烷氧基、C1-C6支鏈或直鏈的酰基、氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基、二乙基氨基和三氟甲氧基的取代基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是2-4。
2.具有通式Ia的如權(quán)利要求1所述的化合物或通式Ia化合物的可藥用的鹽 其中R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是2-4。
3.具有通式Ib的如權(quán)利要求1所述的化合物或通式Ib化合物的可藥用的鹽 其中R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基-哌嗪-1-基；Ar選自苯基、1-萘基、2-萘基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、6-喹啉基和5-嘧啶基；X(0-2)表示0至2個(gè)選自C1-C6支鏈或直鏈的烷基、C1-C6支鏈或直鏈的烷氧基、C1-C6支鏈或直鏈的?；?、氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基、二乙基氨基和三氟甲氧基的取代基；Y(1-3)表示1至3個(gè)選自氟、氯、溴、二甲基氨基、二乙基氨基、三氟甲基和甲氧基的取代基；Z是O或S；n是1-3；并且m是2-4。
4.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中R1選自二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙基氨基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、4-甲基-哌嗪-1-基；n選自1和2；m選自2和3；Y(1-3)是一個(gè)選自氟、氯、溴、三氟甲基、二甲基氨基和二乙基氨基的取代基。
5.如權(quán)利要求1和3-4中任意一項(xiàng)所述的化合物，其中Ar選自苯基、2-萘基和4-吡啶基，n選自1和2；m選自2和3；Y(1-3)是選自氟、氯、溴和三氟甲基的取代基之一。
6.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的化合物，其選自1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-脲；1-{2-[3-(3-氯-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二甲基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；3-(4-溴-苯基)-1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-二甲基氨基-乙基)-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基苯基)-脲基]-乙基}-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-溴-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)脲基]-乙基}-3-(2，6-二氯-吡啶-4-基)-脲；3-(4-氯-苯基)-1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]乙基}-1-(2-二乙基氨基-乙基)-脲；1-(2-二甲基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(3-氟-苯基)-1-{2-[3-(3-氟-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[1-(3-吡咯烷-1-基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二乙基-氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-{2-[3-(4-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(4-氯-苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲；1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[3-(4-溴-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-二甲基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)-乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；1-(2-二乙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(4-溴-苯基)-3-{3-[1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-硫脲基]-丙基}-脲；1-(2-二異丙基氨基-乙基)-1-[2-(3-苯基-脲基)乙基]-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-(4-氯-苯基)-3-{2-[3-(3-甲氧基-苯基)-1-(2-哌啶-1-基-乙基)-硫脲基]-乙基}-硫脲；3-(4-氯-苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基}-脲；1-{2-[3-(3-氯-苯基)-脲基]-乙基}-1-(3-二乙基-氨基-丙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-脲；并且1-(2-二異丙基氨基-乙基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-1-{2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-乙基)-脲。
7.用作藥物的如權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的化合物。
8.如權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的化合物在制造用于治療可以由抑制IL-2和其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)活化T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡而受益的免疫病癥的藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中所說(shuō)的免疫病癥選自炎性疾病、自身免疫性疾病、器官和骨髓移植排斥以及與致炎細(xì)胞因子，尤其是IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)和細(xì)胞調(diào)節(jié)缺陷有關(guān)的其它病癥。
10.如權(quán)利要求8或9所述的應(yīng)用，其中所說(shuō)的免疫病癥選自急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病和惡性瘤形成病。
11.一種包含如權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的化合物和一種或多種可藥用的賦形劑或載體的藥物組合物。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中所說(shuō)的賦形劑選自填充劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、著色劑、甜味劑、緩沖劑、酸化劑、稀釋劑和防腐劑。
13.如權(quán)利要求10-12中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其被口服給藥、肌內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥或皮下給藥、通過(guò)植入物給藥、直腸給藥、鼻內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥、局部給藥或胃腸外給藥。
14.一種治療方法，其包括給患有可以由抑制IL-2和其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)活化T-細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡而受益的免疫病癥的患者施用藥學(xué)有效量的如權(quán)利要求1-6所述的化合物或如權(quán)利要求11-13所述的藥物組合物。
15.如權(quán)利要求14所述的治療方法，其中所說(shuō)的免疫病癥選自炎性疾病、自身免疫性疾病、器官和骨髓移植排斥和與致炎細(xì)胞因子，尤其是IL-2介導(dǎo)的免疫響應(yīng)和細(xì)胞調(diào)節(jié)缺陷有關(guān)的其它病癥。
16.如權(quán)利要求14或15所述的治療方法，其中所說(shuō)的免疫病癥選自急性或慢性炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、1-型糖尿病、炎性腸病、牛皮癬、移植物抗宿主病和惡性瘤形成病。
全文摘要
本發(fā)明涉及阻斷細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)從而抑制了致炎細(xì)胞因子，尤其是白介素－2(IL－2)的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)了活化T－細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡的新型雙脲衍生物。其還公開(kāi)了用作藥物的該類化合物、所說(shuō)化合物在制造用于治療可以由抑制IL－2和其它致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生和/或誘導(dǎo)活化T－細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡而受益的免疫病癥的藥物中的應(yīng)用、包含所說(shuō)化合物的藥物組合物以及包括施用藥學(xué)有效量的所說(shuō)化合物的治療方法。通式I的化合物。
文檔編號(hào)C07D403/12GK1917873SQ200580004181
公開(kāi)日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2005年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月4日
發(fā)明者A·L·阿布拉莫, L·O·G·彼得森, K·I·安德森, A·A·松德斯泰特 申請(qǐng)人:活躍生物技術(shù)有限公司