專利名稱：：纖連蛋白粘附抑制劑的制作方法許多細胞-細胞間、細胞-胞外基質(zhì)間的相互作用是由蛋白質(zhì)配體(如纖連蛋白、玻連蛋白和VCAM-1)及其整合蛋白受體〔如VLA-4(α4β1)〕介導(dǎo)的。最近的研究表明，這些相互作用在許多生理(如胚胎發(fā)育和傷口愈合)及病理(如腫瘤細胞粘附和轉(zhuǎn)移、發(fā)炎、動脈粥樣硬化和自身免疫疾病)狀況下起重要作用。能夠選擇性抑制某些這種相互作用的試劑可望用于治多種疾病。整合蛋白是異源二聚體細胞表面受體，由非共價相關(guān)的α和β亞基組成。運用分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)化學(xué)已鑒別出多種α和β亞基?？砂处聛喕鶎⒄系鞍准易宸诸悾渲笑聛喕膳c一個或多個α亞基相聯(lián)。最廣泛分布的整合蛋白屬β1類，也就是所知的極遲抗原(VLA)。第二類整合蛋白是白細胞特異受體，由三個α亞基(αL、αM或αX)之一與β2蛋白復(fù)合組成。細胞粘附素(cytoadhesin)αIIbβ3和αvβ3構(gòu)成第三類整合蛋白。許多蛋白能用作整合蛋白受體的配體。通常，被整合蛋白識別的蛋白質(zhì)屬下述三類之一細胞外基質(zhì)蛋白、血漿蛋白和細胞表面分子。如膠原蛋白、纖連蛋白、血纖蛋白原、層粘連蛋白、血小板反應(yīng)蛋白和玻連蛋白這樣的胞外基質(zhì)蛋白能與許多整合蛋白結(jié)合。許多這些粘附蛋白也在血漿中循環(huán)并與活化的血細胞結(jié)合。血漿中作為整合蛋白配體的其它成分包括血纖蛋白原和因子X。細胞結(jié)合補體C3bi和幾個跨膜蛋白，如Ig類細胞粘附分子(ICAM-1、2、3)和血管細胞粘附分子(VCAM-1)為Ig超家族成員，也可用作為一些整合蛋白的細胞表面配體。已鑒定出許多整合蛋白的靶氨基酸序列。例如，α5β1、αIIβ3和αvβ3中的靶序列是Arg-Gly-Asp三肽，見于蛋白質(zhì)如纖連蛋白、血纖蛋白原、血小板反應(yīng)蛋白、I型膠原蛋白、玻連蛋白和vWF中。但是，Arg-Gly-Asp序列不是僅有的由粘附配體所用的整合蛋白識別基元。另一個整合蛋白α4β1通過序列Leu-Asp-Val與纖連蛋白可變區(qū)(CS1)結(jié)合，并且血小板整合蛋白αIIbβ3也能識別血纖蛋白原γ鏈羧基末端的序列His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。本發(fā)明主要涉及阻斷配體VCAM-1和它的整合蛋白受體VLA-4(α4β1)間相互作用的試劑?！矃㈤営嘘P(guān)VLA-4的綜述整合蛋白VLA-4的結(jié)構(gòu)及其細胞細胞間和細胞基質(zhì)間的粘附功能(StructureoftheIntegrinVLA-4andItsCell-CellandCellMatrixAdhesionFunctions)，M.E.Hemler，M.J.Elices，C.ParkerandY.Takada，免疫學(xué)綜述(ImmunologicalReviews，114(1990)45-65〕。許多造血細胞和已建立的細胞系包括造血生成前體、外周和細胞毒T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞、胸腺細胞和嗜曙紅細胞能表達整合蛋白α4β1。和僅參與細胞-胞外基質(zhì)相互作用的其它β1整合蛋白不同，α4β1介導(dǎo)細胞-細胞間和細胞-胞外基質(zhì)間兩種相互作用。表達活化α4β1的細胞能與纖連蛋白的羧基末端細胞結(jié)合區(qū)域結(jié)合(非Arg-Gly-Asp介導(dǎo))，能與表達于內(nèi)皮細胞上的VCAM-1結(jié)合，以及能相互結(jié)合促使同型聚集。促炎細胞因子如INF-γ、INF-α和IL-1β能向上調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞對VCAM-1的表達。α4β1介導(dǎo)的細胞粘附的調(diào)節(jié)作用在許多生理過程中是很重要的，包括T-細胞增殖、對生發(fā)中心的B細胞定位以及活化的T細胞和嗜曙紅細胞對內(nèi)皮細胞的粘附。此外，整合蛋白α4β1介導(dǎo)過程與某些疾病有關(guān)，如轉(zhuǎn)移中黑素瘤細胞的侵染、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中滑液膜內(nèi)T細胞的浸潤、自身免疫糖尿病、結(jié)腸炎、實驗性自自免疫腦脊髓炎中血腦屏障的白細胞的滲入、動脈粥樣硬化、外周血管疾病、心血管疾病以及多發(fā)性硬化。通過在各種體外和體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ椭?，即在炎癥(如小鼠的急性皮膚超敏反應(yīng))、實驗性自身免疫腦脊髓炎、肺抗原激發(fā)、糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、腎炎和同種移植排斥反應(yīng)的模型中，研究肽CS-1和特異于VLA-4或VCAM-1的抗體的作用，已收集到了VLA-4/VCAM-1相互作用參與上述疾病過程的證據(jù)。其它相關(guān)疾病包括哮喘、牛皮癬、心瓣再狹窄、心肌炎和腸炎。例如，在關(guān)節(jié)炎的實驗?zāi)Ｐ椭?在近親繁殖的雌性Lewis大鼠中用來自鏈球菌細胞壁A基團的肽聚糖-多糖片段進行一次腹膜內(nèi)注射，誘發(fā)關(guān)節(jié)炎)，在已患關(guān)節(jié)炎的動物中，炎癥初期(第0-4天，300μg/天)或第11-16天靜脈內(nèi)給藥CS-1，發(fā)現(xiàn)對急性和慢性炎癥均有抑制作用。(參閱合成纖連蛋白肽通過阻斷白細胞的粘附和補充抑制大鼠患關(guān)節(jié)炎(SyntheticFibronectinPeptidesSuppressArthritisinRatsbyInterruptingLeucocyteAdhesionandRecruitment，S.M.Wahl，J.B.Allen，K.L.Hines，T.Imamichi，A.M.Wahl，L.T.FurchtandJ.B.McCarthy，臨床研究(J.Clin.Invest.，94(1994)655-662)。在另一炎癥模型中(以噁唑酮或2，4-二硝基氟苯使小鼠過敏，產(chǎn)生接觸超敏反應(yīng))，靜脈內(nèi)給藥抗α4特異的單克隆抗體R1-2或PS/2攻擊前4-6小時)顯著抑制(耳腫脹反應(yīng)減少50-60％)輸出應(yīng)答?！矃㈤喺系鞍爪?4亞基的單克隆抗體抑制鼠接觸超敏反應(yīng)(MonoclonalAntibodiestotheIntegrinα-4SubunitInhibittheMurineContactHypersensitivityResponse)P.L.Chisholm，C.A.WilliamsandR.R.Lobb，歐洲免疫學(xué)雜志(EurJ.Immunol.，23(1993)682-688〕。在腸炎模型中(在Cotton-toptamarin中的急性腸炎)，結(jié)合VLA-4的抗α4整合蛋白單克隆抗體HP1/2使急性結(jié)腸炎明顯減輕。與此相反，對Cotton-toptamarin治療10天后，兩個抗E選擇蛋白單克隆抗體(BB11和EH8)僅使結(jié)腸炎輕微減緩〔參閱抗α4整合蛋白單克隆抗體對Cotton-top的結(jié)腸炎減緩作用(AttenuationofColitisintheCotton-topTamarinbyAnti-α4IntegrinMonoclonalAntibody)，D.K.Podolsky，R.Lobb.N.King，C.D.BenjaminB.Pepinsky，P.Sehgal和M.deBeaumont，臨床研究(J.ClinInvest)，92(1993)372-380〕。在自身免疫腦脊髓炎(EAE)(即一種與多發(fā)性硬化具有相似性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥)模型中，該抗體也表明是有效的。兩種疾病中，循環(huán)的白細胞穿透血腦屏障并損害髓磷脂，導(dǎo)致?lián)p傷的神經(jīng)傳導(dǎo)和麻痹。給動物注入象髓磷脂堿性蛋白(MBP)類的CNS蛋白能主動誘發(fā)EAE，或者通過注射活化的特異于這些CNS抗原的淋巴細胞能繼承性誘發(fā)EAE。各種單克隆抗體〔MK/1(抗VCAM-1)和PS/2和LPAM-1(抗α4抗原)〕，當(dāng)被注射入經(jīng)照射的雌性(PL/J×SJL)Fl小鼠時，會推遲疾病的發(fā)作。當(dāng)每3天繼續(xù)注射α4整合蛋白的抗體(LPAM-1和PS/2)，直到疾病發(fā)作，那么不僅會推遲疾病的發(fā)作，而且這種情況下疾病的嚴重性也會明顯減輕?！矃㈤咰D4T細胞對α4整合蛋白的表面表達是其進入腦實質(zhì)的必要條件(SurfaceExpressionofα4IntegrinbyCD4TCellsIsRequiredfortheirEntryintoBrainParenchyma)，J.L.Baron，J.A.Madri，N.H.Ruddle，J.Hashim和C.A.Janeway，Jr.，醫(yī)學(xué)實驗(J.Exp.Med.)，177(1993)57-68〕。在治療非肥胖糖尿病小鼠的胰島素依賴性糖尿病中，對α4整合蛋白(LPAM-1)和其配體之一均特異性的抗體VCAM-1，表明是有效的。人們認為胰島素依賴性糖尿病是自身免疫疾病，其中活化的T淋巴細胞能破壞胰島中產(chǎn)生胰島素的β細胞?？贵wR1-2防止非肥胖糖尿病小鼠的劑量依賴形式的胰島炎發(fā)作。對疾病的阻斷伴隨著淋巴細胞滲入Langerhans胰島的明顯減少。〔參閱繼承性鼠自身免疫糖尿病的發(fā)病機理需要α4整合蛋白和血管細胞粘附分子-1的相同作用(ThePathogenesisofAdoptiveMurineAutoimmuneDiabetesRequiresanInteractionBetweenα4-IntegrinsandVascularCellAdhesionMolecule-1)J.L.Baron，E-P.Reirn，I.Visintin和C.A.Janeway，Jr，臨床研究(J.Clin.Invest.)，93(1994)1700-1708〕。已表明表達整合蛋白α4β1的細胞與肝素II結(jié)合區(qū)域的序列及位于纖連蛋白羧基末端細胞結(jié)合區(qū)域的交替剪接的III型連接片段(IIICS)結(jié)合。在IIICS區(qū)內(nèi)，α4β1以高親和力與稱為CS-1的肽序列(一個25個氨基酸的肽)結(jié)合，表明此處是纖連蛋白中α4β1相互作用的主要位點。三肽Leu-Asp-Val是CS-1內(nèi)能支持造血細胞粘附或能抑制α4β1介導(dǎo)的細胞與纖連蛋白結(jié)合的最小序列?！灿嘘P(guān)CS1參閱在纖連蛋白交替剪接的III型連接片段區(qū)域內(nèi)用于細胞型特異的主要粘附位點(CS1)的最小基本序列是Leu-Asp-Val(TheMinimalEssentialSequenceforaMajorCellType-SpecificAdhesionSite(CS1)WithintheAlternativelySplicedTypeIIIConneotingSegmentDomainofFibronectinisLeucine-Asparticacid-Valine)，A.Komoriya，L.J.Green，M.Mervic，S.S.Yamada，K.M.Yamada和M.J.Humphries，生物化學(xué)雜志(J.Biol，Chem.)，23(1991)15075-15079；由纖連蛋白V區(qū)的LDV序列的造血細胞進行的活化依賴性識別(Activation-DependentRecognitionbyHematopoieticCellsoftheLDVSequenceintheVregionofFibronectin)，E.A.Wayner和N.L.Kovach，細胞生物學(xué)雜志(J.Cell.Biol.)，116(1992)489-497〕。除上述含Leu-Asp-Val的序列，還報道了一個環(huán)八肽1-金剛烷乙酰基-Cys-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Cys-(含兩個Cys殘基間二硫鍵)，它與含LDV的肽Cys-Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr一樣在阻斷Jurkat細胞粘附于已包被有CS-1的板.(IC5030μm)上時是有效的。該環(huán)肽也可抑制Jurkat細胞與纖連蛋白包被的板的結(jié)合。此八肽除了抑制α4β1誘導(dǎo)的粘附，還抑制αvβ3的功能及αIIbβIIIa依賴性分析。因此此肽對α4β1介導(dǎo)的粘附?jīng)]有選擇性?！矃㈤啳h(huán)RGD肽抑制α4β1與連接片段1和血管細胞粘附分子的相互作用(CyclicRGDPeptideInhibitsα4β1InterationwithConnectingFragment1andVascularCellAdhesionMolecule)，P.M.Cardarelli，R.R.Cobb，D.M.Nowlin，W.Scholz，F(xiàn).Gorcsan，M.Moscinski，M.Yasuhara，S-L，Chiang和T.J.Lobl，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，269(1994)18668-18673〕。還報道了幾個小的非肽化合物能抑制α4β1誘導(dǎo)的粘附〔參閱Leu-Asp-Val序列的非肽替代物及其在治療炎癥、自身免疫疾病和腫瘤生長中的用途(Non-PeptidicSurrogatesoftheLeu-Asp-ValSequenceandTheirUseintheTreatmeirtofInflammation，AutoimmuneDiseasesandTumorProgression)，YEDAResearchandDevelopmentCo.Ltd，WO94/02445，公布日1994年2月3日〕。還有報道說二硫化環(huán)五肽Arg-Cys-Asp-硫代Pro-Cys(硫代Pro＝噻唑烷-4-羧酸)是白細胞粘附于纖連蛋白的抑制劑。此外，該環(huán)肽還抑制與纖連蛋白120kDa胰凝乳蛋白酶片段的結(jié)合，此片段含Arg-Gly-Asp中心細胞結(jié)合區(qū)域。該肽也不是選擇性的。它與α4β1和α5β1二者都結(jié)合〔參閱一種新的環(huán)五肽抑制α4β1和α5β1整合蛋白介導(dǎo)的細胞粘附(ANovelCyclicPentapeptideInhibitsα4β1andα5β1Integrin-MediatedCellAdhesion)，D.M.Nowlin，F(xiàn).Gorcsan，M.Moscinski，S-LChiang，T.J.Lobl和P.M.Cardarelli，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，268(1993)20352-20359〕。本發(fā)明基于下述發(fā)現(xiàn)，即相對小的環(huán)肽能有效地抑制VCAM-1和纖連蛋白與整合蛋白VLA4間的相互作用。根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了式1(圖1)所示的環(huán)肽或其鹽，其中AA1表示選自Ile、Leu、Pro、Gly或Tic或其氨基酸類似物的L或D型氨基酸AA2表示選自Leu、Ile、Phe或Val或其氨基酸類似物的L型氨基酸AA3表示選自Asp或Glu或其氨基酸類似物的L型氨基酸AA4表示選自Val、Leu、Ile、Phe或Cha(環(huán)己基丙氨酸)或其氨基酸類似物的L型氨基酸LINKER(接頭)表示連接AA1和AA4以形成環(huán)肽的連接部分，其中連接部分長度小于-(CH2)11-(優(yōu)選小于-C(O)-(CH2)11-NH-；優(yōu)選小于-C(O)-(CH2)10-NH-；優(yōu)選小于-C(O)-(CH2)9-NH-；優(yōu)選小于-C(O)-(CH2)8-NH-；優(yōu)選小于-C(O)-(CH2)7-NH-)；此處所述的MOLT-4細胞/纖連蛋白測定中優(yōu)選IC50＜20μm的、更優(yōu)選IC50＜15μm的肽，或此處所述的MOLT-4細胞/重組可溶VCAM-1測定中IC50＜100μm的優(yōu)選＜50μm的肽以及AA1-4均具有通式II(圖1)所示結(jié)構(gòu)，其中R1是氨基酸側(cè)鏈，R2和R3各自獨立地表示H或C1-4烷基(優(yōu)選H或甲基，特別是H)。這里定義的氨基酸類似物是與所代替的氨基酸具有相同側(cè)鏈性質(zhì)的氨基酸，側(cè)鏈性質(zhì)如疏水性或官能團的存在或其模擬基團(如COOH情況下的四唑)的存在。優(yōu)選連接部分長于-C(O)-(CH2)2-NH-。(注意，通過-C(O)-(CH2)2-NH-(β-Ala)連接N與C末端的環(huán)四肽Ile-Leu-Asp-Val在生物測試中在200μm時是沒有活性的)。術(shù)語LINKER(接頭)不包括AA1-AA4本身的重迭部分。(下面敘述了本發(fā)明的另一方面，其中LINKER被定義為與AA1-AA4形成的雜環(huán)的一部分。根據(jù)所需，術(shù)語的優(yōu)選值和釋義適用于本發(fā)明所定義的每種方式)。本說明書中，通常術(shù)語“烷基”包括直鏈和支鏈烷基。但是考慮到具體的烷基如丙基，則僅特指直鏈情況，考慮到具體的支鏈烷基如異丙基則僅特指支鏈情況。其它通用術(shù)語也適用類似的規(guī)則。本發(fā)明化合物包括溶劑化物，如水合物，本發(fā)明化合物包括前藥，如體內(nèi)可水解的酯。術(shù)語“芳基”和“雜芳基”還可包括被單取代或雙取代的基團，取代基選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、氰基和三氟甲基。優(yōu)選值如下AA1是Ile、D-Ile、MeIle(特別是D-Ile和MeIle)；AA2是Leu；AA3是Asp；AA4是Val。優(yōu)選的Ile類似物示于圖5。Ile優(yōu)選類似物為D-Ile。LINKER優(yōu)選值排除二硫鍵，尤其是Cys殘基間的二硫鍵。本說明書中四肽-AA1-AA2-AA3-AA4的N末端在AA1，C末端在AA4，除非另有說明或提示；氨基酸為L構(gòu)型，除非上下文中另有說明或提示。AA1的合適值包括叔-Leu和叔-丁基-Ala。LINKER優(yōu)選式4所示基團(圖1)，其中n＝3-5(特別是n＝3)，R4和R5代表H或；R4表示NH2，可任選地用C1-10芳基或C1-10.O.CO基團取代(其中C1-10是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基)，例如C2-5烷?；?特別是異丁基羰基、CH3C(O)-、CH3CH2C(O)-、環(huán)丙基羰基-、環(huán)丁基羰基-)、叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基、吡啶-羰基(特別是吡啶基-3-基-羰基)；或者NH2可任選地通過α-羧基以氨基酸取代，例如Glu、Asp、Pro-Glu或Pro-Asp，氨基酸的N末端可任選地被C1-10?；駽1-10.O.CO基團(其中C1-10是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基)保護，例如CH3C(O)-、CH3CH2C(O)-、環(huán)丙基羰基-、環(huán)丁基羰基-、Boc；或者NH2可任選地以C1-4烷基(特別是二乙基)單取代或雙取代；或者NH2可任選地以芐基、吡啶基、羧基C2-5烷?；?特別是3-羧基-丙?；?、氨基-C2-5烷酰基(特別是3-氨基-丙?；?，且R5是H或；R4是H，R5是COOH，可任選地被取代成酯如-COOMe、COOEt、-COOPr、COOBu或R5是酰胺，例如-CONH2、-CONHMe、-CONHEt、-CONHPr、-CONHBu。特別優(yōu)選R4＝R5＝H。n的合適值包括3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、3、4、5、6、7、8和9。LINKER的進一步優(yōu)選值示于圖8和/或13。本發(fā)明一方面提供了式1(圖1)所示環(huán)肽或其鹽，其中AA1是選自Ile和Leu或其氨基酸類似物的L型或D型氨基酸；AA2是選自Leu或其氨基酸類似物的L型氨基酸；AA3是選自Asp或側(cè)鏈含羧基(可任選羧基模擬基，特別是四唑)的其氨基酸類似物的L型氨基酸；AA4是選自Val或其氨基酸類似物的L型氨基酸。LINKER代表連接AA1N末端和AA4C末端以形成含17至30元雜環(huán)的環(huán)肽的連接部分；在此處所述的MOLT-4細胞/纖連蛋白測定中，該環(huán)肽IC50＜20μm(優(yōu)選級別逐漸增高，＜10、＜3、＜1、＜0.3、＜0.1、＜0.03μm)或在此處所述的MOLT-4細胞/重組可溶VCAM-1測定中環(huán)肽的IC50＜100μm(優(yōu)選級別逐漸增高，＜50、＜30、＜10、＜3、＜1、＜0.3、＜0.1、＜0.03μm)；AA1-4具有通式2(圖2)其中R1是氨基酸側(cè)鏈，R2和R3對于AA1-AA4可以相同或不同，各自獨立地代表H或C1-4烷基。由連接部分(LINKER)連接AA1N端和AA4C端形成的雜環(huán)環(huán)中原子數(shù)優(yōu)選值為17至29元；更優(yōu)選17至28元；更優(yōu)選17至27元；更優(yōu)選17至26元；更優(yōu)選17至25元；更優(yōu)選17至24元；更優(yōu)選17至23元；更優(yōu)選17至22元；更優(yōu)選17至21元；更優(yōu)選17至20元；更優(yōu)選17至19元；更優(yōu)選17至18元；特別優(yōu)選18元。由連接部分(LINKER)連接AA1N末端和AA4C末端形成雜環(huán)本身包含一個環(huán)(內(nèi)環(huán))，那么雜環(huán)中的原子數(shù)被計為僅包括該內(nèi)環(huán)原子數(shù)，為成就雜環(huán)形成最短路徑。例如表2中的化合物16在其雜環(huán)中有20個原子，即屬此定義所表明的含義，同理，化合物17有18個原子。上述環(huán)肽或其鹽優(yōu)選具有下列值A(chǔ)A1氨基酸類似物選自Val、Pro、Gly、Tic、叔-Leu、叔丁基-Ala、Phe、Nle、Met、Arg、Lys、Ala；AA2氨基酸類似物選自Ile、Phe、Val、叔-Leu、Nle、Cha、叔丁基-Ala；AA3是氨基酸類似物為Glu；AA4氨基酸類似物選自Leu、Ile、Phe、Cha、Nle和Nva。上述環(huán)肽或其鹽更優(yōu)選具下列數(shù)值A(chǔ)A1選自Ile和Leu，每個氨基酸可任選地為被N-甲基化；AA2是Leu；AA3是Asp；AA4是Val。上述環(huán)肽或其鹽優(yōu)選具下列數(shù)值LINKER為式4所示基團(圖1)其中n＝3-5，R4和R5代表H或；R4表示可任選被C1-10C(O)-基取代的NH2；或NH2可任選地通過α-羧基被天然氨基酸取代，此氨基酸的N端可任選地被C1-10C(O)-基取代，或NH2可任選地被C1-4烷基單取代或雙取代；或NH2可任選地被芐基、吡啶基、羧基C2-5烷?；被?C2-5烷?；〈琑5是H或R4是H，R5是可任選地以C1-4烷基取代的COOH而得到的酯，或R5是式-CONR6R7酰胺，其中R6和R7各自獨立地表示H或C1-4烷基。在本說明書中，以箭頭表示的鍵是直鍵或連接的點，而不是-CH2-基團，除非另有說明或提示。在本說明書中氨基酸以常規(guī)方式相連，除非另有說明或提示，并且氨基酸均為L構(gòu)型，除非另有說明或提示。上述環(huán)肽或其鹽優(yōu)選具有下列值LINKER代表如圖13所示的通式6-44任意一種情況。上述環(huán)肽或其鹽更為優(yōu)選具有下列值LINKER代表如圖13所示出的式6、7、8、13、17、18、19、20或21-44的任意一種情況。優(yōu)選的環(huán)肽為(其中，方括號中的注釋指其LINKER部分，MeIle代表N-甲基-Ile)c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO-)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-Pro)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Orn)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(CHMe2)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(環(huán)己基)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(4-氯芐基)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(Et2)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys(CHMe2)-D-Lys(CHMe2))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Lys)c(MeIle-Leu-AsP-Val-D-Trp-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg(Pmc)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-His)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Orn)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Orn)；或其鹽根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了式5(見圖1)所示的環(huán)肽，其中各基團定義與式1相同，此外AA0代表Glu，AA5代表Pro。本發(fā)明的環(huán)肽至少具有下列優(yōu)點之一它們比已知化合物如我們試驗中使用的CS1更有效；它們比CS1-一個25氨基酸的肽要小，因此更易合成；環(huán)肽對于酶降解作用更穩(wěn)定。圖2中給出了一些優(yōu)選化合物。特別優(yōu)選的化合物在下述體內(nèi)篩選試驗〔例如在小鼠體內(nèi)CHS(急性超敏)模型-實施例2、3〕中顯示出活性。10mg/kg/天的CS1和1mg/kg/天的CS1具有0％的抑制作用?；衔?(圖2)和化合物4(圖2)在10mg/kg/天(39％的抑制作用)和1mg/kg/天(19％的抑制作用)時是具有活性的。對于本發(fā)明測試的化合物，在有效劑量時未觀察到毒性。本發(fā)明進一步提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的環(huán)肽及一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。組合物可以呈適于口服使用的形式，如片劑、膠囊、水溶液或油溶液、懸浮液或乳劑；呈適于鼻內(nèi)使用的形式，如嗅劑、鼻噴霧劑或鼻滴劑；呈適于陰道或直腸使用的形式，如栓劑；適于吸入劑給藥，如呈精細粉末或液體氣霧劑形式；呈適于舌下或面頰使用的形式，如片劑或膠囊；呈適于非腸道使用(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)的形式，例如無菌水溶液或油溶液或懸浮液，或一種存儲式制劑，含有滲入可生物降解的聚合物中的藥物。該組合物可以呈適于表皮給藥的形式，例如乳膏、軟膏和凝膠。還可使用皮膚貼片。Hansch等編，PergamonPress1990年出版的ComprehensiveMedicinalChemistry第5卷第25.2章描述了常用制劑。通常，可使用常規(guī)賦形劑根據(jù)常規(guī)方法制備上述組合物。但在用于口服給藥的組合物情況下，應(yīng)使組合物含一層包膜，以保護環(huán)肽活性成分免受胃中酶的作用。本發(fā)明優(yōu)選的組合物是適于口服給藥的呈單位劑量形式的組合物，例如為片劑或膠囊，每單位劑量中含2.5至500mg，優(yōu)選10至100mg的環(huán)肽；或者本發(fā)明組合物適于非腸道給藥。每ml含0.5至100mg的環(huán)肽，并優(yōu)選每ml含1至10mg的環(huán)肽。非腸道組合物優(yōu)選為等滲鹽水溶液或等滲葡萄糖溶液，需要的話緩沖至pH5至9?；蛘?，可將非腸道組合物設(shè)計為適于緩釋的組合物，這種情況下每單位劑量的環(huán)肽量通常大于使用常規(guī)注射制劑時所需的環(huán)肽量。優(yōu)選緩釋制劑是持續(xù)釋放制劑，例如歐洲專利說明書No.58481所述的制劑類型。對于含以polylactic/polyglycolic為基的聚合物的緩釋制劑來說，優(yōu)選本發(fā)明環(huán)肽在LINKER處含有一堿性基團。進一步優(yōu)選此處所述的環(huán)肽為那些化合物，其中LINKER代表一個二肽(式為←NH-CHR′-CO-NH-CHR″-CO→的二肽，其中R′和R″代表氨基酸側(cè)鏈，該二肽也可以在肽骨架和/或側(cè)鏈N原子上以C1-4烷基(特別是甲基)取代)，優(yōu)選該二肽至少含一個堿性氨基酸或其鹽，更為優(yōu)選二肽中的氨基酸為D型氨基酸或其鹽，具體來說二肽選自如圖13中所示的式24-38、43和44之一的肽或其鹽。將側(cè)鏈中含一個堿性官能團的氨基酸定義為堿性氨基酸，例如氨基酸的氨基或胍基也可任選地被C1-4烷基取代。優(yōu)選的緩釋非腸道給藥制劑每單位劑量含10至100mg環(huán)肽。在本發(fā)明另一實例中，LINKER代表-二肽，二肽中一個氨基酸可任選地被不帶側(cè)鏈的氨基酸如β-丙氨酸取代。本發(fā)明組合物應(yīng)按通常方法給藥，即口服每日劑量為0.1mg/kg至50mg/kg。非腸道給藥每日劑量為20μg/kg至10mg/kg。本發(fā)明進一步提供了一種在需要治療的溫血動物如人中抑制VCAM-1和/或纖連蛋白與整合蛋白受體VLA-4間相互作用的方法，包括對所述動物給藥有效量的式I的環(huán)肽或及可藥用鹽。本發(fā)明還提供了式I環(huán)肽或其可藥用鹽在制備新藥劑中的應(yīng)用，該藥劑用于治療由纖連蛋白和/或VCAM-1(特別是VCAM-1)與整合蛋白受體VLA-4間相互作用介導(dǎo)的疾病或癥狀。也可用作研究工具。本發(fā)明另一方面提供了一種藥物組合物，包含此處所描述的一種環(huán)肽及可藥用稀釋劑或載體。優(yōu)選的藥物組合物是設(shè)計成至少5天內(nèi)緩釋的用于非腸道給藥的組合物。本發(fā)明另一方面提供了用作藥劑的此處所述的環(huán)肽。本發(fā)明另一方面提供了一種在需治療的哺乳動物中抑制VCAM-1和/或纖連蛋白與整合蛋白受體VLA-4間相互作用的方法，包括對所述哺乳動物給藥有效量的此處所描述的藥物組合物或其可藥用鹽。優(yōu)選實例中需治療的哺乳動物患多發(fā)性硬化或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明另一方面提供了式I環(huán)肽或其可藥用鹽在制備藥劑中的應(yīng)用，該藥劑用于治療由VCAM-1或纖連蛋白與整合蛋白受體VLA-4間相互作用介導(dǎo)的疾病或癥狀。合成詳述可用肽化學(xué)領(lǐng)域熟知的適于合成相似化合物的任何一種方法來制備本發(fā)明的式I的環(huán)肽。因此，本發(fā)明環(huán)肽可用下述方法的相似方法獲得，例如由Atherton和Sheppard所述的。固相肽合成一種實用途徑(“SolidPhasePeptideSynthesisApracticalapproach”)(OxfordUniversityPressIRL出版社出版，1989)，由Stewart和Young描述的“固相肽合成(SolidPhasePeptideSynthesis)”(PierceChemicalCompany，Illinois，1984出版)，由M.Bodanszky描述的“肽合成原理(PrinciplesofPeptideSynthesis)”(Springer-Verlag，BerlinHeidelberg，1984出版)，由M.Bodanszky和A.Bodanszky描述的“肽合成實踐(ThePracticeofPeptideSynthesis)”(Springer-Verlag，BerlinHeidelberg，1984出版)，以及系列叢書“(氨基酸、肽和蛋白質(zhì))(AminoAcids，PeptidesandProteins)”(第1-26卷；1995年出版的第26卷)(RoyalSocietyofChemistryCambridge，UK出版)。除這些書外，還出版了許多有關(guān)肽合成的綜述〔如“固相肽合成銀年度報告(SolidPhasePeptideSynthesisaSilverAnniversaryReport)”，G.Barany，N.Kneib-Cordonier和D.G.Mullen，國際肽與蛋白研究(InternationalJournalofPeptideandProteinResearch)，30(1987)705-739；“使用9-芴甲氧羰基氨基酸進行固相肽合成(SolidPhasePeptideSynthesisUtilising9-FluorenylmethoxycarbonylAminoAcids)”，G.B.Fields和R.L.Noble，InternationalJournalofPeptideandProteinResearch，35(1990)161-214〕。在美國、歐洲和日本肽年會上也公布合成進展。可通過自動或人工方法完成合成。本發(fā)明另一方面提供了生產(chǎn)式1環(huán)肽的方法，環(huán)肽選自(a)從式3(圖1)所示的被保護的環(huán)肽上脫除一個或多個常規(guī)肽保護基，其中Prl表示AA3側(cè)鏈上酸性基團的保護基，由此得到本發(fā)明式I環(huán)肽，并且還可任選地，同時或隨后脫除LINKER上的另外任意一種常規(guī)肽保護基團，如果需要的話將由此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為它的鹽；(b)將兩個肽單元偶聯(lián)形成酰胺鍵，兩個肽中一個含羧基或羧基的活性衍生基團，另一個含氨基，由此生成式I所示序列的被保護的或未被保護的環(huán)肽，必要的話使用上述方法(a)脫除保護基，并且還可以在需要時將由此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成它的鹽；(c)對于在LINKER中含-S(O)-或S(O2)-的式1環(huán)肽，氧化環(huán)肽前體的LINKER中的-S-(或再氧化-S(O)-，得-S(O2)-)以得到在其LINKER中含-S(O)-或-S(O2)-的環(huán)肽，需要時將由此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成它的鹽。使用有機化合物合成中的常用技術(shù)可在固相支持物(固相肽合成(SolidPhasePeptideSynthesis))或溶液中進行上面的脫保護和偶聯(lián)步驟。除固相支持物外，所有其它的保護基、偶聯(lián)劑、去封閉劑以及純化技術(shù)在固相和液相肽合成法中是相似的。為在固相支持物上合成肽，選擇合適的樹脂，其能夠在從樹脂上切除后提供一個游離羧基或一個肽衍生物，該肽衍生物能被選擇性脫保護得到C末端羧基。該固相支持物可由聚苯乙烯珠、聚二甲基丙烯酰胺珠、聚二甲基丙烯酰胺/聚苯乙烯混合物(Polyhipe)或聚苯乙烯-聚氧乙烯樹脂(Tentagel樹脂)。下面列出了一些固相肽合成中使用的合適的含固相支持物的連接基團實例。除所示的接頭外，還可使用一些其它接頭，如羥基丁烯酰胺甲基(HYCRAM)。然后，通過本申請所描述的肽合成方法或使用肽合成中的任何一種偶聯(lián)劑將第一個氨基酸偶聯(lián)于樹脂上，一些偶聯(lián)劑的例子也描述于本申請中?！睲errifield氯甲基或羥甲基樹脂〕在合成肽的過程中，用各種保護基將不參加反應(yīng)的氨基酸官能基保護起來。例如，可使用9-芴甲氧羰基(Fmoc)、叔-丁氧羰基(Boc)、聯(lián)苯異丙氧羰基(Bpoc)、2-〔3，5-二甲氧苯基〕丙基-2-氧羰基(Ddz)、金剛烷氧羰基(Adoc)、烯丙氧羰基(Aloc)、2，2，2-三氯乙氧羰基(Troc)、芐氧羰基和各種取代的芐氧羰基來保護N-端和側(cè)鏈氨基。需要時可用常規(guī)方法將這些保護基切除(如酸或堿處理、催化氫解和Pd(o)處理或鋅/乙酸處理)。用于保護α羧基或側(cè)鏈羧基的合適保護基包括各種酯(如甲基、乙基、叔-丁基、芐基、硝基芐基、烯丙基和9-芴甲基)。用于保護含精氨酸殘基的肽中側(cè)鏈胍基的合適保護基包括硝基、金剛烷氧羰基、4-甲氧-2，3，6-三甲基苯磺酰基(Mtr)、2，2，4，6，7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)和2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫呋喃-6-磺?；?Pmc)。用于保護含組氨酸殘基的肽中側(cè)鏈咪唑基的合適保護基包括三苯甲游基、甲苯磺?；⒍趸交?、Adoc、Boc或Fmoc?？稍?℃至40℃間(優(yōu)選室溫，約25℃)進行保護基切除反應(yīng)。切除反應(yīng)可進行10分鐘至24小時。用于偶聯(lián)每個氨基酸或肽片段的合適的偶聯(lián)方法包括常用的疊氮法、對稱酸酐法、混合酸酐法和各種活化酯法、碳二亞胺法。在各種碳二亞胺(如二環(huán)己基-或二異丙基-碳二亞胺)的情況中，也可使用多種添加劑〔如1-羥基苯并三唑和N-羥基琥珀酰亞胺〕。此外，還可通過利用多種其它試劑完成氨基酸或片段偶聯(lián)，如1H-苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)、〔2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)〕和〔2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)〕?？稍?20℃至40℃的溫度間進行偶聯(lián)反應(yīng)。完成反應(yīng)所需時間可以在10分鐘至24小時之間。中間體和終產(chǎn)物的合適的純化方法包括逆流分布、離子交換、凝膠過濾和包括高壓液相色譜(HPLC)在內(nèi)的各種其它色譜技術(shù)以及許多有機化學(xué)中所用的其它常規(guī)技術(shù)(如溶劑萃取和結(jié)晶)?？捎萌我环N本領(lǐng)域所知的適宜方法制備鹽?？伤幱名}包括無機鹽如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽等與有機胺鹽或有機堿的堿，但不僅僅限于此?，F(xiàn)在，通過下面非限制性實施例來描述本發(fā)明，其中圖1示出的為化學(xué)式。圖2示出的是本發(fā)明一些優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)。圖3示出用于環(huán)肽合成的一般步驟，其中初始原料是通過在三苯甲基氯樹脂上(Chlorotrityl)固相合成而制得的。圖4示出Tic、Pyr的結(jié)構(gòu)，以及圖2中化合物3的詳細結(jié)構(gòu)。圖5為Ile類似物。圖6為實施例1第7段提及的化合物。圖7為實施例1第17和16段提及的終產(chǎn)物。圖8為一些優(yōu)選的LINKER結(jié)構(gòu)。圖9為實施例1第22段提及的化合物。圖10對比了同一環(huán)肽的不同表示方法。圖11示出終產(chǎn)物11(列于表2)的合成。圖12示出終產(chǎn)物17(列于表2)的合成。圖13示出一些優(yōu)選LINKER，注意6-18是從C末端至N末端，其余的則反過來是從N端至C端。圖14示出Fmoc-Arg(Pmc)的結(jié)構(gòu)。圖15示出N-MeAla和Asp(OBut)的結(jié)構(gòu)。圖16示出正亮氨酸(Nle)、正纈氨酸(Nva)和環(huán)己基丙氨酸(Cha)的結(jié)構(gòu)。表1示出環(huán)肽的合成與純化。方框中的注釋指環(huán)肽的LINKER部分。表2示出環(huán)肽的特征。方框中的注釋指環(huán)肽的LINKER部分。圖表中加箭頭的鍵表示連接點或直接的鍵(不是-CH2-基團)，除非另有說明或提示。對接頭中箭頭連接點說明如下N原子與相關(guān)肽的C端-C(O)-相連；同樣-C(O)-與相關(guān)肽的N端氮原子相連；除非另有說明或提示。另外，圖10中線性前體的結(jié)構(gòu)能與適當(dāng)?shù)慕K產(chǎn)物環(huán)肽相對比；圖10對比了同一結(jié)構(gòu)的不同表示方式，使用下面的縮寫Ac乙?；鵄hx6-氨基-己酸Boc叔-丁氧羰基Cha環(huán)己基丙氨酸Dab2，4-二氨基丁酸Fmoc9-芴甲氧羰基HPLC高壓液相色譜Nle正亮氨酸Orn鳥氨酸Pmc2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；鵓yr焦谷氨酸(見圖4)Tic1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸Z芐氧羰基實施例1-表1和2中化合物1-114的合成詳述通過表1公開的相應(yīng)的前體的環(huán)化(通常為線性)肽，來獲得表1和2中公開的終產(chǎn)物環(huán)肽(參照表2中的編碼體系)。(注意，可在任意氨基酸或LINKER位置間形成最終酰胺鍵，得到同一環(huán)肽)。圖3示出了制備化合物之一環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO)(表2化合物No.3)的一般步驟，并詳述如下。在制備其它化合物的情況中，僅提及標準步驟的不同之處。1.環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO)(圖3化合物3)的合成使用2-氯三苯甲基氯樹脂通過固相步驟制備環(huán)肽。在樹脂上裝配完部分被保護的線性肽后，將肽從樹脂上切除并用在后續(xù)步驟中而無需任何純化。但是，在測定性質(zhì)之前要通過反相高壓液相色譜(HPLC)將終產(chǎn)物進行充分純化。1.1環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH(CH2)5-CO)〔化合物3〕(圖3步驟6)的制備用三氟乙酸-水(95∶5，15ml)和三異丙基硅烷(200μl)的混合物處理被保護的環(huán)肽環(huán)(Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-CO)(125mg，0.2mmol)30分鐘，脫除天冬氨酸側(cè)鏈保護基。蒸發(fā)使體積減小，隨后用醚研制得粗品環(huán)肽(75mg)。通過制備型反相HPLC在Vydac218TP1022柱上純化該粗產(chǎn)物，使用含0.1％三氟乙酸(15-55％)的乙腈-水、梯度洗脫65分鐘，流速為10.0ml/分。將含產(chǎn)物的級分合并冷凍干燥，得純化的環(huán)肽(50mg)。通過氨基酸分析和質(zhì)譜(表2)鑒定肽〔HPLC為單峰，在NovapakC18柱上使用含0.1％三氟乙酸(10-60％)的乙腈-水梯度洗脫30分鐘，流速1.0ml/分，保留時間18.03分鐘。被保護的環(huán)肽原料制備如下。1.2Fmoc-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂的制備(圖3步驟1)將2-氯三苯甲基氯樹脂(NovaBiochem；1.6mmolCl/g；1g)在二氯甲烷(10ml)(用分子篩干燥)中溶脹5分鐘。加入Fmoc-NH-(CH2)5-COOH(355mg，1mmol)和二異丙基乙胺(560μl，3.2mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，并將該懸浮液機械振搖45分鐘。加入甲醇(9ml)和二異丙基乙胺(1ml)，并再持續(xù)振搖5分鐘。過濾收集樹脂，并依次用二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、異丙醇和乙醚洗滌，最后在50℃下真空箱中干燥(重1.33g)。1.3Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂的制備(圖3步驟2和3)將上述樹脂放入安裝有燒結(jié)玻璃片的反應(yīng)瓶中。然后人工進行下面一系列反應(yīng)，得到所需的肽樹脂。(a)用20％的哌啶二甲基甲酰胺溶液兩次處理(1×5分鐘與1×15分鐘)脫除Fmoc基團，隨后用二甲基甲酰胺洗滌5次，除去過量試劑和斷裂產(chǎn)物。(b)用Fmoc-Val(678mg，2mmol)?；渲蠪moc-Val已用O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)(760mg，2mmol)和二異丙基乙胺(700μl，4mmol)的二甲基甲酰胺(4ml)溶液活化1小時。再用二甲基甲酰胺將樹脂洗滌5次，除去過量試劑。使用Fmoc-Asp(OBut)-OH(822mg，2mmol)、Fmoc-Leu-OH(700mg，2mmol)和Fmoc-Ile-OH(700mg，2mmol)重復(fù)進行上面的脫保護和偶聯(lián)循環(huán)，得到Fmoc-Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂。用20％的哌啶的二甲基甲酰胺溶液(1×5分鐘和1×15分鐘)切除N-末端Fmoc基團，連續(xù)用二甲基甲酰胺、二氯甲烷和乙醚洗滌肽樹脂Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂，并將該樹脂于真空烘箱中50℃干燥(重1.51g)。1.4Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COOH，HCl的制備(圖3步驟4)將肽樹脂Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂懸浮于乙酸-三氟乙醇-二氯甲烷(2∶2∶6)(25ml)的混合物中2小時。過濾除去樹脂，并將樹脂以上述溶劑混合物洗滌。蒸發(fā)合并的濾液，殘余物用乙醚研制得Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COOH的乙酸鹽(428mg)，[M+H]+628.4，[M+Na]+650.5。然后將該乙酸鹽溶解于水-乙腈(2∶1，60ml)的混合物中，冷卻至0℃，加入1.05當(dāng)量的1NHCl使其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，并冷凍干燥產(chǎn)物。1.5環(huán)(Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-CO)的制備(圖3步驟5)將上述一部分線性肽鹽酸鹽Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COOH(HCl)(190mg，0.288mmol)溶解于二甲基甲酰胺(300ml)中，并向溶液中加入O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)(109mg，0.288mmol)、1-羥基苯并三唑(45mg，0.288mmol)和二異丙基乙胺(117μl，0.86mmol)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時。然后真空下蒸發(fā)至干燥。將殘余物在乙酸乙酯和水間進行分配。然后連續(xù)用1M檸檬酸、飽和氯化鈉、10％碳酸氫鈉、飽和氯化鈉洗滌有機層，用硫酸鎂干燥，真空下蒸發(fā)至干，收集產(chǎn)物，并用P2O5/KOH干燥得粗產(chǎn)物〔125mg；在Vydac218TP54柱上用含0.1％三氟乙酸(20-80％)的乙腈-水梯度洗脫30分鐘，流速1.0ml/min，保留時間20.71分鐘〕，將該粗產(chǎn)物用于最后一步(見1.1)，無需任何純化。2.化合物1、2和4的合成通過合成化合物3所用的程序來合成這3個化合物，除了以Fmoc-NH(CH2)3-COOH(用于化合物1)、Fmoc-NH(CH2)4-COOH(用于化合物2)和Fmoc-NH(CH2)7-COOH(用于化合物4)、的衍生物代替化合物3中所用的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，首先被偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂上之外。3.化合物5-10的合成除了以Fmoc-D-Ile(用于化合物5)、Fmoc-D-Leu(用于化合物6)、Fmoc-Proc(用于化合物7)、Fmoc-Gly(用于化合物8)、Fmoc-t-Bu-Gly(用于化合物9)或Fmoc-t-Bu-Ala(用于化合物10)衍生物代替Fmoc-Ile外，按合成化合物3所用程序來合成這些化合物。t-Bu-Gly(叔亮氨酸)和t-Bu-Ala(新戊基甘氨酸)結(jié)構(gòu)示于圖5。4.化合物11的合成合成化合物11的程序示于圖114.1(圖11步驟6)將粗制環(huán)肽原料溶解于三氟乙酸-水(95∶5，20ml)的混合物中，加入三異丙基硅烷(200μl)后，混合物于室溫下攪拌30分鐘。真空下將溶劑蒸發(fā)掉，通過反相HPLC純化該粗產(chǎn)物，得所需終產(chǎn)物(產(chǎn)量為28mg)。粗環(huán)肽原料制備如下。4.2Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-三苯甲基氯樹脂的制備(圖11步驟1)除了以Fmoc-Val代替Fmoc-NH(CH2)5-COOH首先與樹脂反應(yīng)外，根據(jù)合成化合物3所用的上述生產(chǎn)Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COO-三苯甲基氯樹脂的相似程序，在三苯甲基氯樹脂上裝配Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp-Val。4.3Z-D-Lys-Ile-Leu-Asp(OBut)-Val，HCl的制備(圖11步驟2和3)用上述制備Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-NH(CH2)5-COOH鹽酸鹽的相似程序，首先以哌啶處理Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-三苯甲基氯樹脂，以切除Fmoc，然后從樹脂上切下肽，得Z-D-Lys-Ile-Leu-Asp(OBut)-Val，其隨后被轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。4.4的制備(圖11步驟4)將線性肽鹽酸鹽(236mg，0.291mmol)溶解于二甲基甲酰胺(350ml)中，加入HBTU(110.5mg，0.291mmol)、HOBt(39.3mg，0.291mmol)和二異丙基乙胺(152μl，0.873mmol)后，室溫下攪拌該反應(yīng)混合物2小時。真空除去溶劑，將殘余物在乙酸乙酯和水間進行分配。用1N檸檬酸、飽和氯化鈉溶液、10％碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌有機相。然后有機相在硫酸鎂上干燥，并真空除去溶劑。粗產(chǎn)物(Vydac柱，20-80％乙腈-水梯度洗脫30分鐘，保留時間25.24分鐘)用于下一步驟，無需任何純化。4.5的合成。(圖11步驟5)將粗環(huán)肽(157mg，0.207mmol)溶解于乙醇-水-乙酸(40ml/6ml/10ml)的混合物中，加入Pd/C(約200mg)。然后將H2通入攪拌的反應(yīng)混合物4小時，切除N-端芐氧羰基。過濾除去催化劑，蒸發(fā)濾液至干燥。殘余物溶解于二甲基甲酰胺(10ml)中，以過量的乙酸酐處理，將該溶液置于室溫下，16小時。真空除去溶劑，用乙醚收集殘余物，并用乙醚洗滌，用于步驟6(見4.1)。5.化合物12、13和14的合成所有這些化合物的制備程序均與上述化合物11的相似。裝配于樹脂上的相應(yīng)的線性肽結(jié)構(gòu)示于表1。6.化合物15的合成除了以N-Fmoc-氨甲基苯甲酸代替化合物3中所用的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，被首先偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂外，用合成化合物3的程序來合成化合物15。7.化合物16的合成(圖6)7.1環(huán)肽16的制備(圖6步驟6)根據(jù)實施例1(化合物3)的相同步驟中上述生產(chǎn)環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO)的程序使線性肽原料環(huán)化和脫保護，得到最后的環(huán)肽終產(chǎn)物(16)。線性肽原料制備如下7.2Nα-Boc-His的制備(圖6步驟1)15分鐘內(nèi)向組氨酸二鹽酸鹽(10g，54.3mmol)和三乙胺(15.3ml，109mmol)的甲醇溶液中攪拌加入二-叔丁基二碳酸酯(butyldicarbonate)(24g，110mmol)的甲醇(50ml)溶液。室溫下攪拌24小時后，蒸發(fā)除去溶劑，殘余物在二氯甲烷和水間進行分配。用M檸檬酸溶液和飽和氯化鈉溶液兩次洗滌有機相，并在MgSO4上干燥，蒸發(fā)留下固體物質(zhì)。從乙酸乙酯重結(jié)晶得到Nα，Nτ-Boc-His〔12.99g，76％，熔點125-126℃；在硅膠板上薄層層析顯出單一點；在乙酸乙酯-異己烷(1∶1)中Rf為0.25，在甲醇-氯仿(1∶9)中為0.62〕。向Nα，Nτ-Boc-His(8.3g，26.7mmol)的甲醇(150ml)溶液中加入二異丙基乙胺(1ml)，將該溶液于室溫下攪拌24小時。蒸發(fā)除去溶劑，從乙酸乙酯-異己烷中沉淀出殘余物〔5.46g，97％，熔點93-95℃；在硅膠板上薄層層析顯示出單一點，在乙腈-水(3∶1)中Rf為0.53，甲醇-氯仿(1∶9)中為0.23，氯仿-甲醇-水(55∶40∶10)中為0.73〕。7.3的制備(圖6步驟2)向攪拌的Nα-Boc-His(2.5g，11.8mmol)和二異丙基乙胺(2.06ml，11.8mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入溴乙酸叔丁酯(2.31g，11.80mmol)的二氯甲烷溶液(6ml)。室溫下持續(xù)攪拌24小時。再加入二氯甲烷(200ml)，溶液以M檸檬酸溶液，飽和氯化鈉溶液洗滌，于MgSO4上干燥，蒸發(fā)至干燥。殘余油用于下一步，無需進一步純化。7.4的制備(圖6步驟3)將上面的咪唑衍生物溶解于含三異丙基硅烷(1ml)的三氟乙酸∶水(95∶5；100ml)中，置于室溫下90分鐘。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余油用乙醚研制并于高真空下P2O5和KOH上干燥，得固體物〔3.9g，(M+H)+170，硅膠板上薄層層析顯示單一點；乙腈-水(3∶1)中Rf為0.35，氯仿-甲醇-水(55∶40∶10)中為0.37〕。將脫保護的咪唑衍生物(3.9g，14mmol)溶解于水(50ml)、丙酮(30ml)和1M硫酸鈉(30ml)中，并將此溶液在冰浴中冷卻，攪拌情況下向其中滴加9-芴甲基-N-羥基琥珀酰亞胺(476mg)的丙酮(30ml)溶液20分鐘(通過加入1M碳酸鈉溶液保持pH為9)。持續(xù)進行攪拌過夜。蒸發(fā)除去丙酮，用1MKHSO4酸化此水溶液，并用乙酸乙酯萃取該產(chǎn)物。有機相用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，于MgSO4上干燥，蒸發(fā)留下油狀物，用乙醚和乙醚/異己烷研制，得固體物〔3.66g，66％；(M+H)+390〕。7.5的制備(圖6步驟4和5)向溶脹于二氯甲烷(25ml)的2-氯三苯甲基氯樹脂(NovaBiochem.，2g)中加入Fmoc-His衍生物(782mg，2mmol)的二氯甲烷(10ml)和二異丙基乙胺(1.05ml，6mmol)溶液，將此反應(yīng)混合物輕輕搖動75分鐘。加入10％的二異丙基乙胺的甲醇(20ml)溶液，繼續(xù)搖動15分鐘。濾出樹脂，并將樹脂連續(xù)以二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇和乙醚洗滌，于真空烘箱中50℃干燥16小時(重2.16g)。將上述樹脂置于安裝有燒結(jié)玻璃片的反應(yīng)瓶中，使用標準方法(見實施例1中的同等步驟)(化合物3)在樹脂上合成四肽衍生物，然后將肽切下得所需線性肽。8.化合物17的合成化合物17的合成途徑示于圖12。8.4化合物17的合成(圖12步驟5)根據(jù)上述實施例1(化合物3)的同等步驟中合成環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO)的程序使線性肽原料環(huán)化和脫保護，得到最后的環(huán)肽終產(chǎn)物(17)。線性肽原料制備如下8.1化合物17的合成(圖12步驟1)向叔丁基-1-哌嗪羧酸酯(4.65g，25mmol)和三乙胺(3.5ml，25mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入溴乙酸叔丁酯(4.88g，25mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，過濾除去固體，分離過夜，并將濾液蒸發(fā)至干燥。殘余物在乙酸乙酯和水間進行分配。然后有機層以水洗滌，在MgSO4上干燥，并蒸發(fā)至干燥，將殘余物從乙醚-異己烷中結(jié)晶，得產(chǎn)物(5.66g，75％，熔點99-100℃)?！苍胤治鰧崪y值C59.8％、H9.6％、N9.1％；C15H28N2O4中C60.0％、H9.4％、N9.33％〕，〔硅膠板上薄層層析顯示出單一點；在乙酸乙酯-異己烷(1∶1)中Rf0.38，在甲醇-氯仿(1∶9)中0.68〕。8.2化合物17的合成(圖12步驟2)用三氟乙酸-水(95∶5；50ml)的混合物處理上面8.1部分所述的化合物(5g，16.6mmol)1小時。真空蒸發(fā)除去酸，殘余油用乙醚研制得固體物，收集該固體物，用乙醚洗滌，真空條件下在P2O5/KOH上干燥(6.25g，熔點177-182℃)。然后將該固體物溶解于含碳酸鉀(6.92g，3當(dāng)量)的水和丙酮(1∶1，150ml)的混合物中。攪拌狀態(tài)下20分鐘內(nèi)加入9-芴甲基-N-羥基琥珀酰亞胺(5.66g，16.7mmol)的丙酮溶液(30ml)。通過加入MK2CO3溶液保持溶液pH約為9。室溫下攪拌過夜后，真空蒸發(fā)除去丙酮，用KHSO4溶液酸化該水溶液。用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物，并用水(6次)和飽和NaCl溶液洗滌該溶液。有機層在MgSO4上干燥，并蒸發(fā)得油狀物，經(jīng)異己烷和醚研制作用固化(產(chǎn)量3.72g，60％)。樣品從乙醇-乙醚重結(jié)晶，熔點179-182℃，(M+H)+367。8.3化合物17的合成(圖12步驟3和4)向2-氯三苯甲基氯樹脂(NovaBiochem，1g)中加入上述Fmoc-哌嗪衍生物(366mg，1mmol)的二氯甲烷(15ml和二異丙基乙胺(525μl，3當(dāng)量)溶液，將此反應(yīng)混合物輕輕搖動75分鐘。加入10％的二異丙基乙胺的甲醇(10ml)溶液，并繼續(xù)搖動10分鐘。樹脂被濾出，并連接以二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙醚洗滌，于真空烘箱中50℃干燥(重1.13g)。將上述樹脂放入裝有燒結(jié)玻璃片的反應(yīng)瓶中，然后人工進行下面一系列反應(yīng)得到所需的肽樹脂。(a)用20％的哌啶的二甲基甲酰胺溶液兩次處理(1×5分鐘和1×15分鐘)脫去Fmoc基，隨后用二甲基甲酰胺洗滌5次，除去過量的試劑和切下的產(chǎn)物。(b)用Fmoc-Val(678mg，2mmol)?；現(xiàn)moc-Val已被O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)(760mg，2mmol)和二異丙基乙胺(700μl，4mmol)的二甲基甲酰胺(4ml)溶液活化1小時。用二甲基甲酰胺將樹脂再洗滌5次，以除去過量試劑。使用Fmoc-Asp(OBut)-OH(822mg，2mmol)、Fmoc-Leu-OH(700mg，2mmol)和Fmoc-D-Leu-OH(700mg，2mmol)重復(fù)進行上面的脫保護和偶聯(lián)循環(huán)，得到接附于三苯甲基氯樹脂(步驟3)上的脫保護的四肽衍生物。用20％的哌啶的二甲基甲酰胺(1×5分鐘和1×15分鐘)溶液切除N-端Fmoc基，并連續(xù)以二甲基甲酰胺、二氯甲烷和乙醚洗滌肽樹脂，樹脂于真空烘箱中50℃干燥。將肽樹脂懸浮于乙酸-三氟乙醇-二氯甲烷(2∶2∶6)(25ml)的混合物中2小時。過濾除去樹脂，以上述溶劑混合物洗滌，蒸發(fā)合并的濾液，殘余物用乙醚研制，得呈乙酸鹽形式的線性四肽衍生物。然后將該乙酸鹽溶解于水-乙腈(2∶1，60ml)的混合物中，冷卻至0℃、加入1.05當(dāng)量的1NHCl將其轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，并冷凍干燥該內(nèi)容物。9.化合物18和19的合成通過上述合成化合物17的程序來合成這兩個化合物。根據(jù)上述實施例1(化合物3)中同等步驟中合成環(huán)(Ile-Leu-Asp-Val-NH(CH2)5-CO)的程序使該線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)環(huán)化和脫保護，得到最后的環(huán)肽終產(chǎn)物(18和19)。10.化合物20至27的合成采用相似于上述合成化合物11(圖11)的程序來制備所有這些化合物。裝配于樹脂上的相應(yīng)線性肽的結(jié)構(gòu)示于表1。11.化合物28至38的合成用化合物3(圖3)的程序合成這些化合物。在合成化合物30-32情況中首先接在樹脂上的氨基酸是氨基己酸，在化合物28-29和33-38的情況中為氨基戊酸。通過以化合物38-28中相應(yīng)位置的氨基酸代替化合物3中的Ile或Val殘基，來制備所需的線性肽(氨基酸序列示于表1)。非天然氨基酸結(jié)構(gòu)〔N-Me-Ala、N-Me-Ile、t-Bu-Gly(叔亮氨酸)和t-Bu-Ala(新戊基甘氨酸)〕示于圖5和15。12.化合物39和40的合成用相似于上述合成化合物11的程序(圖11)制備化合物40。通過化合物11中所述的相應(yīng)步驟切除N-末端芐氧羰基，得到化合物39。13.化合物41的合成用合成化合物11的途徑(圖11)來合成含N-端氨基的部分被保護的環(huán)肽(結(jié)構(gòu)如下所示，用于化合物14的合成)向上述肽(80mg，0.141mmol)的二甲基甲酰胺(7ml)溶液中加入丙酸酐(72μl，0.563mmol)。室溫下攪拌過夜后真空蒸發(fā)去溶劑，通過HPLC純化殘余物，得所需肽41。14.化合物42和43的合成通過上述合成化合物41的相同方法和相同量的中間體肽來合成這兩種化合物。在化合物42的情況中使用琥珀酸酐(56.3mg，0.564mmol)代替丙酸酐，在化合物43的情況下使用異戊酸酐(105mg，0.564mmol)。15.化合物44的合成通過合成化合物11所述的相同方法(圖11)來合成化合物44中所用的部分被保護的環(huán)肽(結(jié)構(gòu)如下所示)除了以Fmoc-D-Leu代替Fmoc-Ile。將上述肽(100mg，0.16mmol)溶解于二甲基甲酰胺(5ml)中，并加入Fmoc-β-Ala(50mg，0.16mmol)、HBTU(60.7mg，0.16mmol)、HOBt(22mg，0.16mmol)和二異丙基乙胺(83μl，0.48mmol)，于室溫下將反應(yīng)混合物攪拌16小時。真空蒸發(fā)出溶劑，將粗肽脫保護(Fmoc基和OBut基)，并以標準方法純化，得44。16.化合物45的合成將前體環(huán)肽(N-端脫保護的)(100mg)溶解于二甲基甲酰胺(5ml)中，并加入乙醛(9μl)。將混合物于室溫下攪拌5分鐘，然后伴隨1滴乙酸加入氰基氫硼化鈉(11.1mg)，繼續(xù)攪拌30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，粗產(chǎn)物被脫封閉(切除Asp叔丁酯基)，并用HPLC純化。17.化合物46的合成將前體環(huán)肽(N-末端脫保護的)溶解于二甲基甲酰胺(10ml)中，加入苯甲醛(20μl)。室溫下攪拌混合物5分鐘，然后伴隨一滴乙酸加入氰基氫硼化鈉(11.1mg)，持續(xù)攪拌30分鐘。蒸發(fā)除去溶劑，粗產(chǎn)物脫封閉(切除Asp叔丁酯基)，以HPLC純化。18.化合物47、48和49的合成使用與合成化合物44所述的相同方法和相同的部分被保護的肽中間體合成上面的三個化合物。對于化合物47、48和49，分別以3-吡啶乙酸、Fmoc-Glu(OBut)和焦谷氨酸代替Boc-β-Ala。19.化合物50～53的合成通過化合物13所用的程序合成上面這四個化合物，除了以Fmoc-NH(CH2)2-COOH(用于化合物50)、Fmoc-NH(CH2)4-COOH(用于化合物51)、Fmoc-NH(CH2)5-COOH(用于化合物52)和Fmoc-NH(CH2)7-COOH(用于化合物53)衍生物代替化合物3中所用的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，被首先偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂上之外。然后在樹脂上裝配線性肽(序列示于表1)并通過標準程序獲得所需環(huán)肽。在最后脫封閉步驟中除去側(cè)鏈Asp(OBut)和Glu(OBut)保護基。20.化合物54的合成通過化合物3所用的程序合成化合物54，除了以Fmoc-NH(CH2)2-S-CH2COOH代替化合物3情況中所用的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，被首先偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂之外。然后在樹脂上裝配線性肽(序列示于表1)，并通過標準程序獲得所需環(huán)肽。從2-氨基乙硫醇和2-溴乙酸獲得Fmoc-NH(CH2)2-S-CH2-COOH(上面所用的)。將2-氨基乙硫醇鹽酸鹽(5.68g，50mmol)溶解于水(200ml)中，向其中加入碳酸氫鈉(25.2g，300mmol)。30分鐘內(nèi)將溶于乙腈(100ml)中的2-溴乙酸(6.95g，50mmol)按份加入上述攪拌著的溶液中。室溫下1小時后，加入9-芴甲基-N-羥基琥珀酰亞胺(Fmoc-OSu)(16.85g，50mmol)的乙腈(150ml)溶液，持續(xù)攪拌16小時。將此輕微混濁溶液蒸發(fā)除去大部分乙腈，剩余水溶液用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，并加入鹽酸酸化(pH2)。收集白色固體，用水洗滌，真空45℃下干燥，產(chǎn)量17g(95％)，(M+H)+358.0。20.化合物55和56的合成通過化合物3(圖1)所述的程序來合成這兩種化合物，除了以Fmoc-NH(CH2)4-COOH代替化合物3情況中所用的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，被首先偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂之外。裝配線性肽(序列示于表1)，通過標準程序獲得環(huán)肽。22.化合物57的合成將母體環(huán)肽(化合物54，266mg)溶解于水-乙腈(1∶1，50ml)的混合物中，并將過氧化氫(150μl)分成五等份5天內(nèi)加入攪拌著的溶液中。然后蒸發(fā)除去溶劑，殘余物以HPLC純化，得產(chǎn)物(140mg)。23.化合物58的合成通過化合物3所用程序合成化合物58，除了以Fmoc-NH(CH2)2-S-(CH2)2-COOH代替化合物3情況中的Fmoc-NH(CH2)5-COOH，被首先偶聯(lián)于2-氯三苯甲基氯樹脂之外。然后在樹脂上裝配線性肽(序列示于表1)，通過標準程序獲得所需環(huán)肽。根據(jù)上述Fmoc-NH(CH2)2-S-CH2COOH(合成化合物54)的程序使用3-溴丙酸和2-氨基乙硫醇獲得Fmoc-NH(CH2)2-S-(CH2)2-COOH。(M+H)+372。24.化合物59-69的合成通過上述化合物3所用程序合成這些化合物。在樹脂上合成線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)，用標準程序環(huán)化、脫保護、以HPLC純化，得最后的環(huán)肽終產(chǎn)物59-69。25.化合物70的合成通過將Fmoc-異谷氨酰胺偶聯(lián)于Ile-Leu-Asp(OBut)-Val-OTrt樹脂制備合成該化合物(表1)所需的線性肽。從2-氯三苯甲基氯樹脂開始用通用方法(化合物3)制備四肽樹脂。然后將線性肽環(huán)化、脫保護、用標準方法純化，得環(huán)肽70。26.化合物71-77的合成通過上述化合物3所用程序合成這些化合物。在樹脂上合成線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)，用標準方法環(huán)化、脫保護、以HPLC純化，得最后環(huán)肽終產(chǎn)物71-77。27.化合物78和79的合成通過上述化合物17(圖12)所用程序來合成這兩個化合物。在樹脂上合成線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)，通過標準方法環(huán)化、脫保護、以HPLC純化，得最后的環(huán)肽終產(chǎn)物78和79。28.化合物80的合成在2-氯三苯甲基氯樹脂上裝配合成此肽(表1)所需的線性肽。按實施例1(化合物3)所述的Fmoc-NH(CH2)5-COOH的相似方式使3-溴丙酸與樹脂反應(yīng)。然后向3-溴丙?；?O-(2-三苯甲基氯)-樹脂中加入五倍過量的哌嗪，得連接于樹脂上的哌嗪-N-丙酰衍生物(結(jié)構(gòu)如下所示)以化合物11所述程序(圖11)在樹脂上裝配線性肽，切除肽，并環(huán)化。使用化合物11中相應(yīng)步驟所述的方法通過催化氫解(用5％Pd/C)除去N端芐氧羰基。然后將該環(huán)肽與乙酸酐在二甲基甲酰胺中反應(yīng)，使N端氨基乙?；?。切除Asp(OBut)基，隨后以HPLC純化粗肽，得所需環(huán)肽化合物80。29.化合物81的合成通過上面化合物16所述程序(圖6)合成化合物81。通過標準方法在樹脂上合成線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)、環(huán)化、脫保護，并以HPLC純化，得最后的環(huán)肽終產(chǎn)物。30.化合物82的合成通過化合物11所述的相同方法(圖11)合成含N-端芐氧羰基及替代Ile的D-Leu殘基的化合物11的類似物(結(jié)構(gòu)如下所示)。用相同的方法切除N-端芐氧羰基，所得化合物(350mg，0.56mmol)溶解于二甲基甲酰胺(15ml)中。然后加入2-溴乙酸(86mg)，接著加入二異丙基碳二亞胺(97μl)。室溫下16小時后，加入哌嗪(5-倍過量)，將此反應(yīng)混合物于室溫下再保持24小時。真空蒸發(fā)除去溶劑，粗肽被脫保護，并以標準方法純化。31.化合物83和84的合成將含D-Lys-D-Leu的環(huán)肽〔結(jié)構(gòu)如上所示(化合物82的合成)〕以三氟乙酸處理30分鐘，得到一個完全脫保護的環(huán)肽(結(jié)構(gòu)如下所示)，其被用于83和84的制備中。為合成肽83，將Boc-4-氨基丁酸(55mg)溶解于二甲基甲酰胺(2ml)中，并與二異丙基碳二亞胺(41μl)和HOAt(36mg)反應(yīng)。環(huán)境溫度下30分鐘后，將此反應(yīng)混合物加入到上述環(huán)肽(177mg，0.26mmol)和二異丙基乙胺(92μl)的DMF(10ml)溶液中，環(huán)境溫度下將混合物攪拌6小時。然后真空蒸發(fā)去溶劑，殘余物以三氟乙酸處理，切除N-端Boc基，純化(HPLC)粗肽，得純肽83。用與化合物83的同樣程序制備環(huán)肽84，除了以Nα-Boc-Arg(HCl)代替Boc-4-氨基丁酸。32.化合物85至89的合成通過化合物17情況中所用的程序(圖7)來合成化合物85至89。在樹脂上裝配的線性肽的結(jié)構(gòu)示于表1。33.化合物90至105的合成通過上述化合物3的程序合成這些化合物。通過標準程序在2-氯三苯甲基氯樹脂上合成線性肽(結(jié)構(gòu)示于表1)、環(huán)化、脫保護并以HPLC純化，得最后的環(huán)肽終產(chǎn)物90-105。在含一個D-Arg殘基的化合物(90、91、97、98、101、102和103)中，使用Fmoc-Arg(Pmc)衍生物插入Arg殘基(圖14)。最后的脫保護步驟中使用三氟乙酸，通過常規(guī)方法也分離出一部分被保護的化合物(106-109；仍含有Pmc基)，并鑒定其特征。34.化合物110至114的合成通過將環(huán)肽環(huán)(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Ala)(92)或環(huán)(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Lys)(95)與所需的醛或酮及氰基氫硼化鈉反應(yīng)制備上述環(huán)肽。例如，通過將環(huán)肽92(64mg，100μmol)溶解于無水丙酮(2ml)并與氰基氫硼化鈉(63mg，10當(dāng)量)反應(yīng)來制備化合物111。1小時后，將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，殘余物溶于水(5ml)并用乙酸酸化，真空下蒸發(fā)。HPLC純化粗肽。實施例2-體外和體內(nèi)測定本實施例中使用下面的縮寫和材料來源。MOLT-4細胞-T淋巴細胞系(來自ATCC)。纖連蛋白-試劑級人纖連蛋白。通過凝膠-葡聚糖親和層析從人血漿中純化。來源BioProductsElstreeUK商品號9136。一篇有關(guān)纖連蛋白的綜述文章為纖連蛋白-細胞表面和血液的粘附糖蛋白(Fibronectins-AdhesireGlycoproteinsofCellSurfaceandBlood)，K.M.Yamada和K.Olden，Nature(自然)，275(1978)179-184，rsVCAM-1-(參考文獻生物化學(xué)與生物物理研究通信1991，178N3；1498-1504)。VCAM-1是由血管內(nèi)皮產(chǎn)生的細胞表面糖蛋白，在應(yīng)答某些炎癥刺激時產(chǎn)生于巨噬細胞類和樹突型細胞上。VCAM-1與呈遞于單核白細胞上的整合蛋白相互作用。通過篩選來自IL-1β-活化的人內(nèi)皮細胞的cDNA文庫分離VCAM-1的cDNA。使用桿狀病毒表達體系在昆蟲細胞中表達了大量蛋白。VCAM-1表達細胞顯示出與多種VLA-4表達細胞系(Jurkat，THP-1，u937)特異地結(jié)合。另一篇有關(guān)VCAM-1的參考文獻是ExpressionandFunctionalCharacterisationofRecombinantHumanVascularCellAdhesionMolecule-1(VCAM-1)SynthesisedbyBaculorirus-InfectedInsectCells(通過桿狀病毒感染的昆蟲細胞合成的重組人血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)的表達及功能特征)，J.K.Stoltenborg，R.A.Straney，R.J.Tritch，W.M.Mackin和H.J.George，ProteinExpressionandPurificatrin(蛋白質(zhì)表達與純化)，4(1993)585-593。RPMI1640-細胞培養(yǎng)基。SourceGibcoBRL(Lifetechnologies；目錄號31870-025)。FCS-胎牛血清。SourceAdvancedproteinproducts(WestMidlandsUK)，目錄號AS-302-50。BCECF-AM-2′，7′-雙(2-羧乙基)-5-(ε6)羧基熒光素乙酸基甲基酯)。來源MolecularProbesIncUSA；目錄號B-1150。CHODG44-中國倉鼠卵巢細胞系(源自ATCC；參考文獻SomCellMolGen1986；12；555-666)。DEME-Dulbecco’s改良的eagle培養(yǎng)基。SourceGibcoBRL(Lifetechnologies；目錄號41966-029)。抗生素-青霉素-鏈霉素。SourceGibcoBRL(LifeTechnologies；目錄號15070-022)。FluorskanTM-是一種熒光計HUVEC-人臍帶內(nèi)皮細胞。原代培養(yǎng)物由組織樣品制備(參考文獻J.ClinInvest(臨床研究)1973，52；2745-2747)。重組人TNFα-腫瘤壞死因子。Alzet滲透小泵-皮下植入的微型滲透泵，AlzaCorporationPaloAlto，California。2.1MOLT-4細胞/纖連細胞-VCAM-1粘附測定MOLT-4細胞/纖連蛋白-VCAM-1粘附測定用于研究表達于MOLT-4細胞膜上的整合蛋白VLA4(極遲抗原α4/β1)與纖連蛋白或重組可溶VCAM-1(rsVCAM-1)間的相互作用，將纖連蛋白或rsVCAM-1分別于20μg/ml和1μg/ml的濃度4℃時包覆于聚苯乙烯96-孔微滴板上過夜。隨后，加入濃縮的BSA溶液(10mg/ml)封閉非特異結(jié)合位點。吸去這些溶液后，加入等體積的化合物和MOLT-4細胞懸浮液(1×10E6個細胞/ml)。粘附發(fā)生于37℃溫育2小時的過程中，通過輕輕攪拌和隨后真空吸氣除去未粘附的或松散粘附的細胞。通過酸性磷酸酶活性的比色測定，在分光光度計上讀數(shù)，對存留的粘附細胞計數(shù)。能抑制粘附的化合物具有較低的吸光度讀數(shù)。重復(fù)三次測定標準條件，對照條件和測試條件，根據(jù)每板上的總的(無抑制劑)和非特異(無纖連蛋白)標準，計算抑制的百分比率。2.2細胞-細胞測定2.2.1VCAM-1CHO細胞用熒光染料BCECF-AM(每3×10E6個細胞用30μg/ml)標記MOLT-4細胞(補充有5％FCS和2mML-谷氨酰胺的RPMI1640)。通過FACS分析選擇出用于VCAM-1表達的以全長VCAM-1cDNA轉(zhuǎn)染的CHODG44，并在96孔組織培養(yǎng)板中生長至匯合。用于粘附測定之前，CHODG44細胞被洗滌3次(補充有5％FCS的DMEM，2mML-谷氨酰胺和2％抗生素)。將MOLT-4細胞(10E5細胞/孔)鋪于表達VCAM-1的CHO細胞上，并于37℃、5％CO2中溫育30分鐘。通過將板洗滌3次(RPMI1640，補充有5％FCS和2mML-谷氨酰胺)除去未粘附的細胞，隨后將板用薄紙印干。向每孔中加入100μl2％TritonX-100，使用Fluoroskan(激發(fā)＝485nm，發(fā)射＝538nm)對板進行讀數(shù)。將化合物溶解于適當(dāng)溶劑中，并在將其加入HUVEC培養(yǎng)物之前，將其加入MOLT-4細胞，對比以載體處理的細胞對照樣的粘附(熒光)水平和以化合物處理的細胞粘附水平，計算出粘附抑制率。2.2.2人臍靜脈內(nèi)皮細胞用熒光染料BCECF-AM(30μg/ml，每3×10E6個細胞)標記MOLT-4細胞(補充有5％FCS和2mML-谷氨酰胺的RPMI1640)。原代HUVEC在96孔組織培養(yǎng)板中生長至匯合，并與2U/ml重組人TNFα一起溫育18小時。用于粘附測定之前洗滌一級HUVEC單層(補充有5％FCS、2mML-谷氨酰胺和2％抗生素的M199)。將MOLT-4(10E5細胞/孔)細胞鋪于原代HUVEC之上，于37℃5％CO2中溫育30分鐘。將板洗滌3次(補充有5％FCS和2mML-谷氨酰胺的RPMI1640)除去未粘附的細胞，并用薄紙印干。向每孔中加入100μl2％的TritonX-100，用Fluoroskan對板進行讀數(shù)(激發(fā)＝485nm，發(fā)射＝538nm)。將化合物溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，在將其加入HUVEC培養(yǎng)物之前將其加入MOLT-4細胞，將以載體處理的細胞對照樣的粘附(熒光)水平與以化合物處理的細胞的粘附水平相比較，計算出粘附抑制率。2.3體內(nèi)接觸超敏反應(yīng)通過在Balb/c雄性小鼠(20-25g)背部的刮除后的皮膚區(qū)域局部施用噁唑酮(oxazolone)(50μl，在丙酮/橄欖油中濃度為0.24％)使小鼠過敏。7天后，在小鼠耳表面局部施用噁唑酮(25μl，在丙酮/橄欖油中濃度為0.25％)攻擊小鼠。耳腫脹24小時，隨后測量耳厚度，并與攻擊前厚度相對比，計算耳厚度增加的百分率。通過噁唑酮攻擊前24小時植入的Alzet滲透微型泵每日給藥來遞送化合物(1次/天)，通過對比載體處理的動物和化合物處理的動物組(每組n＝6只動物)計算炎癥反應(yīng)的抑制。2.4體內(nèi)卵清蛋白遲發(fā)型超敏模型用卵清蛋白乳濁液(Sigma；皮下注射2mg/ml的與完全弗氏佐劑混合(1；1)的溶液0.1ml；Difco)在脅部免疫Balb/c雌性小鼠(20-25g)。7天后，在其左后足墊上足底注射卵清蛋白(30μl1％熱凝聚的卵清蛋白鹽水溶液)攻擊小鼠。足腫脹24小時，隨后測量足墊厚度，與激發(fā)前厚度相比，計算足墊厚度增長的百分率。通過卵清蛋白激發(fā)前24小時植入的Alzet滲透微型泵每日給藥來遞送化合物(1次/天)，通過對比載體處理的動物和化合物處理的動物組(每組n＝5只動物)計算炎癥反應(yīng)的抑制。2.5體內(nèi)抗原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎模型用完全弗氏佐劑中(皮下)100μg甲基化BSA及隨后以腹膜內(nèi)注射百日咳桿菌微生物使小鼠免疫，7天后加強免疫。增強后兩周，用100μg甲基化牛血清白蛋白(BSA)關(guān)節(jié)內(nèi)攻擊動物，通過測量膝關(guān)節(jié)腫脹、急性期蛋白組織學(xué)和變化來測定炎癥/關(guān)節(jié)炎程度。從攻擊前一天開始算，給藥化合物7至14天，炎癥/關(guān)節(jié)炎程度與對照動物和另一側(cè)的膝相對比。2.6實驗性自身免疫腦脊髓炎模型通過皮下注射脊髓勻漿、髓磷脂堿性蛋白(MBP)或腦生肽(encephalogenicpeptide)和完全弗氏佐劑(CFA)的混合物，并同時i.p.注射百日咳毒素，誘發(fā)疾病。對于急性病，免疫后重復(fù)注射百日咳2天。對于慢性病，不注射百日咳，小鼠兩次注射CFA中的抗原，間隔時間為7天。通過建立于組織學(xué)上的臨床評分，評估疾病，從攻擊前一天開始算，化合物給藥7至14天，將癥狀與對照動物相比較。表1和2的說明為清楚起見，表中每一化合物均有一不同的編號，但有不同編號的某些化合物實際上是同一物質(zhì)，在下面將其列出。92＝224＝225＝226＝22795＝228155＝156＝157＝161158＝159＝160＝162-163＝196＝197＝19854＝171表1環(huán)肽的合成與純化</tables>如</tables>使用-反相(C18)直徑為1英寸Vydac柱(218TP1022，22×250mm)進行制備型HPLC。溶劑系統(tǒng)由水和乙腈組成(均含0.1％三氟乙酸)，使用乙腈濃度漸增的梯度(溶劑比率和時間示于表中)流速10ml/min洗脫粒子。表2環(huán)肽的合成與特征<></tables><>使用-反相(C18)Vydac柱(218TP54，4.6×250mm)或Novapak柱(3.9×150mm)進行分析型HPLC。除非上表中另有說明，Vydac柱是用于化合物的。溶劑體系由水和乙腈(均含0.1％三氟乙酸)組成。使用乙腈濃度漸增的梯度(溶劑比率和時間示于表中)流速1ml/min洗脫粒子。在氨基酸分析中觀察到一些非天然氨基酸的存在，但未估計其含量。序列表說明本說明書表1和2列出化合物編號。為某些專利局提供了使用Patentin軟件制作的序列表，但認為其不制約含D型氨基酸的肽。因此本說明書序列表中不包括表1和2中的所有肽。為方便和清楚起見，下表中對比列出表1和2中使用的化合物編號與序列表中使用的SEQIDNO號序列表(1)一般信息(i)申請人(A)姓名ZENECALIMITED(B)街道15STANHOPEGATE(C)城市倫敦(E)國家英國(F)郵編WIY6LN(G)電話01713045000(H)電傳01713045151(I)電掛01718342042(ii)發(fā)明名稱化合物(iii)序列數(shù)122(iv)計算機可讀方式(A)介質(zhì)類型軟盤(B)計算機IBMPC兼容機(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatertInRelease#1.0，版本#1.3(EPO)(vi)優(yōu)先權(quán)申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)朑B9426254.0(B)申請日19941224(vi)優(yōu)先權(quán)申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)朑B9505905.1(B)申請日1995323(vi)優(yōu)先權(quán)申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)朑B9513904.4(B)申請日199577(2)SEQIDNO1的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵修飾點(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“4-氨基丁酸”(xi)序列描述SEQIDNO1IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO2的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“4-氨基戊酸”(xi)序列描述SEQIDNO2IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO3的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO3IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO4的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“7-氨基庚酸”(xi)序列描述SEQIDNO4IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO5的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO5IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO6的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO6LeuLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO7的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO7ProLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO8的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO8GlyLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO9的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔亮氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO9XaaLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO10的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔丁基丙氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“6-氨基己酸”(xi)序列描述SEQIDNO10XaaLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO11的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙?；?D-Lys”(xi)序列描述SEQIDNO11XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO12的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙酰基-D-Orn”(xi)序列描述SEQIDNO12XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO13的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙?；?Orn”(xi)序列描述SEQIDNO13XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO14的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙?；?D-Lys”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO14XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO15的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“4-氨基甲基-苯甲酸”(xi)序列描述SEQIDNO15IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO16的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“(4-(2-氨乙基)-咪唑-1基)-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO16IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO17的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO17LeuLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO18的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-乙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(xi)序列描述SEQIDNO18IleLeuAspValXaaAla15(2)SEQIDNO19的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-乙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(xi)序列描述SEQIDNO19LeuLeuAspValXaaAla15(2)SEQIDNO20的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙酰基-D-Lys”(xi)序列描述SEQIDNO20XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO21的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-Ac-Orn”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D-構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO21XaaIleLeuAspVal15(2)SEQIDNO22的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A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DNO69IleLeuAspLeuXaa15(2)SEQIDNO70的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH(CONH2).CH2.CH2.CO-”(xi)序列描述SEQIDNO70IleLeuAspValXaa15(2)SEQIDNO71的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“5-氨基戊酸”(xi)序列描述SEQIDNO71IleLeuAspPheXaa15(2)SEQIDNO72的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“5-氨基戊酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(xi)序列描述SEQIDNO72IleLeuAspValXaaAla15(2)SEQIDNO73的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(xi)序列描述SEQIDNO73IleLeuAspValAlaPro15(2)SEQIDNO74的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO74IleLeuAspValAlaAla15(2)SEQIDNO75的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D-構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO75IleLeuAspValAlaAla15(2)SEQIDNO76的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Orn”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO76IleLeuAspValAlaXaa15(2)SEQIDNO77的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO77IleLeuAspValAlaLys15(2)SEQIDNO78的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1基-乙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CO-”(xi)序列描述SEQIDNO78IleLeuAspValXaaXaa15(2)SEQIDNO79的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1基-乙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CO-”(xi)序列描述SEQIDNO79IleLeuAspValXaaXaa15(2)SEQIDNO80的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1基-丙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-乙酰基-Lys”(xi)序列描述SEQIDNO80IleLeuAspValXaaXaa15(2)SEQIDNO81的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“(4-(2-氨乙基-咪唑-1基)乙酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(xi)序列描述SEQIDNO81IleLeuAspValXaaAla15(2)SEQIDNO82的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N(哌嗪-1-基-乙酰)-Lys，D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO82XaaLeuLeuAspVal15(2)SEQIDNO83的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N(NH2.CH2.CH2.CH2.CO)-Lys，D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO83XaaLeuLeuAspVal15(2)SEQIDNO84的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N(ARG)-D-Lys”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(xi)序列描述SEQIDNO84XaaLeuLeuAspVal15(2)SEQIDNO85的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)環(huán)狀(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“D構(gòu)型”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1基-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO85IleLeuAspValLysXaa15(2)SEQIDNO86的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“4Abu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO86IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO87的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO87IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO88的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)Asp”(xi)序列描述SEQIDNO88IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO89的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO89IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO90的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO90ProLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO91的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO91GlyLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO92的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔-Leu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO92XaaLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO93的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔丁基亮氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO93XaaLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO94的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“Z-Orn”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(xi)序列描述SEQIDNO94XaaIleLeuXaaVal15(2)SEQIDNO95的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“4-氨甲基-苯甲酸”(xi)序列描述SEQIDNO95IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO96的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“(4-(2-氨乙基)-咪唑-1-基)-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO96IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO97的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1基-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO97AlaIleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO98的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“Z-Lys”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(xi)序列描述SEQIDNO98XaaIleLeuXaaVal15(2)SEQIDNO99的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“Z-(2，4-二氨基-丁酸)”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(xi)序列描述SEQIDNO99XaaIleLeuXaaVal15(2)SEQIDNO100的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-Me-Ala”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO100XaaLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO101的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“N-Me-Leu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO101XaaLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO102的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔丁基丙氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO102IleXaaXaaValXaa15(2)SEQIDNO103的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO103IleIleXaaValXaa15(2)SEQIDNO104的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Nle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO104IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO105的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO105IleValXaaValXaa15(2)SEQIDNO106的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“環(huán)己基丙氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO106IleXaaXaaValXaa15(2)SEQIDNO107的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置2(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“叔亮氨酸”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO107IleXaaXaaValXaa15(2)SEQIDNO108的信息(i)序列特征(A)長度7個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Glu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置7(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO108XaaIleLeuXaaValProXaa15(2)SEQIDNO109的信息(i)序列特征(A)長度7個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Glu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置7(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO109XaaIleLeuXaaValProXaa15(2)SEQIDNO110的信息(i)序列特征(A)長度7個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Glu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置7(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO110XaaIleLeuXaaValProXaa15(2)SEQIDNO111的信息(i)序列特征(A)長度7個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Glu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置7(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO111XaaIleLeuXaaValProXaa15(2)SEQIDNO112的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO112IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO113的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.S.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO113IleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO114的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO114IleLeuXaaLeuXaa15(2)SEQIDNO115的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“NH2.CH(CO.NH2).CH2.CH2.CO-”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(xi)序列描述SEQIDNO115XaaIleLeuXaaVal15(2)SEQIDNO116的信息(i)序列特征(A)長度5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO116IleLeuXaaPheXaa15(2)SEQIDNO117的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“-NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH”(xi)序列描述SEQIDNO117AlaIleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO118的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置3(D)其他信息/產(chǎn)物＝“Melle”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置5(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(xi)序列描述SEQIDNO118AlaProIleLeuXaaVal15(2)SEQIDNO119的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“4Abu”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO119XaaIleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO120的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“NH2.CH2.CH2.CH2.CH2.CO-”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO120XaaIleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO121的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“NH2.CH2.CH2.CH2.CH2..CH(Z).CO-”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“哌嗪-1-基-丙酸”(xi)序列描述SEQIDNO121XaaIleLeuXaaValXaa15(2)SEQIDNO122的信息(i)序列特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲學(xué)線性(ii)分子類型肽(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置1(D)其他信息/產(chǎn)物＝“bAla”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置4(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“O-(叔丁基)-Asp”(ix)特點(A)名稱/鍵肽(B)位置6(D)其他信息/產(chǎn)物＝“其它”/注明＝“(4-(2-氨乙基)-咪唑-1-基)-乙酸”(xi)序列描述SEQIDNO122AlaIleLeuXaaValXaa1權(quán)利要求1.式1的環(huán)肽或其鹽其中AA1是選自Ile、Leu或其氨基酸類似物的L或D型氨基酸；AA2是選自Leu或其氨基酸類似物的L型氨基酸；AA3是選自Asp或在側(cè)鏈含羧基或羧基類似基團的Asp氨基酸類似物的L型氨基酸；AA4是選自Val或其氨基酸類似物的L型氨基酸；LINKER代表一連接部分，其連接AA1N端和AA4C端，形成一個含17至30元雜環(huán)的環(huán)肽；此環(huán)肽在本文所述的MOLT-4細胞/纖連蛋白測定中IC50＜20μm或者此環(huán)肽在本文所述的MOLT-4細胞/重組可溶VCAM-1測定中IC50＜100μm，并且；AA4具有通式2結(jié)構(gòu)其中R1是氨基酸側(cè)鏈，及R2和R3對于每個AA1-AA4可以相同或不同，各自獨立地表示H或C1-4烷基。2.根據(jù)權(quán)利要求1的環(huán)肽或其鹽，其中AA1氨基酸類似物選自Val、Pro、Gly、Tic、t-Leu、t-Bu-Ala、Phe、Nle、Met、Arg、Lys、Ala；AA2氨基酸類似物選自Ile、Phe、Val、t-Leu、Nle、Cha和t-Bu-Ala；AA3氨基酸類似物為Glu；AA4氨基酸類似物選自Leu、Ile、Phe、Cha、Nle和Nva。3.根據(jù)權(quán)利要求1的環(huán)肽或其鹽，其中AA1選自Ile和Leu，Ile和Leu還可被N-甲基化；AA2為Leu；AA3為Asp；和AA4為Val。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的環(huán)肽及其鹽，其中LINKER是式4所示基團其中n＝3-5，和R4和R5代表H或；R4代表NH2，可任選被C1-10C(O)-基團取代或；NH2還可通過α-羧基被天然氨基酸取代，氨基酸的N端可任選被C1-10C(O)-基團取代；或NH2還可任選以C1-4烷基單或雙取代；或NH2還可任選以芐基、吡啶基、羧基C2-5烷酰基或氨基-C2-5烷?；〈琑5是H或；R4是H，R5是可任選被C1-4烷基取代的COOH，以得到酯或R5是式-CONR6R7的酰胺，其中R6和R7各自獨立地代表H和C1-4烷基。5.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的環(huán)肽或其鹽，其中LINKER代表圖3示出的式6-44之一。6.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的環(huán)肽或其鹽，其中LINKER表示此處圖3示出的式6、7、8、13、17、18、19、20或21-44之一。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的環(huán)肽或其鹽，其中LINKER表示含至少一個堿性氨基酸的二肽。8.根據(jù)權(quán)利要求7的環(huán)肽或其鹽，其中二肽LINKER中的氨基酸為D-型氨基酸。9.根據(jù)權(quán)利要求8的環(huán)肽或其鹽，其中二肽選自圖13示出的式24-38、43和44之一。10.下面任意一個環(huán)肽或及其鹽，其中方括號中的注釋指其LINKER部分。c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH2)5-CO-)[β-Ala-D-Lys類似物][N-Pyr-D-Lys類似物][N-吡啶基羰基-D-Lys類似物][α-Glu-D-Lys類似物]c(D-Leu-Leu-Asp-Val-β-Ala-Pro)c(D-Leu-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Ala)c(D-Leu-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-Pro)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Orn)c(MeIle-Leu-Asp-Val-β-Ala-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(CHMe2)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(環(huán)己基)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(4-氯芐基)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(Et2)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys(CHMe2)-D-Lys(CHMe2))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg(Pmc)-D-Ala)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-AsP-Val-D-Phe-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg(Pmc))c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Lys)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Arg)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-His)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Orn)c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Orn)；或其鹽。11.一種生產(chǎn)式1環(huán)肽的方法，選自(a)從被保護的式3環(huán)肽脫去1個或多個常規(guī)肽保護基得式1所示的本發(fā)明環(huán)肽，其中式3中Pr1代表AA3側(cè)鏈酸性基團上的保護基，并且可任選地，同時或隨后脫除LINKER上任意其它常規(guī)肽保護基，并且如果需要，還可將如此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為其鹽；(b)使兩個肽單元偶聯(lián)形成酰胺鍵，一個肽含羧酸基團或其活性衍生物，另一肽含氨基，由此得到具有式1所示序列的保護的或未保護的環(huán)肽，如果必要的話，用上述(a)方法脫除保護基，且如果需要時還可將由此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為它的鹽；(c)LINKER中含-S(O)-或-S(O2)-的式1環(huán)肽，氧化前體環(huán)肽LINKER中的-S-或在-S(O2)-情況中另外氧化-S(O)-，得到在其LINKER中含-S(O)-或-S(O2)-的環(huán)肽，如果需要時，將由此獲得的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為它的鹽。12.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-10之一的環(huán)肽和可藥用稀釋劑或載體。13.一種根據(jù)權(quán)利要求10的設(shè)計為至少5天內(nèi)緩釋的用于非腸道給藥的藥物組合物。14.一種用作藥物的權(quán)利要求1-10之一的環(huán)肽。15.一種在需要治療的哺乳動物中抑制VCAM-1和/或纖連蛋白與整合蛋白受體VLA-4間相互作用的方法，其包括給藥所述動物有效量的根據(jù)權(quán)利要求12-13之一的藥物組合物或其可藥用鹽。16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中需治療的哺乳動物患多發(fā)性硬化或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。17.式1的環(huán)肽或其可藥用鹽在制備用于治療由VCAM-1或纖連蛋白與整合蛋白受體VLA-4間相互作用介導(dǎo)的疾病或癥狀的藥物中的應(yīng)用。全文摘要式(Ⅰ)所示的環(huán)肽,其中:AA1是L或D型氨基酸,選自Ile和Leu或其氨基酸類似物;AA2是L型氨基酸,選自Leu或其氨基酸類似物;AA3是L型氨基酸,選自Asp或側(cè)鏈含有羧基的其氨基酸類似物;AA4是L型氨基酸,選自Val或其氨基酸類似物;接頭(LINKER)代表一連接部分,連接AA1的N末端和AA4的C末端,形成一個含17至30元雜環(huán)的環(huán)肽。該環(huán)肽抑制血管細胞粘附分子－1和纖連蛋白與整合蛋白極遲抗原4間的相互作用,能用于如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性硬化的治療中。文檔編號A61P29/02GK1171118SQ9519700公開日1998年1月21日申請日期1995年12月21日優(yōu)先權(quán)日1994年12月24日發(fā)明者A·S·杜塔申請人:曾尼卡有限公司