本發(fā)明專利申請是國際申請?zhí)枮閜ct/us2011/024055，國際申請日為2011年2月8日，進入中國國家階段的申請?zhí)枮椤?01180008612.x”，發(fā)明名稱為“結(jié)合于161p2f10b蛋白的抗體藥物偶聯(lián)物(adc)”的發(fā)明專利申請的分案申請。相關申請的引用本申請書要求于2010年2月8日提交的美國臨時申請?zhí)?1/302,489的權(quán)益。該申請書的內(nèi)容通過引用以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。對于在聯(lián)邦資助研究下完成發(fā)明的權(quán)利聲明不適用。參考通過efs-web提交的序列表出于所有的目的，下面通過usptoefs-web服務器電子提交序列表的全部內(nèi)容(在mpep§1730ii.b.2(a)(c)中批準和提出)通過引用以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。在如下的電子提交的文本文件上對該序列表進行鑒別。文件名產(chǎn)生日期大小(字節(jié))511582006274seqlist2011年1月27日43,630字節(jié)在此所述的發(fā)明涉及結(jié)合稱為161p2f10b蛋白的其抗體藥物偶聯(lián)物(adc)。本發(fā)明進一步涉及用于治療癌癥的預測、預防和治療方法以及組合物。
背景技術(shù)：
：癌癥是在冠狀動脈疾病之后的人類死亡的第二主要原因。全世界每年有數(shù)百萬人死于癌癥。僅在美國，如美國癌癥協(xié)會報告的，每年癌癥造成超過50萬人死亡，每年有超過120萬新診斷的病例。雖然源于心臟病的死亡正在顯著地降低，總體上癌癥引起的死亡不斷升高。在下個世紀的早期，癌癥被預測為死亡的主要原因。在世界范圍內(nèi)，幾種癌癥顯著地成為主要殺手。很少例外地，源于癌的轉(zhuǎn)移性疾病是致命的。此外，甚至對于最初從他們原發(fā)癌癥幸存的那些癌癥病人，通常的經(jīng)驗顯示他們的生活被顯著地改變。許多癌癥病人經(jīng)受由知曉復發(fā)可能性或治療失敗驅(qū)使的嚴重焦慮。許多癌癥病人在治療之后經(jīng)歷身體虛弱。此外，許多癌癥病人經(jīng)歷復發(fā)。當前面鑒定的標志物例如psa、psm、pcta以及161p2f10b有助于診斷和治療前列腺癌的努力時，對于鑒別前列腺和相關癌癥另外的標志物以及治療目標從而進一步改善診斷和治療存在需要。目前在美國腎細胞癌(rcc)是排在第10位癌癥死亡的主要原因。在美國估計每年可以診斷出51,190人患有腎細胞癌并且在2007年約12,890人死于該疾病(美國癌癥協(xié)會)。歷史地看，治療主要集中在腎切除術(shù)，緊接著是非特異性免疫療法，以及有時放射療法(hauke,2006)。非特異性免疫療法包括用細胞因子白介素-2或干擾素-α作為單劑亦或聯(lián)合地進行治療。在手術(shù)切除之后，在1-3年內(nèi)20-30％的病人將發(fā)展出轉(zhuǎn)移性疾病，通常在肺部(motzer等人，2006)。患有轉(zhuǎn)移性疾病病人的生存中值是約13個月(cohenandmcgovern,2005)。從2005年以來，fda已經(jīng)批準六(6)種試劑用于治療晚期腎細胞癌。這些進步包括靶向暗含在腎細胞癌中特定途徑的幾種試劑。這些試劑包括索拉非尼(于2005年12月獲fda批準)、舒尼替尼(于2006年1月獲fda批準)、temsirolimus(于2007年5月獲fda批準)、依維莫司(于2009年3月獲fda批準)、貝伐單抗(與干擾素α聯(lián)合，于2009年8月獲fda批準)以及帕唑帕尼(于2009年10月或fda批準)。然而，雖然在治療方面有了進步，轉(zhuǎn)移性腎細胞癌仍然是不可治愈的并且基于總存活率的優(yōu)點僅temsirolimus獲得批準。另外地，肝細胞癌(即，癌的癌癥)占全部肝癌的80-90％。與女人相比較，這種類型的肝癌更常見地出現(xiàn)在男人體內(nèi)。它通常見于50-60歲年齡人體內(nèi)。通常地，肝癌的治療是大膽的手術(shù)或可以成功地治療小型或慢速生長腫瘤(如果它們被早期診斷的話)的肝移植。然而，很少有病人被早期診斷?；瘜W治療和放射治療通常不是有效的。然而，使用這些治療來使腫瘤收縮使得手術(shù)具有更大的成功可能性?，F(xiàn)在甲苯磺酸索拉非尼可用于患有肝癌的病人。肝癌病人的預后通常是較差的，因為僅10-20％肝細胞癌可以使用手術(shù)去除。因此，對于開發(fā)用于治療肝癌的試劑存在需要。單克隆抗體(mab)的治療實用性得以實現(xiàn)(g.kohlerandc.milstein,nature256:495-497(1975))。現(xiàn)在單克隆抗體已經(jīng)批準作為移植、癌、傳染病、心血管疾病以及炎癥中的治療。不同的同種型具有不同的效應子功能。功能上的這類差異反映在不同免疫球蛋白同種型截然不同的3維結(jié)構(gòu)中(p.m.alzari,etal.,annualrev.immunol.,6:555-580(1988))。因為小鼠可方便地用于免疫并且將大多數(shù)人類抗原識別為外來物，抗具有治療潛力的人類靶物質(zhì)的mab典型地具有鼠類起源。然而，作為人類治療劑鼠類mab具有固有的缺點。因為與人類抗體相比較，在人體中mab具有更短的循環(huán)半衰期，它們需要更頻繁地給藥。更關鍵地，將鼠類抗體反復施用到人類免疫系統(tǒng)中通過將小鼠蛋白識別為外來物并且產(chǎn)生人抗小鼠抗體(hama)應答引起人類免疫系統(tǒng)產(chǎn)生應答。這類hama應答可以導致變態(tài)反應以及從系統(tǒng)中快速清除鼠類抗體由此通過無用的鼠類抗體給予治療。為了避免這類影響，已經(jīng)嘗試了在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生人免疫系統(tǒng)的多種嘗試。最初的嘗試希望產(chǎn)生能夠用具有人序列的抗體對抗原進行應答的轉(zhuǎn)基因小鼠(參見bruggemann,etal.,proc.nat’l.acad.sci.usa86:6709-6713(1989))，但是受通過可用于克隆載體可以穩(wěn)定地維持的dna數(shù)量限制。酵母人工染色體(yac)克隆載體的使用引導了將人ig基因座較大種系片段引入到轉(zhuǎn)基因哺乳動物體內(nèi)的途徑?；旧系兀褂脃ac將在人類基因組和人類恒定區(qū)中找到的以相同間隔安排的大部分人類v、d、和j區(qū)基因引入到小鼠體內(nèi)。一種這樣的轉(zhuǎn)基因小鼠品系稱為小鼠，并且可從amgenfremont公司(fremontca)商購。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了結(jié)合到161p2f10b蛋白上的抗體藥物偶聯(lián)物(adc)。在一些實施方案中，本發(fā)明包括與治療劑偶聯(lián)的完全人類抗體。本發(fā)明進一步提供了不同的免疫原性或治療性組合物，例如抗體藥物偶聯(lián)物，以及用于治療癌癥(例如在表i中列出的組織癌癥)的策略。本發(fā)明涉及：[1]包括特異性地結(jié)合于包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段的一種抗體藥物偶聯(lián)物，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的vh區(qū)，從20至142，以及seqidno:8的vl區(qū)，從20至127并且其中所述抗體偶聯(lián)到單甲基auristatinf上(mmaf)。[2][1]的抗體藥物偶聯(lián)物，其中該抗原結(jié)合片段是一種fab、f(ab′)2或fv片段。[3][1]的抗體藥物偶聯(lián)物，其中該抗體是一種完全人類抗體。[4][1]的抗體藥物偶聯(lián)物，它是重組地生產(chǎn)的。[5]處于人類單位劑量形式的包括[1]的抗體藥物偶聯(lián)物的一種藥物組合物。[6][5]的藥物組合物，其中該組合物是用于癌癥治療。[7][6]的藥物組合物，其中該癌癥是腎癌或肝癌。[8]抑制受試者體內(nèi)癌細胞生長的一種方法，包括：將[1]的抗體藥物偶聯(lián)物施用到所述受試者體內(nèi)。[9]將細胞毒性劑或診斷劑遞送到細胞中的一種方法，包括：提供偶聯(lián)到特異性地結(jié)合于包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段上的mmaf，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的vh區(qū)，從20至142，以及seqidno:8的vl區(qū)，從20至127，從而形成一種抗體藥物偶聯(lián)物；以及將該細胞暴露于該抗體藥物或片段藥物偶聯(lián)物。[10]一種用于治療哺乳動物體內(nèi)腫瘤的方法，包括用有效數(shù)量的[1]的抗體藥物偶聯(lián)物來治療該哺乳動物。[11]一種用于降低哺乳動物體內(nèi)腫瘤生長的方法，包括用有效數(shù)量的[1]的抗體藥物偶聯(lián)物與輻射的組合來治療該哺乳動物。[12]用于降低哺乳動物體內(nèi)腫瘤生長的一種方法，包括用有效數(shù)量的[1]的抗體藥物偶聯(lián)物與一種化學治療劑的組合來治療該哺乳動物。[13]用于降低哺乳動物體內(nèi)腫瘤生長的一種方法，包括用有效數(shù)量的[1]的一種抗體藥物偶聯(lián)物和一種藥物或生物活性治療的組合來治療該哺乳動物。[14]用于治療哺乳動物體內(nèi)癌癥的一種方法，包括用有效數(shù)量的[1]的一種抗體藥物偶聯(lián)物和一種化學治療劑的組合來治療該哺乳動物。[15]一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，其中該adc具有式l-(lu-d)p，其中：(a)l是包括特異性地結(jié)合到包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白上的一種抗體或其抗原結(jié)合片段的抗體，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的vh區(qū)，從20至142，以及seqidno:8的vl區(qū)，從20至127；(b)lu是一種接頭；(c)d是要求藥物部分，其中該藥物是單甲基auristatinf(mmaf)；(d)p是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。[16]一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，其中該adc具有下式，其中ab-s是包括特異性地結(jié)合到包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白上的一種抗體或其抗原結(jié)合片段的抗體，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的vh區(qū)，從20至142以及seqidno:8的vl區(qū)，從20至127；p是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。[17]包括特異性地結(jié)合于包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白的抗體的一種抗體藥物偶聯(lián)物，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的重鏈，從20至468，以及seqidno:8的輕鏈，從20至233，并且其中所述抗體偶聯(lián)到單甲基auristatinf(mmaf)上。[18]一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，其中該adc具有式l-(lu-d)p，其中：(a)l是包括特異性地結(jié)合到包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白上的一種抗體的抗體，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的重鏈，從20至468以及seqidno:8的輕鏈，從20至233；(b)lu是一種接頭；(c)d是一種藥物部分，其中該藥物是單甲基auristatinf(mmaf)；(d)p是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。[19]一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，其中該adc具有下式，其中ab-s是包括特異性地結(jié)合到包括seqidno:2的氨基酸序列的161p2f10b蛋白上的一種抗體的抗體，并且其中該抗體包括以下氨基酸序列：seqidno:7的重鏈，從20至468以及seqidno:8的輕鏈，從20至233；p是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。附圖說明圖1.161p2f10b的cdna和氨基酸序列示于圖1中。開放閱讀框從核酸44-271延伸，包括終止密碼子。圖2.161p2f10b抗體的核酸和氨基酸序列。圖2a.h16-7.8重鏈的cdna和氨基酸序列。加下劃線的是前導序列并且加雙下劃線的是重鏈可變區(qū)。虛下劃線顯示人igg2恒定區(qū)。圖2b.h16-7.8輕鏈的cdna和氨基酸序列。加下劃線的是前導序列并且加雙下劃線的是輕鏈可變區(qū)。虛線下劃線顯示人igκ恒定區(qū)。圖3.161p2f10b抗體的氨基酸序列。圖3a.h16-7.8重鏈的氨基酸序列。加下劃線的是前導序列并且加雙下劃線的是重鏈可變區(qū)。虛線下劃線顯示人igg2恒定區(qū)。圖3b.h16-7.8輕鏈的氨基酸序列。加下劃線的是前導序列并且加雙下劃線的是輕鏈可變區(qū)。虛線下劃線顯示人igκ恒定區(qū)。圖4.h16-7.8抗體與人類種系的比對。圖4a.h16-7.8重鏈與人類種系vh4-31/d5-12/jh6的比對圖4b.h16-7.8輕鏈與人類種系a26/jk1的比對圖5.在cho細胞中h16-7.8的重組表達。將h16-7.8重鏈和輕鏈序列克隆到表達載體中。將這些載體轉(zhuǎn)染到cho細胞中。用來自雜交瘤亦或來自cho細胞的h16-7.8將3t3-對照和3t3-161p2f10b細胞染色。通過流式細胞術(shù)來檢測結(jié)合。結(jié)果顯示在cho細胞中重組地表達的h16-7.8被分泌并且特異性地結(jié)合到細胞表面161p2f10b上。圖6.h16-7.8和h16-7.8mcmmaf的細胞結(jié)合和親合性。針對與在ku812細胞上內(nèi)源性地表達的161p2f10b的結(jié)合親合性對h16-7.8和h16-7.8mcmmaf進行測試。簡言之，在4℃下在160nm至0.0001nm的終濃度下使h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的十一(11)個稀釋物與ku812細胞(50,000個細胞/孔)一起孵化過夜。在孵化結(jié)束時，在4℃將細胞洗滌并且與抗-higg-pe檢測抗體一起孵化45分鐘。在洗滌未結(jié)合的檢測抗體之后，通過facs對這些細胞進行分析。獲得平均熒光強度(mfi)值(參見表iv)。將mfi值輸入到graphpadprisim軟件中并且使用y＝bmax*x/(kd+x)的單位點結(jié)合(雙曲線)等式進行分析從而產(chǎn)生h16-7.8或h16-7.8mcmmaf飽和曲線(示于圖6中)。bmax是h16-7.8或h16-7.8mcmmaf最大地結(jié)合到161p2f10b上的mfi值；kd是h16-7.8或h16-7.8mcmmaf結(jié)合親合性，它是達到半最大結(jié)合所需要的h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的濃度。在ku812細胞表面上內(nèi)源性地表達的161p2f10b上h16-7.8和h16-7.8mcmmaf計算的親和性(kd)對應地是0.06nm和0.19nm。圖7.將h16-7.8和h16-7.8mcmmaf結(jié)合到腎癌細胞上。用10μg/ml天然h16-7.8、h16-7.8mcmmaf、或同種型對照人igg2對人ugk-3細胞(病人衍生的透明細胞腎癌)和rxf-393細胞(透明細胞腎癌)進行染色，并且通過facs進行評估。圖7中(左圖)的結(jié)果證明用h16-7.8對兩種不同腎腫瘤細胞的強染色(灰色線)，但是使用對照mab則沒有(填充的直方圖)。右側(cè)圖證明用h16-7.8mcmmaf對相同腎腫瘤細胞類似的強染色(灰色線)(圖7，右圖)。這些結(jié)果顯示h16-7.8和h16-7.8mcmmaf兩者結(jié)合在人癌細胞表面上表達的天然161p2f10b抗原。偶聯(lián)天然h16-7.8從而產(chǎn)生h16-7.8mcmmaf不改變它細胞表面結(jié)合到在人癌細胞上表達的天然161p2f10b抗原上。圖8.通過h16-7.8mcmmaf得到的細胞毒性。在第0天將2000個有活力的ku812細胞一式三份地鋪板并且允許恢復過夜。第二天，添加h16-7.8mcmmaf或與mcmmaf結(jié)合的對照mab的不同批次的1:4連續(xù)稀釋物從而產(chǎn)生終濃度。這些細胞允許孵化六(6)天，這時將20μl阿爾瑪藍添加到各孔中。將這些孔板孵化另外四(4)小時并且使用540nm激發(fā)波長和620nm發(fā)射波長在熒光酶標儀上讀取熒光強度。這些結(jié)果顯示h16-7.8mcmmaf的兩個批次都有效地抑制ku812細胞的增殖。針對批次(1)和批次(2)確定ic50對應地是0.2nm和0.1nm。未結(jié)合ku812細胞的完全人類對照mab與mcmmaf相偶聯(lián)從而產(chǎn)生3.9(+/-0.2)的dar。對照adc(對照mcf)未抑制ku812細胞增殖，進一步證明細胞毒性的特異性。因此，這些結(jié)果表明h16-7.8mcmmaf可以選擇性地將細胞毒性藥物遞送到表達161p2f10b的細胞中，導致將它們殺死。圖9.在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌異種移植物ug-k3中h16-7.8mcmmaf的療效。在這個實驗中，通過在scid小鼠體內(nèi)連續(xù)地傳代來維持病人衍生的人腎癌異種移植物ug-k3。無菌地收獲大塊腫瘤并且切碎成小塊。使用liberaseblendzyme(rocheappliedscience,indianapolis,in)將這些腫瘤塊酶消化成單細胞懸浮液。將1.5×106個細胞注射到個體scid小鼠的側(cè)腹中并且允許腫瘤未處理地生長直至它們達到100mm3的大致體積。將動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組、h16-7.8對照以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注在第0天以10mg/kg劑量將h16-7.8mcmmaf和h16-7.8給藥一次。所施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl的劑量施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量對腫瘤生長進行監(jiān)測直至研究結(jié)束。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。當腫瘤達到約1000mm3時，將對照組動物人道地安樂處死。在處死之前對h16-7.8mcmmaf治療組動物進行監(jiān)測持續(xù)另外兩周。當兩個對照組的數(shù)據(jù)可供使用時在最后時間點使用具有α＝0.05的克魯斯凱-沃利斯檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果證明在所檢查的所有劑量和方案下用h16-7.8mcmmaf治療ug-k3腎透明細胞異種移植腫瘤導致對scid小鼠體內(nèi)腫瘤生長的顯著抑制。圖10.通過h16-7.8mcmmaf實現(xiàn)建立的正位ug-k3異種移植物的生長抑制。使用病人衍生的ug-k3腫瘤異種移植物對h16-7.8mcmmaf抑制建立的正位生長的腎腫瘤生長的能力進行評估。簡言之，的第0天對大塊的ug-k3腫瘤進行酶消化并且以手術(shù)方式將150萬活細胞植入到雄性scid小鼠的腎中。這些腫瘤允許生長7天，這時將動物隨機分成4個不同治療組(n＝10/組)。隨機分到組a的動物接受5mpk的對照adc。組b接受3mg/kg的h16-7.8mcmmaf并且組c接受5mg/kg的h16-7.8mcmmaf，每4天進行給藥持續(xù)共4個劑量。組d接受10mg/kg的h16-7.8mcmmaf一次。在研究結(jié)束時(第41天)，將動物處死并且在電子天平上對右腎和左腎進行稱重。通過從攜帶腫瘤的右腎重量中減去無腫瘤對側(cè)腎的重量來確定在圖上繪制的腫瘤重量。這些結(jié)果證明在所檢查的所有劑量和方案下用h16-7.8mcmmaf治療ug-k3腎透明細胞異種移植腫瘤導致腫瘤生長的顯著抑制。在所有h16-7.8mcmmaf治療組中腫瘤重量(b、c、以及d)比對照治療組中腫瘤重量少1％。這些差異是高度統(tǒng)計顯著的(p<0.0001,anova)。圖11.在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌異種移植物rxf-393中h16-7.8mcmmaf的療效。在這個實驗中，將人腎癌細胞rxf-393(0.5×106個細胞/小鼠)注入個體小鼠的側(cè)腹中并且這些腫瘤允許未處理地生長直至它們達到100mm3的大致體積。然后將動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組、h16-7.8治療組以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注以10mg/kg的劑量每周一次地施用h16-7.8mcmmaf和h16-7.8持續(xù)共兩個劑量。所施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl的劑量施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量對腫瘤生長進行監(jiān)測直至研究結(jié)束。將腫瘤體積計算為寬度×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。當腫瘤達到約1000mm3時，將對照組動物人道地安樂處死。在處死之前對h16-7.8mcmmaf治療組動物進行監(jiān)測持續(xù)另外兩周。這些結(jié)果證明在所檢查的所有劑量和方案下用h16-7.8mcmmaf治療rfx-393人腎癌異種移植腫瘤導致scid小鼠體內(nèi)腫瘤生長的顯著抑制。當兩個對照組中的數(shù)據(jù)可供使用時在最后時間點使用具有α＝0.05的克魯斯凱-沃利斯檢驗進行統(tǒng)計分析圖12.在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌skrc-01中與h16-7.8mcmmaf相比較h16-7.8的療效研究。將人腎癌細胞skrc-01(0.8×106個細胞/小鼠)注射到個體小鼠的側(cè)腹中。這些腫瘤允許未處理地生長直至它們達到100mm3的大致體積。在第0天當腫瘤達到100mm3時，將動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組、h16-7.8治療組以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注每四天以4mg/kg的劑量施用h16-7.8mcmmaf和h16-7.8持續(xù)共四個劑量。所施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl的劑量施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量來監(jiān)測腫瘤生長。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小的尺寸并且長度是最大的。這些結(jié)果顯示adch16-7.8mcmmaf顯著地抑制了skrc-01腫瘤形成的生長而裸mabh16-7.8沒有影響。因此，與裸抗體h16-7.8相比較，adch16-7.8mcmmaf具有顯著地更突出的影響。圖13.在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的ug-k3中與其他161p2f10b抗體藥物偶聯(lián)物(adc)相比較h16-7.8mcmmaf的療效研究。在另一個實驗中，將人腎癌細胞ug-k3(1.5×106個細胞/小鼠)注射到個體小鼠的側(cè)腹中。這些腫瘤允許未處理地生長直至它們達到100mm3的大致體積。在第0天當腫瘤達到100mm3時，將動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf、h16-7.8vcmmae、以及h16-1.11mcmmaf、以及h16-1.11vcmmae、pbs對照、以及對照mab-vcmmae治療組中。在第0天以10mg/kg劑量將所有抗體藥物偶聯(lián)物(adc)施用一次。所施用的每種adc的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μ/l的劑量施用pbs對照。每3至4天使用測徑器測量對腫瘤生長進行監(jiān)測。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。這些結(jié)果顯示這些adch16-7.8vcmmae和h16-1.11vcmmae未抑制腫瘤形成生長。另外地，在第一個三十(30)天期間h16-7.8mcmmaf和h16-1.11mcmmaf兩者都顯著地抑制ug-k3腫瘤形成的生長。在第三十(30)天之后，當與h16-1.11mcmmaf相比較時，h16-7.8mcmmaf具有顯著地更突出的影響。圖14.h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的肽圖。用二硫蘇糖醇對得到的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8進行處理用來還原二硫鍵，緊接著將得到的游離半胱氨酸烷基化。在這個步驟中使用胍來確保該蛋白完全變性。在透析以便去除胍之后，用特異性蛋白內(nèi)切酶lys-c對樣品進行消化。lys-c切割賴氨酸殘基c端側(cè)上的肽鍵。通過結(jié)合質(zhì)譜法的反相層析法對得到的肽進行分析。在h16-7.8mcmmaf與h16-7.8之間對峰的反相保留時間和觀察到的質(zhì)核比進行比較。使用偶聯(lián)到watersq-tofp質(zhì)譜儀上的watersacquityuplc進行l(wèi)c-ms(液相層析法-質(zhì)譜法)分析。將消化的樣品應用到y(tǒng)mcc18柱上并且用包含三氟乙酸的乙腈梯度進行洗脫。這些結(jié)果顯示與天然抗體相比較在偶聯(lián)的抗體中通過星號指示的峰強度是減少的。用箭頭標記的峰表示在偶聯(lián)的抗體肽圖上出現(xiàn)的新峰。尤其地，用星號亦或用箭頭標記的峰被認為對應地是指定用于偶聯(lián)的肽以及得到的偶聯(lián)肽。圖15.(*)峰的質(zhì)譜圖。這些結(jié)果顯示在圖14中用星號標記的峰的質(zhì)譜圖的一部分。在偶聯(lián)期間改變的信號的質(zhì)量值是通過“加號”符號指示的。具有大致m/z970.4的這種肽(+3電荷狀態(tài))被鑒定為c225-k250，它是源于重鏈的鉸鏈區(qū)并且包含預期的結(jié)合位點。圖16.在619.4m/z下在h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的肽圖上mse的提取離子層析圖(xic)。為了鑒別這些新出現(xiàn)的峰(這些峰被認為是上面圖14中的偶聯(lián)肽)，使用升高能量(mse)數(shù)據(jù)采集技術(shù)來進行l(wèi)c-ms分析。該圖顯示使用m/z619.4針對h16-7.8mcmmaf和h16-7.8肽圖的提取離子層析圖(xic)。該離子相應于藥物部分的碎片離子。對于在圖14中用箭頭標記的峰而言在619.4下在xic中觀察到的峰幾乎是完全相同的。此外，在天然抗體的層析圖中未檢測出這類峰。這些觀察結(jié)果表明在m/z619.4下在xic中檢測的峰明顯地是藥物偶聯(lián)肽并且是通過它完整的質(zhì)量值來鑒別的。該結(jié)果匯總于表v中。這些結(jié)果表明在偶聯(lián)物的情況下，主要的肽是在重鏈的鉸鏈區(qū)上結(jié)合到2種藥物上的那些。這些數(shù)據(jù)與通過其他正交例如dar分析獲得的數(shù)據(jù)相一致。圖17.示出了脫糖基化的h16-7.8mcmmafadc的質(zhì)量圖譜的實例譜圖。通過電噴射離子化作用飛行時間(esi-tof)質(zhì)譜術(shù)來確定脫糖基化的h16-7.8mcmmaf的完全質(zhì)量。測試樣品通過250mm磷酸鈉緩沖液，ph7.5進行稀釋，并且然后在37℃下與糖肽酶f一起孵化過夜。將樣品注射到plrptm柱(variantechnology)上，在90℃下平衡，并且用乙腈/水梯度進行洗脫。通過偶聯(lián)到waterssynapt質(zhì)譜儀(waters)上的acquityuplc系統(tǒng)對樣品峰進行分析，并且通過maxent1軟件從原始數(shù)據(jù)對質(zhì)量進行重構(gòu)。顯示了針對脫糖基化的h16-7.8mcmmaf的一個實例的質(zhì)譜譜圖。主要的藥物偶聯(lián)的抗體是一種加載4-藥物種類。包括在h16-7.8mcmmaf中富集未結(jié)合抗體的這種觀察是與通過其他正交方法(例如，通過rp-hplc得到dar，肽譜、以及hic測定法)獲得的結(jié)果相一致的。圖18.h16-7.8mcmmaf的藥物抗體比率(dar)譜圖。進行dar分析用于定量hplc確定每個輕鏈和重鏈中藥物負荷的相對數(shù)量。使用plrp-s分析柱，2.1mm×50mm，使用由2.0％甲酸組成的流動相a以及由2.0％甲酸加上90％乙腈組成的流動相b來進行dar分析。顯示了針對h16-7.8mcmmaf的代表性的dar譜圖。dar值是4.0。使用本方法的相同hplc條件對樣品進行l(wèi)c-ms分析用來鑒別觀察到的峰。結(jié)果匯總于表vi中。通過lc-ms正交地證實了在該方法鑒定期間獲得的dar結(jié)果的峰識別。具體實施方式章節(jié)概要i.)定義ii.)161p2f10b抗體iii.)通常的抗體藥物偶聯(lián)物iii(a).auristatin和dolostatiniv.)結(jié)合161p2f10b的抗體藥物偶聯(lián)物v.)接頭單元vi.)延伸物單元vii.)氨基酸單元viii.)間隔物單元ix.)藥物單元x.)藥物加載xi.)確定adc的細胞毒性作用的方法xii.)一種或多種癌癥的治療xiii.)作為基于抗體治療靶的161p2f10bxiv.)161p2f10badc混合物xv.)聯(lián)合治療xvi.)制造試劑盒/物品i.)定義：除非另外定義，在此使用的所有技術(shù)術(shù)語、注釋以及其他科學術(shù)語或科學術(shù)語是旨在具有本發(fā)明涉及領域普通技術(shù)人員所通常理解的含義。在一些情況中，為了清楚和/或為了便于引用在此定義了具有通常理解含義的術(shù)語，并且在此包括這類定義不必解釋成表示與本領域通常理解的具有顯著差異。在此說明或引用的許多技術(shù)和步驟被本領域普通技術(shù)人員良好地理解并且使用常規(guī)方法(例如在sambrook,etal.,molecularcloning:alaboratorymanual第2版(1989)coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y中說明的廣泛使用的分子克隆方法)一般性地使用。當適當時，除非另外說明，通常地根據(jù)制造商限定的實驗方案和/或參數(shù)來執(zhí)行涉及使用可商購的試劑盒和試劑的步驟。當在此使用商品名稱時，除非上下文另外指出，對商品名稱的引用還涉及該商品名稱產(chǎn)品的產(chǎn)品配方、屬類藥物、以及一種或多種活性藥物成分。術(shù)語“晚期癌癥”、“局部晚期癌癥”、“晚期疾病”以及“局部晚期疾病”是指延伸穿過相關組織被膜的癌癥，并且是指包括在美國泌尿?qū)W會(aua)系統(tǒng)下的階段c疾病，在whitmore-jewett系統(tǒng)下的階段c1-c2疾病，以及在tnm(腫瘤、結(jié)節(jié)、轉(zhuǎn)移)系統(tǒng)下的階段t3-t4和n+疾病。通常地，對于患有疾病晚期疾病的病人不推薦手術(shù)治療，并且與具有臨床局部化(器官限制)癌的病人相比較這些病人具有顯著地更少有利的結(jié)果?？s寫“afp”是指二甲基纈氨酸-纈氨酸-多拉異亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸-對苯二胺(參見下文式xvi)?？s寫“mmae”是指單甲基auristatine(參見下文式xi)。縮寫“aeb”是指通過使auristatine與對乙?；郊姿徇M行反應所生產(chǎn)的一種酯(參見下文式xx)?？s寫“aevb”是指通過使auristatine與苯甲酰基纈草酸進行反應所生產(chǎn)的一種酯(參見下文式xxi)?？s寫“mmaf”是指多拉纈氨酸-纈氨酸-多拉異亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸(參見下文式xviv)。除外另外說明，術(shù)語“烷基”是指具有從約1至約20個碳原子(以及其中碳原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)的一種飽和的直鏈或支鏈烴，其中從約1至約8個碳原子是優(yōu)選的。烷基基團的實例是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、以及3,3-二甲基-2-丁基。烷基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以用一個或多個基團，優(yōu)選地1至3個基團(以及選自鹵素的任何另外的取代基)可選地取代，包括但不限于-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、＝o、-n3、-nh2、-nh(r’)、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基，并且其中所述的-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、以及-c2-c8炔基基團可以用一個或多個基團可選地進一步取代，這些基團包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基。除非另外說明，術(shù)語“烯基”和“炔基”是指具有從約2至約20個碳原子(以及其中碳原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)的直鏈或支鏈的碳鏈，其中從約2至約8個碳原子是優(yōu)選的。烯基鏈在該鏈中具有至少一個雙鍵并且炔基鏈在該鏈中具有至少一個三鍵。烯基基團的實例包括但不限于亞乙基或乙烯基、烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、以及-2,3-二甲基-2-丁烯基。炔基基團的實例包括但不限于炔性的、炔丙基、乙炔基、丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、以及-3-甲基-1丁炔基。烯基和炔基基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，可以用一個或多個基團，優(yōu)選地1至3個基團(以及選自鹵素的任何另外的取代基)可選地取代，這些基團包括但不限于-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、＝o、-n3、-nh2、-nh(r')、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基，并且其中所述的-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、以及-c2-c8炔基基團可以用一個或多個取代基可選地進一步取代，這些基團包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基。除非另外說明，術(shù)語“亞烷基”是指具有從約1至約20個碳原子的(以及其中碳原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)一種飽和的支鏈或直鏈烴基，其中從1至約8個碳原子在優(yōu)選的并且具有通過從母體烷的同一個或兩個不同碳原子中去除兩個氫原子而得到的兩個單價基團中心。典型的亞烷基包括但不限于亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基、亞己基、亞庚基、亞辛基、亞壬基、亞癸基、1,4-環(huán)亞己基等。亞烷基基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，可以用一個或多個基團，優(yōu)選地1至3個基團(以及選自鹵素的任何另外的取代基)可選地取代，這些基團包括但不限于-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、＝o、-n3、-nh2、-nh(r’)、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基，并且其中所述的-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、以及-c2-c8炔基基團可以用一個或多個取代基進一步可選地取代，這些取代基包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基。除非另外說明，術(shù)語“亞烯基”是指包括至少一個碳-碳雙鍵的一種任選取代的亞烷基基團。示例性的亞烯基基團包括例如亞乙烯基(-ch＝ch-)和亞丙烯基(-ch＝chch2-)。除非另外說明，術(shù)語“亞炔基”是指包含至少一個碳-碳三鍵的一種任選取代的亞烷基基團。示例性的亞炔基基團包括例如亞乙炔(-c≡c-)、炔丙基(-ch2c≡c-)、以及4-戊炔基(-ch2ch2ch2c≡ch-)。除非另外說明，術(shù)語“芳基”是指通過從母體芳環(huán)系統(tǒng)的一個單個碳原子中去除一個氫原子而得到的具有6-20個碳原子(以及其中碳原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)的一種單價芳香族烴基。在示例性結(jié)構(gòu)中一些芳基基團表示為“ar”。典型的芳基基團包括但不限于從苯、取代的苯、苯基、萘、蒽、聯(lián)苯等衍生的基團。芳基基團，無論單獨地還是作為另一個具體的一部分，可以用一個或多個，優(yōu)選地1至5個，或甚至1至2個基團可選地取代，這些基團包括但不限于-鹵素、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、-no2、-n3、-nh2、-nh(r’)、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基并且其中所述的-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、以及-芳基基團可以用一個或多個取代基進一步可選地取代，這些取代基包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基。除非另外說明，術(shù)語“亞芳基”是指一種任選取代的芳基基團，該芳基基團是二價的(即，通過從母體芳環(huán)系統(tǒng)的同一個或兩個不同碳原子中去除兩個氫原子而衍生的)并且可以處于如下面結(jié)構(gòu)中所示的鄰、間、或?qū)?gòu)象(使用苯基作為示例性芳基基團)。典型的“-(c1-c8亞烷基)芳基”、“-(c2-c8亞烯基)芳基”、以及“-(c2-c8亞炔基)芳基”基團包括但不限于芐基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘甲基、2-萘基乙烷-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并芐基、2-萘并苯基乙烷-1-基等。除非另外說明，術(shù)語“雜環(huán)”是指具有從3至14個環(huán)原子的(也稱為環(huán)元件)(以及其中碳原子和雜原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)一種單環(huán)、二環(huán)、或多環(huán)的環(huán)系統(tǒng)，其中在至少一個環(huán)中至少一個環(huán)原子是選自n、o、p、或s的一種雜原子。該雜環(huán)可以具有從1至4個獨立地選自n、o、p、或s的環(huán)雜原子?？梢詫㈦s環(huán)中的一個或多個n、c、或s原子氧化。單環(huán)雜環(huán)優(yōu)選地具有3至7個環(huán)元件(例如，2至6個碳原子以及1至3個獨立地選自n、o、p、或s的雜原子)，并且二環(huán)雜環(huán)優(yōu)選地具有5至10個環(huán)元件(例如，4至9個碳原子以及1至3個獨立地選自n、o、p、或s的雜原子)。包括該雜原子的環(huán)可以是芳香族的或非芳香族的。除非另外說明，該雜環(huán)在任何雜原子或?qū)е路€(wěn)定結(jié)構(gòu)的碳原子處附連到它的懸垂基團上。這些雜環(huán)在paquette,“principlesofmodernheterocyclicchemistry”(w.a.benjamin,newyork,1968),particularlychapters1,3,4,6,7,and9；“thechemistryofheterocycliccompounds,aseriesofmonographs”(johnwiley&sons,newyork,1950topresent),特別是volumes13,14,16,19,and28；andj.am.chem.soc.82:5566(1960)中進行說明“雜環(huán)”基團的實例通過舉例方式但非限制地包括吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、二氫吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙-四氫呋喃基、四氫吡喃基、雙-四氫吡喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、氮雜環(huán)辛基、三嗪基、6h-1,2,5-噻二嗪基、2h,6h-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、氧雜蒽基、吩惡噻、2h-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3h-吲哚基、1h-吲唑基、嘌呤基、4h-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹噁啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4h-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋吖基、吩噁嗪基、異色滿基、色滿基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、噁唑烷基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、氧吲哚基、苯并噁唑啉基、以及靛紅?；?yōu)選的“雜環(huán)”基團包括但不限于苯并呋喃基、苯并苯硫基、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、苯硫基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基以及四唑基。雜環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，可以用一個或多個基團，優(yōu)選地1至2個基團可選地取代，這些基團包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、-n3、-nh2、-nh(r’)、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’的獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基并且其中所述-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、以及-芳基基團可以用一個或多個取代基進一步可選地取代，這些取代基包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”的獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或芳基。作為舉例但非限制地，碳結(jié)合雜環(huán)可以結(jié)合在下面位置處：吡啶的位置2、3、4、5、或6；噠嗪的位置3、4、5、或6；嘧啶的位置2、4、5、或6；吡嗪的位置2、3、5、或6；呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯的位置2、3、4、或5；噁唑、咪唑或噻唑的位置2、4、或5；異噁唑、吡唑、或異噻唑的位置3、4、或5；氮丙啶的位置2或3；吖丁啶的位置2、3、或4；喹啉的位置2、3、4、5、6、7、或8；或異喹啉的位置1、3、4、5、6、7、或8。又更典型地，碳結(jié)合的雜化包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、或5-噻唑基。作為舉例并且非限制地，氮結(jié)合的雜化可以結(jié)合在氮丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、或1h-吲唑的位置1；異吲哚或異二氫吲哚的位置2；嗎啉的位置4；以及咔唑或β-咔啉的位置9。又更典型地，氮結(jié)合的雜化包括1-氮雜環(huán)丙基、1-氮雜環(huán)丁基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基、以及1-哌啶基。除非另外說明，術(shù)語“碳環(huán)”是指具有從3至14個環(huán)原子(以及其中碳原子的范圍和具體數(shù)字的所有組合和亞組合)一種飽和或不飽和的非芳香族單環(huán)、二環(huán)、或多環(huán)的環(huán)系統(tǒng)，其中這些環(huán)原子都是碳原子。這些單環(huán)碳環(huán)優(yōu)選地具有3至6個環(huán)原子，又更優(yōu)選5或6個環(huán)原子。二環(huán)碳環(huán)優(yōu)選地具有例如安排為二環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)的7至12個環(huán)原子，或安排為二環(huán)[5,6]或[6,6]系統(tǒng)的9或10個環(huán)原子。術(shù)語“碳環(huán)”包括例如稠合到芳環(huán)上的單環(huán)碳環(huán)(例如，稠合到苯環(huán)上的單環(huán)碳環(huán))。碳環(huán)優(yōu)選地具有3至8個碳環(huán)原子。這些碳環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，可以用例如一個或多個基團，優(yōu)選地1或2個基團(以及選自鹵素的任何另外的取代基)可選地取代，這些基團包括但不限于-鹵素、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r’、-oc(o)r’、-c(o)or’、-c(o)nh2、-c(o)nhr’、-c(o)n(r’)2、-nhc(o)r’、-sr’、-so3r’、-s(o)2r’、-s(o)r’、-oh、＝o、-n3、-nh2、-nh(r’)、-n(r’)2以及-cn，其中每個r’是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基并且其中所述的-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、以及-芳基基團可以用一個或多個取代基進一步可選地取代，這些取代基包括但不限于-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-鹵素、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c2-c8烯基)、-o-(c2-c8炔基)、-芳基、-c(o)r”、-oc(o)r”、-c(o)or”、-c(o)nh2、-c(o)nhr”、-c(o)n(r”)2、-nhc(o)r”、-sr”、-so3r”、-s(o)2r”、-s(o)r”、-oh、-n3、-nh2、-nh(r”)、-n(r”)2以及-cn，其中每個r”是獨立地選自-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、或-芳基。單環(huán)碳環(huán)取代基的實例包括-環(huán)丙基、-環(huán)丁基、-環(huán)戊基、-1-環(huán)戊-1-烯基、-1-環(huán)戊-2-烯基、-1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、-1-環(huán)己-1-烯基、-1-環(huán)己-2-烯基、-1-環(huán)己-3-烯基、-環(huán)庚基、-環(huán)辛基、-1,3-環(huán)己二烯基、-1,4-環(huán)己二烯基、-1,3-環(huán)庚二烯基、-1,3,5-環(huán)更三烯基、以及–環(huán)辛二烯基?！疤辑h(huán)”，無論單獨地還是作為另一個基團的部分使用，是指如上面定義的一種任選取代的碳環(huán)基團，該基團是二價的(即，通過從母體碳環(huán)系統(tǒng)的同一個或兩個不同碳原子中去除兩個氫原子而衍生的)。除非上下文另外指出，短線(-)指示附連到懸垂分子上的點。因此，術(shù)語“-(c1-c8亞烷基)芳基”或“-c1-c8亞烷基(芳基)”是指如在此定義的一種c1-c8亞烷基，其中該亞烷基在該亞烷基碳原子的任何一個處附連到懸垂分子上并且結(jié)合到該亞烷基碳原子上的這些氫原子之一是用如在此定義的芳基替換的。當一個特定的基團被“取代”時，該基團可以具有一個或多個取代基，優(yōu)選地從一至五個取代基，更優(yōu)選地從一只三個取代基，最優(yōu)選地從一至兩個取代基(獨立地選自取代基列表)。然而，該基團通?？梢跃哂腥魏螖?shù)量選自鹵素的取代基。還指示了被取代的基團。所預期的是在分子中特定位置處任何取代基或變量的定義是獨立于在該分子中別處的它的定義。應當理解的是本領域普通技術(shù)人員可以選擇在本發(fā)明化合物上的取代基和取代模式從而提供化學穩(wěn)定的并且可以通過本領域已知的技術(shù)以及在此列出的那些方法容易地合成的化合物。如在此使用的保護基團是指選擇性地阻斷(臨時地或永久地)多官能化合物中一個反應位點的基團。用于本發(fā)明的適當?shù)牧u基保護基團是藥學上可接受的并且在施用到受試者體內(nèi)之后可能需要或不需要從母體化合物上切割從而使該化合物有活性。切割是通過體內(nèi)正常代謝過程。羥基保護基團是本領域熟知的，參見protectivegroupsinorganicsynthesisbyt.w.greeneandp.g.m.wuts(johnwiley&sons,3rdedition)(通過引用以其全部內(nèi)容并且出于所有目的結(jié)合在此)，并且包括例如醚(例如，烷基醚類和甲硅烷基醚類包括例如二烷基甲硅烷基醚、三烷基甲硅烷基醚、二烷基烷氧基甲硅烷基醚)、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯類、磺酸酯以及和磷酸酯保護基團。羥基保護基團的實例包括但不限于甲醚、甲氧基甲基醚、甲硫甲基醚、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基醚、芐氧甲基醚、對-甲氧基芐氧甲基醚、對-硝基芐氧甲基醚、鄰-硝基芐氧甲基醚、(4-甲氧基苯氧基)甲基醚、愈創(chuàng)木酚甲基醚、叔-丁氧基甲基醚、4-戊烯基氧甲基醚、硅氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、2,2,2-三氯乙氧基甲基醚、雙(2-氯乙氧基)甲基醚、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚、甲氧基甲基醚、四氫吡喃基醚、1-甲氧基環(huán)己基醚、4-甲氧基四氫硫吡喃基醚、4-甲氧基四氫硫吡喃基醚s,s-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1,4-二噁烷-2-基醚、四氫呋喃基醚、四氫硫呋喃基醚、取代的乙基醚類例如1-乙氧基乙基醚、1-(2-氯乙氧基)乙基醚、1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]乙基醚、1-甲基-1-甲氧基乙基醚、1-甲基-1-芐氧乙基醚、1-甲基-1-芐氧基-2-氟乙基醚、1-甲基-1-苯氧乙基醚、2-三甲基甲硅烷基醚、叔丁基醚、烯丙基醚、炔丙基醚類、對氯苯基醚、對甲氧基苯基醚、芐基醚、對甲氧基芐基醚、3,4-二甲氧基芐基醚、三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、三丙基甲硅烷基醚、二甲基異丙基甲硅烷基醚、二乙基異丙基甲硅烷基醚、二甲基己基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、二苯基甲基甲硅烷基醚、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯基乙酸酯、苯甲酸酯、烷基甲基碳酸酯、烷基9-芴基甲基碳酸酯、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2-三氯乙基碳酸酯、1,1,-二甲基-2,2,2-三氯乙基碳酸酯、烷基磺酸酯、甲磺酸酯、芐基磺酸酯、甲苯磺酸酯、亞甲基乙縮醛、亞乙基乙縮醛、乙基叔丁基亞甲基縮酮。優(yōu)選的保護基團是通過下式表示的：-ra、-si(ra)(ra)(ra)、-c(o)ra、-c(o)ora、-c(o)nh(ra)、-s(o)2ra、-s(o)2oh、p(o)(oh)2、以及-p(o)(oh)ora，其中ra是c1-c20烷基、c2-c20烯基、c2-c20炔基、-c1-c20亞烷基(碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(碳環(huán))、-c6-c10芳基、-c1-c20亞烷基(芳基)、-c2-c20亞烯基(芳基)、-c2-c20亞炔基(芳基)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))其中所述的烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、乙基雜環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，是可選地取代的。出于在此所述的目的“改變天然糖基化模式”旨在指刪除一個或多個在天然序列161p2f10b中發(fā)現(xiàn)的碳水化合物部分(通過去除潛在的糖基化位點亦或通過用化學的和/或酶的手段來刪除糖基化作用)，和/或添加一個或多個在天然序列161p2f10b中不存在的糖基化位點。此外，該短語包括天然蛋白糖基化中定性改變，涉及存在的不同碳水化合物部分的特性和比例的改變。術(shù)語“類似物”是指在結(jié)構(gòu)上是類似的或與另一個分子(例如，一種161p2f10b相關蛋白)共享類似的或?qū)膶傩缘姆肿?。例如，可以通過特異性地結(jié)合到161p2f10b上的抗體或t細胞來特異性地結(jié)合161p2f10b蛋白的類似物。除非另外清楚地指出，術(shù)語“抗體”是以最廣義含義使用的。因此，“抗體”可以是天然發(fā)生的或人造的例如通過常規(guī)雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體。161p2f10b抗體包括單克隆和多克隆抗體以及包含這些抗體的抗原結(jié)合域和/或一個或多個互補決定區(qū)的片段。如在此使用的，術(shù)語“抗體”是指特異性地結(jié)合161p2f10b和/或展示希望的生物活性的任何形式的抗體或其片段，并且尤其地包括單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、乙基抗體片段，只要它們特異性地結(jié)合161p2f10b和/或展示希望的生物活性。在此提供的方法和組合物中可以使用任何特異性抗體。因此，在一個實施方案中術(shù)語“抗體”包括包含來自輕鏈免疫球蛋白分子的至少一個可變區(qū)以及來自重鏈分子至少一個可變區(qū)(它們結(jié)合地形成針對靶抗原的一個特異性結(jié)合位點)的一種分子。在一個實施方案中，該抗體是一種igg抗體。例如該抗體是一種igg1、igg2、igg3、或igg4抗體。用于本方法和組合物的抗體可以在細胞培養(yǎng)物中，在噬菌體中，或在不同動物中產(chǎn)生，包括但不限于牛、兔、山羊、小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、綿羊、狗、貓、猴、黑猩猩、猿。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體是一種哺乳動物抗體。噬菌體技術(shù)可以用于分離初始抗體或用于產(chǎn)生具有改變的特異性或親和力特征的變異體。這類技術(shù)是常規(guī)的并且是本領域熟知的。在一個實施方案中，通過本領域已知的重組手段來生產(chǎn)該抗體。例如，可以通過用包含對抗體進行編碼的dna序列的載體轉(zhuǎn)染宿主細胞來生產(chǎn)重組抗體?？梢杂靡环N或多種載體將表達至少一個vl和一個vh區(qū)的dna序列轉(zhuǎn)染到宿主細胞中?？贵w產(chǎn)生和生產(chǎn)重組手段的示例性說明包括delves,antibodyproduction:essentialtechniques(wiley,1997)；shephard,etal.,monoclonalantibodies(oxforduniversitypress,2000)；goding,monoclonalantibodies:principlesandpractice(academicpress,1993)；currentprotocolsinimmunology(johnwiley&sons,mostrecentedition)。可以通過重組手段來修飾本發(fā)明抗體用來在調(diào)節(jié)希望的功能中增加抗體療效。因此，可以使用重組手段通過取代來修飾這些抗體是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。典型地，這些取代可以是保守取代。例如，可以用不同殘基來替換該抗體恒定區(qū)中至少一個氨基酸。參見，例如美國專利號5,624,821、美國專利號6,194,551、申請?zhí)杦o9958572、乙基angal,etal.,mol.immunol.30:105-08(1993)。氨基酸中的修飾包括氨基酸的缺失、添加、以及取代。在一些情況中，可以制造這類改變用來減少不希望的活性，例如補體依賴性細胞毒性。常見地，通過共價地異或非共價地連接提供可檢出信號的物質(zhì)來對抗體進行標記。廣泛多樣的標記和結(jié)合技術(shù)是已知的并且廣泛地報告于科學以及專利文獻兩者中?？梢葬槍Y(jié)合到正常的或缺陷的161p2f10b對這些抗體進行篩選。參見例如antibodyengineering:apracticalapproach(oxforduniversitypress,1996)。可以用下面體外測定法(包括但不限于：增殖、遷移、附著、軟瓊脂生長、血管發(fā)生、細胞-細胞通訊、凋亡、運輸、信號轉(zhuǎn)導、內(nèi)化作用、抗體介導的二次殺傷)以及下面的體內(nèi)測定法(例如抑制腫瘤生長)鑒別出具有希望的生物活性的適當抗體。在此提供的抗體可以用作adc的中間體。在此提供的抗體還可以用于診斷應用。關于捕獲或非中和性抗體，可以針對結(jié)合到特異性抗體上而不抑制抗原的受體結(jié)合或生物活性的能力對它們進行篩選。關于中和性抗體，這些抗體可以用于競爭性結(jié)合測定中。它們還可以用于定量161p2f10b或它的受體。如在此使用的術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”或“抗體片段”(或簡單地“抗體部分”)是指保留特異性地結(jié)合到抗原(例如，161p2f10b；圖1)上的能力的161p2f10b抗體的一個或多個片段。已經(jīng)顯示的是可以通過全長抗體的片段來實現(xiàn)抗體的抗原結(jié)合功能。包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”中的結(jié)合片段的實例包括(i)一個fab片段、由vl、vh、cl以及ch1結(jié)構(gòu)域組成的一個單價片段；(ii)一個f(ab')2片段、包括在鉸鏈區(qū)通過二硫橋連接的兩個fab片段的一個二價片段；(iii)由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成的一個fd片段；(iv)由抗體的單個臂的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成的一個fv片段；(v)一個dab片段(ward,etal.(1989)nature341:544-546)，該片段由vh結(jié)構(gòu)域組成；以及(vi)一個分離的互補決定區(qū)(cdr)。此外，雖然fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域，vl和vh，是針對分離的基因編碼的，它們可以使用重組方法通過使它們能夠制造成單個蛋白鏈的合成接頭進行連接，其中該vl和vh區(qū)配對從而形成單價分子(稱為單鏈fv(scfv)；參見例如bird,etal.(1988)science242:423-426；以及huston,etal.(1988)proc.natl.acad.sci.usa85:5879-5883)。這類單鏈抗體還旨在包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”之內(nèi)。使用本領域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)來獲得這些抗體片段，并且為了以與完整抗體同樣方式進行使用對這些片段進行篩選。如在此使用的，可以使用任何形式的“抗原”來產(chǎn)生對161p2f10b具有特異性的抗體。因此，提出的抗原可以是一個單個表位、多表位、或單獨地整個蛋白或與本領域已知的一個或多個免疫原性增強劑相結(jié)合。提出的抗原可以是一種分離的全長蛋白、一種細胞表面蛋白(例如，用轉(zhuǎn)染有該抗原至少一部分的細胞進行免疫)、或可溶性蛋白(例如，僅用該蛋白的細胞外結(jié)構(gòu)域部分進行免疫)。可以在基因修飾的細胞中生產(chǎn)該抗原。編碼該抗原的dna抗原是基因組的或非基因組的(例如，cdna)并且編碼該細胞外結(jié)構(gòu)域的至少一部分。如在此使用的，術(shù)語“部分”是指當適當時用于構(gòu)成感興趣抗原的免疫原性表位的最小數(shù)量的氨基酸或核酸。可以使用適合用于轉(zhuǎn)化感興趣細胞的任何遺傳載體，包括但不限于腺病毒載體、質(zhì)粒、以及非病毒載體，例如陽離子脂類。在一個實施方案中，在此所述的方法和組合物的抗體特異性地結(jié)合感興趣的161p2f10b的細胞外結(jié)構(gòu)域的至少一部分。在此提供的抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合到一種“生物活性劑”上。如在此使用的，術(shù)語“生物活性劑”是指結(jié)合該抗原和/或增強或調(diào)節(jié)用來增強殺死細胞毒素的希望的生物學作用的任何合成的或天然發(fā)生的化合物。在一個實施方案中，用于本發(fā)明的結(jié)合片段是生物學活性的片段。如在此使用的，術(shù)語“生物學活性”是指能夠結(jié)合希望的抗原表位以及直接地或間接地發(fā)揮生物學作用的抗體或抗體片段。直接的作用包括但不限于調(diào)節(jié)、刺激、和/或抑制生長信號；調(diào)節(jié)、刺激、和/或抑制抗凋亡信號；調(diào)節(jié)、刺激、和/或抑制凋亡或壞死信號；調(diào)節(jié)、刺激、和/或抑制adcc級聯(lián)；以及調(diào)節(jié)、刺激、和/或抑制cdc級聯(lián)。在此所述的單克隆抗體尤其地包括“嵌合體”抗體，其中該重鏈和/或輕鏈的一部分與從特定種類得到的抗體中相應序列是完全相同的或同源的或?qū)儆谔囟ǖ目贵w類別或亞類，而該一個或多個鏈的剩余部分與從另一個種類中得到的抗體中相應序列是完全相同的或同源的或?qū)儆诹硪粋€抗體類別或亞類，以及這類抗體的片段，只要它們特異性地結(jié)合靶抗原和/或展示希望的生物活性(美國專利號4,816,567；以及morrison,etal.,proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855(1984))。術(shù)語“化學治療劑”是指在抑制腫瘤生長中有效的所有化合物?；瘜W治療劑的非限制性實例包括烷基化劑類；例如，氮芥、乙烯亞胺化合物類以及烷基磺酸酯類；抗代謝物類，例如，葉酸、嘌呤或，嘧啶拮抗劑類；有絲分裂抑制劑類，例如，抗微管蛋白劑類例如長春花生物堿類、auristatin類以及鬼臼毒素的衍生物類；細胞毒性抗生素類；損害或干擾dna表達或復制的化合物類，例如dna小溝結(jié)合劑類；以及生長因子受體拮抗劑類。另外地，化學治療劑類包括細胞毒性劑類(如在此定義的)、抗體類、生物分子類、以及小分子類。術(shù)語“化合物”是指并且包括該化合物本身以及下面那些，無論明確地說明與否，并且除非上下文清楚地表明將下面各項排除在外：化合物的無定形和結(jié)晶形式，包括多態(tài)性形式，其中這些形式可以是混合物的部分或處于分離形式；該化合物的游離酸和游離堿形式，它們典型地是以在此提供的結(jié)構(gòu)顯示的形式；給化合物是同分異構(gòu)體，它是指光學異構(gòu)體、以及互變異構(gòu)體，其中光學異構(gòu)體包括對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，手性異構(gòu)體和非手性異構(gòu)體，并且這些光學異構(gòu)體包括分離的光學異構(gòu)體以及包括消旋和非消旋混合物的光學異構(gòu)體的混合物；其中同分異構(gòu)體可以處于分離形式或處于與一個或多種其他同分異構(gòu)體的混合物形式；該化合物的同位素類，包括包含氘核氚的化合物，并且包括包含放射性同位素的化合物，包括治療和診斷有效的放射性同位素；該化合物的多體形式，包括二體、三體、等形式；該化合物的鹽類，優(yōu)選藥學上可接受的鹽類、包括酸加成鹽類和堿加成鹽類，包括具有有機反粒子和無機反離子的鹽類，并且包括兩性離子形式，其中如果化合物與一種或多種反離子相結(jié)合，該兩個或更多個反離子可以是相同的或不同的；以及該化合物的溶劑化物類，包括半溶劑化物類、單溶劑化物類、二溶劑化物類等，包括有機溶劑化物類和無機溶劑化物類，所述無機溶劑化物類包括水合物類；其中如果化合物與兩種或更多種溶劑分子相結(jié)合，該兩種或更多種溶劑分子可以是相同的或不同的。在一些實例中，在此提及的本發(fā)明的化合物可以包括明確地提及上述形式的一種或多種，例如鹽類和/或溶劑化物類，然而這種提及僅用于強調(diào)，并不應解釋為將上面鑒定的其他上述形式排除在外。術(shù)語“細胞毒性劑”是指抑制或阻止細胞表達活性、細胞功能和/或引起細胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語旨在包括放射性同位素類、化學治療劑類、以及毒素類例如細菌、真菌、植物或動物起源的小分子毒素類或酶活性毒素類，包括它們的片段和/或變異體。細胞毒性劑類的實例包括但不限于auristatin類(例如，auristatine、auristatinf、mmae和mmaf)、金霉素類、類美坦辛類、蓖麻蛋白、蓖麻蛋白a鏈、考布他汀、多卡米星類、多拉司他汀類、多柔比星、柔紅霉素、紫杉醇類、順鉑、cc1065、溴乙啶、絲裂霉素、依托泊甙、替尼泊苷、長春新堿、長春堿、秋水仙堿、二羥基炭疽菌素二酮、放線菌素、白喉毒素、假單胞菌外毒素(pe)a、pe40、相思豆毒蛋白、相思豆毒蛋白a鏈、蒴蓮根毒素a鏈、α-八疊球菌素、白樹毒素、絲裂吉霉素、局限曲菌素、酚霉素、依諾霉素、麻風樹毒蛋白、巴豆毒蛋白、加利車霉素、肥皂草抑制劑、以及糖皮質(zhì)激素和其他化學治療劑類，以及放射性同位素類例如at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212或213、p32以及l(fā)u的放射性同位素包括lu177。這些抗體還可以結(jié)合到能夠?qū)⒃撍幬锴绑w轉(zhuǎn)化成其活性形式的抗癌性藥物前體活性酶上。在161p2f10b結(jié)合劑對表達161p2f10b細胞影響的背景中，術(shù)語“去除”是指減少表達161p2f10b細胞的數(shù)量或消除這些細胞。在此使用“基因產(chǎn)物”是指一種肽/蛋白或mrna。例如，“本發(fā)明的基因產(chǎn)物”有時在此是指“癌氨基酸序列”、“癌蛋白”、“表i中列出癌癥的蛋白”、“癌mrna”、“表i中列出癌的mrna”等。在一個實施方案中，該癌蛋白是通過圖1的核酸來編碼的。該癌蛋白可以是一種片段，或可替代地，是通過圖1的核酸編碼的全長蛋白。在一個實施方案中，使用癌氨基酸序列來確定序列一致性或相似性。在另一個實施方案中，這些序列是通過圖1的核酸編碼蛋白的天然發(fā)生的等位基因變異體。在另一個實施方案中，這些序列是如在此進一步說明的序列變異體。這些“雜偶聯(lián)”抗體用于本發(fā)明方法和組合物中。如在此使用的，術(shù)語“雜偶聯(lián)抗體”是指兩個共價連接的抗體。可以使用合成蛋白化學中已知方法來制備這類抗體，包括使用交聯(lián)劑類。參見例如美國專利號4,676,980。術(shù)語“同系物”是指展示與另一種分子同源性的分子，通過舉例，它具有在對應的位置上是相同的或類似的化學殘基的序列。在一個實施方案中，在此提供的抗體是一種“人類抗體”。如在此使用的，術(shù)語“人類抗體”是指一種抗體，其中該輕鏈和重鏈序列的基本上整個序列，包括互補決定區(qū)(cdr)，是來自人類基因。在一個實施方案中，通過三源雜交瘤技術(shù)，人類b細胞技術(shù)(參見例如，kozbor,etal.,immunol.today4:72(1983),ebvtransformationtechnique(see,e.g.,cole,etal.monoclonalantibodiesandcancertherapy77-96(1985))，或使用噬菌體展示(參見例如，marks,etal.,j.mol.biol.222:581(1991))來制備這些人類單克隆抗體。在一個具體實施方案中，在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)來產(chǎn)生該人類抗體。用于制造這類部分地至全部地人類抗體的技術(shù)是本領域已知的并且可以使用任何這類技術(shù)。根據(jù)一個特別優(yōu)選的實施方案，在被工程化用于表達人類重鏈和輕鏈抗體基因的轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)制造完全的人類抗體序列。制備生產(chǎn)人類抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠的示例性說明發(fā)現(xiàn)于申請?zhí)杦o02/43478以及美國專利6,657,103(abgenix)和它的子代專利中。然后可以將來自生產(chǎn)希望抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠的b細胞融合用來制造用于連續(xù)生產(chǎn)該抗體的雜交瘤細胞系。參見例如，美國專利號5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、和5,545,806；以及jakobovits,adv.drugdel.rev.31:33-42(1998)；green,etal.,j.exp.med.188:483-95(1998)。如在此使用的術(shù)語“抑制”或“抑制作用”是指降低可測量數(shù)量，或是指完全阻止。適當?shù)摹皹撕烆悺卑ǚ派湫院怂仡?、酶類、底物類、輔因子類、抑制劑類、熒光部分類、化學發(fā)光部分類、磁性顆粒類等。傳授這類標簽用途的專利包括美國專利號3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149、以及4,366,241。此外，在此提供的抗體可以用作熒光體的抗原結(jié)合部分。參見例如，zeytun,etal.,nat.biotechnol.21:1473-79(2003)。術(shù)語“轉(zhuǎn)移癌癥”和“轉(zhuǎn)移性疾病”是指已經(jīng)擴展到局部淋巴結(jié)或擴展至遠側(cè)位點的癌癥，并且旨在包括在aua系統(tǒng)下的階段d疾病和在tnm系統(tǒng)下的階段txnxm+。如在此使用的術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”或“測試化合物”或“藥物候選物”或“語法上的等效物”說明用于測試直接地或間接地改變癌癥表型或癌癥序列(例如核酸或蛋白序列)表達的能力、或癌癥序列作用(例如，信號傳導、基因表達、蛋白相互作用等)的任何分子，例如蛋白、寡肽、小有機分子、多糖、多核苷酸等。一方面，調(diào)節(jié)劑可以中和本發(fā)明癌蛋白的作用?！爸泻汀币辉~是指連同細胞上最終作用一起抑制或阻斷蛋白活性。另一方面，調(diào)節(jié)劑可以通過使所述蛋白水平正?；瘉碇泻捅景l(fā)明的基因、及其相應蛋白的作用。在優(yōu)選實施方案中，這些調(diào)節(jié)劑改變表達譜、或在此提供的核酸或蛋白的表達譜，或下游效應子途徑。在一個實施方案中，該調(diào)節(jié)劑抑制癌癥表型例如至正常組織指紋。在另一個實施方案中，調(diào)劑劑誘導癌癥表型?？傮w上，與不同試劑濃度平行地運行多個測定混合物用來獲得對不同濃度的不同應答。典型地，這些濃度之一用作陰性對照，即在零濃度下或低于檢測水平。這些調(diào)節(jié)劑、藥物候選物、或測試化合物包括多個化學類別，雖然典型地它們是有機分子，優(yōu)選地具有大于100并且小于約2,500道爾頓分子量的小型有機分子。優(yōu)選的小分子是小于2000、或小于1500或小于1000或小于500d。這些候選劑包括對于與蛋白結(jié)構(gòu)性相互作用(具體地是氫鍵)所必需的官能團，并且典型地包括至少一個胺、羰基、羥基、或羧基基團，優(yōu)選這些功能性化學基團的至少兩個。這些候選劑通常包括用一種或多種上述官能團取代的環(huán)碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳香族或多芳香族結(jié)構(gòu)。這些調(diào)節(jié)劑還包括生物分子類例如肽類、糖類、脂肪酸類、類固醇類、嘌呤類、嘧啶類、衍生物類、結(jié)構(gòu)類似物類或它們的組合。特別優(yōu)選的是肽類。一類調(diào)節(jié)劑是例如具有從約5至約35個氨基酸的肽類，其中從約5至約20個氨基酸是優(yōu)選的，并且從約7至約15是特別優(yōu)選的。優(yōu)選地，癌調(diào)節(jié)蛋白是可溶的，包括非跨膜區(qū)，和/或使n端cys來有助于溶解度。在一個實施方案中，該片段的c端以游離酸的形式來保持并且n端是游離胺用來有助于偶聯(lián)到例如半胱氨酸上。在一個實施方案中，本發(fā)明的癌蛋白偶聯(lián)到在此討論的免疫原性劑上。在一個實施方案中，該癌蛋白偶聯(lián)到bsa上。本發(fā)明的肽類(例如具有優(yōu)選長度)可以連接到彼此上或連接到其他氨基酸上用來產(chǎn)生更長的肽/蛋白。這些調(diào)節(jié)肽類可以是上面列出的天然發(fā)生的蛋白的消化物類、隨機肽類、或“偏置的”隨機肽類。在一個優(yōu)選實施方案中，這些基于肽/蛋白的調(diào)節(jié)劑是如在此定義的抗體類、以及它們的片段。如在此使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指從基本上均質(zhì)抗體的一個群體獲得的抗體，即包括該群體的單獨抗體是完全相同的除了能夠以少量存在的可能的天然發(fā)生的突變之外。單克隆抗體是高度特異性的，是針對單個抗原表位。相反地，常規(guī)的(多克隆)抗體制劑典型地包括針對不同表位(或?qū)ζ渚哂刑禺愋?的多種抗體。在一個實施方案中，該多克隆抗體包含在包含多個抗原性表位的單個抗原中具有不同表位特異性、親和性、或親和力的多個單克隆抗體。修飾語“單克隆的”是指如從抗體的基本上均質(zhì)群體中獲得的抗體特征，并且不應解釋成要求通過任何特定方法來生產(chǎn)該抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明有待使用的單克隆抗體可以通過首先由kohler,etal.,nature256:495(1975)說明的雜交瘤方法來制造，或可以通過重組dna方法(參見例如，美國專利號4,816,567)來制造。還可以使用例如在clackson,etal.,nature352:624-628(1991)和marks,etal.,j.mol.biol.222:581-597(1991)中說明的技術(shù)從噬菌體抗體文庫中分離這些“單克隆抗體”。這些單克隆抗體通常地可以以至少約1μm的kd，更通常地至少約300nm，典型地至少約30nm，優(yōu)選地至少約10nm，更優(yōu)選地至少約3nm或更好地進行結(jié)合(通常地通過elisa進行確定)?！八幱觅x形劑”包括一種材料，例如一種佐劑、一種載體、ph調(diào)節(jié)和緩沖劑類、張力調(diào)節(jié)劑類、濕潤劑類、防腐劑等?！八帉W上可接受的”是指一種無毒物、惰性物、和/或與人類或其他哺乳動物生理相容的組合物。術(shù)語“多核苷酸”是指具有至少10個堿基或堿基對長度的核苷酸的聚合形式，核糖核苷酸亦或脫氧核苷酸或兩種核苷酸之一類型的修飾形式，并且是指包括dna和/或rna的單鏈或雙鏈形式。在本領域中，該術(shù)語通常可與“寡核苷酸”互換地使用。多核苷酸可以包括在此披露的核苷酸序列，其中胸苷(t)(例如在圖1中所示)還可以是尿嘧啶(u)；這個定義與dan和rna化學結(jié)構(gòu)之間的差異相關，特別是觀察到rna中四種主要堿基之一是尿嘧啶(u)而不是胸苷(t)。術(shù)語“多肽”是指具有至少約4、5、6、7、或8個氨基酸的聚合物。貫穿本說明書，使用氨基酸的標準三字母或單字母命名。在本領域中，該術(shù)語通常與“肽”或“蛋白”可互換地使用?！爸亟M體”dna或rna分子是在體外經(jīng)受分子操縱的dna或rna分子。如在此使用的，術(shù)語“特異性”、“特異性地結(jié)合”以及“特異地結(jié)合”是指該抗體選擇性地結(jié)合到靶抗原表位上?？梢酝ㄟ^將在一組給定的條件下結(jié)合到適當抗原上與結(jié)合到無關抗原或抗原混合物上進行比較，針對結(jié)合特異性對抗體進行測試。如果該抗體比無關抗原或抗原混合物高至少2、5、7、以及優(yōu)選地10倍地結(jié)合到適當抗原上，則它被認為是特異性的。在一個實施方案中，特異性抗體是結(jié)合該161p2f10b相關抗原(具體地161p2f10b)，但是不結(jié)合到無關抗原上的抗體。如在此使用的，“用于治療”或“治療的”以及語法上相關的術(shù)語，是指疾病任何結(jié)果的任何改進，例如延長的存活率、更低的發(fā)病率、和/或減輕副作用(這些副作用是可替代的治療形式的副產(chǎn)物)，如本領域中容易理解的，完全消除疾病是優(yōu)選的盡管對于治療活動不是必要的。“161p2f10b相關的蛋白”包括在此具體指出的那些(參見，圖1)，以及等位基因變異體、保守取代的變異體、已經(jīng)分離/產(chǎn)生并且不是按照在此列出的或本領域可容易地得到的方法用不適當?shù)膶嶒灡碚鞯念愃莆锖屯滴铩＿€包括結(jié)合了不同161p2f10b蛋白的多個部分或它們片段的融合蛋白，以及161p2f10b蛋白和異源多肽的融合蛋白。這類161p2f10b蛋白統(tǒng)稱為161p2f10b相關蛋白，本發(fā)明的蛋白，或161p2f10b。術(shù)語“161p2f10b相關蛋白”是指具有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、或多于25個氨基酸；或至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、330、335、339或更多氨基酸的多肽片段或161p2f10b蛋白序列。ii.)161p2f10b抗體本發(fā)明用于adc的抗體在生理條件下特異性地結(jié)合到161p2f10b蛋白上并且不結(jié)合(或較弱地結(jié)合)到不是161p2f10b相關蛋白的肽或蛋白上。用于制備抗體(尤其是單克隆抗體)的不同方法是本領域熟知的。例如，可以通過用處于分離的或免疫偶聯(lián)形式的161p2f10b相關蛋白、肽、或其片段免疫適當?shù)牟溉閯游锼拗鱽碇苽溥@些抗體(antibodies:alaboratorymanual,cshpress,eds.,harlow,andlane(1988)；harlow,antibodies,coldspringharborpress,ny(1989))。此外，還可以使用161p2f10b的融合蛋白，例如161p2f10bgst-融合蛋白。在一個具體實施方案中，生產(chǎn)出包括所有或大多數(shù)圖1氨基酸序列的gst融合蛋白，并且然后用作免疫原用來產(chǎn)生適當?shù)目贵w。在另一個實施方案中，合成一種161p2f10b相關蛋白并且用作免疫原。此外，使用本領域已知的裸dna免疫技術(shù)(使用或不使用純化的161p2f10b相關蛋白或表達161p2f10b的細胞)用來產(chǎn)生對編碼的免疫原的免疫應答(關于綜述，參見donnelly,etal.,1997,ann.rev.immunol.15:617-648)?？梢詫D1中所示的161p2f10b蛋白的氨基酸序列進行分析用來選擇用于產(chǎn)生抗體的161p2f10b蛋白的特異性區(qū)域。例如，使用161p2f10b氨基酸序列的疏水性和親水性分析來鑒別161p2f10b結(jié)構(gòu)中的親水性區(qū)域?？梢允褂帽绢I域已知的多種其他方法例如chou-fasman、garnier-robson、kyte-doolittle、eisenberg、karplus-schultz或jameson-wolf分析容易地鑒別顯示免疫原性結(jié)構(gòu)的161p2f10b蛋白的區(qū)域以及其他區(qū)域和結(jié)構(gòu)域。可以使用hopp,t.p.andwoods,k.r.,1981,proc.natl.acad.sci.u.s.a.78:3824-3828的方法來產(chǎn)生親水性譜圖?？梢允褂胟yte,j.anddoolittle,r.f.,1982,j.mol.biol.157:105-132的方法來產(chǎn)生親水性譜圖。可以使用janinj.,1979,nature277:491-492的方法來產(chǎn)生可接觸殘基百分比(％)譜圖?？梢允褂胋haskaranr.,ponnuswamyp.k.,1988,int.j.pept.proteinres.32:242-255的方法來產(chǎn)生平均柔性譜圖?？梢允褂胐eleage,g.,rouxb.,1987,proteinengineering1:289-294的方法來產(chǎn)生β折疊譜圖。因此，通過這些程序或方法的任何一種鑒別的每個區(qū)域都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通過在此提供的實例進一步說明了用于產(chǎn)生161p2f10b抗體的優(yōu)選方法。用于制備用作免疫原的蛋白或多肽的方法是本領域熟知的。本領域還熟知的是用于制備蛋白與載體(例如bsa、klh或其他載體蛋白)的免疫原性偶聯(lián)物的方法。在一些情況中，使用直接偶聯(lián)(例如使用碳二亞胺試劑)；在其他情況中連接劑例如通過piercechemicalco.,rockford,il提供的那些是有效的。如本領域應當理解的，通過在適當時間期間內(nèi)進行注射并且通過使用適當佐劑來進行161p2f10b免疫原的施用。在免疫方案期間，可以取得抗體滴度用來確定足夠抗體形成。在一個優(yōu)選的實施方案中，用于本發(fā)明adc的161p2f10bmab包括命名為h16-7.8的抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)(參見圖3)，或包含與h16-7.8的重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列同源的氨基酸序列的重鏈或輕鏈可變區(qū)，并且其中這些抗體保留本發(fā)明161p2f10bmab的希望的功能特性(特別是與161p2f10b的結(jié)合活性)。h16-7.8的重鏈可變區(qū)由seqidno:7的范圍從第20位q殘基至第142位殘基的氨基酸序列組成，并且h16-7.8的輕鏈可變區(qū)由seqidno:8的范圍從第20位e殘基至第127位r殘基的氨基酸序列組成。關于本發(fā)明抗體的恒定區(qū)，可以選擇恒定區(qū)的任何亞類。優(yōu)選地，可以使用人類igg2恒定區(qū)作為該重鏈恒定區(qū)并且人類igκ恒定區(qū)作為該輕鏈恒定區(qū)?？梢允褂?61p2f10b蛋白、表達161p2f10b的細胞或它們的提取物，通過多種熟知手段(包括蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀法、elisa、以及fasc分析)來建立161p2f10bmab與61p2f10b蛋白的反應性(結(jié)合活性)。在一個實施方案中，ch1的鉸鏈區(qū)被修飾使得該鉸鏈區(qū)中的半胱氨酸殘基的數(shù)量得以改變，例如增加或減少。在美國專利號5,677,425中由bodmer等人對這種方法進行進一步說明。將ch1鉸鏈區(qū)中半胱氨酸數(shù)量改變用來例如有助于組裝輕鏈和重鏈，或用來增加或降低161p2f10bmab的穩(wěn)定性。在另一個實施方案中，將抗體的fc鉸鏈區(qū)突變用來降低161p2f10bmab的生物半衰期。更具體地，將一個或多個氨基酸突變引入到fc–鉸鏈片段的ch2-ch3結(jié)構(gòu)域界面區(qū)中使得該抗體具有相對于天然fc-鉸鏈結(jié)構(gòu)域spa結(jié)合受損的葡萄球菌蛋白質(zhì)a(spa)結(jié)合。在授予ward等人的美國專利號6,165,745中對該方法進行進一步詳細說明。在另一個實施方案中，對161p2f10bmab進行修飾用來增加其生物半衰期。不同的方法是可能的。例如，可以如授予ward的美國專利號6,277,375中所述引入突變?？商娲?，為了增加生物半衰期，可以在ch1或cl區(qū)域中對抗體進行改變用來包含從igg的fc區(qū)的ch2結(jié)構(gòu)域的兩個環(huán)取得的拯救受體結(jié)合表位(如授予presta等人的美國專利號5,869,046和6,121,022中所述)。在其他實施方案中，通過用不同氨基酸殘基替換至少一個氨基酸殘基對fc區(qū)進行改變用來改變161p2f10bmab的一個或多個效應物功能。例如，可以用不同氨基酸殘基來替換選自氨基酸特異性殘基的一個或多個氨基酸使得該抗體對于效應物配體具有改變的親和性但是保留母體抗體的抗原結(jié)合能力。其親和性被改變的效應子配體可以是例如fc受體或補體的c1組分。在美國專利號5,624,821和5,648,260(兩者都授予winter等人)中對這種方法進行進一步詳細說明。在一個實施方案中，通過本領域已知的重組手段來生產(chǎn)用于本發(fā)明adc的抗體。例如，可以通過用包含對該抗體進行編碼的dna序列的載體轉(zhuǎn)染宿主細胞來生產(chǎn)重組體抗體?？梢允褂靡环N或多種載體來將表達至少一個vl和一個vh區(qū)的dna序列轉(zhuǎn)染到該宿主細胞中?？贵w產(chǎn)生和生產(chǎn)的重組體手段的示例性說明包括delves,antibodyproduction:essentialtechniques(wiley,1997)；shephard,etal.,monoclonalantibodies(oxforduniversitypress,2000)；goding,monoclonalantibodies:principlesandpractice(academicpress,1993)；currentprotocolsinimmunology(johnwiley&sons,mostrecentedition)?？梢允褂帽绢I域通常已知的方法，基于在此頻率的它們的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)上的序列信息，由本領域普通技術(shù)人員容易地制備用于本發(fā)明adc的抗體。具體地，制備出具有對本發(fā)明adc抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸進行編碼的堿基序列的重鏈可變區(qū)基因片段(seqidno:7，從20至142)，以及具有對本發(fā)明adc抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸進行編碼的堿基序列的輕鏈可變區(qū)基因片段(seqidno:8，從20至127)。然后，將這些可變區(qū)基因連接到處于適當種類人類抗體中的恒定區(qū)基因上用來制備抗體基因。接著，將該抗體基因連接到適當?shù)谋磉_載體上，并且引入到培養(yǎng)細胞中。最后，對這種培養(yǎng)細胞進行培養(yǎng)，由此可以從培養(yǎng)物上清液中獲得該抗體?？梢允褂帽绢I域通常已知的基因合成方法，通過基于在重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的基礎上(seqidno:7，從20至142以及seqidno:8，從20至127)或在本發(fā)明抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)堿基序列的基礎上(通過seqidno:4，從91至459以及seqidno:6，從100至423顯示的)設計的堿基序列來制備對本發(fā)明抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸進行編碼的上述可變區(qū)基因片段的每一個(seqidno:7，從20至142以及seqidno:8，從20至127)。因為這樣一種基因合成方法，多種方法對于本領域普通技術(shù)人員而言是明顯的，可以使用例如在wo90/07861中說明的抗體基因合成方法。接下來，將上述可變區(qū)基因片段和人類抗體的恒定區(qū)基因連接用來制備一種抗體基因。雖然可以選擇任何亞類的恒定區(qū)作為所使用的人類抗體的恒定區(qū)，可以優(yōu)選地使用人類ig[γ]2作為重鏈恒定區(qū)，并且人類ig[κ]作為輕鏈恒定區(qū)。關于通過連接重鏈可變區(qū)基因(通過seqidno:7顯示的，從20至142)和人類ig[γ]2重鏈恒定區(qū)基因而獲得的針對本發(fā)明adc的抗體的優(yōu)選抗體重鏈基因，可以提及包括對通過seqidno:7，從20至468顯示的氨基酸序列進行編碼的堿基序列的基因，更優(yōu)選地包括通過seqidno:4從91至1437顯示的堿基序列的基因。關于通過連接輕鏈可變區(qū)基因(通過seqidno:8顯示的，從20至127)和人類ig[κ]輕鏈恒定區(qū)基因而獲得的針對本發(fā)明adc抗體的優(yōu)選抗體輕鏈基因，可以提及包括對通過seqidno:8，從20至233顯示的氨基酸序列進行編碼的堿基序列的基因，更優(yōu)選地包括通過seqidno:6，從100至741顯示的堿基序列的基因。關于通過包括通過seqidno:4，從91至1437顯示的堿基序列的重鏈基因和包括通過seqidno:6，從100至741顯示的堿基序列的輕鏈基因編碼的針對本發(fā)明adc的抗體，可以提及在下面實例中所述的h16-7.8。在制備這種抗體基因之后，可以通過使用本領域通常已知的不同方法來完成將該抗體基因引入到表達載體中，將該表達載體引入到培養(yǎng)細胞中，對這些培養(yǎng)細胞進行培養(yǎng)，對抗體進行純化等。該表達載體不受限制，只要它能夠表達該抗體基因即可。優(yōu)選的是使用已經(jīng)具有人類ig恒定區(qū)基因例如ag-[γ]2或ag-[κ]的表達載體，因為當將抗體可變區(qū)基因插入其中時它可以容易地變成具有抗體基因的表達載體。通過例如磷酸鈣方法等將上述表達載體引入掃培養(yǎng)細胞中。作為表達載體引入其中的培養(yǎng)細胞的舉例，基團是使用多種培養(yǎng)細胞例如cho細胞，并且它們可以通過常規(guī)方法進行培養(yǎng)。在上述培養(yǎng)之后，在培養(yǎng)物上清液中累積的抗體可以使用蛋白a柱通過例如不同層析法進行純化?？梢允褂?適當時)161p2f10b蛋白、表達161p2f10b的細胞或它們的提取物，通過多種熟知手段(包括蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀法、elisa、以及facs分析)來建立使用161p2f10b蛋白這樣獲得的161p2f10b抗體的反應性(結(jié)合活性)。這樣獲得的抗體或由于該抗體根據(jù)需要被進一步純化之后保留活性的抗體片段可以制備成針對adc的抗體。161p2f10b抗體或其片段可以標記有一種可檢出標志物或偶聯(lián)到一個第二分子上。適當?shù)目蓹z出標志物包括但不限于放射性同位素、熒光化合物、生物發(fā)光化合物、化學發(fā)光化合物、金屬螯合劑或酶。進一步地，使用本領域通常已知的方法來產(chǎn)生對兩個或更多個161p2f10b表位具有特異性的抗體。還可以通過本領域已知的交聯(lián)技術(shù)來產(chǎn)生同源二聚體抗體(例如，wolff,etal.,cancerres.53:2560-2565)。在又另一個優(yōu)選實施方案中，用于本發(fā)明adc的161p2f10bmab是包括命名為h16-7.8的抗體的重鏈和輕鏈的抗體。h16-7.8的重鏈由seqidno:7的范圍從第20位q殘基至第468位k殘基的氨基酸序列組成并且h16-7.8的輕鏈由seqidno:8序列的范圍從第20位e殘基至第233位c殘基的氨基酸序列組成。它們的序列在圖2和圖3中列出。在一個優(yōu)選實施方案中，h16-7.8偶聯(lián)到一種細胞毒性劑上。iii.)通常的抗體-藥物偶聯(lián)物另一方面，本發(fā)明提供抗體-藥物偶聯(lián)物(adc)，這些偶聯(lián)物包括偶聯(lián)到細胞毒性劑例如mmaf上的抗體。另一方面，本發(fā)明進一步提供了使用這些adc的方法。一方面，adc包括共價地附連到細胞毒性劑上的上述161p2f10bmab中任何一種。這些抗體-藥物偶聯(lián)物用于局部遞送細胞毒性劑或細胞抑制劑(即，用來殺死或抑制腫瘤細胞用來治療癌癥的藥物(syrigosandepenetos(1999)anticancerresearch19:605-614；niculescu-duvazandspringer(1997)adv.drgdel.rev.26:151-172；美國專利4,975,278))的用途允許將藥物部分靶向遞送到腫瘤中，并且細胞內(nèi)累積于其中，其中全身性施用這些未偶聯(lián)藥劑可能導致對于正常細胞以及尋找以被消除的腫瘤細胞不可接受水平的毒性(baldwin,etal.,(1986)lancetpp.(mar.15,1986):603-05；thorpe,(1985)“antibodycarriersofcytotoxicagentsincancertherapy:areview,”inmonoclonalantibodies'84:biologicalandclinicalapplications,a.pinchera,etal.(ed.s),pp.475-506)。由此尋找具有最小毒性的最大療效。已經(jīng)報道多克隆抗體和單克隆抗體兩者在這些策略中是有用的(rowland,etal.(1986)cancerimmunol.immunother.,21:183-87)。在這些方法中使用的藥物包括道諾霉素、多柔比星、甲氨蝶呤、以及長春地辛(rowland,etal.,(1986)所述)。在抗體-毒素偶聯(lián)物中使用的毒素包括細菌毒素類例如白喉毒素，植物毒素類例如蓖麻蛋白，小分子毒素類例如格爾德霉素(mandler,etal.(2000)jour.ofthenat.cancerinst.92(19):1573-1581；mandler,etal.(2000)bioorganic&med.chem.letters10:1025-1028；mandler,etal.(2002)bioconjugatechem.13:786-791),類美坦辛類(ep1391213；liu,etal.(1996)proc.natl.acad.sci.usa93:8618-8623),以及加利車霉素(lode,etal.(1998)cancerres.58:2928；hinman,etal.(1993)cancerres.53:3336-3342)。這些毒素可以通過多種機理(包括微管蛋白結(jié)合、dna結(jié)合、或拓撲異構(gòu)酶抑制)來影響它們的細胞毒性和細胞抑制性作用。當偶聯(lián)到較大抗體或蛋白受體配體上時一些細胞毒性藥物傾向于失活或具有更少活性。抗體藥物偶聯(lián)物的實例是(替伊莫單抗，biogen/idec)，它是一種抗體-放射性同位素偶聯(lián)物，包括針對在正常和惡性b淋巴細胞表面上找到的cd20抗原和通過硫脲連接劑-螯合劑結(jié)合的111in或90y放射性同位素的一種鼠類igg1κ單克隆抗體(wiseman,etal.(2000)eur.jour.nucl.med.27(7):766-77；wiseman,etal.(2002)blood99(12):4336-42；witzig,etal.(2002)j.clin.oncol.20(10):2453-63；witzig,etal.(2002)j.clin.oncol.20(15):3262-69)。另外地，在2000年已經(jīng)批準mylotargtm(吉姆單抗奧佐米星，wyethpharmaceuticals)(一種抗體藥物偶聯(lián)物，包括連接到加利車霉素上的一種hucd33抗體)用于通過注射來治療急性髓樣白血病(drugsofthefuture(2000)25(7):686；美國專利號4970198、5079233、5585089、5606040、5693762、5739116、5767285、以及5773001)。此外，莫坎妥珠單抗(immunogen,inc.)(由通過二硫鍵spp連接到類美坦辛藥物部分(dm1)上的huc242抗體組成的抗體藥物偶聯(lián)物)正進入用于治療表達canag的癌癥(例如，結(jié)腸、胰、胃以及其他)的ii期試驗。此外，mln-2704(millenniumpharm.,bzlbiologics,immunogeninc.)(一種抗體藥物偶聯(lián)物，包括連接到類美坦辛藥物部分(dm1)上的抗前列腺特異性膜抗原(psma)單克隆抗體)處于用于潛在治療前列腺腫瘤的開發(fā)中。最后，這些auristatin肽，auristatine(ae)以及單甲基auristatin(mmae)、多拉司他汀的合成類似物偶聯(lián)到嵌合體單克隆抗體cbr96(對于癌上的路易斯y具有特異性)和cac10(對于血液性惡性腫瘤具有特異性)上(doronin,etal.(2003)naturebiotechnology21(7):778-784)并且處于治療研發(fā)中。iii(a).auristatin和多拉司他汀多拉司他汀類和auristatin類已經(jīng)顯示干擾微管動力性、gtp水解、以及細胞核和細胞分裂(woyke,etal.(2001)antimicrob.agentsandchemother.45(12):3580-3584)并且具有抗癌癥(us5663149)和抗真菌活性(pettit,etal.(1998)antimicrob.agentschemother.42:2961-2965)。該多拉司他汀或auristatin藥物部分可以通過該肽藥物部分的n(氨基)端或c(羧基)端附連到該抗體上(wo02/088172)。示例性的auristatin實施方案包括在senter,etal,“proceedingsoftheamericanassociationforcancerresearch,”volume45,abstractnumber623,andpresentedmarch28,2004中披露的n端連接的單甲基auristatin藥物部分de和df，其披露的內(nèi)容通過引用全部明確地結(jié)合在此、示例性的auristatin實施方案是mmae(其中波浪線指示共價附連到抗體藥物偶聯(lián)物的接頭(l)上)。另一個示例性auristatin實施方案是mmaf，其中波浪線指示共價附連到抗體藥物偶聯(lián)物的接頭(l)上(us2005/0238649)：包括mmae或mmaf以及多種接頭組分(在此進一步說明的)另外的示例性實施方案具有下面結(jié)構(gòu)和縮寫(其中ab是指抗體并且p是1至約12)：本發(fā)明的adc包括mmaf。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的adc包括作為接頭的馬來亞胺己酰基(mc)和作為藥物的mmaf。iv.)結(jié)合161p2f10b的抗體-藥物偶聯(lián)物化合物除了別的之外，本發(fā)明提供了用于靶向遞送藥物的抗體-藥物偶聯(lián)物化合物。諸位發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物具有針對表達161p2f10b細胞的潛在的細胞毒性和/或細胞抑制活性。這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物包括共價地連接到至少一個藥物單元上的一個抗體單元。這些藥物單元可以直接地或通過一個接頭單元(-lu-)共價地連接。在一些實施方案中，該抗體藥物偶聯(lián)物化合物具有下式：l-(lu-d)p(i)或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物；其中：l是抗體單元，例如本發(fā)明的161p2f10bmab，并且(lu-d)是一種接頭單元-藥物單元部分，其中：lu-是一個接頭單元，并且-d是針對靶細胞具有細胞抑制或細胞毒性活性的藥物單元；并且p是從1至20的整數(shù)。在一些實施方案中，p范圍從1至12，1至10，1至9，1至8，1至7，1至6，1至5，1至4，1至3，或1至2。在一些實施方案中，p范圍從2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在其他實施方案中，p是1、2、3、4、5或6。在一些實施方案中，p是2或4。在一些實施方案中，該抗體藥物偶聯(lián)物化合物具有下式：l-(aa-ww-yy-d)p(ii)或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中：l是抗體單元，例如，161p2f10bmab；并且-aa-ww-yy-是一個接頭單元(lu)，其中：-a-是一個延伸物單元，a是0或1，每個-w-獨立地是一個氨基酸單元，w是范圍從0至12的整數(shù)，-y-是一種自消耗的間隔物單元，y是0、1或2；-d是針對靶細胞具有細胞抑制或細胞毒性活性的藥物單元；并且p是從1至20的整數(shù)。在一些實施方案中，a是0或1，w是0或1，并且y是0、1或2。在一些實施方案中，a是0或1、w是0或1、并且y是0或1。在一些實施方案中，p范圍從1至12、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、或1至2。在一些實施方案中，p范圍從2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在其他實施方案中，p是1、2、3、4、5或6。在一些實施方案中，p是2或4。在一些實施方案中，當w不是0時，y是1或2。在一些實施方案中，當w是1至12時，y是1或2。在一些實施方案中，w是2至12并且y是1或2。在一些實施方案中，a是1并且w和y是0。對于包括多種抗體的組合物，抗體負荷是通過p(每個抗體藥物分子的平均數(shù))表示的。藥物負荷可以范圍從1至12藥物(d)/抗體?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法例如質(zhì)譜、elisa測定、以及hplc來表征在偶聯(lián)反應的制劑中抗體平均數(shù)/抗體。還可以確定關于p的抗體-藥物偶聯(lián)物的定量分布。在一些情況中，可以通過多種手段(例如反相hplc或電泳法)來實現(xiàn)均質(zhì)抗體-藥物偶聯(lián)物的分離、純化、以及表征(其中p是來自具有其他藥物負荷的抗體-藥物偶聯(lián)物的某一數(shù)值)。在示例性實施方案中，p是從2至8可以通過本領域技術(shù)人員已知的任何技術(shù)來實現(xiàn)抗體-藥物偶聯(lián)物化合物的產(chǎn)物。簡言之，這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物包括作為抗體單元的161p2f10bmab，一種藥物，以及可選地連接該藥物和結(jié)合劑的一種接頭。在一個優(yōu)選實施方案中，該抗體是包括命名為上述h16-7.8的抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)的161p2f10bmab。在更優(yōu)選的實施方案中，該抗體是包括命名為上述h16-7.8的抗體的重鏈和輕鏈的161p2f10bmab?？墒褂枚鄠€不同反應將藥物和/或接頭共價地附連到結(jié)合劑上。這通常是通過使結(jié)合劑(例如抗體分子)的氨基酸殘基(包括賴氨酸的氨基基團、谷氨酸和天冬氨酸的游離羧酸基團、半胱氨酸的巰基基團以及芳香族氨基酸的不同部分)發(fā)生反應來實現(xiàn)的。共價附連的最常用的非特異性方法之一是用于將一種化合物的羧基(或氨基)基團連接到抗體的氨基(或羧基)基團上的碳二亞胺反應。此外，已經(jīng)使用雙官能試劑例如二醛類或酰亞胺酯類來將一種化合物的氨基基團連接到一種抗體分子的氨基酸基團上。而且可用于將藥物附連到結(jié)合劑上的是希夫堿反應。這種方法涉及包含二醇或羥基基團的藥物的高碘酸鹽氧化反應，因此形成了一種醛，然后該醛與結(jié)合劑進行反應。通過與結(jié)合劑的氨基基團形成希夫堿來發(fā)生附連。還可以使用異硫氰酸鹽作為偶聯(lián)劑來將藥物共價地附連到結(jié)合劑上。其他技術(shù)是熟練業(yè)內(nèi)人士已知的并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在某些實施方案中，在適當條件下使一種中間體(該中間體是該接頭的前體)與該藥物進行反應。在某些實施方案中，這些反應基團用在該藥物和/或該中間體上。隨后在適當條件下該藥物和中間產(chǎn)物，或衍生的藥物之間的反應產(chǎn)物與161p2f10bmab進行反應。在此對這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物特定單元的每一項進行更詳細地說明。在美國專利申請?zhí)?003-0083263、2005-0238649和2005-0009751中還對示例性接頭單元、延伸物單元、氨基酸單元、自身消化間隔物單元、以及藥物單元的合成和結(jié)構(gòu)進行了說明，它們每一個都通過引用并且出于所有目的以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。v.)接頭單元典型地，這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物包括該藥物單元與抗體單元之間的一個接頭區(qū)。在一些實施方案中，該接頭在細胞內(nèi)條件下是可切割的，使得該接頭的切割將藥物單元從抗體中釋放到細胞內(nèi)環(huán)境中。在又其他實施方案中，該接頭單元是不可切割的并且例如通過抗體降解來釋放藥物。在一些實施方案中，可通過存在于細胞內(nèi)環(huán)境中的切割劑來切割該接頭(例如在溶酶體或內(nèi)體或胞質(zhì)微囊體內(nèi))。該接頭可以是例如被細胞內(nèi)肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶體或內(nèi)體蛋白酶)切割的一種肽基接頭。在一些實施方案中，該肽基接頭是至少兩個氨基酸長度或至少三個氨基酸長度。切割劑可以包括組織蛋白酶b和d以及纖溶酶，它們都已知用來水解二肽藥物衍生物類，導致將活性藥物釋放到靶細胞內(nèi)部(參見例如dubowchikandwalker,1999,pharm.therapeutics83:67-123)。最典型的是可通過在表達161p2f10b的細胞這個存在的酶切割的肽基接頭。例如，可以使用可通過巰基依賴性蛋白酶組織蛋白酶b(它在癌組織中高度表達)切割的肽基基團(例如，phe-leu或gly-phe-leu-gly接頭(seqidno:9))。例如在美國專利號6,214,345中對這類接頭的其他實例進行說明，通過引用并且出于所有目的將它以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。在一個具體實施方案中，可通過細胞內(nèi)蛋白酶切割的肽基接頭是val-cit接頭或phe-lys接頭(參見例如美國專利6,214,345，它說明了用val-cit接頭來合成多柔比星)。使用細胞內(nèi)蛋白水解釋放治療劑的一個優(yōu)點是當偶聯(lián)時典型地減弱了該試劑并且偶聯(lián)物的血清穩(wěn)定性是典型地較高的。在其他實施方案中，該可切割的接頭是ph敏感的，即在某些ph值下對水解敏感。典型地，該ph敏感型接頭可在酸性條件下水解。例如，可以使用酸敏感性接頭，該接頭可在溶酶體中水解(例如腙、縮氨基脲、縮氨基硫脲、順式-烏頭酰胺、原酸酯、縮醛、縮酮、或類似物)。(參見美國專利號5,122,368、5,824,805、5,622,929；dubowchikandwalker,1999,pharm.therapeutics83:67-123；neville,etal.,1989,biol.chem.264:14653-14661.)在中性ph條件下，這類接頭是相對穩(wěn)定的(例如在血液中的那些)，但是在低于ph5.5或5.0下(溶酶體的大致ph)是不穩(wěn)定的。在某些實施方案中，該可水解的接頭是一種硫醚接頭(像例如通過?；赕I附連到治療劑上的硫醚(參見例如美國專利號5,622,929))。在其他實施方案中，該接頭是在還原條件下可切割的(例如，二硫鍵接頭)。多種二硫鍵接頭是本領域已知的，包括例如可以使用sata(n-琥珀酰亞胺酰-s-乙酰基硫代乙酸鹽)、spdp(n-琥珀酰亞胺酰-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸鹽)、spdb(n-琥珀酰亞胺酰-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸鹽)以及smpt(n-琥珀酰亞胺酰-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯)、spdb和smpt形成的那些。(參見例如，thorpe,etal.,1987,cancerres.47:5924-5931；wawrzynczak,etal.,inimmunoconjugates:antibodyconjugatesinradioimageryandtherapyofcancer(c.w.vogeled.,oxfordu.press,1987。還參見美國專利號4,880,935.)在其他具體實施方案中，該接頭是一種丙二酸鹽接頭(johnson,etal.,1995,anticancerres.15:1387-93)、一種馬來酰亞胺苯?；宇^(lau,etal.,1995,bioorg-med-chem.3(10):1299-1304)、或一種3’-n-酰胺類似物(lau,etal.,1995,bioorg-med-chem.3(10):1305-12)。在又其他實施方案中，該接頭單元是不可切割的并且該藥物通過抗體降解來釋放(參見美國公開號2005/0238649，通過引用并且處于所以目的以其全部內(nèi)容結(jié)合在此)。在優(yōu)選的實施方案中，接頭單元是馬來酰亞胺己酰基(mc)。典型地，該接頭對于細胞外環(huán)境不是顯著敏感的。如在此使用的，在接頭的背景中“對于細胞外環(huán)境不是顯著敏感的”是指當該抗體-藥物偶聯(lián)物化合物存在于細胞外環(huán)境中(例如在血漿中)時，在抗體-藥物偶聯(lián)物化合物的樣品中，不大于約20％，典型地不大于約15％，更典型地不大于約10％，并且甚至更典型地不大于約5％，不大于約3％，或不大于約1％的接頭被切割。例如可以通過將抗體-藥物偶聯(lián)物化合物與血漿一起孵化持續(xù)預定的時間期間(例如，2、4、8、16、或24小時)來確定接頭是否是對細胞外環(huán)境不是顯著不敏感的并且然后對在血漿中存在的游離藥物的數(shù)量進行定量。在其他的，非彼此互斥的實施方案中，該接頭促進了細胞內(nèi)化作用。在某些實施方案中，當偶聯(lián)到治療劑上時(即，在如在此所述的抗體-藥物偶聯(lián)物化合物的接頭-治療劑部分的環(huán)境中)該接頭促進細胞內(nèi)化作用。在又其他實施方案中，當偶聯(lián)到auristatin化合物和161p2f10bmab兩者上時該接頭促進細胞內(nèi)化作用。在wo2004-010957、美國專利號20060074008、美國公開號20050238649、以及美國公開號20060024317(它們的每一個都通過引用并且處于所有目的以其全部內(nèi)容結(jié)合在此)中說明了多種可以與本發(fā)明組合物和方法一起使用的示例性接頭?！敖宇^單元”(lu)是可以用于連接藥物單元和抗體單元從而形成抗體-藥物偶聯(lián)物化合物的一種雙功能化合物。在一些實施方案中，該接頭單元具有下式：-aa-ww-yy-其中：-a-是一種延伸物單元，a是0或1，每個-w-獨立地是一個氨基酸單元，w是范圍從0至12的整數(shù)，-y-是一種自消除的間隔物單元，并且y是0、1或2。在一些實施方案中，a是0或1，w是0或1，并且y是0、1或2。在一些實施方案中，a是0或1，w是0或1，并且y是0或1。在一些實施方案中，當w是1至12時，y是1或2。在一些實施方案中，w是2至12并且y是1或2。在一些實施方案中，a是1并且w和y是0。vi.)延伸物單元當存在時，該延伸物單元(a)能夠?qū)⒁粋€抗體單元連接到一個氨基酸單元(-w-)(如果存在的話)上、連接到間隔物單元(-y-)上(如果存在的話)；或連接到一個藥物單元(-d)上。天然地或通過化學操縱地可以在161p2f10bmab(例如h16-7.8)上存在的有用的官能團包括但不限于巰基、氨基、羥基、碳水化合物的異頭羥基基團、以及羧基。適當?shù)墓倌軋F是巰基和氨基。在一個實施方案中，可以通過還原161p2f10bmab的分子內(nèi)二硫鍵來產(chǎn)生巰基基團。在另一個實施方案中，可以通過使161p2f10bmab的賴氨酸部分的氨基基團與2-亞氨基硫烷(traut劑)或其他巰基產(chǎn)生試劑進行反應來產(chǎn)生巰基基團。在某些實施方案中，該161p2f10bmab是一種重組抗體并且被工程化用來攜帶一個或多個賴氨酸。在某些其他實施方案中，該重組體161p2f10bmab被工程化用來攜帶額外的巰基基團，例如額外的半胱氨酸。在一個實施方案中，該延伸物單元與抗體單元的硫原子形成一個鍵。該硫原子可以衍生自抗體的巰基基團。在式iiia和iiib的方括號中對本實施方案的代表性的延伸物單元進行說明，其中l(wèi)-、-w-、-y-、-d、w和y是如上定義的，并且r17是選自-c1-c10亞烷基-、-c1-c10亞烯基-、-c1-c10亞炔基-、碳環(huán)-、-o-(c1-c8亞烷基)-、o-(c1-c8亞烯基)-、-o-(c1-c8亞炔基)-、-亞芳基-、-c1-c10亞烷基-亞芳基-、-c2-c10亞烯基-亞芳基、-c2-c10亞炔基-亞芳基、-亞芳基-c1-c10亞烷基-、-亞芳基-c2-c10亞烯基-、-亞芳基-c2-c10亞炔基-、-c1-c10亞烷基-(碳環(huán))-、-c2-c10亞烯基-(碳環(huán))-、-c2-c10亞炔基-(碳環(huán))-、-(碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、-(碳環(huán))-c2-c10亞烯基-、-(碳環(huán))-c2-c10亞炔基、-雜環(huán)-、-c1-c10亞烷基-(雜環(huán))-、-c2-c10亞烯基-(雜環(huán))-、-c2-c10亞炔基-(雜環(huán))-、-(雜環(huán))-c1-c10亞烷基-、-(雜環(huán))-c2-c10亞烯基-、-(雜環(huán))-c1-c10亞炔基-、-(ch2ch2o)r-、或-(ch2ch2o)r-ch2-，并且r是范圍從1-10的整數(shù)，其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、碳環(huán)基、雜環(huán)劑、以及亞芳基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，是可選地取代的。在一些實施方案中，所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、碳環(huán)基、雜環(huán)基、以及亞芳基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，是未取代的。在一些實施方案中，r17是選自-c1-c10亞烷基-、-碳環(huán)-、-o-(c1-c8亞烷基)-、-亞芳基-、-c1-c10亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-c1-c10亞烷基-、-c1-c10亞烷基-(碳環(huán))-、-(碳環(huán))-c1-c10亞烷基-、-c3-c8雜環(huán)-、-c1-c10亞烷基-(雜環(huán))-、-(雜環(huán))-c1-c10亞烷基-、-(ch2ch2o)r-、以及-(ch2ch2o)r-ch2-；并且r是范圍從1-10的整數(shù)，其中所述亞烷基基團是未取代的并且這些基團的剩余部分是可選地取代的。從所有這些示例性實例中應當理解的是甚至當未明確地指示時，從1至12個藥物部分可以連接到一個抗體上(p＝1-12)。一個示例性延伸物單元是具有式iiia的單元，其中r17是-(ch2)5-：另一個示例性延伸物單元是具有式iiia的單元，其中r17是-(ch2ch2o)r-ch2-；并且r是2：一個示例性延伸物單元是具有式iiia的單元，其中r17是-亞芳基-或亞芳基-c1-c10亞烷基-。在一些實施方案中，該芳基基團是一種未取代的苯基基團。又另一個示例性延伸物單元是具有式iiib的單元，其中r17是-(ch2)5-：在某些實施方案中，該延伸物單元通過在抗體單元的一個硫原子與該延伸物單元的一個硫原子之間的二硫鍵連接到該抗體單元上。在式iv的方括號中對本實施方案的代表性延伸物單元進行說明，其中r17、l-、-w-、-y-、-d、w和y是如上定義的。應當注意的是貫徹本說明書，除非上下文另外指出，在下式中的s部分是指抗體單元的硫原子。在又另外的實施方案中，該延伸物包含可以與抗體的伯胺或仲胺基團形成鍵的一個反應位點。這些反應位點的實例包括但不限于活化的脂類例如琥珀酰亞胺脂類、4硝基苯基脂類、五氟苯基脂類、四氟苯基脂類、酸酐類、?；阮?、磺酰氯類、異氰酸鹽類以及異硫氰酸鹽類。在式va和vb的方括號中對本實例的代表性延伸物單元進行說明，其中-r17-、l-、-w-、-y-、-d、w和y是如上定義的；在一些實施方案中，該延伸物包含與可能在抗體上存在的修飾的碳水化合物的(-cho)基團進行反應的一個反應位點。例如，可以使用一種試劑(例如高碘化鈉)對碳水化合物進行溫和地氧化并且氧化的碳水化合物的得到的(-cho)單元可以與包含一種官能度的延伸物(例如酰肼、肟、伯胺或仲胺、肼、縮氨基硫脲、肼羧化物、以及芳基酰肼)進行縮合(例如通過kaneko,etal.,1991,bioconjugatechem.2:133-41說明的那些)。在式via、vib、和vic的方括號內(nèi)對這個實施方案的代表性延伸物單元進行說明，其中-r17-、l-、-w-、-y-、-d、w和y是如上定義的。vii.)氨基酸單元該氨基酸單元(-w-)(當存在時)將該延伸物單元連接到該間隔物單元上(如果該間隔物單元存在的話)，將該延伸物單元連接到該藥物部分上(如果該間隔物單元不存在的話)，并且將該抗體單元連接到該藥物單元上(如果該延伸物單元和間隔物單元不存在的話)。ww-可以是例如一個單肽、二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元。每個-w-單元獨立地具有在下面方括號中指示的式，并且w范圍是從0至12的整數(shù)：其中r19是氫、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、芐基、對羥基芐基、-ch2oh、-ch(oh)ch3、-ch2ch2sch3、-ch2conh2、-ch2cooh、-ch2ch2conh2、-ch2ch2cooh、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2、-(ch2)3nh2、-(ch2)3nhcoch3、-(ch2)3nhcho、-(ch2)4nhc(＝nh)nh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)4nhcoch3、-(ch2)4nhcho、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nhconh2、-ch2ch2ch(oh)ch2nh2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、環(huán)己基、在一些實施方案中，該氨基酸單元可以通過一種或多種酶(包括癌或腫瘤相關的蛋白酶)進行酶切割從而釋放該藥物單元(-d)，在一個實施方案中，當釋放時該藥物單元在體內(nèi)被質(zhì)子化從而提供一種藥物(d)。在某些實施方案中，該氨基酸單元可以包括天然氨基酸。在其他實施方案中，該氨基酸單元可以包括非天然氨基酸。通過式(vii)-(ix)來表示說明性的ww單元：其中r20和r21是如下：其中r20、r21和r22是如下：其中r20、r21、r22和r23是如下：這些示例性氨基酸單元包括但不限于式vii的單元，其中：r20是芐基并且r21是-(ch2)4nh2；r20是異丙基并且r21是-(ch2)4nh2；或r20是異丙基并且r21是-(ch2)3nhconh2。另一個示例性氨基酸單元是式viii的單元，其中r20是芐基，r21是芐基，并且r22是-(ch2)4nh2?？梢酝ㄟ^特定的酶(例如，腫瘤相關蛋白酶)在它們酶切割選擇性方面對有用的-ww-單元進行設計和優(yōu)化。在一個實施方案中，-ww–單元是其切割是被組織蛋白酶b、c和d、或纖溶酶蛋白酶催化的單元。在一個實施方案中，-ww-是一種二肽、三肽、四肽或五肽。當r19、r20、r21、r22或r23不是氫時，r19、r20、r21、r22或r23附連到其上的碳原子是手性的。r19、r20、r21、r22或r23附連到其上的每個碳原子獨立地是處于(s)或(r)構(gòu)型。該氨基酸單元的一個方面，該氨基酸單元是纈氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)。在另一個方面，該氨基酸單元是苯丙氨酸-賴氨酸(即，fk)。在該氨基酸單元的又另一個方面，該氨基酸單元是n-甲基纈氨酸-瓜氨酸。在又另一個方面，該氨基酸單元是5-氨基戊酸、高苯丙氨酸賴氨酸、四異喹啉羧酸鹽賴氨酸、環(huán)己基丙氨酸賴氨酸、異煙酸(isonepecoticacid)賴氨酸、β-丙氨酸賴氨酸、甘氨酸絲氨酸纈氨酸谷氨酰胺以及異煙酸。viii.)間隔物單元間隔物單元(-y-)(當存在時)將一個氨基酸單元連接到藥物單元上(當氨基酸單元存在時)。可替代地，該間隔物單元將延伸物單元連接到藥物單元上(當氨基酸單元不存在時)。該間隔物單元還將藥物單元連接到抗體單元上(當氨基酸單元和延伸物單元兩者都不存在時)。間隔物單元具有兩者一般形式：非自消化型或自消化型。非自消化型間隔物單元是其中在從抗體-藥物偶聯(lián)物中切割(具體地酶切割)氨基酸單元之后部分或所有的間隔物單元保持結(jié)合到藥物部分上的一種單元。非自消化間隔單元的實例包括但不限于(甘氨酸-甘氨酸)間隔物單元和甘氨酸間隔物單元(兩者都描述與方案1中)(下文)。當包含甘氨酸-甘氨酸間隔物單元或甘氨酸間隔物單元的偶聯(lián)物通過一種酶(例如，腫瘤細胞相關蛋白酶、癌細胞相關蛋白酶或淋巴細胞相關蛋白酶)經(jīng)歷酶切割時，從l-aa-ww-中切割一個甘氨酸-甘氨酸-藥物部分或一個甘氨酸-藥物部分。在一個實施方案中，在靶細胞內(nèi)發(fā)生一個獨立水解反應，切割該甘氨酸-藥物部分結(jié)合并且釋放該藥物。方案1在一些實施方案中，一種非自消化間隔物單元(-y-)是-gly-。在一些實施方案中，一種非自消化間隔物單元(-y-)是-gly-gly-。在一個實施方案中，提供了一種藥物-接頭偶聯(lián)物，其中該間隔物單元是不存在(y＝0)、或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物。可替代地，包括一個自消化間隔物單元的偶聯(lián)物可以釋放-d。如在此使用的，術(shù)語“自消化的間隔物”是指一種雙功能化學部分，它能夠?qū)蓚€隔開的化學部分同價地連接到一起成為一個穩(wěn)定的三聯(lián)分子。如果它與第一部分的鍵被切開時，它將自發(fā)地與該第二化學部分分開。在一些實施方案中，-yy-一個對氨基苯甲醇(pab)單元(參見方案2和3)，它的亞苯基部分用qm進行取代，其中q是-c1-c8烷基、-c1-c8烯基、-c1-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c1-c8烯基)、-o-(c1-c8炔基)、-鹵素、-硝基或-氰基；并且m是范圍從0-4的整數(shù)。該烷基、烯基和炔基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以是任選取代的。在一些實施方案中，-y-是一個pab基團，該基團通過pab基團的氨基氮原子連接到-ww–上，并且通過碳酸酯、氨基甲酸酯或醚基團直接地連接到–d上。不受任何特定理論或機理束縛，如通過tokietal.,2002,j.org.chem.67:1866-1872說明的，方案2描述了pab基團藥物釋放的一種可能的機理，該基團通過氨基甲酸酯或碳酸酯基團直接附連到-d上。方案2在方案2中，q是-c1-c8烷基、-c1-c8烯基、-c1-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c1-c8烯基)、-o-(c1-c8炔基)、-鹵素、-硝基或-氰基；m是范圍從0-4的整數(shù)；并且p范圍從1至約12。該烷基、烯基和炔基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以是任選取代的。不受任何特定理論或機理束縛，方案3描述了pab基團藥物釋放的一種可能機理，該基團通過一個醚鍵或胺鍵直接附連到-d，其中d包括作為該藥物單元一部分的氧或氮基團。方案3在方案3中，q是-c1-c8烷基、-c1-c8烯基、-c1-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c1-c8烯基)、-o-(c1-c8炔基)、-鹵素、-硝基或-氰基；m是范圍從0-4的整數(shù)；并且p范圍從1至約12。該烷基、烯基和炔基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以是任選取代的。自消化間隔物的其他實例包括但不限于與pab基團電子類似的芳香族化合物例如2-氨基咪唑基-5-甲醇衍生物類(hay,etal.,1999,bioorg.med.chem.lett.9:2237)以及鄰或?qū)Π被S基縮醛類?？梢允褂卯旛０锋I水解時經(jīng)歷環(huán)化反應的間隔物，取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺類(rodrigues,etal.,1995,chemistrybiology2:223)，適當取代的二環(huán)[2.2.1]和二環(huán)[2.2.2]環(huán)系統(tǒng)(storm,etal.,1972,j.amer.chem.soc.94:5815)以及2-氨基苯基丙酸酰胺類(amsberry,etal.,1990,j.org.chem.55:5867)。在甘氨酸α-位置取代的包含胺藥物的消除反應(kingsburyetal.,1984,j.med.chem.27:1447)也是自消化間隔物的實例。在一個實施方案中，該間隔物單元是如方案4中描述的分支的雙(羥甲基)-苯乙烯(bhms)單元，它可以用于結(jié)合和釋放多種藥物。方案4在方案4中，q是-c1-c8烷基、-c1-c8烯基、-c1-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c1-c8烯基)、-o-(c1-c8炔基)、-鹵素、-硝基或-氰基；m是范圍從0-4的整數(shù)；n是0或1；并且p范圍是范圍從1至約12。該烷基、烯基、和炔基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以是可選地取代的。在一些實施方案中，該-d部分是相同的。在又另一個實施方案中，該-d部分是不同的。一方面，通過式(x)-(xii)來表示間隔物單元(-yy-)：其中q是-c1-c8烷基、-c1-c8烯基、-c1-c8炔基、-o-(c1-c8烷基)、-o-(c1-c8烯基)、-o-(c1-c8炔基)、-鹵素、-硝基或-氰基；并且m是范圍從0-4的整數(shù)。該烷基、烯基、和炔基基團，無論單獨地或作為另一個基團的一部分，可以是可選地取代的。和包括抗體-藥物偶聯(lián)物化合物的式i和ii的實施方案可以包括：其中w和y各自是0、1或2，并且，其中w和y各自是0，以及ix.)藥物單元藥物部分(d)可以是任何細胞毒性劑、細胞抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑(例如免疫抑制劑)或藥物。d是具有可以與間隔物單元、與氨基酸單元、與延伸物單元或與抗體單元形成鍵的一個原子的藥物單元(部分)。在一些實施方案中，該藥物單元d具有可以與間隔物單元形成鍵的一個氮原子。如在此使用的，術(shù)語“藥物單元”和“藥物部分”是同義的并且可互換地使用。細胞毒性劑或免疫調(diào)節(jié)劑的有用類別包括例如抗微管蛋白劑類、dna小溝結(jié)合劑類、dna復制抑制劑類、以及烷基化劑類。在一些實施方案中，該藥物是一種auristatin，例如auristatine(本領域中也稱為多拉司他汀-10的衍生物)或其一種衍生物。該auristatin可以是例如在auristatine與酮酸之間形成的酯。例如，可以使auristatine與對乙?；郊姿峄虮郊柞；焖徇M行反應用來對應地生產(chǎn)aeb和aevb。其他典型的auristatin包括afp、mmaf、和mmae。示例性auristatin的合成和結(jié)構(gòu)在美國專利申請公開號2003-0083263、2005-0238649和2005-0009751；國際專利公開號wo04/010957、國際專利公開號wo02/088172、以及美國專利號6,323,315、6,239,104、6,034,065、5,780,588、5,665,860、5,663,149、5,635,483、5,599,902、5,554,725、5,530,097、5,521,284、5,504,191、5,410,024、5,138,036、5,076,973、4,986,988、4,978,744、4,879,278、4,816,444、以及4,486,414中進行說明，它們的每一項都通過引用并且出于所有目的以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。auristatin已經(jīng)顯示干擾微管動力學以及細胞核和細胞分裂并且具有抗癌活性。mmaf結(jié)合微管蛋白并且可以在表達161p2f10b的細胞上產(chǎn)生細胞毒性或細胞抑制作用。存在本領域已知的多種不同的測定法，它們可以用于確定auristatin或得到的抗體-藥物偶聯(lián)物是否在希望的細胞系上產(chǎn)生細胞抑制或細胞毒性作用。用于確定化合物是否結(jié)合微管蛋白的方法是本領域已知的。參見例如muller,etal.,anal.chem2006,78,4390-4397；hamel,etal.,molecularpharmacology,199547:965-976；以及hamel,etal.,thejournalofbiologicalchemistry,1990265:28,17141-17149。為了本發(fā)明的目的，可以確定化合物與微管蛋白的相對親和性。本發(fā)明的一些優(yōu)選的auristatin以范圍從比mmae與微觀蛋白的結(jié)合親和性低10倍(更弱的親和性)至比mmae與微管蛋白的結(jié)合親和性高10倍、20倍、或甚至100倍(更高的親和性)的親和性結(jié)合微管蛋白。在一些實施方案中，-d是式de或df的auristatin：或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物形式；其中，獨立地在每個位置處：波浪線表示一個鍵；r2是-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；r3是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、-碳環(huán)、-c1-c20亞烷基(碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(碳環(huán))、-芳基、-c1-c20亞烷基(芳基)、-c2-c20亞烯基(芳基)、-c2-c20亞炔基(芳基)、雜環(huán)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))；r4是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、碳環(huán)、-c1-c20亞烷基(碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(碳環(huán))、芳基、-c1-c20亞烷基(芳基)、-c2-c20亞烯基(芳基)、-c2-c20亞炔基(芳基)、-雜環(huán)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))；r5是-h或-c1-c8烷基；或r4和r5共同地形成一個碳環(huán)并且具有式-(crarb)s-，其中ra和rb獨立地是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、或-碳環(huán)并且s是2、3、4、5或6；r6是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；r7是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、碳環(huán)、-c1-c20亞烷基(碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(碳環(huán))、-芳基、-c1-c20亞烷基(芳基)、-c2-c20亞烯基(芳基)、-c2-c20亞炔基(芳基)、雜環(huán)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))；每個r8獨立地是-h、-oh、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、-o-(c1-c20烷基)、-o-(c2-c20烯基)、-o-(c1-c20炔基)、或-碳環(huán)；r9是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；r24是-芳基、-雜環(huán)、或-碳環(huán)；r25是-h、c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、-碳環(huán)、-o-(c1-c20烷基)、-o-(c2-c20烯基)、-o-(c2-c20炔基)、或or18，其中r18是-h、一種羥基保護基團、或一種直鍵其中or18表示＝o；r26是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基、-芳基、-雜環(huán)、或-碳環(huán)；r10是-芳基或-雜環(huán)；z是-o、-s、-nh、或-nr12，其中r12是-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；r11是-h、-c1-c20烷基、--c2-c20烯基、-c2-c20炔基、-芳基、-雜環(huán)、-(r13o)m-r14、或-(r13o)m-ch(r15)2；m是范圍從1-1000的整數(shù)；r13是-c2-c20亞烷基、-c2-c20亞烯基、或-c2-c20亞炔基；r14是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；每個出現(xiàn)的r15獨立地是-h、-cooh、-(ch2)n-n(r16)2、-(ch2)n-so3h、-(ch2)n-so3-c1-c20烷基、-(ch2)n-so3-c2-c20烯基、或-(ch2)n-so3-c2-c20炔基；每個出現(xiàn)的r16獨立地是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基或-(ch2)n-cooh；并且n是范圍從0至6的整數(shù)；其中所述的烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、以及雜環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，是可選地取代的。式de的auristatin包括以下那些，其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、以及雜環(huán)基團是未取代的。式de的auristatin包括以下那些，其中基團r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、和r9是未取代的并且基團r19、r20和r21是如在此所述可選地取代的。式de的auristatin包括下面那些，其中r2是c1-c8烷基；r3、r4和r7是獨立地選自-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、單環(huán)c3-c6碳環(huán)、-c1-c20亞烷基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、c6-c10芳基、-c1-c20亞烷基(c6-c10芳基)、-c2-c20亞烯基(c6-c10芳基)、-c2-c20亞炔基(c6-c10芳基)、雜環(huán)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))；其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、碳環(huán)、芳基和雜環(huán)基團是可選地取代的；r5是-h；r6是-c1-c8烷基；每個r8是獨立地選自-oh、-o-(c1-c20烷基)、-o-(c2-c20烯基)、或-o-(c2-c20炔基)，其中所述烷基、烯基、和炔基基團是可選地取代的；r9是-h或-c1-c8烷基；r24是可選地取代的-苯基；r25是-or18；其中r18是h、一個羥基保護基團、或一個直鍵其中or18表示＝o；r26是選自-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、或-碳環(huán)；其中所述烷基、烯基、炔基和碳環(huán)基團是可選地取代的；或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物形式。式de的auristatin包括下面那些，其中r2是甲基；r3是-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、或c2-c8炔基，其中所述烷基、烯基、和炔基基團是可選地取代的；r4是-h、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、單環(huán)c3-c6碳環(huán)、-c6-c10芳基、-c1-c8亞烷基(c6-c10芳基)、-c2-c8亞烯基(c6-c10芳基)、-c2-c8亞炔基(c6-c10芳基)、-c1-c8亞烷基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c8亞烯基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c8亞炔基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))；其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基和碳環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，是可選地取代的；r5是-h；r6是甲基；r7是-c1-c8烷基、-c2-c8烯基或-c2-c8炔基；每個r8是甲氧基；r9是-h或-c1-c8烷基；r24是-苯基；r25是-or18；其中r18是h、一個羥基保護基團、或一個直鍵其中or18表示＝o；r26是甲基；或其一種藥學上可接受的鹽形式。式de的auristatin包括下面那些，其中：r2是甲基；r3是-h或-c1-c3烷基；r4是-c1-c5烷基；r5是-h；r6是甲基；r7是異丙基或仲丁基；r8是甲氧基；r9是-h或-c1-c8烷基；r24是苯基；r25是-or18；其中r18是-h、一個羥基保護基團、或一個直鍵其中or18表示＝o；并且r26是甲基；或其一種藥學上可接受的鹽或溶劑化物形式。式de的auristatin包括下面那些，其中：r2是甲基或c1-c3烷基；r3是–h或–c1-c3烷基；r4是–c1-c5烷基；r5是h；r6是c1-c3烷基；r7是-c1-c5烷基；r8是-c1-c3烷氧基；r9是–h或-c1-c8烷基；r24是苯基；r25是-or18；其中r18是-h、一個羥基保護基團、或一個直鍵其中or18表示＝o；并且r26是-c1-c3烷基；或其一種藥學上可接受的鹽形式。式df的auristatin包括下面那些，其中：r2是甲基；r3、r4、和r7是獨立地選自-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、單環(huán)c3-c6碳環(huán)、-c1-c20亞烷基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c20亞烯基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c2-c20亞炔基(單環(huán)c3-c6碳環(huán))、-c6-c10芳基、-c1-c20亞烷基(c6-c10芳基)、-c2-c20亞烯基(c6-c10芳基)、-c2-c20亞炔基(c6-c10芳基)、雜環(huán)、-c1-c20亞烷基(雜環(huán))、-c2-c20亞烯基(雜環(huán))、或-c2-c20亞炔基(雜環(huán))；其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、碳環(huán)、芳基和雜環(huán)基團，無論單獨地還是作為另一個基團的一部分，是可選地取代的；r5是-h；r6是甲基；每個r8是甲氧基；r9是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基；其中所述烷基、烯基、和炔基基團是可選地取代的；r10是任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)；z是–o-、-s-、-nh-、或-nr12，其中r12是-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基，它們每一個是可選地取代的；r11是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基、-芳基、-雜環(huán)、-(r13o)m-r14、或-(r13o)m-ch(r15)2，其中所述烷基、烯基、炔基、芳基和雜環(huán)基團是可選地取代的；m是范圍從1-1000的整數(shù)或m＝0；r13是-c2-c20亞烷基、-c2-c20亞烯基、或-c2-c20亞炔基，它們的每一個是可選地取代的；r14是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、或-c2-c20炔基，其中所述烷基、烯基、和炔基基團是可選地取代的；每個出現(xiàn)的r15獨立地是-h、-cooh、-(ch2)n-n(r16)2、-(ch2)n-so3h、-(ch2)n-so3-c1-c20烷基、-(ch2)n-so3-c2-c20烯基、或-(ch2)n-so3-c2-c20炔基，其中所述烷基、烯基、和炔基基團是可選地取代的；每個出現(xiàn)的r16獨立地是-h、-c1-c20烷基、-c2-c20烯基、-c2-c20炔基或-(ch2)n-cooh，其中所述烷基、烯基和炔基基團是可選地取代的；n是范圍從0至6的整數(shù)；或其一種藥學上可接受的鹽。在這些實施方案的某些中，r10是任選取代的苯基。式df的auristatin包括下面那些，其中基團r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、和r9是未取代的并且基團r10和r11是如在此所述的。式df的auristatin包括下面那些，其中所述烷基、烯基、炔基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、芳基、碳環(huán)、和雜環(huán)基團是未取代的。式df的auristatin包括下面那些，其中：r2是-c1-c3烷基；r3是-h或-c1-c3烷基；r4是-c1-c5烷基；r5是-h；r6是-c1-c3烷基；r7是-c1-c5烷基；r8是-c1-c3烷氧基；r9是-h或-c1-c8烷基；r10是任選取代的苯基；z是–o-、-s-、或–nh-；r11是如在此定義的；或其一種藥學上可接受的鹽。式df的auristatin包括下面那些，其中：r2是甲基；r3是-h或-c1-c3烷基；r4是-c1-c5烷基；r5是-h；r6是甲基；r7是異丙基或仲丁基；r8是甲氧基；r9是-h或-c1-c8烷基；r10是任選取代的苯基；z是–o-、-s-、或–nh-；并且r11是如在此定義的；或其一種藥學上可接受的鹽。式df的auristatin包括下面那些，其中：r2是甲基；r3是-h或-c1-c3烷基；r4是-c1-c5烷基；r5是-h；r6是甲基；r7是異丙基或仲丁基；r8是甲氧基；r9是-h或c1-c8烷基；r10是苯基；并且z是–o-或–nh-并且r11是如在此定義的，優(yōu)選氫；或其一種藥學上可接受的鹽形式。式df的auristatin包括下面那些，其中：r2是-c1-c3烷基；r3是-h或-c1-c3烷基；r4是-c1-c5烷基；r5是-h；r6是-c1-c3烷基；r7是-c1-c5烷基；r8是-c1-c3烷氧基；r9是-h或-c1-c8烷基；r10是苯基；并且z是–o-或–nh-并且r11是如在此定義的，優(yōu)選氫；或其一種藥學上可接受的鹽形式。式de或df的auristatin包括下面那些，其中r3、r4和r7獨立地是異丙基或仲丁基并且r5是-h。在一個示例性實施方案中，r3和r4各自是異丙基，r5是h，并且r7是仲丁基。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式de或df的auristatin包括下面那些，其中r2和r6各自是甲基，并且r9是h。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式de或df的auristatin包括下面那些，其中每個出現(xiàn)的r8是-och3。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式de或df的auristatin包括下面那些，其中r3和r4各自是異丙基，r2和r6各自是甲基，r5是h，r7是仲丁基，每個出現(xiàn)的r8是-och3，并且r9是h。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中z是-o-或–nh-。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中r10是芳基。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中r10是-苯基。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中z是-o-，并且r11是h、甲基或叔丁基。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中，當z是–nh-時，r11是-(r13o)m-ch(r15)2，其中r15是-(ch2)n-n(r16)2，并且r16是-c1-c8烷基或-(ch2)n-cooh。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。式df的auristatin包括下面那些，其中當z是–nh-時，r11是-(r13o)m-ch(r15)2，其中r15是-(ch2)n-so3h。這些取代基的剩余部分是如在此定義的。在優(yōu)選的實施方案中，當d是一個式de的auristatin時，w是范圍從1至12的整數(shù)，優(yōu)選2至12，y是1或2，并且a優(yōu)選地是1。在一些實施方案中，其中d是一個式df的auristatin，a是1并且w和y是0。示例性的藥物單元(-d)包括具有下面結(jié)構(gòu)的藥物單元：以及或其藥學上可接受的鹽類或溶劑化物類。一方面，可以將親水性基團，例如但不限于三乙二醇酯類(teg)在r11處附連到該藥物單元上。不受理論束縛，這些親水性基團有助于該藥物單元的內(nèi)化作用和非團聚作用。在一些實施方案中，該藥物單元不是tzt-1027。在一些實施方案中，該藥物單位不是auristatine、多拉司他汀10、或auristatinpe。在優(yōu)選的實施方案中，這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物具有下面結(jié)構(gòu)，其中“l(fā)”或“mab-s-”表示在此列出的一個161p2f10bmab(命名為h16-7.8)：或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，該藥物單元是加利車霉素、喜樹堿、美坦辛類似物、或蒽環(huán)類抗生素。在一些實施方案中，該藥物是紫杉烷、拓撲異構(gòu)酶抑制劑、長春花生物堿、或類似物。在一些典型的實施方案中，適當?shù)纳锒拘詣┌ɡ鏳na小溝結(jié)合劑(例如，烯二炔類和來紅霉素類，一種cbi化合物；也參見美國專利號6,130,237)、多卡米星類、紫杉烷類(例如，紫杉酚和多西紫杉醇)、嘌呤霉素類、以及長春花生物堿類。其他細胞毒性劑包括例如cc-1065、sn-38、托泊替坎、嗎啉代-多柔比星、根霉素、氰基嗎啉代-多柔比星、棘霉素、考布他汀、紡綞菌素、埃博霉素a和b、雌氮芥、隱芽植物素、西馬多丁、類美坦辛類、替斯利得、和米托蒽醌。在一些實施方案中，該藥物是一種抗微管蛋白劑。這些抗微管蛋白劑的實例包括auristatin類、紫杉烷類(例如，(紫杉酚)、(多西紫杉醇))、t67(tularik)以及長春花生物堿類(例如，長春新堿、長春堿、長春地辛、以及長春瑞濱)。其他抗微管蛋白劑包括例如，漿果赤霉素衍生物類、紫杉烷類似物類(例如，埃博霉素a和b)、諾考達唑、秋水仙堿和秋水仙酰胺、雌氮芥、隱芽植物素類、西馬多丁、類美坦辛類、考布他汀類、替斯利得類、以及紅蔥濱。在某些實施方案中，該細胞毒性劑是一種類美坦辛，另一組抗微管蛋白劑類。例如，在具體實施方案中，該類美坦辛是美坦辛或dm-1(immunogen,inc.；也參見charietal.,1992,cancerres.52:127-131)。在某些實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑是一種多拉司他汀。在某些實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑屬于auristatin類別。因此，在一個具體實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑是mmae(式xi)。在另一個具體實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑是afp(式xvi)。在某些實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑是式xii-xxi的一種化合物或其藥學上可接受的鹽：p是1至12。在更優(yōu)選的實施方案中，這些抗體-藥物偶聯(lián)物化合物具有下面結(jié)構(gòu)，其中“mab-s-”表示在此列出的命名為h16-7.8的一種161p2f10bmab，并且p是4：在一個具體實施方案中，該細胞毒性或細胞抑制劑是mmaf(式xviv)。藥物負荷是通過p表示的并且是分子中每個抗體藥物部分的平均數(shù)。藥物負荷可以范圍從1至20個藥物部分(d)/抗體。本發(fā)明的adc包括與范圍從1至20的藥物部分偶聯(lián)的抗體集合。來自偶聯(lián)反應的adc制劑中藥物部分的平均數(shù)量/抗體可以通過常規(guī)手段例如質(zhì)譜和elisa測定法來表征。還可以確定關于p的adc的定量分布。在一些情況中，可以通過多種手段例如電泳來實現(xiàn)均質(zhì)adc的分離、純化、以及表征(其中p是來自具有其他藥物負荷的adc的某一數(shù)值)。對于一些抗體-藥物偶聯(lián)物而言，p可以受抗體上附連位點數(shù)量限制。例如，當附連是半胱氨酸巰基時(如在上述示例性實施方案中)，抗體可以具有僅一個或數(shù)個半胱氨酸巰基基團，或可以具有僅一個或數(shù)個接頭可以通過其附連的足夠反應性的巰基基團。在某些實施方案中，更高的藥物負荷(例如p>5)可以引起聚集、不溶性、毒性、或喪失某些抗體-藥物偶聯(lián)物的細胞滲透性。在某些實施方案中，針對本發(fā)明adc的藥物負荷范圍從1至約12、從1至約8、從約2至約6、從約3至約5、從約3至約4、從約3.1至約3.9、從約3.2至約3.8、從約3.2至約3.7、從約3.2至約3.6、從約3.3至約3.8、或從約3.3至約3.7。實際上，已經(jīng)顯示的是對于某些adc，藥物部分/抗體的最佳比率可以是小于8，并且可以是約2至約5。參見us2005-0238649a1(通過引用以其全部內(nèi)容結(jié)合在此)。在某些實施方案中，在偶聯(lián)反應期間小于理論最大值的藥物部分偶聯(lián)到抗體上?？贵w可以包含例如不與藥物-接頭中間體或接頭試劑反應的賴氨酸殘基(如下面討論的)?？傮w上，這些抗體不包含多個游離的和反應性的可以連接到藥物部分上的半胱氨酸巰基基團；實際上在這些抗體中大多數(shù)半胱氨酸巰基基團以二硫橋鍵的形式存在。在某些實施方案中，可以在部分或完全還原條件下用還原劑例如二硫蘇糖醇(dtt)或三羰基乙基膦(tcep)將抗體還原從而產(chǎn)生反應性半胱氨酸巰基基團。在某些實施方案中，使抗體經(jīng)受變性條件用來揭示反應性親核基團例如賴氨酸或半胱氨酸?？梢杂貌煌緩嚼缤ㄟ^下面各項來控制adc的負荷(藥物/抗體比率)：(i)限制藥物-接頭中間體和接頭試劑相對于抗體的摩爾過量，(ii)限制偶聯(lián)反應時間或溫度，(iii)部分地或限制用于半胱氨酸巰基修飾的還原條件，(iv)通過重組技術(shù)將抗體的氨基酸序列工程化使得半胱氨酸殘基的數(shù)量和位置被改變用來控制接頭-藥物附連的數(shù)量和/或位置(例如如在此和在wo2006/034488(通過引用以其全部內(nèi)容結(jié)合在此)中披露制備的thiomab或thiofab)。應當理解的是當多于一個親核性基團與藥物-接頭中間體或接頭試劑，緊接著與藥物部分試劑反應時，則得到的產(chǎn)物是具有附連到抗體上的一種或多種藥物部分的分布的adc化合物的混合物?？梢酝ㄟ^二重elisa抗體測定法(它對抗體具有特異性并且對藥物具有特異性)從該混合物中計算出藥物的平均數(shù)量/抗體?？梢酝ㄟ^質(zhì)譜在混合物中鑒別出單個adc分子并且通過hplc進行分離，例如疏水性相互作用層析法(參見例如hamblett,k.j.,etal.“effectofdrugloadingonthepharmacology,pharmacokinetics,andtoxicityofananti-cd30antibody-drugconjugate,”abstractno.624,americanassociationforcancerresearch,2004annualmeeting,march27-31,2004,proceedingsoftheaacr,volume45,march2004；alley,s.c.,etal.“controllingthelocationofdrugattachmentinantibody-drugconjugates,”abstractno.627,americanassociationforcancerresearch,2004annualmeeting,march27-31,2004,proceedingsoftheaacr,volume45,march2004)。在某些實施方案中，可以通過電泳或?qū)游龇◤呐悸?lián)混合物中分離出具有單一負荷值的均質(zhì)adc。xi.)確定adc的細胞毒性作用的方法確定藥物或抗體-藥物偶聯(lián)物是否在細胞上發(fā)揮細胞抑制和/或細胞毒性作用的方法是已知的。通常地，可以通過下面各項來測量抗體藥物偶聯(lián)物的細胞毒性或細胞抑制活性：將表達抗體藥物偶聯(lián)物靶蛋白的哺乳動物細胞暴露于細胞培養(yǎng)基中；培養(yǎng)這些細胞持續(xù)從6小時至約5天的時間期間；并且對細胞活力進行測量?？梢允褂没诩毎捏w外測定法來測量抗體藥物偶聯(lián)物的活力(增殖)、細胞毒性、以及凋亡的誘導(caspase活化)。為了確定抗體藥物偶聯(lián)物是否發(fā)揮了細胞抑制作用，可以使用胸苷結(jié)合測定。例如可以將以5,000個細胞/96孔板的孔的密度表達靶抗原的癌細胞培養(yǎng)持續(xù)72小時時間期間并且在該72小時時間期間的最后8小時期間暴露于0.5μci3h-胸苷。在抗體藥物偶聯(lián)物的存在和不存在下對3h-胸苷結(jié)合到培養(yǎng)物的細胞中進行測量。為了確定細胞毒性、可以對壞死或凋亡(程序性細胞死亡)進行測量。壞死典型地伴隨有質(zhì)膜滲透性增加；細胞膨脹、以及質(zhì)膜破裂。凋亡典型地特征為膜起泡、細胞質(zhì)凝聚、以及內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的活化。在癌細胞上確定這些效應的任何一項指示一種抗原藥物偶聯(lián)物在治療癌癥中是有用的?？梢酝ㄟ^確定細胞中染料(例如中性紅、錐蟲藍、或alamartm藍(參見例如page,etal.,1993,intl.j.oncology3:473-476))的攝取來測量細胞活力。在這樣的一個測定中，將細胞孵化于包含該染料的培養(yǎng)基中，對細胞進行洗滌，并且以分光光度測量的方式對剩余的染料(反映染料的細胞攝取)進行測量。還可以使用蛋白結(jié)合染料磺酰羅丹明b(srb)來測量細胞毒性(skehan,etal.,1990,j.natl.cancerinst.82:1107-12)?？商娲?，通過檢測活的而不是死的細胞將四唑鹽(例如mtt)用于針對哺乳動物細胞存活以及增殖的定量的比色測定中(參見例如mosmann,1983,j.immunol.methods65:55-63)?？梢酝ㄟ^測量例如dna片段化對凋亡進行定量。用于體外定量確定dna片段化的商業(yè)光度測量方法是可供使用的。這類測定(包括tunel(它檢測標記的核苷酸結(jié)合到片段化的dna中)和基于elisa的測定)的實例在biochemica,1999,no.2,pp.34-37(rochemolecularbiochemicals)中進行說明。還可以通過測量細胞中形態(tài)改變來確定凋亡。例如，與壞死一樣，可以通過測量某些染料(例如，熒光染料像例如吖啶橙或溴乙啶)的攝取來確定質(zhì)膜完整性的喪失。通過dukeandcohen,currentprotocolsinimmunology(coliganetal.eds.,1992,pp.3.17.1-3.17.16)說明了用于測量凋亡細胞數(shù)量的方法。這些細胞還可以標記有dna染料(例如，吖啶橙、溴乙啶、或碘化丙啶)并且針對染色質(zhì)凝聚和沿著內(nèi)部核膜的邊集對細胞進行觀察。為了確定凋亡可以測量的其他形態(tài)改變包括例如細胞質(zhì)凝聚，膜起泡增加、以及細胞收縮。可以在培養(yǎng)物的貼壁和“漂浮”區(qū)室兩者中對凋亡細胞的存在進行測量。例如，可以通過下面各項對兩個區(qū)室進行收集：去除上清液，對貼壁細胞進行胰蛋白酶作用，在離心洗滌步驟之后(例如，在2000rpm下10分鐘)將配制品合并，并且對凋亡進行檢測(例如，通過測量dna片段化作用)(參見例如piazza,etal.,1995,cancerresearch55:3110-16)。在體內(nèi)方面，可以在適當?shù)膭游锬Ｐ椭袑?61p2f10b治療性組合物的作用進行評估。例如，可以使用異種癌癥模型，其中將癌外植體或傳代的異種移植組織引入到缺乏免疫的動物體內(nèi)，例如裸鼠或scid小鼠(klein,etal.,1997,naturemedicine3:402-408)。例如，pct專利申請wo98/16628和美國專利6,107,540說明了能夠再現(xiàn)原發(fā)腫瘤發(fā)育、微轉(zhuǎn)移、以及特征為晚期疾病的成骨性轉(zhuǎn)移形成的人前列腺癌的多種異種移植模型?？梢允褂脤δ[瘤形成、腫瘤消退或轉(zhuǎn)移等的抑制作用進行測量的測定法來預測療效。在體內(nèi)測定中，對凋亡促進作用進行評估是在評估治療性組合物中有用的。在一個實施方案中，來自用該治療性組合物治療的荷瘤小鼠的異種移植物可以針對凋亡病灶存在進行檢查并且與未治療的對照異種移植物攜帶小鼠進行比較。在治療小鼠的腫瘤中發(fā)現(xiàn)凋亡病灶的程度提供了該組合物療效的指示?？梢詫⒃谇懊娣椒ǖ膶嵺`中使用的治療性組合物配制成包括適合于希望的遞送方法的載體的藥物組合物。適當?shù)妮d體包括當與該藥物組合物結(jié)合時保留該治療組合物的抗腫瘤功能并且通常地不與病人免疫系統(tǒng)發(fā)生反應的任何物質(zhì)。這些實例包括但不限于多種標準藥物載體的任何一種例如無菌磷酸鹽緩沖鹽水溶液、抑菌水等(通常地參見remington’spharmaceuticalsciences16thedition,a.osal.,ed.,1980)。可以溶解并且通過能夠?qū)⒃撝委熃M合物遞送到腫瘤位點的任何途徑來施用這些治療配制品。給藥的潛在有效途徑包括但不限于靜脈內(nèi)、腸胃外、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮內(nèi)、器官內(nèi)、正位的，等等。用于靜脈注射的優(yōu)選配制品包括處于保存的抑菌水、無菌的非保存水、和/或在包含0.9％注射用無菌氯化鈉(usp)的聚氯乙烯或聚乙烯袋中稀釋的溶液中的治療性組合物。治療性蛋白制劑可以凍干并且存儲為無菌粉末(優(yōu)選地在真空下)，并且然后在注射之前在抑菌水(包含例如苯甲醇防腐劑)中或在無菌水中進行重構(gòu)。使用上述方法用于治療癌癥的劑量和給藥方案可以隨方法和模板癌癥而改變，并且通常地將依賴于本領域所理解的大量的其他因素。xii.)一種或多種癌癥的治療將161p2f10b鑒定為在限定集合的組織中正常表達的，但是在癌癥(例如在表i中列出的那些)中也表達的蛋白，開啟了用于治療這類癌癥的多種治療途徑?？偹苤?，靶向抗腫瘤治療甚至當該靶向蛋白表達于正常組織，甚至致命的正常器官組織上時也是有用的。致命的器官是維持生命所必需的一種器官，例如心臟或結(jié)腸。非致命的器官是可以被去除而從個體仍然能夠存活的一種器官。非致命性器官的實例是卵巢、乳房、以及前列腺。在正常組織，甚至致命的正常組織中靶蛋白的表達未破壞將針對該蛋白的靶向劑用作針對其中該蛋白也過表達的某些腫瘤的治療劑。例如，在致命器官中的表達不處于或具有自身有害性。另外地，被認為可有可無的器官例如前列腺和卵巢可以被去除而不影響死亡率。最后，因為免疫豁免一些致命器官不受正常器官表達的影響。免疫豁免的器官是通過血-器官屏障避免血液而進行保護并且因此不能用于免疫治療的器官。免疫豁免器官的實例是腦和睪丸。因此，抑制161p2f10b蛋白活性的治療途徑對于患有表達161p2f10b的癌癥的病人是有用的。這些治療途徑通常落在三個類別中。第一類別調(diào)節(jié)161p2f10b功能，因為它涉及腫瘤細胞生長，這導致了抑制或延遲腫瘤細胞生長或誘導它的殺傷作用。第二類別包括用于抑制161p2f10b蛋白與它的結(jié)合配偶體或與其他蛋白的連接或結(jié)合的多種方法。第三類別包括用于抑制161p2f10b基因的轉(zhuǎn)錄或161p2f10bmrna的翻譯的多種方法。因此，優(yōu)選地使用腫瘤組織的免疫組織化學評估，161p2f10b定量成像、或可靠地指示161p2f10b表達的存在和程度的其他技術(shù)，可以針對161p2f10b表達的存在和水平對癌癥病人進行評估。為了這個目的優(yōu)選腫瘤活組織檢查或手術(shù)樣品的免疫組織化學分析。用于腫瘤組織免疫組織化學分析的方法是本領域熟知的。xiii.)161p2f10b作為基于抗體治療的靶物質(zhì)161p2f10b是用于基于抗體治療策略的一種吸引人的靶物質(zhì)。用于靶向細胞外和細胞內(nèi)分子兩者的多種抗體策略是本領域已知的(參見例如補體和adcc介導的殺傷作用以及使用細胞內(nèi)抗體)。因為161p2f10b是由相對于相應正常細胞不同譜系的癌細胞表達的，制備全身性施用161p2f10b免疫反應性組合物，它們展示優(yōu)秀的選擇性而沒有通過將免疫反應性組合物結(jié)合到非靶向器官和組織上而引起的毒性、非特異性和/或非靶向作用。與161p2f10b的結(jié)構(gòu)域特異性反應的抗體用于全身性地治療癌癥(優(yōu)選地表i的癌癥，更優(yōu)選地腎癌和/或肝癌)，優(yōu)選地以抗體藥物偶聯(lián)物(即adc)形式，其中該偶聯(lián)物具有一種毒素或治療劑。本領域普通技術(shù)人員應當理解的是可以使用這些抗體來特異性地靶向和結(jié)合免疫原性分子例如圖1中所示的161p2f10b序列的免疫原性區(qū)。此外，熟練業(yè)內(nèi)人士應當理解的是將這些抗體偶聯(lián)到細胞毒性劑上是常規(guī)的(參見例如slevers,etal.,blood93:113678-3684(june1,1999))。當將細胞毒性劑和/或治療劑直接地遞送到細胞中時(例如通過將它們偶聯(lián)到對由該細胞表達的分子具有特異性的抗體上(例如，161p2f10b))，細胞毒性劑可以在這些細胞上發(fā)揮它已知的生物作用(即，細胞毒性)。使用抗體-細胞毒性劑偶聯(lián)物來殺死細胞的廣泛多樣的組合物和方法是本領域已知的。在癌癥的背景中，典型的方法要求將生物有效數(shù)量的包括連接到結(jié)合到表達于、易于結(jié)合或定位到細胞表面上的抗原(例如，161p2f10b)上的靶向劑(例如161p2f10bmab，優(yōu)選地h16-7.8)上的選擇的細胞毒性劑和/或治療劑的偶聯(lián)物施用到具有腫瘤的哺乳動物體內(nèi)。一個典型的實施方案是將細胞毒性劑和/或治療劑遞送到表達161p2f10b的細胞中方法，包括將細胞毒性劑偶聯(lián)到免疫特異性地結(jié)合到161p2f10b表位上的抗體上，并且將細胞暴露于該抗體藥物偶聯(lián)物(adc)。另一個說明性實施方案是治療懷疑患有轉(zhuǎn)移癌癥的個體的一種方法，包括將包括治療有效數(shù)量的結(jié)合到細胞毒性劑和/或治療劑上的抗體的藥物組合物胃腸外地施用到所述個體體內(nèi)一個步驟。使用161p2f10b抗體的癌癥免疫治療可以根據(jù)在治療其他類型癌癥(包括但不限于結(jié)腸癌(arlen,etal.,1998,crit.rev.immunol.18:133-138)、多發(fā)性骨髓瘤(ozaki,etal.,1997,blood90:3179-3186,tsunenari,etal.,1997,blood90:2437-2444)、胃癌(kasprzyk,etal.,1992,cancerres.52:2771-2776)、b細胞淋巴瘤(funakoshi,etal.,1996,j.immunother.emphasistumorimmunol.19:93-101)、白血病(zhong,etal.,1996,leuk.res.20:581-589)、結(jié)直腸癌(moun,etal.,1994,cancerres.54:6160-6166；velders,etal.,1995,cancerres.55:4398-4403)、以及乳腺癌(shepard,etal.,1991,j.clin.immunol.11:117-127))中已經(jīng)成功地使用的多種途徑來實現(xiàn)。一些治療途徑涉及將裸抗體偶聯(lián)到一種毒素或放射性同位素上，例如將y91或i131對應地偶聯(lián)到抗cd20抗體上(例如，zevalintm,idecpharmaceuticalscorp.或bexxartm,coulterpharmaceuticals)，而其他的涉及抗體和其他治療劑例如herceptintm(曲妥珠單抗)與紫杉酚(genentech,inc.)一起的共同給藥。在一個優(yōu)選的實施方案中，這些抗體可以偶聯(lián)一種細胞毒性劑(上述)，優(yōu)選地命名為mmaf(seattlegenetics)的一種auristatin衍生物。在本發(fā)明治療方法中使用的優(yōu)選的單克隆抗體是全人類的以及以高親和性特異性地結(jié)合到靶物質(zhì)161p2f10b抗原上的那些。xiv.)161p2f10badc混合物本發(fā)明的治療方法考慮了單個的161p2f10badc以及不同mab(即，161p2f10bmab或結(jié)合另一個蛋白的mab)的組合，或混合物的施用。這類mab混合物可以具有某些優(yōu)點，因為它們包含靶向不同表位的mab，利用不同效應物機理或直接地使細胞毒性mab與依賴免疫效應物官能度的mab相結(jié)合。這類mab以結(jié)合方式可以展示協(xié)同的療效。此外，161p2f10bmab可以與其他治療形式相伴地給藥，包括但不限于多種化學治療劑和生物試劑、雄激素阻斷劑、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，il-2、gm-csf)、手術(shù)或輻射。在一個優(yōu)選的實施方案中，這些161p2f10bmab以偶聯(lián)的形式施用。通過能夠?qū)⑦@些抗體遞送到腫瘤細胞的任何途徑來施用這些161p2f10badc配制品。給藥途徑包括但不限于靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮內(nèi)、等等。治療通常涉及通過可接受的給藥途徑(例如靜脈注射(iv)，典型地以該范圍內(nèi)的一個劑量，包括但不限于0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、或25mg/kg體重)反復施用161p2f10badc制劑?？傮w上，10-1000mgmab/周范圍內(nèi)的劑量是有效的并且是良好耐受的?；谠谥委熮D(zhuǎn)移性乳腺癌中使用(曲妥珠單抗)的臨床經(jīng)歷，約4mg/kg病人體重iv的初始負荷劑量，緊接著約2mg/kgivmab制劑的每周劑量代表了可接受的給藥方案。優(yōu)選地，當90分鐘或更長時間輸注時施用初始負荷劑量。當30分鐘或更長時間輸注時，施用定期維持劑量，其條件是該初始劑量是良好耐受的。如本領域普通技術(shù)人員所理解的，在具體情況中多種因素可能影響理想的給藥方案。這類因素包括例如所使用的mab的結(jié)合親和性和半衰期、在病人體內(nèi)161p2f10b表達程度、循環(huán)脫落的161p2f10b抗原的程度、希望的穩(wěn)態(tài)抗體濃度水平、治療頻率、以及與本發(fā)明治療方法一起結(jié)合使用的化學治療劑或其他試劑的影響，以及特定病人的健康情況?？蛇x地，可以針對給定樣品中161p2f10b的水平(例如，循環(huán)的161p2f10b抗原和/或161p2f10b表達細胞的水平)對這些病人進行評估從而協(xié)助確定最有效的給藥方案等。這類評估還用于貫穿治療的監(jiān)測目的，并且與其他參數(shù)(例如，在膀胱癌治療中尿細胞學和/或immunocyt水平，或通過類比前列腺癌治療中血清psa水平)的評估相結(jié)合用于精確計量治療的成功。本發(fā)明的一個目的是提供161p2f10badc，它們抑制或延遲了腫瘤細胞(優(yōu)選表i中的腫瘤細胞)的生長。本發(fā)明一個另外的目的是提供使用這類161p2f10badc，并且具體地使用與其他藥物或免疫活性治療相結(jié)合的這類161p2f10badc來抑制血管發(fā)生以及其他生物功能并且由此減少哺乳動物體內(nèi)(優(yōu)選人類)腫瘤生長的方法。xv.)聯(lián)合治療在一個實施方案中，當用161p2f10badc與化學治療劑或輻射或它們的組合相結(jié)合來治療腫瘤(包括人類腫瘤)時存在協(xié)同作用。換言之，當與化學治療劑或輻射或它們的組合結(jié)合時，通過161p2f10badc抑制腫瘤生長得以增強超過預期。例如可以通過與從僅161p2f10badc的治療可以預期的相比較使用聯(lián)合治療更大地抑制腫瘤生長或用161p2f10badc和化學治療劑或輻射治療的疊加作用顯示了協(xié)同作用。優(yōu)選地，通過緩解癌癥證明了協(xié)同作用，其中緩解不是從來自161p2f10badc的治療亦或使用161p2f10badc和化學治療劑或治療的加性組合的治療中預期的。使用161p2f10badc以及化學治療或輻射或兩者的組合用于抑制腫瘤細胞生長的方法包括在開始化學治療或輻射治療，以及它們的任何組合(即，在開始化學治療和/或放射治療之前和其間、之前和之后、其間和之后、或之前、其間、以及之后)之前、其間、或之后施用161p2f10badc。例如，典型地在開始放射治療和/或化學治療之前1天至60天之間，優(yōu)選地在3天至40天之間，更優(yōu)選地在5天至12天之間，施用161p2f10badc。然而，依賴于治療方案和具體病人需要，以可以提供最有效治療并且最終延長病人生命的方式來執(zhí)行該方法?；瘜W治療劑的施用能夠以多種方式實現(xiàn)包括全身性地通過腸胃外和腸內(nèi)途徑。在一個實施方案中，這些161p2f10badc和化學治療劑是以單獨分子的形式施用的?；瘜W治療劑或化學治療的具體實例包括順鉑、達卡巴嗪(dtic)、更生霉素、氮芥(mechlorethamine)(氮芥(nitrogenmustard))、鏈脲菌素、環(huán)磷酰胺、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、多柔比星(doxorubicin)(多柔比星(adriamycin))、柔紅霉素、丙卡巴肼、絲裂霉素、阿糖胞苷、依托泊甙、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、長春堿、長春新堿、博來霉素、紫杉酚(紫杉醇)、多西紫杉醇(泰索帝)、阿地白介素、天冬酰胺酶、白消安、卡鉑、克拉屈濱、達卡巴嗪、氟尿苷、氟達拉濱、羥基脲、異環(huán)磷酰胺、干擾素α、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法侖、巰嘌呤、普利霉素、米托坦、培門冬酶、噴司他丁、哌泊溴烷、普利霉素、鏈脲菌素、他莫昔芬、替尼泊甙、睪內(nèi)酯、硫鳥嘌呤、塞替派、尿嘧啶氮芥、長春瑞濱、苯丁酸氮芥、紫杉醇以及它們的混合物。與161p2f10badc相結(jié)合使用的輻射源對于有待治療的病人而言可以是外部的亦或內(nèi)部的。當該來源對于該病人而言是外部的時，該治療稱為外線束放射治療(ebrt)。當該輻射源對于該病人而言是內(nèi)部的時，該治療稱為近距離放射治療(bt)。上述治療方案可以進一步與另外的癌癥治療劑和/或方案相結(jié)合，例如另外的化學治療、癌癥疫苗、信號轉(zhuǎn)導抑制劑類、用于治療異常細胞生長或癌癥的試劑類、抗體類(例如，如wo2005/092380(pfizer)中所述的抗-ctla-4抗體)或通過結(jié)合到igf-1r上抑制腫瘤生長的其他配體類、以及細胞因子類。當該哺乳動物經(jīng)受另外的化學治療時，可以使用上述的化學治療劑。另外地，可以使用生長因子抑制劑類、生物應答調(diào)節(jié)劑類、抗激素治療、選擇性雌性激素受體調(diào)節(jié)劑類(serm)、抗血管生成抑制劑類、以及抗雄性激素類。例如，可以使用抗激素類，例如抗雌激素類例如諾瓦得士(他莫昔芬)或抗雄激素類例如康士得(4'-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羥基-2-甲基-3-'--(三氟甲基)地恩丙胺)。上述治療途徑可以與廣泛多樣的手術(shù)、化學治療或放射治療方案中任何一種相結(jié)合。本發(fā)明的治療途徑可以能夠使用減少劑量的化學治療(或其他治療)和/或更少頻繁的給藥，對于所有病人而言并且尤其地對于不能良好地耐受化學治療劑的毒性的那些人而言這是一個優(yōu)點xvi.)制造的試劑盒/物品為了用于在此所述的實驗室、預測、預防、診斷以及治療應用中，這些試劑盒是在本發(fā)明范圍內(nèi)的。這類試劑盒可以包括一個載體、包裝、或被區(qū)室化用來接受一個或多個例如小瓶、管等等這類容器的一個容器，該一個或多個容器的每一個包含有待用于本方法中的這些分離元件中的一個，連同包括使用指導(例如在此所述的用途)的標簽或插入物一起。例如該一個或多個容器可以包括一種抗體，該抗體是或可以是可檢出地標記的。這些試劑盒可以包括包括一個藥物單元(drugunit)的容器。該試劑盒可以包括全部或部分的圖2、或圖3中的氨基酸序列或它們的類似物，或編碼這類氨基酸序列的核酸分子。本發(fā)明的試劑盒典型地可以包括上述容器以及一個或多個與其相關聯(lián)的其他容器，這些其他容器包括從商業(yè)以及使用者觀點看令人希望的材料，包括緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器；載體、包裝、容器、小管和/或管、列出內(nèi)容和/或使用指導的標簽、以及具有使用指導的包裝插入物。標簽可以存在與該容器上或與其一起存在用來指示該組合物是用于特異性治療或非治療性應用，例如預測的、預防的、診斷的、或?qū)嶒炇业膽?，并且還可以指示用于體內(nèi)或體外使用的指導，例如在此所述的那些。這些指導和/或其他信息還可以包括在一個或多個插入物或標簽上，該一個或多個插入物或標簽與該試劑盒一起包括或包括在其上。該標簽可以在該容器上或與其相關聯(lián)。當形成標簽的字母、數(shù)字或其他字符被模制或蝕刻到該容器本身中時，標簽可以是在容器上的；當標簽存在于也保持該容器的容器或載體中時(例如，以包裝插入物的形式)，該標簽可以是與容器相關聯(lián)的。該標簽可以指示該組合物是用于診斷、治療、預防或預測一種病癥，例如在表i中列出的組織癌癥。術(shù)語“試劑盒”和“制造物品”可以作為同義詞使用。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了包含組合物例如抗體藥物偶聯(lián)物(adc)的制造的一個或多個物品(例如，用于診斷、預測、預防和/或治療組織癌癥(例如表i中列出的那些)的材料)。該制造的物品典型地包括至少一個容器以及至少一個標簽。適當?shù)娜萜靼ɡ缙?、小瓶、注射器、以及試管。這些容器可以從多種材料(例如玻璃、金屬或塑料)形成。該容器可以容納一種或多種氨基酸序列、一種或多種小分子、一種或多種核酸序列、一種或多種細胞群和/或一種或多種抗體。在另一個實施方案中，容器還包括用于評估在細胞或組織中161p2f10b的蛋白表達，或用于相關實驗室、預測、診斷、預防和治療目的的一種抗體，其結(jié)合片段或特異性結(jié)合蛋白；這類用途的指示和/或指導可以包括在這類容器上或與其一起，用于這些目的的試劑和其他組合物或工具也可以如此?？商娲卦撊萜骺梢匀菁{有效地治療、診斷、預測或預防病癥的組合物并且可以具有無菌進入端口(例如，該容器可以是一種靜脈注射溶液袋或具有可通過皮下注射針刺穿塞子的小瓶)。該組合物中的活性劑可以是特異性地結(jié)合到161p2f10b上的一種抗體藥物偶聯(lián)物。該制造的物品可以進一步包括一個第二容器，該第二容器包括一種藥學上可接受的緩沖劑例如磷酸鹽緩沖鹽水、林格溶液和/或右旋糖溶液。它可以進一步包括從商業(yè)和使用者觀點看令人希望的其他材料，包括其他緩沖劑、稀釋劑、過濾器、攪拌器、針、注射器、和/或具有使用指示和/或指導的包裝插入物。實施例通過下面幾個實例對本發(fā)明不同方面進行進一步說明和展示，這些實例不旨在限制本發(fā)明的范圍。實施例1161p2f10b抗原使用本領域已知的抑制消減雜交法(ssh)發(fā)現(xiàn)該161p2f10b基因序列。使用標準方法從由腎癌病人體內(nèi)得到的cdna鑒別182bp的161p2f10bssh序列。從腎癌病人樣品中分離161p2f10b的全長cdna克隆。cdna是3858bp長度并且編碼一個875氨基酸orf(參見，圖1)。161p2f10b顯示與enpp3的同源性(參見,buhring等人，《血液》97:3303-3305(2001)。使用本領域已知的標準方法針對染色體6q22繪制161p2f10b基因圖。對于進一步參考，參見美國專利號7,279,556(agensys公司,圣塔莫尼卡市,加利福尼亞州)、美國專利號7,405,290(agensys公司，圣塔莫尼卡市，加利福尼亞州)、美國專利號7,067,130(agensys公司，圣塔莫尼卡市，加利福尼亞州)，以及美國專利號7,226,594(agensys公司，圣塔莫尼卡市，加利福尼亞州)。實施例2161p2f10b單克隆抗體(mab)的產(chǎn)生在一個實施方案中，針對161p2f10b的治療性單克隆抗體(“mab”)包括與可以結(jié)合、內(nèi)化、破壞或調(diào)節(jié)161p2f10b生物功能的蛋白特異性表位進行反應的那些，例如可以破壞與配體、底物、以及結(jié)合配偶子相互作用的那些。用于產(chǎn)生這類mab的免疫原包括設計成編碼或包含細胞外結(jié)構(gòu)域或全部161p2f10b蛋白序列的那些，以及預測為包含從氨基酸序列的計算機分析預測具有抗原性的功能性基序的區(qū)域。這些免疫原包括肽類和重組蛋白類例如標記5-161p2f10b(一種純化的哺乳動物細胞衍生的his標記的蛋白)。此外，使用通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導用來表達高水平161p2f10b而工程化的細胞，例如rat1-161p2f10b，來免疫小鼠。使用技術(shù)(amgenfremont)來產(chǎn)生針對161p2f10b的mab，其中該鼠類的重鏈和κ輕鏈基因座已經(jīng)被失活并且大部分人類重鏈和κ輕鏈免疫球蛋白基因座已經(jīng)被插入。命名為h16-7.8的mab是從免疫具有標簽5-161p2f10b細胞的生產(chǎn)人γ2的xenomice來產(chǎn)生的。該161p2f10bmabh16-7.8特異性地結(jié)合到表達重組161p2f10b(seqidno:2)的細胞以及在癌癥異種移植細胞中表達的內(nèi)源性細胞表面161p2f10b上。在用試劑(lifetechnologies,gibcobrl)從對應的雜交瘤細胞中分離mrna之后，對161p2f10bmabh16-7.8的dna編碼序列進行確定。使用下面實驗方案從雜交瘤細胞對抗-161p2f10bh16-7.8重鏈和輕鏈可變核酸序列進行測序。用試劑(lifetechnologies,gibcobrl)將分泌h16-7.8的雜交瘤細胞溶解。將總rna純化并且定量。使用superscriptpreamplification系統(tǒng)用寡聚(dt)12-18引物從總rna產(chǎn)生第一鏈cdna。使用人免疫球蛋白可變重鏈引物，以及人免疫球蛋白可變輕鏈引物來擴增第一鏈cdna。對這些pcr產(chǎn)物進行測序并且對可變重鏈和輕鏈區(qū)進行確定。可變重鏈和輕鏈區(qū)的核酸和氨基酸序列列于圖2和圖3中。該h16-7.8的重鏈可變區(qū)是由范圍從seqidno:7的第20位置q殘基至第142位置的s殘基的氨基酸序列組成的，并且h16-7.8的輕鏈可變區(qū)是由范圍從seqidno:8的第20位置e殘基至第127位置r殘基的氨基酸序列組成的。該h16-7.8的重鏈是由范圍從seqidno:7的第20位置q殘基至第468位置k殘基的氨基酸序列組成的并且該h16-7.8的輕鏈是由范圍從seqidno:8的第20位置e殘基至第233位置c殘基的氨基酸序列組成的。h16-7.8與人vh4-31/d5-12/jh6種系和人a26/jk1種系的比對列于圖4a-4b中。實施例3使用重組dna方法表達h16-7.8為了在轉(zhuǎn)染的細胞中重組地表達h16-7.8，將h16-7.8重鏈和輕鏈序列(seqidno:7,從20至468，并且輕鏈為seqidno:8，從20至233)克隆到表達載體中。將完整的h16-7.8人重鏈和輕鏈盒克隆到克隆載體中cmv啟動子/增強子的下游。將聚腺苷酸化作用位點包括在該mab編碼序列的下游。將表達重組體h16-7.8的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染到cho細胞中并且從這些cho細胞中分泌重組體h16-7.8。通過elisa來測量igg滴度。這些結(jié)果證實igg以及該重鏈和輕鏈的表達和良好的共表達。通過流式細胞術(shù)針對結(jié)合到細胞表面161p2f10b上對重組體h16-7.8進行評估(圖5)。用來自雜交瘤亦或來自用h16-7.8重鏈和輕鏈載體構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的cho細胞的重組體h16-7.8對3t3-對照和3t3-161p2f10b細胞進行染色。通過流式細胞術(shù)來檢測結(jié)合。結(jié)果顯示在cho細胞中重組表達的h16-7.8被分泌并且特異性地結(jié)合到細胞表面161p2f10b上(圖5)。在其肽序列方面，對重組體h16-7.8進行表征。h16-7.8的肽譜分析證實相對于使用下面各項確定的序列：lys-c消化(用lc-ms/ms)、asp-n消化(用lc-ms/ms)、以及n端序列(通過埃德曼降解)，h16-7.8推論的氨基酸序列是正確的實施例4h16-7.8的抗體藥物偶聯(lián)使用下面列出的馬來酰亞胺己酰基(mc)不可切割的接頭將h16-7.8(圖2)偶聯(lián)到命名為mmaf(式xviv；單甲基auristatinf)的多拉纈氨酸-纈氨酸-多拉異亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸上(aurastatin衍生物)：使用表vi中列出的合成方法來完成(safc,madison,wi)將馬來酰亞胺己酰胺(mc)不可切割的接頭合成到該mmaf(seattlegenetics,seattle,wa)上從而產(chǎn)生細胞毒性的mcmmaf。然后，使用下面實驗方案來制造命名為h16-7.8mcmmaf的本發(fā)明抗體藥物偶聯(lián)物(adc)。簡言之，通過透析過濾對處于10mm琥珀酸鹽，ph4.5中的10mg/mlh16-7.8溶液進行緩沖液交換。該緩沖劑交換的目的是去除h16-7.8配制品緩沖劑組分并且用針對隨后的“還原”步驟優(yōu)化的更適合的緩沖劑對它進行替換。對抗6透析體積(dv)的硼酸鈉緩沖劑對抗體進行透析過濾并且濃縮至10±1mg/ml，從該系統(tǒng)沖洗，稀釋至7.5mg/ml并且進行0.2μm過濾。隨后，添加edta至在該反應混合物中5mm終濃度。然后，用tris-(2-羧乙基)-膦鹽酸鹽(tcep)將h16-7.8的二硫鍵部分地還原從而形成游離的巰基(sh)。在37℃下完成該過程。在該反應期間edta以5mm濃度存在從而螯合可能引起不希望的sh再氧化的任何二價金屬陽離子。在該還原步驟結(jié)束時，將該反應溶液的溫度降低至20℃并且進行分析用來確定游離sh的摩爾比率并且用來確保產(chǎn)生每個mab≥3.9sh。為了偶聯(lián)，在隔離器中稱出藥物-接頭mcmmaf并且溶于dmso中至5.5mg/ml的濃度。使該部分還原的h16-7.8上的sh基團與藥物-接頭mcmmaf進行反應從而形成該偶聯(lián)物(h16-7.8mcmmaf)。以設定的藥物對抗體的摩爾當量添加處于dmso中的mcmmaf。在20℃下實現(xiàn)這個步驟。在1h孵化期之后，用n-乙?；?半胱氨酸來淬滅反應中的任何過量的藥物-接頭，因此消除了任何反應性藥物-接頭，并且將它轉(zhuǎn)化成更易于去除和通過分析方法檢測的加合物。然后，在添加相對于mcmmaf一(1)摩爾當量的n-乙?；?半胱氨酸之后將該混合物攪拌另外十五(15)分鐘。然后，進行超濾/透析過濾用來去除dmso，處理雜質(zhì)，并且對該adc進行緩沖劑交換成為配置品緩沖劑。因此通過用8透析體積的20mm組氨酸，ph5.2配制品緩沖劑超濾/透析過濾該抗體藥物偶聯(lián)物(adc)來去除過量淬滅的mcmmaf。在完成第8透析體積之后，將溶液再循環(huán)并且針對蛋白質(zhì)濃度進行測定。用20mm組氨酸，10％海藻糖，ph5.2的緩沖劑將該偶聯(lián)物調(diào)節(jié)到六(6)±0.5mg/ml。然后添加聚山梨酯20，混合至均勻，并且通過0.2μm過濾器進行無菌過濾。得到的抗體藥物偶聯(lián)物(adc)被命名為h16-7.8mcmmaf并且具有下式：其中mab是h16-7.8(圖2和圖3)并且p是從1至12。實施例5h16-7.8和h16-7.8mcmmaf的表征使用在名稱為實例2“產(chǎn)生161p2f10b單克隆抗體(mab)”的實例中列出的步驟產(chǎn)生h16-7.8。另外地，使用在名稱為“h16-7.8的抗體藥物偶聯(lián)”的實例中列出的步驟產(chǎn)生結(jié)合161p2f10b的抗體藥物偶聯(lián)物。使用本領域已知測定方法的組合對h16-7.8和h16-7.8mcmmafadc進行篩選、鑒別，以及表征。a.通過facs確定細胞結(jié)合以及親和力針對對于在ku812細胞上內(nèi)源性表達的161p2f10b的結(jié)合親和力對h16-7.8和h16-7.8mcmmaf進行測試。簡言之，在4℃下在160nm至0.0001nm的終濃度下將h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的十一(11)個稀釋物與ku812細胞(50,000個細胞/孔)一起進行孵化過夜。在孵化結(jié)束時，在4℃下對細胞進行洗滌并且與抗-higg-pe檢測抗體一起孵化45min。在洗滌未結(jié)合的檢測抗體之后，通過facs對細胞進行分析。獲得了平均熒光強度(mfi)值(參見，表iv)。將mfi值輸入到graphpadprisim軟件中并且使用y＝bmax*x/(kd+x)的單位點結(jié)合(雙曲線)等式進行分析從而產(chǎn)生圖6中所示的h16-7.8或h16-7.8mcmmaf飽和曲線。bmax是在h16-7.8或h16-7.8mcmmaf最大地結(jié)合到161p2f10b上的mfi值；kd是h16-7.8或h16-7.8mcmmaf結(jié)合親和力，它是達到半最大結(jié)合所需要的h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的濃度。在ku812細胞表面上內(nèi)源性地表達的161p2f10b相關蛋白上，h16-7.8和h16-7.8mcmmaf計算的親和力(kd)對應地是0.06nm和0.19nm。為了確定h16-7.8和h16-7.8mcmmaf結(jié)合到在腎癌細胞表面上表達的內(nèi)源性161p2f10b相關蛋白上，用10μg/ml天然h16-7.8、h16-7.8mcmmaf、或同種型對照人igg2對人ugk-3細胞(病人衍生的透明細胞腎癌)和rxf-393細胞(透明細胞腎癌)進行染色并且通過facs進行評估。圖7中的結(jié)果(左圖)證明了用h16-7.8對兩種不同腎腫瘤細胞進行強染色(灰色線)，但是用對照mab則沒有這種情況(填充的直方圖)。右側(cè)圖證明用h16-7.8mcmmaf對相同的腎腫瘤細胞進行類似的強染色(灰色線)(圖7；右圖)。這些結(jié)果表明h16-7.8和h16-7.8mcmmaf兩者都結(jié)合在人癌細胞表面上表達的天然161p2f10b抗原。偶聯(lián)天然h16-7.8從而產(chǎn)生h16-7.8mcmmaf未改變它的細胞表面結(jié)合到在人癌細胞上表達的天然161p2f10b抗原上。實施例6通過h16-7.8mcmmaf介導的細胞毒性在工程化用來表達161p2f10b的ku812細胞中對h16-7.8mcmmaf介導161p2f10b依賴性細胞毒性的能力進行評估。對于這個測定，在第0天將2000個活性ku812細胞一式三份地鋪板并且運行恢復過夜。第二天，添加與mcmmaf偶聯(lián)的h16-7.8mcmmaf或?qū)φ誱ab的不同批次的1:4連續(xù)稀釋物從而產(chǎn)生圖8中指示的終濃度。允許將這些細胞孵化六(6)天，這時將20μl阿爾瑪藍添加到各孔中。將這些孔板孵化另外四(4)小時并且使用540nm激發(fā)波長和620nm發(fā)射波長在熒光酶標儀上讀取熒光強度。圖8中的結(jié)果表明h16-7.8mcmmaf的兩個批次都有效地抑制ku812細胞的增殖。對應地，針對批次(1)和批次(2)，經(jīng)確定ic50為0.2nm和0.1nm。使未結(jié)合ku812細胞的完全人類對照mab與mcmmaf偶聯(lián)從而產(chǎn)生3.9(+/-0.2)的dar。該對照adc未抑制ku812細胞增殖進一步證明細胞毒性的特異性。因此，這些結(jié)果表明h16-7.8mcmmaf可以選擇性地將細胞毒性藥物遞送到表達161p2f10b的細胞中，導致將它們殺死。實施例7h16-7.8mcmmaf抑制體內(nèi)腫瘤生長在腫瘤組織細胞表面上161p2f10b的顯著表達，連同在正常組織中它的限制性表達一起，使161p2f10b成為用于抗體治療以及類似地通過adc進行治療的良好目標。因此，在人腎癌異種移植小鼠模型中對h16-7.8mcmmaf的治療效果進行評估。在小鼠癌異種移植模型中對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移形成上抗體藥物偶聯(lián)物療效進行研究(例如，皮下的并且正位地)。在雄性scid小鼠的右側(cè)腹中通過注射與基質(zhì)膠(collaborativeresearch)以1:1稀釋混合的5x104-106個癌細胞來產(chǎn)生皮下(s.c.)腫瘤。為了測試在腫瘤形成方面adc的療效，即，在腫瘤細胞注射的同一天開始adc注射。作為對照，用純化的人igg或pbs亦或識別在人細胞中未表達的無關抗原的純化的mab來注射小鼠。在初步研究中，在腫瘤生長方面在對照igg或pbs之間未發(fā)現(xiàn)差異。通過測徑器測量來確定腫瘤尺寸，并且將腫瘤體積計算為長x寬x高。將具有直徑大于1.5cm皮下腫瘤的小鼠處死。通過注射皮下植入雄性scid小鼠體內(nèi)的150萬至200萬個細胞來實現(xiàn)小鼠體內(nèi)腎腫瘤的生長。針對一般性健康情況、身體活性、以及直至它們即將死亡的外觀對小鼠進行監(jiān)測。在處死時，可以對小鼠進行檢查用來確定腫瘤負荷并且收獲其他器官用來評估轉(zhuǎn)移到遠側(cè)位點?？商娲?，可以使用死亡作為終點。然后將這些小鼠分成用于適當治療的組，通過靜脈注射來施用161p2f10b或?qū)φ誱ab。異種移植癌癥模型的一個優(yōu)點是能夠研究新生血管形成以及血管發(fā)生。腫瘤生長部分地依賴于新血管發(fā)育。雖然毛細血管系統(tǒng)和發(fā)展血液網(wǎng)絡具有宿主起源，通過異種移植腫瘤對新血管系統(tǒng)的創(chuàng)建和構(gòu)造進行調(diào)節(jié)(davidoff,etal.,clincancerres.(2001)7:2870；solesvik,etal.,eurjcancerclinoncol.(1984)20:1295)。根據(jù)本領域已知的步驟(例如通過腫瘤組織及其周圍微環(huán)境的ihc分析)對抗體和小分子對新生血管形成的作用進行研究。h16-7.8mcmmaf抑制了腎癌異種移植物的形成。這些結(jié)果表明利用h16-7.8mcmmaf來治療局部和晚期癌癥，以及優(yōu)選地在表i中列出的那些癌癥。161p2f10badc：如在名稱為“產(chǎn)生161p2f10b單克隆抗體(mab)”的實例中所述產(chǎn)生抗161p2f10b的單克隆抗體。進一步地，如名稱為“h16-7.8的抗體藥物偶聯(lián)”的實例中所述將這些mab偶聯(lián)到毒素上從而形成h16-7.8mcmmaf。通過facs以及本領域已知的其他方法來表征該h16-7.8mcmmaf用來確定它結(jié)合161p2f10b的能力。細胞系和異種移植物：在補充有l(wèi)-谷氨酰胺和10％fbs的rpmi中維持這些rfx-393細胞。通過在scid小鼠體內(nèi)連續(xù)增殖來維持這些ug-k3和skrc-01異種移植物。在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌異種移植物ug-k3中h16-7.8mcmmaf的療效在這個實驗中，通過在scid小鼠體內(nèi)連續(xù)傳代來維持病人衍生的人腎癌異種移植物ug-k3。無菌地收獲大塊腫瘤并且切碎成小塊。使用liberaseblendzyme(rocheappliedscience,indianapolis,in)將這些腫瘤塊酶消化成單細胞懸浮液。將1.5×106個細胞注入單個scid小鼠的側(cè)腹中并且允許這些腫瘤未處理地生長直至它們達到100mm3的適當體積。將這些動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組，h16-7.8對照以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注在第0天以10mg/kg將h16-7.8mcmmaf和h16-7.8給藥一次。施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量對腫瘤生長進行監(jiān)測直至研究結(jié)束。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。當腫瘤達到約1000mm3時，將對照組動物人道地安樂處死。在處死之前對h16-7.8mcmmaf治療組的動物進行監(jiān)測持續(xù)另外兩周。當可獲得兩個對照組的數(shù)據(jù)時，在最后的時間點使用具有α＝0.05的克魯斯凱-沃利斯檢驗進行統(tǒng)計分析。這些結(jié)果證明在所檢查的全部劑量和用方案下h16-7.8mcmmaf治療ug-k3腎透明細胞異種移植腫瘤導致了scid小鼠體內(nèi)腫瘤生長的顯著抑制(圖9)。通過h16-7.8mcmmaf建立的正位ug-k3異種移植物的生長抑制在這個實驗中，使用病人衍生的ug-k3腫瘤異種移植物對h16-7.8mcmmaf抑制正位生長的建立的腎腫瘤生長的能力進行評估。簡言之，在第0天對大塊的ug-k3腫瘤進行酶消化并且將150萬個活細胞以手術(shù)方式植入到雄性scid小鼠的腎臟中。允許這些腫瘤生長7天，這時將這些動物隨機化到4個不同治療組中(n＝10/組)。隨機化到組a的動物接受5mpk的對照adc，組b接受3mg/kg的h16-7.8mcmmaf并且組c接受5mg/kg的h16-7.8mcmmaf，每4天進行給藥持續(xù)共4個劑量。組d接受10mg/kg的h16-7.8mcmmaf一次。在研究結(jié)束時(第41天)，將動物處死并且在電子天平上對右腎和左腎進行稱量。通過從攜帶腫瘤的右腎重量中減去無腫瘤對側(cè)腎的重量來確定在曲線圖上繪制的腫瘤重量。這些結(jié)果證明在所檢查的所有劑量和方案下用h16-7.8mcmmaf治療ug-k3腎透明細胞移植物腫瘤導致顯著地抑制腫瘤生長(圖10)。在所有h16-7.8mcmmaf治療組(b、c、以及d)中腫瘤重量小于對照治療組中腫瘤重量的1％。這些差異是高度統(tǒng)計顯著的(p<0.0001,anova)。在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌異種移植物rxf-393中h16-7.8mcmmaf的療效在這個實驗中，將人腎癌細胞rxf-393(0.5×106個細胞/小鼠)注射到單個小鼠的側(cè)腹中并且允許這些腫瘤未處理地生長直至它們達到100mm3的適當體積。然后將這些動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組，h16-7.8治療組以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注每周一次地以10mg/kg劑量施用h16-7.8mcmmaf和h16-7.8持續(xù)共2個劑量。施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl的劑量施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量來監(jiān)測腫瘤生長直至研究結(jié)束。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。當腫瘤達到約1000mm3時，將對照組的動物人道地安樂處死。在處死之前對h16-7.8mcmmaf治療組的動物進行監(jiān)測持續(xù)另外兩周。這些結(jié)果證明在所檢查的所有劑量和方案下(包括單劑量)用h16-7.8mcmmaf治療rfx-393人腎癌異種移植腫瘤導致顯著地抑制scid小鼠體內(nèi)腫瘤生長。當可以獲得兩個對照組中的數(shù)據(jù)時在最后時間點使用具有α＝0.05的克魯斯凱-沃利斯檢驗進行統(tǒng)計分析(圖11)。在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的人腎癌skrc-01中h16-7.8對比h16-7.8mcmmaf的療效研究在另一個實驗中，將人腎癌細胞skrc-01(0.8×106細胞/小鼠)注射到單個小鼠的側(cè)腹中。允許這些細胞未處理地生長直至它們達到100mm3的適當體積。在第0天當腫瘤達到100mm3時，將這些動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf治療組、h16-7.8治療組以及5％右旋糖對照。通過靜脈推注每四天以4mg/kg劑量施用h16-7.8mcmmaf和h16-7.8持續(xù)共4個劑量。施用的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μl的劑量施用5％右旋糖對照。每3至4天使用測徑器測量來監(jiān)測腫瘤生長。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。這些結(jié)果表明在所有劑量下(包括單劑量)該adch16-7.8mcmmaf顯著地抑制了skrc-01腫瘤形成的生長，而裸mabh16-7.8沒有影響。因此，與裸抗體h16-7.8相比較adch16-7.8mcmmaf具有顯著地更突出的影響(圖12)。在scid小鼠體內(nèi)皮下建立的ug-k3中h16-7.8mcmmaf對比其他161p2f10b抗體藥物偶聯(lián)物(adc)的療效研究在另一個實驗中，將人腎癌細胞ug-k3(1.5×106個細胞/小鼠)注射到個體小鼠的側(cè)腹中。允許這些腫瘤未處理地生長直至它們達到100mm3的適當體積。在第0天當腫瘤達到100mm3時，將這些動物隨機地分配到下面同齡組中：h16-7.8mcmmaf、h16-7.8vcmmae、以及h16-1.11mcmmaf、以及h16-1.11vcmmae、pbs對照、以及對照mab-vcmmae治療組。在第0天以10mg/kg劑量將所有抗體藥物偶聯(lián)物(adc)給藥一次。所施用的每個adc的數(shù)量是基于在給藥之前立即獲得的每個動物的個體體重。以每個動物150μ/l的劑量施用該pbs對照。每3至4天使用測徑器測量來監(jiān)測腫瘤生長。將腫瘤體積計算為寬度2×長度/2，其中寬度是最小尺寸并且長度是最大的。這些結(jié)果表明adch16-7.8vcmmae和h16-1.11vcmmae未抑制腫瘤形成生長。另外地，是第一個三十(30)天期間h16-7.8mcmmaf和h16-1.11mcmmaf兩者都顯著地抑制ug-k3腫瘤形成的生長。在第三十(30)天之后，當與h16-1.11mcmmaf相比較時，該h16-7.8mcmmaf具有顯著地更突出的影響(圖13)。實施例8通過使用161p2f10badc來治療和診斷人類癌的人類臨床試驗根據(jù)本發(fā)明使用特異性地結(jié)合到161p2f10b上的161p2f10badc，并且用于治療某些腫瘤，優(yōu)選地在表i中列出的那些。與這些指示的每一項相結(jié)合，成功地進行兩種臨床方法。i.)輔助療法：在輔助治療中，用161p2f10badc與化學治療或抗腫瘤劑和/或放射治療或它們的組合相結(jié)合來治療病人。通過將161p2f10badc添加到標準的第一和第二線療法中，在標準實驗方案下對原發(fā)癌目標(例如在表i中列出的那些)進行治療。實驗方案設計著手解決通過下面實例評估的效率，包括但不限于原發(fā)或轉(zhuǎn)移損害的腫瘤質(zhì)量減少，無進展存活率的增加，總存活率，病人健康的改善，疾病穩(wěn)定性，以及降低標準化學治療劑和其他生物劑的常規(guī)劑量的能力。這些劑量減少允許通過減少化學治療或生物劑的劑量相關毒性進行另外的和/或延長的治療。這些161p2f10badc與化學治療劑或抗腫瘤劑相結(jié)合用于幾個輔助臨床試驗中。ii.)單一療法：在腫瘤單一療法中與使用161p2f10badc相結(jié)合，在無化學治療劑或抗腫瘤劑下將161p2f10badc施用到病人體內(nèi)。在一個實施方案中，在具有廣泛轉(zhuǎn)移性疾病的末期癌癥病人體內(nèi)臨床地進行單一療法。實驗方案設計著手解決如通過下面實例評估的效率，這些實例包括但不限于原發(fā)或轉(zhuǎn)移性損害的腫瘤質(zhì)量的減少，無進展存活率的增加，總存活率，病人健康的改善，疾病穩(wěn)定性，以及減少標準化學質(zhì)量劑和其他生物劑的常規(guī)劑量的能力。劑量可以調(diào)節(jié)給藥方案用來提供最希望的反應。例如，可以施用一個單一推注，可以隨時間施用幾個分開的劑量或可以如通過治療情況的緊急性指示的按比例地減少或增加劑量。特別有利的是以易于施用和劑量均勻的劑量單位形式配制腸胃外組合物。如在此使用的劑量單位形式是指以單一劑量方式適合于有待治療的哺乳動物受試者的物理上分離的單位；每個單位包含計算為與需要的藥物載體相結(jié)合產(chǎn)生希望療效的預定數(shù)量的活性化合物。本發(fā)明劑量單位形式的說明通過下面指示并且直接地依賴于(a)抗體和有待實現(xiàn)的具體治療或預防效果的獨特特征，以及(b)混合這種活性化合物用來治療個體體內(nèi)敏感性的本領域固有限制。根據(jù)本發(fā)明聯(lián)合施用的161p2f10badc的治療有效數(shù)量的示例性的，非限制性的范圍是約0.5至約10mg/kg，約1至約5mg/kg，至少1mg/kg，至少2mg/kg，至少3mg/kg，或至少4mg/kg。其他示例性的非限制性范圍是例如約0.5至約5mg/kg，或例如約0.8至約5mg/kg，或例如約1至約7.5mg/kg。本發(fā)明的高劑量實施方案涉及大于10mg/kg的劑量。應當注意的是劑量值可以隨有待緩解病癥的類型和嚴重性而改變，并且可以包括單劑量或多劑量。應當進一步理解的是對于任何特定的受試者，具體的給藥方案可以根據(jù)個體需要以及管理或監(jiān)督組合物給藥的人員的專業(yè)判斷隨時間調(diào)節(jié)，并且在此列出的劑量范圍僅是示例性的并且不旨在限制要求權(quán)利的組合物的范圍或?qū)嵺`。臨床開發(fā)計劃(cdp)cdp遵循并且開發(fā)了與輔助治療或單一療法相結(jié)合的161p2f10badc治療。最初地，使用本領域已知的標準實驗方案在非人類受試者體內(nèi)(例如，小鼠、猴等)進行臨床前毒理學研究。在這些非人類毒理學研究中theh16-7.8mcmmaf證明是耐受良好的。最初地，以重復劑量的方式人類臨床試驗證明了安全性并且此后證實了效率。將標準化學治療與標準治療加上161p2f10badc進行比較，對這些試驗進行開放標記。如應當理解的，可以與招募病人相結(jié)合利用的一個非限制性指標是在如通過活組織檢查確定的他們腫瘤中161p2f10b的表達水平。當使用任何基于蛋白或抗體注入的治療時，安全性考慮主要地涉及(i)細胞因子釋放綜合征，例如低血壓、發(fā)熱、抖動、寒戰(zhàn)；(ii)針對該物質(zhì)發(fā)展免疫原性反應(例如，針對抗體治療通過病人發(fā)展人類抗體，或haha反應)；以及(iii)針對表達161p2f10b的正常細胞的毒性。利用標準測試和隨訪來監(jiān)測這些安全考慮的每一項。當人類給藥時發(fā)現(xiàn)61p2f10bmab是安全的。實施例9h16-7.8mab的抗體藥物偶聯(lián)的表征i)通過質(zhì)譜繪制肽圖進行肽圖分析。使用這種方法來證實h16-7.8mcmmaf的身份并且區(qū)別天然抗體(h16-7.8)。用二硫蘇糖醇(dtt)對得到的h16-7.8mcmmaf和h16-7.8進行處理用來還原二硫鍵，緊接著對得到的游離半胱氨酸進行烷基化作用。在這個步驟中使用胍來確保該蛋白完全變性。在透析以便去除胍之后，用特異性蛋白內(nèi)切酶lys-c對樣品進行消化。lys-c切割賴氨酸殘基c端側(cè)上的肽鍵。通過反相層析法結(jié)合質(zhì)譜法對得到的肽進行分析。在h16-7.8mcmmaf與h16-7.8之間對反相保留時間和這些峰觀察到的質(zhì)核比進行比較。使用偶聯(lián)到watersq-tofp質(zhì)譜儀上的watersacquityuplc進行l(wèi)c-ms(液相層析法-質(zhì)譜法)分析。將消化的樣品應用到y(tǒng)mcc18柱上并且用包含三氟乙酸的乙腈梯度進行洗脫。針對h16-7.8mcmmaf和h16-7.8代表性的肽圖示于圖14中。在圖14中所有三個色譜圖看起來是相同的除了通過星號和箭頭指示的峰之外。如在該圖中可以看到的，與天然抗體相比較，在偶聯(lián)的抗體中通過星號指示的峰強度是減少的。用箭頭標記的峰表示在偶聯(lián)抗體肽圖上出現(xiàn)的新峰。特別地，用星號異或用箭頭標記的峰被認為對應地是指定用于偶聯(lián)的肽以及得到的偶聯(lián)肽。圖15顯示用星號標記的峰的質(zhì)譜圖的一部分。在偶聯(lián)期間改變的信號質(zhì)量值是通過“加號”符號指示的。具有適當?shù)膍/z970.4(+3電荷狀態(tài))的這種肽被鑒定為c225-k250，它源于重鏈的鉸鏈區(qū)并且包含預期的偶聯(lián)位點。為了鑒別新出現(xiàn)的峰(在圖14中這些峰被認為是偶聯(lián)的肽)，使用升高的能量(mse)數(shù)據(jù)獲取技術(shù)進行l(wèi)c-ms分析。圖16顯示使用619.4的m/z針對h16-7.8mcmmaf和h16-7.8肽圖提取的離子層析圖(xic)。這個離子相應于該藥物部分的碎片離子。在圖14中在619.4處在xic中觀察到的峰與用箭頭標記的峰幾乎是完全相同的。此外，在天然抗體的層析圖中未檢測出這類峰。這些觀察表明在619.4的m/z下在xic中檢出的峰明顯地是藥物偶聯(lián)的肽并且通過它的完整質(zhì)量值進行鑒別。該結(jié)果匯總與表v中。這些結(jié)果表明在偶聯(lián)物的情況下，主要的肽類是在重鏈鉸鏈區(qū)上偶聯(lián)到2種藥物上的那些。這些數(shù)據(jù)與通過其他正交例如dar分析獲得的數(shù)據(jù)相一致。ii)通過lc-ms進行完整質(zhì)量分析通過電噴射離子化飛行時間(esi-tof)質(zhì)譜來確定脫糖基化的h16-7.8mcmmaf的完全質(zhì)量。這種技術(shù)提供了關于藥物對抗體比率(dar)數(shù)值的直接信息。這些測試樣品通過250mm磷酸鈉緩沖劑，ph7.5進行稀釋，然后在37℃下與糖肽酶f一起孵化過夜。將樣品注射到plrptm柱(variantechnology)上，在90℃下平衡，并且用乙腈/水梯度進行洗脫。通過偶聯(lián)到waterssynapt質(zhì)譜儀(waters)上的acquityuplc系統(tǒng)對樣品峰進行分析并且通過maxent1軟件從原始數(shù)據(jù)對質(zhì)量進行重構(gòu)。脫糖基化的h16-7.8mcmmaf的示例性質(zhì)譜圖示于圖17中。主要的藥物偶聯(lián)抗體是一種加載4-藥物種類。包括在h16-7.8mcmmaf中富含未偶聯(lián)抗體的這種觀察是與通過其他正交方法(例如通過rp-hplc的dar，肽圖以及hic測定法)獲得的結(jié)果相一致的。iii)通過rp-hplc進行藥物對抗體比率(dar)分析為了定量hplc確定每個輕鏈和重鏈中藥物負荷的相對數(shù)量進行藥物對抗體比率(dar)分析。使用plrp-s分析柱，2.1mm×50mm，使用由2.0％甲酸組成的移動相a和由2.0％甲酸加上90％乙腈組成的移動相b進行dar分析。為了制備樣品，通過dtt將藥物偶聯(lián)的抗體完全還原并且然后基于藥物負荷數(shù)量分成l鏈、藥物偶聯(lián)的l鏈、h鏈以及藥物偶聯(lián)的h鏈。使用0.5ml/min的流量對50μg樣品進行洗脫，在280nm下進行檢測。通過下面等式來定義藥物對抗體比率(dar)的摩爾比率。其中dar–藥物對抗體的摩爾比率n–每個ab鏈mcmmaf藥物的數(shù)量auc輕鏈,n,auc重鏈,n–對應地，具有n種藥物的輕或重抗體鏈曲線下的面積；auc總和,輕鏈(重鏈)–輕或重鏈曲線下的峰面積。使用來自h16-7.8mcmmaf的材料對這種方法進行認證。所評估的參數(shù)包括特異性、準確性、可重復性、中間精確性。針對h16-7.8mcmmaf代表性的dar曲線圖示于圖18中。dar值是4.0。使用這種方法相同的hplc條件使樣品經(jīng)受lc-ms分析用來鑒別觀察到的峰。結(jié)果匯總于表vi中。通過lc-ms正交地證實在本方法的定量期間獲得的dar結(jié)果的峰識別。iv)結(jié)合親和性針對h16-7.8和h16-7.8mcmmaf對在ku812細胞上(人類慢性髓性白血病細胞，atcc)表達的161p2f10b的結(jié)合親和性對它們進行測試。簡言之，在4℃下在160nm至0.004nm的終濃度下將h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的十二個(12)稀釋物與ku812細胞(50,000個細胞/孔)一起孵化過夜。在孵化結(jié)束時，在4℃下對細胞進行洗滌并且與抗-higg-pe檢測抗體一起孵化45分鐘。在洗滌未結(jié)合的檢測抗體之后，通過facs對細胞進行分析。將mfi值輸入到graphpadprisim軟件中并且使用y＝bmax*x/(kd+x)的單位點結(jié)合(雙曲線)等式進行分析從而產(chǎn)生h16-7.8和h16-7.8mcmmaf飽和曲線。bmax是h16-7.8或h16-7.8mcmmaf最大地結(jié)合到ku812上的mfi值；kd是h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的結(jié)合親和性，它們是達到半最大結(jié)合所需要的h16-7.8或h16-7.8mcmmaf的濃度。在ku812細胞表面上表達的161p2f10b上h16-7.8和h16-7.8mcmmaf計算的親和性(kd)對應地是0.08nm和0.25nm(n＝4)。v)細胞毒性將h16-7.8、h16-7.8mcmmaf以及一種陰性對照adc分別地連續(xù)稀釋并且添加到包含ku812細胞的96孔板中，這些細胞在細胞表面上內(nèi)源性地表達161p2f10b。在孵化六天之后，將阿爾瑪試劑添加到該抗體-細胞混合物中。阿爾瑪是一種細胞活力指示劑，該指示劑使用活細胞的天然還原力將刃天青轉(zhuǎn)化成熒光分子試鹵靈。刃天青被還原成試鹵靈，這產(chǎn)生非常亮的紅色熒光?；罴毎B續(xù)地將刃天青轉(zhuǎn)化成試鹵靈，由此產(chǎn)生活力和細胞毒性的定量測量。使用synergy4混合多模式酶標儀(540/35,620/40nm)使用以分光光度測量方式獲得的熒光單位對h16-7.8mcmmaf的百分比細胞毒性進行評估。該測定的線性范圍是約3.9至1000ng/ml。在標準曲線中存在9個點：h16-7.8mcmmaf的最高濃度是1000ng/ml，緊接著八個1比2的連續(xù)稀釋以及一個空白(0)。使用下式計算％存活率：％存活率＝(x–空白)/(未處理的–空白)×100在ku812細胞上h16-7.8mcmmaf的特異性細胞毒性活性：ic500.15nm。在ku812細胞上h16-7.8和adc對照(抗體(非-抗-161p2f10b抗體)-mcmmaf)不具有細胞毒性活性。貫穿本申請書，引用了不同網(wǎng)站數(shù)據(jù)內(nèi)容、出版物、專利申請已經(jīng)專利。(通過它們的統(tǒng)一資源定位器，或url(在萬維網(wǎng)上的地址)，來提及這些網(wǎng)站)。由此通過引用將這些引用每一項的披露以其全部內(nèi)容結(jié)合在此。本發(fā)明不被在此披露的實施方案限制于范圍內(nèi)，這些實施方案旨在作為本發(fā)明單個方面的單個說明，并且在功能上等價的任何事物都在本發(fā)明范圍內(nèi)。除了在此說明的那些之外，對本發(fā)明模型和方法的不同修飾對于本領域熟練人士而言從前面的說明和傳授內(nèi)容將是清楚的，并且類似地旨在落在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？梢詫嵺`這類修飾或其他實施方案而不偏離本發(fā)明的真正范圍和精神。表格表i:當惡性時表達161p2f10b的組織。腎結(jié)腸肺卵巢乳房淋巴瘤骨子宮胰腺肝前列腺表ii:氨基酸縮寫單字母三字母全稱fphe苯丙氨酸lleu亮氨酸sser絲氨酸ytyr酪氨酸ccys半胱氨酸wtrp色氨酸ppro脯氨酸hhis組氨酸qgln谷氨酰胺rarg精氨酸iile異亮氨酸mmet甲硫氨酸t(yī)thr蘇氨酸nasn天冬酰胺klys賴氨酸vval纈氨酸aala丙氨酸dasp天冬氨酸eglu谷氨酸ggly甘氨酸表iii:氨基酸取代矩陣從gcg軟件9.0適配blosum62氨基酸取代矩陣(塊取代矩陣)。數(shù)值越高，越有可能在相關的天然蛋白中找到取代。表iv:在ku812細胞上facsmfi數(shù)值表v:在藥物偶聯(lián)的肽上峰鑒別結(jié)果的匯總，潛在的偶聯(lián)位點(半胱氨酸殘基)以粗體字型列出并且加下劃線。表vi:通過lc-ms得到的dar分析的峰鑒別結(jié)果表vii:mcmmaf的合成方案序列表<110>艾更斯司股份有限公司(agensys,inc.)m·托爾戈夫(torgov,michael)r·k·莫里森(morrison,robertkendall)a·雅各波維茨(jakobovits,aya)j·古達斯(gudas,jean)z·安(an,zili)<120>結(jié)合于161p2f10b蛋白的抗體藥物偶聯(lián)物(adc)<130>511582006274<140>pct/us2011/024055<141>2011-02-08<150>us61/302,489<151>2010-02-08<160>12<170>fastseqforwindowsversion4.0<210>1<211>3858<212>dna<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(3858)<223>161p2f10b變異體2<220><221>cds<222>(44)...(2671)<400>1ctactttattctgataaaacaggtctatgcagctaccaggacaatggaatctacg55metgluserthr1ttgactttagcaacggaacaacctgttaagaagaacactcttaagaaa103leuthrleualathrgluglnprovallyslysasnthrleulyslys5101520tataaaatagcttgcattgttcttcttgctttgctggtgatcatgtca151tyrlysilealacysilevalleuleualaleuleuvalilemetser253035cttggattaggcctggggcttggactcaggaaactggaaaagcaaggc199leuglyleuglyleuglyleuglyleuarglysleuglulysglngly404550agctgcaggaagaagtgctttgatgcatcatttagaggactggagaac247sercysarglyslyscyspheaspalaserpheargglyleugluasn556065tgccggtgtgatgtggcatgtaaagaccgaggtgattgctgctgggat295cysargcysaspvalalacyslysaspargglyaspcyscystrpasp707580tttgaagacacctgtgtggaatcaactcgaatatggatgtgcaataaa343phegluaspthrcysvalgluserthrargiletrpmetcysasnlys859095100tttcgttgtggagagaccagattagaggccagcctttgctcttgttca391pheargcysglygluthrargleuglualaserleucyssercysser105110115gatgactgtttgcagaggaaagattgctgtgctgactataagagtgtt439aspaspcysleuglnarglysaspcyscysalaasptyrlysserval120125130tgccaaggagaaacctcatggctggaagaaaactgtgacacagcccag487cysglnglygluthrsertrpleuglugluasncysaspthralagln135140145cagtctcagtgcccagaagggtttgacctgccaccagttatcttgttt535glnserglncysprogluglypheaspleuproprovalileleuphe150155160tctatggatggatttagagctgaatatttatacacatgggatacttta583sermetaspglypheargalaglutyrleutyrthrtrpaspthrleu165170175180atgccaaatatcaataaactgaaaacatgtggaattcattcaaaatac631metproasnileasnlysleulysthrcysglyilehisserlystyr185190195atgagagctatgtatcctaccaaaaccttcccaaatcattacaccatt679metargalamettyrprothrlysthrpheproasnhistyrthrile200205210gtcacgggcttgtatccagagtcacatggcatcattgacaataatatg727valthrglyleutyrprogluserhisglyileileaspasnasnmet215220225tatgatgtaaatctcaacaagaatttttcactttcttcaaaggaacaa775tyraspvalasnleuasnlysasnpheserleuserserlysglugln230235240aataatccagcctggtggcatgggcaaccaatgtggctgacagcaatg823asnasnproalatrptrphisglyglnpromettrpleuthralamet245250255260tatcaaggtttaaaagccgctacctacttttggcccggatcagaagtg871tyrglnglyleulysalaalathrtyrphetrpproglysergluval265270275gctataaatggctcctttccttccatatacatgccttacaacggaagt919alaileasnglyserpheproseriletyrmetprotyrasnglyser280285290gtcccatttgaagagaggatttctacactgttaaaatggctggacctg967valpropheglugluargileserthrleuleulystrpleuaspleu295300305cccaaagctgaaagacccaggttttataccatgtattttgaagaacct1015prolysalagluargproargphetyrthrmettyrphegluglupro310315320gattcctctggacatgcaggtggaccagtcagtgccagagtaattaaa1063aspserserglyhisalaglyglyprovalseralaargvalilelys325330335340gccttacaggtagtagatcatgcttttgggatgttgatggaaggcctg1111alaleuglnvalvalasphisalapheglymetleumetgluglyleu345350355aagcagcggaatttgcacaactgtgtcaatatcatccttctggctgac1159lysglnargasnleuhisasncysvalasnileileleuleualaasp360365370catggaatggaccagacttattgtaacaagatggaatacatgactgat1207hisglymetaspglnthrtyrcysasnlysmetglutyrmetthrasp375380385tattttcccagaataaacttcttctacatgtacgaagggcctgccccc1255tyrpheproargileasnphephetyrmettyrgluglyproalapro390395400cgcatccgagctcataatatacctcatgacttttttagttttaattct1303argileargalahisasnileprohisaspphepheserpheasnser405410415420gaggaaattgttagaaacctcagttgccgaaaacctgatcagcatttc1351glugluilevalargasnleusercysarglysproaspglnhisphe425430435aagccctatttgactcctgatttgccaaagcgactgcactatgccaag1399lysprotyrleuthrproaspleuprolysargleuhistyralalys440445450aacgtcagaatcgacaaagttcatctctttgtggatcaacagtggctg1447asnvalargileasplysvalhisleuphevalaspglnglntrpleu455460465gctgttaggagtaaatcaaatacaaattgtggaggaggcaaccatggt1495alavalargserlysserasnthrasncysglyglyglyasnhisgly470475480tataacaatgagtttaggagcatggaggctatctttctggcacatgga1543tyrasnasnglupheargsermetglualailepheleualahisgly485490495500cccagttttaaagagaagactgaagttgaaccatttgaaaatattgaa1591proserphelysglulysthrgluvalgluprophegluasnileglu505510515gtctataacctaatgtgtgatcttctacgcattcaaccagcaccaaac1639valtyrasnleumetcysaspleuleuargileglnproalaproasn520525530aatggaacccatggtagtttaaaccatcttctgaaggtgcctttttat1687asnglythrhisglyserleuasnhisleuleulysvalprophetyr535540545gagccatcccatgcagaggaggtgtcaaagttttctgtttgtggcttt1735gluproserhisalaglugluvalserlyspheservalcysglyphe550555560gctaatccattgcccacagagtctcttgactgtttctgccctcaccta1783alaasnproleuprothrgluserleuaspcysphecysprohisleu565570575580caaaatagtactcagctggaacaagtgaatcagatgctaaatctcacc1831glnasnserthrglnleugluglnvalasnglnmetleuasnleuthr585590595caagaagaaataacagcaacagtgaaagtaaatttgccatttgggagg1879glnglugluilethralathrvallysvalasnleupropheglyarg600605610cctagggtactgcagaagaacgtggaccactgtctcctttaccacagg1927proargvalleuglnlysasnvalasphiscysleuleutyrhisarg615620625gaatatgtcagtggatttggaaaagctatgaggatgcccatgtggagt1975glutyrvalserglypheglylysalametargmetpromettrpser630635640tcatacacagtcccccagttgggagacacatcgcctctgcctcccact2023sertyrthrvalproglnleuglyaspthrserproleuproprothr645650655660gtcccagactgtctgcgggctgatgtcagggttcctccttctgagagc2071valproaspcysleuargalaaspvalargvalproprosergluser665670675caaaaatgttccttctatttagcagacaagaatatcacccacggcttc2119glnlyscysserphetyrleualaasplysasnilethrhisglyphe680685690ctctatcctcctgccagcaatagaacatcagatagccaatatgatgct2167leutyrproproalaserasnargthrseraspserglntyraspala695700705ttaattactagcaatttggtacctatgtatgaagaattcagaaaaatg2215leuilethrserasnleuvalpromettyrglugluphearglysmet710715720tgggactacttccacagtgttcttcttataaaacatgccacagaaaga2263trpasptyrphehisservalleuleuilelyshisalathrgluarg725730735740aatggagtaaatgtggttagtggaccaatatttgattataattatgat2311asnglyvalasnvalvalserglyproilepheasptyrasntyrasp745750755ggccattttgatgctccagatgaaattaccaaacatttagccaacact2359glyhispheaspalaproaspgluilethrlyshisleualaasnthr760765770gatgttcccatcccaacacactactttgtggtgctgaccagttgtaaa2407aspvalproileprothrhistyrphevalvalleuthrsercyslys775780785aacaagagccacacaccggaaaactgccctgggtggctggatgtccta2455asnlysserhisthrprogluasncysproglytrpleuaspvalleu790795800ccctttatcatccctcaccgacctaccaacgtggagagctgtcctgaa2503propheileileprohisargprothrasnvalglusercysproglu805810815820ggtaaaccagaagctctttgggttgaagaaagatttacagctcacatt2551glylysproglualaleutrpvalglugluargphethralahisile825830835gcccgggtccgtgatgtagaacttctcactgggcttgacttctatcag2599alaargvalargaspvalgluleuleuthrglyleuaspphetyrgln840845850gataaagtgcagcctgtctctgaaattttgcaactaaagacatattta2647asplysvalglnprovalsergluileleuglnleulysthrtyrleu855860865ccaacatttgaaaccactatttaacttaataatgtctacttaatatataattta2701prothrphegluthrthrile870875ctgtataaagtaattttggcaaaatataagtgattttttctggagaattgtaaaataaag2761ttttctatttttccttaaaaaaaaaaccggaattccgggcttgggaggctgaggcaggag2821actcgcttgaacccgggaggcagaggttgcagtgagccaagattgcgccattgcactcca2881gagcctgggtgacagagcaagactacatctcaaaaaataaataaataaaataaaagtaac2941aataaaaataaaaagaacagcagagagaatgagcaaggagaaatgtcacaaactattgca3001aaatactgttacactgggttggctctccaagaagatactggaatctcttcagccatttgc3061ttttcagaagtagaaaccagcaaaccacctctaagcggagaacatacgattctttattaa3121gtagctctggggaaggaaagaataaaagttgatagctccctgattgggaaaaaatgcaca3181attaataaagaatgaagatgaaagaaagcatgcttatgttgtaacacaaaaaaaattcac3241aaacgttggtggaaggaaaacagtatagaaaacattactttaactaaaagctggaaaaat3301tttcagttgggatgcgactgacaaaaagaacgggatttccaggcataaagttggcgtgag3361ctacagagggcaccatgtggctcagtggaagacccttcaagattcaaagttccatttgac3421agagcaaaggcacttcgcaaggagaagggtttaaattatgggtccaaaagccaagtggta3481aagcgagcaatttgcagcataactgcttctcctagacagggctgagtgggcaaaatacga3541cagtacacacagtgactattagccactgccagaaacaggctgaacagccctgggagacaa3601gggaaggcaggtggtgggagttgttcatggagagaaaggagagttttagaaccagcacat3661ccactggagatgctgggccaccagacccctcccagtcaataaagtctggtgcctcatttg3721atctcagcctcatcatgaccctggagagaccctgataccatctgccagtccccgacagct3781taggcactccttgccatcaacctgaccccccgagtggttctccaggctccctgccccacc3841cattcaggccggaattc3858<210>2<211>875<212>prt<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(875)<223>161p2f10b變異體2<400>2metgluserthrleuthrleualathrgluglnprovallyslysasn151015thrleulyslystyrlysilealacysilevalleuleualaleuleu202530valilemetserleuglyleuglyleuglyleuglyleuarglysleu354045glulysglnglysercysarglyslyscyspheaspalaserphearg505560glyleugluasncysargcysaspvalalacyslysaspargglyasp65707580cyscystrpaspphegluaspthrcysvalgluserthrargiletrp859095metcysasnlyspheargcysglygluthrargleuglualaserleu100105110cyssercysseraspaspcysleuglnarglysaspcyscysalaasp115120125tyrlysservalcysglnglygluthrsertrpleuglugluasncys130135140aspthralaglnglnserglncysprogluglypheaspleupropro145150155160valileleuphesermetaspglypheargalaglutyrleutyrthr165170175trpaspthrleumetproasnileasnlysleulysthrcysglyile180185190hisserlystyrmetargalamettyrprothrlysthrpheproasn195200205histyrthrilevalthrglyleutyrprogluserhisglyileile210215220aspasnasnmettyraspvalasnleuasnlysasnpheserleuser225230235240serlysgluglnasnasnproalatrptrphisglyglnpromettrp245250255leuthralamettyrglnglyleulysalaalathrtyrphetrppro260265270glysergluvalalaileasnglyserpheproseriletyrmetpro275280285tyrasnglyservalpropheglugluargileserthrleuleulys290295300trpleuaspleuprolysalagluargproargphetyrthrmettyr305310315320pheglugluproaspserserglyhisalaglyglyprovalserala325330335argvalilelysalaleuglnvalvalasphisalapheglymetleu340345350metgluglyleulysglnargasnleuhisasncysvalasnileile355360365leuleualaasphisglymetaspglnthrtyrcysasnlysmetglu370375380tyrmetthrasptyrpheproargileasnphephetyrmettyrglu385390395400glyproalaproargileargalahisasnileprohisaspphephe405410415serpheasnserglugluilevalargasnleusercysarglyspro420425430aspglnhisphelysprotyrleuthrproaspleuprolysargleu435440445histyralalysasnvalargileasplysvalhisleuphevalasp450455460glnglntrpleualavalargserlysserasnthrasncysglygly465470475480glyasnhisglytyrasnasnglupheargsermetglualailephe485490495leualahisglyproserphelysglulysthrgluvalgluprophe500505510gluasnilegluvaltyrasnleumetcysaspleuleuargilegln515520525proalaproasnasnglythrhisglyserleuasnhisleuleulys530535540valprophetyrgluproserhisalaglugluvalserlyspheser545550555560valcysglyphealaasnproleuprothrgluserleuaspcysphe565570575cysprohisleuglnasnserthrglnleugluglnvalasnglnmet580585590leuasnleuthrglnglugluilethralathrvallysvalasnleu595600605propheglyargproargvalleuglnlysasnvalasphiscysleu610615620leutyrhisargglutyrvalserglypheglylysalametargmet625630635640promettrpsersertyrthrvalproglnleuglyaspthrserpro645650655leuproprothrvalproaspcysleuargalaaspvalargvalpro660665670prosergluserglnlyscysserphetyrleualaasplysasnile675680685thrhisglypheleutyrproproalaserasnargthrseraspser690695700glntyraspalaleuilethrserasnleuvalpromettyrgluglu705710715720phearglysmettrpasptyrphehisservalleuleuilelyshis725730735alathrgluargasnglyvalasnvalvalserglyproilepheasp740745750tyrasntyraspglyhispheaspalaproaspgluilethrlyshis755760765leualaasnthraspvalproileprothrhistyrphevalvalleu770775780thrsercyslysasnlysserhisthrprogluasncysproglytrp785790795800leuaspvalleupropheileileprohisargprothrasnvalglu805810815sercysprogluglylysproglualaleutrpvalglugluargphe820825830thralahisilealaargvalargaspvalgluleuleuthrglyleu835840845aspphetyrglnasplysvalglnprovalsergluileleuglnleu850855860lysthrtyrleuprothrphegluthrthrile865870875<210>3<211>1440<212>dna<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(1440)<223>h16-7.8重鏈<220><221>cds<222>(34)...(1440)<400>3tttctgagagtcctggacctcctgtgcaagaacatgaaacacctgtggttcttc54metlyshisleutrpphephe15ctcctgctggtggcagctcccagatgggtcctgtcccaggtgcagctg102leuleuleuvalalaalaproargtrpvalleuserglnvalglnleu101520caggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctc150glngluserglyproglyleuvallysproserglnthrleuserleu253035acctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtggttactactgg198thrcysthrvalserglyglyserileserserglyglytyrtyrtrp40455055agctggatccgccagcacccagggaagggcctggagtggattgggatc246sertrpileargglnhisproglylysglyleuglutrpileglyile606570atctattacagtgggagcacctactacaacccgtccctcaagagtcga294iletyrtyrserglyserthrtyrtyrasnproserleulysserarg758085gttaccatatcagtagacacgtctaagaaccagttctccctgaagctg342valthrileservalaspthrserlysasnglnpheserleulysleu9095100aactctgtgactgccgcggacacggccgtgttttactgtgcgagagtg390asnservalthralaalaaspthralavalphetyrcysalaargval105110115gctatagtgactacgatcccgggcggtatggacgtctggggccaaggg438alailevalthrthrileproglyglymetaspvaltrpglyglngly120125130135accacggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttc486thrthrvalthrvalserseralaserthrlysglyproservalphe140145150cccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctg534proleualaprocysserargserthrsergluserthralaalaleu155160165ggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg582glycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrp170175180aactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtccta630asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu185190195cagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctcc678glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser200205210215agcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagccc726serasnpheglythrglnthrtyrthrcysasnvalasphislyspro220225230agcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgag774serasnthrlysvalasplysthrvalgluarglyscyscysvalglu235240245tgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctc822cysproprocysproalaproprovalalaglyproservalpheleu250255260ttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgag870pheproprolysprolysaspthrleumetileserargthrproglu265270275gtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccag918valthrcysvalvalvalaspvalserhisgluaspprogluvalgln280285290295ttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaag966pheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlys300305310ccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctc1014proargglugluglnpheasnserthrpheargvalvalservalleu315320325accgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaag1062thrvalvalhisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslys330335340gtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaa1110valserasnlysglyleuproalaproileglulysthrileserlys345350355accaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcc1158thrlysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproser360365370375cgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaa1206arggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallys380385390ggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcag1254glyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglygln395400405ccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggc1302progluasnasntyrlysthrthrproprometleuaspseraspgly410415420tccttcttcctttacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcag1350serphepheleutyrserlysleuthrvalasplysserargtrpgln425430435caggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaac1398glnglyasnvalphesercysservalmethisglualaleuhisasn440445450455cactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaataa1440histyrthrglnlysserleuserleuserproglylys460465<210>4<211>468<212>prt<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(468)<223>h16-7.8重鏈<400>4metlyshisleutrpphepheleuleuleuvalalaalaproargtrp151015valleuserglnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallys202530proserglnthrleuserleuthrcysthrvalserglyglyserile354045serserglyglytyrtyrtrpsertrpileargglnhisproglylys505560glyleuglutrpileglyileiletyrtyrserglyserthrtyrtyr65707580asnproserleulysserargvalthrileservalaspthrserlys859095asnglnpheserleulysleuasnservalthralaalaaspthrala100105110valphetyrcysalaargvalalailevalthrthrileproglygly115120125metaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaser130135140thrlysglyproservalpheproleualaprocysserargserthr145150155160sergluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro165170175gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval180185190histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser195200205servalvalthrvalproserserasnpheglythrglnthrtyrthr210215220cysasnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysthrval225230235240gluarglyscyscysvalglucysproprocysproalaproproval245250255alaglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu260265270metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser275280285hisgluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu290295300valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr305310315320pheargvalvalservalleuthrvalvalhisglnasptrpleuasn325330335glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproalapro340345350ileglulysthrileserlysthrlysglyglnproarggluprogln355360365valtyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnval370375380serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval385390395400glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro405410415prometleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthr420425430valasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysserval435440445methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu450455460serproglylys465<210>5<211>744<212>dna<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(744)<223>h16-7.8輕鏈<220><221>cds<222>(43)...(744)<400>5aggagtagaaaatgagcaaaactgacaagtcaaggcaggaagatgttgccatca54metleuproser1caactcattgggtttctgctgctctgggttccagcctccaggggtgaa102glnleuileglypheleuleuleutrpvalproalaserargglyglu5101520attgtgctgactcagtctccagactttcagtctgtgactccaaaggag150ilevalleuthrglnserproasppheglnservalthrprolysglu253035aaagtcaccatcacctgccgggccagtcagagcattggtattagctta198lysvalthrilethrcysargalaserglnserileglyileserleu404550cactggtaccagcagaaaccagatcagtctccaaagctcctcatcaag246histrptyrglnglnlysproaspglnserprolysleuleuilelys556065tatgcttcccagtccttctcaggggtcccctcgaggttcagtggcagt294tyralaserglnserpheserglyvalproserargpheserglyser707580ggatctgggacagatttcaccctcaccatcaatagcctggaagctgaa342glyserglythraspphethrleuthrileasnserleuglualaglu859095100gatgctgcaacgtattactgtcatcagagtaggagtttcccgtggacg390aspalaalathrtyrtyrcyshisglnserargserpheprotrpthr105110115ttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacgaactgtggctgcacca438pheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalalaalapro120125130tctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaact486servalpheilepheproproseraspgluglnleulysserglythr135140145gcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaa534alaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproargglualalys150155160gtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggag582valglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnserglnglu165170175180agtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagc630servalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuserser185190195accctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcc678thrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyrala200205210tgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttc726cysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysserphe215220225aacaggggagagtgttag744asnargglyglucys230<210>6<211>233<212>prt<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(233)<223>h16-7.8輕鏈<400>6metleuproserglnleuileglypheleuleuleutrpvalproala151015serargglygluilevalleuthrglnserproasppheglnserval202530thrprolysglulysvalthrilethrcysargalaserglnserile354045glyileserleuhistrptyrglnglnlysproaspglnserprolys505560leuleuilelystyralaserglnserpheserglyvalproserarg65707580pheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileasnser859095leuglualagluaspalaalathrtyrtyrcyshisglnserargser100105110pheprotrpthrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthr115120125valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu130135140lysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrpro145150155160argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly165170175asnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyr180185190serleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshis195200205lysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserproval210215220thrlysserpheasnargglyglucys225230<210>7<211>468<212>prt<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(468)<223>h16-7.8重鏈<400>7metlyshisleutrpphepheleuleuleuvalalaalaproargtrp151015valleuserglnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallys202530proserglnthrleuserleuthrcysthrvalserglyglyserile354045serserglyglytyrtyrtrpsertrpileargglnhisproglylys505560glyleuglutrpileglyileiletyrtyrserglyserthrtyrtyr65707580asnproserleulysserargvalthrileservalaspthrserlys859095asnglnpheserleulysleuasnservalthralaalaaspthrala100105110valphetyrcysalaargvalalailevalthrthrileproglygly115120125metaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaser130135140thrlysglyproservalpheproleualaprocysserargserthr145150155160sergluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro165170175gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval180185190histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser195200205servalvalthrvalproserserasnpheglythrglnthrtyrthr210215220cysasnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysthrval225230235240gluarglyscyscysvalglucysproprocysproalaproproval245250255alaglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu260265270metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser275280285hisgluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu290295300valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr305310315320pheargvalvalservalleuthrvalvalhisglnasptrpleuasn325330335glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproalapro340345350ileglulysthrileserlysthrlysglyglnproarggluprogln355360365valtyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnval370375380serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval385390395400glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro405410415prometleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthr420425430valasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysserval435440445methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu450455460serproglylys465<210>8<211>233<212>prt<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(233)<223>h16-7.8輕鏈<400>8metleuproserglnleuileglypheleuleuleutrpvalproala151015serargglygluilevalleuthrglnserproasppheglnserval202530thrprolysglulysvalthrilethrcysargalaserglnserile354045glyileserleuhistrptyrglnglnlysproaspglnserprolys505560leuleuilelystyralaserglnserpheserglyvalproserarg65707580pheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileasnser859095leuglualagluaspalaalathrtyrtyrcyshisglnserargser100105110pheprotrpthrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthr115120125valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu130135140lysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrpro145150155160argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly165170175asnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyr180185190serleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshis195200205lysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserproval210215220thrlysserpheasnargglyglucys225230<210>9<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成地構(gòu)建的輕鏈肽<400>9serpheasnargglyglucys15<210>10<211>25<212>prt<213>人工序列<220><223>合成地構(gòu)建的重鏈肽<400>10cyscysvalglucysproprocysproalaproprovalglyproser151015valpheleupheproprolysprolys2025<210>11<211>369<212>dna<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(369)<223>h16-7.8重鏈可變區(qū)<400>11caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcacagaccctgtccctc60acctgcactgtctctggtggctccatcagcagtggtggttactactggagctggatccgc120cagcacccagggaagggcctggagtggattgggatcatctattacagtgggagcacctac180tacaacccgtccctcaagagtcgagttaccatatcagtagacacgtctaagaaccagttc240tccctgaagctgaactctgtgactgccgcggacacggccgtgttttactgtgcgagagtg300gctatagtgactacgatcccgggcggtatggacgtctggggccaagggaccacggtcacc360gtctcctca369<210>12<211>452<212>dna<213>智人(homosapiens)<220><221>misc_feature<222>(1)...(452)<223>h16-7.8輕鏈可變區(qū)<400>12gaaattgtgctgactcagtctccagactttcagtctgtgactccaaaggagaaagtcacc60atcacctgccgggccagtcagagcattggtattagcttacactggtaccagcagaaacca120gatcagtctccaaagctcctcatcaagtatgcttcccagtccttctcaggggtcccctcg180aggttcagtggcagtggatctgggacagatttcaccctcaccatcaatagcctggaagct240gaagatgctgcaacgtattactgtcatcagagtaggagtttcccgtggacgttcggccaa300gggaccaaggtggaaatcaaacgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcca360tctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctat420cccagagaggccaaagtacagtggaaggtgga452當前第1頁12