本發(fā)明屬于衛(wèi)生用品領域，具體涉及一種含有乳酸菌的發(fā)酵上清的女性洗液。
背景技術(shù)：
由于婦科疾病發(fā)病率的上升，女性的個人健康，尤其是私處護理問題越來越受到現(xiàn)代女性的關(guān)注。調(diào)查表明，女性中滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎分別高達17.2％和17.3％，而這兩種陰道炎均可以通過改進個人局部衛(wèi)生而得到預防。據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示，95％以上的女性使用過女性洗液，其中又有約45％的女性是作為日常清潔護理使用，45％的女性作為緩解私處不適及治療婦科炎癥使用?，F(xiàn)有洗液產(chǎn)品大多為中草藥制劑或者中西藥混合制劑，作用機理主要是采用清熱解毒類的中藥來抑菌殺菌或者抗生素來迅速滅殺病源菌。
女性生殖器是一個開放性腔道，是人體重要的微生態(tài)區(qū)系，有眾多的微生物寄居在此，與健康和疾病關(guān)系密切。因此，從微生態(tài)的角度來解決女性陰道健康問題的課題一直是本技術(shù)領域研究人員關(guān)注的熱點。
乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一類能夠分解糖類以產(chǎn)生乳酸為主要代謝產(chǎn)物的細菌的通稱，其在自然界分布極為廣泛，具有豐富的物種多樣性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何使女性洗液具有良好的清潔效果，而且具有抑菌的功能。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了一種女性洗液。
本發(fā)明所提供的女性洗液，可包括a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)乳酸菌的發(fā)酵上清；
a2)所述乳酸菌的發(fā)酵物；
a3)所述乳酸菌的發(fā)酵上清的提取物；
a4)所述乳酸菌的發(fā)酵物的提取物。
上述女性洗液中，所述乳酸菌的發(fā)酵物為包括所述乳酸菌的發(fā)酵上清和菌體在內(nèi)的整個發(fā)酵后體系。
上述女性洗液中，所述乳酸菌可為乳酸球菌屬的乳酸菌，具體可為乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種。所述乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種具體可為菌株J-2或菌株C-10。
上述女性洗液中，所述乳酸菌可為乳桿菌屬的乳酸菌，具體可為鼠乳桿菌的菌種或干酪乳桿菌干酪亞種的菌種。所述鼠乳桿菌的菌種具體可為菌株6-2。所述干酪乳桿菌干酪亞種的菌種具體可為菌株3-3。
上述女性洗液中，所述乳桿菌屬的乳酸菌可為植物乳桿菌。所述植物乳桿菌具體可為菌株N-1或B16植物乳桿菌。
上述女性洗液中，所述植物乳桿菌具體可為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228，該菌株已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。
所述菌株N-1、所述B16植物乳桿菌、所述菌株6-2、所述菌株3-3、所述菌株J-2和所述菌株C-10均記載于如下文獻中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文.
上述女性洗液中，所述乳酸菌的發(fā)酵物的制備方法可為：發(fā)酵培養(yǎng)所述乳酸菌，得到乳酸菌的發(fā)酵物。所述發(fā)酵的起始時刻，所述乳酸菌的初始菌濃度可為6×105cfu/mL。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件：30℃振蕩培養(yǎng)24-72h(24h、48h或72h)。所述振蕩培養(yǎng)的參數(shù)具體可為搖速220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑50mm。
上述女性洗液中，所述乳酸菌的發(fā)酵上清的制備方法可為：取所述乳酸菌的發(fā)酵物，除菌，收集上清液，得到乳酸菌的發(fā)酵上清。所述收集上清液的實現(xiàn)方法為4000rpm離心10min。所述除菌的方法為過濾除菌(過濾孔徑可為0.45mm)。
上述女性洗液中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基可用任何適合培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基。
上述女性洗液中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.2-6.6。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有10.00g/L蛋白胨、10.00g/L牛肉膏、5.00g/L酵母膏、2.00g/L檸檬酸氫二銨、20.00g/L葡萄糖、1mL/L吐溫-80、2.00g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸錳和0.28g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.4。
上述任一女性洗液主要可由如下質(zhì)量份的原料組成：20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、2.00～7.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、5.00～15.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00質(zhì)量份無患子提取物和0.30～0.50質(zhì)量份香精。
上述任一所述女性洗液具體可由如下質(zhì)量份的原料組成：20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、2.00～7.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、5.00～15.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30～0.50質(zhì)量份香精和40.00～71.00質(zhì)量份水。
上述任一所述女性洗液具體可由20.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、2.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、5.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、0.50質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30質(zhì)量份香精和70.20質(zhì)量份水組成。
上述任一所述女性洗液具體可由25.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、4.50質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、10.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、0.75質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、3.50質(zhì)量份無患子提取物、0.40質(zhì)量份香精和55.85質(zhì)量份水組成。
上述任一所述女性洗液具體可由30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、7.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、15.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、5.00質(zhì)量份無患子提取物、0.50質(zhì)量份香精和41.50質(zhì)量份水組成。
上述任一所述女性洗液的制備方法也屬于本發(fā)明的保護范圍。
上述任一所述女性洗液的制備方法可包括將20.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、2.00～7.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、5.00～15.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30～0.50質(zhì)量份香精和40.00～71.00質(zhì)量份水混合的步驟。
上述任一所述乳酸菌在制備女性洗液中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
上文中，香精具體可為羅伯特香精香料(北京)有限公司的產(chǎn)品。椰油酰胺丙基甜菜堿為贏創(chuàng)德固賽(中國)投資有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為61789-40-0。月癸基葡糖苷為LG Household&Healthcare Ltd的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為110615-47-9。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯為禾大化學品(上海)有限公司公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為397247-05-1。
上文中，無患子提取物具體可為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。
上文中，無患子提取物可為無患子果皮提取物。
上文中，無患子提取物可為無患子醇提物。所述醇具體可為乙醇。
所述無患子醇提物的制備方法可包括如下步驟：以無患子果皮為原料，依次進行乙醇回流提取、水沉并去雜、醇沉并去雜和干燥。
所述“乙醇回流提取”具體可為采用乙醇水溶液進行回流提取。所述乙醇水溶液具體可為78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液。所述“乙醇回流提取”中，乙醇水溶液與原料的質(zhì)量配比可為(7.9-8.1)：1。所述“乙醇回流提取”的時間具體可為2h±10min。為了增加產(chǎn)率，可多次重復提取，再將回流液混合。所述重復提取的次數(shù)具體可為3次。
所述制備方法中，具體可將所述“乙醇回流提取”得到的回流液過濾，收集上清液進行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液1)進行所述“水沉”。
所述“水沉”中，所述濃縮液1與水的體積配比為1:3。
所述“水沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5h，再靜置6h。
所述制備方法中，具體可將所述“水沉”得到的溶液過濾，收集上清液進行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液2)進行所述“醇沉”。
所述“醇沉”中，所述濃縮液2與水的體積配比為1:2。
所述“醇沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5min，再靜置2-4h。
所述制備方法中，具體可將所述“醇沉”得到的溶液過濾，收集上清液進行脫色，然后得到脫色后的溶液。
所述制備方法中，具體可將所述“脫色后的溶液”濃縮，然后依次進行干燥、粉碎。
所述干燥的具體條件參數(shù)為：75℃條件下干燥至恒重。
所述粉碎的具體條件參數(shù)為：篩網(wǎng)目數(shù)100目。
獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進行回流提取，提取分別進行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進行水沉(攪拌時間5h，水沉時間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進行過濾，收集上清液進行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進行醇沉(攪拌時間5min，醇沉時間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進行過濾，收集上清液進行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實驗證明，本發(fā)明所提供的女性洗液具有良好的抑菌效果，具有重要的應用價值。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結(jié)果取平均值。
MRS培養(yǎng)基：將蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、檸檬酸氫二銨2.00g、葡萄糖20.00g、吐溫-80 1mL、磷酸氫二鉀2.00g、硫酸錳0.58g和硫酸鎂0.28g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至6.4。
固體培養(yǎng)基：將胰蛋白胨5.0g、淀粉2.5g、瓊脂15.0g和葡萄糖1.0g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至5.5。
固體平板：用固體培養(yǎng)基制成固體平板。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538和白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231均保藏于美國模式培養(yǎng)物集存庫(簡稱ATCC，地址：American Type Culture Collection(ATCC)10801University Boulevard Manassas，VA 20110 USA)，公眾可從美國模式培養(yǎng)物集存庫獲得該菌株。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538在下文中簡稱為金黃色葡萄球菌。白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231在下文中簡稱為白色念珠菌。
無患子提取物為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。香精為羅伯特香精香料(北京)有限公司的產(chǎn)品。椰油酰胺丙基甜菜堿為贏創(chuàng)德固賽(中國)投資有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為61789-40-0；椰油酰胺丙基甜菜堿在下文中簡稱F50。月癸基葡糖苷為LG Household&Healthcare Ltd的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為110615-47-9。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯為禾大化學品(上海)有限公司公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為397247-05-1；二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯在下文中簡稱SCE。
下述實施例中的菌株N-1、B16植物乳桿菌、菌株6-2、菌株3-3、菌株J-2和菌株C-10均記載于如下文獻中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文.
實施例1、乳酸菌的分離與鑒定
一、菌的分離
1、樣品的采集
采集女性(均為對試驗內(nèi)容知情同意的志愿者)的陰道分泌物作為樣品，共10份。
2、菌的分離
(1)取樣品，用無菌水稀釋至10倍體積，得到樣品稀釋液。取1mL樣品稀釋液，攪拌接種于30-40℃的固體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(2)完成步驟(1)后，挑選單菌落，點接接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)24-72h。
(3)完成步驟(2)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，劃線接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)。
(4)完成步驟(3)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，接種于MRS培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(5)完成步驟(4)后，革蘭氏染色涂片鏡檢。
革蘭氏染色涂片鏡檢陽性、過氧化氫陰性、含溴甲酚紫平板上形成黃色菌落的菌株初步判定為乳酸菌。按照上述分離方法，從10份樣品中分離到了7株乳酸菌，依次命名為菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7。
二、乳酸菌的鑒定
參考文獻(陳強，2004；胡清華，2002)中記載的方法，測定菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7的生理生化特征。生理生化試驗均設置重復、陰性對照和陽性對照。根據(jù)測定結(jié)果，與《伯杰細菌鑒定手冊》(R.E.布坎南，N.E吉本斯，1984)、《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀株，蔡妙英，2001)、《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》(Peter H.A.Sneath，1984)和《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》(凌代文，東秀珠1999)對照進行判別。
菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均無芽抱，革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗、吲哚試驗、聯(lián)苯胺試驗、硝酸鹽還原試驗中反應陰性，pH4.5生長，因此菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均鑒定為乳桿菌屬的乳桿菌。菌株N1、菌株N2和菌株N3的糖發(fā)酵結(jié)果與《伯杰細菌鑒定手冊》和《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》中的植物乳桿菌描述一致，菌株N1為植物乳桿菌，菌株N2具體為菌株N-1，菌株N3具體為B16植物乳桿菌。菌株N4能利用甘露醇、乳糖、棉籽糖、鼠李糖、七葉苷、海藻糖、纖維二糖、阿拉伯糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸、不發(fā)酵核糖、木糖、葡萄糖酸鹽產(chǎn)酸，精氨酸不產(chǎn)氨，15℃不生長，所以菌株N4鑒定為鼠乳桿菌，具體為菌株6-2。菌株N5的糖發(fā)酵結(jié)果與《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》中描述一致，因此，將菌株N5鑒定為干酪乳桿菌干酪亞種，具體為菌株3-3。
菌株N6和菌株N7的生理生化特征如下：在10℃生長，45℃不生長，4％NaCl生長，葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，革蘭氏染色陽性的球形或卵球形細菌，在過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗、聯(lián)苯胺試驗、硝酸鹽還原試驗中反應陰性，因此菌株N6和菌株N7鑒定為乳酸球菌屬的乳酸菌。菌株N6能利用甘露醇、乳糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、鼠李糖、海藻糖、木糖、甘油、淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸、精氨酸水解，符合《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》的描述，將菌株N6鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株J-2。菌株N7能夠發(fā)酵利用乳糖、海藻糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、阿拉伯糖、山梨醇、木糖產(chǎn)酸，能從精氨酸產(chǎn)氨，并且能夠水解精氨酸，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，在pH9.2、pH9.6的培養(yǎng)基中生長，符合《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》的描述，將菌株N7鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株C-10。
實施例2、女性洗液的制備
一、發(fā)酵上清的制備
1、取菌株N1，接種至MRS培養(yǎng)基(乳酸菌的初始菌濃度為6×105cfu/mL)，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系1。
2、完成步驟1后，取體系1，按體積比為1:9接種至MRS培養(yǎng)基，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系2。
3、完成步驟2后，取體系2，4000rpm離心10min，收集上清液。將上清液過濾除菌(過濾孔徑為0.45mm)，即獲得菌株N1的發(fā)酵上清。
按照上述方法，將菌株N1分別替換為菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7，其它步驟均不變，得到菌株N2的發(fā)酵上清、菌株N3的發(fā)酵上清、菌株N4的發(fā)酵上清、菌株N5的發(fā)酵上清、菌株N6的發(fā)酵上清和菌株N7的發(fā)酵上清。
二、女性洗液的制備
按照表2的配比，將水、F50、月癸基葡糖苷、菌株的發(fā)酵上清、SCE、無患子提取物和香精混合，獲得表2所示的女性洗液。
表2不同女性洗液的原料組成(g)
實施例3、實施例2制備的女性洗液的沐浴效果
一、實施例2制備的女性洗液的抑菌試驗
按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版2.1.8.2的抑菌環(huán)試驗的方法，測定待測女性洗液對待測菌的抑菌效果。待測女性洗液為女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2、女性洗液G3或女性洗液K。待測菌為金黃色葡萄球菌或白色念珠菌。抑菌試驗重復三次，每次重復的步驟如下：
1、按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版2.1.1.2.3的方法，制備待測菌的菌懸液，待測菌的菌懸液的濃度為5.2×106cfu/mL。
2、取20μL菌懸液，倒入15-20mL固體培養(yǎng)基中(固體培養(yǎng)基的溫度約為50-55℃)，混合均勻，獲得混合液。
3、取4個牛津杯置于培養(yǎng)皿，各牛津杯心之間相距25mm以上，與培養(yǎng)皿的周緣相距15mm以上，且各距離均勻；然后倒入混合液，冷卻。
4、完成步驟3后，向牛津杯中加入1mL待測女性洗液(與培養(yǎng)皿中混合液的液面高度一致)，將培養(yǎng)皿置于37℃培養(yǎng)17h，然后用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑。
5、完成步驟3后，向牛津杯中加入1mL無菌水(與培養(yǎng)皿中混合液的液面高度一致)，將培養(yǎng)皿置于37℃培養(yǎng)17h，然后用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑，作為陰性對照。
抑菌試驗結(jié)果判斷：
(1)抑菌環(huán)直徑大于7mm者，判斷為有抑菌效果；抑菌環(huán)直徑為7mm以下者，判斷為無抑菌效果。
(2)三次重復試驗均有抑菌作用結(jié)果者，判為合格。
(3)陰性對照應無抑菌環(huán)產(chǎn)生，否則試驗無效。
抑菌試驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明，女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2和女性洗液G3均對待測菌有抑菌效果，抑菌效果依次為：(女性洗液A1、女性洗液A2或女性洗液A3)>(女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2或女性洗液C3)>(女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2或女性洗液E3)>(女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3)。女性洗液K對待測菌無抑菌效果。
表3女性洗液對金黃色葡萄球菌的抑菌效果
二、實施例2制備的女性洗液的清潔效果
1、清潔試驗
將1150名陰道清潔度檢測為Ⅲ級或Ⅳ級的志愿者(志愿者對試驗內(nèi)容均知情同意)隨機分成女性洗液A1試驗組、女性洗液A2試驗組、女性洗液A3試驗組、女性洗液B1試驗組、女性洗液B2試驗組、女性洗液B3試驗組、女性洗液C1試驗組、女性洗液C2試驗組、女性洗液C3試驗組、女性洗液D1試驗組、女性洗液D2試驗組、女性洗液D3試驗組、女性洗液E1試驗組、女性洗液E2試驗組、女性洗液E3試驗組、女性洗液F1試驗組、女性洗液F2試驗組、女性洗液F3試驗組、女性洗液G1試驗組、女性洗液G2試驗組、女性洗液G3試驗組、女性洗液K試驗組和對照組(每組50人)，然后進行如下試驗：
女性洗液A1試驗組：試驗第1天，采用女性洗液A1清洗私處；試驗第4天，再次采用女性洗液A1清洗私處；試驗第7天，再次采用女性洗液A1清洗私處。每人每次女性洗液A1的使用量為4-6mL。
女性洗液A2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液A2。
女性洗液A3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液A3。
女性洗液B1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液B1。
女性洗液B2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液B2。
女性洗液B3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液B3。
女性洗液C1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液C1。
女性洗液C2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液C2。
女性洗液C3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液C3。
女性洗液D1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液D1。
女性洗液D2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液D2。
女性洗液D3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液D3。
女性洗液E1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液E1。
女性洗液E2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液E2。
女性洗液E3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液E3。
女性洗液F1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液F1。
女性洗液F2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液F2。
女性洗液F3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液F3。
女性洗液G1試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液G1。
女性洗液G2試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液G2。
女性洗液G3試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液G3。
女性洗液K試驗組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為女性洗液K。
對照組：按照女性洗液A1試驗組的操作步驟進行，僅將女性洗液A1替換為無菌水。
2、效果評價
試驗結(jié)果表明，與使用女性洗液K的志愿者或使用無菌水的志愿者相比，使用女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3的志愿者中，陰道清潔度檢測為Ⅰ級或Ⅱ級的比例顯著增加，使用效果依次為：(女性洗液A1、女性洗液A2或女性洗液A3)>(女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2或女性洗液C3)>(女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2或女性洗液E3)>(女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3)。
可見，本發(fā)明提供的女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2和女性洗液G3均具有良好抑菌效果。
按照上述實施例2的制備方法，將無患子提取物替換為無患子的醇提物，制備相應的女性洗液，然后將該女性洗液按照實施例3的方法進行檢測，結(jié)果表明，該女性洗液的抑菌效果與女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3相比，無顯著差異。獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將市售的無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進行回流提取，提取分別進行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進行水沉(攪拌時間5h，水沉時間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進行過濾，收集上清液進行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進行醇沉(攪拌時間5min，醇沉時間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進行過濾，收集上清液進行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實施例1分離純化得到的菌株N1已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。菌株N1的全稱為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228CGMCC No.12881。