本發(fā)明涉及一種用于注射給藥治療腫瘤藥物的組合物脂質(zhì)體制劑，尤其涉及一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨ズ烷L春新堿的組合物脂質(zhì)體。

背景技術(shù)：

長春新堿(Vincristine，VCR，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見式1)是從夾竹桃科植物長春花葉中提取出來的一種二聚吲哚型的生物堿，它自問世以來，一直廣泛應(yīng)用于急性淋巴細胞白血病、兒童急性白血病、惡性淋巴瘤、生殖細胞腫瘤、小細胞肺癌、尤文肉瘤、腎母細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤、乳腺癌、慢性淋巴細胞白血病、消化道癌、黑色素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、支氣管肺癌、何杰金及非何杰金淋巴瘤等。長春新堿具有較為顯著的抗腫瘤活性。目前直接藥用產(chǎn)品為硫酸長春新堿注射液，長春新堿雖然抗腫瘤作用良好，但是硫酸長春新堿注射液的半衰期較短，毒副作用大，神經(jīng)系統(tǒng)毒性和胃腸道系統(tǒng)毒性都較強，另外其注射的局部刺激也較大，也極易產(chǎn)生多藥耐藥性，這些缺點大大限制了其在臨床上的使用。

化學(xué)結(jié)構(gòu)式1.長春新堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

棕櫚?？箟难狨?L-palmitoyl ascorbate，PA，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見式2)是抗壞血酸的一種脂溶性衍生物，由于棕櫚酸基的植入，使其既有親水的抗壞血酸基，又有親油的棕櫚酰酯，從而成為了一種優(yōu)良的抗氧化劑。與抗壞血酸相比，其穩(wěn)定性更強，具備更好的理化性質(zhì)。脂溶性增強后，棕櫚?？箟难徇M入細胞的能力增強，藥效增強。前期研究已經(jīng)表明抗壞血酸可以增強長春新堿的抗腫瘤作用及安全性。因此其與抗壞血酸、長春新堿或它們的組合物比較，經(jīng)靜脈、動脈、肌肉、皮下、腹腔等給藥，特別是瘤內(nèi)注射、介入給藥等給藥方式可以更加顯著的增強長春新堿的抗腫瘤作用及安全性。而與抗壞血酸相似的是，棕櫚?？箟难峥梢赃x擇性的在腫瘤細胞內(nèi)發(fā)揮藥效，毒副作用較小。此外，疏水性的特性使得棕櫚?？箟难岣子诒恢|(zhì)體包載，制備出緩釋效果較好的脂質(zhì)體。

化學(xué)結(jié)構(gòu)式2.維生素C棕櫚酰酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

抗腫瘤藥物在發(fā)揮抗腫瘤細胞作用的同時，亦可損傷正常細胞藥物。治療的一個關(guān)鍵問題是如何把藥物定向輸送到癌癥細胞而又不損傷正常細胞。脂質(zhì)體是靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，這種系統(tǒng)是目前藥劑學(xué)最新、最有前途的給藥系統(tǒng)。它可以將藥物選擇性地運送到靶點部位，發(fā)揮治療作用，同時又不影響正常細胞、組織或器官的功能，從而達到提高療效、減少毒副作用的目的。

目前，尚未有復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿納米粒的報道，本發(fā)明旨在研制一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的納米粒，以提高長春新堿的靶向性，降低其毒副作用，應(yīng)用棕櫚?？箟难狨サ目鼓[瘤作用提高療效。同時，本發(fā)明所采用的制備方法適合產(chǎn)業(yè)化推廣。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有良好的包封率、載藥量和穩(wěn)定性；并且粒徑分布集中，大小分布均勻的復(fù)方棕櫚?？箟难狨ズ烷L春新堿的組合物脂質(zhì)體。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的組合物脂質(zhì)體，包括如下各組分：長春新堿∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物。

并且各組分之間的質(zhì)量百分比如下：長春新堿∶棕櫚?？箟难狨ァ昧字愇镔|(zhì)∶膽固醇類似物＝0.006～0.3∶0.06～60∶203.3～290∶9.67～96.7。

優(yōu)選的長春新堿∶棕櫚酰抗壞血酸酯∶磷脂類物質(zhì)∶膽固醇類似物＝0.06～0.21∶6～60∶203.3～273∶96.7～9.67。

更優(yōu)選的長春新堿∶棕櫚酰抗壞血酸酯∶磷脂類物質(zhì)∶膽固醇類似物＝0.06～0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

長春新堿的重量份是0.006～0.06；0.006～0.12；0.006～0.21；0.006～0.3；0.06～0.12；0.06～0.21；0.06～0.3；0.12～0.21，0.12～0.3，0.21～0.3，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：0.06～3；0.06～6；0.06～15；0.06～24；0.06～60；3～6；3～15；3～24；3～60；6～15；6～24；6～60；15～24；15～60；24～60；24；

磷脂類物質(zhì)的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；203.3～290；225～250；225～273；225～290；250～275；250～290；275～290；

膽固醇類似物的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；96.7～9.67；75～50；75～27；75～9.67；50～27；50～9.67；27～9.67；

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自磷脂酰膽堿類、磷脂酰甘油類、磷脂酰肌醇類、磷脂酰乙醇胺類、神經(jīng)鞘磷脂類中至少一種。

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自單鏈或雙鏈磷脂；

優(yōu)選的雙鏈磷脂選自二棕櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二軟脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二亞油酸磷脂酰肌醇、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二軟脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、

優(yōu)選的單鏈磷脂選自單棕櫚酸磷脂酰膽堿(MPPC)、單月桂酸磷脂酰膽堿(MLPC)、單肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(MMPC)、單硬脂酰磷脂酰膽堿(MSPC)、單肉蔻酸磷脂酰甘油、單月桂酸磷脂酰甘油、單軟脂酸磷脂酰甘油、單硬脂酸磷脂酰甘油、單肉蔻酸磷脂酸、單月桂酸磷脂酸、單軟脂酸磷脂酸、單硬脂酸磷脂酸、單油酸磷脂酰絲氨酸、單亞油酸磷脂酰肌醇、

優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)還選自大豆磷脂、卵磷脂、心磷脂、腦磷脂中至少一種。

所述的腦磷脂可以是天然或合成的腦磷脂。

更優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、大豆磷脂、卵磷脂、腦磷脂、心磷脂中至少一種。

最優(yōu)選的磷脂類物質(zhì)選自二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、大豆磷脂中至少一種。

優(yōu)選的膽固醇類似物選自膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯、谷甾醇中至少一種。

最優(yōu)選的膽固醇類似物選自膽固醇。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

長春新堿的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿∶膽固醇＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

長春新堿的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

大豆磷脂的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

谷甾醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶谷甾醇＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.06～0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

長春新堿的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

二棕櫚酸磷脂酰膽堿的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇半琥珀酸酯的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶二棕櫚酸磷脂酰膽堿∶膽固醇半琥珀酸酯＝0.12∶24∶273∶27。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)可以選自如下范圍任意組合：

優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.06～0.21∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

更優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶6～24∶203.3～273∶96.7～27。

最優(yōu)選長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶15～24∶203.3～273∶96.7～27。

組合物中各組分還可以選自如下重量份：

長春新堿的重量份是0.06～0.12，0.06～0.21，0.12～0.21，0.12；

抗壞血酸棕櫚酸酯的重量份是：6～15，6～24，15～24；

大豆磷脂的重量份是：203.3～225；203.3～250；203.3～273；225～250；225～273；250～275；

膽固醇的重量份是96.7～75；96.7～50；96.7～27；75～50；75～27；50～27；

上述優(yōu)選實施方案中，最優(yōu)選的各組分之間的質(zhì)量份比例(或重量份比例)選自：

最優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶203.3∶96.7。

最優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶250∶50。

最優(yōu)選的長春新堿∶抗壞血酸棕櫚酸酯∶大豆磷脂∶膽固醇＝0.12∶24∶273∶27。

本發(fā)明制備的復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體，粒徑為80-200nm，包封率為70％以上，長春新堿的載藥量為0.005％～5％，棕櫚?？箟难狨サ妮d藥量為0.1％～40％。

優(yōu)選的處方為：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，棕櫚?？箟难狨サ妮d藥量：1％～20％。

本發(fā)明第二方面提供了一種上述復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括如下步驟：

A、將處方量的棕櫚酰抗壞血酸酯、長春新堿、磷脂類物質(zhì)、膽固醇類似物溶解于有機溶劑中；

B、蒸發(fā)除去有機溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜；

C、干燥；

D、加入蒸餾水，使用超聲將脂質(zhì)薄膜洗下；

E、低溫下探頭超聲，即得。

步驟A中，優(yōu)選的有機溶劑可為二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇、乙醚、四氫呋喃。更優(yōu)選的溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮；最優(yōu)選的有機溶劑選自三氯甲烷。

步驟B中，蒸發(fā)除去有機溶劑優(yōu)選采用旋轉(zhuǎn)減壓的方式；優(yōu)選的旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)時的溫度選自30℃～80℃；優(yōu)選的溫度選自50℃～75℃；更優(yōu)選的溫度選自65℃～75℃；最優(yōu)選的溫度是70℃；

步驟C中，干燥的方式：優(yōu)選采用真空干燥；干燥的溫度設(shè)定為30℃～90℃；溫度選自40℃～90℃；優(yōu)選的溫度選自50℃～85℃；更優(yōu)選的溫度選自70℃～80℃；最優(yōu)選的溫度是75℃；

步驟E中，探頭超聲強度及時長設(shè)定為30％～90％，10s～50s，超聲1～7s停1s，循環(huán)次數(shù)為1～8次。

本發(fā)明第三方面提供了復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的組合物脂質(zhì)體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述的腫瘤選自黑色素瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、口腔表皮癌、宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腦瘤、食管癌。

有益技術(shù)效果

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的組合物脂質(zhì)體具有良好的包封率、載藥量和穩(wěn)定性。

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的組合物脂質(zhì)體與棕櫚?？箟难狨畏街|(zhì)體及長春新堿的單方脂質(zhì)體相比，藥效明顯增強，可以顯著提高長春新堿的抗腫瘤效果，且毒性降低，安全性高。提高了長春新堿臨床用藥的安全性及有效性，具有重要的實際應(yīng)用前景。

本發(fā)明的復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體制備方法具有工藝簡便、制備成本低、工藝重現(xiàn)性好、實驗處方和工藝可放大到生產(chǎn)應(yīng)用等特點，因而對產(chǎn)業(yè)化的應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。

附圖說明

圖1.長春新堿單獨作用于MCF-7和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗。

圖2.長春新堿單獨作用于HepG-II和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗

圖3.長春新堿單獨作用于A549和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗

圖4.長春新堿單獨作用于SGC-7901和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗

圖5.長春新堿單獨作用于BxPC-3和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗

圖6.長春新堿單獨作用于Hela和與不同濃度PA合用后的體外藥效實驗

圖7.靜注5mg/kg給藥后長春新堿溶液組與脂質(zhì)體組在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時間曲線

具體實施方式

實施例1：一種復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實驗方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的脂質(zhì)體制備工藝為：將長春新堿、棕櫚?？箟难狨?、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、膽固醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中75℃下干燥過夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲2個循環(huán)(30％，20s，超聲1s停1s)，即得。

脂質(zhì)體評價方法：

脂質(zhì)體的粒徑的測定：采用激光粒度測定儀測定。

包封率以及載藥量的測定：0.3mL的復(fù)方脂質(zhì)體過葡聚糖凝膠柱，用生理鹽水為洗脫液，分開游離的藥物和脂質(zhì)體后，收集脂質(zhì)體組分，用甲醇破乳定容后用HPLC進行測定，計算得復(fù)方脂質(zhì)體濃度C₁。另取0.3mL復(fù)方脂質(zhì)體用甲醇定容到與上柱后脂質(zhì)體組分相同體積，然后進樣并計算得復(fù)方脂質(zhì)體破乳后總濃度C₀。根據(jù)以下公式計算包封率(Encapsulation Efficiency，EE％)以及載藥量(Drug Loading Efficiency，DLE％)：

$EE\%=\frac{C_1}{C_0}\×100\%$

實驗結(jié)果：

表1.實施例1的實驗結(jié)果

長春新堿：VCR，棕櫚酰抗壞血酸酯：PA，二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿：DMPC，膽固醇：CHOL制劑評價標準：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實施例2：一種復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實驗方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的脂質(zhì)體制備工藝為：將長春新堿、棕櫚?？箟难狨?、大豆磷脂、谷甾醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，60℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中35℃下干燥過夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲4個循環(huán)(80％，50s，超聲1s停1s)，即得。

實驗結(jié)果：

表2.實施例2的實驗結(jié)果

長春新堿：VCR，棕櫚?？箟难狨ィ篜A

制劑評價標準：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實施例3：一種復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實驗方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的脂質(zhì)體制備工藝為：將長春新堿、棕櫚?？箟难狨?、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、膽固醇半琥珀酸酯溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中75℃下干燥過夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲6個循環(huán)(30％，60s，超聲1s停1s)，即得。

實驗結(jié)果：表3.實施例3的實驗結(jié)果

長春新堿：VCR，棕櫚?？箟难狨ィ篜A，二棕櫚酸磷脂酰膽堿：DMPC，膽固醇半琥珀酸酯：CHS

制劑評價標準：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

實施例4：一種復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿的組合物脂質(zhì)體配方及其制備如下：

實驗方法：所述的復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的脂質(zhì)體制備工藝為：將長春新堿、棕櫚?？箟难狨ァ⒋蠖沽字?、膽固醇溶解于三氯甲烷中，渦旋至完全溶解后加入500mL茄形燒瓶中，70℃旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，在瓶壁內(nèi)制得均勻的脂質(zhì)薄膜，置于真空干燥箱中65℃下干燥過夜后，加入蒸餾水，超聲將脂質(zhì)薄膜洗下后，冰水浴下探頭超聲2個循環(huán)(50％，60s，超聲1s停1s)，即得。

實驗結(jié)果：

表4.實施例4的實驗結(jié)果

長春新堿：VCR，棕櫚?？箟难狨ィ篜A，膽固醇：CHOL

制劑評價標準：粒徑：100～200nm，包封率：＞85％，PA載藥量：1％～20％為合格制劑

藥理實驗

實驗例1：棕櫚?？箟难狨ヅc長春新堿合用對腫瘤細胞的作用

MTT法測定腫瘤細胞活性

對數(shù)生長期的細胞株經(jīng)0.25％胰酶消化后，用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成單細胞懸液，以3×10³個/mL的密度接種于96孔板中，每孔加入100μL細胞懸液，置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細胞充分貼壁后，去除原有的培養(yǎng)液，每孔加入用培養(yǎng)液配制的不同濃度的長春新堿溶液50μL，再加入用用培養(yǎng)液配置的不同濃度棕櫚?？箟难狨?0μL。對照組加入含0.1％DMSO的培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束后吸棄藥液，每孔加入PBS 100μL洗去殘留的藥液，每孔加入含10％5mg/mL MTT工作液培養(yǎng)液100μL，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸棄上清液，每孔加入150μL DMSO，振蕩10min以充分溶解結(jié)晶物，在酶標儀570nm下測定OD值，按下列公式計算給予長春新堿后腫瘤細胞的抑制率，并采用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件計算半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

根據(jù)各濃度藥物的抑制率，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計分析軟件計算半數(shù)抑制濃度IC₅₀，并依據(jù)IC₅₀計算長春新堿與不同濃度的棕櫚?？箟难狨ズ嫌煤驣C50減少倍數(shù)。

PA提高了藥物A的化療作用的判斷方法

IR(A+PA)＞IR(A)，表示PA的存在提高了藥物A的化療作用，右上角標記為^▲。

協(xié)同作用判斷方法

用以下的計算方法對協(xié)同作用進行判斷：

IR(A+B)＞IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間存在協(xié)同作用；

IR(A+B)＝IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間只是簡單疊加作用；

IR(A+B)＜IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)，藥物間存在拮抗作用；

其中IR(A+B)，IR(A)，IR(B)分別對應(yīng)藥物AB聯(lián)用，A單獨作用及B單獨作用時的生長抑制率。

IR(A)+IR(B)-IR(A)×IR(B)的結(jié)果示為預(yù)測值，如AB聯(lián)用的抑制率{IR(A+B)}大于預(yù)測值，則表示合用具有協(xié)同作用。右上角標記^▲▲為具有協(xié)同作用。如抑制率為負值者記為0。

上述細胞株選自：人乳腺癌細胞株MCF-7、人肝癌細胞株HepG-II、人肺癌細胞株A549、人胃癌細胞株SGC-7901、人原位胰腺腺癌細胞株BxPC-3、人宮頸癌細胞株Hela。

PA合用長春新堿對人乳腺癌細胞株MCF-7的作用結(jié)果見表1-1，表1-2和圖1。

PA合用長春新堿對人肝癌細胞株HepG-II的作用結(jié)果見表2-1，表2-2和圖2。

PA合用長春新堿對人肺癌細胞株A549的作用結(jié)果見表3-1，表3-2和圖3。

PA合用長春新堿對人胃癌細胞株SGC-7901的作用結(jié)果見表4-1，表4-2和圖4。

PA合用長春新堿對人原位胰腺腺癌細胞株BxPC-3的作用結(jié)果見表5-1，表5-2和圖5。 PA合用長春新堿對人宮頸癌細胞株Hela的作用結(jié)果見表6-1，表6-2和圖6。

表1-1.PA合用長春新堿對MCF-7的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表1-2.長春新堿單獨作用MCF-7和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表2-1.PA合用長春新堿對HepG-II的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表2-2.長春新堿單獨作用HepG-II和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表3-1.PA合用長春新堿對A549的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表3-2.長春新堿單獨作用A549和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表4-1.PA合用長春新堿對SGC-7901的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表4-2.長春新堿單獨作用SGC-7901和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表5-1.PA合用長春新堿對BxPC-3的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表5-2.長春新堿單獨作用BxPC-3和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表6-1.PA合用長春新堿對Hela的作用結(jié)果

注：“^▲▲”表示具有協(xié)同作用；“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

表6-2.長春新堿單獨作用Hela和與不同濃度PA合用后的IC₅₀值及藥效增加倍數(shù)

注：“^▲”表示PA可以提高化療藥作用

藥動學(xué)實驗

實驗例1：復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿的脂質(zhì)體與長春新堿溶液的藥動學(xué)性質(zhì)比較

取大鼠6只，按體重隨機分成兩組，每組三只大鼠，按5mg/kg劑量靜注給予1mg/mL 長春新堿溶液(大鼠編號為No.1、No.2、No.3)、復(fù)方棕櫚酰抗壞血酸酯/長春新堿脂質(zhì)體(其中長春新堿濃度為1mg/mL，大鼠編號為No.4、No.5、No.6)，分別于給藥前約0.25h和給藥后0.083h、0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、4h、8h、12h取血，約200μL至肝素化試管中，于8000rpm離心5min，分離出血漿，于-80℃保存供測試。

表1.大鼠靜注給予5mg/kg長春新堿溶液后的血藥濃度(μg/L)

表2.大鼠靜注給予5mg/kg長春新堿溶液后大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)

表3.大鼠靜注給予5mg/kg復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿脂質(zhì)體后的血藥濃度(μg/L)

表4.大鼠靜注給予5mg/kg復(fù)方棕櫚?？箟难狨?長春新堿脂質(zhì)體后大鼠體內(nèi)的藥代動力 學(xué)參數(shù)

實驗結(jié)果：見表1-4和圖7，藥動參數(shù)表明，靜注給予大鼠同樣劑量的長春新堿溶液和復(fù)方脂質(zhì)體后，脂質(zhì)體組的AUC為溶液組的2.36倍，半衰期為溶液組的2.67倍，清除率約為溶液組的1/2.7，表明脂質(zhì)體減緩了藥物釋放，延長了藥物的作用時間，增強了藥效。