本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及α-山竹黃酮的新用途，尤其是α-山竹黃酮對胰島細胞功能和胰島素抵抗、脂肪肝以及血管內(nèi)皮功能的影響。
背景技術(shù)：
：山竹(GarciniamangostanaL.)，被譽為“果中皇后”，是藤黃科(Guttiferae)藤黃屬(Garcinia)常綠喬木山竹的果實。原產(chǎn)于印度尼西亞和馬來西亞，是一種典型的熱帶水果，主要分布于泰國、越南、馬來西亞、印度尼西亞、菲律賓等東南亞國家，在中國廣西、海南等地區(qū)廣泛栽培。山竹果皮一直作為泰國傳統(tǒng)醫(yī)藥用于腹痛、腹瀉、痢疾、感染性創(chuàng)傷、化膿、慢性潰瘍、白帶、淋病等疾病治療。而且，許多研究發(fā)現(xiàn)，山竹具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化活性，并對金黃色葡萄球菌、志賀痢疾桿菌、弗氏去賀菌、大腸桿菌、霍亂弧菌和幽門螺桿菌等細菌具有抗菌活性。近年來，山竹特別是山竹果皮的化學(xué)成分及其生物學(xué)活性成為人們的研究熱點。α-山竹黃酮是山竹果皮中分離出的主要具有生物活性的化合物，其有多種藥理作用，如抑制環(huán)氧化酶-2(COX-2)的作用、對阿爾茨海默癥的延緩作用、抗炎作用、抗氧化作用、抑制神經(jīng)鞘磷脂酶的作用、細胞凋亡作用、組胺H1受體拮抗作用、對α-葡萄糖苷酶的抑制作用、抗致病菌作用、植物雌激素樣作用。目前尚未見α-山竹黃酮對胰島細胞功能和胰島素抵抗、脂肪肝以及血管內(nèi)皮功能的相關(guān)報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了α-山竹黃酮的新應(yīng)用。在一個具體實施例中，本發(fā)明用2型糖尿病模型小鼠(8周齡雄性db/db純合子小鼠)隨機分為糖尿病組、α-山竹黃酮組，同時選8周齡同窩野生型小鼠作為正常對照組。α-山竹黃酮組每天定時腹腔注射α-山竹黃酮0.3mg/kg，正常對照組和糖尿病組給予相當量的溶媒腹腔注射。觀察各組小鼠一般情況、飲水量、進食量、體重、血糖等指標，共觀察12周，終止實驗時行胰島素耐量試驗((Insulintolerancetest，ITT)實驗，同時每組均留取空腹血漿用于血糖和胰島素水平檢測，計算HOMA-IR、QUICKI-IR及HOMA-β指數(shù)。隨著觀察時間的延長，糖尿病組小鼠血糖明顯增高，而α-山竹黃酮組用α-山竹黃酮干預(yù)后血糖增加比未干預(yù)組明顯減輕，說明α-山竹黃酮可延緩糖尿病的進展。糖尿病組小鼠HOMA-β細胞功能下降，HOMA-IR明顯增加，胰島素處置葡萄糖的能力下降(ITT)。而α-山竹黃酮組用α-山竹黃酮干預(yù)后胰島β細胞功能和胰島素抵抗都得到改善，胰島素處置葡萄糖能力有所改善。進一步，麻醉處死小鼠后，立即分離出胰腺組織，制作石蠟切片用于胰腺HE染色觀察胰腺病理改變，同時進行胰島素、胰高血糖素免疫組化及雙標免疫熒光觀察胰島功能。胰島病理結(jié)果顯示正常對照組小鼠的胰島呈圓形或橢圓形，胰島細胞大小相似，分布均勻，呈索狀排列，細胞核與細胞質(zhì)均染色清晰，細胞間分隔清楚。糖尿病組小鼠胰島邊緣不規(guī)則，胰島細胞大小不一致，排列稀疏不均，包漿內(nèi)可見空泡，核仁染色淺，細胞間分隔不清晰。而α-山竹黃酮組小鼠胰島形態(tài)介于正常對照組與糖尿病組之間，胰島細胞大小較為一致，排列較均勻，核仁染色尚清晰。胰島素、胰高血糖素免疫組化及雙標免疫熒光顯示正常對照組胰島呈較規(guī)則的橢圓形，細胞分布較均勻，胰島素染色陽性區(qū)域比例大。糖尿病組胰島形態(tài)不規(guī)則，胰島素染色陽性區(qū)域比例小，且顏色淺。α-山竹黃酮組胰島素染色陽性面積有所恢復(fù)。胰高血糖素免疫組化圖顯示正常對照組胰高血糖素陽性區(qū)域小，且只位于胰島的周邊區(qū)域。糖尿病組胰高血糖素陽性區(qū)域明顯增大，且出現(xiàn)在胰島的中央?yún)^(qū)域。α-山竹黃酮組較糖尿病組有所好轉(zhuǎn)。使用imagepro-plus圖像分析軟件，根據(jù)免疫組化結(jié)果計算染色陽性率(染色陽性面積/胰腺總面積)，以代表胰腺中胰島素/胰高血糖素的分泌情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖尿病小鼠胰島素/胰高血糖素比值較正常對照組明顯下降，用山竹黃酮干預(yù)后胰島素/胰高血糖素比值有統(tǒng)計學(xué)意義上升。上述結(jié)果表明α-山竹黃酮可以改善胰島細胞功能和胰島素抵抗。因此本發(fā)明提供了α-山竹黃酮在制備改善胰島細胞功能和胰島素抵抗的藥物中的用途。在一個具體實施例中，本發(fā)明通過BUXCO生物記錄系統(tǒng)連續(xù)記錄血管張力變化取各組小鼠胸主動脈血管通過BUXCO生物記錄系統(tǒng)連續(xù)記錄血管張力變化觀察血管舒張功能。同時取胸主動脈通過HE染色及電鏡觀察內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，與正常對照組比較，糖尿病組小鼠血管舒張功能受損。α-山竹黃酮組血管舒張功能較糖尿病組改善。與正常對照組比較，糖尿病組小鼠血管內(nèi)膜層次不清晰，內(nèi)皮細胞排列不整齊，形態(tài)欠規(guī)則，內(nèi)皮細胞損傷，中膜增厚。而α-山竹黃酮組血管組織形態(tài)損傷情況較糖尿病組有改善。與正常對照組比較，糖尿病組小鼠電鏡下超微結(jié)構(gòu)可見內(nèi)皮細胞水腫，壞死，脫落，結(jié)構(gòu)紊亂。而α-山竹黃酮組血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)較糖尿病組改善。表明α-山竹黃酮可以改善血管內(nèi)皮功能。因此本發(fā)明還提供了α-山竹黃酮在制備改善血管內(nèi)皮功能的藥物中的用途。在一個具體實施例中，本發(fā)明取處死的各組小鼠的肝臟進行病理檢查，結(jié)果顯示正常對照組其肝組織結(jié)構(gòu)規(guī)則，未見明顯的肝臟脂肪變性。糖尿病組大鼠肝組織呈現(xiàn)明顯脂肪肝的病理學(xué)改變，肝小葉結(jié)構(gòu)欠清楚，肝細胞重度脂肪變性。而α-山竹黃酮組脂肪變性較輕。HE染色光鏡下可見正常對照組未見紅染；糖尿病組出現(xiàn)大片面積的紅染；α-山竹黃酮組紅染區(qū)域明顯小于糖尿病對照組。表明α-山竹黃酮對脂肪肝有改善作用。因此本發(fā)明還提供了α-山竹黃酮在制備改善脂肪肝的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種藥物制劑，包含α-山竹黃酮。。進一步的，所述的包含α-山竹黃酮還包括藥學(xué)上可接受的輔料。所述藥物制劑可以為當前藥品領(lǐng)域任何劑型，優(yōu)選的，所述藥物制劑為丸劑、膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液。各藥物劑型可根據(jù)該劑型實際需要選取合適的可接受輔料來制備，這屬于本領(lǐng)域常規(guī)的劑型制備技術(shù)。由上述技術(shù)方案可知，本發(fā)明提供了α-山竹黃酮在制備改善胰島細胞功能和胰島素抵抗、血管內(nèi)皮功能以及脂肪肝的藥物中的用途。試驗表明，α-山竹黃酮可以改善胰島細胞功能和胰島素抵抗，改善血管組織形態(tài)損傷以及內(nèi)皮細胞水腫、壞死、脫落、結(jié)構(gòu)紊亂的現(xiàn)象，減少肝臟空泡變性。表明α-山竹黃酮可以改善胰島細胞功能和胰島素抵抗、血管內(nèi)皮功能以及脂肪肝。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。圖1示實施例1ITT實驗結(jié)果曲線圖，其中NC組為正常對照組，DMC組為糖尿病組，α－M組為α-山竹黃酮組；圖2示實施例1小鼠胰島免疫組化染色圖(400倍)；圖3示實施例1小鼠胰島素免疫組化圖(400倍)，其中黃色著色區(qū)為胰島素染色陽性的區(qū)域，深藍色的點為細胞核；圖4示實施例1小鼠胰高血糖素免疫組化圖(400倍)，其中深紅色著色區(qū)為胰高血糖素染色陽性區(qū)域，深藍色的點為細胞核；圖5示實施例1α/β細胞比例免疫熒光圖(400倍)，其中紅色熒光為胰島素標記，綠色熒光為胰高血糖素標記，藍色熒光為細胞核標記；圖6示實施例2不同條件下的小鼠主動脈的內(nèi)皮依賴性血管舒張功能比較圖，其中橫坐標為乙酰膽堿濃度的對數(shù)值，縱坐標為血管舒張的百分比。正常組為同窩野生型小鼠，糖尿病組為糖尿病小鼠(溶媒無山竹黃酮注射組)，干預(yù)組為α-山竹黃酮干預(yù)的糖尿病小鼠；圖7示實施例2血管內(nèi)皮細胞顯微觀察圖；圖8示實施例2血管內(nèi)皮細胞電鏡觀察圖；圖9示實施例3小鼠肝臟病理檢查圖，其中圖A為糖尿病組(200倍)，圖B為糖尿病組(400倍)，圖C為α-山竹黃酮組(200倍)，圖D為α-山竹黃酮組(400倍)。具體實施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。如無特征說明以上實施例中，各組分均為市售商品。實施例1、胰島功能研究1.實驗方法用2型糖尿病模型小鼠(8周齡雄性db/db純合子小鼠)隨機分為糖尿病組、α-山竹黃酮組，同時選8周齡同窩野生型小鼠作為正常對照組。α-山竹黃酮組每天定時腹腔注射α-山竹黃酮0.3mg/kg，正常對照組和糖尿病組給予相當量的溶媒腹腔注射。觀察各組小鼠一般情況、飲水量、進食量、體重、血糖等指標，共觀察12周，終止實驗時行胰島素耐量試驗(Insulintolerancetest，ITT)實驗，同時每組均留取空腹血漿用于血糖和胰島素水平檢測，計算HOMA－IR、QUICKI-IR及HOMA-β指數(shù)。其中，HOMA-IR＝FBS*FINS/22.5，QUICKI-IR＝1/[log(FIns)+log(FBS)]，HOMA-β＝20*I0/(G0-3.5)(％)麻醉處死小鼠后，立即分離出胰腺組織，胰尾用4％多聚甲醛固定后蠟塊包埋，行4μm連續(xù)切片，用于胰腺HE染色觀察胰腺病理改變，胰島素、胰高血糖素免疫組化及雙標免疫熒光觀察胰島功能。2.實驗結(jié)果2.1實驗動物一般情況比較正常對照組小鼠身體狀態(tài)良好，體重隨周齡增長，體態(tài)自如，動作靈活。糖尿病組、α-山竹黃酮組小鼠身體狀態(tài)較差。二組小鼠體重較正常對照組明顯肥胖，“多飲、多尿、多食”癥狀明顯，動作遲緩，反應(yīng)緩慢，毛發(fā)枯黃無光澤。2.2各組小鼠飲水量比較在α-山竹黃酮干預(yù)前，糖尿病組和α-山竹黃酮組的db/db小鼠較NC組的正常對照組小鼠飲水量明顯增加。注射α-山竹黃酮6周后，α-山竹黃酮組飲水量較糖尿病組明顯下降(P＜0.05)，注射α-山竹黃酮12周后，α-山竹黃酮組的飲水量進一步下降(P＜0.05)，詳見表1。表1注射α-山竹黃酮0周、1周、6周、12周的飲水量比較(ml/d,X±S)組別例數(shù)0w1w6w12w正常對照組1226.4±2.6#28.4±3.1#31.9±3.4#33.6±3.5#糖尿病組1253.8±4.1*58.3±4.7*74.7±8.3*80.2±8.2*α-山竹黃酮組1255.6±3.8*56.9±4.4*66.5±6.7*#59.4±7.1*#注：“*表示與正常對照組相比P<0.05，#表示與糖尿病組相比P<0.052.3各組小鼠進食量比較在α-山竹黃酮干預(yù)前，糖尿病組的db/db小鼠較正常對照組的小鼠進食量明顯增加。注射α-山竹黃酮6周后，α-山竹黃酮組進食量開始有下降趨勢。注射α-山竹黃酮12周后，α-山竹黃酮組進食量明顯下降(P＜0.05)，詳見表2。表2注射α-山竹黃酮0周、1周、6周、12周的進食量比較(g/d,)組別例數(shù)0w1w6w12w正常對照組1221.6±2.1#22.7±2.9#27.4±2.5#32.8±3.1#糖尿病組1245.2±4.4*46.4±4.2*55.9±4.3*60.5±4.7*α-山竹黃酮組1246.1±3.4*46.2±3.8*52.8±5.7*50.2±4.6*#注：*表示與正常對照組相比P<0.05，#表示與糖尿病組相比P<0.05。2.4各組小鼠體重變化在α-山竹黃酮干預(yù)前，db/db小鼠體重較正常對照組明顯升高(P＜0.05)。注射α-山竹黃酮后糖尿病組仍較正常對照組明顯升高(P＜0.05)，α-山竹黃酮組體重升高較糖尿病組明顯(P＜0.05)，詳見表3。表3各組小鼠α-山竹黃酮干預(yù)前后體重比較(g,)組別例數(shù)干預(yù)前體重干預(yù)后12周體重正常對照組1219.8±1.89#24.6±2.24#糖尿病組1235.8±1.83*43.6±5.58*α-山竹黃酮組1234.5±2.33*47.6±3.41*#注：*表示與正常對照組相比P<0.05，#表示與糖尿病組相比P<0.05。2.5血糖變化統(tǒng)計各組血糖變化結(jié)果見表4表4三組小鼠血糖水平組別例數(shù)干預(yù)前血糖(mmol/l)干預(yù)后12周血糖(mmol/l)正常對照組128.73±2.008.44±2.30糖尿病組1220.66±4.28a36.51±9.20aα-山竹黃酮組1222.14±5.61a15.94±2.21ab注：a表示與正常對照組相比P<0.05，b表示與糖尿病組相比P<0.05。表4結(jié)果顯示在α-山竹黃酮干預(yù)前糖尿病組和α-山竹黃酮組血糖均明顯高于正常對照組。隨著觀察時間的延長，糖尿病逐漸進展，糖尿病組血糖進一步升高，而α-山竹黃酮組血糖較自身干預(yù)前和糖尿病組明顯降低，說明α-山竹黃酮有降低血糖、延緩糖尿病進展的作用。2.6胰島素耐量試驗結(jié)果見圖1結(jié)果顯示，糖尿病組小鼠胰島素處置葡萄糖的能力較正常對照組下降，血糖明顯增高，而用α-山竹黃酮干預(yù)后胰島素處置葡萄糖能力有所改善。2.7胰島素抵抗指數(shù)胰島素抵抗指數(shù)HOMA－IR、QUICKI-IR及胰島β細胞功能指數(shù)HOMA-β結(jié)果見表5。表5胰島素抵抗指數(shù)及胰島β細胞功能指數(shù)組別Log10HOMA-IRLog10QUICKI-IRLog10HOMA-β正常對照組0.47±0.042#-0.26±0.010#1.62±0.293#糖尿病組1.59±0.046*-0.47±0.068*1.12±0.263*α-山竹黃酮組1.04±0.152*#-0.38±0.069*#1.51±0.263#注：*表示與正常對照組比較，P＜0.05；#表示與糖尿病組比較P＜0.05結(jié)果顯示糖尿病小鼠HOMA-β細胞功能下降，HOMA-IR明顯增加，用α-山竹黃酮干預(yù)后胰島β細胞功能和胰島素抵抗都得到改善。2.8胰腺HE染色結(jié)果見圖2圖2結(jié)果顯示，正常對照組小鼠的胰島呈圓形或橢圓形，胰島細胞大小相似，分布均勻，呈索狀排列，細胞核與細胞質(zhì)均染色清晰，細胞間分隔清楚。糖尿病組小鼠胰島邊緣不規(guī)則，胰島細胞大小不一致，排列稀疏不均，包漿內(nèi)可見空泡，核仁染色淺，細胞間分隔不清晰。而α-山竹黃酮組小鼠胰島形態(tài)介于正常對照組與糖尿病組之間，胰島細胞大小較為一致，排列較均勻，核仁染色尚清晰。2.9胰島素、胰高血糖素免疫組化及雙標免疫熒光胰島素、胰高血糖素免疫組化結(jié)果見圖3和4圖3胰島素免疫組化圖顯示正常對照組胰島呈較規(guī)則的橢圓形，細胞分布較均勻，胰島素染色陽性區(qū)域比例大。糖尿病組胰島形態(tài)不規(guī)則，胰島素染色陽性區(qū)域比例小且顏色淺。α-山竹黃酮組胰島素染色陽性面積有所恢復(fù)。圖4胰高血糖素免疫組化圖顯示正常對照組胰高血糖素陽性區(qū)域小，且只位于胰島的周邊區(qū)域。糖尿病組胰高血糖素陽性區(qū)域明顯增大，且出現(xiàn)在胰島的中央?yún)^(qū)域。α-山竹黃酮組較糖尿病組有所好轉(zhuǎn)。胰島素、胰高血糖素雙標免疫熒光結(jié)果見圖5。統(tǒng)計結(jié)果見表6。表6小鼠胰島素、胰高血糖素免疫組化及雙標免疫熒光結(jié)果比較組別例數(shù)胰島素陽性率(％)胰高血糖素陽性率(％)β/α細胞比例正常對照組1278.00％±0.0214.28％±0.0145.65±1.69糖尿病組1251.24％±0.064a10.55％±0.035a2.77±1.48aα-山竹黃酮組1262.88％±0.105a6.33％±0.064ab4.06±1.59ab注：a表示與正常對照組相比P<0.05，b表示與糖尿病組相比P<0.05。表6結(jié)果顯示，與正常對照組小鼠比較，糖尿病組、α-山竹黃酮組小鼠胰島素陽性率降低均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但α-山竹黃酮組胰島素陽性率較糖尿病對照組有統(tǒng)計學(xué)意義增高。胰高血糖素免疫組化的結(jié)果顯示，與正常對照組小鼠比較，糖尿病對照組、α-山竹黃酮組小鼠胰高血糖素陽性率增高均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但經(jīng)α-山竹黃酮組干預(yù)后胰高血糖素陽性率較糖尿病對照組有統(tǒng)計學(xué)意義下降。使用imagepro-plus圖像分析軟件，根據(jù)免疫組化結(jié)果計算染色陽性率(染色陽性面積/胰腺總面積)，以代表胰腺中β/α的比例。結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖尿病小鼠β/α比值較正常對照組明顯下降，用α-山竹黃酮組干預(yù)后β/α比值有統(tǒng)計學(xué)意義上升。實施例2、血管內(nèi)皮功能研究分別取實施例1各組小鼠在麻醉下開胸，心臟取血后，迅速分離、剪取胸主動脈，置于充以95％O2和5％CO2混合氣體改良的克氏液中。小心剪去周圍結(jié)締組織，清除血管內(nèi)血液，剪成3-4mm的血管環(huán)，一端固定于浴槽，另一端連接張力換能器，通過BUXCO生物記錄系統(tǒng)連續(xù)記錄血管張力變化。血管環(huán)置于8ml充滿95％O2和5％CO2混合氣體的改良克氏液的水槽中(37℃)，每隔15分鐘更換1次克氏液。靜息張力為1g，平衡60分鐘，加用KCl(60mmol/L)收縮血管，沖洗2-3次后，重新平衡血管環(huán)，用苯腎上腺素(10-6M)收縮血管，待穩(wěn)定后觀察累積濃度的乙酰膽堿(10-8～10-6M)誘導(dǎo)內(nèi)皮依賴性血管舒張。結(jié)果見圖6。各濃度內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)(EDVR)＝最大張力-各濃度點張力/(最大張力-基礎(chǔ)值)×100％另留取胸主動脈HE染色，電鏡觀察內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)結(jié)果見圖7和圖8。圖6顯示與正常對照組比較，糖尿病組小鼠血管舒張功能受損。而α-山竹黃酮組用α-山竹黃酮干預(yù)后血管舒張功能較糖尿病組改善。圖7結(jié)果顯示糖尿病組小鼠血管內(nèi)膜層次不清晰，內(nèi)皮細胞排列不整齊，形態(tài)欠規(guī)則，內(nèi)皮細胞損傷，中膜增厚。α-山竹黃酮組血管組織形態(tài)損傷情況較糖尿病組改善。圖8與正常對照組比較，糖尿病組小鼠電鏡下超微結(jié)構(gòu)可見內(nèi)皮細胞水腫，壞死，脫落，結(jié)構(gòu)紊亂。而α-山竹黃酮組血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)較糖尿病組改善。實施例3、對脂肪肝的影響分別取實施例1各組處死的小鼠的肝臟進行HE染色病理檢查，結(jié)果見圖9。結(jié)果顯示正常對照組其肝組織結(jié)構(gòu)規(guī)則，未見明顯的肝臟脂肪變性。糖尿病組大鼠肝組織呈現(xiàn)明顯脂肪肝的病理學(xué)改變，肝小葉結(jié)構(gòu)欠清楚，肝細胞重度脂肪變性。而α-山竹黃酮組脂肪變性較輕。HE染色光鏡下可見正常對照組未見紅染；糖尿病組出現(xiàn)大片面積的紅染；α-山竹黃酮組紅染區(qū)域明顯小于糖尿病對照組。表明α-山竹黃酮對脂肪肝有改善作用。當前第1頁1 2 3